QUANTA FlashTM DGP IgG
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1. El QUANTA Flash DGP IgG es una prueba que ofrece un rendimiento mejorado para la detecci n de anticuerpos IgG contra un p ptido sint tico desamidado selectivamente derivado de la prote na del trigo gliadina y que permite la detecci n de la enfermedad cel aca incluso si coexiste una deficiencia de IgA Principios del procedimiento Se recubren con p ptido de gliadina desamidado sint tico part culas de l tex paramagn ticas que se guardan en el cartucho de reactivos en unas condiciones que mantienen el ant geno en su estado reactivo Cuando el cartucho del ensayo est preparado para el primer uso se invierte varias veces para mezclar completamente los reactivos A continuaci n se coloca el cartucho de reactivos en el instrumento BIO FLASH Mediante el instrumento se diluye en un factor de 1 17 una muestra de suero del paciente con l quido de lavado del sistema a adido a una cubeta desechable de pl stico Se combinan en una segunda cubeta y se mezclan peque as cantidades del suero de paciente diluido las part culas de DGP y el tamp n de an lisis Esta cubeta se incuba a 37 C y despu s las part culas se magnetizan y se lavan varias veces A continuaci n el anticuerpo conjugado con isoluminol se a ade a la cubeta y se incuba a 37 C De nuevo las part culas se magnetizan y se lavan repetidamente El conjugado de isoluminol produce una reacci n luminiscente cuando se a aden a la cubeta los reactivos iniciadores2. Trier JS Celiac Sprue New England Journal of Medicine 1991 325 1709 1719 Troncone R Ferguson A Antigliadin antibodies J Pediatr Gastroenterol Nutr 1991 12 150 158 Husby S Koletzko S Korponay Szab IR Mearin ML Phillips A Shamir R Troncone R Giersiepen K Branski D Catassi C Lelgeman M Maki M Ribes Koninckx C Ventura A Zimmer KP ESPGHAN Working Group on Coeliac Disease Diagnosis ESPGHAN Gastroenterology Committee European Society for Pediatric Gastroenterology Hepatology and Nutrition European Society for Pediatric Gastroenterology Hepatology and Nutrition guidelines for the diagnosis of coeliac disease J Pediatr Gastroenterol Nutr 2012 54 136 60 McMillan SA Haughton Du et al Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy BMJ 1991 303 1163 1165 Sugai E Moreno ML et al Celiac disease serology in patients with different pre test probabilities Is biopsy avoidable World J Gastroenterol 2010 16 3144 52 Burgin Wolff A Gaze H et al Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease Arch Dis Child 1991 66 941 947 Osman AA et al B Cell epitopes of gliadin Clin Exp Immunol 2000 121 248 254 Aleanzi M et al Celiac disease Antibody recognition against native and selectively deamidaion gliadin peptides Clinical Chemistry 2001 47 2023 2028 Schwertz E et al Serologic assay based on gliadi
3. La luz generada por la reacci n se mide como unidades relativas de luz RLU mediante el sistema ptico del BIO FLASH El n mero de RLU es proporcional a la cantidad de conjugado de isoluminol ligado que a su vez es proporcional a la cantidad de anticuerpos anti DGP unidos al DGP de las part culas El ensayo QUANTA Flash DGP IgG utiliza una curva maestra predefinida espec fica para cada lote que se carga en el instrumento mediante el c digo de barras del cartucho de reactivos A partir de los resultados obtenidos mediante el an lisis de dos calibradores se genera una curva de trabajo espec fica para el instrumento que el software utiliza para calcular las unidades de quimioluminiscencia CU bas ndose en el valor de RLU obtenido para cada muestra Reactivos 1 El cartucho de reactivos del QUANTA Flash IgG contiene los siguientes reactivos para 50 determinaciones a Part culas paramagn ticas recubiertas de DGP en tamp n con estabilizantes de prote nas y conservante b Tamp n del ensayo de color rosa que contiene soluci n salina tamponada con Tris Tween 20 estabilizantes de prote nas y conservantes C IgG trazadora anticuerpos anti lgG humana etiquetados con isoluminol en tamp n con estabilizantes de prote nas y conservante Advertencias 1 El tampon del ensayo contiene una sustancia quimica cloranfenicol al 0 02 que esta clasificada como cancerigena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como c
4. Adem s se han realizado estudios de precisi n en tres laboratorios de an lisis diferentes en INOVA Diagnostics Inc y en dos laboratorios externos para evaluar la reproducibilidad En el laboratorio de INOVA se han incluido como variables dos lotes de reactivos dos lotes de calibradores y dos operadores La reproducibilidad total se ha calculado seg n una precisi n intraensayo interensayo interlote entre lotes de calibrador entre operadores e interlaboratorio Entre lotes Entre lotes Entre Inter Intraensayo Interensayo de x Total de reactivo calibrador operadores laboratorio Muestra Media N mero de DE cV DE cV DE cV DE cV DE cV DE cV DE cy CU r plicas CU CU CU CU CU CU CU Muestra 1 13 4 80 03 2 6 08 59 05 40 10 7 5 05 36 1 0 8 1 1 8 13 5 Muestra 2 21 0 80 05 23 12 55 07 35 15 7 3 08 4 0 1 5 7 6 2 7 12 9 Muestra 3 118 9 80 28 24 59 49 28 23 28 23 4 7 40 94 81 130 10 9 Rango de medicion analitica El l mite de detecci n inferior de este ensayo determinado seg n el documento EP17 A del CLSI es 469 2 RLU un valor m s peque o que el m nimo del rango de medici n anal tica 2 8 CU El AMR que va de 2 8 CU a 1 936 7 CU es lineal Se ha realizado un estudio de linealidad conforme al documento EP6 A del CLSI utilizando
