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1. O E CONSERVA O DAS AMOSTRAS A dosagem deve ser executada em amostras humanas de soro e de plasma EDTA Heparina Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas e turvas Se a dosagem for executada mais de 8 horas depois separar o soro ou o plasma do co gulo dos gl bulos vermelhos e das provetas de separa o com gel Antes de serem analisadas as amostras podem ser conservadas no frigor fico entre 2 e 8 no m ximo por 7 dias Se a dosagem for executada mais de 7 dias depois conservar as amostras congeladas lt 200 Evitar congelamentos e descongelamentos repetidos IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 6 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 PROCEDIMENTO Para obter desempenhos anal ticos v lidos respeitar escrupulosamente as instru es do manual de instru es do instrumento Carregamento dos reagentes Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar Antes de inserir o cartucho de reagentes no sistema o recipiente das part culas magn ticas deve ser agitado por rota o horizontal de modo a facilitar a suspens o das part culas Executar a opera o evitando a forma o de espuma Colocar o cartucho de reagentes na rea dos reagentes do analisador utilizando a respectiva guia e deixar em agita o durante pelo menos 30 minutos antes de usar A coloca o do cartucho de reagentes determina simultaneamente a leitura do c digo de bar2. ZENIT RA CCP REF 41430 REF 41430 Distribu do por entr ZENIT RA CCP WAMCNARIN INSTRUGOES 8 C A O Val e APLICA O O teste ZENIT RA CCP um teste imunol gico quimiluminescente CLIA para a determina o quantitativa com instrumenta o dedicada Analisador ZENIT RA dos anticorpos espec ficos de classe IgG dirigidos contra o p ptido citrulinado c clico CCP em amostras de soro ou de plasma humano EDTA Heparina Esta dosagem utilizada como aux lio no diagn stico de artrite reumat ide AR ATEN O Qualquer decis o m dica n o poder basear se unicamente no resultado deste teste mas dever incluir o conjunto de todos os dados cl nicos e de laborat rio dispon veis SIGNIFICADO CL NICO A artrite reumat ide AR uma poliartrite inflamat ria cr nica progressiva com patog nese auto imunit ria a cargo das articula es sinoviais A AR uma das doen as auto imunes mais comuns 1 a 2 da popula o europeia e a sua evolu o cl nica leva na maior parte dos casos a uma grave disfun o da funcionalidade articular com graves formas de invalidez portanto o diagn stico precoce da AR tem implica es cl nicas importantes pois uma terapia aplicada nas fases iniciais da doen a demonstrou se eficaz para limitar ou reduzir a progress o das les es e para melhorar a qualidade de vida dos doentes Recentemente em combina o com o Facto
3. Reac es cruzadas Para avaliar as potenciais reac es cruzadas do antig nio utilizado para sensibilizar as part culas magn ticas foi conduzido um estudo com 25 amostras todas com n veis altos de outros auto anticorpos e negativos a anti CCP IgG As amostras utilizadas estavam assim divididas SS A 2 SS B 3 U1 snRNP 1 Jo 1 2 Scl 70 3 Cenp B 1 Histonas 2 Nucleolares 1 MPO 1 PR3 1 B gt GPI CL IgG 2 e Gliadina t TG 3 O estudo n o demonstrou nenhuma reac o cruzada significativa do antig nio em fase s lida com os outros auto anticorpos IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 13 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 Efeito de satura o em doses elevadas Alguns m todos imunol gicos empregues para a determina o de amostras que cont m o analito em concentra es extremamente elevadas podem fornecer n veis aparentes de analito subestimados Efeito hook O m todo utilizado no kit ZENIT RA CCP sendo um m todo com duas incuba es n o sofre esse efeito Uma amostra com concentra o extremamente elevada acima do intervalo de medi o de IgG anti CCP confirmou a aus ncia de efeito hook at concentra o de 1511 UA mL Sensibilidade e Especificidade Relativas A presen a de anticorpos anti CCP IgG foi determinada utilizando o kit ZENIT RA CCP e um m todo de dosagem ELISA dispon vel no com rcio em 288 amostras 9 amostras deram lugar a r
