CAPILLARYS PROTEIN(E) 5
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1. CAPILLARYS PROTEIN E 5 Ref 2000 2009 04 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 ESPECIFICACIONES DE USO El kit CAPILLARYS PROTEIN E 5 est dise ado para la separaci n de las prote nas del suero humano en tamp n alcalino pH 9 5 con el sistema CAPILLARYS Las prote nas s ricas normales se separan en 5 fracciones principales El CAPILLARYS realiza todas las secuencias autom ticamente para obtener un perfil proteico para su an lisis cualitativo o cuantitativo Las prote nas separadas en capilares de s lice son detectadas directamente a una absorbancia de 200 nm Las separaciones electrofor ticas pueden ser interpretados visualmente para examinar la presencia de cualquier anomal a en el perfil La detecci n directa proporciona una cuantificaci n relativa precisa de las fracciones individuales de prote na Para Uso Diagn stico In Vitro PRINCIPIO DEL TEST La electroforesis de prote nas es una t cnica bien establecida que se usa rutinariamente en los laboratorios cl nicos para la investigaci n de anomal as proteicas en las muestras El CAPILLARYS ha sido desarrollado para proporcionar la completa automatizaci n de esta prueba con una r pida separaci n y una buena resoluci n En muchos aspectos la metodolog a puede considerarse como un tipo intermedio de t cnica entre la electroforesis de zona cl sica y la cromatograf a l quida El Sistema CAPILLARYS utiliza el principio de la electrofo2. listo para trabajar 3 Seleccione el programa de an lisis PROTEIN E 5 en el instrumento 4 El cargador de muestras contiene 8 posiciones para tubos de muestra Coloque 8 tubos de muestra en cada cargador de muestras el c digo de barras de cada tubo debe ser visible en las aberturas del cargador de muestras IMPORTANTE Si el n mero de tubos que se va a analizar es inferior a 8 complete el cargador de muestras con tubos que contengan agua destilada o desionizada 5 Coloque un segmento de diluci n nuevo en cada cargador de muestras Aparecer un mensaje de aviso si falta el segmento 6 Deslice el los carro s de muestras entero dentro del sistema CAPILLARYS a trav s de la abertura situada en medio del instrumento Se pueden introducir en el sistema hasta 13 carros de muestras de forma sucesiva y continua Si va analizar un suero control use el cargador de muestras N 0 destinado a tal efecto 7 Extraiga los carros de muestras analizados de la placa situada en el lado izquierdo del instrumento 8 Quite con cuidado los segmentos de diluci n usados del cargador de muestras y des chelos ATENCI N Manipule con cuidado los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas DILUCI N MIGRACI N DESCRIPCI N DE LAS ETAPAS AUTOM TICAS Los c digos de barras se leen en los tubos de muestra y en los carros de muestras Las muestras se diluyen con el tamp n de an lisis y la aguja de diluci n se limpia entre cada diluc
3. n beta estar a muy modificada No use muestras de plasma El fibrin geno migra en positci n beta pico suplementario en beta su presencia en algunas muestras plasma suero mal defibrinado o suero de un paciente bajo tratamiento anticoagulante puede falsear la interpretaci n del an lisis confusi n con una bada monoclonal que migre en posici n beta o aumento del porcentaje de esta fracci n PROCEDIMIENTO El sistema CAPILLARYS es un instrumento multiparam trico para el an lisis de prote nas s ricas en 8 capilares paralelos en la secuencia siguiente Lectura del c digo de barras de los tubos de muestra para hasta 8 tubos y los carros de muestras Diluci n de la muestra en los segmentos de diluci n desde los tubos primarios Lavado de los capilares Inyecci n de las muestras diluidas An lisis de las prote nas y detecci n directa en los capilares Las etapas manuales incluyen Colocaci n de los tubos de muestra en los carros de muestras Colocaci n de los carros de muestras en el instrumento CAPILLARYS Extracci n de los carros de muestras despu s del an lisis POR FAVOR LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS 35 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 I PREPARACI N DEL AN LISIS ELECTROFORETICO 1 Ponga en marcha el instrumento CAPILLARYS y el ordenador 2 Prepare el programa Despu s de un per odo de precalentamiento de 10 minutos el Sistema CAPILLARYS est
