- STACLOT® APC-R - Annar Diagnóstica Import
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1. STA STACLOT APC R Detecci n de la resistencia a la prote na C activada e El estuche contiene 4 frascos de Reactivo 1 F V Deficient Plasma 4 frascos de Reactivo 2 Venom 4 frascos de Reactivo 3 PCa 4 frascos de Reactivo 4 Control N 4 frascos de Reactivo 5 Control P REF 00721 CE Mayo 2011 Espa ol 6 1 INTER S DEL KIT El estuche STA Staclot APC R permite la detecci n de la resistencia a la prote na C activada PCa en los aparatos de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos 2 RECUERDO SOBRE LA RESISTENCIA A LA PROTE NA C ACTIVADA Desde 1990 L Amer sospechaba la presencia en el plasma de una sustancia que se opon a a la acci n de la prote na C activada PCa en un enfermo afectado de trombosis 1 Luego B Dahlb ck describi un mecanismo de resistencia a la prote na C activada 2 3 En 1994 R M Bertina mostr que esta anomal a hab a sido vinculada a una mutaci n en el exon 10 del gen codificante del factor V 4 Esta mutaci n da lugar a la s ntesis del factor V Leiden en el que la glutamina reemplaza a la arginina en posici n 506 Esta posici n corresponde al primer sitio de ruptura del factor Va por parte de la PCa 8 La PCa desactiva con mayor dificultad el factor Va Leiden que el factor Va normal 5 Desde entonces se han encontrado otras mutaciones responsables de una resistencia a la prote na C activada 10 122. La mutaci n del factor V Leiden se transmite de manera autos mica dominante 6 y es frecuente en la poblaci n de caus sico 7 Esta anomal a favorece la aparici n de trombosis sobre todo cuando se da en el portador de otros factores de riesgo 9 3 FUNDAMENTOS DEL TEST El principio de la detecci n de la resistencia a la PCa se basa en un alargamiento anormalmente d bil del tiempo de coagulaci n del plasma sometido a prueba en presencia de PCa y en medio c lcico En el sistema STA Staclot APC R la coagulaci n de la muestra diluida se lleva a cabo en presencia de plasma deficiente en factor V y de veneno de Crotalus viridis helleri Este veneno que act a como un activador del factor X pone en marcha la coagulaci n a este nivel y elimina la interacci n de los factores situados con anterioridad en la cascada El alargamiento del tiempo de coagulaci n de un plasma normal en presencia de PCa se debe a la capacidad de la PCa aportada por el Reactivo 3 para inactivar el factor Va del plasma sometido a prueba 4 COMPOSICI N Cada estuche de STA Staclot APC R contiene una hoja con tres c digos de barras uno para los Reactivos 1 2 y 3 y el otro para cada uno de los controles Reactivos 4 y 5 Cada c digo de barras contiene las siguientes informaciones n mero de lote referencia s del kit referencia s de l lo s reactivo s fecha de caducidad y para los Reactivos 4 y 5 los valores determinados en los apara
3. que pueden utilizar estos reactivos Antes de cualquier utilizaci n leer con atenci n el Manual del operador del instrumento utilizado 6 OBTENCI N Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA e Obtener en citrato tris dico 0 109 M 1 vol de citrato por 9 vol de sangre e Centrifugaci n 15 minutos a 2 500 g Se recomienda practicar una doble centrifugaci n a 4 C con el fin de eliminar las plaquetas la preparaci n del plasma se debe llevar a cabo lo antes posible despu s de la obtenci n e Conservaci n del plasma 8 horas a 20 5 C 6 meses a 80 C el plasma se debe congelar durante las 2 horas que siguen la obtenci n de la muestra En caso de congelaci n el plasma se deber descongelar a 37 C al ba o de mar a en termostato por lo menos durante 15 minutos y ser homogeneizado antes de cualquier utilizaci n No de sebe proceder de ning n modo una nueva congelaci n de dicho plasma 7 CONSERVACI N Y PREPARACI N DE LOS REACTIVOS Conservados a 2 8 C en su estado original los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche e Reactivos 1 2 y 3 Reconstituir cada frasco con 2 ml de agua destilada Dejar la soluci n estabilizarse durante 1 hora a temperatura ambiente 18 25 C Luego agitar despacio para homogeneizar antes de su uso Estabilidad despu s de la reconstituci n 8 horas en STA STA Compact y STA R Reactivos 4 y 5 Reconstituir cada frasco en 1 ml de agua des
