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1. 6 2 Zusammenstellen von Experimenten eeeeeeeese 6 3 Starten des Betriebssystems Windows NT TM cssesssessessesssennesenennennn T 3 1 Arbeiten mit der Maus esessesseeeneennenemnnerenenn nnne 8 3 2 Die Benutzeroberfl che von Windows NT 222202200220220 seen 8 Suo Bi aE ernennen ee 10 3 4 Starten von Programmen ussuussuessesssenenennnennennnennnennnnnnnen nme 10 33 Dile TASK LE nenne 11 3 6 Einstellen von Datum und Uhrzeit Lesueseeseusee 12 o Aulr len der Fliesen ernennen 12 3 8 Beenden von Windows NT u220220220220snnsnnsnnsnennennennnnnnnnnnneen 13 4 Hilfe ber das Internet eseseeseeseeeeeene 14 MEE ec IR SUME 14 5 1 Softwarefunktionen zur Datenaufnahme ssesse 14 5 2 Datendarstellungsfunktionen eeeeeeseeeeeeeeeeereeee 41 5 3 Mess und Analysefunktionen 0220022002000000 nennen ann enn nenne 69 5 4 Funktionen zur Datendokumentation sseueeesse T 5 5 Funktionen zum Datenhandling ssseeeeeeeeeseeeeee 82 5 6 Benutzerspezifische Anpassungen 22202200220220eenennennnnenennennenn 86 Version RK03032000 Seite 2 Hinweis Version RK03032000 2 Die Leica Confocal Software Ein berblick 2 1 Starten der Software
2. eica Confocal Software lolx Ele View Macro Tools Window Help x x o do zu fs Hardware E Document User Name Institute Comment 1 Comment 2 Format 512 5512 Image Dim 1 00 mmx 1 00 mmX Begin End ZiY Position 0 02 um Scan Direction Parameter Setting Sections unidirectional 10 Scan Mode Y Position Stage Gain PMT 1 Gain PMT 2 Gain PMT Trans Gain PMT 3 Gain PMT 4 Offset PMT 1 m o vlaje lE b EEN EM Pal Continuous a H v a s Series b el Build 0224 SIMULATOR SP Leica Confocal Software LCS Benutzerhandbuch f r Leica TCS SP Systeme 1 Inhaltsverzeichnis 1 Inhaltsverzeichnis eeeseseeseseeeen mne 2 2 Die Leica Confocal Software Ein berblick eeeee 3 2 1 Starten der Software zzussussussssnnennusnnnnnnnennnnnnennnnnnennennnsnnsenenenn 3 2 2 Das experimentelle Konzept der Software 3 2 3 Prinzipieller Aufbau der Benutzeroberfl che 4 2 4 ffnen von Datens tzen uuaseeeennnnnnnnnnnnsnnnnnnnnnnnnnennnnennnnnnnnnnnnnn 5 2 5 Speichern von Bildern u22002202202200220 nn EA EREE EREA Aiii 5 2 6 Datenorganisation durch Gruppieren von Experimenten
3. 5 5 2 Datei speichern Funktion Wenn Sie auf die Taste SAVE klicken werden die Daten im aktuellen Experiment lei oder in der aktuellen Pr sentationsseite ano gespeichert Wenn Sie mit der Taste SAVE ein Experiment oder eine Pr sentationsseite zum ersten Mal speichern erscheint zuerst das Dialogfenster SAVE AS Hinweis Oft werden Originaldaten unabsichtlich mit der Funktion SAVE berschrieben Dies k nnen Sie verhindern indem Sie die Funktion SAVE AS verwenden um ein bereits gespeichertes Experiment unter einem anderen Namen abzuspeichern siehe Datei speichern unter Version RK03032000 Seite 83 Hinweis Hinweis Version RK03032000 5 5 3 Datei speichern unter Funktion Mit der Taste SAvE As k nnen Sie ein Experiment lei oder eine Pr sentationsseite ano unter einem bestimmten Dateinamen und in einem bestimmten Dateiformat abspeichern Beim Abspeichern eines Experiments wird auf Dateiebene ein Ordner mit dem Namen des Experiments angelegt Im Unterverzeichnis dieses Ordners befindet sich die Beschreibungsdatei lei des Experiments zusammen mit den einzelnen Bilddateien Bei der Beschreibungsdatei handelt es sich um ein Leica spezifisches bin res Datenformat In dieser Datei werden die Parametereinstellungen und die in Form einer Farbzuordnungstabelle gespeicherte Farbinformation jedes zu diesem Experiment geh renden Bildes registriert Die Bilddateien eines Experiments k nn
4. Variance Hinweis Version RK03032000 Standard Deviation Standardabweichung Varianz Einige der Parameter sind in wissenschaftlicher Exponentialnotation angegeben z B Varianz 1 88e 004 18800 5 3 4 Materials analysis Funktion Die Materialanalysefunktion ermittelt neben allgemeinen statistischen Daten auch Standardwerte nach DIN ISO 4287 Teil eines Datensatzes Randbedingungen Zur Materialanalyse muss eine Topographiedarstellung eines dreidimensionaler Datensatz vorliegen Typische Anwendungen 5 3 5 ROI als Ellipse Funktion Mit dieser Funktion kann ein elliptischer Auswertungsbereich Region of Interest ROI im Ansichtsfenster Viewer definiert werden Von den innerhalb des Auswertungsbereichs ermittelten Intensit tswerte wird das arithmetische Mittel berechnet und im Ansichtsfenster PROFILE in Abh ngigkeit der z Dimension des Datensatzes dargestellt Randbedingungen Vor der Definition des Auswertungsbereichs muss die PROFILE Funktion angew hlt werden Typische Anwendungen Nach der Wahl der PROFILE Funktion dr cken sie die ROI Funktionstaste Dr cken sie die linke Maustaste halten sie diese gedr ckt Damit haben sie einen Eckpunkt des Auswertungsbereichs definiert Ziehen sie bei gedr ckter linker Maustaste den Cursor diametral in die gegen berliegende Ecke Seite 72 Hinweis Hinweis Version RK03032000 um den zweiten Eckpunkt des Auswertungsbereichs zu definieren
5. Version RK03032000 Seite 59 iE Hinweis iL Hinweis El Version RK03032000 Funktion Die bei einer Bildserie aufgenommen Einzelbilder k nnen Sie als Filmsequenz ablaufen lassen Klicken Sie auf die Taste FIRST um zum ersten Bild dieser Serie zu springen Ist die Taste GALLERY angeklickt sind die Tasten FIRST und LAST NEXT und PREVIOUS und PLAY STOP grau unterlegt und k nnen nicht bet tigt werden Mit der Taste GALLERY werden alle Einzelbilder einer Bildserie eingeblendet und k nnen somit nicht als Filmsequenz abgespielt werden 5 2 18 N chstes Bild der Serie anzeigen Funktion Die bei einer Bildserie aufgenommen Einzelbilder k nnen Sie als Filmsequenz ablaufen lassen Klicken Sie auf die Taste NEXT um das nachfolgende Bild in dieser Serie anzuzeigen Ist die Taste GALLERY angeklickt sind die Tasten NEXT und PREVIOUS FIRST und LAST und PLAY STOP grau unterlegt und k nnen nicht bet tigt werden Mit der Taste GALLERY werden alle Einzelbilder einer Bildserie eingeblendet und k nnen somit nicht als Filmsequenz abgespielt werden 5 2 19 Vorheriges Bild der Serie anzeigen Funktion Seite 60 Hinweis iL Hinweis ua Die bei einer Bildserie aufgenommen Einzelbilder k nnen Sie als Filmsequenz ablaufen lassen Klicken Sie auf die Taste PREVIOUS um das vorherige Bild in dieser Serie anzuzeigen Ist die Taste GALLERY angeklickt sind die Tasten NEXT und PREVIOUS FiRST und LAST und PLAY STOP
6. Send to back Die Linie wird in den Hintergrund ger ckt Delete Die Linie wird gel scht Die L nge der Linie k nnen Sie ver ndern indem Sie mit dem Mauszeiger an einem der Anfasspunkte der Linie ziehen Um die Version RK03032000 Seite 79 Linie zu verschieben ohne ihre Gr e zu ver ndern klicken Sie auf den mittleren Anfasspunkt und verschieben Sie die Linie w hrend Sie die linke Maustaste gedr ckt halten Randbedingungen Die Taste LINE kann nur bet tigt werden wenn zuvor eine Pr sentationsseite mit der Taste ANNOTATION ge ffnet wurde 5 4 4 Rechteck zeichnen Funktion Mit der Taste RECTANGLE zeichnen Sie ein Rechteck in die Pr sentationsseite Klicken Sie in der Pr sentationsseite auf die Stelle an der sich eine Ecke des Rechtecks befinden soll Halten Sie die linke Maustaste gedr ckt und ziehen Sie den Mauszeiger ber die Seite um die Gr e des Rechtecks zu bestimmen Wenn Sie das Rechteck markieren und dann auf die rechte Maustaste klicken erscheint ein Kontextmen in dem Ihnen folgende Befehle zur Verf gung stehen Befeh Funktion In einem Dialogfenster k nnen Typ und St rke der Linie sowie weitere Optionen eingestellt werden cn einem Dialogfenster kann eine beliebige Farbe f r das Rechteck ausgewahlt werden Bring to front Das Rechteck wird in den Vordergrund ger ckt Sent to back Das Rechteck wird in den Hintergrund ger ckt Delete Das Rechteck wird gel scht Die Gr e des
7. W hlen Sie Start Programs Leica Confocal Software Es ffnet sich der Startbildschirm der Leica Confocal Software In diesem Fenster k nnen Sie nun aus drei Profilen w hlen Company Mit dieser Option wird die Leica Confocal Software mit werksseitig vorgegebenen Einstellungen gestartet Das bedeutet dass die Konfiguration und die Position der Funktionscontainer fest vorgegeben ist Diese Einstellungen k nnen nicht ge ndert werden Personal Mit dieser Option wird ein benutzerspezifisches Einstellungsprofil verwendet Der Benutzername wiederum h ngt davon ab unter welchem Account sich eine Person am Betriebssystem anmeldet Wenn beim ersten Start durch einen Benutzer noch kein pers nliches Einstellungsprofil vorliegt wird automatisch die werksseitige Standardeinstellung als pers nliches Profil verwendet Last Exit Mit dieser Option wird das zuletzt verwendete Einstellungsprofil verwendet F r Fortgeschrittene Wenn Sie ber mehrere Einstellungsprofile verf gen k nnen Sie diese beim Start laden wenn Sie mit dem Mauszeiger auf die Schaltfl che mit den drei kleinen schwarzen Punkten dr cken befindet sich am rechten unteren Rand der Profiloptionen Hier k nnen Sie auch Ihr aktuell eingestelltes pers nliches Einstellungsprofil wieder auf das werksseitige Standardprofil zur cksetzen Nach Dr cken der Start Schaltfl che wird die Leica Confocal Software mit dem entsprechenden Einstellungsprofil gestartet Die Softwar
8. Einzelbilder einer Bildserie eingeblendet und k nnen somit nicht als Filmsequenz abgespielt werden 5 2 22 Serienbild anzeigen Funktion Wenn Sie auf die Taste GALLERY klicken werden alle Einzelbilder einer Bildserie im Ansichtsfenster VIEWER dargestellt Je nachdem welche weiteren Tasten Sie gleichzeitig noch aktivieren sind folgende Darstellungsarten m glich Tastenkombination Darstellung Gallery Single Channel 1 2 3 4 5 Gallery Single Overlay Channel 1 2 3 4115 Alle Einzelbilder einer Bildserie werden nur f r einen ausgew hlten Detektionskanal dargestellt Entsprechend der Anzahl von Einzelbildern einer Bildserie werden Uberlagerungsbilder aus allen ausgew hlten Detektionskan len erzeugt Alle Einzelbilder einer Bildserie werden f r alle Gallery Tiled Channel 1 2 3 4 5 ausgew hlten Detektionskan le getrennt 3 41 Version RK03032000 dargestellt Alle Einzelbilder einer Bildserie werden getrennt Gallery Tiled Overlay Channel 1 2 f r alle ausgew hlten Detektionskan le und zus tzlich zusammen in berlagerungsbildern dargestellt Seite 62 5 2 23 Projektion eines Bildstapels Funktion Mit der Funktion PROJECTION k nnen Sie bestimmte Intensit tsdaten aus einem Bildstapel also einer Serie von xy Schnitten oder xz Schnitten ausw hlen oder miteinander verrechnen und in einem zweidimensionalen Bild darstellen Dabei werden die Abtastpunkte Voxel die entlang
9. L schen k nnen sie einen einzelnen Auswertungsbereich indem sie ihn mit der SELECT Taste ausw hlen und mit der auf der Tastatur befindlichen Entf Taste entfernen Sie k nnen alle Auswertungsbereiche mit der CLEAR Taste auf einmal l schen 5 3 6 ROI als Polygon Funktion Mit dieser Funktion kann ein polygonf rmiger Auswertungsbereich Region of Interest ROI im Ansichtsfenster Viewer definiert werden Von den innerhalb des Auswertungsbereichs ermittelten Intensit tswerte wird das arithmetische Mittel berechnet und im Ansichtsfenster PROFILE in Abh ngigkeit der z Dimension des Datensatzes dargestellt Randbedingungen Vor der Definition des Auswertungsbereichs muss die PROFILE Funktion angew hlt werden Typische Anwendungen Nach der Wahl der PROFILE Funktion dr cken sie die ROl Funktionstaste Dr cken sie die linke Maustaste um den Anfangspunkt des Polygons zu definieren Lassen sie die Maustaste los fahren sie den Cursor in die n chste Ecke des Polygons und dr cken sie erneut die linke Maustaste Wiederholen sie dies f r jede gew nschte Ecke des Polygons Sie k nnen das Polygon durch einen Doppelklick schliessen L schen k nnen sie einen einzelnen Auswertungsbereich indem sie ihn mit der SELECT Taste ausw hlen und mit der auf der Tastatur befindlichen Entf Taste entfernen Sie k nnen alle Auswertungsbereiche mit der CLEAR Taste auf einmal l schen 5 3 7 ROlals Rechteck Seite 73 Hinweis Versio
10. nnen nur geladen aber nicht ver ndert werden Sie k nnen die f r eine spezifische Bildaufnahme vorgenommenen Einstellungen auch als benutzerdefinierte Parametereinstellung speichern und somit jederzeit mit einem Klick wieder laden Klicken Sie auf die Schaltfl che SAVE Ein Dialogfenster wird ge ffnet in dem Sie einen Namen f r die Parametereinstellung eingeben Die Parametereinstellung wird im Listenfeld unter User angelegt und ist mit einem U User gekennzeichnet Sie k nnen die Parameter ausw hlen die mit dem Befehl SAVE gespeichert werden sollen W hlen Sie im Men TOOLS die Option SETTINGS Klicken Sie im Dialogfenster SETTINGS auf das Register INSTRUMENT PARAMETERS W hlen Sie die Parameter aus indem Sie auf das entsprechende Kontrollk stchen klicken Mit den Schaltfl chen SELECT ALL und DESELECT ALL k nnen Sie alle Parameter ausw hlen oder die Wahl aller Parameter r ckg ngig machen Wenn Sie eine dieser benutzerdefinierten oder voreingestellten Parametereinstellungen anklicken und anschlie end auf die rechte Maustaste klicken stehen Ihnen in einem Kontextmen folgende Befehle zur Verf gung Befehl Funktion Set as default Die Parametereinstellung wird als Standardeinstellung beim Start des setting Systems geladen T N Die Markierung als Standardeinstellung wird r ckg ngig gemacht Lose Die Parametereinstellung wird geladen pe une Die Parametereinstellung kann umbenannt werden Version
11. obere Textfeld ein Klicken Sie dann im mittleren Feld auf ein Wort um die Suche einzugrenzen Sehen Sie sich zuletzt die am unteren Rand angezeigte Liste mit Hilfethemen durch und doppelklicken Sie auf das Thema das Sie lesen m chten Wenn Sie sich das Thema durchgelesen haben k nnen Sie entweder auf Help Topics klicken um zum Hauptbildschirm der Hilfe zur ckzukehren oder auf Back um zum vorhergehenden Hilfethema zur ckzukehren Klicken Sie auf die Schaltfl che Close um die Hilfe zu verlassen 3 8 Beenden von Windows NT Klicken Sie grunds tzlich immer erst auf den Befehl Shut Down bevor Sie Ihren PC ausschalten ber den Befehl Shut Down wird das Betriebssystem Windows NT Workstation korrekt beendet heruntergefahren Gleichzeitig stellen Sie damit sicher da auch alle brigen noch laufenden Prozesse ordnungsgem angehalten und Daten die sich gegebenenfalls im Cache befinden vom Cache auf die Festplatte bertragen werden Es stehen Ihnen verschiedene Optionen zur Verf gung wenn Sie das System herunterfahren Wenn Sie den Computer ausschalten ohne ihn vorher ordnungsgem herunterzufahren kann dies zu erheblichen Datenverlusten f hren Seite 13 4 Hilfe ber das Internet Bitte wenden Sie sich bei Problemen zuerst an Ihre Leica Niederlassung oder Ihren Leica Vertragsh ndler vor Ort Falls Sie Informationen zu Leica Microsystems Heidelberg GmbH und zur konfokalen Mikroskopie w nschen erhalten Sie
12. 2 28 3D Ansicht verschieben D gt Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle in der 3D Ansicht Funktion Mit der Taste MOVE k nnen Sie eine 3D Ansicht verschieben Klicken Sie auf die linke Maustaste und halten Sie diese gedr ckt Bewegen Sie den Mauszeiger in die Richtung in die Sie die 3D Ansicht verschieben wollen Hinweis W hrend Sie die 3D Ansicht verschieben wird die Aufl sung des Bildes leicht herabgesetzt um das Arbeiten mit dieser Funktion zu beschleunigen Nach Loslassen der linken Maustaste wird das Bild in der zuvor eingestellten Aufl sung neu angezeigt Als Alternative zu dieser manuellen Methode eine 3D Ansicht zu verschieben gibt es im Dialogfenster VIEWER OPTIONS auch die M glichkeit Koordinatenwerte f r die Positionierung des Bildes einzugeben W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Version RK03032000 Seite 67 Klicken Sie auf das Bildsymbol 3D und dann auf das Register NAVIGATION gt Im Feld TRANSLATION k nnen Sie die Koordinatenwerte f r die x Achse und z Achse ver ndern siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol 3D 5 2 29 3D Ansicht zoomen Funktion Mit der Taste ZooM k nnen Sie eine 3D Ansicht proportional vergr ern oder verkleinern Hierbei handelt es sich lediglich um eine Skalierung des erzeugten Bildes eine verbesserte Aufl sung k nnen Sie mit dieser Zoomfunktion nicht erzielen Klicken Sie im Bildfenster des Ansichtsfensters
13. Ansicht des gew nschten Programms zu klicken Zudem stellt Ihnen die Task Leiste konstant Zusatzinformationen und funktionen zur Verf gung So z B die Systemzeit und die Lautst rkeregelung falls Sie eine Sound Karte installiert haben All diese Funktionen k nnen vom Benutzer nach Belieben ge ndert und angepa t werden 3 6 Einstellen von Datum und Uhrzeit Sie haben die M glichkeit das aktuelle Datum die Uhrzeit und die Zeitzone ber das Symbol Date Time im Fenster Control Panel einzustellen Diese Einstellung ist sehr wichtig da Windows NT alle Ihre Dateien mit einem Datum und einer Uhrzeit versieht sobald Sie sie erstellen oder nderungen daran vornehmen Sie k nnen die beiden Optionen ausw hlen indem Sie auf die entsprechende Registerkarte klicken So ndern Sie Datum und Uhrzeit Klicken Sie auf das gew nschte Datum oder verwenden Sie die Steuerschaltfl chen um den angezeigten Monat und das Jahr zu ndern Die Uhrzeit kann au erdem auch ver ndert werden indem Sie zun chst die digitale Anzeige ausw hlen und die Zeit dann mit Hilfe des nach oben und des nach unten zeigenden Pfeils einstellen So ndern Sie Zeitzone W hlen Sie aus der Dropdown Liste am oberen Rand des Dialogfeldes die entsprechende Zeitzone aus Achten Sie darauf ob die Option zur automatischen Umstellung der Uhr auf Sommer bzw Winterzeit ausgew hlt ist Auf einigen Systemen k nnen Sie au erdem den markierten Bereich auf die Weltkarte z
14. Funktion gestartet wird siehe Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW Seite 33 5 1 17 Endpunkt einer Wellenl ngenserie definieren Funktion Bei einer Wellenl ngenserie wird von einer einzigen optischen Ebene ein Stapel aus Einzelbildern aufgenommen die jeweils bei einer bestimmten Wellenl nge detektiert werden Mit der Taste LAMBDA SCAN END definieren Sie die Wellenl nge bei der die Bildaufnahme enden soll gt ffnen Sie mit der Taste BEAM das Dialogfenster BEAM PATH SETTING Aktivieren Sie einen Detektor indem Sie auf das entsprechende Kontrollk stchen klicken Ein Wurfschatten verbindet nun den aktivierten Detektor mit dem entsprechenden Schieber auf der Skala des Spektrums Doppelklicken Sie auf diesen Schieber Es wird das Dialogfenster RANGE PROPERTIES ge ffnet in dem Sie den Endpunkt der Serie eingeben k nnen oder Ziehen Sie den Schieber auf der Skala des Spektrums auf die gew nschte Gr e zusammen Der rechte Rand des Schiebers kennzeichnet die Wellenl nge bei der die Bildaufnahme enden soll Klicken Sie auf die Taste LAMBDA SCAN END um den Wert zu speichern Auf die gleiche Weise wird der Anfangspunkt einer Wellenl ngenserie bestimmt Au erdem m ssen Sie noch die Anzahl der Wellenl ngenschritte bestimmen LB siehe Anfangspunkt einer Wellenl ngenserie definieren LED siehe Anzahl der Wellenl ngenschritte bestimmen Typische Anwendungen Mit einer Wellenl ngenserie k nne
15. H ufigkeit einer bestimmten Gr e graphisch dargestellt Das Histogramm wird von dem im Ansichtsfenster Viewer ausgew hlten Datensatz berechnet Bei diesem Datensatz kann es sich um ein Einzelbild oder eine Bildserie aus Rohdaten aber auch um das Ergebnisbild einer Bildverarbeitung handeln In Abh ngigkeit von der im Bild dargestellten Gr e wird im Histogramm die Verteilung von Intensit tswerten I oder H henwerten um berechnet Wenn Sie auf die Taste HISTOGRAM klicken wird das Ansichtsfenster HISTOGRAM ge ffnet in dem eine Histogrammkurve f r jeden Detektionskanal und folgende statistische Berechnungen angezeigt werden Parameter Bedeutung Formel Gesamtzahl der Pixel die in die Berechnung des Histogramms eingehen Entspricht dem eingestellten Scanformat Pixel Mean Der arithmetische Mittelwert Version RK03032000 Seite 69 Maximum Maximalwert Max I Minimum Minimalwert Variance Varianz Mittlere Abweichung Average Deviation Standard Deviation Standardabweichung Mean Energy Root Mean Square RMS Skewness Hinweis Mittlere Bildenergie Quadratischer Mittelwert cn Schiefe der Verteilung Einige der Parameter sind in wissenschaftlicher Exponentialnotation angegeben z B Pixel 3 28e 005 327680 entspricht dem Scanformat 640 x 512 Mit dem Maximalwert und Minimalwert der Intensit t lassen sich der Gain Wert und der Offset Wert die D
16. Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle im Bildfenster des Ansichtsfensters VIEWER Klicken Sie dann auf die rechte Maustaste Es erscheint ein Kontextmen in dem oie auf LUT klicken gt Im Ansichtsfenster werden die Farbleisten der aktiven Detektionskan le rechts neben dem Bildfenster eingeblendet Doppelklicken Sie auf eine der Farbleisten Wenn Sie den Mauszeiger ber die jeweilige Farbleiste halten erscheinen Anfasspunkte am oberen und unteren Ende der Farbleiste Mit diesen Anfasspunkten k nnen Sie die aktuelle Farbzuordnungstabelle auf einen bestimmten Intensit tswertebereich begrenzen und eine zweite Farbzuordnungstabelle laden Ziehen Sie den oberen Anfasspunkt nach unten oder den unteren Anfasspunkt nach oben ww Doppelklicken Sie auf den Bereich oberhalb oder unterhalb des jeweiligen Anfasspunktes ww Das Dialogfenster SELECT LUT S wird ge ffnet in dem Sie eine zweite Farbzuordnungstabelle ausw hlen k nnen Der obere und untere Intensit tswertebereich wird in den Farben der jeweiligen zweiten Farbzuordnungstabelle dargestellt Hinweis Diese Methode der Zuordnung von Farbzuordnungstabellen beeinflusst nur die aktuelle Bilddarstellung Sobald Sie einen neuen Scanvorgang starten werden wieder die im Dialogfenster BEAM PATH SETTING eingestellten Farbzuordnungstabellen verwendet siehe Strahlengang einstellen Typische Anwendungen Grunds tzlich ist die Wahl einer geeigneten Farbzuordnu
17. In dieser Dokumentation wird sowohl ein Volumenelement im Pr parat als auch ein 3D Bildpunkt als Voxel bezeichnet Version RK03032000 Seite 90 Version RK03032000 Seite 91
18. Maus auf das gew nschte Objekt zeigen die rechte Maustaste herunterdr cken gedr ckt halten und das Objekt aus dem Fenster Windows Explorer oder My Computer herausziehen Wenn Sie nun die Maustaste loslassen erscheint ein Men W hlen Sie in diesem Men die Option Create Shortcut s Here Einige Programme erstellen w hrend ihres Installationsvorgangs automatisch einen Shortcut Windows NT Workstation 4 verfolgt die Verkn pfung zwischen einem Shortcut und dem Original nicht aktiv zur ck Das bedeutet Wenn Sie beispielsweise einen Shortcut f r ein Programm erstellen und dann das Original in einen anderen Ordner verschieben und nicht kopieren kann es vorkommen da der Shortcut nicht mehr funktioniert Der Ordner Startup hat eine besondere Funktion Alle Programme die sich in diesem Ordner befinden werden automatisch gestartet sobald Sie die Windows NT Workstation 4 starten Im Men Documents sind die Namen der letzten 15 von Ihnen erstellten Dateien aufgef hrt Sie k nnen jede dieser Dateien und gleichzeitig die damit verbundene Anwendung ffnen indem Sie einfach in diesem Men auf den Namen der Datei klicken Alle Dokumentendateien die von einer Anwendung aus ge ffnet wurden in der Regel werden dazu in der jeweiligen Anwendung die Men befehle File Open gew hlt sind hier nicht aufgef hrt In dieser Liste sind nur all die Dokumente enthalten die direkt vom Desktop aus ge ffnet wurden Das Men Settings en
19. OI c1 O I d CO 200 x 200 100 500 Die Leica Confocal Software verf gt ber drei zu unterscheidende Zoom Funktionen den elektronischen Zoom den 3D Zoom und den graphischen Zoom LII siehe 3D Ansicht zoomen LB siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol DISPLAY 5 1 5 Detektionslochblende einstellen Funktion Wenn Sie auf die Taste PINHOLE klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Sie den Offungsdurchmesser der Detektionslochblende des Detektionspinholes einstellen k nnen Im Listenfeld oben rechts im Dialogfenster w hlen Sie die Einheit aus in welcher der Durchmesser angezeigt werden soll Sie k nnen zwischen um Airy Einheiten oder Digitalwerten w hlen Sie haben zwei M glichkeiten um einen Wert f r den Durchmesser der Lochblende einzugeben Bewegen Sie mit dem Mauszeiger den Schieber auf der Skala die links im Dialogfenster eingeblendet ist Der entsprechende Wert wird in der Mitte des Dialogfensters angezeigt Version RK03032000 Seite 22 Doppelklicken Sie auf den fett dargestellten Zahlenwert in der Mitte des Dialogfensters Es wird ein weiteres Dialogfenster ge ffnet in dem Sie den exakten Wert eintragen k nnen Der Offnungsdurchmesser der Detektionslochblende muss immer auf das aktuell verwendete Objektiv eingestellt werden Wenn Sie auf die Schaltfl che AiRY 1 klicken wird die Detektionslochblende automatisch in Abh ngigkeit des verwendeten Objektivs auf den O
20. RK03032000 Seite 15 Delete nur bei U Die Parametereinstellung wird gel scht Anregungsstrahlteiler ausw hlen Links neben dem Spektrum befindet sich das Symbol gr ne gekippte Linie f r den Anregungsstrahlteiler Klicken Sie auf das Symbol und w hlen Sie den gew nschten Strahlteiler aus ww Neutralfilter wie z B der Filter RT 30 70 werden bei Reflektionsanwendungen eingesetzt um das Anregungslicht auf die Probe und das reflektierte Licht zum Detektionspinhole zu leiten ww Dichroitische Filter wie z B der Reflektionskurzpassfilter RSP 510 werden bei Fluoreszenzanwendungen eingesetzt um Fluoreszenzlicht eines bestimmten Wellenl ngenbereichs vom Anregungslicht zu trennen und zu detektieren Doppeldichroitische Filter werden f r Bildaufnahmen verwendet bei denen das Pr parat mit zwei Fluoreszenzfarbstoffen markiert und mit zwei Anregungswellenl ngen angeregt wird Mit dem Doppeldichroiten DD 488 568 zum Beispiel wird Anregungslicht mit der Wellenl nge 488nm und 568nm vom Detektionslicht getrennt ww Tripeldichroitische Filter werden f r Bildaufnahmen verwendet bei denen das Pr parat mit drei Fluoreszenzfarbstoffen markiert und mit drei Anregungswellenl ngen angeregt wird Mit dem Tripeldichroit TD 488 568 633 zum Beispiel wird Anregungslicht mit der Wellenl nge 488nm 568nm und 633nm vom Detektionslicht getrennt Detektoren und Farbzuordnungstabellen LUT einstellen Unterhalb des Spektrums im D
21. Rechtecks k nnen Sie ver ndern indem Sie mit dem Mauszeiger an einem der Anfasspunkte des Rechtecks ziehen Um das Rechteck zu verschieben ohne seine Gr e zu ver ndern klicken Sie in die Mitte des Rechtecks und verschieben Sie es w hrend Sie die linke Maustaste gedr ckt halten Style Randbedingungen Die Taste RECTANGLE kann nur bet tigt werden wenn zuvor eine Pr sentationsseite mit der Taste ANNOTATION ge ffnet wurde Version RK03032000 Seite 80 5 4 5 Quantifizierungsdaten exportieren QExp Funktion Diese Funktion exportiert die Messdaten aller Auswertungsbereiche als ASCII Daten in eine Datei Randbedingungen Um die Messdaten der Auswertungsbereiche exportieren zu k nnen muss die PROFILE Funktion angew hlt werden 5 4 6 Quantifizierungsgraphen drucken Print Funktion Diese Funktion sendet die graphischen Daten s mtlicher Auswertungsbereiche auf den Standarddrucker Randbedingungen Um die Graphen der Auswertungsbereiche ausdrucken zu k nnen muss die PROFILE Funktion angew hlt werden 5 4 7 Drucken Funktion Sie k nnen den Druckbefehl entweder mit der Taste PRINT oder ber das Dialogfenster PRINTER SELECTION ausl sen Um dieses Dialogfenster zu ffnen w hlen Sie im Men FILE die Option PRINT Gedruckt werden kann das im Ansichtsfenster VIEWER geladene Bild oder eine Pr sentationsseite Wenn Sie mit der Taste PRINT den Druckbefehl ausl sen wird das im Ansichtsfenster g
22. ab sofort im Startmen und kann nun dar ber aufgerufen werden Sie haben mehrere M glichkeiten um ein Programm zu starten Die im folgenden beschriebene Methode ist die einfachste 1 Klicken Sie auf die Schaltfl che Start 2 Klicken Sie auf Programs 3 Klicken Sie auf die Gruppe die das Programm enth lt das Sie starten m chten z B LCS 4 Klicken Sie auf das Program das Sie starten m chten z B Leica LCS Au erdem k nnen Sie ein Programm starten indem Sie ein Dokument das Sie mit dem betreffenden Programm erstellt haben ffnen Das Programm wird automatisch gestartet wenn das Dokument ge ffnet wird Doppelklicken Sie auf eine Dokumentendatei im Fenster My Computer oder im Windows Explorer um sie zu ffnen Statt dessen k nnen Sie auch auf die Schaltfl che Start klicken und im Men Documents ein k rzlich verwendetes Dokument ausw hlen Weiterhin haben Sie die M glichkeit ein Programm zu starten indem Sie auf das Programmsymbol sog Shortcut auf dem Desktop doppelklicken Shortcuts sind Verkn pfungen zu anderen Dateien Wenn Sie auf einen Shortcut klicken verfolgt Windows die Verkn pfung zur ck bis zur urspr nglichen Datei Version RK03032000 Seite 10 Vorsicht Vorsicht Version RK03032000 Wenn Sie ein Dokument oder ein Programm sehr h ufig verwenden m chten Sie m glicherweise einen entsprechenden Shortcut erstellen der auf dem Desktop zur Verf gung steht Dazu m ssen Sie mit der
23. alle ausgew hlten Detektionskan le und zus tzlich zusammen in berlagerungsbildern dargestellt Hinweis Die Taste TiLED und die Taste SINGLE k nnen nicht gleichzeitig angeklickt werden da mit ihnen zwei sich ausschlie ende Funktionen aktiviert werden 5 2 16 berlagerungsbild anzeigen Funktion Wenn Sie auf die Taste OVERLAY klicken werden alle ausgew hlten Detektionskan le zusammen in einem berlagerungsbild im Ansichtsfenster VIEWER dargestellt Je nachdem welche weiteren Tasten Sie gleichzeitig noch aktivieren sind folgende Darstellungsarten m glich Tastenkombination Darstellung Von allen ausgew hlten Detektionskan len wird ein einziges Uberlagerungsbild erzeugt bei einer Overlay Single Channel 1 2 3 4 P Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Entsprechend der Anzahl von Einzelbildern einer Bildserie werden Uberlagerungsbilder aus allen ausgew hlten Detektionskan len erzeugt Overlay Single Gallery Channel 1 21 31 1415 Alle ausgew hlten Detektionskan le werden getrennt und zus tzlich zusammen in einem berlagerungsbild dargestellt bei einer Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Overlay Tiled Channel 1 2 3 4 5 Alle Einzelbilder einer Bildserie werden getrennt Overlay Tiled Gallery Channel 1 2 f r alle ausgew hlten Detektionskan le und 3 4 5 zus tzlich zusammen in berlagerungsbildern dargestellt 5 2 17 Erstes Bild der Serie anzeigen
24. auf die Schaltfl che ADD um diese in das Listenfeld SHOW ENTRIES zu bernehmen Im Listenfeld SHOW ENTRIES stehen die Eintr ge die in der Legende angezeigt werden Mit der Schaltfl che REMOVE k nnen Sie Eintr ge wieder aus der Legende herausnehmen w Mit den Schaltfl chen MOVE UP und MOVE DOWN K nnen Sie einzelne oder mehrere Eintr ge in der Liste nach oben oder unten bewegen ww Mit den Schaltfl chen EDIT GRID COLOR und EDIT BACKGROUND COLOR K nnen Sie die Farbe des Rahmens und des Hintergrunds der Legende ver ndern Die Legende HARDWARE wird automatisch am rechten Rand der Bedienoberfl che angeordnet Gr e und Position der Legende k nnen Sie jedoch beliebig ndern Um die Breite der Legende zu ndern ziehen Sie mit dem Mauszeiger den Rand an die gew nschte Position w Um die Position der Legende zu ndern doppelklicken Sie auf den Doppelrand der Legende oder klicken Sie einmal auf das Symbol a Die Legende wird als Fenster aus der Bedienoberfl che gel st Ziehen Sie die Legende jetzt mit gedr ckter linker Maustaste an die gew nschte Stelle Version RK03032000 Seite 44 Hinweis Ist die Legende ber die gesamte Breite der Bedienoberfl che vergr ert l sst sie sich nur wieder an die urspr ngliche Stelle am Rand positionieren wenn Sie zuerst die H he der Legende verkleinern und sie dann erst an den Rand verschieben Option NEw WINDOW Wenn Sie im Men WINDOW die Option NEW WINDO
25. auf die Taste CHANNEL 3 werden im Ansichtsfenster VIEWER die Bilddaten eingeblendet die im Detektionskanal 3 aufgenommen wurden Sie k nnen dem Detektionskanal eine von vielen Farbzuordnungstabellen zuweisen Dies ist sowohl im Ergebnisbild als auch w hrend der Bildaufnahme m glich ffnen Sie zu diesem Zweck das Dialogfenster SELECT LOOK UP TABLES Sie haben zwei M glichkeiten um das Dialogfenster zu ffnen gt Klicken Sie auf die Taste SELECT LOOK UP TABLES Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle im Ansichtsfenster VIEWER Klicken Sie auf die rechte Maustaste Es erscheint ein Kontextmen in dem Sie auf LUT klicken Im Ansichtsfenster werden die Farbleisten der aktiven Detektionskan le eingeblendet Doppelklicken Sie auf die entsprechende Farbleiste Hinweis Version RK03032000 siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Diese Methode der Zuordnung von Farbzuordnungstabellen beeinflusst nur die aktuelle Bilddarstellung Sobald Sie einen neuen Scanvorgang starten werden wieder die im Dialogfenster BEAM PATH SETTING eingestellten Farbzuordnungstabellen verwendet siehe Strahlengang einstellen Seite 52 5 2 10 Detektionskanal 4 anzeigen Funktion Mit einem Klick auf die Taste CHANNEL 4 werden im Ansichtsfenster VIEWER die Bilddaten eingeblendet die im Detektionskanal 4 aufgenommen wurden Sie k nnen dem Detektionskanal eine von vielen Farbzuordnungstabellen zuweisen Dies ist sowohl
26. der z Achse bereinanderliegen durch alle optischen Schnitte hindurch untersucht Aus jeder dieser S ulen von Abtastpunkten wird dann der Intensit tswert der das Auswahlkriterium erf llt oder der berechnete Intensit tswert als Repr sentant aller Werte innerhalb der S ule im zweidimensionalen Projektionsbild dargestellt Es stehen Ihnen drei verschiedene Projektionsarten zur Verf gung die Maximumprojektion die Mittelwertprojektion und die Transparentprojektion Die Maximumprojektion verwendet den maximalen Intensit tswert als Repr sentanten Die Mittelwertprojektion verwendet das arithmetische Mittel der Intensit tswerte als Repr sentanten Die Transparentprojektion verwendet ein gewichtetes Mittel der Intensit tswerte als Repr sentanten Die Gewichtung setzt sich aus zwei Faktoren zusammen Der erste Faktor ergibt sich aus dem Verh ltnis des jeweilig gemessenen Intensit tswertes zur maximal m glichen Intensit t Normierung Der zweite Faktor ber cksichtigt die Gewichtung des zuvor gemessenen Intensit tswertes Je h her die Intensit t des zuvor gemessenen Abtastpunktes ist desto gr er ist seine Gewichtung und desto geringer flie en nachfolgend gemessene Abtastpunkte in die Berechnung mit ein W hlen Sie eine der Projektionsarten und weitere Optionen im Dialogfenster VIEWER OPTIONS aus W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Klicken Sie auf das Bildsymbol IMAGES und dann auf das Reg
27. die darin befindlichen B cher und Dokumente angezeigt Doppelklicken Sie auf eines der B cher oder Dokumente um es zu ffnen Index Die Registerkarte Index enth lt einen Index mit allen zur Verf gung stehenden Themen Geben Sie den Begriff ein den Sie nachschlagen m chten W hrend Sie die ersten Buchstaben eingeben wird in der Liste gebl ttert und der entsprechende Teil in der alphabetisch aufgebauten Index Liste angezeigt Doppelklicken Sie wenn Sie das gew nschte Hilfethema in der Liste gefunden haben auf das Thema um es anzuzeigen Find Die Registerkarte Find bietet Ihnen statt der Suche nach Kategorien die M glichkeit der Volltextsuche Geben Sie den Begriff oder Ausdruck zu dem Sie ein Thema in der Hilfe suchen m chten in das Textfeld ein Das Textfeld ist mit einer Worterliste in Ihren Hilfedateien verkn pft Alle Begriffe oder Ausdr cke die den von Ihnen eingegebenen Begriffen oder Ausdr cken entsprechen werden angezeigt Sie k nnen mehr als einen Begriff eingeben indem Sie die einzelnen Begriffe durch ein Leerzeichen voneinander trennen Falls Sie die Suchoption ndern m chten rufen Sie dazu die Men option Options auf Wenn Sie das erste Mal auf diese Registerkarte klicken gibt Windows die Meldung aus da Sie zun chst eine Liste erstellen m ssen Klicken Sie auf Next und anschlie end auf Finish um die Liste zu erstellen Sie sehen nun die Hauptregisterkarte Find Geben Sie den gesuchten Begriff in das
28. die gew nschte Position gt Um die Position des Ansichtsfensters zu ndern doppelklicken Sie auf den Doppelrand des Fensters oder klicken Sie einmal auf das Symbola Das Ansichtsfenster wird aus der Bedienoberfl che gel st Ziehen Sie das Ansichtsfenster jetzt mit gedr ckter linker Maustaste an die gew nschte Stelle Hinweis Hinweis Aberration Chromatische Aberration Sph rische Version RK03032000 Ist das Ansichtsfenster ber die gesamte Breite der Bedienoberfl che vergr ert l sst es sich nur wieder an die urspr ngliche Stelle am Rand positionieren wenn Sie zuerst die H he des Fensters verkleinern und es dann erst an den Rand verschieben 5 6 Benutzerspezifische Anpassungen 5 6 1 Konfiguration des Ansichtsfensters Viewer Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen 5 6 2 Glossar Optischer Abbildungsfehler bedingt durch die unterschiedliche Brechung von Lichtstrahlen unterschiedlicher Wellenl nge an einer Linse Dadurch haben Lichtstrahlen mit k rzerer Wellenl nge eine l ngere Brennweite als Lichtstrahlen mit einer l ngeren Wellenl nge Optischer Abbildungsfehler bedingt durch den unterschiedlichen Seite 86 von der optischen Achse Lichtstrahlen die durch u ere Linsenzonen gehen haben eine k rzere Brennweite als Strahlen die durch die Linsenmitte optische Achse gehen Achromate Korrektionsklasse eines Objektivs Bei Objektiven dieses Typs ist die chromatische Aberrat
29. diese auf unserer Website unter http www llt de Oder senden Sie uns eine E Mail an support llt de 5 Softwarefunktionen 5 1 Softwarefunktionen zur Datenaufnahme 5 1 1 Strahlengang einstellen Funktion Mit der Taste BEAM ffnen Sie das Dialogfenster BEAM PATH SETTING in dem Sie den Strahlengang und die Detektoren mit den dazugeh rigen Farbzuordnungstabellen f r die Bildaufnahme einrichten k nnen Anregungswellenl nge ausw hlen Oberhalb des Spektrums im Dialogfenster befinden sich die Felder in denen Sie die Anregungswellenl nge ber einen AOTF einstellen ww Klicken Sie auf das Kontrollk stchen neben der Laserbezeichnung um den Laser zu aktivieren ww otellen Sie die Leistung der Laserlinie ein indem Sie den Schieber der entsprechenden okala auf den gew nschten Wert ziehen oder ww Doppelklicken Sie auf den Prozentwert der Laserleistung Es wird ein weiteres Dialogfenster ge ffnet in dem Sie den exakten Wert eintragen k nnen ww Die aktive Laserlinie wird im Spektrum als Linie eingeblendet Parametereinstellungen laden und speichern Ebenfalls oberhalb des Spektrums befindet sich ein Listenfeld in dem Sie Parametereinstellungen laden und speichern k nnen Version RK03032000 Seite 14 ww w F r die wichtigsten Kombinationen von Fluoreszenzfarbstoffen sind werkseitig vordefinierte Parametereinstellungen verf gbar Diese mit einem L Leica gekennzeichneten Parametereinstellungen k
30. einer Bildaufnahme registriert Sie k nnen festlegen welche Parameter angezeigt werden indem Sie auf einen beliebigen otelle in der Legende klicken Es wird die Liste aller verf gbaren Eintr ge ge ffnet W hlen Sie dann den gew nschten Eintrag Wenn Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle innerhalb der Legende EXPERIMENT halten und auf die rechte Maustaste klicken stehen Ihnen in einem Kontextmen noch folgende Befehle zur Verf gung Seite 43 Befehl Funktion Befehl Im Dialogfenster EDIT LEGEND kann ein Name f r die Legende TITLE eingegeben die Anzahl der Eintr ge NUMBER OF LEGEND ENTRIES Experiment Edit bestimmt oder alle Eintr ge gel scht werden CLEAR ALL ENTRIES Activate De Legende EXPERIMENT wird im Ansichtsfenster Viewer angezeigt Remove be aktuelle Legende EXPERIMENT wird gel scht Add Experiment tab inis et Legende EXPERIMENT wird im Ansichtsfenster VIEWER Legende HARDWARE 3 In der Legende HARDWARE werden die Hardwareeinstellungen einer Bildaufnahme registriert Um diese Legende zu ffnen w hlen Sie im Men VIEW die Option HARDWARE LEGEND Um die Eintr ge auszuw hlen die in der Legende angezeigt werden sollen klicken Sie auf die Schaltfl che EDIT Es wird das Dialogfenster EDIT LEGEND ENTRIES ge ffnet Im Listenfeld AVAILABLE ENTRIES werden alle verf gbaren Eintr ge eingeblendet W hlen oie die Eintr ge aus die in der Legende erscheinen sollen Klicken Sie dann