4. Qu tese inmediatamente toda la ropa contaminada Lleve ropa adecuada y protecci n ocular facial Uso Para lavar los capilares despu s de la separaci n electrofor tica de prote nas IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacene las soluciones de lavado stock y de trabajo en contenedores cerrados a temperatura ambiente o refrigeradas La soluci n de lavado stock es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n de lavado de trabajo es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado de trabajo si cambia su aspecto por ejemplo se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana 33 INSTRUCCIONES SEBIA Espa ol CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 3 SEGMENTOS DE DILUCI N Uso Segmentos de un solo uso para diluir la muestra en el instrumento automatizado ATENCI N Manipule con cuidado los segmentos de diluci n que contengan muestras biol gicas 4 FILTROS Utilizaci n Filtros desechables para filtrar el tamp n la soluci n de lavado de trabajo reconstituida y el agua destilada o desionizada usada para el lavado de los capilares IMPORTANTE Cambie sistem ticamente los tres filtros al empezar un kit nuevo Enrosque un filtro en e
5. beta mercaptoetanol al Fluidil SEBIA referencia n 4587 1 vial de 5 mL Estando el sistema CAPILLARYS preparado para analizar muestras a ada 100 pL de soluci n reductora a 300 uL de suero puro Agite en el v rtex y deje que incube durante 15 minutos como m ximo y luego siga con el procedimiento habitual IMPORTANTE Despu s del tratamiento reductor con beta mercaptoetanol la muestra debe ser analizada inmediatamente no debe haber ning n otro cargador en espera de ser analizado en el sistema CAPILLARYS Cualquier aspecto monoclonal u oligoclonal debe confirmarse usando el kit de inmunotipado SEBIA CAPILLARYS IMMUNOTYPING o los kits de inmunofijaci n SEBIA HYDRAGEL IF Consulte la BIBLIOGRAF A si desea obtener informaci n complementaria para la interpretaci n de los perfiles obtenidos Fracci n alfa 2 El orosomucoide migra entre las fracciones alfa 1 y alfa 2 pero se integra en alfa 2 En el caso de que la fracci n que representa al orosomucoide est separada de la fracci n alfa 2 por un m nimo en el perfil electrofor tico ser necesario suprimirlo para realizar la integraci n Interferencias y Limitaciones Consulte MUESTRAS PARA EL AN LISIS Teniendo en cuenta los principios anal ticos de las t cnicas actuales principios de la electroforesis de zona resoluci n y sensibilidad no puede darse ninguna garant a respecto a la detecci n de la totalidad de todos los componente monoclonales Resolu
6. per odos m s largos de almacenamiento las muestras deben congelarse durante las 8 horas siguientes a su obtenci n Los sueros congelados son estables durante un mes NOTA No conservar los sueros a temperatura ambiente Las prote nas de muestras conservadas entre 2 y 8 C se degradan en particular el complemento C3 Un suero conservado 10 d as entre 2 y 8 C presenta una fracci n beta que disminuye progresivamente y puede aparecer deformada con aparici n de una ondulaci n al principio de la fracci n gamma a causa de la degradaci n del complemento C3 y una fracci n alfa 2 cuya forma puede estar ligeramente modificada Despu s de m s de 10 d as de conservaci n la fracci n beta se deforma ensanch ndose Preparaci n de las muestras Use muestras de suero sin diluir Despu s de almacenarlos entre 2 y 8 C o despu s de congelarlos algunos sueros especialmente aquellos que contengan crioglobulina o criogel pueden volverse viscosos o desarrollar turbidez A temperatura ambiente estas muestras pueden ser analizadas directamente Las muestras que contengan una inmunoglobulina polimerizada pueden ser analizadas sin ning n tratamiento Es recomendable observar el aspecto del suero antes del an lisis hem lisis crioglobulinas o turbidez Muestras a descartar No utilice muestras de suero hemolizadas La hem lisis provoca una fracci n alfa 2 doble No use muestras de suero antiguas o mal conservadas ya que la fracci