5. Control negativo del QUANTA Flash DGP IgG Dos 2 tubos etiquetados con c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos IgG humanos anti DGP en tamp n con estabilizantes de prote nas y conservantes Control positivo del QUANTA Flash DGP IgG Dos 2 tubos etiquetados con c digo de barras que contienen 0 5 mL de reactivo listo para usar Los controles contienen anticuerpos IgG humanos anti DGP en tamp n con estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 Los controles contienen una sustancia qu mica cloranfenicol al 0 02 que est clasificada como cancerigena por el Estado de California Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa que puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza pilas de lavado para eliminar los reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los controles para este producto ha sido analizado y ha dado un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos contra el VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia d
6. tap n de perforaci n parte gris aplique presi n a la parte superior del cartucho de reactivos hasta que descienda y alcance un tope Las pesta as deben quedar ocultas NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO 4 Coloque con cuidado el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carro de reactivos del instrumento BIO FLASH Calibraci n del ensayo 1 Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre 2 Consulte el apartado QUANTA Flash DGP IgG Calibrators 701171 del presente documento para obtener instrucciones de uso detalladas sobre c mo calibrar el cartucho de reactivos 3 Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibraci n estar preparado para utilizarse Programacion y analisis de las muestras 1 Pulse el bot n Worklist de la parte superior de la pantalla y seleccione la pesta a Racks de la parte inferior 2 Seleccione la gradilla de muestras que se utilizar marc ndola en la pantalla o escaneando su c digo de barras con el lector manual de c digos de barras Escanee o escriba el nombre de la muestra indique el tipo de muestra elija el tipo de recipiente tubo copa y seleccione DGP IgG en el panel del ensayo Repita estos pasos para todas las muestras 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y coloque la grad
7. 1986 15 464 473 Jaskowski TD Donaldson MR et al Novel screening assay performance in pediatric celiac disease and adult dermatitis herpetiformis JPGN 2010 51 19 23 Fasano A Berti et al Prevalence of celiac disease in at risk and not at risk groups in the United States a large multicenter study Arch Intern Med 2003 163 286 92 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories BMBL 5 edici n Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 2009 0 mbolos utilizados Producto sanitario para diagn stico In Vitro Consulte las instrucciones de uso L mites de temperatura No reutilizar Riesgos biol gicos O i EM ERS Os OE C digo del lote N mero de cat logo Caducidad Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para lt n gt an lisis ONTROL Control positivo oO e o ONTR Control negativo CAL Calibrador 1 CAL 2 Calibrador 2 Caja de cart n reciclable E gt Mantener en esta posici n QUANTA Flash es una marca comercial registrada de INOVA Diagnostics Inc BIO FLASH es una marca comercial registrada de Biokit SA O 2013 Fabricado por INOVA Diagnostics Inc 9900 Old Grove Road San Diego CA 92131 Estados Unidos de Am rica Servicio t cnico solo para EE UU y Canada 877 829 4745 Servicio t cnico fuera de EE UU 1 858 805 7950 support inovadx com Representante autorizado en la UE Medical Technolo
8. a un paciente con DH Sensibilidad y especificidad clinicas El estudio de validaci n cl nica comprendi 62 muestras celiacas de la biblioteca de sueros de INOVA incluidas 7 muestras con deficiencia selectiva de IgA 87 controles sin celiaqu a y 23 muestras de pacientes con DH Un estudio externo independiente incluy 102 muestras cel acas incluidas 9 muestras con deficiencia selectiva de IgA 151 muestras de personas con s ntomas que buscaron atenci n m dica en las que se excluy la celiaqu a tras el examen f sico y an lisis diagn sticos y finalmente 98 controles con celiaqu a Todas las muestras se analizaron con el QUANTA Flash DGP IgG Los resultados se han procesado para calcular la sensibilidad y la especificidad correspondientes a la celiaqu a CD n 148 la celiaqu a acompa ada de deficiencia selectiva de IgA n 16 y la DH n 23 por separado Sensibilidad y especificidad cl nicas del ensayo QUANTA Flash DGP IgG para la celiaqu a Diagn stico Sin celiaqu a Positivo Sensibilidad 89 2 83 0 93 7 An lisis confianza del 95 Celiaqu a QUANTA Flash Negativo Especificidad 97 3 95 0 98 8 DGP IgG g p i Total Dos pacientes ten an gastritis por H pylori dos m s sufr an hepatitis v rica y uno presentaba artritis reumatoide Las dem s muestras proceden de personas aparentemente sanas y dos de ellas han dado positivo en el EIA DGP IgG De los 13 paci