31. es werden keine zus tzlichen Informationen mehr gewonnen Nachteil des Oversampling ist die lange Abtastzeit und bei bleichempfindlichen Pr paraten die Gefahr der Zerst rung des Untersuchungsobjekts Man spricht von Undersampling wenn die Abtastfrequenz von 2 bis 3 Punkten unterschritten wird In diesem Fall besteht die Gefahr dass nicht alle notwendigen Informationen abgerastert werden Das Bild zeigt dann m glicherweise Strukturen die es im Pr parat nicht gibt Diesen Effekt nennt man Aliasing 5 1 7 Scanmodus ausw hlen T Funktion Wenn Sie auf die Taste MopE klicken ffnet sich ein Dialogfenster mit einer Liste der zur Verf gung stehenden Scanmodi Der Scanmodus bestimmt welche optischen Ebenen im Pr parat abgetastet werden Grunds tzlich k nnen horizontale xy Schnitte oder vertikale xz Schnitte aufgenommen werden Um ein dreidimensionales Bild vom Pr parat zu erzeugen werden die optischen Schnitte in die jeweilige dritte Raumrichtung fortgef hrt und so ein Stapel aus Einzelbildern aufgenommen Hinzu kommt die M glichkeit die Bildaufnahme in Abh ngigkeit von der Zeit oder der Wellenl nge auszuf hren Modus Funktion xyz Aus xy Schnitten wird in z Richtung ein Bildstapel aufgenommen Xzy Aus xz Schnitten wird in y Richtung ein Bildstapel aufgenommen x Eine Linie wird in Abh ngigkeit von der Zeit aufgenommen x Ein xy Schnitt wird in Abh ngigkeit von der Zeit aufgenommen xa Ein xz Schnitt wi
32. grau unterlegt und k nnen nicht bet tigt werden Mit der Taste GALLERY werden alle Einzelbilder einer Bildserie eingeblendet und k nnen somit nicht als Filmsequenz abgespielt werden 5 2 20 Letztes Bild der Serie anzeigen Funktion Die bei einer Bildserie aufgenommen Einzelbilder k nnen Sie als Filmsequenz ablaufen lassen Klicken Sie auf die Taste LAsT um zum letzten Bild dieser Serie zu springen Ist die Taste GALLERY angeklickt sind die Tasten FIRST und LAST NEXT und PREVIOUS und PLAY STOP grau unterlegt und k nnen nicht bet tigt werden Mit der Taste GALLERY werden alle Einzelbilder einer Bildserie eingeblendet und k nnen somit nicht als Filmsequenz abgespielt werden 5 2 21 Film starten und beenden Funktion Die bei einer Bildserie aufgenommenen Einzelbilder k nnen Sie als Filmsequenz ablaufen lassen Mit der Taste PLAY STOP starten und beenden Sie diesen Film Die Filmgeschwindigkeit also die Anzahl der Einzelbilder pro Zeiteinheit ist variabel und k nnen Sie im Dialogfenster VIEWER OPTIONS einstellen W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Version RK03032000 Seite 61 klicken Sie auf das Bildsymbol DISPLAY und dann auf das Register MOVIE Hinweis siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol DISPLAY Ist die Taste GALLERY angeklickt sind die Tasten PLAY STOP FiRST und LAST NExT und PREVIOUS grau unterlegt und k nnen nicht bet tigt werden Mit der Taste GALLERY werden alle
33. im Ergebnisbild als auch w hrend der Bildaufnahme m glich ffnen Sie zu diesem Zweck das Dialogfenster SELECT LOOK UP TABLES Sie haben zwei M glichkeiten um das Dialogfenster zu ffnen gt Klicken Sie auf die Taste SELECT LOOK UP TABLES Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle im Ansichtsfenster VIEWER Klicken Sie auf die rechte Maustaste Es erscheint ein Kontextmen in dem Sie auf LUT klicken Im Ansichtsfenster werden die Farbleisten der aktiven Detektionskan le eingeblendet Doppelklicken Sie auf die entsprechende Farbleiste Hinweis Version RK03032000 siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Diese Methode der Zuordnung von Farbzuordnungstabellen beeinflusst nur die aktuelle Bilddarstellung Sobald Sie einen neuen Scanvorgang starten werden wieder die im Dialogfenster BEAM PATH SETTING eingestellten Farbzuordnungstabellen verwendet siehe Strahlengang einstellen 5 2 11 Detektionskanal 5 anzeigen Funktion Mit einem Klick auf die Taste CHANNEL 5 werden im Ansichtsfenster VIEWER die Bilddaten eingeblendet die im Detektionskanal 5 aufgenommen wurden Sie k nnen dem Detektionskanal eine von vielen Farbzuordnungstabellen zuweisen Dies ist sowohl im Ergebnisbild als auch w hrend der Seite 53 Bildaufnahme m glich ffnen Sie zu diesem Zweck das Dialogfenster SELECT LOOK UP TABLES Sie haben zwei M glichkeiten um das Dialogfenster zu ffnen gt Klicken Sie auf die Tas
34. rechten Maustaste zu klicken Indem Sie ein Objekt anklicken w hlen Sie es normalerweise aus Doppelklicken Sie auf bedeutet da Sie den Cursor wie oben beschrieben auf ein angegebenes Objekt setzen und dann zweimal kurz hintereinander die Maustaste herunterdr cken und wieder loslassen sollen Durch Doppelklicken wird ein Objekt in der Regel aktiviert Ziehen Sie bedeutet da Sie den Cursor auf ein Objekt setzen die Maustaste herunterdr cken und die Maus w hrend Sie die Maustaste gedr ckt halten an eine andere Stelle bewegen sollen Sofern nicht anders angegeben verwenden Sie dazu immer die linke Maustaste andernfalls werden Sie beispielsweise angewiesen mit der rechten Maustaste zu ziehen 3 2 Die Benutzeroberfl che von Windows NT Die Basis Benutzeroberfl che von Windows NT wird als Desktop bezeichnet Der Desktop bildet den Hintergrund f r die darin enthaltenen Objekte Die Ausgangsobjekte auf dem Desktop erm glichen es dem Benutzer mit dem System auf logische Art zu interagieren und die Objekte des Systems anzuzeigen Der Windows NT Bildschirm enth lt viele besondere Objekte und Steuerelemente Sie werden im folgenden kurz erl utert Der Hintergrund vor dem alle Bilder und Dialogfelder abgebildet sind wird als Desktop bezeichnet In der Task Leiste werden alle gegenw rtig aufgerufenen Fenster und Programme angezeigt Sie k nnen zwischen den einzelnen Fenstern und Programmen wechseln indem Sie auf den
35. wieder die aufgenommenen Rohdaten des Bildes angezeigt 5 2 26 3D Ansicht erzeugen Funktion Mit der Taste 3D VIEw k nnen Sie einen zweidimensionalen Datensatz dreidimensional darstellen Bei einer Bildserie wird immer der Datensatz der Serie verwendet der aktuell im Ansichtsfenster VIEWER eingeblendet ist Sie k nnen entweder einen einzelnen xy Schnitt oder xz Schnitt aus Rohdaten oder ein Ergebnisbild wie zum Beispiel ein Topographiebild oder Projektionsbild in der 3D Ansicht darstellen Je nachdem welche Gr sse im Ausgangsbild dargestellt oder berechnet wurde werden bei der Erzeugung der 3D Ansicht entweder Intensit tswerte oder H henwerte auf der z Achse der 3D Ansicht abgebildet Hinweis Die r umliche Darstellung von Intensit t in einer 3D Ansicht f hrt leicht zu der Annahme dass die Topographie des Pr parates dargestellt wird Beachten Sie jedoch dass Sie die reale Oberfl chenstruktur eines Pr parates nur darstellen k nnen wenn Sie zuvor ein Topographiebild erzeugt haben Version RK03032000 Seite 65 siehe Topographiebild erzeugen Die 3D Ansicht kann in drei Darstellungsarten n mlich als Fl chenbild Surface als Drahtgitterbild Wireframe oder als Isolinienbild Isolines erzeugt werden Stellen Sie eine dieser Darstellungsarten im Dialogfenster VIEWER OPTIONS ein W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Klicken Sie auf das Bildsymbol SURFACE und dann auf das Register VISUALIZA
36. 1 Auswertungsbereich verschieben Nachdem sie die SELECT Taste gedr ckt haben bewegen sie den Mauszeiger in das Innere des Auswertungsbereichs den sie verschieben m chten Sobald sich der Mauszeiger zu einem Seite 74 berkreuzten Doppelpfeil ver ndert dr cken sie die linke Maustaste und halten diese gedr ckt Verschieben sie den Auswertungsbereich bei gedr ckten linker Maustaste 2 Ver ndern des Auswertungsbereichs Wenn sie den Mauszeiger ber eine Seitenkante des markierten Auswertebereichs bewegen wird ein Doppelpfeil sichtbar Dr cken sie die linke Maustaste um den Auswertungsbereich in einer Richtung zu verzerren Wenn sie den Mauszeiger exakt in einen Eckpunkt des markierter Auswertungsbereich stellen k nnen sie die Ausdehnung in zwei Richtungen gleichzeitig ver ndern Hinweis L schen k nnen sie einen einzelnen Auswertungsbereich indem sie ihn mit der SELECT Taste ausw hlen und mit der auf der Tastatur befindlichen Entf Taste entfernen 5 3 9 ROll schen Funktion Mit dieser Taste k nnen alle definierten Auswertungsbereiche ROI s auf einmal gel scht werden Randbedingungen Um die definierten Auswertungsbereiche sichtbar zu machen muss die PROFILE Funktion angew hlt werden 5 3 10 Zytofluorogramm in 2D Ansicht optional Funktion Ein Zytofluorogramm stellt die H ufigkeitsverteilung von Intensit tswerten graphisch dar Das Zytofluorogramm kann aus bis zu maximal 3 Detektionskan len erzeu
37. 2 Objektiv ausw hlen Funktion Mit der Taste OBJECTIVE ffnen Sie eine Liste von Objektiven aus der Sie das f r Ihre Bildaufnahme geeignete Objektiv ausw hlen k nnen In dieser Liste werden nur die Objektive angezeigt die zuvor einem der maximal sieben Einschraubpl tzen des Objektivrevolvers zugeordnet wurden Diese Zuordnung k nnen Sie wie folgt vornehmen W hlen Sie im Men TooLs die Option OBJECTIVE Es wird ein Dialogfenster ge ffnet mit einer umfangreichen Liste von Objektiven und den symbolisch dargestellten Einschraubplatzen Slots des Objektivrevolvers ww ouchen Sie in dieser Liste das von Ihnen verwendete Objektiv und klicken Sie es an Halten Sie die linke Maustaste gedr ckt und ziehen Sie das Objektiv auf das Symbol des Slots in welchem das Objektiv eingeschraubt ist Die Zuordnung wird in der Software gespeichert und das Objektiv erscheint in der Auswahlliste die mit der Taste OBJECTIVE ge ffnet werden kann ww Wiederholen Sie diesen Vorgang f r alle Objektive die sie im Objektivrevolver eingesetzt haben Mit den Schaltfl chen ADD REMOVE und EDIT k nnen Sie in diesem Dialogfenster neue Objektive eintragen oder l schen sowie Objektivbezeichnungen editieren Hinweis Bei den Mikroskopen des Typs DM RXA DM RXE und DM IRBE wird der Objektivrevolver von der Software angesteuert so dass bei der Auswahl eines Objektivs ber die Taste oder das Version RK03032000 Seite 17 Dialogfenster O
38. BJECTIVE das Objektiv automatisch in den Strahlengang gedreht wird Bei allen anderen Mikroskoptypen muss das Objektiv nicht nur in der Software eingestellt sondern zus tzlich noch manuell in den Strahlengang gebracht werden Randbedingungen Bei der Wahl des richtigen Objektivs f r eine bestimmte Anwendung ist neben der Korrektionsklasse des Objektivs Achromate Apochromate Fluoritobjektive und Planobjektive vor allem der Vergr erungsfaktor und die numerische Apertur entscheidend Die numerische A Apertur bestimmt das Aufl sungsverm gen eines Objektiis und wird aus dem ffnungswinkel des vom Objektiv aufgenommenen Lichtkegels und dem Brechungsindex des Mediums zwischen Objektivlinse und Pr parat errechnet NA n sin o St rker vergr ernde Objektive haben im allgemeinen h here numerische Aperturen aber auch kleinere Eintrittslinsen und k nnen deshalb Licht nur von einem relativ kleineren Scanfeld aufnehmen Objektive mit hoher Apertur erm glichen zwar eine hohe Aufl sung haben jedoch den Nachteil dass sie nur einen geringen freien Arbeitsabstand zulassen Die folgende Tabelle veranschaulicht diese Zusammenh nge Obiektiv Aufl sung Aufl sung Aufl sung Aufl sung Scanfeldgr e J xy Luft z Wasser z OIl z xy T PL FLUOTAR 5x n mt a 0 15 i PL FLUOTAR rsss 10x 0 30 N PLAN 20x 0 40 488 2630 3566 4093 500 N PLAN 50x 0 75 260 649 048 h 108 200 PL APO 100x 1 40 139 319 209 236 100 mn We
39. Das Tastenfeld unterhalb des Bildfensters Bottom buttons wird ein oder ausgeblendet Die Farbzuordnungstabellen des aktuellen Bildes werden ein oder ausgeblendet Die Legende EXPERIMENT wird ein oder Legend ausgeblendet Das Ansichtsfenster VIEWER wird auf die volle Full screen E F Bildschirmgr sse vergr ert l Das Dialogfenster VIEWER OPTIONS wird Viewer Options ge ffnet LUT Die Farbzuordnungtabellen 5 werden als Farbleisten rechts neben dem Bildfenster angezeigt Wenn Sie den Mauszeiger ber die jeweilige Farbleiste halten erscheinen Anfasspunkte am oberen und unteren Ende der Farbleiste Mit diesen Anfasspunkten k nnen Sie die aktuelle Farbzuordnungstabelle auf einen bestimmten Intensit tswertebereich begrenzen und eine zweite Farbzuordnungstabelle laden Damit haben Sie die M glichkeit den Kontrast des Bildes graphisch zu erh hen Ziehen Sie den oberen Anfasspunkt nach unten oder den unteren Anfasspunkt nach oben Doppelklicken Sie auf den Bereich oberhalb oder unterhalb des jeweiligen Anfasspunktes Das Dialogfenster SELECT LUT s wird ge ffnet in dem Sie eine zweite Farbzuordnungstabelle ausw hlen k nnen Der obere und untere Intensit tswertebereich wird in den Farben der jeweiligen zweiten Farbzuordnungstabelle dargestellt Version RK03032000 siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Legende EXPERIMENT 3 In der Legende EXPERIMENT werden verschiedene Bildparameter
40. E neben dem Feld SECTIONS Die Anzahl der Schnitte wird neu berechnet und angezeigt Wenn Sie auf die Taste RESET klicken werden wieder die anfangs eingestellten Werte angezeigt Achten Sie au erdem darauf alle Einstellungen vorzunehmen die f r eine Bildserie notwendig sind wie z B den Anfangspunkt und Endpunkt zu definieren LL siehe Serien Scan starten LE siehe Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW Hinweis Die minimale Schrittweite ist aus ger tetechnischen Gr nden auf 40 5 nm begrenzt Dies bedeutet jedoch keine Einschr nkung des Aufl sungsverm gens da dieser Wert besser als die xz Aufl sung aller g ngigen Objektive ist Version RK03032000 Seite 35 Hinweis Version RK03032000 5 1 19 Anzahl der Wellenl ngenschritte bestimmen Funktion Bei einer Wellenl ngenserie wird von einer einzigen optischen Ebene ein Stapel aus Einzelbildern aufgenommen die jeweils bei einer bestimmten Wellenl nge detektiert werden Die Bildaufnahme erfolgt ber einen Wellenl ngenbereich hinweg der vom Anfangspunkt und Endpunkt der Serie begrenzt wird Mit der Taste LAMBDA STEPS definieren Sie die Anzahl der Aufnahmen die innerhalb dieses Bereichs aufgenommen werden LB siehe Anfangspunkt einer Wellenl ngenserie definieren LB siehe Endpunkt einer Wellenl ngenserie definieren Typische Anwendungen Mit einer Wellenl ngenserie k nnen Sie das Emissionsmaximum eines Fluoreszenzfarbstoffes
41. Isolinien trennen soll Damit k nnen Sie die Anzahl der Isolinien in der 3D Ansicht begrenzen Im Feld IsoLiNE DETAIL LEVEL bestimmen Sie durch Eingabe eines Grenzwertes dass nur Isolinien mit einer bestimmten L nge in der 3D Ansicht dargestellt werden Damit werden nur die Isolinien angezeigt die einem mit einer bestimmten H ufigkeit auftretenden Intensit tswert entsprechen siehe 3D Ansicht erzeugen 5 2 7 Detektionskanal 1 anzeigen Funktion Mit einem Klick auf die Taste CHANNEL 1 werden im Ansichtsfenster VIEWER die Bilddaten eingeblendet die im Detektionskanal 1 aufgenommen wurden Sie k nnen dem Detektionskanal eine von vielen Farbzuordnungstabellen zuweisen Dies ist sowohl im Ergebnisbild als auch w hrend der Bildaufnahme m glich ffnen Sie zu diesem Zweck das Dialogfenster SELECT LOOK UP TABLES Sie haben zwei M glichkeiten um das Dialogfenster zu ffnen Seite 50 gt Klicken Sie auf die Taste SELECT LOOK UP TABLES gt Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle im Ansichtsfenster VIEWER Klicken Sie auf die rechte Maustaste Es erscheint ein Kontextmen in dem Sie auf LUT klicken Im Ansichtsfenster werden die Farbleisten der aktiven Detektionskan le eingeblendet Doppelklicken Sie auf die entsprechende Farbleiste Hinweis siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Diese Methode der Zuordnung von Farbzuordnungstabellen beeinflusst nur die aktuelle Bilddarstellung Sobald Sie ei
42. SCAN werden ununterbrochen und immer nur aus einer einzigen optischen Ebene Bilder vom Pr parat aufgenommen Bildserien k nnen dabei nicht erstellt werden da immer das zuletzt erzeugte Bild das vorherige ersetzt Dr cken Sie erneut auf diese Taste um den Endlos Scan zu beenden Randbedingungen Das Ger t arbeitet automatisch mit den zuletzt eingestellten Scanparametern Einige dieser Parameter k nnen Sie w hrend Seite 29 der Bildaufnahme ver ndern Andere sollten Sie vor Beginn der Bildaufnahme einstellen Vor der Bildaufnahme W hrend der Bildaufnahme Objektiv ausw hlen Filter einstellen Scanformat ausw hlen Pinholegr e einstellen Scanmodus ausw hlen Elektronischen Zoom einstellen Scangeschwindigkeit ausw hlen Detektoren einstellen Unidirektionaler oder Bidirektionaler Scan Phase einstellen ausw hlen z y Position einstellen Die Tasten der Funktionen die w hrend der Bildaufnahme mit der Endlos Scan Funktion nicht eingestellt werden k nnen sind deaktiviert und erscheinen grau unterlegt Typische Anwendungen Die Endlos Scan Funktion dient zur Optimierung der Bildqualit t bei der ersten Aufnahme eines Pr parates W hrend das Pr parat kontinuierlich abgetastet wird k nnen Sie die oben genannten Scanparameter einstellen und das Ergebnis direkt am Bild berpr fen Hinweis Bei bleichempfindlichen Pr paraten ist es ratsam nur in eingeschr nktem Ma e mit dem Endlos Scan zu arbeiten Die kontinuie
43. Sie mit dem Mauszeiger den Schieber auf der Skala die links im Dialogfenster eingeblendet ist Der entsprechende Positionswert wird in der Mitte des Dialogfensters angezeigt Doppelklicken Sie auf den fett dargestellten Positionswert in der Mitte des Dialogfensters Es wird ein weiteres Dialogfenster ge ffnet in dem Sie den exakten Wert eintragen k nnen Version RK03032000 Die z y Position kann auch mit dem entsprechenden Potentiometer der Panelbox eingestellt werden Seite 27 5 1 10 Zeitserie einstellen Funktion Mit der Taste TiME ffnen Sie das Dialogfenster TIME CONFIGURATION in dem Sie die Aufnahme einer Zeitserie einstellen k nnen Sie k nnen eine Linie xt einen horizontalen Schnitt xyt einen vertikalen Schnitt xzt oder einen Stapel aus horizontalen Schnitten xyz mehrmals hintereinander aufnehmen Die Einstellungen die Sie in diesem Dialogfenster vornehmen k nnen h ngen von dem ausgew hlten Scanmodus ab Hinweis Die Taste TIME ist erst aktiv wenn Sie mit der Taste MODE einen Scanmodus mit Zeitdimension ausgew hlt haben siehe Scanmodus ausw hlen F r eine Zeitserie im Scanmodus xt k nnen Sie folgende Parameter im Dialogfenster einstellen AT Pauseninterval zwischen den Aufnahmen Lines Anzahl der Aufnahmen der Linie Eines per Anzahl der Linien pro Speicherseite Pages Anzahl der Speicherseiten C Gesamte Aufnahmezeit also Summe aus Pausenintervallen und Aufnahmezeit F r e
44. Stufen Sind f r die Optimierung des Bildkontrastes Offset und Gain der Detektoren zu empfehlen Glow Over hebt Intensit ten am oberen Tabellenrand blau hervor Glow Under stellt Intensit ten am unteren Tabellenrand gr n dar Glow Over and Under ist eine Kombination aus diesen beiden Farbtabellen Glow Over Glow Under Glow Over amp Under Cyan Magenta Yellow Sind f r den Ausdruck eines Bildes zu empfehlen Die sogenannten CMY K Farben werden zur Farbausgabe auf Drucksystemen verwendet RGB Farben wie die anderen hier genutzten Farbzuordnungstabellen werden f r die Farbdarstellung auf Monitoren eingesetzt Da es sich hier um zwei unterschiedliche Farbsysteme handelt k nnen sich die Farben in der CMY K Darstellung stark von der Darstellung auf dem Monitor unterscheiden Alle Farbzuordnungstabellen sind auch mit inversem Farbverlauf verf gbar das hei t hohe Intensit ten werden dunkel niedrige Intensit ten hell dargestellt 5 2 13 Einzelbild anzeigen Funktion Version RK03032000 Seite 56 Wenn Sie auf die Taste SINGLE klicken wird nur ein Detektionskanal oder mehrere Detektionskan le in nur einem Bild im Ansichtsfenster VIEWER dargestellt Je nachdem welche weiteren Tasten Sie gleichzeitig noch aktivieren sind folgende Darstellungsarten m glich Tastenkombination Darstellung Nur ein ausgew hlter Detektionskanal wird Single Channel 1 72 3 4 5 dargestellt bei einer Bildse
