Perfil diagnóstico completo VetScan
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1. gt 6 fosfogluconato NADH H Page 47 of 73 F sforo El m todo de f sforo de Abaxis utiliza sucrosa fosforilasa SP acoplada con las reacciones de fosfoglucomutasa PGM y glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G 6 PDH 2 Mediante el sistema enzim tico por cada mol de f sforo inorg nico presente en la muestra se forma un mol de NADH La cantidad de NADH formado se mide como un criterio de valoraci n a 340 nm SP Sucrosa P Glucosa 1 fosfato G 1 P Fructosa SP PGM Mg G 1 P gt Glucosa 6 fosfato G 6 PDH Glucosa 6 fosfato NAD gt NADH 6 fosfogluconato H Potasio Se han desarrollado m todos espectrofotom tricos que permiten la medici n de la concentraci n del potasio con instrumentaci n est ndar de qu mica cl nica El m todo enzim tico de Abaxis se basa en la activaci n de la piruvato quinasa PK con potasio y muestra una linealidad excelente y una susceptibilidad despreciable a las sustancias end genas La interferencia de los iones sodio y amon aco se reduce al m nimo al a adir Kryptofix y glutamato deshidrogenasa respectivamente En la reacci n de acoplamiento de enzimas la PK desfosforila al fosfoenolpiruvato PEP para formar piruvato La lactatodeshidrogenasa LDH cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo NADH se oxida a NAD El rango de cambio en la absorbancia entre 340 y 405 nm se debe a la2. VR 5 2 6 3 Alb mina BCG g dl n 80 Control 1 Media 3 9 3 9 DE 0 13 0 14 VR 3 3 3 6 Control 2 Media 2 3 2 3 DE 0 09 0 10 VR 3 9 4 3 Fosfatasa alcalina U L Fosfatasa U I n 80 Control 1 Media 39 39 DE 1 81 2 29 VR 4 6 5 9 Control 2 Media 281 281 DE 4 08 8 75 VR 1 5 3 1 Amilasa U n 80 Control 1 Media 46 46 DE 2 40 2 63 VR 5 2 5 7 Control 2 Media 300 300 DE 11 15 11 50 VR 3 7 3 8 Calcio mg dl n 80 Control 1 Media 8 6 8 6 DE 0 21 0 25 VR 2 4 2 9 Control 2 Media 11 8 11 8 DE 0 39 0 40 VR 3 3 3 4 Page 54 of 73 Tabla 3 Precisi n continuaci n Analito Tama o de la muestra Creatinina mg dl n 80 Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Glucosa mg dl n 80 Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR F sforo mg dl n 80 Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Potasio mmol l n 120 Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Sodio mmol l n 80 Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Bilirrubina total mg dl n 80 Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Intraserial 1 1 0 14 12 7 5 2 0 23 4 4 66 0 76 1 2 278 2 47 0 9 6 9 0 2 2 2 3 4 0 1 4 1 6 7 0 26 3 9 4 3 0 22 5 1 148 5 1 3 4 118 3 2 2 7 0 8 0 06 7 5 3 2 0 09 1 7 Page 55 of 73 Total 1 1 0 14 12 7 5 2 0 27 232 66 1 03 1 6 278 3 84 1 4 6 9 0 2 2 6 3 4 0
3. Se utilizan dos cubetas para determinar la concentraci n de creatinina en la muestra La creatina end gena se mide en la cubeta de referencia que es restada de la creatina end gena combinada y la creatina formada a partir de las reacciones enzim ticas en la cubeta de prueba Una vez eliminada la creatina end gena de los c lculos la concentraci n de creatinina es proporcional a la intensidad del color rojo producido El criterio de valoraci n del fin de la reacci n se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 600 nm Glucosa Las mediciones de la concentraci n de glucosa fueron introducidas por primera vez mediante m todos de reducci n del cobre como Folin Wu y Somogyi Nelson La falta de especificidad en las t cnicas de reducci n del cobre llev al desarrollo de procedimientos cuantitativos con las enzimas hexoquinasa y glucosa oxidasa La prueba de la glucosa de Abaxis es una versi n modificada del m todo de la hexoquinasa que se propuso como la base para el m todo de referencia de la glucosa La reacci n de glucosa con adenosina trifosfato ATP catalizada por hexoquinasa HK resulta en glucosa 6 fosfato G 6 P y adenosina difosfato ADP La glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G 6 PDH cataliza la reacci n de G 6 P en 6 fosfogluconato y la reducci n de nicotinamida adenina dinucle tido NAD a NADH Hexoquinasa Glucosa ATP Glucosa 6 fosfato ADP M gt G 6 PDH G 6 P NAD 3
4. n de piruvato a lactato Al mismo tiempo la NADH se oxida a NAD como se observa en el esquema de la siguiente reacci n ALT L Alanina a cetoglutarato gt L Glutamato piruvato LDH Piruvato NADH H Lactato NAD El ndice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de ALT en la muestra Alb mina Los m todos usados con mayor frecuencia para la determinaci n de la alb mina son las t cnicas de uni n a colorantes El bromocresol verde BCG es el m s usado de los m todos de tinci n Surfactantes BCG Alb mina e Complejo BCG Alb mina pH cido La alb mina unida es proporcional a la concentraci n de alb mina en la muestra Se trata de una reacci n final que se mide bicrom ticamente a 630 nm y 405 nm Fosfatasa alcalina El procedimiento VetScan se modific a partir de los m todos AACC e IFCC La fosfatasa alcalina hidroliza al p NPP en un tamp n con i n met lico y forma p nitrofenol y fosfato El uso de p nitrofenil fosfato p NPP aumenta la velocidad de la reacci n La fiabilidad de esta t cnica aumenta significativamente con el uso de un tamp n con i n met lico para mantener la concentraci n de iones magnesio y zinc en la reacci n El m todo de referencia de la Asociaci n Norteamericana de Qu mica Cl nica AFCC usa p NPP como substrato y un
