Disco reactivo para panel de bioquímica Plus de
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1. 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 Bibliograf a continuaci n Fales FW Urea in serum direct diacetyl monoxime method In Selected Methods of Clinical Chemistry vol 9 Faulkner WR Meites S eds Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1982 365 373 Van Slyke et al A permanent preparation of urease and its use in the determination of urea J Biol Chem 1914 19 211 228 Fawcett JK et al A rapid and Precise method for the determination of urea J Clin Pathol 1960 13 156 159 Chaney et al Urea and ammonia determinations Clin Chem 1962 8 130 132 Talke H et al Enzymatische harnstoffbestimmung in blut and serum im optischen test nach Warburg Klin Wochensch 1965 43 174 175 Hallett et al Reduced nicotinamide adenine dinucleotide coupled reaction for emergency blood urea estimation Clin Chim Acta 1971 35 33 37 Patton et al Spectrophotometric and kinetics investigation of the Berthelot reaction for the determination of ammonia Anal Chem 1977 49 464 469 Sampson EJ et al A coupled enzyme equilibrium method for the measuring urea in serum optimization and evaluation of the AACC study group on Urea Candidate reference method Clin Chem 1980 26 816 826 Folin O Denis W A new colorimetric method for the determination of uric acid in blood J Biol Chem 1912 1913 13 469 475 Brown H The determination of uric acid in human blood J Biol Chem 1942. 105 5 2 30 22 33 0 2 12 6 4 108 0 3 14 2 9 8 6 0 25 2 9 11 8 0 40 3 4 1 1 0 14 13 1 5 2 0 27 5 2 25 0 74 2 9 106 2 29 2 2 Tabla 6 Precisi n continuaci n Analito Tama o de la muestra Intraserial Total Glucosa mg dl Control 1 N 80 Media 66 66 DE 0 76 1 03 Y CV 1 1 1 6 Control 2 N 80 Media 278 278 DE 2 47 3 84 Y CV 0 9 1 4 Prote nas totales g dl Control 1 N 80 Media 6 8 6 8 DE 0 05 0 08 Y CV 0 8 1 2 Control 2 N 80 Media 4 7 4 7 DE 0 09 0 09 CV 2 0 2 0 Nitr geno ureico en sangre mg dl Control 1 N 80 Media 19 19 DE 0 35 0 40 Y CV 1 9 2 1 Control 2 N 80 Media 65 65 DE 1 06 1 18 Y CV 1 6 1 8 cido rico mg dl Control 1 N 80 Media 3 8 3 8 DE 0 15 0 18 Y CV 4 0 4 8 Control 2 N 80 Media 7 5 7 5 DE 0 24 0 29 Y CV 3 2 3 9 Correlaci n Las muestras de suero y de sangre entera tratadas con heparina litio de los pacientes se extrajeron de dos sitios Las muestras de sangre entera se analizaron con el analizador qu mico de sangre Piccolo en los sitios de campo y las muestras s ricas se analizaron mediante m todos de comparaci n En los dos casos se utilizaron los resultados de las pruebas de las muestras s ricas con Piccolo y stos fueron indicados convenientemente en la tabla En algunos casos se usaron muestras muy y poco enriquecidas para cubrir el rango din mico Para CRP las muestras se recogieron de los pacientes en un sitio Las muestras de plasma tratadas con
3. Abaxis La parte posterior de la cinta de resultados es adhesiva para facilitar su colocaci n en los archivos del paciente 10 Limitaciones del procedimiento Las limitaciones generales del procedimiento se detallan en el Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo e FEl unico anticoagulante recomendado para su uso con el sistema de analizador qu mico xpress de Piccolo es heparina litio No utilice heparina s dica Abaxis ha realizado estudios que demuestran que EDTA fluoruro oxalato y cualquier otro anticoagulante que contenga iones de amon aco interferir n con por lo menos un producto qu mico contenido en el disco reactivo para panel de bioqu mica Plus de Piccolo e Las muestras con hematocritos que superan el 62 65 del volumen concentrado de eritrocitos una fracci n de volumen de 0 62 0 65 pueden dar resultados falsos Las muestras con un hematocrito elevado pueden ser analizadas como hemolizadas Estas muestras pueden ser centrifugadas para obtener plasma y luego realizar la prueba con un nuevo disco reactivo e La CRP es una prote na de fase aguda y se eleva de forma no espec fica en respuesta a la inflamaci n La variaci n intraindividual de la prote na C reactiva es significativa 30 a 60 y debe tomarse en cuenta al interpretar valores Puede ser necesario realizar mediciones en serie para estimar la media real de la prote na C reactiva en cualquier individuo concreto e Los anticuerpos humano
4. C reactiva Calcio Creatinina Gamma glutamil transferasa GGT Glucosa Prote nas totales TP Nitr geno ureico en sangre BUN cido rico 1 6 5 g dl 5 2400 U l 5 4000 U l 5 2000 U l 5 0 200 0 mg l 4 0 16 0 mg dl 0 2 20 mg dl 5 3000 U l 10 700 mg dl 2 14 g dl 2 180 mg dl 1 15 mg dl 10 65 g l 5 2400 U l 5 4000 U l 5 2000 U l 5 0 200 0 mg l 1 0 4 0 mmol l 18 1768 pmol l 5 3000 U l 0 6 38 9 mmol l 20 140 g l 0 7 64 3 mmol l 100 900 umol l Si la concentraci n del analito es superior al intervalo de medici n limites din micos pero inferior al intervalo del sistema en la cinta impresa se indicar n un signo gt en el l mite superior y un asterisco detr s del n mero por ejemplo ALT gt 2000 U L Si es inferior al intervalo din mico se imprimir lt con un asterisco por ejemplo ALT lt 5 U l Para valores que tengan un valor enormemente m s alto que el intervalo de medici n intervalo del sistema se imprimir en lugar del resultado Cada vez que aparezca en la cinta impresa recoja una muestra nueva y realice de nuevo la prueba Si los resultados de la segunda muestra se vuelven a suprimir p ngase en contacto con el servicio de atenci n al cliente de Abaxis Sensibilidad l mites de detecci n El l mite inferior del intervalo informable din mico para cada analito es alanina aminotransferasa 5 U l alb mina 1 g dl 10 g l fosfatasa alcalina 5 U l amil
