Kit S QuickGene de extracción de ADN en Sangre Total
Contents
1. C a 28 C 4 Otros materiales necesarios no incluidos en este kit Reactivos e Etanol gt 99 e Agua ultra pura libre de Nucleasa para disoluci n de proteasa Instrumentos y Equipamiento e Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico de la serie QuickGene Tubos de centrigufa de 1 5ml Tubos de Centrifuga ver Tabla 1 Micropipetas y puntas Agitador Vortex Mixer Microcentrifuga c a 5 000xg Contenedor de tubos Tabla 1 Tubos de Centr fuga recomendados Tama o del Contenedor Tipo de tubo de centr fuga Nombre del producto de tubos de centr fuga de ejemplos la serie QuickGene Est ndar Tubo de centrifuga grande para WDB Tubo c nico BD Falcon 50ml Tubo de centr fuga peque o para CDB Tubo c nico BD Falcon 15ml Grande Tubo de centrifuga grande para WDB Tubo c nico BD Falcon 175ml Tubo c nico BD Falcon 225ml Tubo de centr fuga peque o para CDB Tubo c nico BD Falcon 50ml Los tubos de centrifuga se usan con los Sistemas de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene como tubos contenedores del tamp n de lavado WDB con etanol y del tamp n de eluci n CDB 5 Advertencias sobre Seguridad Advertencia Para uso en investigaci n nicamente No recomendado ni dirigido a aplicaciones diagn sticas o cl nicas para humanos y animales Todos los reactivos y art culos del kit deber an considerarse qu mica y biol gicamen2. cn URL http www fujifilm com cn Distribuidores lt Australia New Zealand gt Berthold AUSTRALIA PTY Ltd 40 Clements Avenue BUNDOORA Victoria 3083 Australia Tel 61 3 9467 6277 1 300 300 865 in Australia Fax 61 3 9467 7493 E mail rafaelOberthold com au URL http berthold com au lt Korea gt Shinki Hi Tec GUNWHA Bldg 7 1 Yangjae 1 dong Secho gu Saoul 137 886 Korea Tel 82 2 572 1600 Fax 82 2 572 0058 E mail info skhitec co kr URL http www skhitec co kr lt Taiwan gt HUNG CHONG CORP No 38 Sec 6 Min Chuan E Road Taipei Taiwan Tel 886 2 2791 1188 Fax 886 2 2794 2248 E mail fuhsing mail hungchong com tw URL http www FUJIFILM COM TW 14 Ap ndice 1 El modo DNA WHOLE BLOOD se configura con los siguientes par metros DNA WHOLE BLOOD PARAMETRO VALOR BIND PEAK 120 WASH COUNT 3 WASH PEAK 110 WASH VOLT 750 WASH VOL2 750 WASH VOL3 750 WASH VOL4 750 WASH VOL5 750 WASH DIP TM 0 WAS2 WAIT T 0 WAS2 COUNT 0 WAS2 PEAK 110 WAS2 VOLI 750 WAS2 VOL2 750 WAS2 VOL3 750 WAS2 VOL4 750 WAS2 VOL5 750 ELUT VOL 200 ELUT PEAK 100 ELUT DIP TM 0
3. 35 ml 21 ml 64 154 ml 22 ml 72 172 ml 24 ml 80 190 ml 26 ml 88 209 ml 28 ml 96 227 ml 30 ml 8 2 Preparaci n de Muestras e ElkitS QuickGene de extracci n de ADN en Sangre Total ha sido espec ficamente dise ado para el aislamiento de ADN gen mico de una muestra de 200ul de sangre total e Se recomienda la utilizaci n de sangre total recogida en EDTA 2NA EDTA 2K o heparina e El rendimiento obtenido depender de las condiciones y caracter sticas de la muestra e Trabaje con el kit a temperatura ambiente 15 C a 30 C El rendimiento podr a no ser el esperado si trabaja a temperaturas por encima o por debajo del rango de temperaturas indicado e Mida con precisi n el volumen de los tampones durante los experimentos lt Etapas de Trabajo para la preparaci n de muestras de sangre total gt Tubo de microcentrifuga de 2ml lt F A ada la soluci n EDB 30ul la lt A ada sangre total 20011 1b lt A ada LDB 250ul 1c Pipetear 5 veces Mezclar muy bien por vortex por 15 segundos vel maxima gt 2500rpm Centrifugar Incubar a 56 C 2minutos lt A ada Etanol gt 99 250u1 Mezclar muy bien por vortex por 15 segundos vel maxima gt 2500rpm Centrifugar Lisado Transfiera todo el lisado al cartucho del Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Seleccione el modo DNA WHOLE BLOOD Pulse el bot n START ADN gen mico Vol