5. A and Kaplan LA Total serum protein Jn LA Kaplan and AJ Pesce eds Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 60 Reigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethods des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 5 Weicheselbaum TE An accurate and rapid method for determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 9 Doumas BT et al A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 50 Sampson EJ MA Baird CA Burtis EM Smith DL Witte and DD Bayse A coupled enzyme equilibrium method for measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on urea candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Procedures for Handling and Processing of Blood Specimens tentative standard NCCLS document H18 A2 Wayne PA NCCLS 1999 Overfield CV Savory J and Heintges MG Glycosis a re evealuation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN and Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 14 Sherwin JE and Obernolte R Bilirubin Jn LA Kaplan and AJ Pesce eds Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed St Louis The C V Mosby Company 1989 1009 10
6. amortiguador con i n met lico ALP p Nitrofenil fosfato H 0 gt p Nitrofenol fosfato Z n M g La cantidad de ALP en la muestra es proporcional al ndice de aumento de la diferencia de absorbancia entre 405 nm y 500 nm Amilasa Los m todos com nmente utilizados son aquellos sacarog nicos y cromol ticos La t cnica cl sica de medici n de la amilasa es un m todo sacarog nico pero es dif cil y exige demasiado tiempo Los m todos cromol ticos que utilizan p nitrofenilgluc sidos como sustratos fueron desarrollados recientemente Estos an lisis tienen mayor especificidad para la amilasa pancre tica que para la salival y son f cilmente monitorizables En el m todo de Abaxis el sustrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotrisida CNPG3 reacciona con a amilasa en la muestra del paciente liberando 2 cloro p nitrofenol CNP La liberaci n del CNP crea un cambio en el color a Amilasa CNPG3 CNP D Maltotriosida La reacci n se mide bicrom ticamente a 405 nm y 500 nm El cambio en la absorbancia debido a la formaci n de CNP es directamente proporcional a la actividad de la a amilasa en la muestra Page 46 of 73 Calcio total El m todo de referencia para el calcio es la espectroscopia por absorci n at mica sin embargo este m todo no es apto para uso rutinario Los m todos espectrofotom tricos que utilizan o cresolftale na complexona CPC o indicadores arsenazo I
7. conversi n de NADH en NAD la cual es directamente proporcional a la cantidad de potasio en la muestra K PK ADP PEP Piruvato ATP LDH Piruvato NADH H gt Lactato NAD Sodio Se han desarrollado m todos colorim tricos y enzim ticos que permiten la medici n de la concentraci n de sodio mediante instrumentaci n qu mica cl nica est ndar 2 En la reacci n enzim tica de Abaxis la P galactosidasa es activada por el sodio presente en la muestra La enzima activada cataliza la reacci n de o nitrofenilo o D galactopiranosida ONPG a o nitrofenol y galactosa El ndice de reacci n entre 405 nm y 500 nm es proporcional a la concentraci n de sodio Na ONPG H O gt o Nitrofenol Galactosa P Galactosidasa Bilirrubina total T picamente los niveles de bilirrubina total se han evaluado por pruebas que emplean cido sulfan lico diazotizado Se ha desarrollado un m todo m s moderno y m s espec fico que utiliza la enzima bilirrubina oxidasa Adem s de utilizar el m todo de prueba de la bilirrubina total m s espec fico la fotodegradaci n del electrolito se minimiza con el analizador porque la muestra se puede analizar inmediatamente despu s de obtenida En el procedimiento enzim tico la bilirrubina se oxida por la bilirrubina oxidasa en biliverdina La bilirrubina se mide como la diferencia en la absorbancia entre 467 nm y 550 nm La absorbancia inicial de esta reacci n de p
