Uricostat enzimático AA
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1. los A turbidez ind cio de deteriora o dos Reagentes Descartar quando as leituras do Branco sejam gt 0 200 D O ou as leituras do Padr o sejam anormalmente baixas AMOSTRA Soro plasma ou urina a Coleta obter soro ou plasma da forma usual Separar o co gulo o mais r pido poss vel dentro das duas horas da co leta Se a amostra for urina utilizar preferencialmente fresca b Aditivos se a amostra utilizada for plasma recomenda se o uso de heparina como anticoagulante para sua obten o c Subst ncias interferentes conhecidas Medicamentos as subst ncias fortemente redutoras tais como o cido absc rbico vitamina C buscapina butil brometo de hioscina etc ministrados em doses elevadas interferem Sempre que poss vel conveniente suspender a medica o do paciente 24 horas antes de coletar a amostra N o se observam interfer ncias por bilirrubina at 10 mg dl triglicer deos at 490 mg dl 4 9 g l hemoglobina at 180 mg dl e heparina at 100 U ml Refer ncia bibliogr fica de Young para efeitos de drogas neste m todo d Estabilidade e instru es de armazenamento as amos 864127522 01 p 4 9 tras devem ser prefer velmente frescas Caso n o sejam processadas no momento as amostras de soro ou plasma podem ser conservadas 3 dias a 20 25 C 7 dias a 2 10 C ou 6 meses congeladas sem acr scimo de conservadores As amostras de urina podem ser conservadas 4 dias a 20 25 C a2. pH gt 8 N o refrigerar nem congelar MATERIAL NECESS RIO n o fornecido Espectrofot metro ou fotocolor metro Material volum trico adequado Tubo ou cubeta espectrofotom trica de faces paralelas Banho maria 37 C Rel gio ou timer CONDI ES DE REA O Comprimento de onda 505 nm em espectrofot metro ou em fotocolor metro com filtro verde 490 530 nm Temperatura de rea o 37 C ou 18 25 C Tempo de rea o 5 minutos a 37 C ou 20 minutos a 18 29 C Volume de amostra 20 ul Volume final de rea o 1 02 ml Os volumes de Amostra e do Reagente podem ser dimi nu dos ou aumentados proporcionalmente Ex 50 ul de Amostra 2 5 ml de Reagente nico ou 10 ul 500 ul PROCEDIMENTO l T CNICA COM REAGENTES SEPARADOS Em tr s tubos ou cubetas espectrofotom tricas marcadas B Branco P Padr o ou Calibrador e D Desconhecido colocar B P D Padr o ou Calibrador 20 ul Amostra 20 ul Reagente A 800 ul 800 ul 800 ul Reagente B 200 ul 200 ul 200 ul Misturar suavemente e incubar durante 5 minutos em banho maria a 37 C ou 20 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Tirar do banho esfriar e ler no espectrofot metro a 505 nm ou em fotocolor metro com filtro verde 490 530 nm levando o aparelho a zero com o Branco Il T CNICA COM REAGENTE NICO Proceder como na T cnica acima mas utilizando 1 ml de Reagente nico preparado em propor o 4 1 segundo indica
3. Ce LINHA L QUIDA Uricostat enzim tico AA Para a determina o de cido rico em soro plasma ou urina SIGNIFICADO CL NICO O cido rico um metab lito das purinas cidos nucl icos e nucleoproteinas Normalmente a concentra o de cido rico em soro varia de um indiv duo para outro conforme diversos fatores tais como sexo alimenta o origem tnica constitui o gen tica e gravidez N veis anormais de cido rico em soro indicam desordem no metabolismo das subst ncias que o originam ou defeitos em sua elimina o FUNDAMENTO DO M TODO O esquema da rea o o seguinte UOD cido rico 2 H O O gt alanto na H O CO POD 2 H O 4 AF 3 5 DHS gt colora o vermelha A quantidade de cido rico determina se medindo a absor b ncia deste pigmento UOD uricase POD peroxidase 4 AF 4 aminofenazona 3 5 DHS sal s dica de 3 5 diclorohidroxibenzeno sulf nico REAGENTES FORNECIDOS S Padr o solu o de cido rico 10 mg dl A Reagente A solu o contendo tamp o Good pH 7 8 e a sal s dica de 3 5 diclorohidroxibenzeno sulf nico DHS B Reagente B solu o contendo tamp o Goods pH 7 8 4 aminofenazona 4 AF uricase UOD peroxidase POD e ferrocianeto de pot ssio Concentra es finais Tampo GOA sacana li id 50 mmol l VOD SORA OD a JA CDU E gt 200 U POD a ron pci E gt 1000 U l AAE PRN RR OR RED RD RD 0 10 mmol l Ferroc
