Hoefer SE640
Contents
1. Tensione La tensione di partenza per un gel 1 5 millimetri lastra collegato ad un alimentatore impostato a 25 mA solitamente da 80 a 90 V utilizzando la SE 600 con un sistema discontinuo tampone Laemmli per SDS gel La tensione finale pu variano tipicamente 220 400 V a seconda della lunghezza del gel Vedi Tabella 2 Attenzione Dopo il monitoraggio iniziale non lasciare incustodito l apparecchio per pi di 1 h prima di verificare l andamento delle bande e il livello del buffer Tempo Una corsa completo quando il colorante inseguimento raggiunge il fondo del gel A 1 5 mm di spessore Laemmli SDS gel eseguito a 25 mA gel senza raffreddamento di solito richiede 2 5 ore Parametri per elettroforesi DNA gel acrilamide Gel di DNA che di solito funzionano ad una regolazione di tensione costante e poich i sistemi tampone sono continui entrambe le letture di corrente e tensione rimangono costanti per tutta la corsa Condizioni di funzionamento sono espressi in unit di V cm Pubblicato condizioni di funzionamento variano ampiamente ma tensioni nell intervallo da 1 a 3 V cm sono comuni per corse notte Registrare ogni corsa Mantenere un record della corrente o della tensione impostazione il numero e lo spessore di gel sistemi tampone e le letture iniziale e finale di corrente o di tensione per ogni ciclo in modo che i risultati possono essere confrontati Risultati incoerenti per lo stesso sistema e le i2. Le piastre sono di 18 cm di larghezza e 8 cm di lunghezza tre set di lastre di vetro sono inclusi in ogni unita Piastre divisori intagliati ordinare separatamente coppia due panini gel per formare un sandwich club in modo che fino a quattro gel pu essere eseguito in una sola volta Morsetti Clamps vengono utilizzati per proteggere le piastre e distanziali insieme bar di pressione morsetto regolata con viti distribuisce la pressione in modo uniforme Casting supporto Lo stand di colata di gel contiene panini assemblati in posizione verticale per la fusione gel piedini regolabili livellare il caster Una guarnizione stratificato sul fondo di ogni culla guarnizioni colata la parte inferiore del sandwich quando viene a camma nel supporto Camme Camme sono usati due volte prima per fissare il panino assemblata nello stand di colata e in secondo luogo per attaccare il panino alla camera tampone superiore Guarnizioni di gomma Ci sono due insiemi di due guarnizioni Le guarnizioni solide laminati inseriscono nel fondo della colata e stanno per realizzare la tenuta colata del gel Le guarnizioni fessurate collocato sotto la camera di transito superiore e formare la tenuta tra le camere superiori e inferiori Le creste sulla guarnizione superiore allineare la scanalatura guarnizione per mantenere aperto un canale tra la parte superiore del gel e il buffer nella camera superiore Distanziali Possono e
3. e pl3 NN O e pl4 Versare la soluzione luce nella camera di serbatoio il piu lontano dalla camera di ingresso Aprire il rubinetto abbastanza a lungo per spostare l aria tra le camere e poi chiudono Versare la soluzione pesante nella camera di miscelazione e inserire una barra di agitazione in questa camera Porre a gradiente su un agitatore magnetico e iniziare agitazione ad una velocit che mescola bene ma non introdurre bolle nella soluzione Mescolare il gradiente e pompare la soluzione nel panino Mentre la soluzione viene agitazione iniziare a pompare dalla camera di miscelazione e aprire il rubinetto alla camera serbatoio Sollevare la cannula quanto liquido entra il panino mantenendo la punta alla superficie del gel Preparare altri gel come richiesto Sovrapposizione ciascun gel con un sottile strato di acqua satura n butanolo acqua o tampone gel diluito per evitare esposizione all ossigeno gel Lentamente fornire la soluzione overlay da una siringa di vetro dotato di 22 gauge Applicare la soluzione in prossimit del distanziatore a lato del sandwich e consentono di fluire attraverso la superficie nudo o Lasciare i gel per polimerizzare per un minimo di un ora Dopo la polimerizzazione versare overlay e sciacquare la superficie del gel piu volte con acqua distillata Preparare la soluzione di impilamento monomero gel versare il gel di impilamento e
4. metanolo 7 di acido acetico 1 litro Metanolo 40 v v 400 0 ml Acido acetico glaciale 99 7 NN 70 0 ml H20 deionizzata a 1 0 litro Soluzione di decolorazione II 7 di acido acetico 5 metanolo Metanolo 5 v v 50 0 ml Acido acetico glaciale 99 7 vv 70 0 ml H20 deionizzata a 1 0 litro e p33 Le ricette sono gel di Laemmli per 30 ml di una soluzione singola concentrazione abbastanza per due 1 5 millimetri 18 x 8 cm gel Tabellare sono gli ingredienti e volumi per i gel pori relativa mente grandi 7 5 10 gamma T cosi come pic coli pori gel 12 5 15 gamma T Un gel al 4 accatastamento comune La ricetta gradiente lineare di 100 ml di soluzione II volume totale necessaria dipende dal numero di fusione gel e lo spessore gel regolare come necessario Tutti i gel sono reticolati con il 2 6 C Laemmli gel per 30 ml di soluzione gel risolutivo 5 ml di soluzione di gel di impilamento Gel separatore Stacking gel 1 5 10 12 5 15 4 Acrilamide stock Solution 1 75m 10 0 m 12 5 m 15 0 m 0 67 ml 1 5 M TrisCl pH 8 8 Soln 2 75m 75m 75m 7 5m 0 5 M TrisCl pH 6 8 Soln 3 1 25 ml 10 SDS Solution 4 0 3 m 0 3 m 0 3 m 0 3 m 0 05 ml H20 deionizzata 14 6m 12 1 m 9 6 m 7 1m 3 00 ml 10 APS Solution 5 150 ul 150 ul 150 ul 150 ul 25 ul TEMED 10 ul 10 ul 10 ul 10 pl 2 5 yl Volume finale 30 0 m 30 0 m 30 0 m 30 0 m 5 0 ml p34 Per gel sfumatura lineare utilizza
5. 10 6 8 1991 Non denaturante gel sistemi Reisfeld R A et al Acidic buffer system for resolution of cationic proteins Nature 195 281 1962 Mclellan T Electrophoresis buffers for polyacrylamide gels at various pH values Anal Biochem 126 94 1982 Hedrick J L and Smith A J Size and charge isomer separa tion and estimation of molecular weights of proteins by discontinuous gel electrophoresis Arch Biochem Biophys 126 155 1968 Denaturazione sistemi gel Laemmli U K Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T Nature 227 680 685 1970 Matsudaira P T and Burgess D R SDS microslab linear gradient polyacrylamide gel electrophoresis Anal Biochem 87 386 396 1978 Schreier M H Erni B and Staehelin T Initiation of mammalian protein synthesis I Purification and charac terization of seven initiation factors J Mol Biol Nov 116 4 727 753 1977 Shapiro A L and Maizel J V Jr Molecular weight estima tion of polypeptides by SDS polyacrylamide gel electropho resis further data concerning resolving power and general considerations Anal Biochem Jun 29 3 505 514 1969 Schaegger H and Von Jagow G Tricine sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separa tion of proteins in the range from 1 to 100 kDa Anal Biochem 166 368 379 1987 Weber K and Osborn M The reliability of molec
6. Comunemente la quantit di reticolante usato C 2 6 Nel sistema seguente esempio la composizione gel risolvere 10 T 2 6 C che si traduce in una dimensione di pori media La composizione gel di impilamento al 4 T 2 6 C La T in gel di impilamento inferiore in quanto una dimensione dei pori maggiore richiesto Le concentrazioni finali Tampone per Gel separatore Stacking gel elettroforesi Acrilamide conc 10 T 2 6 C 4 T 2 6 C Tris CI 0 375 M 0 125 M Tris Glycina 0 025 M Tris base 0 192 M glycina pH 8 8 6 8 8 3 SDS 0 1 0 1 0 1 Ammonio persolfato APS 0 05 wiv 0 05 0 1 wiv TEMED 0 05 viv 0 05 0 1 v v Per ottenere qualsiasi altra operazione di concentrazione finale desiderata regolare i volumi di acrilammide magazzino e acqua Volumi per diverse concentrazioni sono elencati a pagina 34 fTetramethylethylenediamine e p30 Nota Le soluzioni Filtro 1 4 attraverso un filtro da 0 45 micron Importante Fare riferimento alla Scheda di Sicurezza MSDS che accompagna ogni prodotto chimico per la movimentazione dettagliate e informazioni sulla sicurezza Attenzione L acrilamide una neurotossina Indossare sempre i guanti quando si maneggia in qualsiasi forma e indossare una maschera durante la pesatura della polvere Mai bocca pipet tare la soluzione Soluzioni 1 Acrilamide soluzione stock 30 8 2 6 T C Bis 200 ml L acrilamide FW 71 08 Bis FW 154 2 H20 deioni
7. SE6015 livella a bolla SER11 camma e p39 Pettine numero spessore larghezza di pozzi mm mm quantita codice 0 0 75 8 3 SE511 10 75 0 1 00 8 3 SE511 10 1 0 0 1 50 8 3 SE511 10 1 5 2 0 75 7 6 SE511 12 75 2 1 00 7 6 SE511 12 1 0 2 1 50 7 6 SE511 12 1 5 5 0 75 5 7 SE511 15 75 5 1 00 5 7 SE511 15 1 0 5 1 50 5 7 SE511 15 1 5 20 0 75 4 1 SE511 20 75 20 1 00 4 1 SE511 20 1 0 20 1 50 4 1 SE511 20 1 5 28 0 75 2 7 SE511 28 75 28 1 00 2 7 SE511 28 1 0 28 1 50 2 7 SE511 28 1 5 Comb profondita di 15 mm tutti gli altri 25 mm Preparativa pettini Questi pettini sono 25 mm di profondit regolabile a 10 o 15 mm numero di pozzi spessore larghezza mm prep ref mm prep ref quantita codice 1 1 0 75 121 6 1 SE511 R 75 1 1 1 00 121 6 1 SE511 R 1 0 1 1 1 50 121 6 1 SE511 R 1 5 1 2 0 75 113 6 1 SE511 DR 75 1 2 1 00 113 6 1 SE511 DR 1 0 1 2 1 50 113 6 1 SE511 DR 1 5 Schienale regolabile pettine 1 SE511 BKA Necessario per convertire qualsiasi da 25 mm pettine in profondit per 10 o 15 mm di profondit e p40 Distanziali spessore lunghezza mm larghezza mm quantita codice 0 75 8 2 2 SE6419 2 75 1 00 8 2 2 SE6419 2 1 0 1 50 8 2 2 SE6419 2 1 5 Companion prodotti Hoefer SE100 Mate lavaggio della piastra e unita di storage 1 SE100 Hoefer TE62 serbatoio Transfer Unit 1