4. documento A Menarini n o pode ser considerada respons vel por perdas ou danos provocados por uma utiliza o diferente da indicada nas instru es fornecidas Precau es de seguran a Este produto cont m material de origem animal e portanto deve ser manuseado como se contivesse agentes infecciosos Este produto cont m componentes de origem humana Todas as unidades de soro ou plasma utilizadas para o fabrico dos componentes deste Kit foram analisadas com m todos FDA aprovados e resultaram n o reactivas pela presen a de HBsAg anti HCV anti HIV1 e anti HIV2 Todavia como nenhum m todo de an lise capaz de garantir a aus ncia de agentes patog nicos todo o material de origem humana deve ser considerado potencialmente infectado e manuseado como tal Se a embalagem estiver estragada com derramamento dos reagentes providenciar descontamina o da rea afectada com uma solu o dilu da de Hipoclorito de S dio depois de se ter protegido com dispositivos de protec o individual adequados bata luvas culos Eliminar o material utilizado para a limpeza e os res duos da embalagem afectados pelo derramamento de acordo com as normas nacionais para a elimina o de lixos potencialmente infectados Alguns reagentes cont m azida de s dio como conservante Como a azida de s dio pode reagir com o chumbo cobre e lat o revestido de chumbo formando azidas explosivas nos canos aconselha se n o deitar reagentes ou res
5. duos no esgoto mas respeitar as normas nacionais em mat ria de elimina o de lixos potencialmente perigosos IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 5 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 Precau es de utiliza o Para assegurar a obten o de resultados v lidos devem ser rigorosamente respeitadas estas instru es de utiliza o e as indica es do manual de instru es do instrumento Os reagentes fornecidos no kit devem ser utilizados exclusivamente com o sistema ZENIT RA Analyzer Os componentes do cartucho de reagentes n o podem ser retirados do cartucho e montados novamente N o usar o kit para al m do prazo de validade PREPARA O DOS REAGENTES Os reagentes fornecidos no kit est o todos prontos a usar CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Conservar os reagentes fornecidos no kit entre 2 e 8 em posi o vertical e s escuras Nestas condi es o cartucho de reagente e os calibradores que n o tiverem sido abertos estar o est veis at ao fim do prazo de validade O cartucho de reagentes depois de aberto poder ser utilizado por 60 dias se conservado no frigor fico entre2e8 ou a bordo da m quina Os calibradores depois de abertos poder o ser utilizados por 60 dias se conservados no frigor fico entre 2 e 8 ese a perman ncia a bordo da m quina n o ultrapassar as 6 horas por sess o N o congelar os reagentes e os calibradores PREPARA
6. dados de identifica o da amostra podem ser introduzidos manualmente Seleccionar os par metros requeridos de cada amostra Calibra o O Analisador ZENIT RA utiliza uma curva de calibra o memorizada master curve criada pelo fabricante para cada lote de cartuchos de reagentes Os par metros das master curve juntamente aos valores das concentra es dos calibradores est o memorizados no DATA DISK e s o transferidos para a base de dados do analisador Os calibradores A e B s o utilizados para recalibrar a master curve quer em fun o do analisador utilizado quer dos reagentes a bordo Para executar a recalibra o analisar os dois calibradores A e B em triplicado e os controlos individualmente Os valores de concentra o obtidos com os controlos permitem validar a nova calibra o Assim que a recalibra o da master curve tiver sido aceitada e memorizada todas as amostras seguintes poder o ser analisadas sem outra calibra o excepto nos seguintes casos quando estiver carregado a bordo do analisador um cartucho de reagentes com um lote novo quando os valores dos controlos n o estiverem dentro do intervalo de aceitabilidade quando for executada a opera o de manuten o do analisador quando tiver expirado a validade da master curve recalibrada O prazo de validade da master curve recalibrada para o kit ZENIT RA CCP de 15 dias A gest o da recalibra o accionad