4. A FUJIFILM MANUAL Kit S QuickGene de extracci n de ADN en Sangre Total DB S Para aislamiento de ADN gen mico de sangre total INDICE O 1 AEE A OA S EE O AOE ET EOE svieiecsseses onjaccciuesbadetess Componentes SAA A Condiciones de Almacenamiento Otros materiales necesarios no incluidos en este kit cooooooooso Advertencias sobre Seguridad ococnnmmmsmmsmmmmmsrrm A Sus svessedssuatesessadesesseees Controles de Calidad AAA A A RoPS p te raare R aN E PENE EEEE PaRa ENEN ies 1 2 3 4 5 6 7 8 Preparaci n de los Reactivos Preparaci n de Muestras Aislamiento de ADN Gen mico utilizando el Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene E 9 Resoluci n de Problemas iccccscicicccccececsssesscsacecessseccens scvneceasescedsescenesassasecssdecesoedesasecdesscaSeseeonsecsedsecve 12 10 Informaci n sobre pedidos ssscccscssescssessecessessesecnessesesnessesessessesecnessesecessesessessesecsessesessesee 13 11 CCOM ACIOS saiccicsscsstascscscesececeosssncsicessesssasscvessenscedssecesscsdcnesedsonsessesdacsssbeaasodsesssessesesossocecdcesssessssocecssevad L amp Ap ndice A LD 1 Introduccion Fuji Photo Film Co LTD desarroll y patent una revolucionaria membrana porosa para inmovilizar cido nucleico Debido a su gran rea superficial espec fica y a su porosidad fina y uniforme QuickGene a sla satisfactoriamente ADN gen mico con alto re
5. WT incluidos en el kit Monte el Contenedor de Cartuchos en el equipo y coloque de 1 a 8 cartuchos en el Contenedor de Cartuchos e Utilice s lo los Cartuchos especificados CA Notas Para detalles sobre el montaje de los tubos y cartuchos consulte el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Una colocaci n incorrecta de los cartuchos puede provocar un aislamiento incorrecto o un vertido no deseado de la soluci n Utilice siempre guantes durante los experimentos para evitar la contaminaci n con nucleasa 3 Colocaci n de los reactivos Prepare el volumen requerido ver 8 1 Preparaci n de los reactivos para el tubo del Tamp n de Lavado WDB con etanol gt 99 y para el tubo del Tamp n de Eluci n CDB col quelos en el contenedor correspondiente y ste en su posici n designada en el equipo Notas Utilice siempre guantes durante la manipulaci n de los reactivos para evitar la contaminaci n con nucleasa e Para detalles sobre la colocaci n de los reactivos consulte el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene 4 Descarga Coloque la bandeja de descarga y compruebe la correcta colocaci n de los tubos de recogida y del contenedor de cartuchos Pulse el bot n DISCHARGE despu s de haber cerrado la puerta frontal del instrumento Nota La operaci n de descarga previa a la extracci n resulta n
6. de Lisis LDB No se a adi el volumen requerido de etanol al Tamp n de Lavado WDB Antes de comenzar compruebe siempre que se ha a adido el volumen requerido de etanol al Tamp n de Lavado WDB Se ha utilizado un Tamp n de Lavado WDB usado previamente incluido etanol Antes del uso examine visualmente el Tamp n de Lavado usado WDB incluido etanol el cual ha podido utilizarse durante un d a o m s en el instrumento El lisado no se ha aplicado completamente a los cartuchos CA Si hay presentes agregados en el lisado apl quelos en los cartuchos junto con el lisado Se han usado una cantidad insuficiente de reactivos Aseg rese de que hay