OLAB IgG ANTI OXIDISED LOW DENSITY LIPOPROTEIN
Contents
1. Erh hte Serumkonzentrationen an oLAB wurden auch bei verschiedenen anderen Erkrankungen wie Pr eklampsie und systemischem Lupus erythematodes beschrieben Niedrige Werte wurden bei akutem Herzinfarkt und Sepsis beobachtet Ein berblick ber die klinische Wertigkeit von oLAB wurde ver ffentlicht M gliche INDIKATIONEN Arteriosklerose Koronare Herzerkrankung Risikoabsch tzung von Herzinfarkten Akute Sepsis 2 INHALT DES KITS CONT KIT KOMPONENTEN MENGE Oxidiertes LDL beschichtet auf Mikrotiterplattenstreifen im Streifenhalter Te Verpackt im Alu Beutel mit Trockenmittel RE ASYBUF Verd nnungspuffer rote Kappe gebrauchsfertig 1x60 ml WASHBUF Waschpuffer 20fach Konzentrat durchsichtige Kappe 1x50 ml Standards 37 75 150 300 600 1 200 mU ml oLAB IgG wei e Kappen an en iE T SEH CTRL Kontrollen 300 1 000 mU ml gelbe Kappen gebrauchsfertig 2x500 ul CONJ Konjugat monoklonal anti human IgG HRPO braune Kappe gebrauchsfertig 1x13ml SUB Substrat TMB L sung blaue Kappe gebrauchsfertig 1x13ml STOP Stopp L sung H2SOs wei e Kappe gebrauchsfertig 1x7 ml 3 ZUS TZLICHES MATERIAL IM KIT e 2selbstklebende Abdeckfolien lunbeschichtete Mikrotiterplatte zur Vorverd nnung Arbeitsanleitung Beipacktext e QC Protokoll e Protokoll Blatt 4 ZUS TZLICH BEN TIGTES MATERIAL UND GER TE e Inkubator f r 37 C Kalibrierte Prazisionspipetten bzw Mehrkanalpipette f r 20 ul 50 ul 100 ul2. 30 minutes at room temperature 18 24 C 416 Aspirate and wash wells 4x with 300 1 diluted WASHBUF Wash buffer remove remaining WASHBUF by hitting plate against paper towel after the latest wash Add 100 uI SUB Substrate into each well Incubate for 15 min at room temperature 18 24 C in the dark Add 50 ul STOP Stop solution into each well Measure absorbance immediately at 450 nm with reference 630 nm if available 8 CALCULATION OF RESULTS Subtract the blank extinction from all other values Construct the standard curve from the standard values Use commercially available software or graph paper Obtain sample concentration from this standard curve Respective dilution factors have to be considered If the concentration of oLAB IgG in the sample exceeds 1 100 mU ml further dilution and measurement of the diluted sample is recommended The quality control protocol supplied with the kit shows the results of the final release QC for each kit Data for optical density obtained by customers may differ due to various influences and or due to the normal decrease of signal intensity during shelf life However this does not affect validity of results as long as an optical density of 1 00 or higher is obtained for the standard with the highest concentration 9 ASSAY CHARACTERISTICS Median 263 mU ml n 50 Normal range 9 Each laboratory has to establish its own reference range for the samples under investigation Standard
3. Einfl sse und oder dem normalen Signalverlust des Kits w hrend der Laufzeit Dieser m gliche Signalverlust hat keinen Einfluss auf die G ltigkeit der Resultate so lange die OD des h chsten Standards den Wert 1 00 oder h her erreicht 9 TESTMERKMALE Weer Median 263 mU ml n 50 Jeder Verwender sollte den Normalbereich seiner Proben evaluieren Standardbereich 37 bis 1 200 mU ml Probenvolumen 50 uI humanes Serum Detektionsgrenze 48 mU ml 37 mU ml 3x SD Inkubationszeiten 1 5 h 30 min 15 min 9 16 1 0 PR ZISION Intra Assay n 8 Probe 1 Probe 2 Inter Assay n 5 Probe 1 Probe 2 Durchschnitt mU ml 119 324 Durchschnitt mU ml 139 544 SD mU ml 4 14 SD mU ml 11 22 VK 4 4 VK 8 4 11 TECHNISCHE MERKMALE Reagenzien von verschiedenen Lots oder Testen d rfen nicht gemischt werden St psel oder Verschl sse von verschiedenen Reagenzien d rfen nicht vertauscht werden Abgelaufene Reagenzien d rfen nicht verwendet werden Reagenzien sind vor direktem Sonnenlicht zu sch tzen Substratl sung muss vor Verwendung farblos sein Mikrotiterstreifen m ssen w hrend der Inkubationen mit Abdeckfolie abgedeckt sein Vermeiden Sie Schaumbildung beim Mischen der Reagenzien 12 VORSICHTSMASSNAHMEN Alle Bestandteile humanen Ursprunges wurden auf HIV Ak und HBsAg getestet und negativ gefunden Trotzdem sollten die Reagenzien als potentiell infekti s behandelt werden Die fl ssigen Reagenzien enthalten lt 0 1 Procli
