ELISA para IgM frente al HEV
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1. La soluci n del conjugado de trabajo y el tamp n de lavado diluido deben estar reci n preparados No exponga los reactivos ni realice los an lisis en un rea en la que exista un nivel elevado de vapores de desinfectantes qu micos p ej vapores de hipoclorito durante las etapas de almacenamiento y de incubaci n ya que el contacto con los mismos inhibe la reacci n colorim trica Los reactivos tampoco deben exponerse a la luz intensa Deje las microplacas en su bolsa de almacenamiento hasta el momento inmediatamente anterior a su uso Las tiras abiertas que no se hayan utilizado deben conservarse a 2 C 8 C dentro de su bolsa de almacenamiento y con el desecante suministrado Los controles del kit deben analizarse al mismo tiempo que las muestras cl nicas en cada serie de an lisis Debe evitarse tocar o salpicar el borde del pocillo con el conjugado No exprima la micropipeta Se aconseja el pipeteo invertido siempre que sea posible El uso de muestras muy hemolizadas sueros no totalmente coagulados muestras de plasma con fibrina o muestras con contaminaci n microbiana puede causar resultados err neos NO INCUBE LAS PLACAS AL BA O MAR A No deben usarse incubadoras de CO Durante la incubaci n a 37 C es necesario evitar la evaporaci n Cubra las placas con las tapas adhesivas suministradas a tal fin Evite abrir y cerrar repetidamente la puerta del incubador durante las etapas de incubaci n2. No almacene la soluci n de parada en una placa plana ni la devuelva a un frasco de reserva despu s de usarla Aseg rese de que el fondo de la placa est limpio y seco y que la superficie del l quido no presente burbujas antes de leer la placa Elimine todas las burbujas del pocillo por ejemplo mediante golpecitos suaves Aseg rese de que el equipo automatizado haya sido validado antes de su uso Para evitar la contaminaci n por arrastre de muestras muy reactivas a muestras no reactivas es muy recomendable realizar el mantenimiento sistem tico del sistema de aspiraci n y lavado INSTRUCCIONES DE CONSERVACI N 1 Conserve el kit del ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD y sus componentes a 2 C 8 C cuando no se est utilizando 2 Todos los reactivos y microplacas de la prueba si se conservan a 2 C 8 C son estables hasta la fecha de caducidad que figura en el kit No congele los reactivos 3 Cuando el concentrado para el lavado de la placa 20x se conserva a 2 C 8 C pueden formarse cristales que deben disolverse por calentamiento a 37 C antes de su USO 4 Cuando el diluyente se conserva a 2 C 8 C puede precipitar ello no afecta al rendimiento del kit 5 Lasmicroplacas abiertas que no se hayan utilizado deben conservarse a 2 C 8 C en una bolsa cerrada y con el desecante suministrado RECOGIDA TRANSPORTE Y CONSERVACI N DE LAS MUESTRAS Las muestras deben conservarse a 2
3. EE Diagnostics ELISA para IgM frente al HEV CE FECHA DE REVISI N 05 05 MBL 0011 SPN 0 21160 096T kit de 96 an lisis NOMBRE Y USO PREVISTO El ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MP Diagnostics MPD es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas dise ado para la detecci n de anticuerpos IgM frente al virus de la hepatitis E HEV en suero o plasma humanos Nota Cambios resaltados INTRODUCCI N En regiones en desarrollo como Asia la antigua Uni n Sovi tica Centroam rica y Africa se ha observado el desarrollo de epidemias importantes de hepatitis no A no B de transmisi n ent rica HNANB TE 1 2 Tambi n se han notificado casos espor dicos en pa ses desarrollados como Australia Reino Unido y Estados Unidos 3 4 5 Los casos observados en los pa ses desarrollados se han asociado generalmente a viajes a zonas end micas En general el curso de la infecci n es agudo y la enfermedad remite espont neamente sin dejar secuelas cr nicas Sin embargo existe una elevada incidencia de mortalidad aproximadamente 10 20 en las mujeres embarazadas que se encuentran en el tercer trimestre de gestaci n 1 y la tasa de mortalidad es del 1 2 en la poblaci n general cifra que equivale a 10 veces la de la hepatitis A HAV La clonaci n del agente causal de la HNANB TE y la identificaci n de los ep topos v ricos comunes del genotipo 6 7 han hecho posible la creaci n de herramientas diagn