8. del reactivo de manera negativa No utilice un rotor de una bolsa da ada 6 Instrumento Consulte el manual del usuario de VetScan para recibir informaci n completa sobre el uso del analizador 7 Obtenci n y preparaci n de las muestras El tama o m nimo necesario para la muestra es 100 ul de sangre entera heparinizada plasma heparinizado suero o control La c mara de muestra del rotor reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra e La muestra recogida en una micropipeta heparinizada debe dispensarse en el rotor reactivo inmediatamente despu s de la recolecci n de la muestra e Para las muestras de sangre o plasma use s lo tubos de recolecci n de muestras tratados con heparina litio tap n verde Para las muestras de suero use tubos para obtenci n de muestras sin aditivo tap n rojo o tubos separadores de suero tap n rojo o rojo negro e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben homogeneizarse antes de transferir una muestra al rotor reactivo Invierta cuidadosamente los tubos para obtenci n de muestras varias veces justo antes de transferir la muestra No agite el tubo de recolecci n La agitaci n puede causar hem lisis e La prueba debe comenzarse en los 10 minutos siguientes a la transferencia de la muestra al rotor reactivo e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben analizarse en los 60 minutos de la recolecci n si esto no es posible separe la muestra y transfi rala
9. herm tico y saque el rotor teniendo cuidado de no tocar el anillo del c digo de barras situado en la parte superior del rotor reactivo Utilice de acuerdo con las instrucciones provistas en el manual del usuario de VetScan Deseche los rotores no usados transcurridos 20 minutos de la apertura de la bolsa Los rotores dentro de bolsas abiertas no pueden volver a colocarse en el refrigerador para uso en otro momento Almacenamiento Almacene rotores reactivos en sus bolsas selladas a 2 8 C 36 46 F No exponga los rotores abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C 90 F No permita que los rotores sellados en sus bolsas de aluminio permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes del uso Abra la bolsa y retire el rotor inmediatamente antes de usarlo Indicaciones de inestabilidad o deterioro del rotor reactivo e Todos los reactivos contenidos en el rotor reactivo cuando se almacena tal como se describe m s arriba son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsa del rotor No utilice un rotor despu s de la fecha de caducidad La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico VetScan e Una bolsa desgarrada o da ada puede hacer que el rotor sin uso entre en contacto con la humedad lo que puede afectar el rendimiento
10. lisis para cada rotor reactivo del perfil diagn stico completo VetScan es de menos de 14 minutos El analizador mantiene el rotor reactivo a una temperatura de 37 C 98 6 F durante el intervalo de medici n Procedimiento de prueba La recolecci n completa de la muestra y los procedimientos paso por paso se detallan en el manual del usuario de VetScan Page 51 of 73 Calibrado El analizador qu mico VetScan es calibrado por el fabricante antes de ser enviado El c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras proporciona al analizador los datos de calibraci n espec ficos del rotor Consulte el manual del usuario de VetScan Control de calidad Pueden analizarse controles peri dicamente en el analizador qu mico VetScan para verificar la exactitud del analizador Abaxis recomienda analizar un control comercialmente disponible basado en suero Los controles deben analizarse en el rotor reactivo de la misma manera que las muestras de pacientes Consulte el manual del usuario de VetScan para aprender c mo analizar los controles 9 Resultados El analizador qu mico VetScan calcula autom ticamente e imprime las concentraciones de analitos en la muestra Los detalles de los c lculos del criterio de valoraci n y velocidad de la reacci n se encuentran en el manual del usuario de VetScan 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se detallan en el manual del usuario del sistema VetSca
11. 0 95 0 92 0 94 0 99 1 02 0 99 0 89 0 81 0 90 0 67 0 74 N A 1 24 1 24 1 18 1 00 1 01 1 00 1 01 0 97 0 94 1 09 0 80 0 991 Page 56 of 73 Intercepci n 0 0 6 0 1 0 0 6 5 1 4 34 117 N A 1 9 2 1 0 8 0 0 0 1 0 4 6 3 16 0 19 0 81 0 06 N 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 22 180 21 55 7 101 L mites de la muestra 10 1549 27 99 11 30 1 3 4 6 2 1 4 8 1 2 3 2 15 1722 6 54 119 1476 366 1991 473 3474 N A 7 3 13 0 6 3 12 4 7 2 15 1 0 6 10 6 0 3 13 6 0 3 6 2 28 348 52 607 36 353 0 8 87 2 4 6 9 0 8 7 8 Tabla 4 Correlaci n del analizador qu mico VetScan con uno o m s m todos comparativos continuaci n Coeficiente de L mites de la Pendiente Intercepci n N correlaci n muestra Potasio Canino 0 96 0 92 0 4 22 180 3 2 6 9 Felino 0 91 0 92 0 5 21 55 2 7 5 3 ome Equino 0 84 0 97 0 1 7 101 1 8 4 6 Canino 0 89 0 97 4 8 22 180 118 183 Sodio mmol l Felino 0 86 1 08 12 2 21 55 122 166 Equino 0 86 1 00 0 01 7 101 110 166 Bilirrubina Canino 0 87 0 84 0 1 22 180 0 2 3 2 total Felino 1 00 0 92 0 3 21 55 0 4 15 0 mg dl Equino 1 00 0 90 0 1 7 101 0 6 26 1 Prote nas Canino 0 98 1 03 0 1 22 180 2 6 10 7 totales g dl Felino 0 97 0 96 0 4 21 55 4 9 8 5 Equino 0 99 0 97 0 3 7 101 3 0 9 5 Nitr geno Canino 1 00 0 98 2 22 180 4 117 ureico Felin