7. 0 mg dL de la prote na monoclonal NOTA El l mite de detecci n puede variar en funci n de la posici n de la banda monoclonal y el fondo policlonal de la fracci n de las gammaglobulinas Linealidad Se determin que la t cnica CAPILLARYS PROTEIN E 5 era lineal hasta 5 2 g dL de alb mina y 3 1 g dL de gammaglobulinas por lo menos 38 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAPHY IREN 11 12 Clark R et al Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins qualitative comparison with high throughput agarose gel electrophoresis J Chromatogr A 744 205 213 1996 Henskens Y et al Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis Clin Chem 44 1184 1190 1998 Jellum E et al Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis J Chromatogr B 689 155 164 1997 Jenkins MA and Guerin MD Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis Ann Clin Biochem 32 493 497 1995 Jenkins MA et al Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis prospective analysis of 1000 specimens J Chromatogr B 672 241 251 1995 Jenkins MA and Guerin MD Capillary electophoresis procedures for serum protein analysis comparison with established techniques J Chromatogr B 699 257 268 1997 Jenkins MA and Ratnaike S Five unusual serum protein presentations found by cappillary
8. 5 16 7 17 1 SD 0 43 0 43 0 05 0 05 0 13 0 13 0 19 0 17 0 24 0 25 CV 0 7 0 7 2 5 2 5 1 3 1 3 2 2 2 0 1 4 1 4 Suero B lot no 1 lot no 2 MEDIA 66 2 66 4 2 0 2 0 11 0 11 0 9 2 9 0 11 7 11 6 SD 0 48 0 34 0 07 0 07 0 17 0 11 0 15 0 16 0 16 0 15 CV 0 7 0 5 3 6 3 3 15 1 0 1 7 1 8 1 4 1 3 Suero C lot no 1 lot no 2 MEDIA 53 8 53 6 2 2 2 1 8 7 9 2 75172 2791278 SD 0 23 0 44 0 05 0 05 0 17 016 0 14 0 12 0 15 0 36 CV 0 4 0 8 2 3 2 3 1 9 1 7 1 9 1 7 0 5 1 3 Suero D lot no 1 lot no 2 MEDIA 62 3 62 0 2 8 2 9 10 1 10 2 9 3 9 2 15 5 15 7 SD 0 40 0 46 0 05 0 08 0 22 015 0 20 014 0 23 0 22 CV 0 6 0 7 1 8 2 7 2 2 1 5 2 2 1 5 1 5 1 4 Suero E lot no 1 lot no 2 MEDIA 45 8 45 7 2 4 2 4 9 0 9 2 82 82 34 6 34 6 SD 0 42 0 45 0 05 0 06 0 12 0 10 0 10 0 15 0 43 0 40 CV 0 9 1 0 20725 1 3 1 1 12 18 1 3 1 2 37 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 FRACCION MEDIA SD CV Alb mina 45 8 67 2 0 12 0 49 0 2 0 8 Alfa 1 1 8 3 5 0 00 0 12 0 0 5 2 Alfa 2 7 7 11 7 0 07 0 36 0 7 3 8 Beta 7 1 10 3 0 07 0 30 0 9 4 0 Gamma 14 3 34 9 0 08 0 35 0 5 1 9 Reproducibilidad entre lotes Ocho 8 muestras diferentes de suero fueron procesadas 10 veces en 8 capilares usando la t cnica CAPILLARYS PROTEIN E 5 con tres lotes diferentes de tamp n de an lisis La media SD y CV n 30 fueron cal valore
9. a contaminada Lleve ropa adecuada y protecci n ocular facial Uso Para lavar los capilares del CAPILLARYS Reactivo adicional necesario cuando el n mero de determinaciones por serie es inferior a 40 IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor de soluci n de lavado se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el cuello del contenedor el conector y el tubo para evitar la acumulaci n de sales Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacene las soluciones de lavado stock y de trabajo en contenedores cerrados a temperatura ambiente o refrigeradas La soluci n de lavado stock es estable hasta la techa de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial La soluci n de lavado de trabajo es estable durante 3 meses Deseche la soluci n de lavado de trabajo si cambia su aspecto por ejemplo se