4. sticas espec ficas para detectar anticuerpos frente al virus de la hepatitis E HEV Estudios realizados en 1986 con ni os egipcios de la ciudad de Benha revelaron que la exposici n previa al HEV provoca una respuesta de IgG 8 que puede ser transitoria y desaparecer al cabo de 6 meses pero que en ocasiones dura hasta 8 a os o m s como se ha observado recientemente en un estudio efectuado en Taiw n 9 Se ha comprobado que la respuesta de IgM se limita a la fase aguda de la infecci n por el HEV Anteriormente la detecci n de la respuesta aguda en la infecci n por HEV se hac a mediante la observaci n con inmunoelectromicroscopia IME de las part culas v ricas en las heces de las personas infectadas o por reacci n en cadena de la polimerasa PCR 10 11 El equipo necesario para este m todo es caro y se precisa tambi n personal experto en la t cnica Adem s la eliminaci n de part culas v ricas suele producirse en peque as cantidades que pueden no alcanzar una concentraci n suficiente para su detecci n El ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MP Diagnostics utiliza ant genos de HEV recombinante de la regi n estructural del genoma v rico para detectar la presencia de anticuerpos IgM asociados a la infecci n aguda DESCRIPCI N DE LOS S MBOLOS A continuaci n figuran los signos gr ficos que aparecen en los envases y productos de MP Diagnostics y que son los que se incluyen con m s frecuencia en los dispo
5. C 8 C si el an lisis se va a llevar a cabo en los 7 d as posteriores a la extracci n O congelarse a una temperatura de al menos 20 C si el an lisis se va a retrasar m s de 7 d as Es preferible utilizar muestras transparentes y no hemolizadas Las muestras lip micas ict ricas o contaminadas por part culas deben filtrarse 0 45 um o centrifugarse antes del ensayo El suero de los pacientes puede estar inactivado pero no es un requisito indispensable para el rendimiento ptimo del an lisis Para efectuar la inactivaci n 1 Afloje las tapas de los recipientes con el suero 2 Caliente el suero a 56 C durante 30 minutos al ba o Mar a 3 Deje enfriar el suero antes de volver a ajustar las tapas 4 El suero puede conservarse congelado hasta el an lisis Recomendamos que el suero de los pacientes no se someta a ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n MATERIAL ADICIONAL NECESARIO NO SUMINISTRADO 1 Papel absorbente desechable para el banco de trabajo y toallas de papel 2 Recipientes o tubos de polipropileno 3 Pipetas graduadas 5 mi 10 ml 4 Pipeteador multicanal capaz de dispensar 50 ul 100 pl y 200 pl 5 Pipeteador capaz de dispensar 1 1000 pl 6 Puntas de pipeta desechables 7 Recipientes para reactivos cubetas con capacidad para 25 ml 8 Agua destilada o desionizada de calidad para an lisis 9 Matraces 500 mi 1 litro 10 Incubador a 37 C 11 Lector de p