5. Can Med Assoc J 1934 31 376 381 Kind PRN King EJ Estimation of plasma phosphatase by determination of hydrolysed phenol with amino antipyrine J Clin Pathol 1954 7 322 326 Ohmori Y Uber die Phosphomonoesterase Enzymologia 1937 4 217 231 Petitclerc C et al Mechanism of action of Mg and Zn on rat placental alkaline phosphatase I Studies on the soluble Zn and Mg alkaline phosphatase Can J Biochem 1975 53 1089 1100 Tietz NW et al A reference method for measurement of alkaline phosphatase activity in human serum Clin Chem 1983 29 751 761 Bowers GN Jr et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part I General considerations concerning the determination of the catalytic concentration of an enzyme in the blood serum or plasma of man Clin Chim Acta 1979 98 163F 174F McNeely MDD Amylase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 906 909 Zinterhofer L et al Nephelometric determination of pancreatic enzymes I Amylase Clin Chim Acta 1973 43 5 12 Somogyi M Modifications of two methods for the assay of amylase Clin Chem 1960 6 23 35 Gillard BK Markman HC Feig SA Direct spectro photometric determination of a amylase activity in saliva with p nitrophenyl a maltoside as substrate Clin Chem 1977 23 2279 2282 Wallenfels K et al The enzymic synthesis by transglucosyla
6. Rifampina s lo AST GLU TP y UA 1 5 Rifampina todos los dem s 0 5 cido salic lico excepto CRP 25 cido salic lico s lo CRP 50 Sulfasalazina excepto CRP 10 Sulfasalazina s lo CRP ND Sulfadiazina excepto CRP ND Sulfadiazina s lo CRP 150 Sulfanilamida 50 Teofilina 20 AND no realizado Tabla 3 Las siguientes sustancias mostraron un desvio superior al gt 10 en el resultado para una muestra en limites normales Concentraci n que de interferencia produce una observado interferencia gt 10 Alanina aminotransferasa ALT cido asc rbico 20 11 aum Oxaloacetato 132 843 aum Alb mina ALB Acetoacetato 102 18 dism Ampicilina 30 12 dism Cafe na 10 14 dism Cloruro de calcio 20 17 dism Cefalotina Keflin 400 13 aum Ibuprofeno 50 28 aum a cetoglutarato 5 11 dism Nitrofurantoina 20 13 dism Prolina 4 12 aum Sulfasalazina 10 14 dism Sulfanilamida 50 12 dism Teofilina 20 11 dism Fosfatasa alcalina ALP Teofilina 20 42 dism Page 72 of 103 Tabla 3 Las siguientes sustancias mostraron una desviaci n superior al gt 10 continuaci n Concentraci n que de interferencia produce una observado interferencia gt 10 Prote na C reactiva Glutationa 30 13 dism Isoniacida 4 16 dism L dopa 5 28 dism Oxaloacetato 132 57 dism Creatinina CRE cido asc rbico 20 11 dism Dopamina 19 80 dism L dopa 5 71 dism Epinefrina 1 45 dism Glutat
7. de la bilirrubina y el cido asc rbico Uricasa cido rico O HO Alanto na CO H20 Peroxidasa H20 4 AAP DHBSA gt Colorante rojo de quinoneimina HO La cantidad de cido rico en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia de la coloraci n de quinoneimina La absorbancia final de esta reacci n de punto final se mide bicrom ticamente a 500 nm y 600 nm 4 Principios de la operaci n Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo para obtener informaci n sobre los principios y limitaciones del procedimiento 5 Descripci n de los reactivos Reactivos Cada disco reactivo para panel de bioqu mica Plus de Piccolo contiene soportes s lidos reactivos secos espec ficos para la prueba descritos a continuaci n En cada disco se incluye un reactivo seco de muestra de referencia con amortiguador surfactantes excipientes y estabilizadores para utilizar en el c lculo de las concentraciones de alanina aminotransferasa ALT alb mina ALB fosfatasa alcalina ALP amilasa AMY aspartato aminotransferasa AST prote na C reactiva CRP calcio CA gamma glutamil transferasa GGT glucosa GLU prote nas totales TP nitr geno ureico en sangre BUN y cido rico UA En el disco se incluye una muestra de referencia dedicada para calcular la concentraci n de creatinina CRE Cada disco contiene un diluyente que consta d
8. del analizador 7 Obtenci n y preparaci n de las muestras En la secci n Obtenci n de muestras del manual del operador del analizador qu mico xpress de Piccolo se describen las t cnicas para la obtenci n de las muestras e El tama o m nimo de muestra requerido es 100 ul de sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio suero o material de control La c mara de muestra del disco reactivo puede contener hasta 120 ul de muestra e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben homogeneizarse antes de transferir una muestra al disco reactivo Invierta cuidadosamente el tubo para obtenci n de muestras varias veces justo antes de transferir la muestra No agite el tubo para obtenci n de muestras esto puede causar hem lisis e Las muestras de sangre entera s lo deben obtenerse mediante venopunci n y no de la sangre capilar e Las muestras de sangre entera obtenidas por venopunci n deben analizarse en un plazo de tiempo no superior a 60 minutos despu s de su recogida Las concentraciones de glucosa se ven afectadas por el plazo transcurrido entre el momento en el que el paciente ingiri alimentos y el tipo de muestra obtenida del paciente Para determinar los resultados de glucosa con precisi n deben obtenerse muestras de un paciente que haya ayunado por lo menos durante 12 horas Las concentraciones de glucosa disminuyen aproximadamente 5 12 mg dl por hora en muestras no centri
9. heparina litio se analizaron con el analizador qu mico xpress de Piccolo y un m todo de comparaci n Las muestras se han elegido para que cumplan los valores de distribuci n en la directriz EP9 A2 del CLSI Todas las muestras se probaron en singlicato el mismo d a con Abaxis y m todos de comparaci n En la tabla 7 se muestran las estad sticas de correlaci n representativas Tabla 7 Correlaci n del analizador qu mico sangu neo de Piccolo o el analizador qu mico xpress de Piccolo para CRP con m todos de comparaci n Coeficiente tortas L mites de M todo de de correlaci n Pendiente ci n P VER N lamuestra comparaci n Alanina 0 981 0 905 1 3 3 21 86 10 174 Paramax Aminotransferasa U l 0 985 0 946 2 5 2 84 67 10 174 Technicon Page 77 of 103 Tabla 7 Correlaci n continuaci n Coeficiente intercen L mites de M todo de de correlaci n Pendiente ci n P VER N lamuestra comparaci n AO 0 854 1 001 0 3 0 22 261 1 1 5 3 Paramax Almina ed 0 896 0 877 0 1 0 21 100 1 5 5 0 Beckman Fosfatasa 0 988 0 970 5 9 3 97 99 27 368 Paramax alcalina U l 0 929 1 136 17 6 4 79 80 26 150 Technicon 5 0 979 0 692 4 7 3 11 99 11 92 Paramax Ala iD 0 963 1 065 4 1 3 47 80 19 118 Technicon Aspartato 0 93 0 87 5 3 2 716 159 13 111 Paramax aminotransferasa U l 1 0 0 97 3 0 190 46 13 252 DAX Proteina C reactiva mg l 0 998 0 990 0 4 4 60 113 5 4 198 6 Beckman Calcio mg dl 0 991 0 990 0 4 0 17 25 5 2 11 9 Paramax 8 0 673 0 7