12. 15 Henry RJ Canon DC and Winkelman Clinical Chemistry Principles and Technics 2 ed New York Harper and Row 1974 417 21 127 8 Scott MG Electrolytes and Blood Gases In Burtis CA Ashwood ER eds Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 ed Philadelphia WB Saunders Company 1999 617 721 Witte DL Brown LF and RL Williams Effects of bilirubin on detection of hydrogen peroxide by use of peroxidase Clin Chem 1978 24 1778 82 Melnik J and Potter JL Variance in capillary and venous glucose levels during glucose tolerance test Am J Med Tech 1982 48 543 5 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices approved guideline NCCLS Document EPS A Wayne PA NCCLS 1999 Page 58 of 73 13 Bibliograf a continuaci n 53 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Quality management for unit use testing proposed guideline NCCLS Document EP18 P Wayne PA NCCLS 1999 Page 59 of 73
13. 2 4 9 6 7 0 26 3 9 4 3 0 22 5 1 148 5 1 3 4 118 3 2 2 7 0 8 0 07 8 8 5 2 0 15 2 9 Tabla 3 Precisi n continuaci n Analito Prote nas totales g dl Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Nitr geno ureico mg dl Control 1 Media DE VR Control 2 Media DE VR Correlaci n Tama o de la muestra n 80 n 120 6 8 0 05 0 7 4 7 0 09 1 9 19 0 35 1 8 65 1 06 1 6 Intraserial Total 6 8 0 08 1 2 4 7 0 09 1 9 19 0 40 2 1 65 1 18 1 8 Fueron realizados estudios en terreno en un hospital de ensefianza de medicina veterinaria Se analizaron muestras de suero usando el analizador qu mico VetScan y un m todo comparativo En la tabla 4 se muestran las estad sticas de correlaci n representativas Tabla 4 Correlaci n del analizador qu mico VetScan con uno o m s m todos comparativos Alanina aminotransferasa UM Alb mina g dl Fosfatasa alcalina UN Amylasa U I Calcio mg dl Creatinina mg dl Glucosa mg dl F sforo mg dl Canino Felino Equino Canino Felino Equino Canino Felino Equino Canino Felino Equino Canino Felino Equino Canino Felino Equino Canino Felino Equino Canino Felino Equino Coeficiente de correlaci n 1 00 0 98 0 97 0 96 0 75 0 89 1 00 0 97 1 00 0 96 1 0 N A 0 84 0 77 0 94 0 99 1 00 0 95 0 96 1 00 0 97 0 994 0 916 0 971 Pendiente
14. CE Perfil diagn stico completo VetScan Exclusivamente para uso veterinario Servicio t cnico y Servicio al cliente 1 800 822 2947 Enero 2015 PN 500 7123 Rev E 2002 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Indicaciones El rotor reactivo del perfil diagn stico completo VetScan utilizado con el analizador qu mico VetScan utiliza reactivos secos y l quidos para proporcionar determinaciones cuantitativas in vitro de alanina aminotransferasa ALT alb mina ALB fosfatasa alcalina ALP amilasa AMY calcio total CA creatinina CRE globulina GLOB glucosa GLU f sforo PHOS potasio K sodio NA bilirrubina total TBIL prote na total TP y nitr geno ureico BUN en sangre entera heparinizada plasma heparinizado o suero Valor calculado 2 Resumen y explicaci n de las pruebas El rotor reactivo del perfil diagn stico completo VetScan y el analizador qu mico VetScan comprenden un sistema diagn stico in vitro que ayuda al veterinario en el diagn stico de los trastornos siguientes Alanita aminotransferasa Enfermedades hep ticas incluidas la hepatitis viral y la cirrosis cardiopat as Alb mina Enfermedades del h gado y del ri n Fosfatasa alcalina Enfermedades del h gado seas paratiroideas e intestinales Amilasa Enfermedad renal y pancre tica Calcio de la gl ndula paratiroides seas y nefropat as cr nicas tetania Creatinina Enfermedad renal Globulina La concen
15. II metalocr micos son los m s utilizados en la pr ctica El arsenazo III tiene una gran afinidad por el calcio y no depende de la temperatura como la CPC El calcio en la muestra del paciente se une al arsenazo III para formar un complejo de tintura de calcio Ca Arsenazo II Complejo de Ca y arsenazo III El criterio de valoraci n de la reacci n final se controla a 405 nm 467 nm y 600 nm La cantidad de calcio en la muestra es proporcional a la absorbancia Creatinina El m todo Jaffe presentado en 1886 sigue siendo el m todo usado con mayor frecuencia para la determinaci n de los niveles de creatinina en la sangre El m todo actual de referencia combina el uso de tierra de Fuller floridina con la t cnica de Jaffe para aumentar la especificidad de la reacci n Se desarrollaron m todos enzim ticos que son m s espec ficos para la creatinina que las distintas modificaciones de la t cnica Jaffe Los m todos que usan a la enzima creatinina amidohidrolasa eliminan el problema de la interferencia del i n amon aco que se vio en las t cnicas que usan creatinina iminohidrolasa Creatina amidinohidrolasa Creatinina H O _ gt _ Creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina HO gt Sarcosina Urea Sarcosina oxidasa Sarcosina HO 0 gt Glicina formaldeh do H 0 Peroxidasa H 0 TBHBA 4 AAP gt Colorante rojo de quinoneimina H O