8. TE62 Hoefer TE7OXP semi dry Transfer Unit 1 TE7OXP Hoefer reagenti per colata gel e buffer L acrilamide MB grado 1 kg GR141 1 bis acrilamide MB grado 100 g GR142 100 TEMED 258 GR151 25 Persolfato di ammonio ACS per reagenti 10g GR152 10 Tris Glicina SDS Buffer soluzione 10X MB grade LU GR149 1 Tris grado reagente 1 kg GR132 1 Glycine 1 kg GR125 1 Sodio dodecil solfato SDS 500 g GR126 500 Sodio dodecil solfato SDS soluzione al 10 1L GR155 1 Reagenti Hoefer per il caricamento del campione e la colorazione gel Ditiotreitolo DTT MB grado 5g GR122 5 EDTA 0 5 M soluzione MB grado 100 ml GR123 100 Blu di bromofenolo sale di sodio ACS per reagenti 10g GR120 10 Glicerolo MB grado 1L GR124 1 Proteine reagente determinazione 500 saggi 500 ml GR133 500 Coomassie Brilliant Blue G 250 25g GR134 25 Coomassie Brilliant Blue R 250 25g GR135 25 e p41 Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Numero verde 1 800 227 4750 Telefono 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 E mail support hoeferinc com Web www hoeferinc com Hoefer un marchio registrato Hoefer Inc Coomassie un marchio di ICI plc RBS 35 un marchio di Pierce Chemical Co Tygon un marchio di Saint Gobain Performance Plastics 2012 Hoefer Inc Tutti i diritti riservati Stampato negli USA Hoefer
9. accesorios y partes aprobaron o suministraron por Hoefer Inc puede ser utilizado para operar para mantener y para atender a este producto S lo utiliza una alimentaci n que es CE marc o la seguridad certificada por un nacionalmente reconocido probando el laboratorio La tapa de la seguridad debe estar en el lugar antes de conectar la alimentaci n lleva a una alimentaci n Apaga todos controles de alimentaci n y desco necta los plomos del poder antes de quitar la tapa de la seguridad Circula s lo agua o 50 50 glicol de agua etileno por el intercambiador de calor si se es el caso equiparon No conecte el intercambiador de calor a un toque de la agua ni cualquier fuente del l quido refrigerante donde la presi n del agua est libre Nunca introduce anticongelante ni alg n solvente org nico en cualquier parte del instrumento Los solventes org nicos causar n da o irreparable a la unidad No opera con temperaturas de b fer encima del m ximo especific especificaciones t cnicas Reca lentar causar da o irreparable a la unidad Viktig Information Swedish om denna utrustning anv nds i ett s tt som inte har specificeras av Hoefer Inc skyddet tillhan dah ll vid utrustningen kan skadas Detta instrument formges f r inomhuslaborato rium anvandning bara Bara medhj lpare och delar godk nde eller lever erade vid Hoefer Inc kan anv ndas f r fungera underh lla och servic
10. di pH estremi in particolare acido non pu polimerizzare Ossigeno Rimuovere ossigeno dall ambiente gel Degas la soluzione di monomero 5 10 min prima di versare e quindi sovrapporre la superficie del gel con acqua satura di n butanolo Temperatura Regolare la temperatura della soluzione gel ad un minimo di 20 C specialmente per basse gel sulla T e p25 problema Superiori tampone camera perdite Potenza supplyde tects perdita di corrente Curve fronte del colorante fino ndr sorride ai bordi Proteine striature in verticale Insolitamente lenta o veloce run possibile causa Mis allineati parti rimedio Verificare che le lastre di vetro distanziali e morsetti sono allineati e si adattano perfettamente alla guarnizione camera superiore Controllare che entrambe le guarnizioni sono centrati e che le creste di posizionamento che si inseriscano nelle scanalature Componenti sporchi o danneggiati Percorso elettrico a terra al di fuori terra Non uniforme dis tribuzione del calore Controllare che la guarnizione non sia danneggiato o pizzicato Sostituire se necessario Controllare che la camera di compensazione superiore non deformato da una precedente esposizione a calore eccessivo Aggiungi pi grasso al silicone per sigillare passacavi scambiatori di calore Controllare eventuali perdite o rotture nello scambiatore di calore Sostituire anelli di tenuta usurate Riempire la cam
11. di vetro con il gel in allegato Maneggiare il gel con cura per evitare di danneggiarla Capovolgere la piastra e il gel posizione bassa sul vassoio colorazione Pry un angolo del gel lontano dal vetro e farla cadere nel cassetto oppure se il gel spesso sufficiente per gestire sollevarlo e metterlo nel cassetto Per evitare schizzi aggiungere la colorazione o la soluzione fissativa al vassoio dopo che il gel viene trasferito Pulire l unit come descritto nella sezione successiva Attenzione Scollegare sempre apparecchio dalla rete elettrica prima di pulire o asciugare l unit Cura e manutenzione Pulizia Immediatamente dopo ogni utilizzo lavare le camere di buffer superiore e inferiore con acqua e poi sciacquare abbondantemente con acqua distillata Maneggiare la camera superiore del buffer con cura per evitare di danneggiare i con nettori a banana e pinna elettrodo inferiore Pulire le guarnizioni con un detergente neutro e risciacquare con acqua distillata Lasciare asci ugare all aria Lastre di vetro puliti e distanziali con una soluzi one diluita di un detergente laboratorio come RBS 35 quindi risciacquare abbondantemente con rubinetto e acqua distillata Lastre di vetro possono anche essere trattati con soluzioni di acido ma non memorizzato in di pulizia e Non sterilizzare in autoclave o riscaldare qual siasi parte superiore a 45 C e Non usare solventi organici soluzioni di puliz
12. il gel per Fig 5 Versando un gradiente di gel La soluzione gel pud essere intro dotto nel sandwich di gel attra verso una punta di pipetta ad una velocita che mantiene un flusso continuo Opzionale Regolare la percentuale superiore soluzione acrilammide al 15 w v di saccarosio o 25 v v glicerolo per migliorare la stratificazione Gradiente gel Gel gradiente sia lineari che esponenziale pu essere versato nel gel caster duale Si consiglia di utilizzare uno Hoefer SG Maker Gradient Series Gel gradiente vengono versate con una cannula dall alto della ruota gel duale vedi Fig 5 Un gel di impilamento viene poi versato sul gradi ente di gel Versando un gel gradiente lineare 0 Montare sandwich es nel gel caster dual come descritto a pagina 8 e Impostare il percorso di soluzione di monomero di flusso Eseguire una lunghezza di Tygon tubo attraverso una pompa peristaltica Collegare un estremita del tubo alla porta di uscita gradiente maker e l altra estremit ad una cannula 9 cm L OD della cannula deve essere inferiore allo spessore distanziatore Posizionare la cannula in modo che poggia sul fondo della met panino tra i distanziatori Preparare la soluzione di monomero Calcolare il volume di soluzione di monomero necessario Dividete il volume totale a met e preparare questo volume di entrambi i superiore e inferiore percentuale di acrilammide soluzioni
13. introdurre un pettine con una leggera angolazione nel sandwich facendo attenzione a non intrappolare l aria sotto i denti Lasciare un minimo di un ora per polimerizzare il gel per Nota Con blu Coomassie possibile rilevare 1 ug di proteina in una singola banda Con le macchie d argento pi sensibili possibile rilevare un minimo di 10 ng di proteina Preparazione del campione e Loading Il campione pu essere caricati o mentre il sandwich in caster o dopo la camera di tran sito viene fissata Quando si caricano campioni mentre utilizzando piastre divisorie i campioni devono essere caricate senza la camera tampone superiore in posizione La quantit di campione caricato dipende dallo spessore del gel la sensibilit del metodo di rilevamento utilizzato e la quantit di campi one previsto in ciascuna banda In un sistema tampone continuo il campione deve essere relativamente concentrato poich non viene utilizzato gel di impilamento In un sistema tampone discontinuo la zona in cui ciascuna specie molecolare migra acuito dal gel di impi lamento quindi il campione non deve essere cos concentrato 0 Preparare i pozzetti Togliere il pettine delicatamente cullandolo un lato all altro e poi sollevando verso l alto per evitare di danneggiare le pareti del pozzo Sciacquare accuratamente ciascun pozzetto con acqua distillata per rimuovere acrilammide non polimerizzato e quindi scaric
14. la seconda piastra di vetro Fissare il panino con morsetti Inserire un morsetto alla volta lungo i lati a sandwich Serrare una vite su ogni morsetto impostare il panino in posizione verticale su una superficie piana e allentare la vite per allineare lo stack Fare molta attenzione ad allineare per garantire la tenuta Serrare tutte le viti Rimuovere il distanziale Mate lastre di vetro ai lati esterni del sandwich centro della distanziali lastra con intaglio Fig 3 Club sandwich di assemblag gio Fascette laterali ospiter due distanziali fino a 1 5 mm di spessore Nota Non utilizzare grasso al silicone o vaselina per sigillare il panino Queste sostanze sono difficili da rimuovere ed infine causare artefatti Panino a pi strati Un intaglio setto centrale da ordinare separatamente coppie di due panini di raddoppiare il numero di gel che possono essere espressi ed eseguire Assemblare un sandwich nello stesso modo come un sandwich regolare tranne prima di posizionare la lastra di vetro superiore fissare la piastra di separazione e una seconda serie di distanziali sulla pila Posizionare la tacca in modo che sar in cima dei gel essenziale che i distanziatori e le piastre allineare perfettamente per creare una tenuta o Rimuovere il sandwich e ispezionare il fondo per assicurarsi che i bordi siano allineati filo al fine di garantire una buona tenuta Regolare se necessario
