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1. mantenga en hielo o congele la muestra P gina 2 Procedimiento Para la Inoculaci n de las Placas de Cultivo SSGN para Mastitis 1 Marque en el exterior de la base de la 8 Tape la placa con su cubierta y volt ela boca placa el nombre o n mero de la vaca abajo 2 Invierta el tubo que contiene la leche 9 Ponga las placas en la incubadora puesta a 35 varias veces para asegurar que se 95 y exam nelas a intervalos de 24 y 48 horas mezcle adecuadamente para identificar reacciones Consulte la hoja de interpretaci n para la identificaci n 3 Inserte la parte redonda del asa est ril en la leche para llenar el asa 10 Siga las instrucciones adjuntas para el desecho apropiado de las placas 4 Toque con el asa la superficie del primer cuadrante de agar 5 Suavemente esparza la gotita de leche hacia el centro de la superficie del agar No agujere la superficie del agar 6 Suavemente restriegue la superficie varias veces atravesando el esparcido inicial para distribuir la muestra en la mayor parte de la superficie del cuadrante como sea posible 7 Repita los pasos 3 6 para los tres cuadrantes adicionales Fecha ID del Resultados Resultados Resultados Resultados Identificaci Animal Cuarto del del del del n del Cuadrante 1 Cuadrante 2 Cuadrante 3 Cuadrante 4 Organismo Rev 07 05 P gina 3 PLACA DE CUADRANTES SSGN PARA MASTITIS Agar Sangre Gram Negativos Staph Strep Cada s2. de organismos Gram negativos Los organismos que no son coliformes producen colonias blancas Vea la ilustraci n en la p gina 8 8 OTROS Si hay crecimiento solo en la secci n 1 o nada de crecimiento en ninguno de los cuadrantes los s ntomas cl nicos se pueden deber a organismos que no se presentan en este manual Contacte a su veterinario o a un laboratorio de referencia Las colonias demostradas en estas p ginas son cultivos puros de laboratorio y son usadas para ilustrar reacciones microbianas t picas en el medio de crecimiento selectivo Las muestras de leche cruda de mastitis se ven bastante diferentes debido a los m ltiples tipos de bacteria que crecen en la muestra sobre crecimiento o recolecci n deficiente de la muestra Vea las p ginas 9 y 10 para ejemplos Rev 07 05 P gina 5 STAPH AUREUS Crecimiento en agar sangre Crecimiento con hem lisis aumentada en agar Staph STAPH AMBIENTAL Crecimiento en agar sangre Crecimiento sin hem lisis en agar Staph Rev 07 05 P gina 6 STREP AGALACTIAE Crecimiento en agar sangre Crecimiento Crecimiento en agar hem lisis Staph aumentada en agar Strep STREP AMBIENTAL Crecimiento en agar sangre Crecimiento en agar Staph Crecimiento en agar Strep Crecimiento en agar Strep puede ser con o sin oscurecimiento o color caf Rev 07 05 P gina 7 GRAM NEGATIVOS COLIFORMES E COLI Colonias rosas Crecimien
3. ser esparcidas 6 Despu s de que las placas SSGN hayan sido observadas la informaci n anotada vac e suficiente soluci n blanqueadora para inundar la superficie de la placa Coloque los fondos y las tapas en bolsas sellables y t relas a la basura lejos de los animales 7 Si en una placa SSGN no se le ve se as de crecimiento no deber de ser usada nuevamente Desinfecte la placa tal como se describe en el paso 6 y desc rtela Rev 07 05 P gina 1 T cnica de Recolecci n de Leche el Hato Lechero Entero La recolecci n de muestras de leche para determinar el estado de mastitis contagioso de cada vaca en su hato es un paso cr tico si Strep agalactiae o Staph aureus se encuentran presentes Es indispensable que usted siga los pasos enlistados debajo para asegurar resultados exactos Los mejores resultados se lograran si las muestras son recolectadas a la hora normal de orde a Nosotros sugerimos una persona para ordenar y una persona para recolectar muestras O Los medidores de flujo no son aceptables para recolectado de muestras de leche Toda la leche circula a trav s de la misma tuber a Por lo tanto todas muestras que se colecten de esta manera estar n contaminadas con los mismos tipos de bacterias Siga las instrucciones de abajo cuando haga la recolecci n O Las vacas tratadas con antibi ticos no deber n de ser muestreadas por 72 horas despu s del tratamiento o de acuerdo a requerimientos de ti