4. der unbeschichteten Mikrotiterplatte Pipettieren Sie 50 ul STD SAMPLE CTRL Standard Proben Kontrollen in die Wells gut mischen Achtung Verwenden Sie vorverd nnte Proben innerhalb von 15 Minuten F r den weiteren Testansatz folgen Sie Kapitel 7 TESTPROTOKOLL 6 TESTPRINZIP k lt gt t 4 3 M 1 COATED OX LDL A 2 CAL SAMPLE CTRL 3 CONJ O pi 4 SUB I ENZYME CATALYZED J Y COLOUR CHANGE 7 TESTPROTOKOLL Im Test d rfen nur Reagenzien und Proben verwendet werden welche Raumtemperatur 18 24 C aufweisen Markieren Sie die Positionen f r BLANK STD PROBE CTRL Leerwert Standard Probe Kontrolle am Protokollblatt Nehmen Sie die ben tigten Mikrotiterstreifen aus dem Alu Beutel Mindestens 1 Well f r den Leerwert reservieren Nicht verwendete Mikrotiterstreifen k nnen mit Trockenmittel im Alu Beutel bis zum angegebenen Ablaufdatum gelagert werden 8 16 Pipettieren Sie 200 u1 ASYBUF Verd nnungspuffer in die entsprechenden Wells der beschichteten Mikrotiterstreifen inklusive Leerwert Pipettieren Sie 20 ul 1 5 vorverd nnte STD SAMPLE CTRL Standard Probe Kontrolle in die vorgesehenen Wells der beschichteten Mikrotiterstreifen gut mischen ACHTUNG Dieser Schritt muss innerhalb von 15 Minuten ab der Vorverd nnung abgeschlossen sein Verwenden Sie eine Mehrkanalpipette Streifen abdecken und 1 5 Stunden bei 37 C inkubieren Inhalt der Wells verwerfen und 4x mit 300 ul verd nnten WASHBU
5. range 37 to 1 200 mU ml Sample volume 50 ul human serum Detection Limit 48 mU ml 37 mU ml 3x SD Incubation time 1 5 h 30 min 15 min 10 PRECISION Intra Assay n 8 Sample 1 Sample 2 Inter Assay n 5 Sample 1 Sample 2 Mean mU ml 119 324 Mean mU ml 139 544 SD mU ml 4 14 SD mU ml 11 22 CV 4 43 CV 8 4 1 TECHNICAL HINTS Donot mix or substitute reagents with those from other lots or sources Do not mix stoppers and caps from different reagents or use reagents between lots Do not use reagents beyond expiration date e Protect reagents from direct sunlight e Substrate solution should remain colourless until added to the plate e Toensure accurate results proper adhesion of plate sealers during incubation steps is necessary e Avoid foaming when mixing reagents 5 16 12 PRECAUTIONS All test components of human source were tested against HIV Ab and HBsAg and were found negative Nevertheless they should be handled and disposed as if they were infectious Liquid reagents contain lt 0 1 Proclin 300 as preservative Avoid contact with skin and mucous membrane Proclin 300 is not toxic in concentrations used in this kit It may cause allergic skin reactions avoid contact with skin or eyes Do not pipette by mouth Do not eat drink smoke or apply cosmetics where reagents are used Avoid all contact with reagents by using gloves Sulfuric acid is irritating to eyes and skin Flush with water if cont
6. und 200 ul inkl Pipettenspitzen e Mikrotiterplattenphotometer mit 450 nm Filter 630 nm Referenz e Millimeterpapier oder Software Mikrotiterplatten Wascher wird empfohlen Destilliertes oder deionisiertes Wasser 7 16 5 REAGENZIEN UND PROBENVORBEREITUNG Alle gebrauchsfertigenReagenzien des Kits sind bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum siehe Etikett des Reagenz haltbar Proben m ssen bei 20 C gelagert werden falls sie nicht am gleichen Tag getestet werden F r eine Langzeitlagerung empfehlen wir 70 C Lip mische und h molytische Proben k nnen falsche Ergebnisse liefern und d rfen nicht verwendet werden Proben vor Verwendung gut mischen Humane Plasma Proben d rfen nicht verwendet werden WASHBUF Waschpuffer Das mitgelieferte Konzentrat wird 1 20 verd nnt zB 50 ml WASHBUF 950 mi destilliertes Wasser Kristalle im Pufferkonzentrat l sen sich bei Raumtemperatur auf Unverd nnter WASHBUF ist bei 4 C 2 8 C bis zum Ablaufdatum haltbar Der verd nnte WASHBUF ist bei 4 C 2 8 C bis zu einem Monat haltbar Im Testsystem darf nur verd nnter WASHBUF verwendet werden VORVERD NNUNG Alle STD SAMPLE CTRL Standard Proben Kontrolle m ssen im Test 1 55 Vorverd nnung 1 5 Testverd nnung 1 11 endverd nnt werden Verwenden Sie die unbeschichtete Mikrotiterplatte f r den 1 5 Vorverd nnungsschritt Gehen Sie wie folgt vor Pipettieren Sie 200 ul ASYBUF Verd nnungspuffer in die vorgesehenen Wells