16. a entre 550 nm y 850 nm Nitr geno ureico El sistema Abaxis utiliza una reacci n enzim tica acoplada En esta reacci n la ureasa hidroliza la urea en amon aco y di xido de carbono Al combinarse el amon aco con 2 oxoglutarato y nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH la enzima glutamato deshidrogenasa GLDH oxida la NADH en NAD Ureasa Urea H 0 gt _ NH 3 CO GLDH NH NADH H 2 Oxoglutarato gt L Glutamato H2O NAD El ndice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de urea en la muestra 4 Principios de la operaci n Consulte el manual del usuario del analizador qu mico VetScan para obtener informaci n sobre los principios y limitaciones del procedimiento 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada rotor reactivo del perfil diagn stico completo VetScan contiene soportes s lidos reactivos espec ficos para pruebas secas Un reactivo seco de muestra de referencia con amortiguador surfactantes excipientes y conservantes se incluye en cada rotor para utilizar en el c lculo de las concentraciones de alanina aminotransferasa alb mina fosfatasa alcalina amilasa calcio glucosa f sforo potasio sodio y nitr geno ureico Se incluyen muestras de referencia dedicadas en el rotor para calcular la concentraci n de creatinina y los niveles de bilirrubina total y de
17. a un tubo de ensayo limpio Analice la muestra separada de plasma o suero en las 5 horas siguientes a la centrifugaci n Si esto no es posible refrigere la muestra en un tubo de ensayo tapado a 2 8 C 36 46 F durante no m s de 48 horas Una muestra de plasma o suero puede almacenarse a 10 C 14 F durante un m ximo de 5 semanas en un congelador que no tiene un ciclo de autodescongelaci n e Las concentraciones de glucosa disminuyen aproximadamente 5 12 mg dl por hora en muestras no centrifugadas almacenadas a temperatura ambiente Page 50 of 73 e Las muestras de sangre entera refrigerada pueden causar cambios significativos en las concentraciones de glucosa y sos 46 creatinina e Los resultados de la bilirrubina total pueden verse afectados de manera negativa por la fotodegradacion Las muestras de sangre entera que no sean analizadas de inmediato deben ser almacenadas en la oscuridad por per odos que no excedan los 60 minutos Si la muestra no puede ser analizada dentro de ese per odo se la debe separar en plasma o suero y almacenar en un tubo de muestra con tapa en la oscuridad a bajas temperaturas Sustancias conocidas como interferencias e Fl nico anticoagulante recomendado para uso con el analizador qu mico VetScan es heparina de litio No debe usarse heparina s dica durante la recolecci n de muestras de sangre para ser utilizadas con este panel Abaxis realiz estudios que demuestran que el EDTA fluoruro oxala
18. assium and chloride in serum compared with determination by flame photometry coulometry and ion selective electrodes Clin Chem 1994 40 846 7 Hubl W et al Enzymatic determination of sodium potassium and chloride in abnormal hemolyzed icteric lipemic paraprteinemic or uremic serum samples compared with indirect determination with ion selective electrodes Clin Chem 1994 40 1528 31 Helgerson RC et al Host guest Complexation 50 Potassium and sodium ion selective chromogenic ionophores J Amer Chem Soc 1989 111 6339 50 Kumar A et al Chromogenic ionophere based methods for spectrophotometric assay of sodium and potassium in serum and plasma Clin Chem 1988 34 1709 12 Berry MN et al Enzymatic determination of sodium in serum Clin Chem 1988 34 2295 8 Malloy HT and Evelyn KA The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter J biol Chem 1937 119 481 90 Meites S Bilirubin directing reacting and total modified Mally Evelyn method Jn WR Faulkner and S Meites eds Selected Methods of Clinical Chemistry Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 9 119 24 Murao S and Tanaka N A new enzyme bilirubin oxidase produced by Myrothecium verrucaria MT 1 Agric Biol Chem 198 1 45 2383 4 Osaki S and S Anderson Enzymatic determination of bilirubin Clin Chem 1982 30 971 Abstract Perry B et al Measurement of total bilirubin by use of bilirubin oxidase Clin Chem 1986 32 329 32 Koller