10. la reducci n de nicotinamida adenina dinucle tido NADH la enzima glutamato deshidrogenasa GLDH oxida la NADH en NAD Ureasa Urea H O 2NH F CO GLDH NH a cetoglutarato NADH L glutamato H O NAD El ndice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversi n de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra cido rico UA Los primeros m todos cuantitativos para determinar las concentraciones de cido rico en sangre se basaron en la reducci n del cido fosfot ngstico a azul de tungsteno en soluciones alcalinas de cido rico Se desarroll una prueba de cido rico con mayor especificidad utilizando la enzima uricasa espec fica para el cido rico Desde entonces este m todo ha pasado a ser la t cnica qu mica clinica de referencia para el cido rico El m todo de la uricasa se acopla a trav s de un acabado de peroxidasa de Trinder En este m todo la uricasa cataliza la oxidaci n de cido rico a alanto na y per xido de hidr geno La peroxidasa cataliza la reacci n entre el per xido de hidr geno Page 66 of 103 H 0 la 4 aminoantipirina 4 AAP y el cido 3 5 dicloro 2 hidroxibencenosulf nico DHBSA en una coloraci n de rojo quinoneimina Se agregan ferrocianuro de sodio y ascorbato oxidasa a la mezcla de la reacci n para reducir al m nimo la interferencia potencial
11. mide bicrom ticamente a 405 nm y 500 nm El cambio en la absorbancia debido a la formaci n de CNP es directamente proporcional a la actividad de la a amilasa en la muestra Page 63 of 103 Aspartato aminotransferasa AST La prueba de aspartato aminotransferasa AST se basa en el m todo de velocidad de Karmen de acuerdo con la modificaci n de Bergmeyer El m todo de referencia actual de la Federaci n de Qu mica Cl nica IFCC utiliza la t cnica de Karmen Bergmeyer del acoplamiento de malato deshidrogenasa MDH y nicotinamida dinucle tido reducida NADH en la detecci n de AST en suero Se agrega lactato deshidrogenasa LDH a la reacci n para reducir la interferencia causada por el piruvato end geno La AST cataliza la reacci n de L aspartato y a cetoglutarato en oxaloacetato y L glutamato El oxaloacetato se convierte en malato y NADH se oxida a NAD por el catalizador MDH AST L aspartato a cetoglutarato gt oxaloacetato L glutamato MDH Oxaloacetato NADH HX gt 3 malato NAD El cambio en el indice de absorbancia a 340 nm 405 nm debido a la conversi n de NADH a NAD es directamente proporcional a la cantidad de AST contenida en la muestra Prote na C reactiva CRP Las pruebas originales para cuantificar la CRP se realizaron principalmente con fines de investigaci n y bas ndose en la metodolog a ELISA M s recientemente se han utilizado m todos in
12. n de la alb mina son las t cnicas de uni n a colorantes El verde de bromocresol BCG es el m s com n de los m todos de uni n al colorante pero puede sobrestimar la concentraci n de alb mina en especial en el extremo inferior del rango normal La p rpura de bromocresol BCP es el m s espec fico de los colorantes en uso La p rpura de bromocresol BCP al unirse a la alb mina cambia su color de amarillo a azul La absorbancia m xima cambia con el cambio de color Surfactantes BCP alb mina gt Complejo BCP Alb mina pH cido La alb mina unida es proporcional a la concentraci n de alb mina presente en la muestra Se trata de una reacci n de punto final que se mide como la absorbancia a 600 nm Fosfatasa alcalina ALP Las t cnicas para medir la fosfatasa alcalina fueron creadas hace m s de 60 a os En estos momentos varios de estos m todos espectrofotom tricos de criterio de valoraci n o de dos puntos se consideran obsoletos o demasiado complicados El uso de p nitrofenil fosfato p NPP aument la velocidad de la reacci n La fiabilidad de esta t cnica aument significativamente con el uso de un tamp n con i n met lico para mantener la concentraci n de iones magnesio y zinc en la reacci n El m todo de referencia de la Asociaci n Norteamericana de Qu mica Cl nica AACC usa p NPP como substrato y un amortiguador con i n met lico El pro
13. y la inhalaci n del mismo Instrucciones para la manipulaci n de los reactivos Los discos de reactivo pueden usarse inmediatamente despu s de retirarse del refrigerador sin calentarlos previamente No permita que los discos sellados en sus bolsas de aluminio permanezcan a temperatura ambiente m s de 48 horas antes del uso Abra la bolsa de aluminio sellada retire el disco y use de acuerdo con las instrucciones del Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo Deseche los discos no usados transcurridos 20 minutos de la apertura de la bolsa Almacenamiento Almacene los discos de reactivo en sus bolsas selladas a 2 8 C No exponga los discos abiertos o sin abrir a la luz solar directa o a temperaturas superiores a los 32 C Los discos de reactivo pueden ser usados hasta la fecha de caducidad indicada en el paquete La fecha de caducidad tambi n aparece codificada en el c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras Si los reactivos han caducado aparecer un mensaje de error en la pantalla del analizador qu mico xpress de Piccolo Indicaciones de inestabilidad deterioro del disco reactivo Una bolsa rasgada o rota puede permitir que la humedad llegue al disco sin usar y afecte de manera negativa la eficacia del reactivo No use discos de bolsas da adas Page 68 of 103 6 Instrumento Consulte el Manual del usuario del analizador quimico xpress de Piccolo para recibir informacion completa sobre el uso
14. 2 70 3 25 CV 5 2 6 2 Alb mina g dl Control 1 N 80 Media 5 6 5 6 DE 0 09 0 11 CV 1 7 a Control 2 N 80 Media 3 7 3 7 DE 0 07 0 11 Y CV 2 0 2 9 Fosfatasa alcalina U l Control 1 N 80 Media 39 39 DE 1 81 2 29 Y CV 4 6 5 8 Control 2 N 80 Media 281 281 DE 4 08 8 75 Y CV 1 5 3 1 Amilasa U l Control 1 N 80 Media 46 46 DE 2 40 2 63 Y CV 5 2 5 7 Control 2 N 80 Media 300 300 DE 11 15 11 50 Y CV 3 7 3 8 Aspartato aminotransferasa U l Control 1 N 80 Media 47 47 DE 0 98 1 84 Y CV 2 1 3 9 Control 2 N 80 Media 145 145 DE 1 83 4 62 Y CV 1 3 3 2 Page 75 of 103 Tabla 6 Precisi n continuaci n Analito Tama o de la muestra Intraserial Prote na C reactiva mg l Suero 1 N 80 Media 8 3 DE 0 70 CV 8 4 Suero 2 N 40 Media 8 1 DE 0 49 MCV 6 1 Suero 3 N 40 Media 8 8 DE 0 54 MCV 6 2 Plasma 1 N 40 Media 34 5 DE 1 04 MCV 3 0 Plasma 2 N 40 Media 105 5 DE 2 06 MCV 1 9 Control 1 N 80 Media 33 0 DE 1 21 MCV 3 7 Control 2 N 80 Media 108 0 DE 1 88 MCV 1 7 Calcio mg dl Control 1 N 80 Media 8 6 DE 0 21 MCV 2 4 Control 2 N 80 Media 11 8 DE 0 39 MCV 3 3 Creatinina mg dl Control 1 N 80 Media 1 1 DE 0 14 Y CV 12 5 Control 2 N 80 Media 5 2 DE 0 23 Y CV 4 4 Gamma glutamil transferasa U l Control 1 N 80 Media 25 DE 0 59 MCV 2 3 Control 2 N 80 Media 106 DE 1 52 MCV 1 4 Page 76 of 103 Total 8 3 0 81 9 8 8 1 0 51 6 3 8 8 0 54 6 2 34 5 1 09 3 2