6. Conservar a 2 C 8 C CONJUGATE IgM T CONJUGADO 1 vial Anticuerpo monoclonal de rat n 70 ul anti lgM humana marcado con peroxidasa de r bano Contiene un 0 02 de timerosal como conservante Conservar a 2 C 8 C SUSTRATO 1 frasco SUBS TMB Tamp n con 3 3 5 5 12 5 ml tetramethylbenzidine Conservar en la oscuridad a 2 C 8 C SOLN STOP HCI N SOLUCI N DE PARADA 1 frasco AN Soluci n de cido clorhidrico 1 N 30 ml Conservar en la oscuridad a 2 C 8 C TAPAS PARA PLACA 4 piezas Tapas adhesivas para cubrir la microplaca durante la incubaci n MANUAL DE INSTRUCCIONES 1 copia Bronidox es una marca registrada de Henkel Chemical Co ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro nicamente 2 Para uso exclusivo por profesionales 3 Consulte el prospecto del producto para obtener informaci n sobre los componentes potencialmente peligrosos INFORMACI N SANITARIA Y DE SEGURIDAD PRECAUCIONES Este kit contiene productos de origen humano Ning n m todo de an lisis A N permite ofrecer una garant a absoluta de que los hemoderivados humanos no transmitan una infecci n MANIPULE LAS MUESTRAS Y LOS CONTROLES REACTIVOS Y NO REACTIVOS DEL ENSAYO COMO SI FUERAN POTENCIALMENTE INFECCIOSOS Se recomienda manipular los componentes del ensayo y las muestras de conformidad con las pr cticas correctas de laboratorio Asimismo deben desecharse siguiendo los procedimient
7. mismo El fabricante no ser responsable ante el comprador ni ante terceros de cualesquiera da os perjuicios o p rdidas econ micas provocados por la utilizaci n o la aplicaci n del producto El fabricante no realiza declaraci n alguna expresa ni impl cita acerca de que este producto no infrinja los derechos de propiedad intelectual de terceros PROBLEMAS T CNICOS Y RECLAMACIONES En caso de problemas t cnicos o si desea presentar una reclamaci n proceda de la siguiente manera 1 Anote el n mero de lote del kit y su fecha de caducidad 2 Conserve los kits y los resultados obtenidos 3 P ngase en contacto con la oficina de MP Biomedicals m s cercana o con su distribuidor local BIBLIOGRAF A 1 Bradley D W 1990 Enterically transmitted non A non B hepatitis pp 442 461 In A J Zuckerman ed British Medical Bulletin 46 2 Churchill Livingstone Nueva York 2 Purcell R H and J R Ticehurst 1988 Enterically transmitted non A non B hepatitis Epidemiology and clinical characteristics pp 131 137 In A J Zuckerman ed Viral Hepatitis and Liver Disease Alan R Liss Inc Nueva York 3 Moaven L D A J Fuller J C Doultree J A Marshall D S Bowden R A Moeckli and S A Locarnini 1993 A case of acute hepatitis E in Victoria Medical Journal of Australia 159 124 125 4 Skidmore S J P O Yarbough K A Gabor A W Tam G R Reyes A J E Flower 1991 Imported hepatitis E in UK The L
8. 8 19 20 B Lavado manual de la microplaca aspire la totalidad del contenido de todos los pocillos bajando la punta del aspirador lentamente hasta el fondo de cada pocillo TENGA CUIDADO DE NO ROZAR LA SUPERFICIE INTERIOR DEL POCILLO Llene la placa completa con al menos 300 ul pocillo y a continuaci n aspire inmediatamente en el mismo orden Repita este ciclo seis 6 veces Invierta la microplaca y presi nela con firmeza sobre papel absorbente para secarla El papel desecante debe eliminar cualquier resto del tamp n de lavado que quede en la placa ya que ste puede inhibir la aparici n de color durante la incubaci n del sustrato Llene un recipiente para reactivos con el CONJUGADO DE TRABAJO Mediante un pipeteador multicanal dispense 100 ul de CONJUGADO DE TRABAJO en cada pocillo Ponga otra tapa para placa Incube la microplaca durante 30 minutos a 37 C no use ba o Mar a a 37 C para la incubaci n Retire y deseche la tapa de la placa Repita el procedimiento de lavado descrito en los pasos 11 y 12 Llene un recipiente para reactivos con la SOLUCI N SUSTRATO Mediante un pipeteador multicanal dispense 100 pl de SOLUCI N SUSTRATO en cada pocillo Ponga una tapa para placa Incube durante 15 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente 25 3 C Retire y deseche la tapa de la placa Mediante un pipeteador multicanal dispense 100 ul de SOLUCI N DE PARADA en cada pocillo Mezcle s