9. positivos y un positivo d bil Comparaci n de m todos con un instrumento destinado al mismo fin Las muestras usadas en la comparaci n de m todos fueron las de los estudios de validaci n cl nica pacientes con celiaqu a sin celiaqu a y con DH que se encontraban dentro del rango de medici n anal tica del ensayo Dichas muestras se analizaron mediante el QUANTA Flash DGP IgG y un ELISA destinado al mismo fin Comparaci n de m todos ELISA DGP IgG Porcentaje de concordancia N 241 Positivo Negativo Total confianza del 95 Positivo Conc positiva 95 1 88 0 98 7 Negativo Conc negativa 83 6 77 0 89 0 QUANTA Flash DGP IgG CIA Total Conc total 87 6 82 7 91 4 Trece muestras son de pacientes celiacos tres de ellos siguen una dieta sin gluten Una muestra procede de un paciente que se sospecha que es cel aco dicho paciente ha sido positivo en cuanto a la IgA anti DGP Dos muestras proceden de pacientes con gastritis por H pylori dos son de pacientes con hepatitis v rica y una corresponde a un paciente con artritis reumatoide Un paciente con bajo recuento hem tico ha sido positivo en cuanto a la IgG anti h tTG Las 6 muestras restantes proceden de personas aparentemente sanas una de ellas ten a s ntomas gastrointestinales en el momento de la recogida y dos eran positivas en cuanto a la IgA anti h tTG Tres muestras pertenecen a pacientes cel acos y una corresponde
10. y haga clic en Add Por ltimo introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes 1 Antes de utilizar un nuevo lote de los controles QUANTA Flash DGP IgG por primera vez introduzca en el software el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Cirl M v Seleccione QC Ctrl F2 Marque el ensayo DGP_lgG en la columna de la izquierda A continuaci n seleccione el material de control apropiado en la derecha DGPGN para el control negativo o bien DGPGP para el control positivo Haga clic en el bot n New QC Lot Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote Introduzca la informaci n de esta hoja de datos en el software Dicha informaci n debe comprender el n mero de lote la caducidad la dosis objetivo y la DE objetivo Si es necesario haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir compruebe que est marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo DGP_lgG de la lista y haga clic en Add Haga clic en Save Realice este proceso para ambos controles Se recomienda analizar los controles del QUANTA Flash DGP IgG una vez cada dia en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n n
11. 02 que est clasificada como cancer gena por el Estado de California 2 Se utiliza azida s dica como conservante La azida s dica es una sustancia venenosa que puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza pilas de lavado para eliminar los reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Todo el material de origen humano usado en la preparaci n de los calibradores para este producto ha sido analizado y ha producido un resultado negativo con respecto a la presencia de anticuerpos frente al VIH el HBsAg y el VHC seg n m todos aprobados por la FDA Sin embargo ning n m todo de an lisis puede ofrecer plenas garant as de la ausencia del VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los calibradores QUANTA Flash DGP IgG deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso 4 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 5 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Los calibradores QUANTA Flash DGP IgG deben utilizarse con el
12. 6 muestras de suero con diferentes concentraciones de IgG anti DGP Todas las 6 muestras presentaron linealidad de diluci n individualmente y los datos combinados generaron los resultados siguientes con regresi n lineal Intervalo Pendiente Intersecci n en Y a Muestra anal tico CU IC del 95 IC del 95 i Todas las z muestras De 1 9 a 2 565 4 1 03 de 1 02 a 1 04 4 78 de 4 99 a 14 54 1 00 Las muestras positivas con resultados superiores al rango de medici n anal tica no presentaron efecto de gancho hasta 4 323 7 CU en el ensayo DGP IgG Interferencia y reactividad cruzada No se ha detectado interferencia con una concentraci n de hemoglobina de hasta 200 mg dL de triglic ridos de hasta 1 000 mg dL de colesterol de hasta 224 3 mg dL de bilirrubina de hasta 10 mg dL y de IgM anti RF de hasta 500 Ul mL Se han analizado 185 muestras de pacientes con diversas enfermedades autoinmunes e infecciosas para evaluar la reactividad cruzada Dos de las 31 muestras con hepatitis virica dos de las 17 con infecci n por H pylori y una de las 37 con artritis reumatoide dieron positivo en el CIA DGP IgG En conjunto cinco de las 185 muestras 3 fueron positivas lo que indica la ausencia de reactividad cruzada QUANTA Flash DGP IgG 701171 Calibrators Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los calibradores QUANTA Flash DGP IgG est n destinados a utilizarse con el inmunoensayo por quimiolumi