suficiente cantidad de reactivo en las botellas de reactivo 2 Obstrucci n del Cartucho Causa Posible Soluci n Se ha usado una cantidad excesiva de muestra Reduzca la cantidad de sangre total a una cantidad por debajo de la especificada Tamp n de Lisis LDB Insuficiente homogeinizaci n a continuaci n de la adici n del Mezcle por vortex suficientemente 15 segundos inmediatamente despu s de la adici n del Tamp n de Lisis LDB 3 Experimentos subsiguientes por ejemplo PCR insatisfactorios Causa Posible Soluci n Cantidad inapropiada de Determinar la concentraci n basada en la absorbancia a 260nm ADN usada para experimentos subsiguientes 4 Aparici n de precipitados en los r
7. e Materiales Retire los Tubos de Desecho WT y desh gase del l quido de desecho de acuerdo con la normativa aplicable Retire el contenedor de cartuchos y desh gase de los cartuchos CA Advertencia En cuanto al tratamiento de los residuos l quidos y los consumibles Cuando utilice muestras potencialmente infecciosas para sus experimentos realice el tratamiento de los residuos de acuerdo con la normativa aplicable 11 9 Resolucion de Problemas Revise la informaci n que se da a continuaci n para resolver posibles problemas durante la realizaci n de los experimentos con el kit S de sangre total de QuickGene Para problemas relacionados con el sistema esto es cuando aparezca un mensaje de error en el equipo QuickGene consulte el Manual de Usuario del equipo de la serie QuickGene 1 Bajo rendimiento o no obtenci n de ADN Causa Posible Soluci n Reactivos y sangre total a adidos en orden incorrecto A ada los reactivos en los microtubos en el siguiente orden cuando prepare el lisado Proteasa EDB disuelta en 3 3 ml de agua libre de nucleasa gt sangre total Tamp n de Lisis LDB Se ha usado una cantidad excesiva de muestra Reduzca la cantidad de sangre total a una cantidad por debajo de la especificada Insuficiente homogeinizaci n a continuaci n de la adici n del Tamp n de Lisis LDB Mezcle por vortex suficientemente 15 segundos inmediatamente despu s de la adici n del Tamp n
8. eactivos Causa Posible Soluci n Almacenado a baja Conserve las soluciones entre 15 C y 28 C Temperatura Si hay presentes precipitados incube la botella en ba o de agua a 37 C y mezcle invirtiendo la botella intermitentemente hasta que se disuelva el precipitado 5 Los tubos de recogida est n vac os despu s de la eluci n Causa Posible Soluci n Se ha olvidado realizar la Descarga Coloque la bandeja de descarga y compruebe que los tubos de recogida y el contenedor de cartuchos est n colocados en su posici n correcta Pulse el bot n DISCHARGE despu s de cerrar la puerta frontal del instrumento 12 Consulte el Manual de Usuario del equipo de la serie QuickGene 10 Informacion sobre pedidos Producto Cat Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico de la serie QuickGene Kit S para ADN en tejidos QuickGene DT S Kit de reactivos para aislar ADN gen mico en tejidos para QuickGene Kit S para ADN en Sangre Total QuickGene DB S Kit de reactivos para aislar ADN gen mico de sangre total para QuickGene Kit S para ARN en tejidos QuickGene RT S Kit de reactivos para purificar el ARN total en tejidos para QuickGene Kit S para ARN en c lulas en cultivo QuickGene RC S Kit de reactivos para purificar el ARN total en c lulas en cultivo para QuickGene Kit S ADN en Pl smidos para QuickGene PL S Kit de reactivos para extraer el ADN en