7. de 2010 Pagina 14 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 7 Van Gaalen FA Visser H Huizinga TW A comparison of the diagnostic accuracy and prognostic value of the first and second anti cyclic citrullinated peptides autoantibody tests for rheumatoid arthritis Ann Rheum Dis 2005 64 1510 2 8 Rantapaa Dahlqvist S de Jong BAW Berglin E et al Antibodies against cyclic citrullinated peptide and IgA rheumatoid factor predict the development of rheumatoid arthritis Arthritis Rheum 2003 48 2741 9 9 Visser H le Cessie S Vos K et al How to diagnose rheumatoid arthritis early A prediction model for persistent erosive arthritis Arthritis Rheum 2002 46 357 65 10 Jansen LMA van der Horst Bruinsma IE van Shaardenburg D van de Stadt RJ de Koning MHMT Dukmans BAC Rheumatoid factor and antibodies to cyclic citrullinated peptide differentiate rheumatoid arthritis fromm undifferentiated polyarthritis in patients with early arthritis J Rheumatol 2002 29 10 2074 2076 TECHNOGENETICS S r l Viale Casiraghi 471 20099 Sesto San Giovanni MI Distribuido por A Menarini Diagnosticos Lda Quinta da Fonte Edificio D Manuel I 2 B 2770 203 Pago de Arcos Tel 351 210 93 00 00 Fax 351 210 93 00 01 www menarinidiag pt IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 15 de 15
8. 41430 relativas de luz RLU Relative Light Unit indicativo da concentra o de anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores e nos controlos AUTOMATIZA O O Analisador ZENIT RA executa automaticamente todas as opera es previstas pelo protocolo de dosagem adiciona no recipiente de reac o as amostras calibradores controlos part culas magn ticas conjugado e solu es de activa o da quimiluminesc ncia separa o magn tica e lavagem das part culas medi o da luz emitida O sistema calcula os resultados da dosagem para as amostras e para os controlos atrav s de uma curva de calibra o memorizada e imprime um relat rio que inclui todas as informa es relativas dosagem e ao doente MATERIAIS E REAGENTES Materiais e reagentes fornecidos Part culas magn ticas revestidas com antig nio CCP p ptido citrulinado c clico em Tamp o Fosfato com prote nas estabilizantes tensioactivo Pro Clin 300 e azida de s dio lt 0 1 como conservantes Anticorpo monoclonal de rato anti IgG humanos marcado com um derivado do ster de acrid nio conjugado em Tamp o Fosfato com prote nas estabilizantes e azida de s dio lt 0 1 como conservante Solu o Diluente de Amostras Tamp o Fosfato com seroalbumina bovina um tensioactivo um corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO como conservantes Soro humano com baixa concentra o de anticorpos
9. 50 60 e de especificidade 95 a 99 A utiliza o de p ptidos citrulinados c clicos de segunda gera o CCP2 melhorou consideravelmente a sensibilidade para AR 80 mantendo uma elevada especificidade 98 99 7 Os elevados desempenhos dos testes de segunda gera o para CCP est o descritos em numero extremamente significativo de trabalhos cient ficos publicados nestes ltimos anos provavelmente a especificidade ainda mais elevada da indicada na literatura pois foi demonstrado que a positividade a anti CCP manifesta se mesmo 10 anos antes do aparecimento dos sintomas para AR consequentemente outro t tulo de anticorpos anti CCP num indiv duo assintom tico deve ser considerado como preditivo de AR mais do que como um falso positivo Os anticorpos anti CCP tamb m demonstraram possuir um elevado valor preditivo de desenvolvimento de les es articulares erosivas de facto os anticorpos anti CCP parecem ser o nico par metro no in cio incluindo tamb m os par metros cl nicos capaz de indicar que o doente est evolvendo verso una forma di AR erosiva Para al m disso a sua determina o til para o diagn stico de AR na inf ncia e para distinguir a AR das colagenopatias com artrite concomitante EM A utiliza o dos anti CCP em associa o com a determina o do FR maximiza o quociente sensibilidade especificidade De facto n o nos devemos esquecer que 15 a 20 das AR d o resultado positivo a FR mas negativ