19. continuaci n representa el espectro que puede detectar el sistema VetScan Los intervalos que aparecen a continuaci n no representan intervalos normales Tabla 2 Intervalos din micos de VetScan Equino 65 110 mg dl 3 6 6 1 mmol l 1 9 4 3 mg dl 0 61 1 39 mmol l 2 5 5 2 mmol l 2 5 5 2 mmol l 126 146 mmol l 126 146 mmol l 0 5 2 3 mg dl 9 39 umol 1 5 7 8 0 g dl 57 80 g l 7 25 mg dl 2 5 8 9 mmol l Analito Inter valos din micos Unid ades comunes Unidades SI ALT 5 2000 UN 5 2000 UN ALB 1 6 5 g dl 10 65 g l ALP 5 2400 UN 5 2400 UN AMY 5 4000 UN 5 4000 U I CA 4 16 mg dl 1 0 4 0 mmol l CRE 0 2 20 mg dl 18 1768umol l GLOB 1 11 g dl 10 110 g l GLU 10 700 mg dl 0 6 39mg dl PHOS 0 20 mg dl 0 6 46 mmol l K 1 5 8 5 mmol 1 5 8 5 mmol l NA 110 170 mmol l 110 170 mmol l TBIL 0 1 30 mg dl 1 7 513 pmol l TP 2 14 g dl 20 140 g l BUN 2 180 mg dl 0 7 64 3 mmol urea l Valor calculado Page 53 of 73 Precisi n Los estudios de precisi n fueron conducidos mediante las recomendaciones NCCLS EP5 A con modificaciones basadas en NCCLS EP18 P para equipos utilizados en unidad Los resultados para los an lisis intraseriales y de precisi n total fueron determinados evaluando controles de dos niveles Tabla 3 Precisi n Analito Tama o de la muestra Intraserial Total Alanina Aminotransferasa U l n 80 Control 1 Media 21 21 DE 2 76 2 79 VR 13 1 13 3 Control 2 Media 52 52 DE 2 70 3 25
20. ectadas por el plazo transcurrido entre el momento en el que el paciente ingiri alimentos y el tipo de muestra obtenida del paciente Para interpretar con precisi n los resultados de la glucosa se deben obtener las muestras de un paciente que haya estado en ayunas durante un m nimo de 12 horas e Cuando se analizan muestras con un ndice lipid mico 3 se puede ver interferencia en la prueba de prote na total Las muestras con una concentraci n de triglic ridos superior a 400 mg dl pueden mostrar un nivel mayor de prote na total El analizador qu mico VetScan elimina todos los resultados que sufren una interferencia por parte de la lipidemia superior al 10 En lugar del resultado en la tarjeta de resultados se imprime LIP e La prueba de potasio del sistema VetScan es un ensayo de piruvato quinasa PK lactatodeshidrogenasa LDH acoplados Por tanto en casos de trauma muscular extremo o niveles muy elevados de creatina quinasa CK el VetScan puede recuperar un valor de potasio K falsamente elevado En casos como ste los valores de recuperaci n de potasio inesperadamente altos deben confirmarse con otra metodolog a 8 Procedimiento Materiales suministrados e Unrotor reactivo del perfil diagn stico completo VetScan Materiales necesarios pero no suministrados e Analizador qu mico VetScan Par metros de prueba El sistema VetScan opera a temperaturas ambientes entre 15 C y 32 C 59 90 F El tiempo de an
21. n e Si un resultado para una prueba particular supera los valores del an lisis la muestra deber analizarse por otro m todo de prueba homologada o enviarse a un laboratorio de referencia e Las muestras con hematocritos que excedan del 60 de volumen corpuscular de eritrocitos dar n resultados inexactos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden ser centrifugadas y luego volver a analizar el plasma con un nuevo rotor reactivo Advertencia Pruebas exhaustivas del analizador qu mico VetScan han demostrado que en casos muy raros la muestra aplicada al rotor reactivo podr a no fluir con facilidad a la c mara de la muestra Debido al flujo irregular puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y varios resultados obtenidos pueden quedar fuera de los valores de referencia establecidos La muestra puede volverse a analizar con un nuevo rotor reactivo 11 Valores esperados Estos intervalos normales s lo se proporcionan como una recomendaci n Los intervalos de referencia m s definitivos son aquellos establecidos para su poblaci n de pacientes Los resultados deben interpretase conjuntamente con las se ales cl nicas del paciente Para personalizar los intervalos normales espec ficos del analizador qu mico VetScan para el otro banco consulte el manual del usuario de VetScan bajo las funciones de las teclas de men Tabla 1 Intervalos de referencia Canino Feli
22. no Equino ALT 10 118 UA 20 100 U L 5 20 U l 10 118 U I 20 100 U I 5 20 UN ALB 2 5 4 4 g dl 2 2 4 4 g dl 2 2 3 7 g dl 25 44 g l 22 44 g l 22 37 g l ALP 20 150 UN 10 90 U 50 170 UN 20 150 U I 10 90 UN 50 170 U I AMY 200 1200 U L 300 1100 U l 5 15 UA 200 1200 U l 300 1100 U l 5 15 UA CAt 8 6 11 8 mg dl 8 0 11 8 mg dl 11 5 14 2 mg dl 2 2 3 0 mmol l 2 0 3 0 mmol l 2 9 3 6 mmol l CRE 0 3 1 4 mg dl 0 3 2 1 mg dl 0 6 2 2 mg dl 27 124 umol 1 27 186 umol 1 53 194 umol l 2 3 5 2 g dl 1 5 5 7 g dl 2 7 5 0 g dl GLOR 23 52 g l 15 57 g l 27 50 g l Page 52 of 73 Tabla 1 Intervalos de referencia continuaci n GLU PHOS TBIL TP BUN Canino 60 110 mg dl 3 3 6 1 mmol l 2 9 6 6 mg dl 0 94 2 13 mmol l 3 7 5 8 mmol l 3 7 5 8 mmol l 138 160 mmol l 138 160 mmol l 0 1 0 6 mg dl 2 10 umol 5 4 8 2 g dl 54 82 g l 7 25 mg dl 2 5 8 9 mmol l Felino 70 150 mg dl 3 9 8 3 mmol l 3 4 8 5 mg dl 1 10 2 74 mmol l 3 7 5 8 mmol l 3 7 5 8 mmol l 142 164 mmol l 142 164 mmol l 0 1 0 6 mg dl 2 10 umol 5 4 8 2 g dl 54 82 g l 10 30 mg dl 3 6 10 7 mmol l 12 Caracteristicas de rendimiento linealidad La qu mica para cada analito es lineal a lo largo del intervalo din mico enumerado a continuaci n cuando el sistema VetScan se opera de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario de VetScan La tabla de intervalos din micos que aparece a