45. TION Hinweis siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol SURFACE F r jeden Detektionskanal wird eine getrennte 3D Ansicht erstellt Es ist daher nicht m glich aus einem berlagerungsbild Taste OVERLAY eine einzige 3D Ansicht zu erzeugen 5 2 27 3D Ansicht drehen Funktion Mit der Taste ROTATE k nnen Sie eine 3D Ansicht in alle drei Raumrichtungen drehen Beachten Sie dass die 3D Ansicht um einen Fixpunkt gedreht wird der sich in der Mitte des Bildes befindet Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle in der 3D Ansicht Klicken Sie auf die linke Maustaste und halten Sie diese gedr ckt Bewegen Sie den Mauszeiger in die Richtung in die Sie die 3D Ansicht drehen wollen Hinweis Version RK03032000 W hrend Sie die 3D Ansicht drehen wird die Aufl sung des Bildes leicht herabgesetzt um das Arbeiten mit dieser Funktion zu beschleunigen Nach Loslassen der linken Maustaste wird das Bild in der zuvor eingestellten Aufl sung neu angezeigt Seite 66 Als Alternative zu dieser manuellen Methode eine 3D Ansicht zu drehen gibt es im Dialogfenster VIEWER OPTIONS auch die M glichkeit Drehwinkel f r die drei Raumachsen einzugeben W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Klicken Sie auf das Bildsymbol 3D und dann auf das Register NAVIGATION gt Im Feld ROTATION k nnen Sie Drehwinkel f r alle drei Achsen eingeben siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol 3D 5
46. VIEWER auf eine beliebige Stelle und ziehen Sie mit gedr ckter linker Maustaste den Mauspfeil zum unteren Rand Um die 3D Ansicht zu vergr ssern Klicken Sie im Bildfenster des Ansichtsfensters VIEWER auf eine beliebige Stelle und ziehen Sie mit gedr ckter linker Maustaste den Mauspfeil zum oberen Rand Um die 3D Ansicht zu verkleinern Hinweis W hrend Sie die 3D Ansicht zoomen wird die Aufl sung des Bildes leicht herabgesetzt um das Arbeiten mit dieser Funktion zu beschleunigen Nach Loslassen der linken Maustaste wird das Bild in der zuvor eingestellten Aufl sung neu angezeigt Als Alternative zu dieser manuellen Methode eine 3D Ansicht zu zoomen gibt es im Dialogfenster VIEWER OPTIONS auch die M glichkeit den Zoom ber die Eingabe von Zahlenwerten zu ver ndern W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Klicken Sie dann auf das Bildsymbol 3D Version RK03032000 Seite 68 Im Register NAVIGATION k nnen Sie den Zoom variieren indem Sie im Feld TRANSLATION den y Wert ndern siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol 3D Hinweis Die Leica Confocal Software verf gt ber drei zu unterscheidende Zoom Funktionen den 3D Zoom den elektronischen Zoom und den graphischen Zoom A siehe Elektronischer Zoom Q siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol DISPLAY 5 3 Mess und Analysefunktionen 5 3 1 Histogramm berechnen Funktion Mit der HISTOGRAMM Funktion wird die
47. W anklicken haben Sie die M glichkeit ein weiteres Ansichtsfenster zu ffnen das dasselbe Bild anzeigt wie das aktuell ge ffnete Ansichtsfenster Mit diesem Befehl legen Sie also nicht ein neues Experiment an sondern ffnen nur eine zweite Ansicht auf die aktuellen Bilddaten Vorteil dieser Option ist dass gleichzeitig verschiedene Darstellungen derselben Bilddaten moglich sind Diese Kopie des aktuellen Ansichtsfensters erhalt zur Unterscheidung eine laufende Nummer hinter der Dateiendung 4 1 and 2 1 and 2 4 5 3 3 4 1 and 2 1 and 2 AS 3 3 5 2 2 Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol 3D Funktion Wenn Sie im Men ViEW auf die Option VIEWER OPTIONS klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Grundeinstellungen f r verschiedene Funktionen vorgenommen werden k nnen In diesem Dialogfenster werden links die den Funktionen entsprechenden Bildsymbole und rechts die dazugeh rigen Register angezeigt Wenn Sie das Dialogfenster ffnen erscheinen die Bildsymbole der Funktionen mit denen Sie gerade arbeiten Klicken Sie auf den Befehl SHOW ALL um alle Bildsymbole anzuzeigen Im Register NAVIGATION werden die Zahlenwerte der Aktionen angezeigt die mit den Tasten ROTATE MOVE und Zoom und dem Mauszeiger ausgef hrt werden Im Feld ROTATION k nnen Sie durch ndern des Winkelgrads der drei Achsen eine 3D Ansicht in alle drei Raumrichtungen kippen Die 3D Ansicht wird um einen Fixpunkt ged
48. anik und Elektronik kann es beim Betrieb zu leichten Abweichungen gegen ber den eingestellten Standardwerten kommen die mit dieser Taste nachgeregelt werden k nnen 5 1 23 Aufnahmeparameter eines Experiments bernehmen Funktion Mit der Funktion APPLY k nnen Sie die Hardwareeinstellungen die Sie f r ein bereits existierendes Experiment verwendet haben f r die Aufnahme eines neuen Experiments bernehmen Somit haben Sie die M glichkeit f r eine Anwendung optimal eingerichtete Scanparameter mit einem Klick f r weitere Bildaufnahmen neu einzustellen Aktivieren Sie den Bilddatensatz dessen Einstellungen Sie bernehmen wollen Klicken Sie auf die Taste APPLY Hinweis Version RK03032000 5 1 24 Bildaufnahme im Burstbetrieb Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen 5 1 25 Bildaufnahme im Mittelungsverfahren Seite 40 Funktion Mit der Funktion AVERAGE wird ein Mittelungsverfahren f r die Bildaufnahme verwendet Dabei wird jedes einzelne Bild also jeder xy Schnitt oder xz Schnitt mehrmals abgetastet Aus den wiederholt gemessenen Intensit tswerten wird f r jeden Abtastpunkt der arithmetische Mittelwert berechnet und im Ergebnisbild dargestellt Das hier verwendete Verfahren ermittelt einen fortlaufenden Mittelwert Das bedeutet dass nach der Aufnahme des ersten Bildes jedes neu aufgenommene Bild mit dem zuvor dargestellten Bild gemittelt und im Ergebnisbild dargestellt wird Dynamischer Mittel
49. auf den Befehl SHOW ALL um alle Bildsymbole anzuzeigen Im Register VISUALIZATION k nnen Sie im Feld RENDER MODE ausw hlen ob die 3D Ansicht als Fl chenbild Surface als Drahtgitterbild Wireframe oder als Isolinienbild Isolines ausgef hrt werden soll Render Mode Funktion Surface Die Zwischenr ume zwischen den Bildpunkten werden mit Fl chen gef llt Alle Bildpunkte werden mit Linien verbunden die Zwischenr ume bleiben Wireframe frei Version RK03032000 Seite 49 l Bildpunkte die Werten mit gleicher Intensit t entsprechen werden von Isolines einer Kurve umschlossen W hlen Sie im Feld PROJECTION TYPE in welcher Perspektive die 3D Ansicht dargestellt werden soll Projection Type Funktion Perspective Die 3D Ansicht wird in Zentralperspektive dargestellt Parallel Die 3D Ansicht wird in Parallelperspektive dargestellt Version RK03032000 Im Feld STRETCH HEIGHT FACTOR haben Sie die M glichkeit den Skalierfaktor in z Richtung zu variieren und damit die 3D Ansicht in der H he zu strecken oder zu schrumpfen Im Feld DOWNSAMPLE RATE kann die Informationsdichte der 3D Ansicht reduziert werden um die Bildverarbeitung zu beschleunigen Bei einer Bildpunktdichte von 1 1 werden alle gemessenen Intensit tswerte im Bild dargestellt Bei einer Bildpunktdichte von 1 2 flie t nur jeder zweite Intensit tswert in das Bild ein Im Feld ISOLINE INTERVAL definieren Sie einen Abstand in um der die einzelnen
50. b sehr wichtig weil die Zeichen die Sie eintippen auf dem Bildschirm nur als Sternchen erscheinen Falls Sie das Kennwort bei der Best tigung falsch eingegeben haben wird nun eine Warnung angezeigt Versuchen Sie es noch einmal Klicken Sie anschlie end auf OK Wenn Sie sich das n chste Mal anmelden ist Ihr neues Kennwort wirksam Beachten Sie Wenn Sie ein Kennwort eingegeben haben d rfen Sie es auf keinen Fall vergessen Ohne das korrekte Kennwort haben Sie keinen Zugriff mehr auf Ihren Computer Es wird nun das Dialogfeld Welcome angezeigt Nehmen Sie sich einen Moment Zeit um den Tip Did you know zu lesen und klicken Sie dann auf die Schaltfl che Close um mit der Arbeit in Windows NT zu beginnen Seite 7 Version RK03032000 3 1 Arbeiten mit der Maus Um Windows NT wirklich effizient verwenden zu k nnen ben tigen Sie eine Maus Folgende Maus Aktionen m ssen Sie kennen Zeigen Sie auf bedeutet da Sie den Cursor der bei Bewegungen mit der Maus die Form eines Pfeils annimmt auf das angegebene Objekt setzen sollen indem Sie die Maus bewegen Die Spitze des Pfeils mu das Objekt ber hren Klicken Sie auf bedeutet da Sie den Cursor wie oben beschrieben auf ein angegebenes Objekt setzen und dann die Maustaste einmal kurz herunterdr cken und wieder loslassen sollen Sofern nicht anders angegeben verwenden Sie dazu immer die linke Maustaste andernfalls werden Sie beispielsweise angewiesen mit der
51. d Seite 5 Hinweis Hinweis Version RK03032000 automatisch die Save as Funktion verwendet die Sie zur Eingabe eines Dateinamens auffordert Neben der Definition eines geeigneten Dateinamens k nnen Sie hier auch das Dateiformat w hlen Experimente k nnen nur im Leicaspezifischen lei Format Beim Speichern von Experimenten k nnen sie evtl vorhandene Einzelbilder im tif oder raw Format abspeichern Hatten Sie das Experiment oder das Bild bereits einmal abgespeichert werden bei jedem weiteren Speichervorgang die alten Daten berschrieben Wenn Sie dies nicht wollen und die neuen Daten unter einem anderen Namen abspeichern wollen sollten Sie File Save as w hlen 2 6 Datenorganisation durch Gruppieren von Experimenten Das Konzept der Leica Confocal Software erlaubt es Einzelbilder Bildserien sowie Ergebnisse von Bildverarbeitungsschritten zu einer Gruppe einem Experiment zusammenzufassen Sie erhalten einen berblick ber die geladenen Experimente im Experimentenansichtsfenster Experiment Overview Falls das Experimentenansichtsfenster geschlossen ist k nnen Sie es mit View Experiment Overview ffnen Mit File New und File New Template wird ein neues Experiment angelegt Ebenso werden bereits abgespeicherte Dateien die Sie ffnen als separate Experimente verwaltet 2 7 Zusammenstellen von Experimenten Nachdem Sie mit File gt New oder File gt New Template ein neues Experime
52. dardeinstellung befinden sich im Tastenfeld links vom Bildfenster die Tasten f r die Bilddarstellung und im Tastenfeld unterhalb des Bildfensters die Tasten mit denen man durch die einzelnen Bilder einer Bildserie bl ttern kann Beide Tastenfelder k nnen Sie innerhalb des Ansichtsfensters VIEWER verschieben oder aus diesem als separates Fenster herausnehmen Zu diesem Zweck klicken Sie mit dem Mauszeiger auf den Doppelrand des Tastenfeldes und ziehen sie es bei gedr ckter Maustaste an die gew nschte Stelle Bildfenster 4 Wenn Sie den Mauszeiger auf eine beliebige Stelle innerhalb des Bildfensters positionieren und auf die rechte Maustaste klicken wird ein Kontextmen ge ffnet in dem Ihnen folgende Befehle zur Verf gung stehen Befehl Funktion to Experiment Selection raw ME Ausschnittes im Bildfenster wird als neues p Bild im aktuellen Experiment angelegt Die Bildschirmkopie des gesamten aktuellen All snapshot Bildfensters wird als neues Bild im aktuellen Experiment angelegt Der im Bildfenster markierte Ausschnitt wird Printer Selection gedruckt Das gesamte aktuelle Bildfenster wird All gedruckt Version RK03032000 Die Rohdaten eines markierten Ausschnitts im Bildfenster werden als neues Bild in das aktuelle Experiment kopiert Die Bildschirmkopie eines markierten Seite 42 Das Tastenfeld links vom Bildfenster wird ein Left buttons oder ausgeblendet
53. den die aufgenommenen Experimente sowie deren Inhalte in einem Verzeichnisbaum dargestellt Das Ansichtsfenster kann ge ffnet werden ber View Experiment Overview Statusleiste Statusbar Die Statusleiste befindet sich am unteren Rand der Benutzeroberfl che der Leica Confocal Software In ihr werden angezeigt e Der Fortschritt beim Laden von Bilddaten Progressbar e Die Versionsnummer der Software e Die Bezeichnung der Maschinenkonfiguration Systemtyp Details ber Einzelfunktionen k nnen Sie dem Kapitel Softwarereferenz entnehmen Seite 4 Hinweis Version RK03032000 2 4 ffnen von Datens tzen 2 4 1 Lesbare Dateiformate Folgende Dateiformate lassen sich in der Leica Confocal Software ffnen und darstellen Experimente lei Es handelt sich hierbei um ein Leica spezifisches bin res Datenformat Dieses Format ist f r Daten von kompletten Experimenten vorgesehen TIFF Dateien tif Es handelt sich dabei um Leica Bilddateien im Single und Multi TIFF Format Es k nnen sowohl Bilddateien in fr her verwendeten TCS Formaten als auch externe Dateien im RGB TIFF Format eingelesen werden Annotation ano Es handelt sich hierbei ebenfalls um ein Leica spezifisches bin res Datenformat In ihm werden Pr sentationsseiten Annotations abgespeichert Die auf den Pr sentationsseiten vorhandenen Elemente wie Bilder Texte und Grafiken liegen jeweils als einzelne Objekte vor Beim Lesen der Date
54. die Taste BEGIN Der Positionswert f r den Anfangspunkt wird gespeichert Auf die gleiche Weise wird auch der Endpunkt eingestellt siehe z y Position einstellen Hinweis Sie k nnen Anfangspunkt und Endpunkt einer Serie auch bequem im Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW einstellen Sie ffnen dieses Dialogfenster mit der Taste SERIES kleine Taste nicht die Taste mit der die Serien Scan Funktion gestartet wird siehe Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW 5 1 15 Anfangspunkt einer Wellenl ngenserie definieren Funktion Bei einer Wellenl ngenserie wird von einer einzigen optischen Ebene ein Stapel aus Einzelbildern aufgenommen die jeweils bei einer bestimmten Wellenl nge detektiert werden Mit der Taste LAMBDA SCAN BEGIN definieren Sie die Wellenl nge bei der die Bildaufnahme beginnen soll ffnen Sie mit der Taste BEAM das Dialogfenster BEAM PATH SETTING Aktivieren Sie einen Detektor indem Sie auf das entsprechende Kontrollk stchen klicken Ein Wurfschatten verbindet nun den aktivierten Detektor mit dem entsprechenden ochieber auf der Skala des Spektrums Doppelklicken Sie auf diesen Schieber Es wird das Dialogfenster RANGE PROPERTIES ge ffnet in dem Sie den Anfangspunkt der Serie eingeben k nnen oder Version RK03032000 Seite 32 Ziehen Sie den Schieber auf der Skala des Spektrums auf die gew nschte Gr e zusammen Der linke Rand des Schiebers kennzeichnet die Wellenl nge bei der die Bildaufnah
55. e startet nach einer gewissen Zeit unter Benutzung des ausgew hlten Einstellungsprofil auch selbst 2 2 Das experimentelle Konzept der Software Die Leica Confocal Software erlaubt es Bilddaten oder Ergebnisse von Bildverarbeitungsschritten zu Gruppen zusammenzufassen Je eine Gruppe wird Experiment genannt und in einem speziellen Datenformat lei abgespeichert So k nnen originale experimentelle Bilddaten gemeinsam mit Bilddarstellungsdaten abgelegt werden Weitere Details entnehmen Sie bitte dem Kapitel Datenorganisation durch Gruppieren von Experimenten Seite 3 Version RK03032000 2 3 Prinzipieller Aufbau der Benutzeroberflache Das Aussehen der graphischen Benutzeroberfl che im Folgenden kurz GUI Graphical User Interface genannt h ngt sehr stark vom verwendeten Einstellungsprofil ab Dennoch verf gt das GUI ber eine Reihe von Standardelementen Das GUI verf gt ber folgende Standardelemente Die Men zeile In ihr befinden sich die Kategorien File View Macro Tools Window sowie Help Innerhalb dieser Kategorien finden Sie Befehle und Informationen zur allgemeinen Darstellung Einstellung sowie zur Anpassung an den Benutzer Sie enth lt keine Funktionen zur direkten Steuerung von Scanfunktionen Diese befinden sich im TCS Men View gt Menu gt TCS Menu Die Men zeile selbst kann nicht konfiguriert werden Das Ansichtsfenster TCS_Viewer In ihm werden Bilddaten experimentelle Bedingungen sowie Angab
56. eblendet und gespeichert ww Die Gesamth he des Bildstapels zwischen Anfangs und Endpunkt wird errechnet und angezeigt Total Klicken Sie nun auf die Taste SERIES SCAN Das Dialogfenster bleibt ge ffnet und Sie k nnen die Aufnahme der Bildserie mitverfolgen Randbedingungen Es werden noch folgende zus tzliche Parameter im Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW angegeben die vor der Aufnahme einer Bildserie eingestellt werden m ssen Scanmodus oberste Zeile rechts neben der Graphik Scanformat rote Zahlen an den oberen Kanten des W rfels gt Anzahl der optischen Schnitte Teilstriche zwischen Anfangspunkt und Endpunkt Die rote Zahl an der vertikalen Kante des W rfels entspricht der Scantiefe d h dem maximalen Verfahrweg des Galvanometers in z Richtung der nicht ver ndert werden kann Hinweis Anfangspunkt und Endpunkt k nnen auch mit der Panelbox und den separaten Tasten BEGIN und END definiert werden LB siehe Anfangspunkt einer r umlichen Serie definieren LED siehe Endpunkt einer r umlichen Serie definieren LE siehe z y Position einstellen Version RK03032000 Seite 31 5 1 14 Anfangspunkt einer r umlichen Serie definieren Funktion Mit der Taste BEGIN definieren Sie den Anfangspunkt einer r umlichen Bildserie Stellen Sie zuerst die exakte z Position bzw y Position mit der Taste Z Y POSITION oder an der Panelbox mit dem entsprechenden Potentiometer ein Dann klicken Sie auf
57. eladene Bild oder die Pr sentationsseite mit dem voreingestellten Drucker und in der voreingestellten Seitendarstellung gedruckt Diese Standardeinstellungen k nnen Sie im Dialogfenster PRINTER SELECTION nach ihren W nschen ver ndern Zu diesem Zweck k nnen Sie folgende Schaltfl chen in diesem Dialogfenster bedienen Schaltfl che Funktion Version RK03032000 Seite 81 Prinerseti ffnet ein Dialogfenster in dem man den Drucker und p Druckereinstellungen ndern kann Prin Das Bild oder die Pr sentationsseite wird ausgedruckt ffnet ein Dialogfenster in dem man eine beliebige Hintergrundfarbe f r die Seite ausw hlen kann Center on page Das Bild wird in die Mitte der Seite plaziert Fi to page Die Bildgr e wird auf die Gr e des bedruckbaren Bereichs ausgerichtet Aspe ratio Background color Das Seitenverh ltnis des Bildes bleibt bei nderungen von H he und Breite erhalten Im Feld IMAGE k nnen Sie die H he Size Y und Breite Size X des Bildes ver ndern und einen Seitenrand nach oben Offset Y und einen Seitenrand nach links Offset X definieren Bildgr e und Seitenr nder k nnen nicht ver ndert werden wenn die Schaltfl che FIT TO PAGE angeklickt ist Haben Sie die Schaltfl che CENTER ON PAGE angeklickt k nnen nur die Seitenr nder nicht ver ndert werden Mit der im Feld PRINT PREVIEW eingeblendeten Vorschau der Druckseite k nnen Sie das Ergebnis der vorgenommenen nderungen be
58. en Intensit tswertebereich zu begrenzen ziehen Sie im Feld INTENSITY RANGES die beiden Enden des Schiebers des jeweiligen Detektionskanals auf den gew nschten Wert Sie k nnen die Schieber von zwei oder mehr Detektionskan len miteinander verriegeln wenn Sie das Kontrollk stchen LOCK SLIDERS anklicken Um Intensit tswerte in Abh ngigkeit von ihrer H ufigkeit zu begrenzen ziehen Sie im Feld VISIBLE FREQUENCIES die beiden Enden des Schiebers auf den gew nschten Wert LB siehe Zytofluorogramm in 2D Ansicht LB siehe Zytofluorogramm in 3D Ansicht Im Register CoLOR k nnen Sie unterschiedliche Farbzuordnungstabellen f r die Einf rbung des Zytofluorogramms ausw hlen Die bin ren Farbzuordnungstabellen Binary with visualisieren nicht die H ufigkeit der gemessenen lntensit ten Bei diesen Farbzuordnungstabellen wird ein Intensit tswert im Zytofluorogramm angezeigt sobald er einmal detektiert wurde Die h ufigkeitskodierten Farbzuordnungstabellen Frequency coded bilden die H ufigkeit der Intensit tswerte ber die Helligkeit der Pixel im Zytofluorogramm ab Je heller also ein Pixel im Bild ist desto h ufiger ist der jeweilige Intensit tswert na dM Binary with fixed color with fixed color Die Pixel des Die Pixel des Zytofluorogramms werden alle wei dargestellt werden alle wei dargestellt E Die Farbe eines Pixels des Zytofluorogramms wird aus den y g Farbzuordnungstabellen der Ursprungsbilder ge