15. strumento quando e utilizzato in ambienti di laboratorio e utilizzati cos come forniti dal Hoefer Inc salvo alterazioni descritte nel manuale d uso e e collegato ad altri marcati CE strumenti o prodotti raccomandati o approvati da Hoefer Inc Fig 1 Componenti principali della serie SE640 vedi Fig 4 per i componenti caster Inclusi ma non mostrato e Seal composto Gel 1 4 oz e Spacer Mate allineamento template Lastre di vetro 6 e Wonder Wedge piastra strumento di separazione e Diga Buffer Unita completa comprende anche distanziali 4 e pettini 2 Necessario ma non inclusi e Agitatore magnetico e Alimentazione con un rating minimo di 300 V 100 mA costante A o V Nota La sezione di ordinazione elenca tutti gli accessori e parti di ricambio color coded cavi 2 coperchio di sicurezza tampone camera superiore con elettrodo superiore e inferiore pinna elettrodo buffer di camera inferiore Nota Prima di usare la prima volta smontare l unit e lavare con una soluzione diluita di un detergente laboratorio e risciac quare abbondantemente prima con acqua e poi con acqua distillata Disimballaggio e inventario Scartare tutti i pacchetti con attenzione e com parare i contenuti con la packing list assicu randosi che tutti gli elementi arrivato Se una parte manca rivolgersi all ufficio vendite locale Controllare tutti i componenti per i danni che poss
16. that the waste of electrical and electronic eguipment must not be disposed as unsorted municipal waste and must be collected separately Please contact an authorized representative of the manufacturer for information concerning the decommissioning of your eguipment Ce symbole indigue que les d chets relatifs a guipement lectrique et lectronique ne doivent pas tre jet s comme les ordures m nag res non tri es et doivent tre collect s s par ment Contactez un repr sentant agr du fabricant pour obtenir des informations sur la mise au rebut de votre quipement Dieses Symbol kennzeichnet elektrische und elektronische Ger te die nicht mit dem gew hnlichen unsortierten Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern separat behandelt werden m ssen Bitte nehmen Sie Kontakt mit einem autorisierten Beauftragten des Herstellers auf um Informationen hinsichtlich der Entsorgung Ihres Ger tes zu erhalten Este simbolo indica que el equipo el ctrico y electr nico no debe tirarse con los desechos dom sticos y debe tratarse por separado Contacte con el representante local del fabricante para obtener m s informaci n sobre la forma de desechar el equipo Denna symbol anger att elektriska och elektroniska utrustningar inte far avyttras som osorterat hushallsavfall och m ste samlas in separat Var god kontakta en auktoriserad tillverkarrepresentant f r information ang ende avyttring av utrustningen e pvii Gel elettr
17. 1 SE640 15 1 5 Comprende unita di base piu due di 15 e pettini e 2 serie da 8 cm distanziali 1 5 mm di spessore Parti di ricambio Wonder Wedge piastra gel strumento di separazione 1 SE1514 Slotted guarnizioni in gomma siliconica per camera tampone superiore 2 SE6008B Laminati in gomma guarnizioni in silicone per la colata di supporto 2 SE6009 Buffer diga 1 SE6432 Buffer di camera superiore con pinna elettrodo 1 SE6454 Coperchio con cavi ad alta tensione 1 SE6056 Ad alta tensione di sicurezza set di piombo 1 SE6056 HV Buffer di camera inferiore 1 SE6450 Sostituzione fin elettrodo per SE6454 1 SE6870 Spinotto a banana oro con 2 rondelle 1 SE6067 Livella 1 SER11 Gel Seal Ya oz tubo 1 SE6070 e p38 prodotto guantit codice Caster Gel per 1 o 2 gel Gel Caster Dual 1 2 gel 18 cm di larghezza 1 SE6015 Include 2 guarnizioni in bianco Quello incluso in ogni unita SE640 Morsetti e camme Viti di ricambio per pinze 12 SE6003U 2 Cams nero per pinze con fori a camme 4 SE6005L Gruppi dei morsetti 8 cm 2 SE6403U Lastre di vetro 18 x 8 cm Lastre di vetro 2 SE6402 Lastre di vetro fluorescenza a basso 2 SE6402LF Lastre di vetro panino divisore club con intaglio SE6402D coperchio di sicurezza con cavi SE6056 buffer di camera superiore con pinna elettrodo SE6454 buffer di camera inferiore SE6450 morsetto universale SE6403U guarnizione SE6009 caster di base
18. 8 2 1 2 7 4 1 1 1 ref prep 4 90 6 121 9 183 1 2 ref prep 4 85 6 112 9 171 Fig 6 Collegamento panini gel nella camera tampone superiore Se le perdite di assemblaggio necessario per un lavandino e parzialmente rilasciare le camme per consentire buffer di defluire nella camera superiore Smontare controllare l allineamento di tutti i componenti a sandwich e regolare se necessario A Camme Rimuovere dai fori inferiori a camme Posizionare la camera superiore sui panini e quindi inserire le camme nei fori superiori a camme cresta breve termine verso il basso B Il camma posizione finale non mostrato deve essere verticale in modo che il gruppo si inserisce nella camera tampone inferiore Nota Non forzare le camme Se incontrando una resistenza insolita smontare e controllare l allineamento pinza e vetro nella parte superiore del sandwich Allineare e reinstallare Lassemblaggio finale Buffer di camera superiore 0 Sciacquare entrambe le camere del buffer con acqua e acqua distillata accuratamente prima di ogni utilizzo Pulire via qualsiasi gel aderente l esterno dei panini gel a Se si esegue un solo gel Bloccare il secondo superiore slot di camera di compensazione con l installazione della diga acrilico tampone incluso con l unit Montare i morsetti sulla diga avendo cura di allineare le estremit del morsetto e bordi diga Installare i gel fittizio le viti si affac
19. Opzionale applicare un leggero strato di composto Seal Gel solo sulle superfici in basso creati dai distanziatori e piastre se i vostri panini continuano a perdere dopo vari tentativi di allineamento e p9 E Nota guando girando gli eccen trici pi facile mantenere I equilibrio caster se si attiva sia verso il centro della ruota Fig 4 Caster componenti e la configurazione e plo Posizionare la guarnizione lamellare nel supporto di fusione vedi Fig 4 con il lato di schiuma verso il basso Posizionare il gruppo pinza nella culla casting vite laterale rivolto verso l esterno Inserire una camma nel foro su ciascun lato del vassoio fusione con la cresta breve termine verso I alto Sigillare la panino gel contro la guarnizione colata ruotando entrambe le camme di quanto necessario di solito 90 a 150 fino a 180 La camma preme le piastre gi nella guarnizione per sigillare la parte inferiore del sandwich La tenuta conclusa quando il bordo del vetro appare pi scura e quasi trasparente contro la guarnizione Non ruotare la camma oltre questo punto lastra di vetro NS e distanziatore guarnizione lato schiuma verso il basso morsetto S S i A ch D gt S camme piedini di livellamento installare end cresta up Gel di acrilammide o Preparare la soluzione di monomero e versare il gel Preparare la quantita richiesta di soluzione di mono mero Disaerare e aggiu
20. af og afbryder kraftblyet for fjerning sikkerhedl get Cirkulerer bare vand eller 50 50 vand ethylene glykol gennem varmeveksleren i s fald udrustet Forbind ikke varmeveksleren til en vandhane eller nogen kolemiddelkilde hvor vandtrykket er unregulated Introducerer Aldrig antifreeze eller noget organisk opl sningsmiddel ind i nogen del af instrumentet O pii Organiske opl sningsmidler vil for rsage uboelig skade til enheden Driver ikke med st dpudetemperaturer over maksimummet specificerede tekniske specifica tions Overheding vil for rsage uboelig skade til enheden Belangrijke Informatie Dutch Indien deze uitrusting in een manier wordt gebruikt die niet door Hoefer Inc is gespecificeerd de bescherming die door de uitrusting is verzorgd kan worden geschaad Dit instrument is voor binnenlaboratoriumgebruik enkel ontworpen Enkel onderdelen en delen keurden goed of leverden door Hoefer Inc kan voor het bedienen worden gebruikt handhavend en onderhouden van dit product gebruik Enkel een netvoeding die CE is markeerde of veiligheid die door een is gecertificeerd die nationaal is herkend testene laboratorium Het veiligheidsdeksel moet in plaats voor het verbinden van de netvoeding leidt tot een netvoeding zijn Doe alle netvoedingscontroles Uit en koppel los de machtleiding voor het verwijderen van het veiligheidsdeksel Circuleer enkel water of 50 50 water ethyleen glycol d