10. a automaticamente pelo analisador IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 8 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 Dosagem Premir o bot o de in cio 1 O sistema aspira 100 uL de Diluente de Amostras 20 uL de Part culas Magn ticas 100 uL de Diluente de Amostras e 4 uL de amostra ou controlo para os calibradores o soro positivo fornecido pr dilu do com o Diluente de Amostras e o volume recolhido de 104 uL As solu es e a suspens o aspiradas s o distribu das na cuvete de reac o A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 durante 10 minutos Depois desta fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas S o distribu dos 200 uL de conjugado na cuvete A cuvete de reac o incubada no rotor a 37 durante 10 minutos Pah oN Depois desta ltima fase de incuba o as part culas magn ticas s o separadas e lavadas e a cuvete transferida para a c mara de leitura 7 A quantidade de conjugado aderido fase s lida exprimida em RLU directamente proporcional concentra o de IgG anti CCP presente na amostra 8 As respostas obtidas s o interpoladas na curva de calibra o e transformadas em concentra es As amostras com valores de concentra o mais elevados do limite superior do intervalo de medi o podem ser dilu das e testadas novamente O novo valor obtido multiplicado pelo factor de dilui o utilizado para
11. a ee UR SD CV RIP2 7 8 0 37 4 7 RIP3 29 4 1 51 5 1 RIP4 57 9 3 24 5 6 RIP5 116 6 5 58 4 8 Linearidade das Dilui es A precis o das dilui es do kit ZENIT RA CCP foi avaliada utilizando um protocolo baseado nas linhas guia do documento EP6 A dos Clinical and Laboratory Standards CLSI Foram doseadas dilui es escalares de 3 soros de concentra o elevada de IgG anti CCP executadas com o Diluente de Amostras Os resultados deste estudo est o resumidos na tabela seguinte Concentra o Concentra o a Amostra a medida srevlsta Recupera o i UA mL UA mL J 32 10 6 7 9 134 2 100 2 4 45 8 42 6 107 5 32 5 3 120 8 1 100 3 22 74 7 5 98 7 De qualquer modo torna se necess rio sublinhar que nem todos os soros quando medidos em dilui es diferentes podem dar resultados lineares dentro do intervalo de medi o dependendo o resultado n o s da concentra o mas tamb m da afinidade dos anticorpos presentes na amostra IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 12 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 Sensibilidade Analitica A sensibilidade anal tica do kit ZENIT RA CCP IgG exprimida como limite de detec o Limit of Detection LoD ou seja a menor quantidade de analito que o m todo capaz de medir foi determinada utilizando um protocolo baseado nas linhas guia do documento EP17 A dos Clinical a
12. anti CCP IgG em Tamp o Fosfato com seroalbumina bovina um tensioactivo um corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 3 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 Soro humano com elevada concentra o de anticorpos anti CCP IgG em Tamp o Fosfato com seroalbumina bovina um tensioactivo um corante azul inerte Pro Clin 300 e Gentamicina SO4 como conservantes Todos os reagentes est o prontos a usar Os reagentes 1 2 e 3 s o embalados em conjunto constituindo um cartucho de reagentes As concentra es dos Calibradores s o indicadas em UA mL Unidades Arbitr rias e calibradas em rela o a um padr o de refer ncia interno Os valores das concentra es espec ficos para cada lote de produto est o registados no DATA DISK inclu do no kit DATA DISK Mini DVD que cont m as informa es relativas a todos os produtos da Linha ZENIT RA Reagentes Calibradores e Soros de controlo actualizados at ao ltimo lote de produ o excep o dos produtos expirados na data de realiza o do novo DATA DISK Basta conservar o DATA DISK com o n mero de lote mais elevado para manter actualizadas as informa es necess rias para o funcionamento correcto do sistema Materiais e reagentes necess rios mas n o fornecidos no kit ZENIT RA Analyzer C d N 41400 ZENIT RA Cuvette Cube C d N 41402 Embalagem de 960 cuvet