23. o 1 00 1 07 5 21 55 14 165 mg dl Equino 1 00 0 95 1 7 101 3 64 13 Bibliograf a 1 Wr bleski F and LaDue Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 71 2 Bergmeyer HU and Horder M IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 34 3 Webster D et al An assessment on the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 8 4 Bowers GN et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 1 General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 74F 5 Ohmori Y Uber die Phosphomomesterase Enzymologia 1937 4 217 31 6 Fujita H Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Biochem Japan 1937 30 69 87 7 Petitclerc C et al Mechanism of action of Mg and Zn on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn and Mg alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 8 Tietz NW et al A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 61 9 Somogyi M Modifications of two methods for the assay of amylase Clin Chem 1960 6 23 35 10 Gillard BK Markman HC and Feig SA Direct spectrophotome
24. prote na total Cada rotor reactivo contiene tambi n un diluyente que consiste en surfactantes y conservantes Advertencias y precauciones e Para uso diagn stico veterinario in vitro El envase del diluyente del rotor reactivo se abre autom ticamente cuando se cierra el caj n del analizador No puede reutilizarse un rotor con un envase de diluyente abierto Aseg rese de que la muestra o la prueba est colocada en el rotor antes de cerrar el caj n e El reactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o c usticas El usuario no entra en contacto con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso de que se manipule el reactivo en soporte s lido por ejemplo limpieza tras caerse y romperse un rotor reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel y la inhalaci n del mismo Page 49 of 73 e Algunos reactivos en soporte s lido contienen azida s dica que puede reaccionar con plomo y cobre para formar azidas met licas muy explosivas Los reactivos no entrar n en contacto con el plomo y cobre si se siguen los procedimientos recomendados Sin embargo si los reactivos entran en contacto con los metales se debe lavar abundantemente con agua para prevenir la acumulaci n de azida Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los rotores reactivos pueden usarse inmediatamente despu s de retirarse del refrigerador sin calentarlos previamente Abra la bolsa de cierre
25. t al Enzymatic Creatinine Assay A New Colorimetric Method Based on Hydrogen Peroxide Measurement Clin Chem 1983 29 1494 1496 21 Whelton A et al Nitrogen Metabolites and Renal Function In CA Burtis and ER Ashwood Eds Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3 Ed Philadelphia W B Saunders Company 1999 1513 1575 Page 57 of 73 13 Bibliograf a continuaci n 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 Folin O and Wu H A System of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper idiometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N A photometric adaption of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose In LA Kaplan and AJ Pesce eds Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Schulz DW et al An Enzymic Method for the Measurement of Inorganic Phosphate Determination Anal Biochem 1967 19 300 14 Tedokon M Suzuki et al Enzymatic Assay of Inorganic Phosphate with Use of Sucrose Phosphorylase and Phosphoglucomutase Clin Chem 1992 38 512 5 Berry MN et al Enzymatic determination of potassium in serum Clin Chem 1989 35 817 20 Van Pelt J Enzymatic determination of sodium pot
26. to y cualquier anticoagulante con iones de amon aco interferir n con por lo menos un producto qu mico del rotor reactivo del perfil diagn stico completo VetScan e Los interferentes f sicos hem lisis ictericia y lipidemia pueden causar cambios en las concentraciones informadas de algunos analitos Los ndices de la muestra son impresos en la base de cada tarjeta de resultados para informar al usuario sobre los niveles de factores de interferencia presentes en cada muestra El analizador qu mico VetScan suprime cualquier resultado que sea afectado por m s del 10 de interferencia por hem lisis lipidemia o ictericia HEM LIP o ICT se imprime en la tarjeta de resultado en vez del resultado e La hem lisis puede provocar resultados err neamente elevados en las pruebas de potasio Este problema puede pasar desapercibido cuando se analiza sangre entera la liberaci n de potasio de apenas 0 5 de los eritrocitos puede provocar aumentos en el nivel s rico del potasio de 0 5 mmol l En particular incluso las muestras no hemolizadas que no se procesan correctamente pueden tener mayores niveles de potasio debido a la filtraci n de potasio intracelular igi i b R sy s 50 a e La bilirrubina puede interferir con la peroxosidasa utilizada en la reacci n de la creatinina Los resultados de la creatinina disminuyen cuando los niveles de bilirrubina son superiores a 10 mg dl e Las concentraciones de glucosa se ven af