vuelve turbia debido a contaminaci n microbiana EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 1 Sistema CAPILLARYS SEBIA PN 1220 o PN 1222 2 Carros de muestras suministrados con el CAPILLARYS 3 Kit de Contenedores suministrados con el CAPILLARYS Contenedor de lavado para llenarlo con agua destilada o desionizada y de desechos MUESTRAS PARA EL AN LISIS Extracci n y almacenamiento de muestras Se recomienda analizar muestras de suero frescas Los sueros deben obtenerse siguiendo los procedimientos establecidos en el laboratorio cl nico Las muestras pueden ser conservadas hasta 10 d as entre 2 y 8 C Para
10. ales de prote na Los valores normales media 2 SD para las fracciones electrofor ticas principales de prote nas s ricas en el sistema CAPILLARYS han sido establecidos a partir de una poblaci n sana de 266 adultos hombres y mujeres CAPILLARYS PROTEIN E 5 Alb mina 58 6 68 6 Alfa 1 globulinas 1 7 2 9 Alfa 2 globulinas 7 5 11 7 Beta globulinas 6 7 9 6 Gamma globulinas 11 5 21 1 Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de normalidad NOTA Los valores normales han sido obtenidos con los par meiros de integraci n por defecto del programa alisado 2 y deriva autom tica 36 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 Interpretaci n Una deformaci n del perfil obtenido comparado con el perfil normal es signo de anomal a especialmente la presencia de un ligero pico suplementario en la zona de las gammaglobulinas La PCR migra en posici n beta al lado de gamma vea PERFILES ELECTROFOR TICOS Puede sospecharse la presencia de un componente monoclonal en el suero si el mensaje de alerta siguiente aparece en pantalla Warning Migration centering is out of range o si el perfil proteico est retardado o deformado Para confirmar la presencia de un componente monoclonal en la muestra ser necesario realizar un tratamiento reductor con beta mercaptoetanol y repetir el an lisis tras el mismo En este caso prepare una soluci n reductora a adiendo un 1 de
11. ci n de problemas Llame al Servicio de Atenci n T cnica de SEBIA de su distribuidor cuando la prueba no funcione pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la preparaci n y el almacenaje de los materiales y para el procedimiento Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit as como las informaciones relativas a la eliminaci n de los desechos est n disponibles en el Servicio de Asistencia T cnica de su distribuidor CARACTER STICAS T CNICAS Los resultados obtenidos usando el procedimiento CAPILLARYS PROTEIN E 5 indican una muy buena reproducibilidad en el an lisis cuantitativo con un CV medio de m s o menos 1 6 para cada fracci n de prote na Los porcentajes de las diferentes fracciones proteicas han sido obtenidos con los par metros de integraci n por defecto del programa alisado 2 y deriva autom tica Reproducibilidad en serie 5 muestras diferentes de suero fueron procesadas en 8 capilares usando la t cnica CAPILLARYS PROTEIN E 5 con dos lotes diferentes de tamp n de an lisis La media SD y CV n 8 fueron calculadas para cada muestra cada zona y cada lote La tabla muestra los valores para las 5 muestras testadas para cada fracci n proteica y con los dos lotes de tamp n FRACCION ALBUMINA ALFA 1 ALFA 2 BETA GAMMA Suero A lot no 1 lot no 2 MEDIA 63 0 62 8 1 9 2 0 9 5 9 7 8 9 8
12. electrophoresis in the clinical laboratory J Biochem Biophys Methods 41 31 47 1999 Katzmann JA et al Identification of monoclonal proteins in serum quantitative comparison of acetate agarose gel and capillary electrophoresis Electrophoresis 18 1775 1780 1997 Landers JP Clinical Capillary Electrophoresis Clin Chem 41 495 509 1995 Oda RP et al Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids Electrophoresis 18 1715 1723 1997 Wijnen PA and van Dieijen Visser M Capillary Electrophoresis of serum proteins Reproducibility comparison with agarose gel electrophoresis and a