(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nº de catálogo IS503
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1. embedded tissue using antibodies against a peptide sequence from the CD3 antigen J Clin Pathol 1989 42 1194 1200 Pilozzi E Pulford K Jones M M ller Hermelink H K Falini B Ralfkiaer E et al Co expression of CD79a JCB117 and CD3 by lymphoblastic lymphoma J Pathol 1988 186 140 3 CD guide In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 1111 Jacobs H Pre TCR CD3 and TCR CD3 complexes decamers with differential signalling properties Immunol Today 1997 18 565 9 Campana D Thompson JS Amlot P Brown S Janossy G The cytoplasmic expression of CD3 antigens in normal and malignant cells of the T lymphoid lineage J Immunol 1987 138 648 55 Tunnacliffe HA Olsson C Traunecker A Krissansen GW Karjalainen K De la Hera A The majority of CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain In Knapp W D rken B Gilks WR Rieber EP Schmidt RE Stein H et al editors Leukocyte typing IV White cell differentiation antigens Proceedings of the 4th International Workshop and Conference 1989 Feb 21 25 Vienna Austria Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1989 p 295 6 Garson JA Beverley PC Coakham HB Harper El Monoclonal antibodies against human T lymphocytes label2. n inesperada que no puede ser explicada por las variaciones en los procedimientos del laboratorio y se sospeche un problema con el anticuerpo comun quese con la asistencia t cnica de Dako El anticuerpo puede utilizarse para marcar cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina Las muestras de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 um Se requiere el tratamiento previo con recuperaci n del ep topo inducida por calor HIER usando Dako PT Link n de cat logo PT100 PT101 Para m s detalles consulte la Gu a del usuario de PT Link Se obtienen resultados ptimos al pretratar los tejidos con EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8010 K8004 Cortes incluidos en parafina se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido fijados en formol e incluidos en parafina siguiendo el procedimiento de preparaci n de la muestra 3 en 1 para Dako PT Link Siga el procedimiento previo al tratamiento explicado en el prospecto de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x n de cat logo K8010 K8004 Nota Despu s de la tinci n se deben deshidratar enjuagar y montar los cortes usando un medio de montaje permanente Cortes desparafinados se recomienda el tratamiento previo de los cortes de tejido desparafinados fijados en formol e incluidos en parafina usando Dako PT Link y siguiendo el mismo procedimiento descrito para los cortes incluidos en parafina Tr
3. Purkinje neurones of many species Nature 1982 298 375 7 Erber WN Mynheer LC Mason DY APAAP labelling of blood and bone marrow samples for phenotyping leukaemia Lancet 1986 i 761 5 Braylan RC Orfao A Borowitz MJ Davis BH Optimal number of reagents required to evaluate hematolymphoid neoplasias results of an international consensus meeting Cytometry 2001 46 23 7 Kingreen D Siegert W Chronic lymphatic leukemias of T and NK cell type Leukemia 1997 11 Suppl 2 546 9 Lanier LL Chang C Spitz H Pillips JH Expression of cytoplasmic CD3e proteins in activated human adult natural killer NK cells and CD3y 5 e complexes in fetal NK cells Implications for the relationship of NK and T lymphocytes J Immunol 1992 149 1876 80 Pissostiivem dcopae m dico para ica suficiente para lt n gt Fabricante _ diagn stico n vitro in vitro ensayos Al 116598 002 15503 ES MNI 2009 12 04 pag 3 3 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
4. am gdala muestran una reacci n de tinci n de moderada a fuerte mientras que las c lulas T en centros germinales de amigdala y en el epitelio del colon muestran una reacci n de leve a moderada Tejidos anormales El anticuerpo marc 73 96 neoplasias de c lulas T incluidas 7 9 linfobl sticas 25 35 pleom rficas 5 5 inmunobl sticas 5 5 angioinmunoblasticas del tipo linfoadenopatia 2 2 linfomas de zona T 19 19 micosis fungoides sindromes de S zary 2 3 linfomas de Lennert 4 13 linfomas anapl sicos de c lulas grandes Ki 1 positivos 3 4 papulosis linfomatoides y 1 1 linfoma asociado con enfermedad cel aca 1 El anticuerpo marc 149 149 casos de leucemias linfomas linfobl sticas agudas ALL de c lulas T precursoras En 131 149 casos el 100 de las c lulas fueron positivas en 14 casos entre el 50 y el 90 de las c lulas fueron positivas y en 4 casos menos del 50 de las c lulas fueron positivas No se observ ning n marcado en 68 68 casos de ALL de c lulas B precursoras aparte de las c lulas T infiltrantes reactivas 2 1S503 ES MNI 2009 12 04 p g 2 3 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Referencias bibliogr ficas Explicaci n de los s mbolos O a c Limitaci n de temperatura Fecha de caducidad 10 11 Mason DY Cordell J Brown M Pallesen G Ralfkiaer E Rothbard J et al Detection of cells in paraffin wax