15. 42 1 8 0 22 81 8 1 9 9 Beckman Creatinina mg dl 0 993 0 926 0 0 0 15 260 0 4 14 7 Paramax 8 0 987 0 866 0 1 0 16 107 0 4 7 5 Beckman Gamma glutamil 1 0 0 98 0 4 3 29 135 5 312 Paramax transferasa U l 1 0 1 60 3 1 18 57 49 27 1848 Beckman Glucosa mg dl 0 987 1 009 2 8 3 89 251 72 422 Paramax 8 0 997 0 943 1 2 4 69 91 56 646 Beckman y 0 849 0 932 0 6 0 19 251 5 7 9 2 Paramax Proteinas tories eid 0 873 0 935 03 0 16 92 6 5 9 2 Beckman Nitr geno ureico en 0 964 0 923 0 5 1 08 251 6 52 Paramax sangre mg dl 0 983 0 946 0 0 0 66 92 6 38 Beckman cido rico mg dl 0 979 0 958 0 3 0 20 159 1 4 7 6 Paramax 8 0 975 0 908 0 6 0 31 44 2 1 12 1 DAX Las muestras s ricas de pacientes hospitalizados proporcionaron un rango de muestra m s amplio y posiblemente m s til que las muestras de sangre entera venosa de pacientes ambulatorios Las estad sticas de correlaci n para las pruebas del calcio de Piccolo corresponden a estas muestras de suero Un sitio utiliz solamente suero en el analizador Piccolo para la correlaci n de gamma glutamil transferasa Tabla 8 Correlaci n de tipo de muestra para CRP Para el m todo de prueba CRP el an lisis de regresi n de Deming para el tipo de muestra obtuvo los siguientes resultados para n 21 Eje Y Eje X R Pendiente Intercepci n Plasma tratado con Sangre entera tratada con 1 000 0 995 0 2 heparina litio heparina litio Suero Sangre entera tratada con 0 999 1 005 0 5 heparina litio
16. 45 2136 2141 Roberts WL Moulton L Law TC Farrow G Cooper Anderson M Savory J Rifai N Evaluation of nine automated high sensitivity C reactive protein methods implications for clinical and epidemiological applications Part 2 Clin Chem 2001 47 418 425 Kramer B et al A simple technique for the determination of calcium and magnesium in small amounts of serum J Biol Chem 1921 47 475 481 Clark EP et al A study of the Tisdall method for the determination of blood serum calcium with suggested modification J Biol Chem 1925 63 461 464 Katzman E et al The determination of serum calcium by titration with ceric sulfate J Biol Chem 1937 118 539 544 Chemistry Vol 8 Cooper GR ed Washington DC American Association for Clinical Chemistry 1997 3 8 Kessler G M Wolfman An automated procedure for the simultaneous determination of calcium and phosphorus Clin Chem 1964 10 686 703 Michaylova V et al Photometric determination of micro amounts of calcium with arsenazo III Anal Chim Acta 1971 53 194 198 Scarpa A et al Metallochromic indicators of ionized calcium Ann NY Acad Sci 1978 307 86 112 Haeckel R et al Simplified determinations of the true creatinine concentration in serum and urine J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 385 394 Moss GA et al Kinetic enzymatic method for determining serum creatinine Clin Chem 1975 21 1422 1426 Jaynes PK et al An enzymatic reaction rate assay for serum creat
17. 5 158 601 608 Fossati P Prencipe L Berti G Use of 3 5 dichloro 2 hydroxy benzenesulfonic acid 4 aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric acid in serum and urine Clin Chem 1980 26 227 231 Clinical and Laboratory Standards Institute Physician s office laboratory guidelines tentative guideline 2nd ed CLSI Document POL1 T2 Wayne PA CLSI 1992 Clinical and Laboratory Standards Institute Procedures for the handling and processing of blood specimens tentative standard CLSI Document H18 A2 Wayne PA CLSI 1999 Overfield CV et al Glycolysis a re evaluation of the effect on blood glucose Clin Chim Acta 1972 39 35 40 Rehak NN Chiang BT Storage of whole blood effect of temperature on the measured concentration of analytes in serum Clin Chem 1988 34 2111 4 Clinical and Laboratory Standards Institute Interference testing in clinical chemistry proposed guideline CLSI Document EP7 A Wayne PA CLSI 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute Interference testing in clinical chemistry proposed guideline CLSI Publication EP7 P Wayne PA CLSI 1986 Young DS Effects of drugs on clinical laboratory tests 3rd ed Washington DC AACC Press 1990 Clinical and Laboratory Standards Institute How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory approved guidelines 2nd ed CLSI Document C28 A3 Wayne PA CLSL 2008 Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluat
18. CE Disco reactivo para panel de bioqu mica Plus de Piccolo Para uso diagn stico in vitro y uso profesional solamente Servicio y asistencia t cnica al cliente 800 822 2947 Julio 2011 PN 400 7182 Rev C 2010 Abaxis Inc Union City CA 94587 1 Uso previsto El disco reactivo para panel de bioqu mica Plus de Piccolo utilizado con el analizador qu mico xpress de Piccolo est indicado para su uso para la determinaci n cuantitativa in vitro de alanina aminotransferasa ALT alb mina fosfatasa alcalina ALP amilasa aspartato aminotransferasa AST prote na C reactiva CRP calcio creatinina gamma glutamil transferasa GGT glucosa prote nas totales nitr geno ureico en sangre BUN y cido rico en sangre entera tratada con heparina litio plasma tratado con heparina litio o suero en un laboratorio cl nico o en una ubicaci n point of care El m todo CRP de Abaxis no est indicado para la medici n de CRP de alta sensibilidad 2 Resumen y explicaci n de las pruebas El disco reactivo para panel de bioqu mica Plus de Piccolo y el analizador qu mico xpress de Piccolo constituyen un sistema de diagn stico in vitro que ayuda al m dico en el diagn stico de las siguientes enfermedades Alanina aminotransferasa ALT Alb mina Fosfatasa alcalina ALP Amilasa Aspartato aminotransferasa AST Prote na C reactiva CRP Enfermedades hep ticas incluidas hepatitis viral y cirrosis Enfermedade