13. contamina o bacteriana das amostras e a inactiva o ao calor podem influenciar o resultado da dosagem Os anticorpos heter filos presentes nas amostras de soro humano podem reagir com os reagentes base de imunoglobulinas provocando interfer ncias nas dosagens imunol gicas in vitro Estas amostras podem dar lugar a valores anormais se analisados com o kit ZENIT RA CCP IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 10 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 VALORES PREVISTOS Foram analisadas as amostras de 100 dadores seleccionados casualmente para verificar a presen a de anticorpos IgG anti CCP Todas as amostras analisadas deram resultados negativos com um valor m dio de 0 25 UA mL e um desvio padr o de 0 388 UA mL Com os resultados obtidos foi calculado o Limit of Blank LoB o valor mais elevado que podemos esperar numa s rie de amostras que n o contenham o analito O Limit of Blank determinado como 95 por cento de popula o negativa resultou igual a 1 2 UA mL com o Lote de reagentes n 1 DESEMPENHO Advert ncia os dados apresentados n o representam as especifica es de funcionamento do kit mas constituem a evid ncia experimental em como o kit funciona dentro dessas especifica es no modo previsto pelo fabricante Precis o e Reprodutibilidade A precis o e a reprodutibilidade do kit ZENIT RA CCP foram avaliadas utilizando um protocolo baseado nas linhas
14. es ZENIT RA System Liquid C d N 41409 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 10x ZENIT RA Wash Solution C d N 41407 1 garrafa de 0 5 litros de solu o 20x ZENIT RA Trigger Set C d N 41403 1 frasco de 250 mL de Trigger A solu o de pr activa o 1 frasco de 250 mL de Trigger B solu o de pr activa o ZENIT RA D SORB Solution C d N 41436 Embalagem de 2 garrafas de 1 litro de solu o pronta a usar ZENIT RA Cartridge Checking System C d N 41401 IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 4 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 ZENIT RA Top Cap Set C d N 41566 300 tampas superiores para o fecho dos recipientes dos calibradores ap s a primeira utiliza o O analisador ZENIT RA e os acess rios identificados pelo asterisco s o fabricados por Immunodiagnostic Systems S A Rue E Solvay 101 B 4000 Li ge B lgica e distribu dos por A Menarini Diagnostics Srl Outros Reagentes Aconselhados ZENIT RA CCP CONTROL SET C d N 41451 3 ampolas de 1 5 mL de soro humano negativo e 3 ampolas de 1 5 mL de soro humano positivo para anticorpos anti CCP ADVERT NCIAS E PRECAU ES Os reagentes fornecidos no kit ZENIT RA CCP s o exclusivamente para uso em diagn stico in vitro e n o para uso in vivo em pessoas ou animais Este produto deve ser usado por utilizadores profissionais respeitando rigorosamente as instru es deste
15. esultados divergentes entre a dosagem ZENIT RA e a dosagem dispon vel no com rcio A concord ncia relativa resultou assim igual a 96 9 279 288 A sensibilidade relativa resultou igual a 95 7 88 92 A especificidade relativa resultou igual a 97 4 191 196 BIBLIOGRAFIA 1 Wener MH Rheumatoid Factors Manual of Clinical Laboratory Immunology NR Rose et al American Society of Microbiology Press 961 972 2002 2 Schellekens GA Visser H De Jong BA Van de Hoogen FH Hazens JM Breedveld FC et al The diagnostic properties of rheumatoid arthritis recognizing a cyclic citrullinated peptide Arthritis Rheum 2000 43 155 63 3 Baeten D Peene