5. ariar seg n la muestra y el m todo de preparaci n y deber n determinarse individualmente en cada laboratorio Si el pat logo encargado de la evaluaci n desea otra intensidad de tinci n se puede solicitar informaci n a un especialista en aplicaciones de Dako o a un especialista del servicio t cnico para reprogramar el protocolo Verifique que el rendimiento del protocolo ajustado siga siendo v lido confirmando que el patr n de tinci n sea id ntico al descrito en Caracter sticas de resultados Se recomienda la contratinci n en hematoxilina usando EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo K8018 Se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente Los controles positivo y negativo deber n realizarse de manera simult nea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente El tejido de control positivo debe incluir am gdala y las c lulas y estructuras deben mostrar patrones de reacci n como se describe para este tejido en Caracter sticas de resultados en todas las muestras positivas El reactivo de control negativo recomendado es FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus n de cat logo 15600 Las c lulas marcadas por el anticuerpo muestran tinci n citoplasm tica y o de la membrana Tejidos normales El anticuerpo marca las c lulas T de diversos tejidos incluidos am gdala y colon Las c lulas T en las reas interfoliculares de la
6. as la tinci n los portaobjetos deben montarse utilizando un medio de montaje acuoso o permanente Los cortes de tejido no se deben secar durante el tratamiento ni durante el siguiente procedimiento de tinci n inmunohistoqu mica Para una mejor adherencia de los cortes de tejidos a los portaobjetos se recomienda el uso de FLEX IHC Microscope Slides n de cat logo K8020 El sistema de visualizacion recomendado es EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus N de cat logo K8010 Los pasos de tinci n y los tiempos de incubaci n han sido preprogramados en el software de los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus utilizando los siguientes protocolos Plantilla del protocolo FLEXRTU2 volumen de dispensado de 200 uL o FLEXRTU3 volumen de dispensado de 300 uL Autoprograma CD3 sin contratinci n o CD3H con contratinci n El paso Auxiliar debe configurarse a tamp n de enjuague en sesiones de tinci n con lt 10 portaobjetos Para sesiones de tinci n con gt 10 portaobjetos el paso Auxiliar debe configurarse a ninguno Esto garantiza tiempos de lavado similares Todos los pasos de incubaci n deben realizarse a temperatura ambiente Consulte el Manual del usuario para m s detalles sobre el instrumento correspondiente Si todav a no est n disponibles los protocolos en el instrumento Dako Autostainer utilizado comun quese con el servicio t cnico de Dako Las condiciones ptimas pueden v
7. das por los anticuerpos contra CD3 son las c lulas de Purkinje en el cerebelo 7 El ant geno CD3 se detecta primero en timocitos precoces y su aparici n probablemente representa uno de los primeros signos de compromiso del linaje de c lulas T 5 En los timocitos inmaduros la expresi n de CD3 es exclusivamente citoplasm tica el CD3 asociado con la membrana aparece posteriormente cuando madura la c lula 5 La mayor a de las neoplasias de c lulas T expresan el ant geno CD3 mientras que ste se encuentra ausente de los tumores malignos linfoides de c lulas no T 8 De acuerdo con el patr n de s ntesis del ant geno en timocitos normales el primer sitio donde se detecta el CD3 dentro de las c lulas neopl sicas es el citoplasma celular 5 Se ha considerado que el CD3 es un marcador fundamental en la evaluaci n inicial de los trastornos linfoproliferativos cr nicos 9 La leucemia de linfocitos granulares grandes de c lulas T T LGL se caracteriza por el inmunofenotipo CD3 CD57 CD56 y la reordenaci n clonal de los genes receptores de c lulas T 10 Consulte las Instrucciones generales para la tinci n inmunohistoqu mica de Dako o las instrucciones del sistema de detecci n de los procedimientos de IHQ para 1 Principio del procedimiento 2 Material necesario pero no suministrado 3 Almacenamiento 4 Preparaci n de la muestra 5 Procedimiento de tinci n 6 Control de calidad 7 Soluci n de problemas 8 Int