7. ENTO EN EL KIT e 2tiras adhesivas de pl stico e Una placa para preparer la diluci n de las muestras e Hoja con el esquema del protocolo e Manual de instrucciones e Protocolo de ensayo y listado 4 MATERIAL Y EQUIPAMIENTO REQUERIDO QUE NO SE SUMINISTRA e Incubador para 37 C e Pipetas de precision calibradas de 50 200 yl y puntas desechables e Pipetas multicanalpara 20 100 y 200 uL e Lector de ELISA con capacidad para leer absorbancias a 450 nm 6 desde 450 nm a 630 nm Papel para representaci n gr fica o programa inform ticopara el c lculo de los resultados e Serecomienda utilizar lavador autom tico de placas Agua destilada o desionizada 11 16 5 PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y DE LAS MUESTRAS Todos los reactivos en el kit son estables a 4 C 2 8 C hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta de cada reactivo Las muestras deben almacenarse a 20 C y para periodos prolongados almacenar a 70 C Todas las muestras pueden someterse nicamente a 4 ciclos de congelaci n descongelaci n Las muestras lip micas o hemolizadas pueden conducir a resultados err neos Las muestras deben ser homogeneizadas antes de procesarse Se recomienda la realizaci n de duplicados para todos los valores Este test no ha sido dise ado para muestras de plasma WASHBUF Tamp n de lavado Diluir el concentrado 1 20 e g 50 ml WASHBUF 950 ml de agua destilada Si aparecen cristales en el tamp n concentrado pueden di
8. F Waschpuffer waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugf higem Papier entfernen Pipettieren Sie 100 u CONJ Konjugat in alle Wells mit Ausnahme des Leerwerts Streifen abdecken und 30 Minuten bei Raumtemperatur 18 24 C inkubieren Inhalt der Wells verwerfen und 4x mit 300 ul verd nnten WASHBUF Waschpuffer waschen Nach dem letzten Waschschritt Reste von Waschpuffer durch Ausklopfen auf saugf higem Papier entfernen Pipettieren Sie 100 u SUB Substrat in alle Wells 15 Minuten bei Raumtemperatur 18 24 C im Dunkeln inkubieren Pipettieren Sie 50 ul STOP Stoppl sung in alle Wells Extinktion unmittelbar bei 450 nm messen mit 630 nm als Referenz falls m glich 8 BERECHNUNG DER ERGEBNISSE Die OD des Leerwertes ist von allen Wells abzuziehen Konstruieren Sie eine Standardkurve aus den Werten der Standards unter Verwendung von kommerziell erh ltlichem Millimeterpapier oder einer geeigneten Software Die Konzentration der Proben wird aus der Standardkurve abgelesen Eventuell verwendete Verd nnungen m ssen ber cksichtigt werden bersteigt die oLAB IgG Konzentration der Probe 1 100 mU ml empfehlen wir weitere Verd nnungsschritte mit anschlie ender neuerlicher Austestung Im beigepackten QC Protokoll sind die Resultate bei der QC Freigabe der jeweiligen Kit Lot vermerkt Vom Verwender erhaltene Daten der optischen Dichte OD k nnen abweichend sein bedingt durch verschiedene
9. OLAB IgG ANTI OXIDISED LOW DENSITY LIPOPROTEIN ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF HUMAN IgG AUTOANTIBODIES AGAINST OXIDISED LOW DENSITY LIPOPROTEIN IN SERUM CAT NO BI 20032 12 X 8 TESTS ENZYMIMMUNOASSAY ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG VON HUMANEN IgG AUTOANTIK RPERN GEGEN OXIDIERTES LOW DENSITY LIPOPROTEIN IN SERUM KAT NR BI 20032 12 X 8 TESTS ENZIMOINMUNOENSAYO PARA LA DETERMINACION CUANTITATIVA DE IgG AUTOANTICUERPOS CONTRA LA FORMA OXIDADA DE LDL EN SUERO CAT NO BI 20032 12 X 8 TESTS rev no 141028 replacing 080606 Biomedica Medizinprodukte GmbH amp Co KG