Union A Sebbag M Serre G Veys EM et al Specific presence of intracellular citrullinate proteins in rheumatoid arthritis synovium relevance of to antifilaggrin antibodies Arthritis Rheum 2001 44 2218 62 4 Asaga H Yamada M Senshu T Selective deimination of vimentin in calcium ionophore induced apoptosis of mouse peritoneal macrophages Biochem Biophys Res Commun 1998 243 641 6 5 Verpoort KN van Gaalen FA van der Helm van et al Association of HLA DR with anti cyclic citrullinated peptide antibody negative rheumatoid arthritis Arthritis Rneum 2005 52 3058 62 6 Bizzaro N Mazzanti G Tonutti E et al Diagnostic accuracy of the anti citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis Clin Chem 2001 47 1089 93 IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro
16. guia do documento EP5 A2 dos Clinical and Laboratory Standards CLSI A precis o foi calculada analisando os resultados de 20 repeti es de cinco soros um negativo e quatro positivos com diferentes concentra es de anti CCP IgG executados com dois lotes de reagentes diferentes na mesma sess o experimental A concentra o do soro anti CCP IgG negativo RIP1 deu um resultado compreendido no intervalo de 1 7 a 2 7 UA mL e de 1 8 a 2 3 UA mL respectivamente com o Lote de reagentes 1 e 2 Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 4 soros positivos Reagentes Concentra o poste Lote n m dia UA mL P Ne aa 3 ee BB Lo om is 25 o 2 6 7 0 32 4 8 1 25 7 1 00 3 9 RIP i el cee career ES e po ao RO AR E o i 2 26 4 1 09 41 am ie E E E 203 ooo 40 oo 2 52 4 2 02 3 9 apm dE a 1065 E RE 37 ooo 2 107 6 3 20 3 0 IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 11 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 A reprodutibilidade foi calculada analisando os resultados da determina o de cinco soros um negativo e quatro positivos com diferentes concentra es de anti CCP IgG executada individualmente com dois lotes de reagentes diferentes em 40 sess es diferentes A concentra o do soro anti CCP IgG negativo RIP1 deu um resultado no intervalo de 1 4 a 2 7 Na Tabela est o indicados os resultados obtidos com os 4 soros positivos Amostr
17. nd Laboratory Standards CLSI e a f rmula para o c lculo LoD LoB Cg SDs onde LoB representa o valor do Limit of Blank SDs o desvio padr o previsto pela distribui o da amostra a baixa concentra o e Cg deriva de 95 por cento da distribui o padr o de Gauss Foram utilizadas 4 amostras de baixa concentra o de analito determinadas uma s vez com dois Lotes de reagentes diferentes em 40 sess es diferentes O Limite de detec o do kit ZENIT RA CCP foi igual a 2 1 UA mL Os valores do limite de detec o juntamente com as considera es de car cter cl nico e com os resultados de compara o com m todos de refer ncia contribu ram para a defini o do valor de cut off Especificidade Anal tica Interfer ncias Um estudo baseado nas linhas guia do documento EP7 A2 do CLSI demonstrou que os desempenhos da dosagem n o s o influenciados pela presen a na amostra de subst ncias potencialmente interferentes indicadas na tabela seguinte at concentra o experimentada Subst ncias Potencialmente a toi Concentra o m xima experimentada Interferentes Bilirrubina livre 20 mg dL Bilirrubina conjugada 28 mg dL Hemoglobina 1000 mg dL Acidos gordos 3000 mg dL Desaconselha se o uso de amostras lip micas hemolisadas ou turvas Tamb m foi demonstrado que a presen a de Factor reumat ide RF at concentra o de 513 Ul mL n o interfere na dosagem Especificidade anal tica