21. almente ricon osciuto testando il laboratorio Il coperchio di sicurezza deve essere nel luogo prima di collegare i piombi di alimentatore a un alimentatore Spegne tutto i controlli di alimentatore e disin serisce i piombi di potere prima di togliere il coper chio di sicurezza Circola solo l acqua o 50 50 glicole di acqua etilene attraverso lo scambiatore di calore se cos equipag giato Non collegare lo scambiatore di calore a un rubinetto di acqua o qualunque fonte di refriger ante dove la pressione di acqua sregolata Non introduce mai l antigelo o qualunque solvente organico in qualunque parte dello strumento solventi organici causeranno il danno irreparabile all unit Non opera con le temperature di tampone al di sopra del massimo ha specificato le descrizioni tecniche Il surriscaldamento causer il danno irreparabile all unit Dule it Informace Czech Pokud by toto za zen je pou ito zp sobem kter nen podle Hoefer Inc ochrana poskytovan na z klad za zen m e b t naru ena Tento n stroj je ur en pro vnit n pou it v laborato i pouze Pouze p slu enstv a sti schv len nebo poskyt nut ch Hoefer Inc mohou b t pou ity pro provoz dr bu a dr b tohoto v robku zdroj nap jen pou vaj jen e je opat en ozna en m CE osv d ena nebo bezpe nost vnitrost tn uznan mi zku ebn mi laborato Bezpe nosti lid mus
22. an 57 1 200 210 1974 O Farrell P H High resolution two dimensional electropho resis of proteins J Biol Chem May 25 250 10 4007 4021 1975 Bjellqvist B et al Isoelectric focusing in immobilized pH gradients principle methodology and some applications J Biochem Biophys Methods 6 317 339 1982 Gorg A et al The current state of two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients Electropho resis 9 531 546 1988 G rg A Two dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients current state Biochem Soc Trans 21 130 132 1993 Bjellgvist B et al Micropreparative two dimensional electro phoresis allowing the separation of samples containing milli gram amounts of proteins Electrophoresis 14 1375 1378 1993 Blomberg A et al Interlaboratory reproducibility of yeast protein patterns analyzed by immobilized pH gradient two dimensional gel electrophoresis Electrophoresis 16 1935 1945 1995 e p37 Informazioni per Fordine prodotto quantita codice SE640 Unita doppio verticale di base 1 SE640 Comprende 3 serie di lastre di vetro quattro assemblee di serraggio 8 cm 6 camme gel a doppia fusione stand con base di livellamento e di livello diga di buffer Spacer Mate modello di allineamento e la piastra Wonder Wedge strumento di separazione Ordine 2 pettini e 2 serie da 8 cm distanziali separatamente SE640 Unita doppio verticale completa
23. anodo e il cavo nero collegato con l elettrodo superiore il catodo Note di montaggio importanti e Non riempire la camera superiore o inferiore al di sopra dei livelli raccomandati illustrati in Fig 7 Rimuovere tampone in contatto con gli elettrodi posti e Tampone Versare lentamente e lontano dalle fessure nella camera tampone superiore per evitare di disturbare i campioni camera superiore lt _ livello del buffer camera inferiore livello del buffer lt e pl9 Nota tutti i modelli della serie SE600 usare le piastre larghe 18 cm Lo spessore gel deter mina la sezione trasversale e reguisito corrente La lunghe zza della piastra determina il tempo di esecuzione Tabella 2 sistema tampone Laemmli punto di partenza le linee guida Gel di spessore 1 5 mm Corrente per gelt 25 mA corrente costante Avvio di tensione 80 90 V 220 250 V Gel pi spessi o pi sottili richiedono proporzi onalmente pi o meno corrente Per esempio un gel 0 75 mm che la met dello spessore di un gel 1 5 mm richiede met molta corrente o 12 5 mA tensione finale tLa corrente deve essere moltiplicata per il numero di gel Ad esempio se due panini sono installati i quattro gel richiedono quattro volte tanto corrente La corrente pu essere aumentato per velocizzare le pist
24. are invertendo il panino gel o caster Riempire ogni pozzetto con tampone di elettroforesi e p15 Nota Una volta che i campioni nei pozzetti fare attenzione a non urtare i panini in modo che i campioni non vengono sversati o mescolato e pl6 e Preparare il campione Aumentare la densita del liquido campione con il 10 glicerolo o saccarosio Aggiungi un colorante di monitoraggio come il rosso fenolo blu di bromofenolo o pironina Y Per gel SDS proteici 2X tampone di utilizzare un trattamento per denaturare entrambi i campioni secco e liguido in una provetta Per soluzioni proteiche liquide aggiungere un volume uguale di 2X tampone Per asciugare campioni proteici aggiungere volumi uguali di 2X tampone campione e ad elevata purezza per ottenere la concentrazione desiderata Riscaldare il tubo in acqua bollente per 90 secondi poi lasciare raffreddare a temperatura ambiente Campioni trattati possono essere conservati a 40 a 80 C per le corse successive Proteine di membrana di calore a 60 C per 20 minuti Conservare campione inutilizzato a 4 C o Underlay il campione nei pozzetti utilizzando una punta fine microsiringa o gel loading punta della pipetta Tabella 1 Volume di campione per le misure standard pettine volume del campione ul per 1 mm di profondita numero spessore pettine mm di pozzi 0 75 1 0 15 10 6 2 83 12 4 12 5 8 V 11 5 15 43 5 7 8 6 20 3 1 4 1 6 2 2
25. ausera des dommages irr parables a l unit Wichtige Informationen German Wenn diese Ausr stung gewisserma en nicht angegeben durch Hoefer Inc verwendet wird kann der durch die Ausr stung zur Verf gung gestellte Schutz verschlechtert werden Dieses Instrument wird f r den Innenlaborge brauch nur daf r entworfen Nur Zus tze und Teile genehmigten oder lieferten durch Hoefer Inc kann fur das Funktionieren das Aufrechterhalten und die Wartung dieses Produk tes verwendet werden Verwenden Sie nur eine Energieversorgung die CE gekennzeichnet oder durch ein national anerkanntes Probelaboratorium bescheinigte Sicherheit ist Der Sicherheitsdeckel muss im Platz vor dem AnschlieBen der Energieversorgung sein f hrt zu einer Energieversorgung Alle Energieversorgungssteuerungen abdrehen und die Macht trennen f hrt vor dem Entfernen des Sicherheitsdeckels Nur Wasser oder 50 50 Glykol des Wassers Athylens durch den Warmeaustauscher wenn so ausgestattet in Umlauf setzen Verbinden Sie den W rmeaustauscher mit einem Wasserklaps oder jeder Kiihlmittel Quelle nicht wo der Wasserdruck ungeregelt wird F hren Sie nie Frostschutzmittel oder jedes organische L sungsmittel in jeden Teil des Instru mentes ein Organische L sungsmittel werden nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Mit Puffertemperaturen Uber angegebenen technischen Spezifizierungen des Maximums nicht funkti
26. ciano nella culla secondo nel gel caster duale Fissare la panino gel alla camera tampone superiore Girare la camera superiore del buffer a testa in gi e mettere una guarnizione ad incastro a sandwich entrambi i recessi porta Sia la fessura nella guarnizione e la scanalatura nella rientranza devono allinearsi Entrambe le guarnizioni asolati deve essere utilizzato anche se si esegue un solo panino gel Grooves lungo ogni slot aiutare a mantenere la guarnizione al suo posto Inoltre una piccola quantit di Seal gel pu essere applicato a ciascuna estremit della guarnizione prima di installare per contribuire a tenere la guarnizione contro la camera tampone superiore Rilasciare i panini dal caster rimuovendo tutte le camme fondo se presente Abbassare la camera superiore del buffer sui panini gel nello stand casting Installare I camme crinale verso il basso nei fori di buffer camera a camme Cam il panino in posizione da una camma contemporaneamente ruotando in senso orario e l altra in senso antiorario di 180 e p17 a O e p18 Utilizzare una pipetta per riempire attentamente ciascuno slot di sopra dei pozzetti campione con tampone per minimizzare disturbare i campioni Poi versare 100 ml di tampone nella camera dirigendo il flusso tampone verso la parete laterale Controllare che il tampone non vi siano perdite intorno la guarnizione Buffer di camera inferiore 0 Mettere una barra mag
27. e se raffreddamento attivo viene utilizzato e pu essere diminuita per lenti piste notte A 25 mA per gel e p20 Separazione del campione Parametri elettroforesi per gel di poliacrilammide discontinui I gel possono essere eseguiti sia in costante impostazioni correnti o tensione costante Una impostazione corrente costante tradizional mente utilizzato con un sistema tampone dis continuo modo che la velocit di migrazione elettroforetica rimane invariato per tutta la corsa In queste condizioni all aumentare della tensione man mano che procede di esecuzione Un valore minore di corrente raccomandata per una maggiore risoluzione Il livello ottimale di corrente deve essere determinato empirica mente i principali fattori che devono essere equilibrato includere la concentrazione di gel e la velocit di migrazione e il riscaldamento Joule risultante e distorsione banda Tabella 2 elenca punto di partenza le linee guida e le rego lazioni per lo spessore del gel il numero di gel e il tasso di migrazione Corrente Attuali agisce sul totale sezione trasversale di tutti i gel perch i gel sono collegate in parallelo al circuito elettrico Cos l impostazione corrente per un gel deve essere moltiplicato per il numero di gel dello spessore stesso gel che vengono eseguiti contemporaneamente Per un gel 1 5 millimetri di spessore si consiglia l impostazione corrente di avviamento di 25 mA Due da 1 5 mm gel 50 mA