4. ativos color rosa claro en la esquina superior derecha tal como se muestra en la ilustraci n de la p gina 4 2 STAPH AUREUS Crecimiento en la secci n 1 y la secci n 4 Las colonias en la secci n cuatro mostrar n hem lisis o aclaraci n del color rojo del medio que rodea a la colonia Vea la ilustraci n en la pagina 6 Crecimiento o no crecimiento en las secciones 2 y 3 no afectan este diagn stico 3 STAPH AMBIENTAL Crecimiento en la secci n 1 y la secci n 4 Las colonias en la secci n 4 no mostrar n hem lisis o aclaraci n del color rojo del medio Vea la ilustraci n en la p gina 6 Crecimiento o no crecimiento en las secciones 2 y 3 no afectan este diagn stico 4 STREP AGALACTIAE Crecimiento en las secciones 1 3 y 4 Las colonias en la secci n 3 mostrar n hem lisis o aclaraci n del color rojo del medio alrededor de las colonias Vea la ilustraci n en la p gina 7 Crecimiento o no crecimiento en la secci n 2 no afecta este diagn stico 5 STREP AMBIENTAL Crecimiento en las secciones 1 3 y 4 Las colonias en la secci n 3 pueden tener un color caf pero sin hem lisis Vea la ilustraci n en la p gina 7 COLIFORMES E COLT Crecimiento en las secciones 1 y 2 es indicativo de organismos Gram negativos Un precipitado rosa en el medio que rodea las colonias es evidencia de la presencia de organismos E coli Vea la ilustraci n en la p gina 7 NO COLIFORMES Crecimiento en las secciones 1 y 2 es indicativo
5. colecci n Soluci n de blanqueador para ropa casero Bolsas de pl stico sellables para congelar Tambi n se requiere una incubadora ajustada 35 95 Cada secci n de la placa con los cuadrantes contiene diferentes medios capaces de diferenciar distintos grupos de bacteria vea la ilustraci n en la pagina 4 La Secci n 1 es agar con sangre no selectivo en el cual pueden crecer la mayor a de las bacterias Se usa como un control de crecimiento La Secci n 2 es espec fica para Gram negativos del medio ambiente tales como coliformes E coli y Klebsiella La Secci n 3 es espec fica para Strep La Secci n 4 es espec fica para Staph ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES POR FAVOR LEA CUIDADOSAMENTE 1 La recolecci n de la muestra es muy importante S1 la muestra de leche se contamina por el contacto con esti rcol manos sucias o tetillas mal lavadas el cultivo de mastitis no ser valido 2 No use leche de un animal que haya sido tratado con antibi ticos Permita un tiempo suficiente para que se elimine del animal seg n las instrucciones del fabricante de antibi ticos 3 No use la leche recolectada de un medidor de flujo Esta leche puede contener bacterias provenientes de otras vacas 4 La muestra de leche deber de ser sembrada en las placas bajo un ambiente limpio lejos de los animales 5 Nunca toque las colonias en las placas con sus dedos Estas colonias de microorganismos vivos pudieran
6. ecci n de la placa en cuadrantes contiene diferentes nutrientes para bacterias que son capaces de distinguir diferentes grupos de bacteria Secci n 1 Agar sangre no selectivo capaz en el cual la mayor a de las bacterias crecen Se usa como un control de crecimiento Secci n 2 Es espec fica para Gram negativos tales como coliformes E coli y Klebsiella Secci n 3 Es espec fica para Strep Secci n 4 Es espec fica para Staph Rev 07 05 P gina 4 Instrucciones para la Interpretaci n de Placas SSGN Las siguientes fotos ilustran las reacciones bioqu micas t picas de los microorganismos de inter s sobre las cuatro secciones de los medios nutrientes selectivos Debido a que los microorganismos crecen a diferentes velocidades de crecimiento