4. R para estos 1007 plasmas est reproducido en el diagrama de aqu abajo A 140 4 APC R positivos 1304 n 237 120 4 110 4 100 4 90 80 707 60 4 50 4 40 30 4 20 10 4 APC R negativos n 770 N mero de plasmas SORIA RSS SS Tiempos de coagulaci n segundos BIBLIOGRAF A 1 AMER L KISIEL W SEARLEST R P WILLIAMS Jr R C Impairment of the protein C anticoagulant pathway in a patient with systemic lupus erythematosus anticardiolipin antibodies and thrombosis Thromb Res 57 247 258 1990 2 DAHLBACK B CARLSSON M Factor VIII defect associated with familial thrombophilia Thromb Haemostasis 65 6 658 abstract 39 1991 3 DAHLBACK B CARLSSON M SVENSSON PJ Familial thrombophilia due to a previously unrecognized mechanism characterized by poor anticoagulant response to activated protein C prediction of a cofactor to activated protein C Proc Natl Acad Sci USA 90 1004 1008 1993 4 BERTINA R M KOELEMAN B P C KOSTER T ROSENDAAL FR DIRVEN R J DERONDE H VAN DER VELDEN P A RELTSMA P H Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C Nature 369 64 67 1994 5 KALAFATIS M RAND M D MANN K G The mechanism of inactivation of human factor V and human factor Va by activated protein C J Biol Chem 269 50 31869 31880 1994 6 SVENSSON P J DAHLBACK B Re
5. STA R colocar los frascos en posici n RO del caj n de productos Estos controles se utilizan puros El instrumento lleva a cabo autom ticamente la diluci n en soluci n tamp n Owren Koller 9 3 Prueba Para la realizaci n de la prueba referir se al protocolo descrito en el manual Procedimientos operatorios del instrumento El instrumento lleva a cabo autom ticamente la detecci n de la resistencia a la PCa de los plasmas que se someten a prueba a medida que se introducen las muestras 10 RESULTADOS El tiempo de coagulaci n segundos de las muestras sometidas a una prueba se exhibe en tiempo real sobre el tablero de mandos del aparato v ase el Manual del operador Si el aparato se ala que los tiempos de coagulaci n obtenidos para los controles se sit an fuera de los rangos indicados en la hoja asegurarse del buen funcionamiento de todo el sistema condiciones operatorias reactivos plasmas a probar etc Si es necesario empezar de nuevo las pruebas 11 L MITES DEL M TODO e Es esencial que las operaciones de mantenimiento del instrumento tal como est n descritas en la Manual del operador del instrumento se efect an bien e Toda muestra sospechosa principio de coagulaci n muestra hemolizada se debe rechazar Un ndice d bil inferior al 50 de factor V en la muestra puede dar lugar a un resultado falsamente negativo tiempo de coagulaci n gt 120 segund
6. deficientes en prote na S ndice de prote na S variable entre el 23 y 55 n 27 de los cuales 7 positivos en APC R plasmas con lupus anticoagulantes n 20 de los cuales 2 positivos en APC R plasmas que provienen de enfermos bajo tratamiento con heparina HNF o HBPM n 47 de los cuales 4 positivos en APC R plasmas obtenidos entre pacientes tratados con antivitaminas K n 53 de los cuales 12 positivos en APC R En todos los casos no se descubri ninguna interferencia en la prueba Se han llevado a cabo estudios de reproductibilidad dentro de cada serie n 21 y entre las series n 10 en una muestra normal y en una muestra positiva en el sistema STA Staclot APC R En todos los casos la muestra normal dio resultados negativos mientras que la muestra resistente al PCa los dio positivos 14 COMPARACI N CON LA BIOLOG A MOLECULAR 1007 plasmas caracterizados en biolog a molecular para el factor V Leiden entre los cuales 236 APC R positivos en biolog a molecular fueron sometidos a una prueba con el kit STA Staclot APC R Las caracter sticas de la prueba STA Staclot APC R con respecto a la biolog a molecular fueron las siguientes sensibilidad 99 6 especificidad 99 7 valor de predicci n positivo 99 2 valor de predicci n negativo 99 9 A t tulo informativo la repartici n de los tiempos de coagulaci n determinados con la ayuda del reactivo STA Staclot APC
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8. os Sin embargo un resultado positivo tiempo de coagulaci n lt 120 segundos en presencia de un ndice de factor V inferior al 50 ser considerado v lido El m todo propuesto es insensible a la heparina HNF y HBPM hasta ndices de 1 Ul ml Los inhibidores de la trombina ej hirudina argatrob n presentes en la muestra que hay que someter a una prueba son susceptibles de dar lugar a un resultado falsamente negativo de esta muestra e La presencia de aprotinina en la muestra sometida a una prueba es susceptible de dar lugar a un resultado falsamente positivo 12 VALORES USUALES Los plasmas cuyo tiempo de coagulaci n en el sistema STA Staclot APC R obtenido en los aparatos de la l nea STA que pueden utilizar estos reactivos es superior o igual a 120 segundos est n considerados como negativos en cuanto a la resistencia a la PCa Los plasmas para los cuales el tiempo de coagulaci n es inferior a 120 segundos est n considerados como resistentes a la PCa APC R positivos 13 CARACTER STICAS DEL M TODO e Es posible observar resultados diferentes en biolog a molecular y en el m todo de actividad entre enfermos que han sufrido ciertos tipos de injerto 11 e Estudio de diferentes poblaciones En el sistema STA Staclot APC R se han estudiado diferentes plasmas documentados en biolog a molecular para el factor V Leiden y que presentan caracter sticas susceptibles de interferir en la prueba plasmas