13. Materiales suministrados 1 Cartucho de reactivos QUANTA Flash DGP IgG Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO FLASH con ordenador para manejarlo L quido de lavado del sistema BIO FLASH n mero de componente 3000 8205 Iniciadores BIO FLASH n mero de componente 3000 8204 Cubetas BIO FLASH n mero de componente 3000 8206 Calibradores QUANTA Flash DGP IgG n mero de componente 701171 Controles QUANTA Flash DGP IgG n mero de componente 701172 Uso del analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH 1 Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de uso detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Para obtener m s informaci n o solucionar problemas relativos a este ensayo p ngase en contacto con el servicio t cnico de INOVA Diagnostics Inc en la direcci n o n mero de tel fono indicados al final de estas instrucciones de uso Para vaciar el recipiente de residuos s lidos abra el caj n de residuos Retire el recipiente de residuos s lidos y desh gase apropiadamente de las cubetas usadas Vuelva a colocar el recipiente de residuos s lidos cierre el caj n de residuos y haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Para sustituir los iniciadores haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 de la parte superior derecha a En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Triggers s
14. QUANTA Flash DGP IgG 701173 Reagents Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto El QUANTA Flash DGP IgG es un inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA para la determinaci n semicuantitativa de anticuerpos IgG anti DGP p ptido de gliadina desamidado en suero humano La presencia de anticuerpos IgG anti DGP junto con datos cl nicos y otras pruebas de laboratorio puede ayudar a diagnosticar la celiaquia tanto en pacientes con suficiente IgA como en pacientes con deficiencia de IgA as como la dermatitis herpetiforme Resumen y explicaci n de la prueba La celiaqu a es una enteropat a por sensibilidad al gluten caracterizada por la inflamaci n y un t pico aplanamiento histol gico de la mucosa intestinal que provoca un s ndrome de malabsorci n La etiolog a exacta de la celiaqu a es a n desconocida pero la gliadina la fracci n soluble en alcohol del gluten del trigo es claramente el agente t xico Originalmente se utilizaban m ltiples biopsias intestinales para diagnosticar la enfermedad cel aca y los trastornos relacionados M s recientemente la Sociedad Europea de Gastroenterolog a Hepatolog a y Nutrici n Pedi trica ESPGHAN y varios estudios publicados han recomendado el uso de marcadores serol gicos como los anticuerpos anti gliadina anti DGP y anti endomisio EMA con el fin de reducir el n mero de biopsias intestinales necesarias para realizar un diagn stico Recientes investigaciones han rev
15. acional y local 15 Cada control debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de los instrumentos Destape los tubos de ambos controles y col quelos en una gradilla de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en el carrusel de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del control e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de uso detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la medici n de anticuerpos IgG anti DGP p ptido de gliadina desamidado Limitaciones Estos controles est n dise ados para 15 usos La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que pueden marcarse para realizar un seguimiento del n mero de usos El tiempo total durante el que los tubos del control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas Si los controles cargados en el instrumento se mantienen destapados durante m s tiempo deben desecharse Bibliografia 1 2 3
16. dad tiroidea autoinmunitaria 22 22 0 0 Pacientes con s ntomas gastrointestinales 11 11 0 0 Diabetes mellitus tipo 1 14 14 0 0 Artritis reumatoide 37 36 1 3 Otras enfermedades infecciosas VIH s filis 10 10 0 0 Total 185 180 5 3 Resumen de los valores de sensibilidad y especificidad cl nicas para la celiaqu a seg n grupos de edad Grupo de edad DGP IgG Sensibilidad Especificidad 1 mes 2 a os 66 7 94 6 2 a os 12 a os 95 6 96 1 12 21 a os 75 0 100 0 gt 21 a os 89 4 97 8 lt 21 a os total 88 9 96 4 Total 89 2 97 3 Precisi n y reproducibilidad La precisi n del ensayo QUANTA Flash DGP IgG se ha evaluado en 8 muestras que conten an varias concentraciones de anticuerpos IgG anti DGP de acuerdo con el documento EP5 A2 del CLSI Los datos obtenidos se resumen a continuaci n Intraensayo Interensayo Interd a Total Muestra N mero de Media DE CV DE CV DE CV DE r plicas CU CU CU CU CU 1 80 5 8 0 2 3 1 0 1 2 5 0 1 2 0 0 3 4 5 2 80 16 8 0 5 3 0 0 1 0 5 0 2 1 5 0 6 3 3 3 80 20 7 0 5 2 5 0 3 1 3 0 5 2 2 0 7 3 6 4 80 24 6 0 5 1 9 0 5 1 8 0 4 1 5 0 7 3 0 5 80 85 1 1 9 2 2 0 8 0 9 2 5 2 9 3 2 3 8 6 80 411 6 7 7 1 9 6 8 1 6 9 4 2 3 13 9 3 4 7 80 791 0 24 3 3 1 16 2 2 0 5 9 0 7 29 8 3 8 8 80 1 781 4 52 1 2 9 27 9 1 6 48 3 2 7 76 3 4 3
17. el VIH el VHB el VHC u otros agentes infecciosos Por ello los controles QUANTA Flash DGP IgG deben manipularse como si se tratara de material potencialmente infeccioso Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro Los controles QUANTA Flash DGP IgG deben utilizarse con el ensayo QUANTA Flash DGP IgG No transfiera los reactivos de los controles a tubos secundarios El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para identificar al control Cada tubo de control una vez abierto es valido para 15 usos como maximo y en cada uso puede permanecer una media de 10 minutos cargado en el instrumento hasta un total de 2 5 horas Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de conservaci n 1 Guarde los controles no abiertos entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables
18. elado que los anticuerpos de los pacientes cel acos se unen a un n mero muy peque o de ep topos espec ficos de la mol cula de gliadina que se han desamidado de forma selectiva Se considera que la desamidaci n est provocada por la enzima asociada a la enfermedad cel aca la transglutaminasa tisular A partir de las anteriores observaciones se han desarrollado an lisis que utilizan p ptidos de gliadina desamidados espec ficos Estos ensayos consiguen una mayor exactitud en el diagn stico de la enfermedad cel aca que los an lisis de anti gliadina habituales Una estrategia anal tica sensible para detectar personas con enfermedad cel aca en poblaciones de riesgo comprende la determinaci n de anticuerpos IgG e IgA contra p ptidos de gliadina desamidados ya que una proporci n considerable de los pacientes cel acos presentan deficiencia de IgA Varios estudios han demostrado la elevada utilidad cl nica de esta estrategia de an lisis 91914 La dermatitis herpetiforme DH es una enfermedad cr nica que causa la aparici n de ampollas en la piel La mayor a de los pacientes con DH presentan una sensibilidad al gluten y una atrofia de las vellosidades yeyunales id ntica a la de los cel acos y una dieta estricta sin gluten mejora tanto las lesiones intestinales como las cut neas Sin embargo un estudio ha revelado que los anticuerpos anti DGP son m s habituales que los anticuerpos anti tTG en los pacientes con DH
19. ensayo QUANTA Flash DGP IgG No transfiera los reactivos de los calibradores a tubos secundarios El instrumento utiliza los c digos de barras de los tubos para ajustar los calibradores al tipo de an lisis adecuado Los tubos del calibrador una vez abiertos pueden utilizarse durante 8 horas si se mantienen destapados y cargados en el instrumento transcurrido este tiempo el reactivo debe desecharse Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Condiciones de conservaci n 1 2 Guarde los calibradores no abiertos entre 2 y 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado Los calibradores abiertos deben desecharse al cabo de 8 horas Procedimiento 1 Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso El software no permitir usar un lote nuevo hasta que se calibre Cada calibrador debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo para garantizar su homogeneidad Evite la formaci n de espuma ya que las burbujas pueden interferir en la detecci n del nivel de l quido de lo
20. entes con datos de ELISA 10 fueron negativos en el EIA DGP IgG Sensibilidad y especificidad cl nicas del ensayo QUANTA Flash DGP IgG para la celiaqu a con deficiencia de IgA Diagn stico Sin celiaquia An lisis confianza del 95 Celiaqu a con deficiencia de IgA QUANTA Flash Positivo Sensibilidad 56 3 29 9 80 2 Negativo Especificidad 97 3 95 0 98 8 DGP IgG Total Sensibilidad y especificidad clinicas del ensayo QUANTA Flash DGP IgG para la DH Diagn stico An lisis Sin DH Total confianza del 95 Positivo Sensibilidad 69 6 47 1 86 8 QUANTA Flash z E Negativo Especificidad 97 3 95 0 98 8 DGP IgG Total Dos muestras pertenec an a pacientes con gastritis por H pylori y una proven a de un paciente con artritis reumatoide Las dem s muestras proceden de personas aparentemente sanas y dos de ellas han dado positivo en el EIA DGP IgG Cinco muestras fueron tambi n negativas en el ElA DGP IgG Distribuci n de la poblaci n de control de la enfermedad utilizada en el estudio de validaci n i m Porcentaje de Grupo de pacientes N Negativo Positivo erie S Enfermedad hep tica autoinmune 5 5 0 0 Hepatitis virica 31 29 2 6 Enfermedad inflamatoria intestinal Chron UC 17 17 0 0 Infecci n por H pylori 17 15 2 12 Alergia alimentaria 9 9 0 0 Enfermedad reum tica sist mica 12 12 0 0 Enferme
21. ferencia indicado por el fabricante y si lo desea establezca su propio intervalo normal a partir de sus propios controles y su poblaci n de pacientes de acuerdo con sus procedimientos particulares Es recomendable que los resultados comunicados por el laboratorio incluyan la informaci n siguiente Los siguientes resultados se han obtenido mediante el inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash DGP IgG de INOVA Es posible que los valores obtenidos con m todos de ensayo de otros fabricantes no sean intercambiables con dichos resultados Limitaciones del procedimiento 1 No todos los pacientes con celiaqu a o DH son positivos frente a los anticuerpos IgG anti DGP 2 Los resultados de este ensayo deben utilizarse junto con los datos cl nicos y otras pruebas serol gicas 3 Si no se mezclan correctamente los reactivos antes del primer uso pueden obtenerse resultados err neos 4 Las caracteristicas de funcionamiento de este ensayo no se han establecido para matrices de muestras distintas del suero Valores esperados El resultado esperado en la poblaci n normal es negativo Dado que la prevalencia de celiaquia en la poblaci n sin riesgo se acerca al 1 pueden esperarse resultados positivos ocasionales cuando se analicen personas sanas En el an lisis de muestras de suero de 232 personas aparentemente sanas mediante el CIA QUANTA Flash DGP IgG realizado en INOVA Diagnostics se han obtenido cuatro resultados