28. era tampone inferiore al livello appropriato per la corsa bordi Vedi Fig 7 pagina 19 Utilizzare agitatore magnetico e mescolare bar per mante nere buffer di ben miscelati Il calore eccessivo Particolato nel campione Circulate ext refrigerante Diminuire l impostazione corrente o tensione Prechill il buffer Eseguire il gel in cella Centrifuga o filtro di esempio prima di caricare per rimuovere particelle Sovraccarico Carica quantit inferiore di campione degradazione Corrente di disper sione intorno gel Aggiungere inibitore della proteasi come PMSF Controllare eventuali perdite tutti i piatti e distanziali devono essere allineati e privo di grassi e di crepe Se utilizzato la diga del buffer deve essere sicuro Campione o preparaz ione del reagente Se il pH richiesta di una soluzione superato non back titolare Scartare e preparare tampone fresco Ricette Verifica concentrazioni gel e tampone di diluizione Per esempio non utilizzare Tris HCI invece di tampone Tris per serbatoio Laemmli Diminuisce la concentrazione di sale di campioni Qualit del reagente Smaltire soluzioni di acrilammide anziani e utilizzare solo stock di altissima qualit Utilizzare solo urea appena deionizzata Impostazioni di tensione o corrente Per aumentare o diminuire la velocit di migrazione regolare la tensione o corrente del 25 50 p26 problema Bands sono i
29. he sia denaturato Dializzare o desalificare del campione I campioni di calore in tampone campione SDS per non piu di 1 2 min a 100 C per migliorare la dissociazione delle subunita Conservare sul ghiaccio dopo il riscaldamento Regolare il volume del campione o la concentrazione Aggiungere piu mercaptoetanolo o ditiotreitolo controllare trattamento del campione Aggiungere inibitori della proteasi PMSF come se necessaria per prevenire la degradazione proteolitica di campione Aumentare glicerolo o saccarosio per aumentare la densita del campione Conservare i campioni devono essere congelati in aliquote per evitare cicli ripetuti di congelamento scongelamento Conservare a 40 a 80 C Appendice A Laemmli sistema gel Il sistema Laemmli il protocollo pi comune per elettroforesi SDS proteine denaturate Lo ione leader in questo sistema tampone discontinuo e lo ione cloruro finale glicina Di conseguenza il gel e risolvendo il gel di impilamento contengono Tris Cl buffer di diversa concentrazione e pH e il tampone di elettroforesi contiene Tris glicina Tutti i buffer contengono 0 1 SDS Gel poliacrilammide composizione indicata da due diverse percentuali T total acrilamide g acryl bis x 100 100 ml C crosslinker g bis x 100 g acryl bis e p29 Be La percentuale totale di acrilammide T nel gel risoluzione che pu variare da 5 a 20 determina la dimensione dei pori
30. i b t zavedena p ed p ipojen m nap jec zdroj nap jen vede k Turn ve ker nap jen kontroly vypnuto a odpojit p ed odb rem energie vede bezpe nostn v ko Rozeslat pouze voda nebo 50 50 voda ethyleng lykolu prost ednictv m v m n k tepla je li to vybav ena Nemaj p ipojen v m n k tepla s vodn mi set epn nebo jak koli chladic kapaliny zdroje kde tlak vody je neregulo Nikdy zav st prost edek proti zamrznut nebo jak koli organick rozpou t dla do jak koli sti z tohoto n stroje Rozpustidl m zp sob nenapravi teln po kozen jednotka Nejsou provozov na s pufru teplot ch nad maxim ln stanovenou technick mi specifika cemi P eh t zp sob nenapraviteln po kozen jednotka Vigtig Information Danish Hvis dette udstyr bruges i en made ikke specifice ret ved Hoefer Inc den beskyttelse som er blevet forsynet af udstyret kan maske svaekkes Dette instrument er designet for indendors labora toriumbrug bare Bare tilbeh r og del godkendede eller forsynede ved Hoefer Inc kan m ske bruges for drive funk tionsfejl og betjening dette produkt bruger Bare en str mforsyning der er CE markerede eller sikkerhed som er blevet attesteret af en som nationalt er blevet anerkendt prove laboratorium Sikkerhedl get m v re p plads far forbinding stramforsyningsblyet til en str mforsyning Drejer alle stromforsyningskontroller
31. ia abrasivi forti o acidi o basi forti per pulire le camere e Non bagnare la guarnizione laminato e p23 Importante Richiedi una copia del Hoefer Salute e Sicurezza Dichiarazione Inc forma prima della restituzione dell articolo Nessun elemento pu essere accettato per la manutenzione o la restituzione a meno che tale modulo debitamente compilato Nota autorizzazione alla resti tuzione RA il numero deve essere ottenuto dal Hoefer Inc prima di tornare ogni elemento Hoefer Inc p24 Informazioni sul servizio clienti Servizio di assistenza tecnica e riparazione Hoefer Inc offre un completo supporto tecnico per tutti i nostri prodotti Se avete domande su come utilizzare questo prodotto o volete orga nizzare per ripararlo si prega di chiamare o invi are un fax il Hoefer locale Inc rappresentante Controllare il sito web Hoefer Inc al www hoeferinc com per il distributore nella vostra zona Oppure contattaci direttamente a Hoefer Inc 84 October Hill Road Holliston MA 01746 Toll Free 1 800 227 4750 Telefono 1 508 893 8999 Fax 1 508 893 0176 support hoeferinc com www hoeferinc com Risoluzione dei problemi problema possibile causa Gel a sandwich Componenti sporchi o mentre le perdite di danneggiati fusione rimedio Piatti Distanziali e con la guarnizione deve essere completa mente pulita Lavare se necessario Sostituire lastre scheggiate soprattutto se scheggiato v
32. icino ai distanziali Controllare la guarnizione caster per i tagli o screpolature e sostituirli se necessario Mis allineati parti Verificare l allineamento piastra e distanziale riallineare se necessario Over bloccaggio Esempio di pozzi bolle d aria danneggiati o irregolari Ruotare camma soltanto per quanto necessario per creare una tenuta di solito 90 150 ma fino a 180 Su ogni distanziale applicare un leggero strato di composto Seal Gel verso il basso angolo esterno solo Non usare grasso al silicone Eliminare le bolle d aria prima di inserire pettini Far scor rere pettine in soluzione ad angolo Se pettine deve essere rimosso aggiungere la soluzione di monomero pi prima di reinserire il pettine Polimerizzazione incompleta o ritardata Lasciare gel di acrilammide da impostare per un minimo dilh Detriti in pozzi Sciacquare gel non polimerizzato con il tampone del campione rimozione Comb Gel polimerizzazi Prodotti chimici one incompleta Togliere il pettine con una leggera angolazione e molto lenta mente per evitare di danneggiare il gel Gel di agarosio Abbassare il pettine non superiore a 1 cm in gel Utilizzare solo le scorte recenti di altissima qualit reagenti Se il persolfato di ammonio secco non scricchiolano quando vengono aggiunti all acqua sostituire con il brodo fresco Aumentare TEMED o concentrazione APS o entrambi pH Soluzioni con valori
33. ing denna produkt anv nder bara en kraft tillg ng som r CE markerade eller s kerhet intygade vid en nationellt erk nd testande laboratorium S kerheten locket m ste vara p platsen fore koppla kraften tillgangen blyen till en kraft tillgang Vander sig alla kraft tillgang kontroller av och kopplar bort kraften blyen f re flytta s kerheten locket Cirkulerar bara vatten eller 50 50 vatten ethylene glycol genom v rmen exchanger i s utrustad fall Inte kopplar v rmen exchanger till en vatten kran eller n got kylmedel k lla d r vattnet trycket r unregulated Inf r aldrig kylv tska eller n got organiska l sningsmedel in i n gon del av instrumentet Organiskt l sningsmedel ska orsaka irreparable skada till enheten Anv nd inte med buffert temperaturer over det h gsta angivna tekniska specifikationerna verhettning skulle orsaka irreparabla skador p enheten e pvi Italiano R English R French R E German R E Spanish La Swedish R Rifiuti di apparecchiature elettriche ed elettroniche RAEE Auesto simbolo indica che i rifiuti derivanti da apparecchiature elettriche ed elettroniche non devono essere smaltiti come rifiuti municipali indifferenziati e devono invece essere raccolti separatamente Per informazioni relative alle modalita di smantellamento delle apparecchiature fuori uso contattare un rappresentante autorizzato del fabbricante This symbol indicates
34. le d aria tra il gel prima e seconda dimensione e pll E O e p12 Sovrapposizione ciascun gel con un sottile strato di acqua satura n butanolo acqua o tampone gel diluito per evitare l esposizione all ossigeno gel Lentamente fornire la soluzione overlay da una siringa di vetro dotato di 22 gauge Applicare la soluzione in prossimita del distanziatore a lato del sandwich e consentono di fluire attraverso la superficie nudo Lasciare il gel per polimerizzare per un minimo di un ora Stacking preparazione gel Versare il gel di impilamento mentre il sandwich ancora in caster gel Stacking gel risoluzione ottimale quando versato poco prima elettroforesi 0 Rimuovere la mascherina sciacquando la superficie del gel pi volte con acqua distillata Invertire il caster per drenare Per assicurare un contatto perfetto tra il risolvere e il gel di impilamento rimuovere i residui di liquido tamponando un angolo con un panno privo di pelucchi e Preparare la quantita richiesta di impilamento monomero soluzione di gel si deareare e aggiungere catalizzatore APS e iniziatore TEMED Versare il gel di impilamento sul gel risoluzione con una pipetta Pasteur monouso o ad un livello di circa 2 mm dalla cima della piastra Introdurre un pettine con una leggera angolazione nel sandwich facendo attenzione a non intrappolare l aria sotto i denti Lasciare un minimo di un ora per polimerizzare