9. RSE DE LOS VALORES DE ABSORBANCIA TANTO DE LOS CONTROLES COMO DE LAS MUESTRAS ANTES DE INTERPRETAR LOS RESULTADOS La presencia o ausencia de anticuerpos IgM espec ficos frente al HEV se determina relacionando la absorbancia de las muestras con el VALOR UMBRAL de la placa El VALOR UMBRAL del ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD se calcula como 0 400 la absorbancia media del control no reactivo C LCULO DE LOS RESULTADOS 1 C lculo de la absorbancia media del control no reactivo xCNR Ejemplo N de pocillo Absorbancia C1 0 010 D1 0 012 E1 0 008 Total 0 030 Media 0 030 3 0 010 XCNR Los valores individuales del control no reactivo deben ser menores o iguales a 0 100 unidades Si uno de los valores del control no reactivo no cumple los criterios anteriores debe considerarse an malo y excluirse En ese caso la media del control no reactivo XCNR debe volver a calcularse utilizando los valores individuales del control no reactivo restantes Todos los valores individuales del control no reactivo restantes deben cumplir los criterios de lo contrario el ensayo no es v lido y habr que repetirlo 2 C lculo de la absorbancia media del control reactivo XCR Ejemplo N de pocillo Absorbancia F1 0 758 G1 0 732 Total 1 490 Media 1 490 2 0 745 XCR Los valores individuales del control reactivo deben ser pero mayores o iguales a 0 500 unidades Si uno de los valores del control reactivo
10. ancet 337 1541 5 Dawson G J L K Mushahwar K H Chau G L Gittnick 1992 Detection of long lasting antibody to hepatitis E virus in a US traveller to Pakistan The Lancet 340 426 6 Reyes G R M A Purdy J P Kim K C Luk L M Young K E Fry and D Bradley 1990 Isolation of a cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non A non B hepatitis Science 247 1335 7 Yarbough P O A W Tam K E Fry K Krawczynski K A McCaustland D W Bradley and G R Reyes 1991 Hepatitis E virus Identification of type common epitopes Journal of Virology 65 5790 8 Goldsmith R P O Yarbough K E Fry K A Gabor M Kamel S Zakaria S Amer Y Gaffar 1992 Enzyme linked immunosorbent assay for diagnosis of acute sporadic hepatitis E in Egyptian children The Lancet 339 328 331 9 Lee S D Y J Wang R H Lu C Y Chan K J Lo R A Moeckli 1993 Seroprevalence of Antibody to Hepatitis E Virus among Chinese Subjects in Taiwan Hepatology Vol 19 No 4 1994 10 Balayan M S 1991 HEV Infection Historical Perspectives Global Epidemiology and Clinical Features In F B Hollinger S M Lemon and H Margolis editor Viral Hepatitis and Liver Disease Williams amp Wilkins Baltimore 11 Uchida T etal 1991 Virulence of Hepatitis E virus with Serial Passage to Cynomolgus Monkeys and Identification of Viremia In F B Hollinger S M Lemon and H Margolis editor Viral Hepatitis and Liv
11. ante un pipeteador multicanal a ada 200 ul de DILUYENTE en todos los pocillos Los pocillos A1 y B1 son BLANCOS NO A ADA MUESTRAS EN ESOS POCILLOS Vierta otros 10 ul de diluyente en estos pocillos A ada 10 ul de muestra al pocillo asignado empezando por el pocillo H1 Con ello obtendr una diluci n final de la muestra de 1 21 NO DISPENSE MUESTRA EN UN POCILLO VAC O Tras haber dispensado la muestra problema a ada 10 ul de CONTROL NO REACTIVO por pocillo a los pocillos C1 D1 y El Vierta 10 ul de CONTROL REACTIVO por pocillo en los pocillos F1 y G1 Mezcle bien mediante golpecitos suaves en todos los laterales de la microplaca asegur ndose de mantener la placa horizontal en la mesa de trabajo Cubra con cuidado la microplaca con una de las tapas suministradas para evitar la evaporaci n durante la incubaci n Incube durante 30 minutos a 37 C no use ba o Mar a a 37 C para la incubaci n Prepare el CONJUGADO DE TRABAJO tal y como se describe en PREPARACI N DE LOS REACTIVOS antes de lavar la microplaca Retire y deseche la tapa de la placa y lave la microplaca con el TAMP N DE LAVADO DILUIDO siguiendo uno de los dos m todos recomendados A Lavado autom tico O semiautom tico de la microplaca lave seis 6 veces con al menos 300 ul por pocillo por lavado 200 ul 10 pl 10 pl 10 pl 10 pl 30 minutos 300 ul por pocillo x 6 12 13 14 15 16 17 1