4. do nas instru es de uso IIl T CNICA EM URINA Utilizar a mesma t cnica ou Il diluendo a urina 1 10 com gua ou solu o fisiol gica Para o c lculo dos resultados multiplicar pelo fator de dilui o utilizado ESTABILIDADE DA MISTURA DA REA O FINAL A cor da rea o final est vel por 30 minutos Ler a absor b ncia durante este per odo O Marca registrada da Ciba Corning Diagnostics C LCULO DOS RESULTADOS cido rico mg l D x f 10 mg dl P Em caso de usar Calibrador A plus vide a concentra o do cido rico no manual de instru es correspondente D leitura de absorb ncia do Desconhecido P leitura de absorb ncia do Padr o ou Calibrador Exemplo D 0 134 P 0 284 Acido rico no Padr o 10 mg dl 10 mg dl f 35 21 mg dl 0 284 cido rico na amostra 0 134 x 35 21 mg dl 4 72 mg dl M TODO DE CONTROLE DE QUALIDADE Processar 2 n veis de um material de controle de qualidade Standatrol S E 2 niveles com concentra es conhecidas de cido rico com cada determina o VALORES DE REFER NCIA Ensaiaram se com Uricostat enzim tico AA l quida 120 amostras de indiv duos de ambos sexos com idades com preendidas entre 20 e 45 anos provenientes da cidade de Rosario Argentina sem sintomas aparentes de gota ne fropatia gotosa lit ase renal pelos uratos ou qualquer outra doen a aparente Encontrou se que o 95 dos resultados cobriram a
5. ente A 1 x 50 ml Reagente B com Padr o C d 1840107 REF 400 ml 8 x 40 ml Reagente A 4 x 20 ml Reagente B sem Padr o C d 1009277 500 ml 4 x 100 ml Reagente A 1 x 100 ml Reagente B com Padr o C d 1840110 REFER NCIAS 1 F C C Clin Chim Acta 87 3 459 F 1978 Trinder P Ann Clin Biochem 6 24 1969 Young D S Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests AACC Press 4 ed 2001 NCCLS document Evaluation of the Linearity of Quantita tive Analytical Methods EP6 P 1986 NCCLS document Evaluation of Precision Performance EP5 A 1999 Tietz Fundamentals of clinical cnemistry Burtis C Ash wood E 5 Edition WB Saunders 2001 864127522 01 p 6 9 S MBOLOS Os seguintes s mbolos s o utilizados nos kits de reagentes para diagn stico da Wiener lab Ce Representante autorizado na Comunidade Europ ia Este produto preenche os requisitos da Diretiva Europ ia 98 79 CE para dispositivos m dicos de diagn stico in vitro Uso m dico diagn stico in vitro Conte do suficiente para lt n gt testes Data de validade Limite de temperatura conservar a N o congelar Risco biol gico Volume ap s da reconstitui o Conte do N mero de lote Elaborado por Nocivo Corrosivo Ca stico Irritante Consultar as instru es de uso Calibrador Controle Controle Positivo Controle Negativo N mero de cat logo W w