27. traci n de globulina aumentar con la deshidrataci n y tambi n debe aumentar con la estimulaci n antig nica Glucosa Diabetes hiperglucemia hipoglucemia diabetes y enfermedad del h gado F sforo Enfermedad del ri n hipoparatiroidismo y trastornos nutricionales Potasio Malnutrici n y enfermedad renal Este electrolito se utiliza para diagnosticar las causas de v mitos diarrea y s ntomas cardiacos Sodio Deshidrataci n y diabetes Este electrolito se utiliza para diagnosticar las causas de v mitos diarrea y s ntomas cardiacos Bilirrubina total Trastornos hep ticos Prote nas totales Deshidrataci n enfermedad del ri n y del h gado enfermedades metab licas y nutricionales Nitr geno ureico en sangre Enfermedades del h gado y del ri n Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba hay que considerar todos los procedimientos de prueba restantes incluido el estado cl nico del paciente antes del diagn stico final Page 45 of 73 3 Principios del procedimiento Alanina aminotransferasa El m todo desarrollado para uso en el analizador qu mico VetScan es una modificaci n del procedimiento Wr blewski y LaDue recomendado por la Federaci n Internacional de Qu mica Cl nica IFCC En esta reacci n la ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de la L alanina al a cetoglutarato para formar L glutamato y piruvato La lactato deshidrogenasa cataliza la conversi
28. tric determination of a amylase activity in saliva with p nitrophenyl a maltoside as substrate Clin Chem 1977 23 2279 82 11 Wallenfels K et al The enzymic synthesis by transglucosylation of a homologous series of glycosidically substituted malto ologosaccharides and their use as amylase substrateds Carbohydrate Res 1978 61 359 68 12 Cali JP Bowers GN Young DS et al A reference method for the determination of total calcium in serum In GR Cooper ed Selected methods of Clinical Chemistry Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1977 8 3 8 13 Kessler G M Wolfman An Automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 14 Michaylova V P Ilkova Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 8 15 Scarpa A et al Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 16 Knoll VE et al Spezifische Kreatininbetimmung Im Serum Z Klin Chemi Clin Biochem 1970 8 582 587 17 Haeckel R et al Simplified Determinations of the True Creatinine Concentration In Serum And Urine J Cklin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 18 Moss GA et al Kinetic Enzymatic Method For Determining Serum Creatinine Clin Chem 1975 21 1422 1426 19 Jaynes PK et al An Enzymatic Reaction Rate Assay For Serum Creatinine With a Centrifugal Analyzer Clin Chem 1982 28 114 117 20 Fossati P e
29. unto final se determina por la cubeta de referencia con bilirrubina y la absorbancia final se obtiene de la cubeta de prueba con bilirrubina La cantidad de bilirrubina en la muestra es proporcional a la diferencia entre las mediciones inicial y final de la absorbancia Bilirrubina oxidasa Bilirrubina O _ _ Biliverdina HO Page 48 of 73 Prote nas totales El m todo de la prote na total es una modificaci n de la reacci n de Biuret mencionado por su precisi n exactitud y especificidad Originariamente fue desarrollado por Riegler y modificado por Weichselbaum Doumas y otros La reacci n de Biuret es un posible m todo de referencia para la prote na total 2 En la reacci n de Biuret la soluci n de prote nas es tratada con iones c pricos Cu II en un medio fuertemente alcalino Se agregan tartrato s dico de potasio e ioduro de potasio para impedir la precipitaci n del hidr xido de cobre y la auto reducci n del cobre respectivamente Los iones Cu II reaccionan con uniones pept dicas entre el ox geno del carbonilo y el nitr geno de la amida para formar un complejo Cu Prote na coloreado OH Prote na total Cu II gt Complejo Cu Prote na La cantidad de prote nas totales en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia del complejo Cu prote na La prueba de prote na total es una reacci n de valoraci n final y la absorbancia se mide como la diferencia en la absorbanci
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