59. en im Format tif oder im Format raw abspeichert werden Im Standardformat tif sind die experimentellen Einstellungen und die Farbinformation eines Bildes nochmals redundant enthalten Im Format raw werden lediglich die Bilddaten abgespeichert Der Vorteil des Formats raw ist die geringere Dateigr e die Jedoch nur bei Bildaufnahmen mit relativ geringer Datenmenge zum Tragen kommt Wenn Sie zum Beispiel eine Bildserie mit einer gro en Anzahl von Einzelbildern aber bei einem kleinen Scanformat aufnehmen k nnen Sie die Bildserie im Format raw schneller speichern und ffnen als im Format tif 5 5 4 Alle Dateien speichern Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen Seite 84 5 5 5 Experiment anlegen Funktion Wenn Sie auf die Taste NEW EXPERIMENT klicken wird ein neues Ansichtsfenster VIEWER ge ffnet und damit ein neues Experiment angelegt Ein Experiment ist eine Datei die aus mehreren Einzelbildern oder Bildserien bestehen kann Sie haben damit die M glichkeit mehrere Bilder die mit unterschiedlichen Scanparametern aufgenommen wurden oder Ergebnisbilder von Bildverarbeitungen in einem Experiment zusammenzufassen Bei den Experimenten lei handelt es sich um ein Leica spezifisches Datenformat Ansichtsfenster EXPERIMENT OVERVIEW Um das Ansichtsfenster EXPERIMENT OVERVIEW zu Offnen w hlen Sie im Men ViEW die Option EXPERIMENT OVERVIEW In diesem Ansichtsfenster werden die aufgenommenen Bilder in einem Verze
60. en zum Benutzer angezeigt Das Bildfenster kann konfiguriert werden siehe Kapitel Modifikation der Benutzeroberfl che und Definition benutzerspezifische Einstellungen Seite 16 Das Bildfenster zeigt nicht nur konfokale Bilddatens tze sondern auch experimentelle Daten wie Systemeinstellungen Ein Bildfenster f r ein neues Experiment kann ge ffnet werden ber File New TCS Men TCS_Menu Das TCS Men enth lt die Schaltfl chen zu den einzelnen Funktionen des Ger tes Es ist unterteilt in einzelne Arbeitsschritte Je nach Softwareausstattung kann die Anzahl der Arbeitsschritte unterschiedlich sein Der Standardsatz von Arbeitsschritten besteht aus der Datenaufnahme Acquire der Bilddarstellung View der Oberfl chenrekonstruktion 3 D den Messfunktionen Quantify den Bildverarbeitungs und Analysefunktionen Process sowie den Dokumentationsfunktionen Annotate Falls das TCS Men im aktuellen Einstellungsprofil nicht angezeigt wird k nnen Sie es ber View Menu TCS Menu ein und ausschalten Schaltfl chenbereich Container In diesem Bereich k nnen einzelne Tasten Funktionsbuttons eingef gt und benutzerspezifisch eingerichtet werden Der Vorteil des Schaltfl chenbereichs liegt vor allem darin dass er sich mit dem gesamten Inhalt an Schaltfl chen ein und ausschalten l sst Gehen Sie hierf r wie folgt vor View gt Menu Container Ansichtsfenster f r Dokumente Experiment Overview In ihm wer
61. ene Medien befinden k nnen z B das Einbettmedium des Pr parates wird blicherweise die numerische Apertur NA n sin o als Ma einheit f r die Lichtst rke und das Aufl sungsverm gen verwendet Apochromate Korrektionsklasse eines Objektivs Bei Objektiven dieses Typs ist die chromatische Aberration f r drei Wellenl ngen korrigiert meist 450nm 550nm und 650nm und die Sinusbedingung f r mindestens zwei Farben erf llt Die Bildfeldw lbung ist nicht korrigiert Arbeitsabstand Abstand der Frontlinse eines Objektivs zum Fokus Beim freien Arbeitsabstand wird die Entfernung zwischen der Frontlinse des Objektivs und dem Deckglas bzw zur unbedeckten Probe angegeben Meist besitzen die Objektive mit gro em Arbeitsabstand eine niedrige numerische Apertur hLarbharana b 1 KA ibn Zu PPP A oS 8 A A8 8 RA RAS PIU A Version RK03032000 Seite 87 Arbeitsabstand Will man ein hochaperturiges Objektiv mit gro em Arbeitsabstand muss der Durchmesser der Objektivlinsen entsprechend gro gemacht werden Meist handelt es sich dabei allerdings um niedrigkorrigierte Optiken da die Einhaltung der extremen Fertigungsgenauigkeiten ber einen gro en Linsendurchmesser nur mit gro er M he zu erreichen ist Bildfeldw lbung Die gew lbte Fl che auf der ein mikroskopisches Bild scharf abgebildet wird nennt man Bildfeldw lbung Sie ist durch die konvexe Linsenform bedingt und macht sich aufgrund der geringen Brennweiten bei Mikros
62. entsprechenden Namen in der Task Leiste klicken Die Schaltfl che Start ffnet ein Men ber das Sie die gew nschten Programme starten Klicken Sie auf die Schaltfl che Start Das sich ffnende Men enth lt verschiedene Men optionen mit einzelnen Untermen s Klicken Sie auf die gew nschte Option Weiterhin stehen Ihnen auf dem Desktop einige Symbole zur Verf gung Sie aktivieren ein solches Symbol indem Sie darauf doppelklicken Im folgenden werden kurz die einzelnen Objekte erl utert die oie auf dem Desktop sehen Zu den Standardobjekten auf dem Desktop geh rt das Symbol My Computer Wenn Sie auf dieses Symbol doppelklicken ffnet sich das Fenster My Computer Seite 8 Vorsicht Version RK03032000 ber das Fenster My Computer haben Sie leichten Zugriff auf die Hauptkomponenten Ihres Computersystems oder Ihrer Arbeitsstation so z B auf die Festplatte n oder die Diskettenlaufwerke Wenn Sie beispielsweise auf das Symbol Hard disk C doppelklicken wird Ihnen der Inhalt der Festplatte Ihres PC angezeigt Auf diese Weise hat der Benutzer die M glichkeit lokale Ressourcen als Objekte anzuzeigen Au erdem k nnen Sie vom Fenster My Computer auch auf die Systemsteuerung Symbol Control Panel und den Drucker der Windows NT Workstation 4 zugreifen Falls Sie w hrend der Installation eine der lokalen Zusatzanwendungen wie Dial Up Networking installiert haben erscheint diese auch im Fenster My Computer b
63. er das Symbol Control Panel im Fenster My Computer k nnen Sie zudem jede beliebige Systemkomponente anzeigen und ver ndern Das Fenster Control Panel enth lt seinerseits ebenfalls zahlreiche Symbole die es Ihnen erm glichen Ihr System zu steuern M glicherweise sehen Sie auf Ihrem PC noch andere hier nicht erl uterte Symbole Der Grund daf r kann sein da Sie z B eine andere Hardware installiert haben oder da Sie eventuell an ein Modem oder ein Netzwerk angeschlossen sind Ein weiterer Grund kann auch sein da Sie andere Windows NT Workstation 4 Optionen installiert haben Wenn Sie auf das Symbol Network Neighborhood doppelklicken ffnet sich das Dialogfeld Network Neighborhood und zeigt Ihnen an wer und welche Ger te mit Ihrer Arbeitsstation verbunden sind Dieses Dialogfeld stellt einen sehr einfachen Mechanismus dar um durch die Netzwerksysteme und Ressourcen zu bl ttern zu denen Sie unabh ngig vom jeweiligen Netzwerkhersteller eine Verbindung herstellen k nnen Wenn fr her ein System mit verschiedenen Netzwerktypen gleichzeitig verbunden werden sollte mu te man sich beim Anschlie en des Systems und Anzeigen des Netzwerks immer nach den Vorgaben des jeweiligen Herstellers richten Windows NT Workstation 4 dagegen ist in der Lage eine allgemeine Ansicht des gesamten Netzwerks zu liefern selbst dann wenn das Netzwerk Ressourcen von Windows NT Novell NetWare Banyan Vines oder anderen enth lt Das Symbol Inbox wird
64. ermitteln Dies ist deshalb von Bedeutung weil die Stokes Verschiebung der Emissionskurve eines Fluoreszenzfarbstoffes vom jeweilig verwendeten Pr parat abh ngig ist Somit k nnen Sie den Detektionsbereich pr zise auf eine spezifische Anwendung einstellen 5 1 20 Serien Scan starten Funktion Mit der Taste SERIES SCAN wird eine Bildserie erstellt Dabei wird ein mehrdimensionaler Bilddatensatz des Pr parates erzeugt Die f r die Aufnahme einer Bildserie zur Verf gung stehenden Dimensionen sind neben den drei Raumrichtungen x y z auch die Dimensionen Zeit t und Wellenl nge A Somit k nnen Sie die Aufnahme eines dreidimensionalen r umlichen Bildstapels aus xy Schnitten oder xz Schnitten zus tzlich in Abh ngigkeit von der Zeit oder von der Wellenl nge durchf hren Bevor Sie eine Bildserie aufnehmen stellen Sie mit der Endlos Scan Funktion Taste CONTINUOUS SCAN alle erforderlichen Scanparameter so ein dass Sie eine optimale Bildqualit t erhalten Seite 36 siehe Endlos Scan starten F r die Aufnahme einer r umlichen Bildserie sind folgende Einstellungen vorzunehmen Den Scanmodus mit der Taste MODE ausw hlen siehe Scanmodus ausw hlen Das Scanformat mit der Taste FORMAT ausw hlen siehe Scanformat ausw hlen Die gew nschte z Position bzw y Position mit der Taste Z v POSITION oder mit dem entsprechenden Potentiometer der Panelbox einstellen siehe z y Position einstellen Den Anfangspu
65. ertur des Objektivs und der Wellenl nge des verwendeten Anrearnunaslichtes ah dh Laterale Aufl sung na Das folgende Beispiel veranschaulicht diesen Zusammenhang Sie haben zum Beispiel das Objektiv PL APO 100x mit der numerischen Apertur NA 1 4 und eine Wellenl nge von A 488 nm ausgew hlt Daraus ergibt sich der kleinste optisch noch au fl share Ahstand rn ca 140 nm Gem der oben genannten Faustregel betr gt dann der Abstand der Rasterpunkte der f r eine Aufnahme ohne Informationsverlust notwendig Ist utu ca 4 nm Haben Sie das Scanformat 1024x1024 ausgew hlt ergibt sich bei einem Objektiv PL APO 100x dessen maximale Scanfeldgr e 100 um betr gt jedoch der folgende Abstand der HAasterpniunkte 100 um 1024 Um den notwendigen Rasterabstand von 47 nm zu erreichen haben Sie nun die M glichkeit entweder das Scanformat zu erh hen z B auf 2048x2048 oder die Scanfeldgr e mit Hilfe des Elektronischen Zooms Zoom gt 2 zu verkleinern ca 98 nm Der aktuelle Rasterabstand wird in der Legende HARDWARE angezeigt Dieser Wert wird dort als VOXEL SIZE bezeichnet und neu berechnet sobald Sie das Scanformat den Elektronischen Zoom oder das Objektiv ndern siehe Elektronischer Zoom Seite 24 siehe Objektiv ausw hlen Hinweis Man spricht von Oversampling wenn die Abtastfrequenz von 2 bis 3 Punkten berschritten wird Dabei wird die Struktur zwar vollst ndig abgebildet aber
66. etektoren optimal einstellen 5 3 2 Messen eines Profils in einem Bildstapel Version RK03032000 Seite 70 Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen Hinweis 5 3 3 Messen eines Profils in einem Einzelbild Funktion Mit der PROFILE Funktion wird eine bestimmte Gr e ber eine Strecke hinweg gemessen und graphisch dargestellt Das Profil wird aus dem im Ansichtsfenster Viewer ausgew hlten Datensatz gemessen Bei diesem Datensatz kann es sich um ein Einzelbild aus Rohdaten oder um ein Ergebnisbild einer Bildverarbeitung handeln In Abh ngigkeit von der im Bild dargestellten Gr e wird eine Messkurve aus Intensit tswerten 1 oder H henwerten um berechnet Wenn Sie auf die Taste PROFILE klicken wird im Ansichtsfenster Viewer die Messstrecke als wei e Linie im Bild eingeblendet Die L nge und Position der Messstrecke k nnen Sie beliebig ndern indem Sie die Strecke anklicken und mit gedr ckter linker Maustaste die Anfasspunkte an die gew nschte Position ziehen Zus tzlich wird das Ansichtsfenster PROFILE ge ffnet in dem eine Profilkurve f r jeden Detektionskanal und folgende statistische Berechnungen angezeigt werden Parameter Bedeutung Formel L nge der Me strecke Length Mean Amplitude Arithmetisches Mittel Maximum Amplitude Maximalwert Max I Minimum Amplitude Minimalwert Min I Average Deviation Mittlere Abweichung Version RK03032000 Seite 71
67. f llig durch verschiedene optische und elektronische Komponenten verursacht werden und ebenfalls vom Detektor erfasst werden Stokes Verschiebung Die Stokes Verschiebung ist ein zentraler Begriff in der Fluoreszenzmikroskopie Werden fluoreszierende Molek le mit Licht einer bestimmten Wellenl nge angeregt strahlen sie Licht einer anderen gr eren Wellenl nge ab Diese Differenz zwischen Anregungslicht und Fluoreszenzlicht wird als Stokes Verschiebung bezeichnet Ohne die Stokes Verschiebung w re in einem Fluoreszenzmikroskop die Abtrennung des intensit tsstarken Anregungslichts von den intensit tsschwachen Fluoreszenzsignalen nicht m glich Tripeldichroite Tripeldichroitische Filter sind Interferenzfilter bei einem Einfallswinkel des Lichtes von 45 Die Transmissivit t bzw Reflektivit t von Tripeldichroiten ist abh ngig von drei bestimmten Wellenl ngen des Lichtes Bei einem Tripeldichroiten TD 488 568 647 zum Beispiel wird das Anregungslicht bei 488 nm 568 nm und 633nm reflektiert oberhalb dieser Werte transmittiert Die Transmissionswerte liegen blicherweise bei 80 die Reflektionswerte zwischen 90 und 95 Trockenobjektiv Mikroskopisches Objektiv das ohne Immersionsmedien verwendet wird Zwischen der Objektivlinse und dem Pr parat befindet sich Luft Voxel Kunstwort aus den englischen W rtern volume und pixel Ein Voxel ist das kleinste nicht mehr unterteilbare Volumenelement in einem dreidimensionalen System
68. ftung einf gen siehe Bild kopieren Seite 77 LII siehe Linie zeichnen LL siehe Rechteck zeichnen LB siehe Textfeld anlegen Wenn Sie den Mauszeiger ber die Pr sentationsseite halten und dann auf die rechte Maustaste klicken erscheint ein Kontextmen in dem Ihnen folgende Befehle zur Verf gung stehen Befeh Funktion Line Eine Linie im voreingestellten Format wird in die Pr sentationsseite eingef gt Ein Rechteck im voreingestellten Format wird in die Pr sentationsseite Rectangle E eingef gt Text Ein Textfeld im voreingestellten Schrifttyp wird in die Pr sentationsseite eingef gt Zoom Sie k nnen zwischen vier Gr endarstellungen der Pr sentationsseite ausw hlen Grid Ein nicht druckbares Gitterliniennetz wird in der Pr sentationsseite eingeblendet Die Befehle LiNE RECTANGLE und TEXT sind nicht nur im Kontextmen vorhanden sondern k nnen auch mit den entsprechenden separaten Tasten aktiviert werden Pr sentationsseiten erhalten beim Abspeichern die Dateiendung ano 5 4 2 Bild kopieren Funktion Wenn Sie auf die Taste SNAP klicken wird das im Ansichtsfenster VIEWER geladene Bild in die Pr sentationsseite kopiert Wenn Sie das kopierte Bild markieren und dann auf die rechte Maustaste klicken erscheint ein Kontextmen in dem Ihnen folgende Befehle zur Verf gung stehen Befeh Funktion Origina size Das Bild wird in Originalgr e angezeigt Fi to page Das Bild wi
69. gt werden Ist nur ein Detektionskanal angew hl wird die Verteilung der Intensit tswerte in einem Balkendiagramm dargestellt Bei mehreren Detektionskan len werden alle m glichen Kombinationen von Intensit ten aus jeweils zwei Detektionskanalen in einer zweidimensionalen Punktwolke dargestellt Wenn Sie auf die Taste CYTOFLUOROGRAM 2D klicken werden die aktuellen Bilddaten in ein zweidimensionales Zytofluorogramm umgewandelt Je nachdem welche weiteren Version RK03032000 Seite 75 Tasten Sie gleichzeitig noch anklicken sind folgende Darstellungsarten m glich Tastenkombination Darstellung Aus allen ausgew hlten Detektionskan len wird CF2D Single Channel 1 2 3 4 5 das Zytofluorogramm erzeugt und dargestellt Bei einer Bildserie wird das aktuelle Bild verwendet Die Ursprungsbilder der ausgew hlten Detektionskan le und das daraus erzeugte Zytofluorogramm werden dargestellt Bei einer Bildserie wird das aktuelle Bild verwendet CF2D Tiled Channel 1 2 3 4 5 Aus allen ausgew hlten Detektionskan len wird ge Salery znannel 122 das Zytofluorogramm erzeugt und dargestellt Bei 731 415 l l i einer Bildserie werden alle Einzelbilder verwendet Aus allen ausgew hlten Detektionskan len wird CF2D Tiled Gallery Channel 1 2 das Zytofluorogramm erzeugt und dargestellt Bei 3 4 5 einer Bildserie werden alle Einzelbilder verwendet und angezeigt Verschiedene Parameter des Zytofluorogramms wie z B de
70. hmen Einen Scanmodus mit der Dimension Wellenl nge mit der Taste MODE ausw hlen siehe Scanmodus ausw hlen Das Scanformat mit der Taste FORMAT ausw hlen siehe Scanformat ausw hlen Die Wellenl nge bestimmen bei der die Wellenl ngenserie beginnen soll siehe Anfangspunkt einer Wellenl ngenserie definieren Die Wellenl nge bestimmen bei der die Wellenl ngenserie enden soll siehe Endpunkt einer Wellenl ngenserie definieren Die gew nschte Anzahl der Aufnahmen zwischen Anfangs und Endpunkt der Wellenl ngenserie ausw hlen siehe Anzahl der Wellenl ngenschritte bestimmen 5 1 21 Unidirektionaler Bidirektionaler Scan Funktion Wenn Sie auf die Taste UNIDIRECTIONAL BIDIRECTIONAL SCAN klicken wird der Bidirektionale Scan aktiviert Ist die Taste nicht angeklickt ist automatisch der Unidirektionale Scan eingestellt Beim Unidirektionalen Scan wird jede Zeile von links nach rechts abgetastet W hrend der Laserstrahl zum Anfangspunkt der neuen Zeile gelenkt wird werden keine Daten aufgenommen Beim Bidirektionalen Scan wird die erste Zeile von links nach rechts und die zweite Zeile von rechts nach links abgetastet Es Version RK03032000 Seite 38 wird also auch der R cklauf des Laserstrahles f r die Datenaufnahme genutzt Deshalb kann mit dem Bidirektionalen Scan die Scangeschwindigkeit erh ht werden Ist der Bidirektionale Scan aktiv k nnen Sie die mit der Taste SPEED eingestellte Scangeschwindigkeit verd
71. htigen Je h her das Scanformat bei gleichbleibender Geschwindigkeit desto geringer ist die Verweilzeit des Laserpunktes ber einem Abtastpunkt Je l nger der Lichtpunkt des Laserstrahls ber den einzelnen Abtastpunkten im Pr parat verweilt desto mehr Licht wird vom Detektor erfasst Mit einer geringeren Scangeschwindigkeit k nnen Sie also ein besseres Signal Rausch Verh ltnis Seite 26 Hinweis erzielen Der Nachteil einer geringeren Scangeschwindigkeit besteht darin dass das Pr parat durch die relativ l ngere Lichteinwirkung photochemisch gebleicht und somit unbrauchbar werden kann Dies ist vor allem bei Fluoreszenzanwendungen von Bedeutung Ist die Geschwindigkeitsstufe Fast eingestellt kann aus ger tetechnischen Gr nden nicht mehr das maximale Scanfeld abgetastet werden Das System schaltet automatisch auf den Zoomfaktor 4 5 1 9 zly Position einstellen Funktion Mit der Taste Zz v PosiTION legen Sie fest in welcher horizontalen Ebene z Position oder vertikalen Ebene y Position im Pr parat die Bildaufnahme durchgef hrt werden soll Wollen Sie eine Bildserie mit der Serien Scan Funktion aufnehmen definieren Sie mit der Taste Z Y POSITION und den Tasten BEGIN und END Anfangspunkt und Endpunkt der Bildserie siehe Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW Wenn Sie auf die Taste Z vY POSITION klicken ffnet sich ein Dialogfenster in dem Sie auf zwei Arten einen Positionswert eingeben k nnen Bewegen
72. ialogfenster sind die Felder f r die vier Detektoren PMT 1 bis 4 sowie f r den Durchlichtdetektor PMT Trans angeordnet Nehmen Sie folgende Einstellungen vor ww Aktivieren Sie die gew nschten Detektoren indem Sie auf das jeweilige Kontrollk stchen ACTIVE unterhalb des Symbols f r die Farbzuordnungstabellen klicken Ein Wurfschatten verbindet nun den aktivierten Detektor mit dem entsprechenden Schieber auf der Skala des Spektrums Bestimmen Sie den Wellenl ngenbereich in dem detektiert werden soll indem Sie die beiden Enden des Schiebers auf die gew nschten Positionen auf der Skala ziehen oder ww Doppelklicken Sie auf den Schieber Es wird ein weiteres Dialogfenster ge ffnet in dem oie einen exakten Wert f r Anfangspunkt und Endpunkt des Wellenl ngenbereichs eintragen k nnen F r Fluoreszenzanwendungen sind f r jeden Detektor Listenfelder mit den g ngigen Fluoreszenzfarbstoffen angelegt W hlen Sie den gew nschten Fluoreszenzfarbstoff aus um seine Emissionskurve im Spektrum einzublenden Version RK03032000 Seite 16 W hlen Sie eine Farbzuordnungstabelle aus indem Sie auf das entsprechende Symbol klicken siehe Farbzuordnungstabellen ausw hlen Sequentielle Bildaufnahme Die Bildaufnahme in verschiedenen Detektionskan len kann auch sequentiell erfolgen Klicken Sie in der untersten Zeile des Dialogfensters auf das Kontrollk stchen SEQUENTIAL SCAN Das Dialogfenster wird nach unten erweitert 5 1