A 1210 Wien Divischgasse 4 Tel 43 1 291 07 45 Fax 43 1 291 07 85 E mail export Q bmgrp com 1 16 CONTENT INHALT CONTENIDO 1 ENGLISH 3 2 DEUTSCH 7 3 ESPANIOL 11 Additional information on our products is available on our website Zus tzliche Information zu unseren Produkten ist auf unserer Homepage erh ltlich Encontrar informaci n adicional sobre nuestros productos en nuestra p gina web www bmgrp com 2 16 1 INTRODUCTION Oxidized low density lipoprotein oLDL is believed to play a critical role in the development and progression of atherosclerosis Accumulation of oLDL in macrophages and smooth muscle cells causes foam cell formation an initial step in the disease Autoantibodies against oxidatively modified LDL can be used as a parameter that consistently mirrors the occurrence of oxidation pr
10. act occurs Avoid contact with skin and mucous Irritations are possible Flush with water after contact 13 LITERATURE Evaluation of the atherogenic tendency of lipids and lipoprotein content and their relationships with oxidant antioxidant System in patients with psoriasis Vanizor Kural B et al Clin Chim Acta 2003 Feb 328 1 2 71 82 Circulating autoantibodies to oxidized LDL correlate with impaired coronary endothelial function after cardiac transplantation Fang JC et al Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002 Dec 1 22 12 2044 8 Autoantibodies to malondialdehyde modified low density lipoprotein in patients with angiographically confirmed coronary artery disease McDowell A et al J Pharm Pharmacol 2002 Dec 54 12 1651 7 6 16 1 EINLEITUNG Oxidiertes Low Density Lipoprotein oLDL ist offenbar ein wichtiger Faktor bei der Entstehung und Entwicklung von Athero sklerose In Makrophagen und glatten Muskelzellen akkumuliert OLDL und bewirkt dadurch die Entstehung von Schaumzellen die Grundlage f r die Entstehung der Krankheit Neue Untersuchungen zeigen dass die Konzentration von Autoantik rpern gegen oxidativ ver ndertes LDL die ablaufenden Oxidationsprozesse wiederspiegelt Hohe Konzentrationen von Autoantik rpern gegen oLDL wurden im Serum von Patienten mit Herzkranzgef erkrankungen gemessen Au erdem zeigen aktuelle Studien eine Korrelation zwischen Autoantik rpern gegen oLDL und fortschreitender Karotid Atherosklerose
11. ample dilution e QC protocol Protocol sheet e Instruction manual for use 4 MATERIAL AND EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT SUPPLIED e Incubator for 37 C e Precision and multichannel pipettes calibrated to deliver 20 ul 50 ul 100 ul and 200 ul and disposable tips e ELISA reader for absorbance at 450 nm or from 450 nm to 630 nm e Graph paper or software for calculation of results Plate washer is recommended for washing e Distilled or deionised water 3 16 5 REAGENTS AND SAMPLE PREPARATION All reagents as supplied in the kit are stable at 4 C 2 8 C until expiry date stated on the label of each reagent Samples should be stored at 20 C if not assayed on the same day long term storage at 70 C Do not use lipemic or haemolysed samples Samples should be mixed well before assaying The test system is not designed for plasma WASHBUF Wash buffer Dilute the concentrate 1 20 e g 50 ml WASHBUF 950 ml distilled water Crystals in the buffer concentrate will dissolve at room temperature Undiluted WASHBUF is stable at 4 C 2 8 C until expiry date stated on label Diluted buffer is stable at 4 C 2 8 C for one month Use only diluted WASHBUF for the assay performance PREDILUTION All STD SAMPLE CTRL standard sample control must be used in 1 55 end dilution pre dilution 1 5 assay dilution 1 11 in the assay Use the enclosed uncoated microtiter plate for the 1 5 pre dilution step e Add 200 ul ASYBUF Assay b