18. obter o resultado final CONTROLO DE QUALIDADE Para assegurar a validade da dosagem devem ser medidos soros de controlo com n veis diferentes de concentra o pelo menos um soro negativo e um soro positivo cada dia em que se executa a dosagem Se o seu laborat rio requer para a verifica o dos resultados da dosagem um uso mais frequente ou um n mero mais elevado de controlos seguir as opera es de controlo de qualidade estabelecidas Se forem utilizados os soros de controlo ZENIT RA os valores m dios esperados e os limites de aceitabilidade s o os indicados no DATA DISK tamb m presente na embalagem dos controlos Se forem utilizados soros de controlo diferentes necess rio antes da sua utiliza o definir os valores esperados com reagentes e sistema ZENIT RA Se o valor dos controlos n o estiver dentro do intervalo de aceitabilidade especificado os respectivos resultados da dosagem s o inv lidos e essas amostras devem ser analisadas novamente Neste caso necess rio executar uma recalibra o antes da repeti o da dosagem IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 9 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 C LCULO E INTERPRETA O DOS RESULTADOS C lculo dos resultados A concentra o dos anticorpos IgG anti CCP presente nas amostras em exame calculada automaticamente pelo sistema Os valores podem ser visualizados no ecr ou imprimidos As concentra es s o exp
19. os para anti CCP e que aproximadamente metade das AR negativas para FR d o resultado anti CCP positivo A positividade simult nea para FR e CCP tem um valor preditivo positivo de 100 No que respeita monitoriza o dos doentes com AR anti CCP positivos parece que a determina o em s rie destes auto anticorpos n o relacionados com o andamento cl nico e a resposta aos medicamentos PRINC PIO DO M TODO O kit ZENIT RA CCP para a determina o quantitativa das IgG espec ficas anti CCP utiliza um m todo imunol gico indirecto em dois passos baseado no princ pio da quimiluminesc ncia O antig nio espec fico utilizado para revestir as part culas magn ticas fase s lida e um anticorpo anti IgG humano marcado com um derivado do ster de acrid nio conjugado Durante a primeira incuba o os anticorpos espec ficos presentes na amostra nos calibradores ou nos controlos aderem fase s lida Durante a segunda incuba o o conjugado reage com os anticorpos anti CCP capturados pela fase s lida Depois de cada incuba o o material n o aderido fase s lida removido por aspira o e subsequente lavagem A quantidade de conjugado marcado que ficou aderido fase s lida avaliada atrav s da activa o da reac o de quimiluminesc ncia e medi o do sinal luminoso O sinal criado exprimido em unidades IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 2 de 15 ZENIT RA CCP REF
20. r Reumat ide FR marcador serol gico sens vel mas pouco espec fico foi adicionada a pesquisa de auto anticorpos anti p ptidos citrulinados anti citrulina ou CCP dotados de uma elevada especificidade e de um alto valor diagn stico e progn stico nos doentes com artrite reumat ide A citrulina o um processo bioqu mico que tem como objectivo as prote nas presentes na cavidade articular como resultado de eventos flog sticos A reac o catalisada pela enzima dependente do c lcio peptidil arginina desaminase PAD que desamina os res duos de arginina da filagrina prote na filamentosa agregada envolvida na organiza o do cito esqueleto das c lulas dos epit lios escamosos e das outras prote nas da cavidade Ap s estas modifica es os res duos citrulinados s o reconhecidos pelos anticorpos espec ficos A citrulina o das prote nas presentes na cavidade articular um processo comum a todos os derramamentos mas apenas os individuos predispostos geneticamente para sofrer de AR HLA de classe DRB1 produzem auto anticorpos contra os p ptidos citrulinados IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 1 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 Estes auto anticorpos apresentam uma elevadissima especificidade a AR Os p ptidos de sintese de primeira geragao CCP1 foram utilizados como revestimento nos primeiros testes ELISA demonstram bom desempenho de sensibilidade para AR