review of the literature Eur J Clin Chem Clin Biochem 34 535 545 1996 Wendling A Proc dures de diagnostic ou de d pistage Justification et validit d un test de diagnostic ou de d pistage sensibilit sp cificit Impact Internat 1986 Sept 93 97 131 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 SCHEMA FIGURE Figure 1 PROFIL ELECTROPHORETIQUE ELECTROPHORETIC PATTERN Albumin N D amp cd KS RS gt S bal P amp FT Prealbumin i ii HDL od i Alpha 1 antitrypsin J ii A en Sammagiebuline Alpha 1 acid glycoprotein J I SEGA Haptoglobin ed i L Transferrin Alpha 2 macroglobulin J i t Hemopexin 132 ee C3 Complement
13. entraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo ADVERTENCIA La soluci n CAPICLEAN puede causar irritaciones o quemaduras en la piel los ojos y las membranas mucosas Uso Sirve para la limpieza semanal de los capilares y de la c nula de muestras del aparato autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA ATENCI N La utilizaci n semanal del CAPICLEAN es indispensable para un funcionamiento ptimo de la t cnica CAPILLARYS PROTEIN E 5 en el CAPILLARYS Consulte la hoja de instrucciones del CAPICLEAN SEBIA IMPORTANTE No vuelva a usar el segmento de diluci n usado despu s de limpiar los capilares y la c nula de muestras Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro Almacene el CAPICLEAN refrigerado 2 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial NO LO CONGELE El CAPICLEAN debe estar exento de precipitados Deseche el CAPICLEAN si cambia su aspecto es decir se vuelve turbio debido a contaminaci n microbiana 3 SOLUCI N DE HIPOCLORITO DE SODIO para la limpieza de la c nula de muestras Preparaci n Prepare una soluci n de hipoclorito de sodio lej a de 9 clorada 2 3 de cloro diluyendo hasta 1 litro volumen final una soluci n concentrada de 250 ml de 36 clorada 9 6 de cloro con agua destilada o desionizada fr a Utilizaci n Para la limpieza de la c nula de muestras del autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA es un
14. i n Lavado de los capilares Las muestras diluidas se inyectan en los capilares Migraci n a voltaje constante con temperatura regulada por efecto Peltier durante unos 5 minutos Las prote nas se detectan directamente mediante lectura a 200 nm y aparece un perfil electrofor tico en la pantalla del sistema Nota Estas etapas se describen para el primer carro de muestras introducido Los perfiles electrofor ticos aparecen despu s de 10 minutos Para el carro de muestras siguiente las dos primeras etapas lectura del c digo de barras y diluci n de las muestras se realizan durante el an lisis del carro de muestras anterior DARON II ANALISIS DE LOS RESULTADOS Al final del an lisis se realiza autom ticamente una cuantificaci n relativa de las fracciones individuales y se pueden analizar los perfiles Con la concentraci n total de prote nas el sistema calcular la concentraci n de cada tracci n Las separaciones electrofor ticas son interpretadas visualmente para la detecci n de anomal as en el perfil Los perfiles aparecen por defecto en el modo redibujado esta forma de presentaci n acerca la fracci n alfa 1 al pico de la alb mina Como opci n el modo est ndar permite visualizar la curva inicial o no tratada LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS Il FIN DE LA SECUENCIA DEL AN LISIS Al final del cada secuencia del an lisis el operario debe iniciar el procedimiento de stand by o de apagad