6. ianeto de pot ssio 6 umol l DHS ca E E 2 0 mmol l REAGENTES N O FORNECIDOS Calibrador A Plus da Wiener lab INSTRU ES DE USO Padr o pronto para uso Reagentes A e B prontos para uso Podem se utilizar se parados ou como Reagente nico misturando 4 partes de Reagente A 1 parte de Reagente B ex 4 ml Reagente A 1 ml Reagente B N o fornecido em todas as apresentac es PRECAU ES Os reagentes s o para uso diagn stico in vitro N o ingerir Evitar o contato com a pele e os olhos Caso de se produzir derrames ou salpicaduras lave se com abundante gua a zona afetada Utilizar os reagentes observando as precau es habituais de trabalho no laborat rio de an lises cl nicas Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas conforme regula o local vigente ESTABILIDADE E INSTRU ES DE ARMAZENAMENTO Reagentes Fornecidos est veis sob refrigera o 2 10 C at a data do vencimento indicada na embalagem Uma vez abertos n o devem permanecer destampado nem fora do refrigerador durante per odos prolongados Evitar contamina es Reagente nico pr misturado est vel sob refrigera o 2 10 C por 1 m s a contar da data de sua prepara o IND CIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORA O DOS REAGENTES A dificuldade para obter os valores dos controles dentro da faixa assinada ex Standatrol S E 2 niveles ind cio de deteriora o dos Reagentes Descart
7. ica es contidas no documento EP 6P do CLSI antes NCCLS A rea o linear at 20 mg dl Em valores supe riores repetir a determina o empregando a metade da r amp EQ amostra multiplicando o resultado por 2 c Correla o Soro e plasma o valor de cido rico foi determinado em 100 amostras utilizando Uricostat enzim tico AA l quida e Uricostat enzim tico AA da Wiener lab obtendo se o seguinte coeficiente de correla o Cont r 0 9971 pendente b 1 0167 interse o a 0 2225 T cnica manual versus autom tica o valor de cido rico foi determinado em 30 amostras utilizando Uricostat en zim tico AA l quida com ambos os dois procedimentos A eal faixa de concentra o de cido rico nas amostras foi 1 7 xn 18 2 mg dl Obteve se o seguinte coeficiente de correla o x entre ambos os dois m todos r 0 9971 pendente b 0 9893 interse o a 0 2792 Ee PAR METROS PARA ANALISADORES AUTOM TICOS x Consultar as instru es de programa o no Manual de Uso do analisador a utilizar Para a calibra o utilizar um calibra Ji dor baseado em soro Calibrador A plus da Wiener lab ter APRESENTA O a 225 ml 3 x 60 ml Reagente A 3 x 15 ml Reagente B sem Padr o C d 1009320 EEE 225 ml 3 x 60 ml Reagente A 3 x 15 ml Reagente B sem Padr o C d 1009635 CONTROL 250 ml 2 x 100 ml Reag
8. iener lab 2000 Rosario Argentina UR120903
9. s seguintes faixas Homens 2 5 6 0 mg dl Mulheres 2 0 5 0 mg dl A literatura Tietz N W faz men o da seguinte faixa de refer ncia Sorou o plasma Homens 3 5 7 2 mg dl Mulheres 2 6 6 0 mg dl Urina 250 a 750 mg 24 horas Recomenda se que cada laborat rio estabele a seus pr prios intervalos ou valores de refer ncia levando se em conta a idade sexo h bitos alimentares e os demais fatores CONVERS O DE UNIDADES AO SISTEMA SI cido rico mg dl x 0 059 Acido rico mmol l Acido rico mg 24 hs x 0 0059 Acido rico mmol 24 hs LIMITA ES DO PROCEDIMENTO Vide Subst ncias interferentes conhecidas em Amostra DESEMPENHO Os ensaios foram realizados no analisador Express Plus Caso se utiliza o procedimento manual deve se validar que seja obtidO um desempenho semelhante ao seguinte a Reprodutibilidade avaliou se segundo o documento EP 5A do CLSI antes NCCLS obtendo se os seguintes dados 864127522 01 p 5 9 Precis o intra ensaio N vel D P C V 3 39 mg dl 0 075 mg dl 2 21 5 36 mg dl 0 071 mg dl 1 32 Precis o inter ensaio N vel D P C V 3 39 mg dl 0 097 mg dl 2 86 5 36 mg dl 0 102 mg dl 1 90 b Sensibilidade baseada numa leitura m nima do apa vo relho de 0 001 D O a varia o m nima de concentra o y detect vel nessas condi es para 0 001 D O ser aproxi madamente de 0 03 mg dl d Linearidade os estudos realizaram se seguindo as ind
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