22. gy Promedt Consulting GmBH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 6894 581020 Fax 49 6894 581021 www mt procons com 621170ESP Diciembre de 2013 Revisi n 2
23. hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado Los controles est n dise ados para 15 usos permaneciendo una media de 10 minutos cargados en el instrumento en cada uso El tiempo total durante el que los tubos del control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2 5 horas Si los controles cargados en el instrumento se dejan destapados durante m s de 2 5 horas en total deben desecharse Para conseguir una estabilidad ptima retire los controles del sistema inmediatamente despu s de tomar las muestras y almac nelos tapados a 2 8 C en el vial original Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el ensayo DGP IgG 1 Antes de utilizar los controles QUANTA Flash DGP IgG por primera vez en el instrumento introduzca en el software el nombre el lote la caducidad el valor o dosis y la DE objetivo En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n Choose more options Ctrl M vw se alado con una flecha Seleccione QC Ctrl F2 Haga clic en el bot n New QC Material Cada grupo de control incluye una hoja de datos espec fica del lote En primer lugar introduzca en el software el nombre el n mero de lote y la caducidad que figuran en la hoja de datos A continuaci n haga clic en el bot n Add Assay En la ventana que se abrir compruebe que est marcada la casilla Show All Assays Seleccione el ensayo DGP_lgG de la lista
24. iar el recipiente de residuos l quidos en la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Fluid Waste Extraiga el residuo l quido y elim nelo Haga clic en Next Una vez sustituido el frasco vac o haga clic en Finish M todo Preparacion del cartucho de reactivos La primera vez que se utilice el cartucho de reactivos deben seguirse los pasos indicados a continuaci n para instalarlo adecuadamente en el instrumento BIO FLASH Nota No utilice el cartucho de reactivos si presenta cualquier signo de da o Cartucho de reactivos QUANTA Flash DGP IgG Durante el env o y el almacenamiento las micropart culas se depositan y es preciso mezclarlas para volver a suspenderlas 1 La primera vez que utilice el cartucho invi rtalo suavemente 30 veces evitando la formaci n de espuma Compruebe que las microparticulas se resuspenden completamente Si las microparticulas no se han resuspendido totalmente siga invirtiendo el cartucho hasta que se produzca la resuspensi n Si las micropart culas no se resuspenden NO UTILICE EL CARTUCHO 2 Una vez que se hayan resuspendido las microparticulas coloque el cartucho de reactivos sobre una superficie s lida para retirar la pesta a roja Con una mano sostenga el cartucho de reactivos en su lugar Con la otra mano agarre con fuerza la pesta a roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente 3 Mientras pulsa las dos pesta as laterales del
25. iciones de conservacion 1 Guarde los cartuchos de reactivos no abiertos a 2 8 C No los congele Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y se manipulan tal como est indicado 2 Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento El software BIO FLASH supervisa la fecha de caducidad del cartucho cargado en uso y la del lote de reactivo periodo de validez del cartucho de reactivos El sistema no permitir utilizar cartuchos que hayan caducado Recogida preparaci n y manejo de las muestras Este procedimiento debe realizarse con una muestra de suero No deben utilizarse muestras contaminadas con microorganismos que hayan recibido un tratamiento a base de calor ni muestras que contengan part culas visibles No debe utilizarse suero muy hemolizado ni suero ict rico Tras la recogida el suero debe separarse del co gulo El documento H18 A4 del CLSI recomienda las siguientes condiciones de almacenamiento de muestras 1 No guarde las muestras a temperatura ambiente durante m s de 8 horas 2 Si el an lisis no se efect a en un plazo de 8 horas refrigere las muestras a una temperatura de 2a8 C 3 Si el an lisis no va a realizarse en un plazo de 48 horas o si debe preparar las muestras para enviarlas cong lelas a una temperatura de 20 C o inferior Las muestras congeladas deben mezclarse bien despu s de descongelarse y antes del an lisis Procedimiento
26. illa en el carrusel de muestras del instrumento 4 Cuando todos los materiales necesarios est n cargados en el instrumento el icono Start F4 pasar a estar disponible en color verde en la parte superior de la pantalla Pulse el icono Start F4 para comenzar el an lisis Control de calidad Los controles QUANTA Flash DGP IgG vendidos por separado numero de producto de INOVA 701172 contienen los controles positivos y negativos del QUANTA Flash DGP IgG Consulte el apartado QUANTA Flash DGP IgG Controls 701172 de este documento para obtener instrucciones detalladas sobre c mo introducir en el software todos los datos necesarios de cada control y c mo analizar los controles Se recomienda analizar los controles una vez cada d a en que se utilice el ensayo aunque los usuarios tambi n deben tener en cuenta los requisitos de la legislaci n nacional y local C lculo de los resultados Se genera una curva maestra de seis puntos en INOVA para cada nuevo lote de QUANTA Flash DGP IgG Los par metros de esta curva se codifican mediante el c digo de barras de cada cartucho de reactivos Durante la calibraci n se utilizar una curva de trabajo espec fica del instrumento para convertir las RLU a CU La reactividad del anticuerpo IgG frente al DGP puede entonces clasificarse seg n la tabla siguiente Reactividad CU Negativa lt 20 Positiva d bil 20 30 Positiva gt 30 La reactividad expresada en CU est directamente relacionada c