8. de reaccionar con ca er as de plomo y cobre formando acumulaciones de azidas met licas altamente explosivas Una vez desechado el producto deje correr abundante cantidad de agua para evitar acumulaciones de azidas met licas en las ca er as 3 Al igual que con cualquier producto de origen biol gico deber n aplicarse los procedimientos de manipulaci n adecuados 4 Utilice el equipo de protecci n personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel 5 La soluci n que no se utilice deber desecharse de acuerdo con las normativas locales provinciales y nacionales IS503 ES MNI 2009 12 04 p g 1 3 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Almacenamiento Preparaci n de las muestras incluido material necesario pero no suministrado Procedimiento de tinci n incluido material necesario pero no suministrado Interpretaci n de la tinci n Caracter sticas de resultados 116598 002 Almacenar a 2 8 C No utilizar despu s de la fecha de caducidad impresa en el vial Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas el usuario deber comprobar dichas condiciones No existen signos evidentes que indiquen inestabilidad de este producto Por lo tanto los controles positivo y negativo deber n analizarse de manera simult nea con las muestras del paciente En caso de observarse una coloraci
9. erpretaci n de la tinci n y 9 Limitaciones generales El anticuerpo policlonal de conejo listo para su uso se suministra en forma l quida en un tamp n que contiene prote na estabilizadora y 0 015 mol L de azida de sodio P ptido sint tico compuesto de 156 168 amino cidos de la parte citopl smatica de la cadena e del CD3 humano unido a la tiroglobulina 1 En la transferencia de Western el anticuerpo detecta bandas de los pesos moleculares esperados para los ant genos CD3 2 El anticuerpo reconoce el CD3e tanto en la l nea celular T Jurkat como en una l nea celular citol tica natural NK11 pero no reacciona con lisados preparados de varias l neas de c lulas B Raji Ramos y JY con una l nea celular mieloide U937 o con una l nea celular de carcinoma de colon Colo 205 11 En la inmunoprecipitaci n de lisados Nonidet P40 de linfoblastos T con superficie yodada el anticuerpo precipita las cadenas y 26 kDa 5 21 kDa y e 19 kDa de la mol cula de CD3 con un patr n de precipitaci n similar al observado con el anticuerpo bien caracterizado monoclonal mouse anti human CD3 clon UCHT1 1 En el ELISA el anticuerpo marca el p ptido CD3 utilizado como inmun geno 1 Para usuarios profesionales 2 Este producto contiene azida de sodio NaN3 un compuesto qu mico altamente t xico en su forma pura Aunque a las concentraciones presentes en el producto no est clasificada como peligrosa la azida de sodio pue
10. y Uso previsto Sin nimos del ant geno Resumen y explicaci n Reactivo suministrado Inmun geno Especificidad Precauciones 116598 002 C FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus N de cat logo 15503 Para uso en diagn stico in vitro FLEX Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est indicado para su uso en inmunohistoqu mica junto con los instrumentos Dako Autostainer Autostainer Plus Este anticuerpo resulta til en la identificaci n de las c lulas T y neoplasias relacionadas 1 2 La interpretaci n cl nica de los resultados de cualquier tinci n o su ausencia debe complementarse con estudios morfol gicos con controles adecuados y debe evaluarla un anatomopat logo calificado dentro del contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas T3 complejo CD3 3 El CD3 consta de por lo menos cuatro componentes diferentes y 5 e de 20 28 kDa En la superficie celular de los linfocitos el CD3 se asocia sin covalencia con el receptor de c lulas T TCR Se cree que los componentes del CD3 del complejo TCR CD3 intervienen en transducci n de la se al sobre el reconocimiento del ant geno por la TCR 4 Las c lulas T expresan el CD3 en el timo la m dula sea el tejido linfoide perif rico y la sangre 5 6 Se sabe que el nico otro tipo de c lulas normales marca
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