73. ichnisbaum dargestellt Jedes neu angelegte Experiment erscheint in diesem Ansichtsfenster mit dem Dateinamen Experiment und einer laufenden Nummer sowie der Endung lei Sie k nnen Dateinamen und Dateiformat ber die Tasten SAVE oder SAVE AS ndern L siehe Datei speichern IL siehe Datei speichern unter Einzelbilder die Sie mit der Einmal Scan Funktion Taste SINGLE SCAN aufnehmen werden im Verzeichnisbaum mit dem Namen Image und einer laufenden Nummer eingetragen Bildserien die Sie mit der Serien Scan Funktion Taste SERIES SCAN aufnehmen erhalten den Namen Series und eine laufende Nummer Wenn Sie den Namen eines Einzelbildes oder einer Bildserie markieren und dann auf die rechte Maustaste klicken stehen Ihnen in einem Kontextmen folgende Befehle zur Verf gung Befehl Funktion Activate Die markierte Datei wird im Ansichtsfenster Viewer angezeigt New Window Eine zweites Ansichtsfenster f r das aktuell geladene Bild wird ge ffnet Delete Das Einzelbild oder die Bildserie wird gel scht Dateieigenschaften und wesentliche Scanparameter werden in einem Properties l Dialogfenster angezeigt Version RK03032000 Das Ansichtsfenster EXPERIMENT OVERVIEW wird automatisch am linken Rand der Bedienoberfl che eingeblendet Gr e und Position des Ansichtsfensters k nnen Sie jedoch beliebig ndern Seite 85 Um die Breite des Ansichtsfensters zu ndern ziehen Sie mit dem Mauszeiger den Rand an
74. iehen und an der korrekten Stelle absetzen Wenn Sie in Windows NT Workstation 4 nderungen an den Datums und Uhrzeiteinstellungen vornehmen wird dadurch die batteriebetriebene CMOS Uhr in Ihrem System aktualisiert Je nach Konfiguration kann es vorkommen da Systeme die an ein Netzwerk angeschlossen sind bei jedem Anmelden eine Datums und Uhrzeitaktualisierung vom Netzwerk Server erhalten Wenn die Uhrzeit im Server falsch ist dann ist auch die Uhrzeit Ihrer Arbeitsstationen inkorrekt Bitte informieren Sie in diesem Fall Ihren Netzwerk Administrator 3 7 Aufrufen der Hilfe Windows NT enth lt ein umfangreiches und leistungsstarkes Hilfesystem Zus tzlich zu den Hilfemen s die Ihnen in jedem Fenster zur Verf gung stehen gibt es f r das Startmen noch eine eigenst ndige und in sich abgeschlossene Hilfe Um sie aufzurufen m ssen Sie mit der Maus auf die Schaltfl che Start und anschlie end auf Help klicken In diesem Dialogfeld stehen Ihnen drei Registerkarten zur Verf gung Contents Index und Find Die Registerkarte Seite 12 Vorsicht Version RK03032000 Contents Inhalt liegt zuoberst auf Die anderen Registerkarten k nnen Sie aufrufen indem Sie einfach darauf klicken Contents Die Registerkarte Contents zeigt die einzelnen Hilfethemen an Die Hilfethemen sind in Kategorien unterteilt und werden durch kleine Buchsymbole dargestellt Doppelklicken Sie auf eines der B cher um es zu ffnen Es werden nun
75. ien werden nicht nur die Bilddaten sondern auch die experimentellen Einstellungen geladen 2 4 2 Automatische bernahme von Aufnahmeparametern Mit der Leica Confocal Software k nnen die Hardwareeinstellungen die mit Experimenten oder Einzelbildern abgespeichert wurden f r ein neues Experiment bernommen werden So kann die Aufnahme von verschiedenen Experimenten unter gleichbleibenden Einstellungen vorgenommen werden Zur bernahme aktivieren Sie das Ansichtsfenster des Datensatzes dessen Einstellungen Sie bernehmen wollen Dr cken Sie danach die Schaltfl che Apply befindet sich bei dem werksseitigen Einstellungsprofil im Schaltfl chenbereich Container Falls Sie die Schaltfl che Apply nicht in einem der angezeigten Fenster vorfinden k nnen Sie die Taste in ein beliebiges Fenster laden mit Tools Customize W hlen Sie in dem angezeigten Dialogfenster das Register Commands Kategorie File Klicken Sie mit der linken Maustaste auf die Taste Apply halten die linke Maustaste gedr ckt und ziehen Sie diese in das Fenster Ihrer Wahl Lassen Sie die linke Maustaste los um die Taste an der aktuellen Position einzuf gen 2 5 Speichern von Bildern Einzelbilder und Experimente lassen sich in denselben Datenformaten abspeichern wie sie bereits im Abschnitt Lesbare Dateiformate beschrieben sind Speichern k nnen Sie Ihre Bilder und Experimente mit File Save Beim erstmaligen Speichern eines Experimentes wir
76. ine Zeitserie im Scanmodus xyt oder xzt k nnen Sie folgende Parameter im Dialogfenster einstellen AT Pauseninterval zwischen den Aufnahmen Frames Anzahl der Aufnahmen des xy Schnitts oder xz Schnitts m Gesamte Aufnahmezeit also Summe aus Pausenintervallen und Aufnahmezeit F r eine Zeitserie im Scanmodus xyzt k nnen Sie folgende Parameter im Dialogfenster einstellen AT Pausenzeit zwischen den Aufnahmen Version RK03032000 Seite 28 Stacks Anzah der Aufnahmen des Bildstapels n Gesamte Aufnahmezeit also Summe aus Pausenintervallen und Aufnahmezeit Version RK03032000 5 1 11 Einmal Scan starten Funktion Mit der Taste SINGLE SCAN wird nur ein einziges Bild aus einer einzigen optischen Ebene im Pr parat aufgenommen Randbedingungen Bevor Sie mit der Einmal Scan Funktion ein Bild aufnehmen stellen Sie zuvor mit der Endlos Scan Funktion alle erforderlichen Scanparameter so ein dass Sie eine optimale Bildqualit t erhalten siehe Endlos Scan starten Typische Anwendungen Die Einmal Scan Funktion ist f r die Aufnahme von bleichempfindlichen Pr paraten gedacht Verwenden Sie bei solchen Pr paraten diese Funktion nicht nur f r die Bildaufnahme sondern auch anstelle der Endlos Scan Funktion um die Scanparameter einzurichten Wenn Sie das Scanfeld zoomen eignet sich die Einmal Scan Funktion auch um den Bildausschnitt zu berpr fen 5 1 12 Endlos Scan starten Funktion Mit der Taste CONTINUOUS
77. ion f r zwei Wellenl ngen korrigiert blicherweise wird ein solches Objektiv auf eine Wellenl nge unterhalb von 500nm und oberhalb von 600nm korrigiert Au erdem ist die Sinusbedingung f r eine Wellenl nge erf llt Die Bildfeldw lbung ist nicht korrigiert Airy Scheibe Als Airy Scheibe bezeichnet man den inneren hellen Kreis umgeben von abwechselnd dunklen und hellen Beugungsringen des Beugungsbildes einer punktf rmigen Lichtquelle Die Beugungsscheibchen zweier dicht beieinander liegenden Objektpunkte berlappen sich teilweise oder ganz und begrenzen auf diese Weise das r umliche Aufl sungsverm gen Aliasing Abbildungsfehler der dadurch entsteht dass die Abtastrate bezogen auf die Frequenz eines Signals zu niedrig ist AOTF Der akusto optische einstellbare Filter ist ein optisch Acousto Optical transparenter Kristall mit dem Intensit t und Wellenl nge von Tunable Filter eingestrahltem Licht stufenlos eingestellt werden kann In dem Kristall wird ein Ultraschallwellenfeld erzeugt dessen Wellenl nge beliebig eingestellt werden kann Senkrecht zum Ultraschallwellenfeld eingestrahltes Licht wird wie an einem Gitter gebeugt Apertur Numerische Apertur ist der Sinus des ffnungswinkels unter dem Licht in die Frontlinse eines Mikroskopobjektives eintritt Formelzeichen NA Die Apertur beeinflusst neben der Lichtst rke auch das Aufl sungsvem gen einer Objektivoptik Da sich zwischen Pr parat und dem Objektiv verschied
78. ird aus allen bereinanderliegenden Abtastpunkten ein Mittelwert errechnet der Schwerpunkt der Fl che die von der Kurve der gemessenen Intensit tswerte begrenzt wird Das Intensit tsmaximum bzw der Fl chenschwerpunkt wird dann der realen z Position des entsprechenden Abtastpunktes zugeordnet und anschlie end farbkodiert Aufgrund dieser Zuordnung bildet ein Topographiebild die reale Oberfl chenstruktur des Pr parates ab In der Standardeinstellung erscheinen h here Strukturen hell tiefere Strukturen dunkel Die Einstellung des Auswahlkriteriums f r das Topographiebild k nnen Sie im Dialogfenster VIEWER OPTIONS vornehmen W hlen Sie im Men VIEW die Option VIEWER OPTIONS Klicken Sie auf das Bildsymbol IMAGES und dann auf das Register TOPOGRAPHY Version RK03032000 siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol IMAGES Seite 64 In einem zweiten Schritt k nnen Sie das Topographiebild mit der 3D VIEW Funktion in einer dreidimensionalen Graphik darstellen siehe 3D Ansicht erzeugen Typische Anwendungen Die Darstellung der Bilddaten in einem Topographiebild ist vor allem bei materialwissenschaftlichen Untersuchungen aufschlussreich F r die Anwendung von Quantifizierungsfunktionen ist die Topographiefunktion unerl sslich 5 2 25 Originalbild anzeigen Funktion Klicken Sie auf die Taste ORIGINAL um ein Projektionsbild oder ein Topographiebild r ckg ngig zu machen Im Ansichtsfenster VIEWER werden
79. ird ein optischer Langpassfilter durch Angabe der Wellenl ngenkante an der der Filter von Reflektion in Transmission bergeht 50 Schwelle Neutralfilter sind teilweise spiegelbeschichtete Glaspl ttchen Sie dienen zur Aufteilung des Lichtweges unabh ngig von der Wellenl nge Das einfallende Licht wird teilweise reflektiert und teilweise transmittiert Neutralfilter werden normalerweise in einem Winkel unter 45 in den ga gesetzt Die lIa wu A4 Tu AA Ala rten EH A ran L a 4 A AA MAILA L Pai s Aann arcrhAl Seite 89 von Reflektivit t und Transmissivit t Bei einem Neutralfilter RT 30 70 zum Beispiel werden 30 des Anregungslichtes reflektiert und 70 transmittiert Pixel Kunstwort aus den englischen W rtern picture und element Ein Pixel ist das kleinste nicht mehr unterteilbare Bildelement in einem zweidimensionalen System In dieser Dokumentation wird sowohl ein Abtastpunkt im Pr parat als auch ein Bildpunkt als Pixel bezeichnet Planobjektive Korrektionsklasse eines Objektivs Bei Objektiven dieses Typs ist die Bildfeldw lbung korrigiert Die Beseitigung dieses Fehlers erfordert Linsen mit st rkeren Hohlfl chen und gr erer Mittendicke Je nach Art der zus tzlich korrigierten chromatischen Aberration unterscheidet man Planachromate Planapochromate und Planfluoritobjektive Signal Rausch Verh ltnis der Signale die im Pr parat detektiert werden und Verh ltnis der unerw nschten Signale die zu
80. ister PROJECTIONS siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol IMAGES Hinweis Beachten Sie den Unterschied zwischen einer Maximumprojektion und einem Topographiebild das aus Intensit tsmaxima erzeugt wird Bei einer Maximumprojektion Version RK03032000 Seite 63 werden die Intensit tsmaxima direkt einem Farbwert zugeordnet Bei einem Topographiebild aus Intensit tsmaxima werden die Intensit tsmaxima zuerst der realen z Position des jeweiligen Abtastpunktes zugeordnet und dann farbkodiert 5 2 24 Topographiebild erzeugen Funktion Mit der ToPoGRAPHY Funktion k nnen Sie bestimmte Intensit tsdaten aus einem Bildstapel also einer Serie von xy Schnitten oder xz Schnitten ausw hlen und in ein zweidimensionales Topographiebild bertragen Dabei werden die entlang der z Achse bereinanderliegenden Abtastpunkte Voxel durch alle optischen Schnitte hindurch untersucht Aus jeder dieser S ulen von Abtastpunkten wird nur der Intensit tswert welcher das Auswahlkriterium erf llt als Repr sentant aller Werte innerhalb der S ule im Topographiebild dargestellt Sie k nnen entweder nach dem Intensit tsmaximum maximum intensity oder nach dem Fl chenschwerpunkt center of mass der gemessenen Intensit ten selektieren Sollen Intensit tsmaxima im Topographiebild dargestellt werden wird nur der Abtastpunkt ausgew hlt bei dem die maximale Intensit t gemessen wurde Bei der Ermittlung des Fl chenschwerpunktes w
81. kopobjektiven als ein Fehler bemerkbar Das Objekt wird dabei im Zentrum und in der Peripherie nicht gleichzeitig scharf abgebildet Objektive die eine Korrektion bez glich der Bildfeldw lbung haben hei en Planobjektive plan ebenes Bildfeld Bleichen Optisches Zerst rung von Fluoreszenzfarbstoffen sogenannten Fluorochromen durch intensive Beleuchtung In der Fluoreszenzmikroskopie werden Fluorochromemit Laserlicht in einen h heren Energiezustand den Singulettzustand angeregt Fallen die angeregten Molek le wieder in ihren Grundzustand zur ck wird ein Fluoreszenzsignal emittiert Bei der Anregung mit zu hoher Intensit t k nnen Farbstoffmolek le aber auch ber ein Intercrossing aus einem Singulettzustand in einen Triplettzustand wechseln Aufgrund der wesentlich l ngeren Lebensdauer von Triplettzust nden Phosphoreszenz k nnen diese angeregten Molek le chemisch mit Triplett Sauerstoff reagieren und sind f r eine weitere Fluoreszenzanregung verloren Brechungsindex Faktor um den die Lichtgeschwindigkeit in einem optischen Medium kleiner ist als im Vakuum Dichroite Dichroitische Filter sind Interferenzfilter bei einem Einfallswinkel des Lichtes von 45 Die Transmissivit t bzw Reflektivit t von Dichroiten ist abh ngig von einer bestimmten Wellenl nge des Lichtes Bei einem Kurzpassfilter RSP 510 reflection short pass zum Beispiel wird Anregungslicht unterhalb von 510 nm reflektiert und oberhalb dieses Wertes t
82. lbildern pro Sekunde Ziehen Sie mit dem Mauspfeil den Schieber auf der Skala auf den gew nschten Wert Version RK03032000 siehe Film starten und beenden 5 2 4 Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol MEASURE Wenn Sie im Men ViEW auf die Option VIEWER OPTIONS klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Grundeinstellungen f r verschiedene Funktionen vorgenommen werden k nnen In diesem Dialogfenster werden links die den Funktionen entsprechenden Bildsymbole und rechts die dazugeh rigen Register angezeigt Wenn Sie das Dialogfenster ffnen erscheinen die Bildsymbole der Funktionen mit denen Sie gerade arbeiten Klicken Sie auf den Befehl SHOW ALL um alle Bildsymbole anzuzeigen 5 2 5 Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol MuLTIcoLoR optional Funktion Wenn Sie im Men VIEW auf die Option VIEWER OPTIONS klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Grundeinstellungen f r verschiedene Funktionen vorgenommen werden k nnen In Seite 47 diesem Dialogfenster werden links die den Funktionen entsprechenden Bildsymbole und rechts die dazugeh rigen Register angezeigt Wenn Sie das Dialogfenster ffnen erscheinen die Bildsymbole der Funktionen mit denen Sie gerade arbeiten Klicken Sie auf den Befehl SHOW ALL um alle Bildsymbole anzuzeigen Im Register INPUT k nnen Sie die Intensit tswerte die f r die Erzeugung des Zytofluorogramms verwendet werden quantitativ oder qualitativ einschr nken Um d
83. linken Maustaste auf die Schaltfl che Start wird das Startmen ge ffnet Darin werden Ihnen sieben Hauptkategorien von Optionen angezeigt ber die Sie die Arbeit mit dem System aufnehmen k nnen Durch einen einzelnen Klick mit der rechten Maustaste ffnet sich ein kleines Steuermen in dem die Optionen Open Explore und Find enthalten sind Die Funktionsweise wird im folgenden beschrieben 3 4 Starten von Programmen Das Startmen enth lt verschiedene Kategorien in denen Ihre Anwendungen und Ihre Arbeit gespeichert sind Sie k nnen sich die einzelnen Untermen s anzeigen lassen indem Sie mit der Maus auf die gew nschte Option zeigen Dadurch wird automatisch das jeweils n chste Untermen angezeigt Hierbei brauchen Sie nicht mit der Maus zu klicken Die Option Programs ffnet das Untermen zu Programs In diesem Men sind alle installierten und Ihnen zur Verf gung stehenden Anwendungen aufgef hrt Einige Optionen sind mit einem Pfeil markiert Dieser Pfeil zeigt an da ein weiteres Untermen folgt Zeigen Sie z B mit der Maus auf die Option Accessories um sich das dazugeh rige Untermen anzeigen zu lassen Im Untermen zu Accessories wird eine Liste der in Windows NT integrierten Programme angezeigt TIP Wenn Sie ein Objekt entweder vom Desktop oder Windows Explorer mit der Maus auf die Schaltfl che Start ziehen drag und dort absetzen drop wird automatisch eine Verkn pfung erstellt Dieses Objekt erscheint
84. me beginnen soll Klicken Sie auf die Taste LAMBDA SCAN BEGIN um den Wert zu speichern Hinweis Version RK03032000 Auf die gleiche Weise wird der Endpunkt einer Wellenl ngenserie bestimmt Au erdem m ssen Sie noch die Anzahl der Wellenl ngenschritte bestimmen LB siehe Endpunkt einer Wellenl ngenserie definieren LB siehe Anzahl der Wellenl ngenschritte bestimmen Typische Anwendungen Mit einer Wellenl ngenserie k nnen Sie das Emissionsmaximum eines Fluoreszenzfarbstoffes ermitteln Dies ist deshalb von Bedeutung weil die Stokes Verschiebung der Emissionskurve eines Fluoreszenzfarbstoffes vom jeweilig verwendeten Pr parat abh ngig ist Somit k nnen Sie den Detektionsbereich pr zise auf eine spezifische Anwendung einstellen 5 1 16 Endpunkt einer r umlichen Serie definieren Funktion Mit der Taste END definieren Sie den Endpunkt einer r umlichen Bildserie Stellen Sie zuerst die exakte z Position bzw y Position mit der Taste Z v PosiTION oder an der Panelbox mit dem entsprechenden Potentiometer ein Dann klicken Sie auf die Taste END Der Positionswert f r den Endpunkt wird gespeichert Auf die gleiche Weise wird auch der Anfangspunkt eingestellt siehe z y Position einstellen Sie k nnen Endpunkt und Anfangspunkt einer Serie auch bequem im Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW definieren Sie ffnen dieses Dialogfenster mit der Taste SERIES kleine Taste nicht die Taste mit der die Serien Scan
85. messers ber 1 Airy Einheit ist nur dann ratsam wenn sehr schwache Signale detektiert werden sollen Bei Aufnahmen von materialwissenschaftlichen Pr paraten wird in der Regel gen gend Licht in die Detektoren reflektiert so dass das Detektionspinhole ganz geschlossen werden kann das hei t auf den minimalen Durchmesser eingestellt werden kann 5 1 6 Scanformat ausw hlen Version RK03032000 Seite 23 Version RK03032000 Funktion Wenn Sie auf die Taste FORMAT klicken ffnet sich ein Dialogfenster mit einer Auswahl von verschiedenen Scanformaten Mit dem Scanformat w hlen Sie das f r die Bildaufnahme verwendete Bildraster aus Unter Bildraster versteht man die Anzahl der Punkte mit denen das Pr parat in den drei Raumrichtungen abgetastet wird Neben der numerischen Apertur des Objektivs und der Anregungswellenl nge bestimmt das Scanformat zusammen mit dem Elektronischen Zoom wesentlich die r umliche Aufl sung der aufgenommenen Daten Randbedingungen Bei der Wahl des Scanformats sollten Sie beachten welche Zusammenh nge zwischen dem Bildraster und der Aufl sung des erzeugten Bildes bestehen Gem dem Nyquest Theorem oder Sampling Theorem kann eine Struktur nur dann ohne Informationsverlust abgerastert werden wenn der kleinste optisch noch aufl sbare Abstand mit etwa 2 bis 3 Rasterpunkten abgetastet wird Dieser als laterale Aufl sung bezeichnete optisch noch aufl sbare Abstand h ngt von der numerischen Ap
86. mischt Binary with custom fcol_w fcol_y Diese Farbzuordnungstabellen sind speziell f r colors die Erstellung von Zytofluorogrammen entwickelt rg blue rg coll rg w rg y 2x2x2 o Frequency coded linear coded ia Frequency coded logarithmic Version RK03032000 Seite 48 Frequency and intensity weighted Im Register MASK besteht Im Register VIEw k nnen Sie in den Feldern 2D und 3D auf einen der aufgelisteten Befehle klicken um das entsprechende Bildelement des Zytofluorogramms ein oder auszublenden 2D und 3D Funktion Show axes Showaxes Die Koordinatenachsen anzeigen Show color LUTS Die ausgew hlte Farbzuordnungstabelle color look up table an der Achse anzeigen Show histograms Show histograms Ein Histogramm an der Achse einblenden Show bounding box Den Bildrahmen anzeigen Im Feld RENDERING k nnen Sie noch zwischen schneller Bilderzeugung FAST oder genauer Bilderzeugung ACCURATE w hlen 5 2 6 Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol SURFACE Funktion Wenn Sie im Men VIEW auf die Option VIEWER OPTIONS klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Grundeinstellungen f r verschiedene Funktionen vorgenommen werden k nnen In diesem Dialogfenster werden links die den Funktionen entsprechenden Bildsymbole und rechts die dazugeh rigen Register angezeigt Wenn Sie das Dialogfenster ffnen erscheinen die Bildsymbole der Funktionen mit denen Sie gerade arbeiten Klicken Sie