15. l extremo de cada tubo que se sumerge en los frascos de tamp n soluci n de lavado y de agua destilada o desmineralizada Al colocar los filtros en el sistema CAPILLARYS lave los conectores y los tubos con agua destilada o desionizada Los filtros usados deben limpiarse antes de desecharlos El filtro destinado al tamp n de an lisis debe usarse para filtrar la totalidad de los dos contenedores de tamp n los otros dos filtros est n destinados a la filtraci n de la soluci n de lavado de trabajo y del agua destilada o desionizada que se usa para lavar los capilares Conservaci n Antes de usarlos los filtros deben conservarse dentro de su embalaje herm ticamente cerrado en un lugar seco y a temperatura ambiente o en el refrigerador REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS 1 AGUA DESTILADA O DESIONIZADA Utilizaci n Para el lavado de los capilares del autom tico para electroforesis capilar CAPILLARYS SEBIA Se recomienda usar agua destilada o desionizada filtrada con un filtro de porosidad lt 0 45 um Cambie el agua cada d a para evitar contaminaciones microbianas En caso de conservaci n prolongada a ada 35 l l de ProClin 300 IMPORTANTE Antes de llenar el contenedor del agua se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada en abundancia 2 CAPICLEAN Composici n El vial de la soluci n concentrada CAPICLEAN SEBIA PN 2058 25 mL contiene enzimas proteol ticos surfactantes y aditivos inocuos a las conc
16. mantenimiento semanal para eliminar las prote nas que se hayan podido adsorber a la c nula Consulte las instrucciones del CAPILLARYS SEBIA Utilice el cargador de muestras espec fico para el mantenimiento n 100 Coloque en la posici n 1 de este cargador de muestras un tubo que contenga 2 ml de la soluci n de hipoclorito de sodio al 2 3 de cloro preparada previamente Introduzca el cargador de muestras n 100 de mantenimiento en el sistema CAPILLARYS En el men de la ventana MANTENIMIENTO que aparece en la pantalla seleccione Realizar la limpieza de la c nula con lej a y luego valide Conservaci n estabilidad y se ales de deterioro La soluci n de hipoclorito de sodio de 9 puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de pl stico cerrado herm ticamente protegido de la luz solar y de cualquier fuente de calor o ignici n y alejado de los cidos y el amoniaco 34 CAPILLARYS PROTEIN E 5 2009 04 4 SOLUCI N DE LAVADO CAPILLARYS Preparaci n Cada vial de la Soluci n de Lavado CAPILLARYS stock SEBIA PN 2052 2 viales 75 mL debe diluirse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada ATENCI N La soluci n de lavado contiene hidr xido s dico Soluci n corrosiva Causa quemaduras severas Mant ngala lejos del alcance de los ni os Si contacta con los ojos enju guelos inmediatamente con agua en abundancia y busque consejo m dico Qu tese inmediatamente toda la rop
17. o del sistema CAPILLARYS con el fin de conservar los capilares en condiciones ptimas IV LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO El sistema CAPILLARYS posee un control autom tico de los reactivos IMPORTANTE Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores de reactivo riesgo de despresurizaci n de los contenedores y perturbaci n de los an lisis y respetar el c digo de colores contenedor conector en cada cambio de contenedor Aparecer un mensaje en pantalla cuando sea necesario realizar una de las tareas siguientes Colocar un nuevo vial de tamp n y o Llenar el contenedor con soluci n de lavado de trabajo y o Llenar del contenedor de agua con agua desionizada o destilada filtrada y o Vaciar contenedor de desechos ATENCI N No use agua destilada o desionizada comercial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultrapura como el agua para inyecci n IMPORTANTE Antes de llenar el frasco de la soluci n de lavado se recomienda enjuagarlo con agua desmineralizada o destilada en abundancia POR FAVOR LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL CAPILLARYS RESULTADOS Control de calidad Se aconseja incluir un suero control en cada secuencia de an lisis Valores La detecci n directa a 200 nm en los capilares proporciona las concentraciones relativas porcentajes de las fracciones individu