21. ras de identifica o Se o r tulo do cartucho estiver estragado ou por falta de leitura os dados de identifica o do cartucho de reagentes podem ser introduzidos manualmente O analisador mant m automaticamente as part culas magn ticas em agita o cont nua Se o cartucho de reagentes for retirado do analisador deve ser conservado na vertical e s escuras entre 2 esc Carregamento dos calibradores e dos controlos Os calibradores e os controlos ZENIT RA est o prontos a usar Deixar os calibradores e os controlos a temperatura ambiente durante 10 minutos e agitar delicadamente o conte do manualmente ou com um vortex evitando a forma o de espuma N o inverter o recipiente e n o retirar a tampa perfuradora de fecho tampa amarela para os calibradores e tampas verdes ou azuis para os controlos No caso em que os calibradores ou os controlos sejam utilizados pela primeira vez premir a tampa perfuradora para baixo at ao fim Deste modo a membrana que veda o recipiente ser perfurada tornando assim poss vel a colheita do l quido contido no mesmo O abaixamento total da tampa perfuradora assinalado pela simult nea cobertura da faixa vermelha situada na parte superior do r tulo Fig 1 Recipiente selado e Recipiente perfurado Se os calibradores ou os controlos j tiverem sido utilizados o recipiente ter a tampa superior tampa branca e a faixa vermelha do r tulo estar tapada S devem ser carregados no in
22. rimidas em UA mL O c lculo da concentra o na amostra efectuado atrav s da leitura da resposta obtida por cada amostra numa curva de calibra o elaborada com um sistema de fitting log stico de quatro par metros 4PL Y ponderado corrigida periodicamente em fun o das respostas obtidas na dosagem dos calibradores Para mais informa es sobre o sistema de c lculo dos resultados consultar o manual de instru es do sistema Interpreta o dos resultados O intervalo de medi o da dosagem ZENIT RA CCP de 0 0 a 320 UA mL Os valores inferiores a 0 0 UA mL s o valores extrapolados e podem ser indicados como iguais a 0 0 UA mL Os valores superiores a 320 UA mL podem ser indicados como superiores a 320 UA mL ou testados novamente ap s a devida dilui o Os resultados das amostras podem ser interpretados do seguinte modo UA mL Interpreta o A amostra deve ser considerada Negativa pela presen a de IgG anti CCP 25 A amostra deve ser considerada Positiva pela presen a de IgG anti CCP Os valores acima mencionados devem ser considerados como valores indicativos Cada laborat rio deve estabelecer os seus pr prios intervalos de refer ncia LIMITES DA DOSAGEM Para efeitos de diagn stico os resultados obtidos com o kit ZENIT RA CCP e o sistema ZENIT RA Analyzer devem ser utilizados em conjunto com os outros dados cl nicos e de laborat rio disposi o do m dico A
23. strumento os recipientes sem tampa superior tampa branca e com a faixa vermelha do r tulo tapada Fig 1 Recipiente perfurado Introduzir no analisador os calibradores ou os controlos na rea das amostras depois da leitura do c digo de barras Os dados do c digo de barras tamb m podem ser introduzidos manualmente se o r tulo estiver estragado ou em caso de falta de leitura Os valores da concentra o de anticorpos IgG anti CCP presente nos calibradores ou nos controlos est o registados no DATA DISK e s o transferidos automaticamente para o analisador Em caso de falta de transfer ncia dos dados poss vel introduzi los manualmente IFUO20ZENIT RA Vers o 01 10 de Fevereiro de 2010 P gina 7 de 15 ZENIT RA CCP REF 41430 No final da sess o os recipientes dos calibradores e dos controlos devem ser fechados com as respectivas tampas superiores tampas brancas e conservados entre 2 e 8 at serem novamente utilizados Fig 1 Recipiente fechado Os calibradores s podem ser utilizados ao m ximo quatro vezes Figura 1 Desenho do recipiente Recipiente selado Recipiente perfurado Recipiente fechado 83 55 Carregamento das amostras Identificar as amostras utilizando o leitor de c digo de barras e introduzi las no analisador no respectivo recipiente Em caso de falta do c digo de barras na amostra ou em caso de falta de leitura os
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