9. ecesaria debido a que los tubos podr an contener algo de aire y esto podr a provocar una extracci n de volumen de reactivos incorrecta 5 Aplicaci n de las muestras preparadas Inserte el contenido de las muestras de lisado preparadas Ver 8 2 Preparaci n de las Muestras en cada cartucho CA utilizando micropipetas cualquier agregado presente en el lisado deber transferirse junto con el lisado al cartucho 6 Aislamiento Compruebe que est n bien colocados todos los materiales de trabajo Tamp n de Lavado WDB con etanol gt 99 Tamp n de Eluci n CDB Cartuchos CA con las muestras inclu das Tubos de Desecho WT y tubos ded Recogida CT Cierre la puerta frontal del instrumento Confirme que se ha seleccionado el modo de operaci n apropiado en el panel de operaci n y pulse el bot n START 10 7 Recogida del ADN gen mico Una vez completado el proceso el resultado de la extracci n se indicar en el panel de operaci n como sigue Y Extracci n satisfactoria gui n Extracci n fallida _ subrayado No cartucho o No muestra Abra la puerta frontal y retire el Tubo de Recogida CT de su alojamiento e Yaque el ADN gen mico es elu do de los Cartuchos CA si se ha utilizado un volumen de 200ul de Tamp n de Eluci n CDB se recuperar una soluci n de ADN de 200u1 Tapone correctamente los Tubos de Recogida CT que contienen el ADN gen mico aislado con los Tapones de tubo CAP 8 Recogida d
10. la lej a e En cuanto al tratamiento de los residuos l quidos y los consumibles Cuando utilice muestras potencialmente infecciosas para sus experimentos realice el tratamiento de los residuos de acuerdo con la normativa aplicable 6 Advertencias Consulte el MSDS hoja de datos de Seguridad Material para revisar las recomendaciones espec ficas de manipulaci n y propiedad Esta hoja de datos MSDS se puede obtener de la siguiente p gina web http lifescience fujifilm com Consulte el Manual de usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de QuickGene antes de utilizarlo 7 Controles de Calidad La estabilidad de los reactivos est garantizada por un a o desde la compra siempre que se haya almacenado a la temperatura especificada de 15 C a 28 C Como parte del riguroso programa de calidad en Fuji Photo Film Co LTD las prestaciones del kit S QuickGene ADN en Sangre Total se eval an rutinariamente asegurando la uniformidad de lote a lote Se comprueba la calidad y el rendimiento de los ADN gen micos aislados por medio de la medida de la absorbancia a 260nm relaci n de absorbancia 260nm 280nm y amplificaci n PCR 8 Protocolos 8 1 Preparaci n de los Reactivos Proteasa EDB A ada 3 3 ml de agua ultra pura libre de nucleasa al vial que contiene la proteasa congelada en hielo seco y disu lvala cuidadosamente La proteasa disuelta EDB se podr almacenar por 2 meses a 4 C La enzi
11. ma permanecer estable por un per odo m s largo si se conserva a 20 C Esto est recomendado para evitar la repetida congelaci n y descongelaci n Tamp n de Lisis LDB Mezcle muy bien antes de usar Si hay precipitados en el Tamp n de Lisis incube la botella en un ba o de agua a 37 C y mezcle invirtiendo la botella intermitentemente hasta que el precipitado se haya disuelto Una vez disuelto el Tamp n de Lisis enfr e la botella a temperatura ambiente antes de su uso Tamp n de Lavado WDB A ada a la soluci n concentrada A ada 160ml de etanol gt 99 en la botella y mezcle invirtiendo la botella suavemente antes de su primer uso Requerimientos para el Tamp n de Lavado WDB con etanol gt 99 y el Tamp n de Eluci n CDB Prepare los vol menes de muestra requeridos para la preparaci n del Tamp n de Lavado WDB con etanol gt 99 y del Tamp n de Eluci n CDB de acuerdo con el n mero de muestras para la extracci n siga la tabla siguiente Coloque los tampones en cada tubo y coloque los tubos en el Contenedor de Tubos del equipo QuickGene Consulte el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de QuickGene Tabla 2 Volumen del tamp n y n mero de muestras a colocar en el equipo QuickGene N mero de Muestras WDB con Etanol CDB 8 26 ml 8 ml 16 44 ml 11 ml 24 62 ml 13 ml 32 80 ml 15 ml 40 99 ml 17 ml 48 117 ml 19 ml 56 1