12. ation of the atherogenic tendency of lipids and lipoprotein content and their relationships with oxidant antioxidant system in patients with psoriasis Vanizor Kural B et al Clin Chim Acta 2003 Feb 328 1 2 71 82 Circulating autoantibodies to oxidized LDL correlate with impaired coronary endothelial function after cardiac transplantation Fang JC et al Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002 Dec 1 22 12 2044 8 Autoantibodies to malondialdehyde modified low density lipoprotein in patients with angiographically confirmed coronary artery disease McDowell A et al J Pharm Pharmacol 2002 Dec 54 12 1651 7 14 16 is IVD LOT lt HEI SYMBOLS Expiry date Verfallsdatum Date de p remption Data di scadenza Fecha de caducidad Data de validade Uiterste gebruiksdatum Udlobsdato Utg ngsdatum Termin Waznosci Lej rati id Doba exspir cie Doba exspirace Consider instructions for use Bitte Gebrauchsanweisung beachten Consultez la notice d utilisation Consultare le istruzioni per l uso Consulte las instrucciones de utilizaci n Consulte as instruc es de utilizac o Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Se brugsanvisningen L s anvisningarna f re anv ndning Prosze przeczyta instrukcje wykonania Vegy k figyelembe a haszn lati utas t sban foglaltakat Postupujte pod a pokynov na pou itie Postupujte dle n vodu k pou it In vitro Diagnostic Medical Device for in Vitro Diagnostic Us
13. cillos incluido el blanco A adir 20 ul de STD SAMPLE CTRL a los pocillos respectivos excepto para el blanco Utilizar pipeta multicanal Este paso se debe completar en 15 minutos desde el paso de prediluci n 12 16 Tapar con cuidado e incubar durante 1 5 horas a 37 C Aspirar y lavar los pocillos 4x con 300 ul de WASHBUF diluido Tamp n de lavado eliminar el WASHBUF remanente golpeando la placa suavemente sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado A adir 100 ul de CONJ Conjugado a cada pocillo excepto para el blanco Tapar con cuidado e incubar durante 30 minutos a 18 24 C Aspirar y lavar los pocillos 4x con 300 uI de WASHBUF diluido tamp n de lavado eliminar el WASHBUF remanente golpeando la placa suavemente sobre papel absorbente despu s del ltimo lavado A adir 100 yl de SUB Substrato en cada pocillo Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente 18 24 C en oscuridad A adir 50 ul de soluci n de parada Stop solution a cada pocillo agitar con cuidado Medir la absorbancia inmediatamente a 450 nm y utilizar como referencia un filtro de 630 nm si est disponible 8 CALCULO DE RESULTADOS Restar el valor del blanco a todos los dem s valores Realizar una curva est ndar a partir de los valores de los est ndares Utilizar un programa inform tico comercial o un papel de representaci n gr fica Obtener el valor de la concentraci n de la muestra a partir de la curva est ndar Se deben considera
14. e In vitro Diagnostikum zur In vitro Diagnostik Dispositif m dical de diagnostic in vitro Pour usage diagnostique in vitro Dispositivo medico per diagnostica in vitro per uso diagnostico in vitro Dispositivo m dico de diagn stico in vitro para uso diagn stico in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Para utiliza o de diagn stico in vitro Medisch hulpmiddel voor diagnostiek in vitro Voor diagnostisch gebruik in vitro Medicinsk udstyr til in vitro diagnostik Udelukkende til in vitro diagnostisk anvendelse Medicinteknisk produkt avsedd f r in vitro diagnostik F r in vitro diagnostiskt bruk Wyr b medyczny do Diagnostyki In Vitro In vitro orvosdiagnosztikai term k In vitro diagnostick zdravotn cky materi l ur en pre diagnostiku in vitro In vitro diagnostick zdravotnicky materi l ur eno pro diagnostiku in vitro Lot Batch Number Charge Chargennummer Lot Code du lot Lotto Numero di lotto Lote C digo de lote Lote Codigo do lote Lot Partijnummer Lot Batchkode Lot Satskod Numer serii Lot Batch sz m slo ar e C slo ar e Manufactured by Hergestellt von Fabriqu par Prodotto da Fabricado por Fabricado por Vervaardigd door Fabrikation af Tillverkad av Wyprodukowane pr Gy rtotta Vyroben Vyrobeno Catalogue Number Bestellnummer Num ro de r f rence Numero di riferimento N mero de referencia N me