9. sistance to activated protein C as a basis for venous thrombosis N Engl J Med 330 8 517 522 1994 7 REES D C COX M CLEGG J B World distribution of factor V Leiden Lancet 346 1133 1134 1995 8 TROSSAERT M CONARD J HORELLOU M H ELALAMY I SAMAMA M M Le diagnostic biologique de la r sistance la prot ine C activ e Rev Fr Lab 279 19 23 1995 9 ZOLLER B HILLARP A DAHLBACK B Activated protein C resistance clinical implications Clin Appl Thromb Haemost 3 1 25 32 1997 10 CHAN W P LEE C K KWONG Y L LAM C K LIANG R A novel mutation of Arg306 of factor V gene in Hong Kong Chinese Blood 91 4 1135 1139 1998 11 CROOKSTON K P HENDERSON R CHANDLER W L False negative factor V Leiden assay following allogeneic stem cell transplant Br J Haematology 100 600 602 1998 12 WILLIAMSON D BROWN K LUDDINGTON R BAGLIN C BAGLIN T Factor V Cambridge a new mutation Arg Thr associated with resistance to activated protein C Blood 91 4 1140 1144 1998 Los cambios significativos son indicados por las l neas punteadas en el margen DIAGNOSTICA STAGO S A S Las informaciones y o las im genes contenidas en este 9 rue des Fr res Chausson documento est n protegidas por copyright y otros derechos de 92600 Asni res sur Seine France propiedad intelectual 2011 Diagnostica Stago todos derechos 33 0 1 46 88 20 20 Sta
10. tilada Agitar vigorosamente Dejar la soluci n estabilizarse durante 1 hora a temperatura ambiente 18 25 C Luego agitar despacio para homogeneizar antes de su uso Estabilidad despu s de la reconstituci n 8 horas en STA STA Compact y STA R 8 REACTIVO Y MATERIAL AUXILIARES STA Owren Koller REF 00360 e Instrumento de la l nea STA que puede utilizar estos reactivos e Equipamiento habitual en los laboratorios de an lisis m dicos centrifugadora agua destilada 9 MODO OPERATORIO 9 1 Plasmas a probar Los plasmas que hay que someter a una prueba se utilizan puros Introducirlos en el instrumento v ase el Manual del operador del aparato utilizado El instrumento lleva a cabo autom ticamente la diluci n en soluci n tamp n Owren Koller Seleccionar la prueba que hay que efectuar en los plasmas del paciente 9 2 Controles Los controles espec ficos del lote son necesarios para verificar la exactitud y la reproductibilidad de los resultados Utilizar los Reactivos 4 Control N y 5 Control P Preparar estos controles y introducirlos en el instrumento como se indica en el Manual del operador del mismo La colocaci n de los viales se realiza de la siguiente manera en el STA colocar los frascos en posici n 8 9 o 10 de uno de los dos cajones de muestras en el STA Compact colocar los frascos en posici n 1 a 18 o 35 a 38 del caj n de productos en el
11. tos de la l nea STA del tiempo de coagulaci n de estos reactivos en el sistema STA Staclot APC R e Reactivo 1 plasma humano immunodeprimido en factor V y enriquecido con fosfol pidos liofilizado Reactivo 2 preparaci n liofilizada que contiene veneno de Crotalus viridis helleri Reactivo 3 reactivo que contiene prote na C activada de origen humano en medio c lcico liofilizado Reactivo 4 plasma humano normal citratado liofilizado utilizado como control negativo e Reactivo 5 plasma humano citratado liofilizado utilizado como control positivo Estes reactivos de este kit contienen productos de origen humano y o animal Cuando se ha utilizado plasma humano en la preparaci n de estes reactivos se excluye previamente la presencia del ant geno HBs de los anticuerpos anti HCV anti HIV 1 y anti HIV 2 con los correspondantes an lisis Sin embargo ning n test puede garantizar de manera absoluta la ausencia de agentes infecciosos Por eso estos reactivos de origen biol gico han de ser manipulados con las precauciones habituales ya que se trata de productos potencialmente infecciosos 5 PRECAUCIONES El estuche intacto se debe conservar a 2 8 C Estos reactivos se destinam exclusivamente a un uso in vitro y deben ser manipulados per personas habilitadas Los residuos se eliminar n con arreglo a la reglamentaci n local vigente El kit STA Staclot APC R sirve en particular en los aparatos de la l nea STA
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