27. ituado a la izquierda Se abrir la ventana Add Triggers Remove old bottles b Abra el caj n de residuos del instrumento BIO FLASH y extr igalo Tire todas las cubetas del caj n de residuos secos Haga clic en Yes en la ventana Empty Waste Drawer Retire los frascos del iniciador de sus soportes y haga clic en el bot n Next Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustit yalos por nuevos iniciadores Realice la operaci n frasco a frasco y respete el c digo de color de los tapones blanco blanco rojo rojo c Siga las instrucciones de la ventana que se abrir Add Triggers Add Trigger 2 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco Haga clic en Next d Siga las instrucciones de la ventana Add Triggers Add Trigger 1 bottle Una vez aceptado el c digo de barras coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo Haga clic en Finish Vuelva a colocar el caj n de residuos y ci rrelo Para sustituir el recipiente de l quido de lavado del sistema haga clic en el bot n Bulks Inventory F9 en la esquina superior derecha En la pantalla Inventory Bulks haga clic en el bot n Sys Rinse En la ventana que se abrir Add System Rinse Remove bottles haga clic en Next Siga las instrucciones de la nueva ventana que se abrir Add System Rinse Add bottle Una vez aceptado el c digo de barras haga clic en Finish si es necesario Para vac
28. n related nonapeptides as a highly sensitive and specific diagnostic aid in celiac disease Clinical Chemistry 2004 50 2370 2375 Fleckenstein B Qiao S W et al Molecular characterization of covalent complexes between tissue transglutaminase and gliadin peptides J Bio Chem 2004 279 17607 16 Prince HE Evaluations of the INOVA Diagnostics Enzyme Linked Immunosorbent Assay Kits for Measuring Serum Immunoglobulins G IgG and IgA to Deamidated Gliadin Peptides Clinical and Vaccine Immunology 2006 13 150 151 Sugai E et al Accuracy of Testing Antibodies to Synthetic Gliadin Related Peptides in Celiac Disease Clinical Gastroenterology and Hepatology 2006 4 1112 1117 Kurppa K Lindfors K et al Antibodies against deamidated gliadin peptides in early stage celiac disease J Clin Gastroenterol 2010 epub ahead of print Volta U Granito A et al Deamidated gliadin peptide antibodies as a routine test for celiac disease J Clin Gastroenterol 2010 44 186 90 Collin P et al Selective IgA deficiency and coeliac disease Scand Journal Gastroenterology 1992 27 367 371 Smecuol E et al Permeability Zonulin Production and Enteropathy in Dermatitis Herpetiformis Clinical Gastroenterlogy and Hepatology 2005 3 335 341 Beutner EH et al Sensitivity and Specificity of IgA class anti endomysial antibodies for dermatitis herpetiformis and findings relevant to their pathogenic significance Journal of the American Academy of Dermatology
29. niscencia CIA QUANTA Flash DGP IgG Cada calibrador establece un punto de referencia para la curva de trabajo que sirve para obtener las unidades de quimioluminiscencia CU en la determinaci n de los anticuerpos IgG anti DGP en suero Resumen y principios del procedimiento El CIA QUANTA Flash DGP IgG utiliza una curva maestra predefinida espec fica de cada lote que se guarda en el c digo de barras del cartucho de reactivos Los calibradores QUANTA Flash DGP IgG est n dise ados para generar una curva de trabajo espec fica del instrumento a partir de los par metros de la curva maestra con un punto de decisi n basado en las caracter sticas de rendimiento y en la evaluaci n cl nica del CIA QUANTA Flash DGP IgG Los calibradores se analizan en varios instrumentos con diversos lotes de reactivos antes de efectuar la asignaci n de valores Reactivos 1 Calibrador QUANTA Flash DGP IgG 1 Dos 2 tubos con c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para usar Los calibradores contienen anticuerpos IgG humanos anti DGP en tamp n con estabilizantes de prote nas y conservantes 2 Calibrador QUANTA Flash DGP IgG 2 Dos 2 tubos con c digo de barras que contienen 0 3 mL de reactivo prediluido listo para usar Los calibradores contienen anticuerpos IgG humanos anti DGP en tamp n con estabilizantes de prote nas y conservantes Advertencias 1 Los calibradores contienen una sustancia qu mica cloranfenicol al 0