19. Suero Plasma tratado con heparina litio 0 999 1 010 0 3 No se observaron diferencias significativas para CRP entre los resultados correspondientes a la sangre entera tratada con heparina litio el plasma tratado con heparina litio y el suero Page 78 of 103 13 Bibliografia 1 Ze 10 11 12 13 14 15 16 17 Fujita H Uber die Mikrobestimmung der Blutphosphatase J Biochem Japan 1939 30 69 87 19 20 21 22 23 Centers for Disease Control CDC Alpha amylase methodology survey I Atlanta US Public Health Service Nov 1975 26 27 28 29 30 31 Tonhazy NE White NG Umbreit WW A rapid method for the estimation of the glutamic aspartic transaminase in tissues and its application to radiation sickness Arch Biochem 1950 28 36 42 Reitman S Frankel S A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases Am J Clin Pathol 1957 28 56 63 Murray RL Alanine aminotransferase In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 895 898 Wr blewski F LaDue JS Serum glutamic pyruvic transminase in cardiac and hepatic disease Proc Soc Exp Biol Med 1956 91 569 571 Bergmeyer HU Horder M IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 3 IFCC method for alanine aminotransferase J Clin Chem Clin Biochem 1980 18 521 534 Howe PE The
20. a a temperaturas ambientes entre 15 C y 32 C El tiempo de an lisis para cada disco reactivo para panel de bioqu mica Plus de Piccolo es menor a 14 minutos El analizador mantiene el disco reactivo a una temperatura de 37 C durante el intervalo de medici n Procedimiento de la prueba La recolecci n completa de la muestra y los procedimientos paso por paso se detallan en el Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo Page 69 of 103 Calibraci n El analizador qu mico xpress de Piccolo es calibrado por el fabricante antes de ser enviado El c digo de barras impreso en el anillo del c digo de barras proporciona al analizador los datos de calibraci n espec ficos del disco Ver el Manual del operador del analizador qu mico xpress de Piccolo Control de calidad Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo para obtener informaci n m s detallada sobre la realizaci n registro interpretaci n y extrapolaci n de los resultados de control 9 Resultados El analizador qu mico xpress de Piccolo calcula autom ticamente e imprime las concentraciones de analitos en la muestra Los detalles de los c lculos del criterio de valoraci n y velocidad de la reacci n se encuentran en el Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo En el Manual del usuario se detalla tambi n la interpretaci n de los resultados los cuales se imprimen en la cinta de resultados proporcionadas por
21. amida para formar un complejo Cu prote na coloreado OH Prote nas totales Cu II gt Complejo Cu Prote na La cantidad de prote nas totales presente en la muestra es directamente proporcional a la absorbancia del complejo Cu prote na La prueba de las prote nas totales es un criterio de valoraci n de la reacci n final y la absorbancia se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 850 nm Nitr geno ureico en sangre BUN La urea puede ser medida tanto directa como indirectamente La reacci n de diacetil monoxima el nico m todo directo para medir la urea es la usada m s com nmente pero emplea reactivos peligrosos Los m todos indirectos miden el amon aco creado a partir de la urea el uso de la enzima ureasa aument la especificidad de estas pruebas El amon aco se cuantifica mediante distintos m todos entre ellos la nesslerizaci n titulaci n cida la t cnica de Berthelot y las reacciones enzim ticas acopladas Sin embargo los procedimientos de Berthelot catalizados son err ticos cuando se mide el amon aco Las reacciones enzim ticas acopladas son r pidas tienen una elevada especificidad para el amon aco y son las usadas habitualmente Una de estas reacciones fue propuesta como posible m todo de referencia En la reacci n de acoplamiento de enzimas la ureasa hidroliza la urea en amon aco y di xido de carbono Al combinarse el amon aco con a cetoglutarato y
22. asa 5 U l aspartato aminotransferasa 5 U l prote na C reactiva 5 0 mg l calcio 4 0 mg dl 1 0 mmol l creatinina 0 2 mg dl 18 umol l gamma glutamil transferasa 5 U l glucosa 10 mg dl 0 6 mmol l prote nas totales 2 g dl 20 g l nitr geno ureico en sangre 2 0 mg dl 0 7 mmol l y cido rico 1 mg dl 100 pmol l Page 74 of 103 Precisi n Se condujeron estudios de precisi n de acuerdo con las recomendaciones EP3 T2 del CLSI excepto CRP y las directrices EP5 A con modificaciones seg n la directriz EP18 A del CLSI para dispositivos usados en unidad Los resultados para la precisi n intraserial y total se determinaron mediante dos niveles de materiales de referencia disponibles comercialmente Los estudios utilizaron m ltiples instrumentos Las pruebas de ALT AST alb mina ALP amilasa calcio creatinina GGT glucosa prote nas totales BUN y cido rico se realizaron en dos sitios con dos lotes de discos reactivos durante 20 d as Las pruebas de prote na C reactiva se realizaron con un lote de discos reactivos durante cinco d as suero 1 control 1 y control 2 se realizaron en dos sitios suero 2 suero 3 plasma 1 y plasma 2 se realizaron en un sitio Los resultados de los estudios de precisi n se muestran en la Tabla 6 Tabla 6 Precisi n Analito Tama o de la muestra Intraserial Total Alanina aminotransferasa U I Control 1 N 80 Media 21 21 DE 2 76 2 79 Y CV 13 4 13 5 Control 2 N 80 Media 52 52 DE
23. bado Trinder la peroxidasa cataliza la reacci n entre el per xido de hidr geno 2 4 6 tribromo 3 cido hidroxinbenzoico TBHBA y 4 aminoantipirina 4 AAAP en una tintura roja de quinoneimina Se agregan ferrocianuro de sodio y ascorbato oxidasa a la mezcla de la reacci n para reducir al m nimo la interferencia potencial de la bilirrubina y el cido asc rbico respectivamente Page 64 of 103 Creatinina amidohidrolasa Creatinina HO Y creatina Creatina amidinohidrolasa Creatina H O 23 Sarcosina urea Sarcosina oxidasa Sarcosina HO O y Glicina formaldeh do H O Peroxidasa H20 TBHBA 4 AAP _ Colorante rojo de quinoneimina H O Se utilizan dos cubetas para determinar la concentraci n de creatinina en la muestra La creatina end gena se mide en la cubeta de referencia que es restada de la creatina end gena combinada y la creatina formada a partir de las reacciones enzim ticas en la cubeta de prueba Una vez eliminada la creatina end gena de los c lculos la concentraci n de creatinina es proporcional a la intensidad del color rojo producido El criterio de valoraci n de la reacci n final se mide como la diferencia en la absorbancia entre 550 nm y 600 nm eGFR calculada La creatinina s rica se mide de forma rutinaria como indicador de la funci n renal Debido a que la edad el sexo y la raza influyen en las concentraciones de creatin