12. encialmente infeccioso con un papel absorbente y lave la zona contaminada con una soluci n de hipoclorito s dico al 1 antes de reanudar el trabajo El hipoclorito s dico no debe utilizarse para vertidos de cido contaminantes a menos que se seque la zona previamente con papel absorbente Para su eliminaci n el material utilizado incluidos los guantes desechables debe tratarse como material potencialmente biopeligroso No utilice el autoclave para el material que contenga hipoclorito s dico Esterilice en autoclave todos los materiales usados y contaminados a 121 C y 15 psi durante 30 minutos antes de desecharlos Otra opci n consiste en descontaminar los materiales con una soluci n de hipoclorito s dico al 5 durante 30 60 minutos antes de desecharlos en bolsas para residuos biopeligrosos Descontamine todos los productos qu micos y reactivos usados a adi ndoles un volumen de hipoclorito s dico suficiente como para conseguir una concentraci n final de al menos el 1 D jelos en reposo durante 30 minutos para lograr una descontaminaci n eficaz PRECAUCIONES ANAL TICAS 1 Para obtener un rendimiento ptimo del ensayo es necesario un CUMPLIMIENTO ESTRICTO del procedimiento descrito en el presente Manual de instrucciones Cualquier modificaci n del procedimiento puede provocar resultados an malos NO CAMBIE NI SUSTITUYA LOS REACTIVOS DE UN LOTE DEL KIT POR LOS DE OTRO Los controles el conjugado y las microplaca
13. er Disease Williams amp Wilkins Baltimore 12 Edward T Clayson Khin Saw Aye Myint Rapin Snitban David W Vaughn Bruce L Innis Lily Chan Peter Cheung Mrigendra P Shrestha Viremia Fecal Shedding and IgM and IgG Responses in Patients with Hepatitis E Journal of Infectious Diseases 1995 172 927 33 MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Singapur 118259 Tel 65 6775 0008 Fax 65 6775 4536 Correo electr nico enquiry_ap O mpbio com Medical Technology Promedt EC REP Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Alemania Tel 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Correo electr nico info mt procons com Oficinas regionales MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport Apartado de correos 1015 1211 Ginebra 5 Suiza Tel 4122 788 1908 Fax 4122 788 1986 Correo electr nico mpbiosuisse mpbio com Patente en Estados Unidos 5 741 490 5 770 689 5 885 768 5 686 239 Patente en Singapur 39445 49225 Australia 644878 Taiw n 63167 Corea del Sur 178399 180530 Otras patentes pendientes El nombre y el logotipo de Genelabs cuentan con licencia de Genelabs Technologies Inc
14. lacas para microensayos de longitud de onda doble A A 2 O sencilla A 12 Soluci n de hipoclorito s dico al 5 o lej a dom stica l quida PREPARACI N DE LOS REACTIVOS 1 CONJUGADO DE TRABAJO a El CONJUGADO DE TRABAJO debe estar reci n preparado b Para preparar el conjugado diluido diluya a 1 200 el conjugado con el diluyente suministrado en el kit c Utilice nicamente tubos o recipientes de polipropileno d Consulte la tabla para la preparaci n del conjugado de trabajo TABLA DE PREPARACI N DEL CONJUGADO N mero de Vol de conjugado Vol de diluyente an lisis ul mi a T e o wv 2 TAMP N DE LAVADO DILUIDO a El TAMP N DE LAVADO DILUIDO debe estar reci n preparado b Diluya 1 volumen de CONCENTRADO PARA EL LAVADO DE LA PLACA con 19 vol menes de agua destilada de calidad para an lisis Mezcle bien Se necesitan aproximadamente 400 ml de tamp n de lavado para lavar 1 placa PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO IMPORTANTE los inmunoensayos de este tipo son sensibles a la temperatura y al paso del tiempo El cumplimiento estricto del procedimiento del ensayo garantiza un rendimiento ptimo del mismo Cualquier modificaci n del procedimiento recomendado puede provocar resultados an malos 1 10 11 Extraiga la microplaca de la bolsa de aluminio Agite la muestra y los viales de los controles antes de su uso Llene un recipiente para reactivos con el DILUYENTE Medi