12. mpleto al cartucho del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Realice el aislamiento en un per odo m ximo de 30 minutos despu s de la preparaci n del lisado Si hay presentes agregados en el lisado apl quelos junto con el lisado en el cartucho El volumen est ndar de eluci n por defecto es 2001 aunque se puede cambiar esta configuraci n a un valor inferior de volumen hasta un m nimo de 50ul En el caso de trabajar con una configuraci n de 50ul el rendimiento podr a bajar El rendimiento est ndar del ADN gen mico elu do es 4 8 ug de una muestra de 200ul de sangre total Conserve el ADN gen mico elu do a 20 C si no lo va a utilizar inmediatamente 8 3 Aislamiento de ADN Gen mico utilizando el Sistema de Aislamiento Autom tico de Acido Nucleico de la serie QuickGene Notas Configuraci n del sistema y operaciones b sicas Por favor lea el Manual de Usuario del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico de la serie QuickGene antes de su uso 1 Selecci n del modo de aislamiento Seleccione el modo DNA WHOLE BLOOD para el aislamiento de ADN gen mico de sangre total con el kit ver Ap ndice 1 2 Colocaci n de los cartuchos y los tubos Abra la puerta frontal del instrumento y coloque los tubos de recogida y desecho en el contenedor de tubos de recogida e Utilice s lo los tubos especificados de recogida CT y los tubos especificados de desecho
13. ndimiento y m s a n con la utilizaci n de su membrana elimina la mayor a de los contaminantes QuickGene utiliza la t cnica de filtraci n a presi n la cual no puede utilizarse satisfactoriamente con membranas t picas de fibra de vidrio utilizando la t cnica de filtraci n a presi n se puede usar con gran xito una nueva instrumentaci n compacta y automatizada para la purificaci n r pida de cido nucleico Utilizando el kit S de QuickGene para extracci n de ADN en Sangre Total junto con la serie de Sistemas Autom ticos de Aislamiento de cido Nucleico QuickGene se podr aislar y tambi n purificar ADN gen mico de sangre total con muy alta calidad y rendimiento Adicionalmente se pueden extraer simult neamente y en s lo 6 minutos 8 muestras lisadas de sangre total El ADN gen mico de alta calidad purificado se puede utilizar para aplicaciones con PCR digesti n con enzimas de restricci n Southern Blotting y otras aplicaciones Por favor aseg rese de leer cuidadosamente este manual antes de la utilizaci n del kit 2 Componentes del kit El kit incluye los reactivos necesarios para 96 conjuntos de aislamiento de ADN gen mico o Proteasa EDB a Tamp n de Lisis LDB a Tamp n de Lavado WDB a Tampon de Eluci n CDB Q Cartuchos CA Tubos de recogida CT a Tapones CAP Tubos de desecho WT 3 Condiciones de Almacenamiento Temperatura de almacenamiento para todos los reactivos de 15