30. on la valoraci n del anticuerpo de la muestra del paciente Los aumentos y las disminuciones de la concentraci n de anticuerpo en los pacientes se reflejar en un correspondiente aumento o disminuci n de las CU que son proporcionales a la cantidad de anticuerpo El rango de medici n anal tica AMR del ensayo determinado por los puntos m nimo y m ximo de la curva maestra va de 2 8 CU a 1 936 7 CU que corresponde al rango lineal del ensayo Si el resultado de un paciente es inferior a 2 8 CU el sistema BIO FLASH indicar lt 2 8 CU Dado que es un valor inferior a 20 CU el resultado se considera negativo Si el resultado de un paciente es superior a 1 936 7 CU el sistema BIO FLASH lo indicar como gt 1 936 7 CU Este valor se considera un resultado positivo El software BIO FLASH dispone de una opci n denominada Auto Rerun rean lisis autom tico Cuando esta opci n est seleccionada el instrumento volver a analizar autom ticamente todas las muestras cuyo resultado sea gt 1 936 7 CU despu s de efectuar una diluci n adicional en un factor de 10 para que el valor medido se encuentre dentro del AMR El software calcular el resultado final teniendo en cuenta el factor de diluci n adicional aplicado Dado que el m ximo valor que puede medirse es 1 936 7 CU el valor m s alto que puede notificarse es 19 367 CU Interpretacion de los resultados Se aconseja que cada laboratorio verifique el intervalo de re
31. onservante La azida s dica es una sustancia venenosa que puede resultar t xica si se ingiere o si se absorbe a trav s de la piel o los ojos La azida s dica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las tuber as y formar azidas met licas potencialmente explosivas Si utiliza pilas de lavado para eliminar los reactivos aclare con abundante cantidad de agua para evitar la formaci n de azidas met licas 3 Utilice un equipo de protecci n personal adecuado cuando trabaje con los reactivos suministrados 4 Los derrames de reactivos deben limpiarse inmediatamente Cumpla todas las normas estatales y locales sobre protecci n del medio ambiente cuando elimine residuos Precauciones 1 Este producto est destinado a uso diagn stico In Vitro 2 Este ensayo solo debe utilizarse en el instrumento BIO FLASH 3 Una vez abierto el cartucho de reactivos debe almacenarse en el carrusel de reactivos del instrumento La colocaci n por primera vez del cartucho de reactivos en el instrumento debe realizarse con todo cuidado para no derramar reactivos 4 Puede producirse contaminaci n qu mica de los reactivos como consecuencia de un lavado o un aclarado inadecuados del instrumento Los restos de sustancias qu micas habituales en los laboratorios como formol lej a etanol o detergente pueden interferir en el an lisis Limpie siempre el instrumento siguiendo las recomendaciones indicadas en el manual del operador del BIO FLASH Cond
32. ra ser utilizado Se recomienda analizar los controles QUANTA Flash DGP IgG vendidos por separado n mero de producto 701172 tras calibrar un lote de cartuchos de reactivos Trazabilidad Actualmente no existe ning n est ndar internacional reconocido para la medici n de anticuerpos IgG anti DGP p ptido de gliadina desamidado Limitaciones Estos calibradores est n dise ados para realizar 4 calibraciones El tiempo m ximo durante el que los tubos del calibrador pueden permanecer destapados y cargados en el instrumento es de 8 horas Si los calibradores permanecen destapados en el instrumento durante m s de 8 horas deben desecharse Si se utilizan los mismos tubos de calibrador durante m s de 8 horas es posible que la calibraci n del ensayo sea incorrecta lo que puede generar resultados err neos QUANTA Flash DGP IgG 701172 Controls Para uso diagn stico In Vitro Uso previsto Los controles QUANTA Flash DGP IgG est n destinados al control de calidad del kit de inmunoensayo por quimioluminiscencia CIA QUANTA Flash DGP IgG Resumen y principios del procedimiento Los controles QUANTA Flash DGP IgG est n constituidos por un control negativo y un control positivo Cada uno de ellos contiene una cantidad diferente de anticuerpos IgG anti DGP El control negativo y el control positivo se emplean para monitorizar el rendimiento anal tico del inmunoensayo por quimioluminiscencia QUANTA Flash DGP Screen Reactivos 1
33. s instrumentos Destape los tubos de ambos calibradores y col quelos en una gradila de muestras con los c digos de barras orientados hacia delante a trav s de las aberturas de la gradilla Coloque la gradilla de muestras en el carrusel de muestras del instrumento BIO FLASH y cierre la puerta El instrumento leer los c digos de barras de los tubos del calibrador e identificar el cartucho de reactivos adecuado Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO FLASH para obtener instrucciones de uso detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO FLASH y el software BIO FLASH El instrumento analizar cada calibrador por triplicado Una vez analizados los calibradores el software solicitar la validaci n de la calibraci n En la pantalla Instrument Summary haga clic en el bot n de flecha Choose more options Ctrl M V Seleccione Calibration Ctrl F3 En la ventana de calibraci n marque el ensayo deseado y haga clic en Details En la ventana que se abrir Calibration Details seleccione la calibraci n que acaba de efectuar La curva maestra se visualizar como una l nea discontinua y la nueva curva de trabajo como una l nea continua Si los resultados de la calibraci n son v lidos en la parte inferior izquierda de la pantalla aparecer un bot n de validaci n Haga clic en el bot n Validate Calibration Una vez validada la calibraci n el lote de cartuchos de reactivos calibrado estar listo pa
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