15. nfecci n por este virus En un kit de ensayo de este tipo pueden sospecharse resultados falsamente reactivos La proporci n de falsos reactivos depende de la sensibilidad y la especificidad del kit de ensayo En la mayor a de los ensayos diagn sticos cuanto mayor sea la prevalencia de anticuerpos en una poblaci n menor ser la proporci n de muestras falsamente reactivas En estudios internos se constat que la presencia de factor reumatoide FR o de t tulos elevados de lgG no afecta al rendimiento del ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD El uso de m todos para la extracci n de IgG p ej reactivo para la eliminaci n del factor reumatoide o RFRR con los que es necesario diluir la muestra puede afectar a la sensibilidad del ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD CL USULA DE EXENCI N DE RESPONSABILIDAD La nica garant a expresa que otorga el fabricante es que el kit de an lisis funcionar como ensayo diagn stico in vitro de acuerdo con las especificaciones y limitaciones descritas en el Manual de instrucciones del producto cuando se use de conformidad con las instrucciones citadas en el mismo El fabricante reh sa cualquier garant a expresa o impl cita incluida la garant a expresa o impl cita relativa a la comercializaci n adecuaci n para el uso o supuesta utilidad para cualquier otro fin El fabricante s lo se obliga a la sustituci n del producto o al reembolso del precio de compra del
16. no cumple cualquiera de los criterios anteriores el ensayo no es v lido y habr que repetirlo 3 C lculo de la diferencia entre XCR y XCNR Ejemplo XCNR 0 010 XCR 0 745 XCR XCNR 0 745 0 010 0 735 Para que el ensayo sea v lido el valor de XCR xXCNR debe ser mayor o igual a 0 400 En caso contrario debe sospecharse un error en la t cnica o un deterioro de los reactivos y habr que repetir el ensayo 4 C lculo del valor UMBRAL Valor UMBRAL 0 400 xCNR Ejemplo XCNR 0 010 Valor UMBRAL 0 400 0 010 0 410 INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS 1 El ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD considera no reactivas las muestras con valores de absorbancia menores que el valor UMBRAL 2 Elensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD considera Inicialmente reactivas las muestras con valores de absorbancia mayores o iguales al valor UMBRAL las muestras deben volverse a analizar por duplicado antes de su interpretaci n 3 El ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD considera que las muestras que resultan reactivas al repetir el an lisis presentan reactividad repetida para los anticuerpos IgM frente al HEV 4 Elensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD considera que las muestras que son inicialmente reactivas y resultan no reactivas al repetir el an lisis son negativas CARACTER STICAS ESPEC FICAS DEL ENSAYO Especificidad y sensibilidad Se ha utilizado la detecci n de virus en muestra
17. os de seguridad establecidos El control reactivo y el control no reactivo contienen timerosal y azida s dica La azida s dica puede reaccionar con el cobre y el plomo que se utilizan en ciertas tuber as y formar sales explosivas Aunque las cantidades que se usan en este kit son peque as los materiales que contienen azida deben eliminarse con vol menes relativamente grandes de agua para evitar la acumulaci n de azidas met licas en las tuber as 1 Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos al abrirlos y al extraer partes al cuotas de los viales o frascos originales 2 No pipetee con la boca 3 Manipule las muestras las microplacas y los controles reactivos y no reactivos como si fueran agentes potencialmente infecciosos 4 Use bata de laboratorio y guantes desechables mientras realiza el ensayo Deseche los