35. mpostazioni di indicare potenziali problemi come perdite attuali le concentrazioni di tampone errati elevate concentrazioni saline o la qualit chimica incoerente Verificare i progressi band dopo 5 minuti e di nuovo dopo un ora tenendo d occhio il tasso di migrazione del colorante inseguimento La pista completa quando il colorante inseguimento raggiunge il fondo del gel Vedere il livello del buffer e se necessario alimentarlo come richiesto per mantenere l elettrodo superiore sommerso Un piccolo volume di tampone pu fuoriuscire oltre una piastra intaccate o guarnizione o tampone pu passare attraverso il gel e p21 Nota utilizzare solo gli stru menti flessibili di plastica per evitare scheggiature indiscreti le lastre di vetro e p22 Dopo elettroforesi 0 Una volta il colorante inseguimento raggiunge il fondo del gel spegnere l alimentazione scollegare i cavi e rimuovere il coperchio di sicurezza Sollevare verso l alto per evitare di piegare i connettori a banana a Estrarre il gruppo superiore camera buffer Versare il buffer in un lavandino Installare il gruppo nel gel caster duale e guindi rilasciare i panini girando e la rimozione delle camme Svitare le pinze dai panini e rimuovere Delicatamente allentare e poi scivolare via entrambi i distanziali Utilizzare il Hoefer Wonder Wedge strumento piastra di separazione per separare i piatti o Sollevare con cautela la lastra
36. nclinate o distorte possibile causa Gel preparazione incompleta e di polimerizzazione rimedio Degas l impilamento gel soluzione ed evitare bolle d aria sotto i denti del pettine Interfaccia irrego lare tra stacking e l esecuzione di gel Sovrapporre il gel esecuzione con acqua satura butanolo comincia prima della polimerizzazione per evitare la formazione di una superficie irregolare gel Preparazione del campione Campione Stained raccoglie Vicino alla parte anteriore del buffer Gel concentration Degradation Dializzare o desalificare del campione Le molecole non sono sufficientemente limitata dalle dimensioni del gel risoluzione dei pori aumentare la T Le proteine possono essere degradata da proteasi endo gene utilizzare gli inibitori delle proteasi durante la fase di isolamento Vicino alla parte superiore del gel quando il fronte di buffer ha raggiunto il fondo Gel concentration Precipitation La dimensione dei pori gel troppo piccola diminuire il T del o sovrapposizione gel risolvere La proteina precipitata Riscaldare il campione ad una temperatura inferiore 70 C o meno per 1 2 min A sia superiore e inferiore del gel Monitoraggio colorante non affi nare in una zona concentrata nel gel di impilamento Gel concentration Poor impilamento L intervallo di peso molecolare del campione richiede un gradiente di concentrazione di acrilamide per ris
37. netica di spin nella camera tampone inferiore e posizionare l unit su un agitatore magnetico Riempire la camera inferiore con un minimo di 2 1 litri di tampone Optional Prechill il buffer a Montare il gruppo superiore camera di compensazione nella camera tampone inferiore Utilizzare una mano ferma per evitare di disturbare i campioni Afferrare il montaggio nello stand di colata dalla camera tampone superiore e con attenzione abbassare nella camera tampone inferiore Controllare Finstallazione e regolare i livelli di buffer Camera superiore L elettrodo lungo la cresta camera superiore deve essere immerso per una profondita di circa 1 cm Questo livello richiede 450 600 ml di tampone quanto basta a coprire le costole camera superiore ma non abbastanza per contattare la spina a banana Camera Bassa La camera inferiore livello del buffer richiede un minimo di 2 1 litri ed un massimo di 2 8 litri di tampone sufficiente a coprire il filo sulla pinna elettrodo inferiore ma mantenendo un 1 5 cm di distanza dalla parte inferiore della camera tampone superiore a O Fig 7 Buffer livelli da camera Mettere il coperchio di sicurezza sull unita Collegare i cavi colorati ai jack di un alimentatore approvato Collegare il cavo rosso nel jack di uscita rosso e il filo nero nel jack di uscita nero Nella maggior parte dei sistemi il conduttore rosso che collegato all elettrodo di fondo l
38. ngere l iniziatore e cataliz zatore appena prima di versare il gel Pipettare la soluzione in un angolo del sandwich facendo attenzi one a non introdurre eventuali bolle d aria Vedi sotto per il livello della soluzione appropriata a seconda dell applicazione No stacking gel sistema continuo Riempire soluzione appena sotto il bordo superiore della piastra superiore Se le bolle sono in trappola rimuovere con una pipetta o una siringa Introdurre un pettine con una leggera angolazione in ogni sandwich facendo attenzione a non intrappolare bolle d aria sotto i denti Panino a pi strati Pipettare la soluzione in entrambi i panini riempiendo ciascuna allo stesso livello sotto il bordo dentellato Stacking gel Riempire soluzione di 3 4 cm sotto la parte superiore della lastra di vetro Questa altezza permette 1 cm di gel di impilamento al di sotto del pozzetti Versare il gel e applicare un overlay vedi punto 2 Dopo che il gel impostato la preparazione del gel di impila mento come descritto di seguito 2 D elettroforesi proteine del sistema discontinuo Riempire soluzione di monomero di circa 1 cm sotto la parte superiore della lastra di vetro per consen tire 4 5 mm per la striscia IPG o gel tubo e una guarnizione agarosio Un gel di impilamento richie dono spazio extra Sigillare la striscia IPG o gel tubo in posizione con agarosio sciolto in tampone di corsa Fare attenzione a non intrappolare eventuali bol
39. nt Organic solvents will cause irreparable damage to the unit Do not operate with buffer temperatures above the maximum specified technical specifications Overheating will cause irreparable damage to the unit T rke Tietoa Finnish Jos tata varusteita k ytet n tavassa ei m ritetty Hoefer Inc suojelu ehk isty varusteille saattaa olla avuton Tama valine suunnitellaan sisalaboratoriokayt lle vain Vain lis varusteet ja osat hyv ksyiv t tai toimitti Hoefer Inc oheen voi k ytt k ytt miselle valvoalle ja servicing t m tuote Vain k ytt k ytt j nnitett joka on CE merkitsi tai turvallisuus joka on todistanut aidoksi ohi joka on kansallisesti tunnustettnut testaaminen labo ratoriota Turvallisuuskansi t ytyy olla paikallaan ennen yhdist minen k yttoj nnitelyijyj kaytt jannit teeseen Kiert kaikki kaytt jannitevalvonnat ja irrottaa valtalyijyt ennen poistaminen turvallisuuskantta Kiert vain vesi tai 50 50 vesi ethylene glycol siin tapauksessa varustetun limm nvaihtimen piii l pi l yhdist limm nvaihdinta vesinapautuk seen eik j hdytysnestel hteeseen miss vesi paine on unregulated Pakkasneste eik orgaaninen liuotin v lineen osassa ei esitele Koskaan Orgaaniset liuottimet aiheuttavat korvaamattoman vahingon yksikk n Ei k yt puskuria yll olevia l mp tiloja enint n m ritetyill teknisill ta
40. nziali e set di clamp sono dimensionati in modo che il sandwich assemb lato pu essere facilmente allineato per creare la tenuta necessaria prima di lanciare il gel e poi eseguirlo Per ottenere risultati ottimali fare particolare attenzione ad allineare tutte le com ponenti in fase di montaggio panini bordi a sandwich sia superiore e inferiore deve essere allineato con le creste di guida del morsetto bar di pressione Fig 2 Sandwich di montaggio Ispezionare lastre di vetro per il nick Utilizzare solo le piastre unchipped per evitare perdite Suggerimento Usare la base di colata per tenere il panino durante allineamento Rimuovere la guarnizione lamellare dalla culla e invece di impostare il panino in posizione verticale su una superficie piana messo in culla casting Costruire il panino gel e inserirlo caster 0 Preparare il caster e morsetti Posizionare la livella a bolla nel centro caster e regolare i piedini di livellamento Allentare tutte le viti di serraggio e fare spazio per il panino facendo scorrere le piastre di pressione verso le viti a Costruisci ogni sandwich gel Per ogni sandwich scegliere tra due lastre di vetro perfettamente puliti unchipped e due distanziali Lay una piastra su una superficie piana porre le Mate Spacer guida distanziale posizionamento sulla piastra lato largo nella parte superiore della piastra inserire un distanziatore lungo ogni bordo e porre