24. cedimiento de Piccolo se modific a partir de los m todos AACC e IFCC La fosfatasa alcalina hidroliza al p NPP en un tamp n con i n met lico y forma p nitrofenol y fosfato ALP p nitrofenil fosfato gt p nitrofenol fosfato Zn Mg La cantidad de ALP en la muestra es proporcional al ndice de aumento de la diferencia de absorbancia entre 405 nm y 500 nm Amilasa AMY Se desarrollaron 200 pruebas distintas para medir la amilasa La mayor a de los procedimientos usan una soluci n polisac rida pero emplean t cnicas de detecci n distintas Los m todos viscosim tricos carecen de precisi n y exactitud mientras que los m todos turbidim tricos y yodom tricos son dif ciles de estandarizar Los m todos usados con mayor frecuencia son los sacarog nicos y cromol ticos La t cnica cl sica de medici n de la amilasa es un m todo sacarog nico pero es dif cil y exige demasiado tiempo Los m todos cromol ticos que utilizan p nitrofenilgluc sidos como sustratos fueron desarrollados recientemente Estos an lisis tienen mayor especificidad por la amilasa pancre tica que por la salival y se controlan con facilidad En el m todo de Piccolo el sustrato 2 cloro p nitrofenil a D maltotriosida CNPG3 reacciona con la a amilasa en la muestra del paciente liberando 2 cloro p nitrofenol CNP La liberaci n del CNP crea un cambio en el color o amilasa CNP 63 23 CNP D maltotriosida La reacci n se
25. ci n de las concentraciones de ALT en suero es un m todo enzim tico basado en el trabajo de Wr blewski y LaDue La Federaci n Internacional de Quimica Cl nica IFCC ha propuesto como m todo recomendado un procedimiento Wr blewski y LaDue modificado El m todo desarrollado para ser usado con los analizadores de Piccolo es una modificaci n del procedimiento recomendado por la IFCC En esta reacci n la ALT cataliza la transferencia de un grupo amino de la L alanina al a cetoglutarato para formar L glutamato y piruvato La lactato deshidrogenasa cataliza la conversi n de piruvato a lactato Al mismo tiempo la NADH se oxida a NAD como se observa en el esquema de la siguiente reacci n Page 62 of 103 ALT L alanina a cetoglutarato gt L glutamato piruvato LDH Piruvato NADH H gt lactato NAD El indice de cambio de la diferencia de absorbancia entre 340 nm y 405 nm se debe a la conversion de NADH en NAD y es directamente proporcional a la cantidad de ALT en la muestra Alb mina ALB Los primeros m todos usados para medir la alb mina inclu an t cnicas de fraccionamiento y contenido en triptofano las globulinas La realizaci n de estos m todos es poco precisa y su especificidad es baja Hay dos t cnicas inmunoquimicas que se consideran m todos de referencia pero son caras y requieren mucho tiempo Los m todos usados con mayor frecuencia para la determinaci
26. e surfactantes y estabilizantes Tabla 1 Reactivos Componente Cantidad Disco Adenosina 5 trifosfato 12 pg L alanina 874 ug 4 Aminoantipirina 27 ug 4 Aminoantipirina clorhidrato 6 ug CRP antihumano cabra 0 3 ug L tex recubierto de CRP antihumano rat n 67 ug Arsenazo III sal s dica 3 ug Ascorbato oxidasa Cucurbita spp 0 4 U L cido asp rtico 426 ug P rpura de bromocresol 2 ug 2 cloro 4 nitrofenil a D maltotriosida CNPG3 36 ug Creatina amidinohidrolasa Actinobacillus spp 3U Creatinina amidohidrolasa Pseudomonas spp 1U Sulfato c prico 210 ug cido 3 5 dicloro 2 hidroxibencenosulf nico DHBSA 37 ug Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa levadura 0 05 U Glutamato deshidrogenasa h gado bovino 0 01 U cido L glut mico y 3 carboxi 4 nitroanilina sal de amonio 32 ug Glicilglicina 317 ug Hexoquinasa levadura 0 1 U a cetoglutarato sal dis dica 37 ug cido a cetoglut rico 72 ug Lactato deshidrogenasa corazon de pollo 0 002 U Page 67 of 103 Tabla 1 Reactivos continuaci n Componente Cantidad Disco Lactato deshidrogenasa Staphylococcus epidermidis 0 1 U Acetato de magnesio 7 ug Cloruro de magnesio 5 ug Malato deshidrogenasa MDH corazon porcino 0 01 U B Nicotinamida adenina dinucle tido NAD 20 ug B Nicotinamida adenina dinucle tido reducida NADH 19 ug p Nitrofenil fosfato p NPP 67 ug Peroxidasa rabano 0 9 U Yoduro de potasio 28 ug Sarcosina oxidasa microorganismos 0 7 U Ferroc
27. eacci n elimin el paso de formaci n del colorante Debido a la pobre solubilidad y estabilidad de L y glutamil p nitroanilida este procedimiento fue modificado para usar el sustrato L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida El m todo GGT recomendado por la Federaci n Internacional de Quimica Cl nica IFCC se basa en el ltimo sustrato con glicilglicina como el otro sustrato Abaxis modific el m todo IFCC para que reaccione a 37 C El agregado de una muestra con gamma glutamil transferasa a los sustratos L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida y glicilglicina gly gly causa la formaci n de L y glutamil glicilglicina glu gly gly y 3 carboxi 4 nitroanilina GGT L y glutamil 3 carboxi 4 nitroanilida gly gly gt Glu gly gly 3 carboxi 4 nitroanilina La absorbancia de este indice de reacci n se mide a 405 nm La producci n de 3 carboxi 4 nitroanilina es directamente proporcional a la actividad de GGT en la muestra Glucosa GLU Las mediciones de la concentraci n de glucosa fueron introducidas por primera vez mediante m todos de reducci n del cobre como Folin Wu y Somogyi Nelson La falta de especificidad en las t cnicas de reducci n del cobre llev al desarrollo de procedimientos cuantitativos con las enzimas hexoquinasa y glucosa oxidasa La prueba de la glucosa incorporada en el disco reactivo para panel de bioqu mica Plus es una versi n modificada del m todo de la hexoquinasa que se prop