guantes en bolsas para residuos biopeligrosos L vese bien las manos al finalizar 5 Es muy recomendable que este ensayo se lleve a cabo en una c mara de bioseguridad 6 Mantenga el material alejado de bebidas y alimentos 7 En caso de accidente o contacto con los ojos l vense inmediata y abundantemente con agua y acuda a un m dico 8 Acuda a un m dico de inmediato si ingiere material contaminado o si ste entra en contacto con heridas abiertas u otras lesiones de la piel 9 Nunca a ada agua a la soluci n de parada 10 11 12 Limpie de inmediato los vertidos de material pot
18. que contiene 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB La presencia de anticuerpos espec ficos es indicada por el color azul en la adici n del sustrato Para detener la reacci n se a ade cido clorhidrico La intensidad del color que se mide por espectrofotometr a a 450 nm es proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes en la muestra COMPONENTES DEL KIT Descripci n del componente Cantidad suministrada MICROPLACA DE HEV 1 placa Doce tiras de 8 pocillos por placa 96 pocillos selladas en una bolsa de aluminio con desecante Los pocillos de las microplacas contienen prote nas de HEV recombinante adsorbidas Conservar a 2 C 8 C CONTROL CONTROL NO REACTIVO 1 vial Suero humano normal inactivado 160 ul no reactivo para HCV HEV HBsAg ni HIV 1 Contiene timerosal y azida s dica como conservantes Conservar a2 C 8C gt CONTROL REACTIVO 1 vial Suero humano inactivado con un 80 ul elevado t tulo de anticuerpos IgM espec ficos frente al HEV Contiene timerosal y azida s dica como conservantes Conservar a gt 2C 8C DILUYENTE 1 frasco Soluci n Tris NaCl con suero de 100 ml cabra normal termotratado seroalb mina bovina y estabilizantes Contiene Bronidox como conservante Conservara 2 C 8 C wasn Pare ox CONCENTRADO PARA EL 1 frasco LAVADO DE LA PLACA 20X 120 ml Soluci n salina tamponada con fosfato con Tween 20 Contiene cloroacetamida como conservante
19. s de sangre o de heces durante la fase inicial de la infecci n para establecer la presencia de hepatitis E Sin embargo los virus s lo se pueden detectar si las muestras de suero o de heces se recogen en una etapa lo suficientemente precoz a ser posible durante los primeros 14 d as tras la aparici n de los s ntomas 12 Basada en la detecci n de virus la sensibilidad del ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD se determina en funci n de la capacidad para detectar el n mero de positivos presente en este panel de sueros bien caracterizado De las 152 muestras que se recogieron en el periodo de ventana de 14 d as 141 fueron reactivas con el ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD Esta cifra representa una sensibilidad del 93 La serorreactividad en las personas sanas de poblaciones de bajo riesgo suele ser bastante baja aproximadamente lt 1 mientras que en las personas sanas que viven en zonas end micas tiende a ser algo mayor La serorreactividad indica exposici n reciente al virus de la hepatitis E LIMITACIONES DEL M TODO Un resultado de reactividad repetida con el ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD indica presunci n de anticuerpos IgM frente al HEV en la muestra Un resultado NO REACTIVO con el ensayo ELISA para IgM frente al HEV de MPD indica la probable ausencia de anticuerpos lgM frente al HEV detectables en la muestra Un resultado NEGATIVO no descarta la posibilidad de exposici n al HEV ni de i