41. o 2 2 mercaptoetanolo pH 6 8 10 ml 0 5 M Tris CI pH 6 8 Soln 3 0 125M 2 5 ml 10 SDS 0 35 M Soln 4 0 14 M 4 0 ml Glicerolo FW 92 09 20 vw 2 0 ml 2 mercaptoetanolo FW 78 13 2 viv 0 2 ml O ditiotreitolo DTT 0 2 mM 0 31 g FW 154 2 Blu di bromofenolo FW 691 9 0 03 mm 0 2 mg H20 deionizzata a 10 0 ml Dividere in aliquote di 1 0 ml e conservare a 40 C a 80 C Qs 6X Sample buffer di trattamento 0 35 M TrisCI il 10 SDS 30 glicerolo 9 3 DTT pH 6 8 10 ml 0 5 M Tris Cl pH 6 8 Soln 3 0 35 M 7 0 ml SDS FW 288 4 0 35 M 1 0 g Glicerolo FW 92 09 30 viv 3 0 ml DTT FW 154 2 0 6 M 0 93 g Blu di bromofenolo FW 691 9 0 175 mM 1 2 mg Dividere in aliquote di 1 0 ml e conservare a 70 C 8 0 025 M Tris 0 192 M glicina 0 1 SDS pH 8 3 Buffer elettroforesi 5 0 litri Tris FW 121 1 0 025M 151g Glycine FW 75 07 0 192M 72 08 SDS FW 288 4 3 5 mM 5 0 g H20 deionizzata a 5 0 litri Il pH di questo tampone di circa 8 3 Non regolare il pH Fino a 20 litri possono essere preparate e conservate per un massimo di 2 mesi 9 Soluzioni Coomassie macchia Coomassie soluzione macchia 0 025 Coomassie Blue R 250 40 di metanolo 7 di acido acetico 2 litri Coomassie Blue R 250 FW 826 0 3 mM 0 5 g Metanolo 40 viv 800 0 ml Mescolare fino alla dissoluzione Acido acetico glaciale 99 7 VN 140 0 ml H20 deionizzata a 2 0 litri Decolorazione soluzione che 40
42. oforesi unit funzionale e Descrizione Le Hoefer SE600 serie verticale lastra unita elettroforesi su gel SE600 SE640 e SE660 sono destinati ad elettroforesi proteine e acidi nucleici sotto comunemente usato denaturazione e non condizioni denaturanti Fino a 28 campioni pos sono essere confrontati su un gel singola lastra Le applicazioni includono proteine separazioni frazionamento acido nucleico e la separazione seconda dimensione di elettroforesi 2 D Prima dimensione di separazione di 2 D elettroforesi delle proteine deve essere eseguita su gel di pH immobilizzati gradiente Le strisce concentrati sono facilmente trasferiti al gel di seconda dimensione lastra per la separazione dimensioni Le lastre di gel di SE640 sono 18 cm di larghe zza e 8 cm di lunghezza Fino a quattro gel pu essere eseguito in una volta se i panini sono appaiati in club sandwich Specificazioni Gel dimensioni piastra Gel taglia Max potenza Max tensione di Max amperaggio di Max temperatura 18 x 8 cm L x A 14 x 8 cm Lx A 50 W 1000 V 500 mA 45 C Condizioni operative ambientali Uso interno Umidita fino a Altitudine fino a Categoria di installazione Grado di inquinamento Dimensioni L x A x P Certificazioni di prodotto 4 40 C 80 2000 m Il Il 32 x 22 5 x 14 cm EN 61010 1 UL 61010A 1 CSA C22 2 1010 1 Certificazione CE Questa dichiarazione di conformit valida solo per lo
43. olvere l intera gamma di dimensioni proteiche Versare un gel pi alto impilamento Per ottenere risultati ottimali permettono un impilamento gel altezza di 2 5 volte l altezza del campione nel pozzo Qualit del reagente Smaltire le soluzioni obsolete di acrilammide e usare solo il pi alto grado di acrilammide Preparazione del campione Durante la preparazione dei campioni evitare di utilizzare soluzioni con elevate concentrazioni saline e p27 problema possibile causa Fascia bassa Condizioni di risoluzione funzionamento rimedio Iniziare elettroforesi appena il campione viene caricato per impedire specie a basso peso molecolare da diffondere Effettuare la separazione in una posizione pi bassa corrente o tensione per ridurre riscaldamento Joule Qualita del reagente Utilizzare solo i reagenti di altissima qualita Poor impilamento Utilizzare solo gel che erano recentemente preparato Aggiungere un gel di impilamento o aumentare l altezza del gel di impilamento Preparare la Risoluzione gel superficie prima risciacquo con stacking gel monomero prima di ver sare il gel di impilamento per garantire la continuita tra i gel Controllare i valori di pH delle risoluzione e stacking gel soluzioni Non titolare di ritorno buffer Gel polimerizzazione incompleta Lasciare gel per polimerizzare completamente Preparazione del campione e p28 Conservare campione sul ghiaccio prima c
44. onieren Die Uberhitzung wird nicht wiedergutzumachenden Schaden der Einheit verursachen Viktig Informasjon Norwegian Hvis dette utstyret blir brukt i en mate ikke spesi fisert ved Hoefer Inc beskyttelsen som ha blitt git av utstyret kan bli svekket Dette instrumentet er utformet for innendars labo ratoriumbruk bare Bare tilbehar og deler godkjente eller forsynte ved piv Hoefer Inc kan bli brukt for drive vedlikeholde og betjene dette produktet bruker Bare en kraftforsyning som er CE merket eller sikkerhet som ha blitt sertifisert av et som nasjonalt ha blitt anerkjent prover laboratorium Sikkerheten lokket m vaere p plass far forbinding kraftforsyningene blyene til en kraftforsyning Vender all kraftforsyningsstyring av og frakopler kreftene blyene for fjerning sikkerheten lokket Sirkulerer bare vann eller 50 50 vann ethylene glykol gjennom oppvarmingen veksleren i s fall utstyrer Ikke forbind oppvarmingen veksleren til en vanntapp eller noe kjalemiddelkilde hvor vannet trykket er unregulated Introduserer Aldri antifreeze eller noe organisk lasemiddel inn i noe del av instrumentet Organi ske losemiddler vil for rsake irreparabel skade p enheten Driver med buffertemperaturer over maksimum ikke spesifiserte teknisk spesifikasjoner A overop pheting vil for rsake irreparabel skade p enheten Wazne Informacje Polish Jezeli ten sprzet jest wykorzystywany w
45. ono essersi verificati mentre l unit era in transito Se una parte risulta danneggiata contattate immediatamente Essere sicuri di mantenere tutto il materiale di imballaggio per richieste di risarcimento danni o per utilizzare qualora risultasse necessario restituire l unit Buffer di camera inferiore La camera di buffer inferiore in acrilico trasparente che consente di tenere traccia visiva del progresso elettroforesi La camera chimicamente resistente ai comuni buffer di elettroforesi ma non ai solventi organici o acidi forti e alcali Temperature superiori a 45 C pu causare la camera a deformarsi Buffer di camera superiore La camera tampone superiore stampato polisulfone che chimicamente resistente alle comuni buffer elettroforetici ma non ai solventi organici o acidi forti e alcali L elettrodo superiore catodo corre lungo il crinale centro e termina in una banana L elettrodo inferiore anodo corre lungo il bordo della pinna elettrodo sul lato inferiore e termina in una presa seconda banana Coperchio di sicurezza La spina a banana sulla camera tampone superiore al capolinea del filo catodo si collega al cavo nero La spina a banana sulla pinna elettrodo inferiore al capolinea del filo anodico si collega al cavo rosso II 4 mm avvolta color coded spina cavi in colori codificati jack nella sezione di alimentazione Installare sempre il coperchio di sicurezza prima dell uso Lastre di vetro
46. oor de hitte exchanger zo ja uitrust Verbind de hitte exchanger naar een waterkraan of koelmiddelbron niet waar de waterdruk niet geregulariseerd is Stel Nooit antivriesmiddel of organische oplosmid delen in deel van het instrument voor Organische oplosmiddelen zullen onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Bedien niet met buffertemperaturen boven het maximum specificeerde technische specificaties Oververhittend zal onherstelbare schade aan de eenheid veroorzaken Important Information English If this equipment is used in a manner not speci fied by Hoefer Inc the protection provided by the equipment may be impaired This instrument is designed for indoor laboratory use only Only accessories and parts approved or supplied by Hoefer Inc may be used for operating main taining and servicing this product Only use a power supply that is CE marked or safety certified by a nationally recognized testing laboratory The safety lid must be in place before connecting the power supply leads to a power supply Turn all power supply controls off and disconnect the power leads before removing the safety lid Circulate only water or 50 50 water ethylene glycol through the heat exchanger if so equipped Do not connect the heat exchanger to a water tap or any coolant source where the water pressure is unregulated Never introduce antifreeze or any organic solvent into any part of the instrume
47. protecc o forne cida pelo equipamento pode ser comprometida Este instrumento projectado para uso de interior de laborat rio s S acess rios e partes aprovaram ou forneceu por Hoefer Inc pode ser usada para operar manter e servicing este produto S usa um estoque de poder que CE marcou ou seguranca registrada por um nacionalmente recon hecido testando laborat rio A tampa de seguran a deve estar em lugar antes de ligar o estoque de poder leva a um estoque de poder Desliga todos controlos de estoque de poder e desconecta os chumbos de poder antes de retirar a tampa de seguranca Circulam s agua ou 50 50 glicol de gua ethylene pelo exchanger de calor se for assim equiparam N o ligue o exchanger de calor a uma torneira de gua nem qualquer fonte de refrigerante onde a press o de gua n o regulado Nunca introduz anticongelante nem qualquer org nico solvente em qualquer parte do instru mento Org nico solvente causar agress o irrepar vel unidade Nao opera com temperaturas de buffer acima do m ximo especificou especificac es t cnicas Super aquecer causar agress o irrepar vel unidade pv Informaci n Importante Spanish Si este equipo es utilizado en una manera no espe cificado por Hoefer Inc la protecci n proporcio nado por el eguipo puede ser da ada Este instrumento es dise ado para el uso interior del laboratorio s lo S lo