18. rcial como por ejemplo el agua para planchar riesgo de deterioro importante de los capilares Use exclusivamente agua de calidad ultrapura como el agua para inyecci n 1 TAMP N Preparaci n El tamp n est listo para su uso Contiene tamp n alcalino pH 9 5 aditivos inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento ptimo Uso Tamp n para el an lisis de prote nas en electroforesis capilar Almacenamiento estabilidad y se ales de deterioro El tamp n debe conservarse a temperatura ambiente de 15 a 30 C o en nevera entre 2 y 8 C Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de tamp n No conserve el tamp n cerca de una ventana o de una fuente de calor NO CONGELAR NOTA Si el tamp n de an lisis se conserva entre 2 8 C es conveniente dejarlo a temperatura ambiente antes de su utilizaci n Desechar el tamp n si se presenta un cambio de aspecto o la aparici n de turbidez debida a contaminaci n microbiana de precipitaciones o part culas en suspensi n 2 SOLUCI N DE LAVADO Preparaci n El vial de la soluci n de lavado stock debe diluirse hasta 750 mL con agua destilada o desionizada ATENCI N La soluci n de lavado contiene hidr xido s dico Soluci n corrosiva Causa quemaduras severas Mant ngalo alejado del alcance de los ni os Si contacta con los ojos enju guelos inmediatamente con agua en abundancia y busque consejo m dico
19. resis capilar en una soluci n libre Con esta t cnica las mol culas cargadas son separadas seg n su movilidad electrofor tica en un tamp n alcalino con un pH espec fico La separaci n tambi n se da en funci n del pH del electr lito y el flujo electroosm tico El Sistema CAPILLARYS tiene 8 capilares que funcionan en paralelo permitiendo 8 an lisis simult neos Se prepara una diluci n de la muestra con tamp n y se inyecta por aspiraci n en el extremo an dico del capilar Se realiza entonces una separaci n de prote nas a un voltaje elevado y se lleva a cabo la detecci n directa de las prote nas a 200 nm en el extremo cat dico del capilar Los capilares son inmediatamente lavados con una Soluci n de Lavado y preparados con tamp n para el siguiente an lisis Las prote nas se detectan en el siguiente orden gamma globulinas beta globulinas alfa 2 globulinas alfa 1 globulinas y alb mina conteniendo cada fracci n una o m s prote nas REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN EL KIT CAPILLARYS PROTEIN E 5 ART CULOS PN 2000 Tamp n listo para su uso 2 viales de 700 mL Soluci n de lavado soluci n stock 1 vial 75 mL Segmentos de diluci n 1 paquete de 90 Filtros 3 filtros PARA OBTENER RESULTADOS PTIMOS Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y seg n las instrucciones incluidas LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES ATENCI N No use agua destilada o desionizada come
20. s l mite para las 8 muestras testadas y los 3 lotes de tamp n culadas para cada muestra cada zona y cada lote La tabla muestra los FRACCION MEDIA SD CV 95 Alb mina 46 0 67 2 0 19 0 41 0 3 0 7 Alfa 1 1 8 3 4 0 07 0 12 2 8 4 8 Alfa 2 7 8 11 7 0 10 0 30 1 0 3 3 Beta 7 2 10 1 0 13 0 31 1 6 3 9 Gamma 14 5 34 6 0 19 0 40 1 0 2 3 Exactitud Se analizaron muestras de suero patol gicas y normales n 120 usando el procedimiento CAPILLARYS PROTEIN E 5 y otro sistema comercial de geles de agarosa Los par metros de correlaci n calculados para las fracciones individuales a partir de los datos agrupados del CAPILLARYS PROTEIN E 5 vs el sistema de geles comparado y CAPILLARYS PROTEIN E 5 fueron m ig 7 Rango de valores en Fracci n Coeficiente de correlaci n Punto de corte en y Pendiente CAPILLARYS PROTEIN E 5 Alb mina 0 970 0 568 0 955 29 7 74 0 Alfa 1 0 988 0 189 0 982 1 7 14 3 Alfa 2 0 944 0 309 1 105 5 9 28 8 Beta 0 895 1 486 0 682 3 9 13 0 Gamma 0 979 4 097 0 920 6 0 58 3 Sensibilidad Se sometieron a electroforesis diluciones seriales de una muestra de suero con una prote na monoclonal con una concentraci n de 0 63 g dL usando el procedimiento CAPILLARYS PROTEIN E 5 La mayor diluci n que proporcionaba una banda monoclonal distinguible correspondi a la diluci n 1 32 o a una concentraci n de 2
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