15. n 300 als Konservierungsmittel Vermeiden Sie Kontakt mit Augen Haut und Schleimhaut Proclin 300 ist in der verwendeten Konzentration nicht toxisch Allergische Reaktionen sind m glich Nicht mit dem Mund pipetieren Nicht Rauchen Essen Trinken oder Kosmetika benutzen w hrend der Verwendung der Testreagenzien Verwenden Sie Handschuhe zur Vermeidung jedes Kontaktes mit Reagenzien Schwefels ure reizt Augen und Haut Bei Ber hrung gr ndlich mit Wasser sp len 13 LITERATUR Evaluation of the atherogenic tendency of lipids and lipoprotein content and their relationships with oxidant antioxidant System in patients with psoriasis Vanizor Kural B et al Clin Chim Acta 2003 Feb 328 1 2 71 82 Circulating autoantibodies to oxidized LDL correlate with impaired coronary endothelial function after cardiac transplantation Fang JC et al Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002 Dec 1 22 12 2044 8 Autoantibodies to malondialdehyde modified low density lipoprotein in patients with angiographically confirmed coronary artery disease McDowell A et al J Pharm Pharmacol 2002 Dec 54 12 1651 7 10 16 1 INTRODUCCION La forma oxidada de la LDL oLDL se cree que juega un papel principal en el desarrollo y progresi n de la ateroesclerosis La acumulaci n de oLDL en macr fagos y c lulas musculares lisas conduce a la formaci n de las c lulas espumosas la etapa inicial de la enfermedad Los autoanticuerpos contra la forma oxidada de la LDL
16. ocesses taking place in vivo In fact elevated levels of autoantibodies against oLDL have been detected in the blood stream of patients with coronary artery disease Moreover recent studies indicate a correlation between autoantibodies against oLDL and the progression of carotid atherosclerosis Increased serum concentrations of oLAB have also been described in various diseases such as pre eclampsia and systemic lupus erythematosus Decreased OLAB titers were observed during septicemia and myocardial infarction An overview on the clinical applications of oLAB has been published POSSIBLE INDICATIONS atherosclerosis coronary artery disease risk stratification from myocardial infarction acute septicemia 2 CONTENTS OF THE KIT CONT KIT COMPONENTS QUANTITY PLATE Oxidised LDL coated microtiterstrips in stripholder packed in alubag with desiccant 12 x 8 tests ASYBUF Assay buffer red cap ready to use 1x 60 ml WASHBUF Wash buffer concentrate 20x natural cap 1x50 ml STD Standards 37 75 150 300 600 1 200 mU ml oLAB IgG white caps ready to use 6x 500 ul CTRL Controls 300 1 000 mU ml yellow caps ready to use 2 x 500 ul CONJ Conjugate monoclonal anti human IgG HRPO amber cap ready to use 1x13 ml SUB Substrate TMB solution blue cap ready to use 1x 13 ml STOP Stop solution H2SO4 white cap ready to use 1x7ml 3 ADDITIONAL MATERIAL INCLUDED IN THE KIT 2 self adhesive plastic films e 1 uncoated microtiter plate for s
17. r los factores de diluci n respectivos Indicaciones sobre los resultados Si la concentraci n de oLAB IgG en las muestras excede 1 100 mU mL se recomienda diluci n adicional y medida de las muestras diluidas El certificado del control de calidad que se suministra con el kit muestra los resultados del ltimo control de calidad que se realiza antes de la liberaci n del cada kit Los datos de la densidad ptica obtenidos por los clientes pueden diferir debido a diversos factores y o debido a una disminuci n normal de la intensidad de la se al a lo largo de la vida media Sin embargo esto no afecta a la validez de los resultados siempre que se obtenga un valor de 1 0 para la densidad ptica del est ndar de concentraci n m s elevada 9 CARACTERISTICAS DEL ENSAYO Rango Normal Mediana 263 mU mL n 50 Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de normalidad Rango estandard 37 1 200 mU mL Volumen de muestra 50 uL de suero humano Limite de Deteci n 48 mU mL Tiempo de Incubaci n 1 5 h 30 min 15 min 10 PRECISION Intra Ensayo n 8 Muestra 1 Muestra 2 Inter Ensayo n 5 Muestra 1 Muestra 2 Media mU ml 119 324 Media mUl ml 139 544 SD mU ml 4 14 SD mU ml 11 22 CV 4 4 CV 8 4 13 16 11 OBSERVACIONES TECNICAS No mezclar o sustituir reactivos de diferentes lotes o fabricantes No mezclar los tapones de los viales de diferentes reactivos o de reactivos de diferentes lotes No utilizar lo