20. s est n ajustados para un rendimiento ptimo Use s lo los reactivos que se suministran con el kit No utilice los componentes del kit despu s de la fecha de caducidad que figura en la caja Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos al abrirlos y al extraer partes al cuotas de los viales o frascos originales ya que ello reducir a de forma prematura el periodo de validez de los kits y dar a lugar a resultados err neos Al extraer partes al cuotas de los viales utilice t cnicas as pticas como pipetas o puntas de pipeta desechables Para evitar la contaminaci n cruzada use una punta de pipeta nueva para cada al cuota que se extraiga de la muestra y no toque el borde ni el fondo de las tiras el borde de los pocillos ni el l quido de los mismos con los dedos ni con las puntas de pipeta Se aconseja lavar el material de vidrio que se vaya a utilizar para los reactivos con cido clorh drico 2M y aclararlo bien con agua destilada o desionizada antes de usarlo Para obtener mejores resultados permita que todos los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente 25 C 3 C antes de usarlos Inmediatamente despu s del uso vu lvalos a conservar a 2 C 8 C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Utilice s lo agua destilada o desionizada de calidad reactivo para diluir los reactivos Todos los reactivos deben mezclarse bien antes de su uso
21. sitivos m dicos y sus envases Se explican con mayor detalle en la Norma brit nica y europea BS EN 980 2003 Dispositivo m dico Usar antes de OS Sin nimos IVD para diagn stico in Fecha de caducidad vitro C digo de serie N mero de LOT Sin nimos cat logo N mero de lote N mero de serie Atenci n Consulte las Instrucciones de Umbral de temperatura uso Representante autorizado en la Fabricante Comunidad Europea Consultar las instrucciones de uso Contenido suficiente para lt n gt ensayos B E No reutilizar JE gt PRINCIPIOS QU MICOS Y BIOL GICOS DEL PROCEDIMIENTO Los pocillos de las tiras de las microplacas de poliestireno est n recubiertos con tres ant genos de HEV recombinante que se corresponden con las regiones estructurales del virus de la hepatitis E El suero o el plasma humanos diluidos en soluci n tamp n se incuban en estos pocillos recubiertos Cuando existen anticuerpos espec ficos anti HEV dichos anticuerpos se unen a los ant genos del HEV de la fase s lida Los pocillos se lavan minuciosamente para eliminar todo el producto no ligado y despu s se les a ade un anticuerpo monoclonal de rat n anti lIgM humana marcado con peroxidasa de r bano Este anticuerpo marcado se une a los complejos ant geno anticuerpo previamente formados los anticuerpos marcados no ligados sobrantes se eliminan mediante lavado A continuaci n se a ade a los pocillos una soluci n sustrato
22. uavemente mediante golpecitos en la placa Determine la absorbancia de cada pocillo a 450 nm Si se utiliza un dispositivo con filtro doble la longitud de onda de referencia debe ser de 620 nm 100 ul 30 minutos 300 ul por pocillo x 6 100 ul 15 minutos 100 ul NOTA La absorbencia se debe leer en el plazo de 10 minutos sobre la adici n de la SOLUCION DE PARADA CONTROL DE CALIDAD 1 ElI BLANCO y el CONTROL REACTIVO deben analizarse por duplicado y el CONTROL NO REACTIVO debe analizarse por triplicado en cada placa y en todas las series de muestras 2 Los valores de absorbancia del blanco deben ser lt 0 100 3 Los valores de absorbancia del control no reactivo deben ser lt 0 100 tras restar el blanco 4 Los dos valores de absorbancia del control reactivo deben ser gt 0 500 tras restar el blanco 5 Para que el ensayo sea v lido la diferencia entre las absorbancias medias del control reactivo y el control no reactivo XCR XCNR debe ser mayor o igual a 0 400 En caso contrario debe sospecharse un error en la t cnica y habr que repetir el ensayo Si XCR xXCNR da cifras bajas sistem ticamente debe sospecharse que los reactivos se han deteriorado RESULTADOS Cada microplaca debe considerarse por separado al calcular e interpretar los resultados del ensayo independientemente del n mero de placas que se hayan procesado a la vez LOS VALORES MEDIOS DE LA ABSORBANCIA DEL BLANCO DEBEN RESTA
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