28. ectriz EP7 A CRP del CLSI Page 70 of 103 Efectos de las sustancias end genas e Los factores de interferencia fisiol gicos hem lisis ictericia y lipidemia provocan cambios en las concentraciones analizadas de algunos analitos Los ndices de la muestra est n impresos en la base de cada cinta de resultados para informar al usuario sobre los niveles de factores de interferencia presentes en cada muestra e El analizador qu mico xpress de Piccolo suprime cualquier resultado que sea afectado por m s del 10 de interferencia por hem lisis lipidemia o ictericia En lugar del resultado la cinta tendr impreso HEM LIP o ICT respectivamente e Para el m todo CRP los niveles de sustancias end genas que desencadenan las supresiones de HEM LIP o ICT son de 750 mg dl para la hemoglobina 750 mg dl para la lipemia y 35 mg dl para la bilirrubina e P ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para obtener informaci n acerca de los niveles m ximos de sustancias end genas Efectos de las sustancias ex genas y terap uticas Se seleccionaron sustancias ex genas y terap uticas como interferentes potenciales para los m todos de prueba de Abaxis sobre la base de las recomendaciones de Young Se define a la interferencia significativa como un desv o superior al 10 en el resultado para una muestra en l mites normales Las mezclas de suero humano fueron enriquecidas con concentraciones conocidas de los f
29. fugadas almacenadas a temperatura ambiente e Para las muestras de sangre o plasma use s lo tubos de recolecci n de muestras tratados con heparina de litio tap n verde Para las muestras de suero use tubos para obtenci n de muestras sin aditivo tap n rojo o tubos separadores de suero tap n rojo o rojo negro e Las muestras de sangre entera refrigerada pueden causar cambios significativos en la concentraci n de aspartato aminotransferasa creatinina y glucosa La muestra puede separarse en plasma o suero y almacenarse en tubos de ensayo con tapa a 2 8 C si la muestra no se analiza en un plazo de tiempo de hasta 60 minutos e Comience la prueba en los 10 minutos siguientes a la transferencia de la muestra al disco reactivo 8 Procedimiento Materiales suministrados e Un disco reactivo para Piccolo BioChemistry Panel Plus PN 400 1035 una caja de discos PN 400 0035 Materiales necesarios pero no suministrados e Analizador qu mico xpress de Piccolo e Con cada analizador qu mico xpress de Piccolo se suministran pipetas de transferencia de muestras volumen fijo de aproximadamente 100 ul y puntas y pueden solicitarse repuestos a Abaxis e Reactivos de control disponibles comercialmente recomendados por Abaxis p ngase en contacto con el Servicio T cnico de Abaxis para solicitar materiales de control homologados y valores de referencia e Cron metro Par metros de prueba El analizador qu mico xpress de Piccolo oper
30. ianuro de sodio l ug Tartrato s dico de potasio 343 ug cido 2 4 6 Tribromo 3 hidroxibenzoico TBHBA 188 ug Ureasa haba blanca 0 05 U Uricasa microbiana 0 04 U Sulfato de zinc 3 ug Amortiguadores surfactantes excipientes y conservantes Advertencias y precauciones e Para uso diagn stico in vitro e El envase del diluyente del disco reactivo se abre autom ticamente cuando se cierra el caj n del analizador Un disco con un contenedor diluyente abierto no puede volver a utilizarse Aseg rese de que la muestra o la prueba est colocada en el disco antes de cerrar el caj n e Los discos de reactivo usados contienen l quidos del cuerpo humano Siga las pr cticas de seguridad del laboratorio cuando manipule y elimine discos usados Consulte el Manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo para obtener instrucciones sobre la limpieza de derrames biopeligrosos e Los discos reactivos son de pl stico y pueden romperse o estallar si se caen Nunca use un disco que se haya ca do ya que puede esparcir material biol gico peligroso en el interior del analizador e Elreactivo en soporte s lido puede contener sustancias cidas o c usticas El usuario no entra en contacto con el reactivo en soporte s lido si sigue los procedimientos recomendados En el caso de que se manipule el reactivo en soporte s lido por ejemplo limpieza tras caerse y romperse un disco reactivo se debe evitar la ingesti n el contacto con la piel
31. ina no es posible detectar la nefropat a cr nica CKD tan solo mediante la creatinina s rica As pues el National Kidney Disease Education Program Programa Nacional de Educaci n sobre la Nefropat a recomienda encarecidamente que los laboratorios informen de forma rutinaria de la tasa de filtraci n glomerular estimada eGFR cuando se mida la creatinina s rica en los pacientes mayores de 18 a os La comunicaci n de forma rutinaria de la eGFR junto con todas las determinaciones de creatinina s rica permite a los laboratorios ayudar a identificar a los individuos con funci n renal reducida y contribuye a facilitar la detecci n de la CKD Los valores calculados de la eGFR lt 60 ml min generalmente est n asociados a un mayor riesgo de resultados adversos de la CKD Piccolo calcula la eGFR usando la edad el sexo y la raza del paciente El m todo de Piccolo para la creatinina es comparable con el m todo de referencia para la creatinina IDMS de forma que se puede utilizar la siguiente forma de la ecuaci n MDRD para el c lculo de la eGFR GFR mL min 1 73 m 175 x Sa x edady 2 x 0 742 si es mujer x 1 212 si es afroamericano Gamma glutamil transferasa GGT Los primeros m todos cuantitativos desarrollados para medir la gamma glutamil transferasa GGT precisaban una segunda reacci n para formar un colorante azoico que se combinaba con un crom foro El cambio a L y glutamil p nitroanilida como el sustrato en la r
32. inine with a centrifugal analyzer Clin Chem 1982 28 114 117 Fossati P et al Enzymatic creatinine assay a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement Clin Chem 1983 29 1494 1496 Whelton A et al Nitrogen metabolites and renal function In Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2 Ed Burtis CA Ashwood ER eds Philadelphia W B Saunders Company 1994 1513 1575 National Kidney Disease Education Program NKDEP Creatinine Standardization http www nkdep nih gov labprofessionals creatinine_standardization htm Accessed September 2010 National Kidney Disease Education Program NKDEP Creatinine Standardization Recommendations VD Manufacturers http www nkdep nih gov labprofessionals IVD_Manufacturers htm Accessed September 2010 National Kidney Foundation GFR Calculator http www kidney org professionals kls gfr_calculator cfm Accessed September 2010 Ball EG Revel JP Cooper O The quantitative measurement of y glutamyl transpeptidase activity J Biol Chem 1956 221 895 908 Goldbarg JA et al The colorimetric determination of y glutamyl transpeptidase with a synthetic substrate Arch Biochem Biophys 1960 91 61 70 Orlowski M Meister A y Glutamyl p nitroanilide a new convenient substrate for determination and study of L and D y glutamyltranspeptidase activities Biochim Biophys Acta 1963 73 679 681 Persijn JP van der Slik W A new method for the determination of y glutamyltransferase in se