18. ro de refer ncia Referentienummer Referencenummer Katalognummer Numer katalogowy Katal gussz m Katal gov slo Katalogov slo Store at between Lagerung bei zwischen Conserver entre Conservare a tra Conservar a temp entre Armazene a entre Bewaar bij tussen Opbevares mellem F rvaras vid Przechowywa w T roljuk k z tt Skladujte v rozsahu Skladujte v rozmez Contains sufficient for x tests Inhalt ausreichend f r x Tests Contient suffisant pour x tests Contenuto sufficiente per x test Contiene suficiente para x pruebas Cont m suficiente para x testes Bevat voldoende voor x bepalingen Indeholder tilstr kkeligt til x pr ver Inneh llet r cker till x analyser Zawarto na x test w Tartalma X teszt elv gz s re elegend Obsahuje materi l pre x testov Obsahuje materi l pro x test 15 16 D D Ooo oOo BI 20032 OLAB IgG ASSAY PROTOCOL AND CHECKLIST Bring all reagents to room temperature 18 24 C Prepare reagents and samples as instructed Bring unused and prepared components to the storage temperature mentioned in the package insert Take coated microtiter strips out of the alu bag and mark positions on the protocol sheet Add 200 ul ASYBUF Assay buffer into each well of the coated microtiterstrips Add 20 yl 1 5 prediluted STD SAMPLE CTRL into each well except blank swirl gently Use a multichannel pipette This step mus
19. s reactivos despu s de la fecha de caducidad Proteger los reactivos de la acci n directa de la luz solar La soluci n de substrato deber a permanecer incolora hasta que se a ada a la placa Para asegurar unos resultados m s exactos tapar la placa con el papel adhesivo durante los pasos de incubaci n Evitar la formaci n de espuma al mezclar los reactivos 12 PRECAUCIONES Todos los componentes de procedencia humana fueron testados frente a la presencia de anticuerpos HIV y al ant geno de superficie de la Hepatitis B con resultado negativo Sin embargo deber an manipularse y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso Los reactivos l quidos contienen lt 0 1 de Proclin 300 como conservante El Timerosal es toxico Evitar el contacto con la piel con las membranas mucosas La Proclina 300 no es t xica en las concentraciones empleadas en este kit Puede provocar reacciones al rgicas en la piel evitar el contacto con la piel los ojos No pipetear con la boca No comer o beber o aplicarse cosm ticos en las zonas de manipulaci n de los reactivos Evitar el contacto con los reactivos utilizando guantes El cido sulf rico es irritante para los ojos y la piel Enjuagar con abundante agua si se produce contacto Evitar el contacto con la piel y con las membranas mucosas Puede presentarse irritaci n Si tine lugar un contacto enjuagar con abundante agua 13 LITERATURA Evalu
20. se pueden emplear como par metro que refleja la incidencia del proceso de oxidaci n que tiene lugar in vivo De hecho se han detectado niveles elevados de los autoanticuerpos contra OLDL en la sangre de pacientes con enfermedades coronarias de arteria Adem s estudios recientes han demostrado una correlaci n entre autoanticuerpos contra oLDL y la progresi n de ateroesclerosis de car tida Tambi n se ha descrito un aumento de de la concentraci n en suero de oLAB en diversas enfermedades como pre eclampsia y lupus eritomatoso sist mico Por otro lado se han observado niveles bajos de oLAB durante procesos de septicemia e infarto de miocardio Se ha publicado una revisi n de las aplicaciones cl nicas de oLAB 2 CONTENIDO DEL KIT CONT COMPONENTES DEL KIT CANTIDAD PLATE Tiras de micropocillos Belle con LDL oxidada incorporadas en un soporte e 12 x 8 tests incluidas en una bolsa de aluminio con desecante ASYBUF Assay buffer tap n rojo lista para usar 1x60 ml WASHBUF Tamp n de lavado concentrado 20x tap n transparente 1x50 ml STD oo 37 75 150 300 600 1 200 mU ml OLAB IgG tap n blanco lista para 6 x 500 yl CTRL Controles 300 1 000 mU ml tap n amarillo lista para usar 2x 500 ul CONJ Conjugado anticuerpo de human anti IgG HRPO tap n mbar lista para usar 1x13ml SUB Substrato soluci n de TMB tap n azul listo para usar 1x13ml STOP Soluci n de parada tap n blanco lista para usar 1x7ml 3 MATERIAL Y EQUIPAMI