87. n Korrektionsklasse eines Objektivs Fluoritobjektive sind Semi Apochromate also Objektive die in ihrem Korrektionsgrad zwischen Achromaten und Apochromaten liegen Mikroskopisches Objektiv das unter der Voraussetzung der Verwendung von Immersionsmedien entwickelt wurde Wird bei einem Immersionsobjektiv kein oder ein falsches Immersionsmedium verwendet kann es zu Aufl sungsverlusten und Verschlechterungen der Korrektion kommen W hrend beim optischen Konzept eines konventionellen Mikroskops scharfe und unscharfe Bildbestandteile gleicherma en detektiert werden werden beim konfokalen Prinzip Strukturen au erhalb der Brennebene des Mikroskopobjektivs unterdr ckt Dazu dienen Blenden die in optisch konjugierten Orten des Strahlengangs eingebracht sind Sie funktionieren als Punktlichtquelle Anregungsblende und als Punktdetektor Detektionsblende Der Durchmesser der Detektionsblende bestimmt neben der Wellenl nge sowie der numerischen Apertur des verwendeten Objektives die axiale Ausdehnung eines optischen Schnittes Kurzpasstfilter sind Interferenzfilter die kurzwelliges Licht transmittieren langwelliges hingegen reflektieren Charakterisiert wird ein optischer Kurzpassfilter durch Angabe der Wellenl ngenkante an der der Filter von Transmission in Reflektion bergeht 50 Schwelle Langpassfilter sind Interferenzfilter die kurzwelliges Licht reflektieren f r langwelliges hingegen transparent sind Charakterisiert w
88. n Befehle klicken um das entsprechende Bildelement der 3D Ansicht im Ansichtsfenster VIEWER ein oder auszublenden STRE Funktion Elements Show LUT Die ausgew hlte Farbzuordnungstabelle color look up table an der z Achse anzeigen Show scale Die Messskala anzeigen bounding be Quader anzeigen der das Messvolumen begrenzt Show axes Die Koordinatenachsen anzeigen Show data during Die Bilddaten anzeigen w hrend die 3D Ansicht gedreht verschoben 3D motion oder vergr ert und verkleinert wird Version RK03032000 Seite 46 5 2 3 Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol DisPLAY Funktion Wenn Sie im Men VIEw auf die Option VIEWER OPTIONS klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Grundeinstellungen f r verschiedene Funktionen vorgenommen werden k nnen In diesem Dialogfenster werden links die den Funktionen entsprechenden Bildsymbole und rechts die dazugeh rigen Register angezeigt Wenn Sie das Dialogfenster ffnen erscheinen die Bildsymbole der Funktionen mit denen Sie gerade arbeiten Klicken Sie auf den Befehl SHOW ALL um alle Bildsymbole anzuzeigen Im Register SETTINGS haben Sie im Feld DisPLAY die M glichkeit das im Ansichtsfenster VIEWER eingeblendete zwei oder dreidimensionale Bild zu zoomen Im Register MoviE kann die Geschwindigkeit bestimmt werden mit der die Filmsequenz einer Bildserie ablaufen soll Sie k nnen einen Wert ausw hlen zwischen 6 Einzelbildern pro Minute und 25 Einze
89. n RK03032000 Funktion Mit dieser Funktion kann ein rechteckiger Auswertungsbereich Region of Interest ROI im Ansichtsfenster Viewer definiert werden Von den innerhalb des Auswertungsbereichs ermittelten Intensit tswerte wird das arithmetische Mittel berechnet und im Ansichtsfenster PROFILE in Abh ngigkeit der z Dimension des Datensatzes dargestellt Randbedingungen Vor der Definition des Auswertungsbereichs muss die PROFILE Funktion angew hlt werden Typische Anwendungen Nach der Wahl der PROFILE Funktion dr cken sie die ROI Funktionstaste Dr cken sie die linke Maustaste halten sie diese gedr ckt Damit haben sie einen Eckpunkt des Auswertungsbereichs definiert Ziehen sie bei gedr ckter linker Maustaste den Cursor diametral in die gegen berliegende Ecke um den zweiten Eckpunkt des Auswertungsbereichs zu definieren L schen k nnen sie einen einzelnen Auswertungsbereich indem sie ihn mit der SELECT Taste ausw hlen und mit der auf der Tastatur befindlichen Entf Taste entfernen Sie k nnen alle Auswertungsbereiche mit der CLEAR Taste auf einmal l schen 5 3 8 ROl ausw hlen verschieben und ver ndern Funktion Mit der SELECT Taste k nnen sie einen Auswertungsbereich markieren Dr cken sie dazu die Taste und markieren sie den entsprechenden Auswertungsbereich Randbedingungen Um die definierten Auswertungsbereiche sichtbar zu machen muss die PROFILE Funktion angew hlt werden Typische Anwendungen
90. n Sie das Emissionsmaximum eines Fluoreszenzfarbstoffes ermitteln Dies ist deshalb von Bedeutung weil die Stokes Verschiebung der Emissionskurve eines Fluoreszenzfarbstoffes vom jeweilig verwendeten Pr parat abh ngig ist Somit k nnen Sie den Detektionsbereich pr zise auf eine spezifische Anwendung einstellen 5 1 18 Anzahl der raumlichen Schnitte bestimmen Version RK03032000 Seite 34 Funktion Wenn Sie auf die Taste SECTIONS klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Sie die Anzahl der horizontalen xy Schnitte oder vertikalen xz Schnitte f r die Aufnahme einer Bildserie ausw hlen k nnen Wollen Sie eine andere als die in der Liste angegebene Anzahl von Schnitten klicken Sie auf den Auswahlpunkt OTHERS Es erscheint dann das Dialogfenster ZIY CONFIGURATION mit folgenden Angaben Angabe Beschreibung Image Dim z y H he des gesamten Bildstapels zwischen Anfangs und Endpunkt der Bildserie um oections Anzahl der eingestellten Schnitte Step Size um Schritweite also der Abstand zwischen zwei Schnitten Sie haben zwei M glichkeiten die Anzahl der Schnitte zu bestimmen gt Geben Sie die Anzahl der gew nschten Schnitte nur ganze Zahlen im Feld SECTIONS ein Klicken Sie dann auf die Schaltfl che CALCULATE neben dem Feld STEP SIZE Die Schrittweite wird neu berechnet und angezeigt Geben Sie die gew nschte Schrittweite im Feld STEP SIZE ein Klicken Sie dann auf die Schaltfl che CALCULAT
91. nem gegebenen Scanformat berschritten ist eine weitere Vergr erung nicht mehr sinnvoll weil keine weiteren optischen Details mehr aufgel st werden k nnen Leervergr erung LL siehe Scanformat ausw hlen LB siehe Objektiv ausw hlen Seite 20 Hinweis Bei bleichempfindlichen Pr paraten ist es ratsam nur in eingeschr nktem Ma e mit dem Elektronischen Zoom zu arbeiten Da Sie bei hohen Zoomfaktoren einen Ausschnitt des Pr parates mit einer relativ h heren Abtastfrequenz aufnehmen ist das Pr parat einer st rkeren Lichteinwirkung ausgesetzt Dies kann zur photochemischen Zerst rung des Pr parates f hren optisches Bleichen Optimale Zoomfaktoren Die folgende Tabelle zeigt bei welchen Zoomfaktoren rot markiert in Abh ngigkeit einer durch das Objektiv bestimmten Scanfeldgr e und eines gew hlten Scanformats das Pr parat ohne Informationsverlust abgetastet wird Scanfeld Abtast Aufl j ae ufl sun Objektiv Scanformat Zoomfaktor gr e frequenz Ab Sk nm Aufl sung Numerische _ Vergr erung Apertur bei A 488 nm 20 0 6 325 1024 x 1024 1 500 488 0 7 2 250 244 4 125 122 512x512 1 500 977 2 4 8 200x200 1 2 4 8 16 40 1 25 156 1024 x 1024 1 250 244 0 6 2 125 122 4 62 60 512 x 512 250 488 Version RK03032000 Seite 21 200x200 11 250 2 125 4 62 8 31 16 15 012x512 1 100 195 0 7 Hinweis 139 1024 x 1024 1 100 98 1 4 A N N
92. nen neuen Scanvorgang starten werden wieder die im Dialogfenster BEAM PATH SETTING eingestellten Farbzuordnungstabellen verwendet siehe Strahlengang einstellen 5 2 8 Detektionskanal 2 anzeigen Funktion Mit einem Klick auf die Taste CHANNEL 2 werden im Ansichtsfenster VIEWER die Bilddaten eingeblendet die im Detektionskanal 2 aufgenommen wurden Sie k nnen dem Detektionskanal eine von vielen Farbzuordnungstabellen zuweisen Dies ist sowohl im Ergebnisbild als auch w hrend der Bildaufnahme m glich ffnen Sie zu diesem Zweck das Dialogfenster SELECT LOOK UP TABLES Sie haben zwei M glichkeiten um das Dialogfenster zu ffnen gt Klicken Sie auf die Taste SELECT LOOK UP TABLES Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle im Ansichtsfenster VIEWER Klicken Sie auf die rechte Maustaste Es erscheint ein Kontextmen in dem Sie auf LUT klicken Im Ansichtsfenster werden die Farbleisten der aktiven Detektionskan le eingeblendet Doppelklicken Sie auf die entsprechende Farbleiste Version RK03032000 siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Seite 51 Hinweis Diese Methode der Zuordnung von Farbzuordnungstabellen beeinflusst nur die aktuelle Bilddarstellung Sobald Sie einen neuen Scanvorgang starten werden wieder die im Dialogfenster BEAM PATH SETTING eingestellten Farbzuordnungstabellen verwendet siehe Strahlengang einstellen 5 2 9 Detektionskanal 3 anzeigen Funktion Mit einem Klick
93. ngstabelle f r eine bestimmte Anwendung vom Empfinden des Benutzers abh ngig Die Erfahrung zeigt jedoch dass sich einzelne Farbzuordnungstabellen f r bestimmte Anwendungen besonders gut eignen Farbzuordnungstabelle Anwendung Version RK03032000 Seite 55 Wird blicherweise f r die Aufnahme von Pr paraten verwendet die mit FITC Cy2 DTAF und hnlichen Fluoreszenzfarbstoffen markiert wurden die im gr nen Spektralbereich emittieren i Red Blue Wird blicherweise f r die Aufnahme von Pr paraten verwendet die mit UV Fluoreszenzfarbstoffen wie DAPI oder Hoechst oder hnlichen Farbstoffen markiert wurden die im blauen Spektralbereich emittieren Gray Wird blicherweise f r die Darstellung von Transmissionsaufnahmen verwendet P Color 1 2 3 4 5 6 Werden blicherweise f r die Aufnahme von Pr paraten verwendet die mit pH sensitiven bzw ionensensitiven Fluoreszenzfarbstoffen markiert wurden sowie f r die Darstellung von Zeitserien Wird blicherweise f r die Aufnahme von Pr paraten verwendet die mit TRITC Texas Red Cy3 Rodamin und hnlichen Fluoreszenzfarbstoffen markiert wurden die im roten Spektralbereich emittieren Geo Land Geo Sea Geo Land amp Sea Sind f r die Erzeugung von Topographiebildern also f r die Abbildung von Oberfl chenstrukturen empfehlenswert Insbesondere Geo Land amp Sea eignet sich zur Visualisierung von Vertiefungen oder
94. nkt der Bildserie mit der Taste BEGIN oder im Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW speichern siehe Anfangspunkt einer r umlichen Serie definieren Die gew nschte z Position bzw y Position mit der Taste Z v POSITION oder mit dem entsprechenden Potentiometer der Panelbox einstellen siehe z y Position einstellen Den Endpunkt der Bildserie mit der Taste END oder im Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW speichern siehe Endpunkt einer r umlichen Serie definieren Die Anzahl der r umlichen Schnitte mit der Taste SECTIONS ausw hlen siehe Anzahl der r umlichen Schnitte bestimmen Nachdem Sie diese Einstellungen vorgenommen haben klicken Sie auf die Taste SERIES SCAN Im Dialogfenster SERIES SCAN OvERVIEW k nnen Sie die Aufnahme des Bildstapels mitverfolgen F r die Aufnahme einer Zeitserie sind folgende Einstellungen vorzunehmen Einen Scanmodus mit Zeitdimension mit der Taste MODE ausw hlen siehe Scanmodus ausw hlen Das Scanformat mit der Taste FORMAT ausw hlen Version RK03032000 Seite 37 siehe Scanformat ausw hlen Die gew nschte z Position bzw y Position mit der Taste Z Y POSITION oder mit dem entsprechenden Potentiometer der Panelbox einstellen siehe z y Position einstellen Die Anzahl der Aufnahmen die Intervallzeit zwischen den Aufnahmen und die komplette Bearbeitungszeit einstellen siehe Zeitserie einstellen F r die Aufnahme einer Wellenl ngenserie sind folgende Einstellungen vorzune
95. nt definiert haben k nnen Sie dieses sukzessive mit Daten f llen Bilder die mit der Endlos Scan Funktion Continuous scan aufgenommen wurden werden beim n chsten Scanstart automatisch berschrieben Wollen Sie eine Einzelaufnahme dauerhaft als Teil eines Experimentes behalten sollten Sie die Einmal Scan Funktion w hlen Teil eines Experiments sind Daten die mit der Einmal Scan bzw mit der Serien Scan Funktion aufgenommen wurden F hren Sie an einem Datensatz Bildverarbeitungsfunktionen durch k nnen Sie die Ergebnisse ebenfalls als Bestandteil des Experimentes abspeichern W hlen Sie sich dazu durch einen Doppelklick das gew nschte Einzelbild bzw die Serie aus dem Experimentenansichtsfenster F hren Sie nun die Bildverarbeitungsfunktionen durch z B Maximumsprojektion oder Topologiebild o Markieren Sie den Bereich innerhalb des Ansichtsfensters Viewer den Sie als Teil des Experimentes aufbewahren wollen ber die rechte Maustaste Kontextmen w hlen Sie Send to Experiment Die Option Seite 6 Hinweis Vorsicht Version RK03032000 Selection raw legt eine Kopie der Rohdaten des ausgew hlten Objektes als neuen separaten Bestandteil des Experimentes an Die Option Selection snapshot legt ein RGB Bild keine 3D Daten reines Photo des ausgew hlten Objektes als neuen Bestandteil des Experimentes an 3 Starten des Betriebssystems Windows NT Das Betriebssystem Windows NT wird au
96. oppeln Geschwindigkeit Beschreibung Slow Langsame ocangeschwindigkeit mit 440 Bildzeilen pro Sekunde Medium Mittere ocangeschwindigkeit mit 900 Bildzeilen pro Sekunde Fas Schnelle ocangeschwindigkeit mit 1900 Bildzeilen pro Sekunde Hinweis Version RK03032000 siehe Scangeschwindigkeit ausw hlen Um Hin und R cklauf pixelgenau aufeinander abzugleichen kann die Phase zwischen Hin und R cklauf eingestellt werden Verwenden Sie zu diesem Zweck die Taste PHASE oder den entsprechenden Potentiometer der Panelbox siehe Phase einstellen Ist die Geschwindigkeitsstufe Fast eingestellt kann aus ger tetechnischen Gr nden nicht mehr das maximale Scanfeld abgetastet werden Das System schaltet automatisch auf den Zoomfaktor 4 5 1 22 Phase einstellen Funktion Mit dieser Taste k nnen sie die Phasenverschiebung zwischen hin und r cklaufendem Abtaststrahl bei bi direktionaler Datenaufnahme einstellen Randbedingungen Bei der Phaseneinstellung kann es zwischen dem Bild das durch den hinlaufenden Abtaststrahl erzeugt wird und dem Bild das durch den r cklaufenden Abtaststrahl erzeugt wird zu einem maximalen seitlichen Versatz von 1 Pixel kommen Typische Anwendungen Phasenabgeich bei schneller bi direktionaler Datenaufnahme Seite 39 Hinweis F r jeden Zoomfaktor wurde werksseitig bereits ein Phasenabgleich vorgenommen und die entsprechenden Werte eingestellt Aufgrund der Temperaturabh ngigkeit von Mech
97. ptimalwert 1 Airy Einheit eingestellt Neben der numerischen Apertur des Objektivs und der Wellenl nge des Lichtes bestimmt auch die Detektionslochblende die Dicke der optischen Schnitte Randbedingungen Der Durchmesser der Lochblende ist optimal eingestellt wenn er mit dem Durchmesser der Airy Scheibe bereinstimmt Als Airy ocheibe bezeichnet man den inneren hellen Kreis des Beugungsbildes einer punktf rmigen Lichtquelle Der Durchmesser dieser Airy Scheibe ist wiederum von mehreren optischen Parametern abh ngig und l sst sich f r Leica Konfokalsvsteme wie folgt beschreiben 122 A dam A M15 Zur Errechnung des Durchmessers der Airy Scheibe ben tigt man also die Anregungswellenl nge A bei mehreren Wellenl ngen sollte man mit einem gemittelten Wert rechnen die numerische Apertur NA und den Vergr erungsfaktor M des Objektivs Der Faktor 4 5 steht f r die Vergr erung weiterer optischer Komponenten im Leica Konfokalmikroskop Ist die Lochblende auf die Airy Scheibe eingestellt wird Licht von ausserhalb der Fokusebene unterdr ckt und das Signal Rausch Verh ltnis ist hoch Unter diesen Bedingungen k nnen optische Schnitte von minimaler Dicke aufgenommen werden Je mehr die Lochblende ge ffnet wird desto mehr Licht erreicht den Detektor Das Bild wird heller Aber auch Beitr ge von Strukturen au erhalb der Fokusebene werden nun abgebildet und machen das Bild zunehmend unscharf Eine Vergr erung des Blendendurch
98. r Intensit tswertebereich der H ufigkeitswertebereich und die verwendeten Farbzuordnungstabellen k nnen Sie im Dialogfenster VIEWER OPTIONS ver ndern gt W hlen Sie im Men VIEw die Option VIEWER OPTIONS gt klicken Sie dann auf das Bildsymbol MULTICOLOR siehe Dialogfenster VIEWER OPTIONS Bildsymbol MULTICOLOR L siehe Zytofluorogramm in 3D Ansicht LL siehe Zytofluorogramm Masken LB siehe berlagerungsbild in Zytofluorogrammfarben Typische Anwendungen 5 3 11 Zytofluorogramm Masken optional Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen Version RK03032000 Seite 76 Hinweis Hinweis Hinweis Version RK03032000 5 3 12 berlagerungsbild in Zytofluorogrammfarben optional Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen 5 3 13 Optionen f r die Multicolor Funktion optional Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen 5 4 Funktionen zur Datendokumentation 5 4 1 Pr sentationsseite anlegen Funktion Mit der Taste ANNOTATION wird ein Fenster ge ffnet in dem Sie aufgenommene Bilder zu Pr sentationszwecken aufbereiten k nnen Haben Sie die Pr sentationsseite ge ffnet werden die zus tzlichen Tasten SNAP LINE RECTANGLE und TEXT aktiv Mit diesen Tasten k nnen Sie das im Ansichtsfenster VIEWER geladene Bild in die Pr sentationsseite kopieren bestimmte Bereiche im kopierten Bild mit Linien und Rechtecken hervorheben und in einem Textfeld eine Bildbeschri
99. r den Schieber auf der Skala Der entsprechende Wert wird unterhalb der jeweiligen Skala angezeigt Doppelklicken Sie auf den Zahlenwert der unterhalb der Skala angezeigt wird Es wird ein weiteres Dialogfenster ge ffnet in dem Sie den exakten Wert eintragen k nnen Hinweis Version RK03032000 Hinweis Der Gain Wert und der Offset Wert lassen sich am besten mit den Farbzuordnungstabellen Glow Over Glow Under und Glow Over and Under optimieren siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Am bequemsten l sst sich der Gain Wert und der Offset Wert der Detektoren mit den entsprechenden Potentiometern der Panelbox einstellen Ein Detektor ist erst aktiv wenn das entsprechende Kontrollk stchen AcrivE im Dialogfenster SIGNAL oder im Dialogfenster BEAM PATH SETTING angeklickt ist 5 1 4 Elektronischer Zoom Seite 19 Version RK03032000 Funktion In der Konfokalmikroskopie bestimmt zum einen das Objektiv und zum anderen der elektronische Zoom die Vergr erung eines Bildes Das Objektiv erzeugt ein Zwischenbild dessen Vergr erung vom Vergr erungsfaktor des Objektivs abh ngt Eine zus tzliche Vergr erung kann mit dem elektronischen Zoom erreicht werden Bei einem Zoomfaktor 1 wird die maximale Scanfeldgr e mit einer bestimmten Anzahl von Punkten gescannt Stellt man nun den Zoomfaktor 2 ein wird mit derselben Anzahl von Punkten ein Scanfeld mit der halben oeitenl nge des maximalen Scanfelds 1 4 des
100. ransmittiert Die Transmissionswerte liegen berlicherweise zwischen 80 und 9096 die Reflektionswerte zwischen 9096 und 9595 Doppeldichroite Doppeldichroitische Filter sind Interferenzfilter bei einem Einfallswinkel des Lichtes von 45 Die Transmissivit t bzw Reflektivit t von Doppeldichroiten ist abh ngig von zwei bestimmten Wellenl ngen des Lichtes Bei einem Doppeldichroit DD 488 568 zum Beispiel wird das Anregungslicht bei 488 nm und 568 nm reflektiert oberhalb dieser Werte transmittiert Die Transmissionswerte liegen blicherweise bei 8096 die Reflektionswerte zwischen 9096 und 95 Version RK03032000 Seite 88 Fluoreszenzmikroskopie Fluoritobjektive Immersionsobjektiv Konfokalit t Kurzpassfilter Langpassfilter Neutralfilter Version RK03032000 Lichtoptisches Kontrastverfahren zur Darstellung fluoreszierender Strukturen Autofluoreszente Proben verf gen ber eine sogenannte prim re Fluoreszenz Sie brauchen nicht mit zus tzlichen fluoreszierenden Substanzen angereichert werden Sekund r fluoreszierende Substanzen m ssen dagegen zuerst mit geeigneten Farbstoffen sogenannten Fluorochromen versetzt werden Spezifische F rbungen erlauben dabei die genaue Lokalisierung der angef rbten Strukturelemente eines Objektes Die Fluoreszenzmikroskopie verf gt sowohl ber das Potential morphologischer Untersuchungen als auch der M glichkeit dynamische Untersuchungen auf molekularer Ebene durchzuf hre