14. pl smidos para QuickGene Marca Registrada Falcon TM Becton Dickinson and Company La Reacci n en Cadena de la Polimerasa PCR est patentada por Roche Molecular Systems y F Hoffmann La Roche Ltd 13 11 Contactos http lifescience fujifilm com Fuji Photo Film Co Ltd LIFE SCIENCE PRODUCTS DIVISION 26 30 Nishiazabu 2 Chome Minato ku TOKYO 106 8620 JAPAN Tel 81 3 3406 2201 Fax 81 3 3406 2158 E mail sginfo tokyo fujifilm co jp Filiales lt United States Canada Mexico gt Fujifilm Medical System U S A Inc 419 West Avenue Stamford CT 06902 U S A Tel 1 203 324 2000 ext 6112 1 800 431 1850 ext 6112 in the U S Fax 1 203 351 4713 E mail SSG fujimed com URL http lifescience fujifilm com lt Europe excl UK and Ireland gt Fuji Photo Film Europe GmbH Heesenstr 31 40549 Dusseldorf Germany Tel 49 21 1 5089 174 Fax 49 211 5089 139 E mail lifescience fujifilmeurope de URL http www fujifilm de lt UK Ireland gt Fuji Photo Film U K Ltd Unit 12 St Martins way St Martins Business centre Bedford MK42 OLF U K Tel 44 1234 245291 Fax 44 1234 245293 E mail lifesciences fuji co uk URL http www fujifilm co uk lifesciences lt China gt Fuji Photo Film China Investment Co Ltd 31st floor Hong Kong New World Tower No 300 Huai Hai Zhong Road Shanghai P R China Tel 86 21 3302 4655 363 Fax 86 21 6384 3322 E mail wgxiang fujifilm com
15. te peligrosos Durante la realizaci n de los experimentos es altamente recomendable utilizar la vestimenta apropiada de laboratorio guantes y gafas de seguridad En caso de contacto de los reactivos con los ojos la piel o la vestimenta l vese inmediatamente con agua consulte las recomendaciones espec ficas en la hoja de datos de Seguridad Material http www fujifilm co jp msds Proteasa EDB Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Tamp n de Lisis LDB No ingerir Producto venenoso Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Utilice la vestimenta apropiada de laboratorio guantes y gafas de seguridad Tamp n de Lavado WDB Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua Tamp n de Eluci n CDB Tenga cuidado con el contacto de los reactivos con los ojos y con su ingesti n accidental En caso de contacto de los reactivos con los ojos piel o vestimenta lave inmediatamente con agua e Mantenga el Tampon de Lisis LRB lejos de fuentes de calor No lo mezcle con desinfectantes como
16. umen de la eluci n por defecto 200u1 Notas 1 W Siga estrictamente el protocolo desde los pasos 1 a 1c Si no se sigue o se cambia el protocolo se ver reducido el rendimiento la A ada 3 3 ml de agua ultra pura libre de nucleasa al vial que contiene la proteasa congelada en hielo seco y disu lvala cuidadosamente A ada los 30ul de EDB en el fondo de un microtubo de 2m1 1b A ada 20011 de sangre total en el microtubo e inmediatamente despu s a ada 250ul de LDB si no se a ade LDB inmediatamente el rendimiento se podr a ver reducido 1c Mezcle la muestra de sangre total y el LDB pipeteando 5 veces Es muy importante mezclar completamente la muestra por pipeteo despu s de la adici n de LDB Agitar por vortex por 15 segundos a m xima velocidad y centrifugar para recuperar el lisado del tap n y las paredes del tubo La velocidad de vortex recomendada es de 2500 rpm en adelante si no dispone de tal agitador vortex pipetee completamente como en 1c Si la mezcla no es completa en este paso el rendimiento ser inferior al esperado o se producir obstrucci n del cartucho del Sistema de Aislamiento Autom tico de cido Nucleico del equipo de la serie QuickGene Incubar a 56 C El tiempo m ximo de incubaci n es 5 minutos A ada 250u1 de etanol gt 99 y agite por vortex durante 15 segundos a m xima velocidad Centrifugue para recuperar el lisado en el tap n y paredes del tubo Transfiera el lisado co
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