21. solverse a temeperatura ambiente El tamp n sin diluir es estable a 4 C 2 8 C hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta Si el WASHBUF est diluido se mantiene estable durante un periodo de un mes como m ximo a 4 C 2 8 C PREDILUCION todos los STD SAMPLE CTRL standard muestra control deben ser usados a una diluci n 1 55 pre diluci n 1 5 ensayo diluci n 1 11 e A adir 200 ul ASYBUF Assay buffer en los pocillos de la placa microtiter que est sin recubrir sin anticuerpo e A adir 50 ul STD SAMPLE CTRL standard sample control a los pocillos mezclar bien diluci n 1 5 ATENCION LA TRANSFERENCIA DE STD SAMPLE CTRL PREDILUIDOS A LAS TIRAS DE LA PLACA SE DEBE COMPLETAR EN 15 MINUTOS Seguir el 7 PROTOCOLO DEL ENSAYO 6 PRINCIPIO DEL ENSAYO 1 COATED OX LDL 2 CAL SAMPLE CTRL gt s 3 CONJ MA lt 4 4 SUB ENZYME CATALYZED COLOUR CHANGE 7 PROTOCOLO DEL ENSAYO Todos los reactivos y las muestras deben alcanzar la temperatura ambiente 18 24 C antes de su utilizaci n en el ensayo Marcar la posici n de BLAN STD MUES CTRL Blanco Est ndar muestra Control en la hoja del esquema de la placa Sacar las tiras de la bolsa de aluminio emplear como m nimo un pocillo como blanco Almacenar las tiras no utilizadas en la bolsa de aluminio con desecante a 4 C 2 8 C Las tiras son estables hasta la fecha de caducidad indicada en su etiqueta A adir 200 uL del assay buffera los po
22. t be completed within 15 minutes from the predilution Cover tightly and incubate for 90 minutes at 37 C Aspirate and wash wells with 300 u WASHBUF Wash buffer four times Remove remaining buffer by hitting plate against paper towel Add 100 ul CONJ Conjugate into each well except blank Cover tightly and incubate for 30 minutes at room temperature 18 24 C Aspirate and wash wells with 300 ul WASHBUF Wash buffer four times Remove remaining buffer by hitting plate against paper towel Add 100 ul SUB Substrate into each well Incubate for 15 minutes at room temperature 18 24 C in the dark Add 50 ul STOP Stop solution into each well Read Optical Density at 450 nm with reference 630 nm if available 16 16
23. uffer into the appropriate wells of the uncoated microtiter plate e Add 50 ul STD SAMPLE CTRL standard sample control into the wells mix well 21 5 dilution Note Pre diluted material must be used in the assay within 15 minutes Follow chapter 7 ASSAY PROTOCOL 6 PRINCIPLE OF THE ASSAY 1 COATED OX LDL Ww 2 CAL SAMPLE CTRL y 3 CONJ 4 4 lt 4 SUB ENZYME CATALYZED COLOUR CHANGE 7 ASSAY PROTOCOL All reagents and samples must be at room temperature 18 24 C before use in the assay Mark position for BLANK STD SAMPLE CTRL Blank Standard Sample Control on the protocol sheet Take microtiter strips out of the alu bag take a minimum of one well as Blank Store unused strips with desiccant at 4 C 2 8 C in the alu bag Strips are stable until expiry date stated on the label Add 200 ul ASYBUF Assay buffer into respective wells of the coated microtiter strips including blank Add 20 ul 1 5 pre diluted STD SAMPLE CTRL into each well except blank swirl gently ATTENTION The transfer of the pre diluted STD SAMPLE CTRL into the coated microtiter strips must be completed within 15 minutes Use a Multichannel pipette Cover tightly and incubate for 1 5 hours at 37 C Aspirate and wash wells 4x with 300 p1 diluted WASHBUF Wash buffer Remove remaining WASHBUF by hitting plate against paper towel after the latest wash Add 100 ul CONJ Conjugate into each well except blank Cover tightly and incubate for
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