101. rd auf die Gr e der Pr sentationsseite vergr ert Version RK03032000 Seite 78 Bring to front Das Bild wird in den Vordergrund ger ckt Send to back Das Bild wird in den Hintergrund ger ckt Delete Das Bild wird gel scht Die Gr e des Bildes k nnen Sie beliebig ver ndern indem Sie mit dem Mauszeiger an einem Anfasspunkt des Bildes ziehen Um das Bild zu verschieben ohne seine Gr e zu ver ndern markieren Sie das Bild und verschieben Sie es w hrend Sie die linke Maustaste gedr ckt halten Randbedingungen Die Taste SNAP kann nur bet tigt werden wenn zuvor eine Pr sentationsseite mit der Taste ANNOTATION ge ffnet und dann das Ansichtsfenster VIEWER angeklickt wurde 5 4 3 Linie zeichnen Funktion Mit der Taste LINE zeichnen Sie eine Linie in die Pr sentationsseite Klicken Sie in der Pr sentationsseite auf die Stelle an der die Linie beginnen soll Halten Sie die linke Maustaste gedr ckt und ziehen Sie den Mauszeiger ber die Seite bis zu dem Punkt an dem die Linie enden soll Wenn Sie die Linie markieren und dann auf die rechte Maustaste klicken erscheint ein Kontextmen in dem Ihnen folgende Befehle zur Verf gung stehen Befehl Funktion In einem Dialogfenster k nnen Typ St rke und L nge der Linie eingestellt werden Style In einem Dialogfenster kann eine beliebige Farbe f r die Linie ausgew hlt c werden Bring to front Die Linie wird in den Vordergrund ger ckt
102. rd in Abh ngigkeit von der Zeit aufgenommen Aus xy Schnitten wird in z Richtung ein Bildstapel in Abh ngigkeit von der Zeit xyz aufgenommen Version RK03032000 Seite 25 Xy Ein xy Schnitt wird in Abh ngigkeit von der Wellenl nge aufgenommen Xz Ein xz Schnitt wird in Abh ngigkeit von der Wellenl nge aufgenommen Hinweis Alle Scanmodi mit Ausnahme von xt setzen sich aus mindestens drei Dimensionen zusammen Die dritte und weitere Dimensionen werden vom Ger t ignoriert wenn Sie mit der Endlos Scan Funktion oder der Einmal Scan Funktion Bilder nur aus einer optischen Ebene xy oder xz aufnehmen 5 1 8 Scangeschwindigkeit ausw hlen Funktion Wenn Sie auf die Taste SPEED klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Sie drei verschiedene Scangeschwindigkeiten einstellen k nnen Geschwindigkeit Beschreibung Slow Langsame ocangeschwindigkeit mit 220 Bildzeilen pro Sekunde Medium Mittere Scangeschwindigkeit mit 450 Bildzeilen pro Sekunde Fas Schnelle ocangeschwindigkeit mit 950 Bildzeilen pro Sekunde Version RK03032000 In Kombination mit dem Bidirektionalen Scan kann die Geschwindigkeit der Datenaufnahme noch erh ht werden siehe Unidirektionaler oder Bidirektionaler Scan Randbedingungen Je h her die eingestellte Scangeschwindigkeit ist desto k rzer ist die Verweilzeit des Laserpunktes Dabei ist auch das Scanformat also die Anzahl der Abtastpunkte in einer Zeile zu ber cksic
103. reht der sich in der Mitte des Bildes befindet Um die Drehfunktion zu verstehen ist es am besten den Winkel nur einer Achse zu ver ndern w hrend die anderen beiden Achsen auf O gestellt sind Rotation Funktion x von 0 auf 45 Die 3D Ansicht wird um den Fixpunkt um 45 in Richtung der negativen z Achse gedreht Y von 0 auf 45 Die 3D Ansicht wird um den Fixpunkt um 45 in Richtung der negativen x Version RK03032000 Seite 45 Achse gedreht Z von 0 auf 45 Die 3D Ansicht wird um den Fixpunkt um 45 in Richtung der negativen y Achse gedreht siehe 3D Ansicht drehen Im Feld TRANSLATION k nnen Sie durch ndern der Koordinatenwerte eine 3D Ansicht nach rechts oder links nach oben oder unten verschieben sowie vergr ern oder verkleinern Wenn Sie Dezimalzahlen eingeben verwenden Sie den Punkt als Dezimalzeichen en Funktion Mit positiven Werten wird die 3D Ansicht nach rechts verschoben mit negativen nach links Mit positiven Werten wird die 3D Ansicht vergr ert mit negativen verkleinert 7 Mit positiven Werten wird die 3D Ansicht nach oben verschoben mit negativen nach unten Im Feld PREDEFINED k nnen Sie mit einem Klick auf die Schaltfl chen ToP VIEW und SIDE VIEW das Bild in einer voreingestellten Draufsicht oder Seitenansicht darstellen LII siehe 3D Ansicht verschieben LII siehe 3D Ansicht zoomen Im Register DisPLAY k nnen Sie auf einen der aufgelistete
104. rennt und zus tzlich zusammen in einem Uberlagerungsbild dargestellt Bei einer Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Alle Einzelbilder einer Bildserie werden getrennt Tiled Gallery Overlay Channel 1 2 f r alle ausgew hlten Detektionskan le und 3 415 Hinweis zus tzlich zusammen in berlagerungsbildern dargestellt Die Taste TiLED und die Taste SINGLE k nnen nicht gleichzeitig angeklickt werden da mit ihnen zwei sich ausschlie ende Funktionen aktiviert werden 5 2 15 Mehrfachbild anzeigen Funktion Wenn Sie auf die Taste TILED klicken werden die Detektionskan le getrennt im Ansichtsfenster VIEWER dargestellt Je nachdem welche weiteren Tasten Sie gleichzeitig noch aktivieren sind folgende Darstellungsarten m glich Tastenkombination Darstellung Alle ausgew hlten Detektionskan le werden Tiled Channel 1 2 3 4 5 getrennt dargestellt bei einer Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Alle Einzelbilder einer Bildserie werden f r alle Tiled Gallery Channel 1 2 3 4 5 ausgew hlten Detektionskan le getrennt Tiled Overlay Channel 1 2 3 4 5 Version RK03032000 dargestellt Alle ausgew hlten Detektionskan le werden getrennt und zus tzlich zusammen in einem berlagerungsbild dargestellt Bei einer Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Seite 58 Alle Einzelbilder einer Bildserie werden getrennt Tiled Gallery Overlay Channel 1 2 f r
105. rie das erste Bild des ausgew hlten Detektionskanals Alle Einzelbilder einer Bildserie werden nur f r einen ausgew hlten Detektionskanal dargestellt Single Gallery Channel 1 2 3 4 5 Von allen ausgew hlten Detektionskan len wird ein einziges Uberlagerungsbild erzeugt bei einer Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Single Overlay Channel 1 2 3 4 5 Entsprechend der Anzahl von Einzelbildern einer Bildserie werden Uberlagerungsbilder aus allen ausgew hlten Detektionskan len erzeugt Single Gallery Overlay Channel 1 21 31 1415 Hinweis Die Taste SINGLE und die Taste TILED k nnen nicht gleichzeitig aktiv sein da mit ihnen zwei sich ausschlie ende Funktionen aktiviert werden 5 2 14 Mehrfachbild anzeigen Funktion Wenn Sie auf die Taste TILED klicken werden die Detektionskan le getrennt im Ansichtsfenster VIEWER dargestellt Je nachdem welche weiteren Tasten Sie gleichzeitig noch aktivieren sind folgende Darstellungsarten m glich Tastenkombination Darstellung Alle ausgew hlten Detektionskan le werden Tiled Channel 1 2 3 4 5 getrennt dargestellt bei einer Bildserie wird jeweils das erste Bild verwendet Version RK03032000 Seite 57 Alle Einzelbilder einer Bildserie werden f r alle Tiled Gallery Channel 1 2 3 4 5 ausgew hlten Detektionskan le getrennt Tiled Overlay Channel 1 2 3 4 5 dargestellt Alle ausgew hlten Detektionskan le werden get
106. rliche Lichteinwirkung des Lasers kann das Pr parat photochemisch zerst ren optisches Bleichen und damit zur Unbrauchbarkeit des Pr parates f hren 5 1 13 Dialogfenster SERIES SCAN OVERVIEW Funktion In diesem Dialogfenster k nnen Sie den Anfangspunkt und den Endpunkt einer Bildserie definieren und die Aufnahme der einzelnen Schnitte mitverfolgen Der dreidimensionale Scanbereich ist graphisch als W rfel dargestellt In dieser Graphik symbolisiert ein gelbes Quadrat die aktuelle z Position bzw y Position ein gr nes den Anfangspunkt und ein rotes den Endpunkt Die entsprechenden Positionswerte werden rechts neben der Graphik angezeigt Stellen Sie Anfangspunkt und Endpunkt wie folgt ein Ziehen Sie mit dem Mauspfeil das gelbe Quadrat bis auf die Ebene in der die Bildserie beginnen soll Oder ffnen sie mit der Taste Z Y POSITION ein Dialogfenster in dem Sie den Wert der z Version RK03032000 Seite 30 Position bzw y Position eingeben k nnen Klicken Sie in das wei e K stchen f r den Anfangspunkt Begin Der entsprechende Positionswert wird eingeblendet und gespeichert gt Ziehen Sie mit dem Mauspfeil das gelbe Quadrat bis auf die Ebene in der die Bildserie enden soll Oder ffnen sie mit der Taste Z Y POSITION ein Dialogfenster in dem Sie den Wert der z Position bzw y Position eingeben k nnen Klicken Sie in das wei e K stchen f r den Endpunkt End Der entsprechende Positionswert wird eing
107. rpr fen Im Feld PAGE wird H he und Breite des bedruckbaren Bereichs angegeben der nicht identisch mit dem Papierformat ist In den untersten beiden Zeilen des Dialogfensters wird der aktuell installierte Drucker und das eingestellte Papierformat angezeigt Hinweis Wenn Sie das Dialogfenster PRINTER SELECTION mit OK verlassen werden alle Einstellungen im aktiven Ansichtsfenster VIEWER gespeichert Somit k nnen Sie f r verschiedene Bilder eine unterschiedliche Druckereinstellung und Seitendarstellung speichern Diese Einstellungen gehen jedoch mit dem Verlassen der Leica Confocal Software verloren 5 5 Funktionen zum Datenhandling 5 5 1 Datei ffnen Version RK03032000 Seite 82 Funktion In der Leica Confocal Software k nnen Sie mit der Taste OPEN folgende Dateiformate ffnen Dateiformat Beschreibung Ein Leica spezifisches bin res Datenformat Beim Lesen der Experiment lei Experimente werden nicht nur die Bilddaten sondern auch die experimentellen Einstellungen geladen Ein Leica spezifisches bin res Datenformat Die auf den Pr sentationsseiten vorhandenen Elemente wie Bilder Texte und Grafiken liegen jeweils als einzelne Objekte vor Pr sentationsseite ano Es handelt sich um Leica Bilddateien im Single und Multi Tiff Format Tiff Dateien tif Es k nnen auch externe Dateien im RGB Tiff Format eingelesen werden LB siehe Experiment anlegen LB siehe Pr sentationsseite anlegen
108. rte in nm bei Wellenl nge 488 nm Werte in um Typische Anwendungen Trockenobjektive werden typischerweise in der Materialkunde f r die Untersuchung von Oberfl chenstrukturen verwendet F r die Bildaufnahme von Schichtstrukturen bei denen Materialschichten mit unterschiedlichen Brechungsindizes aufeinandertreffen sind Immersionsobjektive am besten geeignet Bei biologischen Pr paraten h ngt es vom Pr parat und seinem Einbettmedium ab ob man sich f r ein limmersionsobjektiv oder Wasserimmersionsobjektiv entscheidet Die beste Aufl sung erh lt man wenn die Brechungsindizes von Einbettmedium bzw Pr parat und Objektivmedium aufeinander abgestimmt sind Version RK03032000 Seite 18 5 1 3 Detektoren einstellen Funktion Mit der Taste SIGNAL ffnen Sie ein Dialogfenster in dem Sie die Detektoren so einstellen k nnen dass der gesamte Wertebereich der detektierten Intensit ten einer Farbzuordnungstabelle zugeordnet und im Bild dargestellt wird Zu diesem Zweck kann f r jeden Detektor ein Gain Wert und ein Offset Wert eingestellt werden Mit dem Gain Wert wird die Verst rkung des detektierten Signals ver ndert und damit die Bildhelligkeit und der Bildkontrast Mit dem Offset Wert bestimmen Sie einen Schwellenwert Nur Signale oberhalb dieses Schwellenwertes werden detektiert und im Bild angezeigt Sie haben zwei M glichkeiten um den Gain Wert und den Offset Wert einzustellen Bewegen Sie mit dem Mauszeige
109. te SELECT LOOK UP TABLES gt Halten Sie den Mauszeiger ber eine beliebige Stelle im Ansichtsfenster VIEWER Klicken Sie auf die rechte Maustaste Es erscheint ein Kontextmen in dem Sie auf LUT klicken Im Ansichtsfenster werden die Farbleisten der aktiven Detektionskan le eingeblendet Doppelklicken Sie auf die entsprechende Farbleiste siehe Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Hinweis Diese Methode der Zuordnung von Farbzuordnungstabellen beeinflusst nur die aktuelle Bilddarstellung Sobald Sie einen neuen Scanvorgang starten werden wieder die im Dialogfenster BEAM PATH SETTING eingestellten Farbzuordnungstabellen verwendet siehe Strahlengang einstellen 5 2 12 Farbzuordnungstabellen LUT ausw hlen Funktion Mit der Taste LOOK UP TABLES ffnen Sie ein Dialogfenster in dem Sie den f nf Detektionskan len jeweils eine Farbzuordnungstabelle zuweisen k nnen Die Einstellung der Farbzuordnungstabellen kann sowohl am Ergebnisbild als auch w hrend der Bildaufnahme vorgenommen werden gt Klicken Sie im Feld SELECT CHANNEL auf den Detektionskanal dem Sie eine neue Farbzuordnungstabelle zuordnen wollen gt W hlen Sie im Feld SELECT LUT die gew nschte Farbzuordnungstabelle aus Klicken Sie auf die Schaltfl che APPLY um das Ergebnis am Ansichtsfenster VIEWER zu berpr fen Version RK03032000 Seite 54 Sie k nnen das Dialogfenster SELECT LUT s auch ber das Ansichtsfenster VIEWER ffnen
110. th lt drei Befehle ber die Sie nderungen an den Einstellungen Ihres Systems vornehmen k nnen ber dieses Men k nnen Sie direkt auf die Systemsteuerung und den Drucker zugreifen Au erdem ffnen oie hier ber das Fenster Task Properties Die M glichkeit auf diese Weise die wichtigsten Dienstprogramme der Systemkonfiguration aufrufen zu k nnen ist vor allem dann sehr hilfreich wenn eine Anwendung bereits ge ffnet und im Vordergrund aktiv ist und Sie schnell eine nderung vornehmen m chten Die Option Find bietet Ihnen eine sehr einfache M glichkeit nach Systemressourcen zu suchen Im Untermen dieser Option k nnen Sie drei Arten von Suchen durchf hren 3 5 Die Task Leiste Die Task Leiste die sich am unteren Bildschirmrand befindet zeigt konstant an welche Anwendungen derzeit auf dem System ausgef hrt werden Dar ber hinaus stellt sie eine einfache M glichkeit dar um zwischen den einzelnen Anwendungen zu wechseln Sobald Sie eine weitere Anwendung ffnen werden die minimierten Ansichten der bereits ge ffneten Programme in Seite 11 Hinweis Version RK03032000 der Task Leiste angepa t so da auch die minimierte Ansicht der neuen Anwendung in der Task Leiste Platz findet Auf diese Weise wird sichergestellt da immer alle ge ffneten Anwendungen in der Task Leiste sichtbar sind Um von einem laufenden Programm zu einem anderen zu wechseln brauchen Sie nur in der Task Leiste auf die minimierte
111. tomatisch gestartet sobald Sie Ihren PC einschalten Als erstes sehen Sie einen Begr ungsbildschirm Melden Sie sich nun bei Ihrem Computer an Wie Sie den Anweisungen in dem angezeigten Dialogfeld entnehmen k nnen melden Sie sich durch gleichzeitiges Herunterdr cken der Tasten Ctrl Alt und Delete beim System an Sobald Sie die Tasten Ctrl Alt und Delete gedr ckt haben ffnet sich das Dialogfeld Logon Information Geben Sie hier Ihr Kennwort ein mit dem Sie sich als g ltiger Benutzer dieses Computers identifizieren Der Standardbenutzername f r das Leica Konfokalsystem h ngt vom jeweiligen Produkttyp ab Das Standardkennwort lautet Sobald Sie sich angemeldet haben k nnen Sie Ihr Kennwort ndern Dr cken Sie hierzu die Tasten Ctrl Alt und Delete gleichzeitig Klicken Sie anschlie end auf Change password Es ffnet sich das Dialogfeld Change password Geben Sie im Feld Old Password Ihr aktuell g ltiges Kennwort ein das Feld zur Kennworteingabe ist gro kleinschrift empfindlich achten Sie daher darauf ob Sie Gro oder Kleinbuchstaben verwenden Dr cken Sie anschlie end die Tabulator Taste Durch Dr cken der Tabulator Taste springt der Cursor in das n chste Feld Geben Sie nun Ihr neues Kennwort ein und dr cken Sie anschlie end noch einmal die Tabulator Taste Geben Sie das neue Kennwort nun zur Best tigung ein zweites Mal ein Auf diese Weise werden Tippfehler ausgeschlossen Dies ist vor allem deshal
112. urspr nglichen ocanfelds abgetastet Man erh lt also eine st rkere Vergr erung und damit auch eine verbesserte Aufl sung des Bildes weil ein kleineres Scanfeld mit derselben Frequenz abgetastet wird und somit eine h here Informationsdichte erzielt wird Im Dialogfenster das mit der Taste ZOOM ge ffnet wird k nnen Sie einen der voreingestellten Zoomfaktoren ausw hlen Wenn Sie auf die Schaltf che OrHERS klicken k nnen Sie einen anderen Zoomfaktor auf zwei Arten einstellen gt Bewegen Sie mit dem Mauszeiger den Schieber der Skala Der entsprechende Wert wird in der Mitte des Dialogfensters angezeigt gt Doppelklicken Sie auf den fett dargestellten Zahlenwert in der Mitte des Dialogfensters Es wird ein weiteres Dialogfenster ge ffnet in dem Sie den exakten Wert eintragen k nnen Sie k nnen den Zoomfaktor auch mit dem entsprechenden Potentiometer der Panelbox bequem einstellen Randbedingungen Es k nnen zwar Zoomfaktoren von 1 bis 32 eingestellt werden Dennoch kann mit dem elektronischen Zoom nicht unbegrenzt sinnvoll vergr ert werden Die Grenze ist mit dem kleinsten optisch noch aufl sbaren Abstand erreicht der vom Aufl sungsverm gen des Objektivs bestimmt wird Dieser optisch noch aufl sbare Abstand wird gem dem Nyquist Theorem dann ohne Informationsverlust abgebildet wenn er mit etwa 2 bis 3 Rasterpunkten abgetastet wird Wird diese Abtastfrequenz bei einem relativ hohen Zoomfaktor und ei
113. verwendet wenn Microsoft Exchange auf Ihrem System aktiv ist Windows NT Workstation 4 verf gt ber einen integrierten E Mail Dienst der auf Microsoft Mail MS Mail und Microsoft Exchange basiert Falls sich in dem Netzwerk an das Ihr System angeschlossen ist bereits ein MS Mail Postoffice befindet kann der Mail Client von Windows NT Workstation 4 direkt eine Verbindung dazu aufbauen ber das Symbol Inbox k nnen Sie auf Ihre Nachrichten zugreifen Das Symbol Recycle Bin der Papierkorb stellt das Depot f r gel schte Objekte dar Solange sich eine Datei in diesem Papierkorb befindet kann sie falls sie versehentlich gel scht wurde schnell und einfach wiederhergestellt werden Windows NT Workstation 4 beh lt Dateien solange in diesem Depot bis das System ber keinen freien Plattenplatz mehr verf gt In diesem Fall beginnt Windows NT Workstation 4 den Inhalt des Papierkorbs Recycle Bin zu l schen wobei die ltesten Dateien nach dem FIFO Prinzip First in First out zuerst gel scht werden Dateien die berschrieben wurden weil zwei verschiedene Anwendungen eine Datei mit demselben Namen verwendet Seite 9 haben werden nicht im Papierkorb gespeichert Durch Doppelklicken auf das Symbol Recycle Bin zeigen Sie den Inhalt des Papierkorbs an Wenn ein leeres Fenster angezeigt wird ist dies die Best tigung da sich keinerlei Objekte im Papierkorb befinden 3 3 Das Startmen Durch einen einzelnen Klick mit der
114. wert Wenn Sie auf die Taste AVERAGE klicken wird ein Dialogfenster ge ffnet in dem Sie einstellen k nnen wie oft ein Schnitt abgetastet werden soll Sie k nnen zwischen 1 bis 64 Wiederholungen des Scanvorganges w hlen Typische Anwendungen Die Bildaufnahme im Mittelungsverfahren dient vor allem zur Rauschunterdr ckung In der Fluoreszenzmikroskopie gelangt bei schwach fluoreszierenden Pr paraten wenig Licht zum Detektor Die geringe Photonenzahl f hrt zu verrauschten Bildern In einem solchen Fall k nnen Sie durch mehrmaliges Aufnehmen und stetiger Mittelung des Bildes das Signal Rausch Verh ltnis verbessern Hinweis Bei bleichempfindlichen Pr paraten ist die Bildaufnahme im Mittelungsverfahren nicht zu empfehlen Die wiederholten Aufnahmen und die damit verbundene lange Lichteinwirkung kann zur Zerst rung des Pr parates f hren 5 1 26 UV Linsenrad einstellen Funktion Randbedingungen Typische Anwendungen Hinweis 5 2 Datendarstellungsfunktionen Version RK03032000 Seite 41 5 2 1 Ansichtsfenster VIEWER Pda d ee Pag 4 1 2 3 1 und 2 4 5 3 3 Das Ansichtsfenster VIEWER besteht aus drei wesentlichen Bereichen In der Mitte befindet sich das Bildfenster 4 in dem die aufgenommenen Bilder dargestellt werden Links und unterhalb von diesem Bildfenster k nnen Tastenfelder 1 und 2 und rechts davon die Register angeordnet werden Tastenfelder 1 und 2 Als Stan

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