48. re volumi uguali di basso e soluzioni ad elevata di acrilam mide nei 2 rami del produttore di gradiente Meno APS viene aggiunto per estendere il tempo di polimerizzazione e ancor meno viene aggi unto alla soluzione superiore T per permettere polimerizzazione avvenga dall alto verso il basso Nella nostra esperienza con le concentrazioni nell esempio gradiente 10 20 di seguito gel pu essere versata ad una portata di 5 10 ml min Gradiente lineare gel per 100 ml di soluzione 10 T 20 T Acrylamide stock Soluzione 1 33 30 ml 66 70 ml Saccharose 15 00 g 1 5 M TrisCl pH 8 8 Soln 2 25 00 ml 25 00 ml 10 SDS Soluzione 4 1 00 ml 1 00 ml H20 deionizzata a 100 00 ml a 100 00 ml 10 APS Soluzione 5 0 300 ml 0 060 ml TEMED 0 036 ml 0 036 ml e p35 e p36 Appendice B Bibliografia Generale Gallagher S R and Smith J A Electrophoretic separation of proteins In Current Protocols in Molecular Biology Ausubel E A eds OSC 10 2 1 10 2 21 1991 Hames B D and Rickwood D Gel Electropboresis of Proteins A Practical Approach Second edition City IRL Press 1990 Sambrook J Fritsch E F and Maniatis T Standard Form aldebyde Protocol Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor NY 1990 Sasse J and Gallagher S R Staining proteins in gels Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A et al eds OSC 10 6 1
49. smennyksilla Ylikuumen eminen aiheuttaa korvaamattoman vahingon yksikk n Information Importante French Si cet quipement est utilis dans une mani re pas sp cifi par Hoefer Inc la protection fourni par l quipement pourrait tre diminu e Cet instrument est con u pour l usage de labora toire int rieur seulement Seulement les accessoires et les parties ont approuv ou ont fourni par Hoefer Inc pourrait tre utilis pour fonctionner maintenir et entrete nir ce produit utilise Seulement une alimentation qui est CET a marqu ou la s curit certifi par un nationale ment reconnu essayant le laboratoire Le couvercle de s curit doit tre a sa place avant connecter l alimentation mene a une alimentation Tourner tous contr les d alimentation de et d brancher les avances de pouvoir avant enlever le couvercle de s curit Circuler seulement de l eau ou 50 50 glycol d eau thyl ne par l exchanger de chaleur si si quip Ne pas connecter l lexchanger de chaleur a un robinet d eau ou a la source d agent de refroidissement o la pression d eau est non r gul e Ne Jamais introduire d antigel ou du dissolvant organigue dans n importe quelle partie de instrument Les dissolvants organigues causeront des dommages irr parables a l unit Ne pas fonctionner avec les temp ratures de tampon au dessus du maximum a sp cifi des sp cifications techniques La surchauffe c
50. spos b nie okreslone przez Hoefer Inc do ochrony przewid zianej przez urz dzenie mo e zosta obni ony Instrument ten jest przeznaczony do u ytku w laboratoriach kryty tylko Tylko akcesori w i cz ci zatwierdzone lub dostarc zone przez Hoefer Inc mog by wykorzystane do eksploatacji utrzymania i obs ugi tego produktu korzysta jedynie zasilacza e jest nosz ce ozna kowanie CE lub bezpiecze stwa uwierzytelnione przez uznane na poziomie krajowym laboratorium badawcze Bezpiecze stwo lid musi by w miejsce przed pod czeniem zasilania prowadzi do zasilania Za wszystkie r d a zasilania urz dzenia steruj ce off i od czy moc prowadzi przed odbiorem bezpiecze stwa lid Kr tylko wody lub wody 50 50 ethylene glycol wymiennik ciep a poprzez je li tak wyposa one Nie nale y po czy wymiennik ciep a woda z kranu lub jakimkolwiek ch odziwo r d a je eli ci nienie wody jest nieuregulowanych Nigdy nie wprowadza rozpuszczalnika organ icznego przeciw zamarzaniu lub jakichkolwiek na dowoln cz dokumentu Rozpuszczalniki organiczne spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Nie dzia aj w buforze temperatury powy ej maksymalnego okre lone specyfikacje techniczne Przegrzania spowoduje nieodwracalne szkody dla jednostki Informac es Importantes Portuguese Se este equipamento usado numa maneira nao especificada por Hoefer Inc que a
51. ssere ordinati separatamente Distanziali determinare lo spessore del gel e sono disponibili in tre spessori 0 75 1 0 e 1 5 mm Spacer Mate spacer guida di posizionamento Allinea distanziali per il montaggio a sandwich Pettini Possono essere ordinati separatamente Pettini sono disponibili in dimensioni che formano 10 12 15 20 o 28 pozzi e sono disponibili in tre spessori 0 75 1 0 e 1 5 mm Preparativa pettini comprendono 1 o 2 pozzetti di riferimento oltre al singolo grande ben preparativa Tutti pettini preparativa e 10 12 15 e 20 pozzetti e forma pettini che sono il 25 mm di profondita I pozzi pettine di 28 e forme che sono solo 15 mm di profondita in modo che i pozzi non collassano quando il pettine viene rimosso Il volume del campione detenuta da ogni pozzetto dipende dallo spessore gel ben profondit e il numero di pozzetti per pettine Tabella 1 a pagina 16 liste volumi di campione di ogni bene per tutti i pettini Wonder Wedge piastra strumento di separazione Utilizzato per smontare panini e gel per misurare spessore del distanziatore e pettine Istruzioni per Fuso Gel procedure di fusione e l elettroforesi seguire Sono incluse istruzioni per gel di poliacrilam mide utilizzata con sistemi tampone continuo o discontinuo e gel gradiente I gel richiesti per la SE640 deve essere auto cast Il Gel Caster Dual incluso detiene due panini gel Preparare il panino gel Lastre di vetro dista
52. uale utente Italiano Hoefer SE640 Wide mini dual gel per I elettroforesi mu SE640 IM Italian Rev B0 07 12 Afro e fe r Indice Informazioni Importanti aaa eee ii Rifiuti di apparecchiature elettriche ed elettroniche RAEE casita td vii Gel elettroforesi unit funzionale e Descrizione 1 SPECIFICAZIONI sek P sees eege iena 2 Disimballaggio e Inventarlo eee 4 Istruzioni el TE WEE A EE Elei MIdE ica ia 11 Preparazione del campione e Loading 15 Lassemblaggio finale aaa aaaaaa ssania 17 Separazione del campione oooocccccnncnnncnnncnnnnnncnnnns 20 Dopo elettroforesi 2244254 sa zzas rina iaia 22 Cura MANUTENZIONE x ssa ERR EEEEEEAEERSRESEE EE EEER 23 Informazioni sul servizio clienti 1 24 Appendice A Laemmli sistema gel 29 el EE 31 GElLICEtIE iii 34 Appendice B Bibliografia 36 Informazioni Importanti Italiano Se quest apparecchiatura usata in un modo specificato da Hoefer Inc la protezione fornito dall apparecchiatura potrebbe essere indebolita Questo strumento disegnato per l uso di labora torio interno solo Solo gli accessori e le parti hanno approvato o hanno fornito da Hoefer Inc potrebbe essere usato per operare per mantenere e per revisionare questo prodotto usa Solo un alimentatore che CE ha marcato o la sicurezza certificato da un nazion
53. ular weight determinators by dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis J Biol Chem 224 4406 4412 1969 Elettroforesi bidimensionale Adams L D and Gallagher S R Two Dimensional Gel Elec trophoresis Using the O Farrell System Current Protocols in Molecular Biology Ausubel F A et al eds OSC pp 10 4 1 10 4 13 1992 Anderson N G Anderson N L and Tollaksen S L Proteins of human urine I Concentration and analysis by two dimensional electrophoresis Clin Chem Jul 25 7 1199 2210 1979 Anderson Leigh and Anderson Norman G High resolution two dimensional electrophoresis of human plasma proteins Proc Natl Acad Sci USA 74 5421 5425 1977 Anderson L Two Dimensional Electrophoresis Operation of the ISO DALT System Second Edition Large Scale Biology Press 1991 Bravo R Schafer R Willecke K MacDonald Bravo H Fey S J and Celis J E More than one third of the discern ible mouse polypeptides are not expressed in a Chinese hamster mouse embryo fibroblast hybrid that retains all mouse chromosomes Proc Natl Acad Sci USA Apr 79 7 2281 2285 1982 Hurkman W J and Tanaka C K Solubilization of Plant Membrane Proteins for Analysis by Two Dimensional Gel Electrophoresis Plant Physiology 81 802 806 1986 Mets L J and Bogorad L Two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis an improved method for ribosomal proteins Anal Biochem J
54. zzata Conservare a 4 C al riparo dalla luce 30 w v 0 8 wiv N N Methylenebisacrylamide 2 1 5 M TrisCI pH 8 8 4X tampone Resolving gel 1 litro Tris FW 121 1 4 NHCI H20 deionizzata 1 5M 3 0 5 M TrisCI pH 6 8 4X tampone gel impilabile 500 ml Tris FW 121 1 4 NHCI H20 deionizzata 0 5 M 4 10 soluzione di SDS 100 ml Dodecilsolfato di sodio SDS FW 288 4 H20 deionizzata 0 35 M 5 10 APS Iniziatore 1 ml Ammonio persolfato 0 44 mm APS FW 228 2 H20 deionizzata 60 g 1 6g a 200 0 ml 181 6 g a pH 8 8 a 1000 ml 30 3 g a pH 6 8 a 500 ml 10 0 g a 100 ml 0 1g a 1 0 ml APS Fresh gracchia quando si aggiunge acqua Se il vostro non sostituirlo con il brodo fresco Preparare al momento dell uso e p31 e p32 6 0 375 M TrisCI 0 1 SDS pH 8 8 Risoluzione gel overlay 100 ml 1 5 M Tris Cl pH 8 8 Soln 2 0 375M 25 0 ml 10 SDS Soln 4 3 5 mM 1 0 ml H20 deionizzata a 100 0 ml 20 Saturo d acqua n butanolo Agitare n butanolo e H20 deionizzata in un imbuto separatore Rimuovere il acquosa inferiore di fase Ripetere questa pro cedura diverse volte Utilizzare la fase superiore Hot Se una sovrapposizione interferisce con il protocollo preferito isolare il gel dall ossigeno atmosferico ponendo un pettine vuoto o risolvere gel precedente sul gel 7 2X Sample buffer di trattamento 0 125 M TrisCI 4 SDS 20 glicerol
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