observe la placa SSGN a las 24 48 horas 51 la placa SSGN no muestra ninguna reacci n t pica despu s de 24 horas contin e la incubaci n y obs rvelas nuevamente a las 40 48 horas No observe la placa si se ha incubado por m s de 50 horas Si la placa muestra una reacci n t pica como se describe en el siguiente resumen despu s de 24 horas o despu s de la segunda observaci n a las 40 48 horas acciones correctivas apropiadas deber n de ser implementadas Deseche la placa despu s de un solo uso a n si no hubo nada de crecimiento en la placa RESUMEN DE REACCIONES EN LOS MEDIOS SSGN 1 Coloque la placa SSGN sobre una superficie plana y limpia con la secci n 2 Gram neg
7. empos de espera para su eliminaci n indicados en la etiqueta 1 Identifique el tubo est ril de recolecci n con el n mero de identificaci n de la vaca o use tubos previamente numerados NO ponga los dedos las tetillas o cualquier otro objeto dentro del tubo o la tapa 2 Lave con mucho cuidado y seque las tetillas de la vaca para orde ar Ponga cuidado en particular de la punta de la tetilla Rev 07 05 Use una gasa con alcohol por cada vaca y sanitize muy bien la punta de la tetilla 51 la gasa se ensucia use otra hasta que esta permanezca limpia despu s de pasarla Empiece con las tetillas que est n m s lejos de usted de manera que sus brazos no vuelvan a depositar bacterias en las puntas de las tetillas Recolecte cantidades iguales de leche de todas las cuatro tetillas Empiece con las tetillas m s cercanas a usted de manera que no vuelva a depositar bacterias en las puntas de las tetillas Exprima 2 3 chorritos de leche para enjuagar el canal de la tetilla luego exprima un chorro en el tubo de recolecci n de cada tetilla Mantenga el tubo al lado de manera que no le caiga esti rcol cuando est exprimiendo la tetilla Solo llene los tubos hasta la mitad Tape el tubo y p ngalo en una cubeta con hielo L vese y s quese las manos entonces contin e con la siguiente vaca 51 usted no puede inocular la placa SSGN dentro de los siguientes 13 minutos despu s de la recolecci n refrigere
8. to indican en agar coliformes sangre Precipitado rosa adicional indica E coli Crecimiento en agar sangre Colonias blancas 2 indican Gram negativos Rev 07 05 P gina 8 EJEMPLOS DE OTRAS PLACAS STAPH AUREUS Rev 07 05 P gina 9 SOBRECRECIMIENTO Necesita volver a ser muestreada MEZCLA Coliformes No coliformes Staph Strep Necesita volver a ser muestreada Rev 07 05 P gina 10 Resultados Resultados Identificaci n del Cuadrante del Cuadrante del Cuadrante del Cuadrante del Organismo Resultados Resultados N N N N N N Animal Cuarto P gina 11 Rev 07 05
9. y pe Ea A r a i e P PATE Pu i al F E A i Fiel a i a 1 A E A O T Vg a ma y 1E mE 2 A i i I y 1 e Division of Diversified Laboratory Testing CULTIVO PARA MASTITIS SSGN rt PLACAS CON CUADRANTES MANUAL DEL USUARIO DOCI Services 5205 Quincy Street Mounds View MN 55112 Tel fono 763 785 0484 Revisi n 07 05 INTRODUCCION El juego de ensayo DQCI para mastitis de vacas causada por Staph Strep o por microorganismos Gram negativos Ensayo SSGN es un procedimiento para ayudar al productor lechero a identificar la prevalencia de estas bacterias en animales lactantes Las terapias de seguimiento o las estrategias sanitarias deber n de ser implementadas bajo asesor a de un veterinario un experto en ganado o el responsable de campo de la cooperativa El uso apropiado del ensayo SSGN para mastitis de DOCI le ayudar al productor a tomar acciones correctivas m s pronto optimizando la calidad de la leche y le ayudar a mantener la salud de hato ganadero MATERIALES REQUERIDOS 1 Una placa Petri dividida en cuadrantes que contenga cuatro medios diferenciales y selectivos para crecimiento de bacterias Una asa de inoculaci n de 10 microlitros Una gasa o hisopo mojado en alcohol Un tubo est ril para re
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