33. ion of precision performance of clinical chemistry devices tentative guideline second edition CLSI Document EP5 T2 Wayne PA CLSI 1992 Clinical and Laboratory Standards Institute Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices approved guideline CLSI Document EP5 A Wayne PA CLSI 1999 Clinical and Laboratory Standards Institute Quality management for unit use testing proposed guideline CLSI Document EP18 A Wayne PA CLSI 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute Method comparison and bias estimation using patient samples approved guideline CLSI Document EP9 A2 Wayne PA CLSI 2002 Page 81 of 103
34. iona 30 13 dism Glucosa GLU Oxaloacetato 132 11 dism Piruvato 44 13 dism cido rico cido asc rbico 20 13 dism Epinefrina 1 14 dism L dopa 5 78 dism Metildopa 0 5 12 dism Rifampina 1 5 14 dism cido salic lico 25 20 dism By ERE F a 7 dism disminuci n en la concentraci n del sustrato especificado aum aumento en la concentraci n del sustrato especificado 11 Valores esperados Se usaron muestras de un total de 193 adultos varones y mujeres analizadas en el analizador qu mico sangu neo de Piccolo para determinar los intervalos de referencia de ALT alb mina ALP amilasa calcio creatinina glucosa prote nas totales y BUN Se usaron muestras de un total de 186 adultos varones y mujeres para determinar el intervalo de referencia de la AST y el cido rico Se usaron muestras de un total de 131 adultos varones y mujeres para determinar el intervalo de referencia de la GGT Los l mites que se indican a continuaci n para estos analitos se calcularon seg n el intervalo de referencia del 95 estimado de los valores combinados globales obtenidos de los sujetos de referencia Se analizaron las muestras de un total de 69 hombres y mujeres adultos en el analizador quimico xpress de Piccolo para CRP El intervalo CRP se bas en la transferabilidad demostrada de los intervalos de referencia para el Beckman Estos rangos s lo se ofrecen como gu a Se recomienda que su consultorio o instituci n establezca
35. l Arsenazo III tiene una gran afinidad por el calcio y no depende de la temperatura como el CPC 34 35 36 El calcio presente en la muestra del paciente se une al arsenazo III para formar un complejo de tintura de calcio Ca Arsenazo I gt Complejo de Ca Arsenazo III La reacci n de punto final es controlada a 405 nm 467 nm y 600 nm La cantidad de calcio total en la muestra es proporcional a la absorbancia Creatinina CRE El m todo Jaffe presentado en 1886 sigue siendo el m todo usado con mayor frecuencia para la determinaci n de los niveles de creatinina en la sangre El m todo de referencia actual combina el uso de tierra de Fuller floridina con la t cnica de Jaff para aumentar la especificidad de la reacci n Se desarrollaron m todos enzim ticos que son m s espec ficos para la creatinina que las distintas modificaciones de la t cnica de Jaffe Los m todos que utilizan la enzima creatinina amidohidrolasa eliminan los problemas de la interferencia del i n amon aco que se encuentra en las t cnicas que usan la creatinina iminohidrolasa En las reacciones de acoplamiento de enzimas la creatinina amidohidrolasa hidroliza la creatinina en creatina Una segunda enzima la creatina amidinohidrolasa cataliza la formaci n de sarcosina a partir de la creatina La sarcosina oxidasa provoca la oxidaci n de sarcosina a glicina formaldeh do y per xido de hidr geno H202 En un aca
36. los rangos normales para su poblaci n de pacientes en particular Page 73 of 103 Tabla 4 Intervalos de referencia de Piccolo Analito Alanina aminotransferasa ALT Alb mina ALB Fosfatasa alcalina ALP Hembra Macho Amilasa AMY Aspartato aminotransferasa AST Proteina C reactiva Calcio CA Creatinina Gamma glutamil transferasa GGT Glucosa Proteinas totales TP Nitr geno ureico en sangre BUN Acido trico UA Hembra Macho 12 Caracteristicas de eficacia Linealidad Unidades comunes 10 47 UN 3 3 5 5 g dl 42 141 U l 53 128 U I 14 97 U l 11 38 U l lt 7 5 mg l 8 0 10 3 mg dl 0 6 1 2 mg dl 5 65 U l 73 118 mg dl 6 4 8 1 g dl 7 22 mg dl 2 2 6 6 mg dl 3 6 8 0 mg dl Unidades SI 10 47 U I 33 55 g l 42 141 U l 53 128 U I 14 97 U l 11 38 UA lt 7 5 mg l 2 00 2 58 mmol l 53 106 umol l 5 65 UN 4 1 6 6 mmol l 64 81 g l 2 5 7 9 mmol l 131 393 umol 1 214 476 umol l La qu mica para cada analito es lineal a lo largo del intervalo din mico enumerado a continuaci n cuando el analizador qu mico xpress de Piccolo se opera de acuerdo con el procedimiento recomendado consulte el manual del usuario del analizador qu mico xpress de Piccolo Tabla 5 L mites din micos de Piccolo Analito Unidades comunes 5 2000 U l Unidades SI 5 2000 U I Alanina aminotransferasa ALT Alb mina ALB Fosfatasa alcalina ALP Amilasa AMY Aspartato aminotransferasa AST Prote na
37. munonefelom tricos mejorados con l tex No obstante esto requiere un nefel metro para medir la dispersi n de la luz Se han dise ado varias pruebas inmunoturbidim tricas e inmunoluminom tricas automatizadas que se pueden llevar a cabo con analizadores qu micos cl nicos convencionales El m todo utilizado por Abaxis es un inmunoensayo turbidim trico de aglutinaci n con l tex La muestra se mezcla con una suspensi n de anticuerpos monoclonales de CRP antihumanos de rat n fijada al l tex La CRP en la muestra se une a las part culas de l tex anticuerpo y se aglutina creando turbidez La dispersi n de la luz de la turbidez se utiliza como medida de CRP La turbidez se mide como un cambio en la absorbancia a 630 nm Este cambio en la absorbancia es directamente proporcional a la actividad de la CRP en la muestra Part culas de l tex anti CRP CRP Part culas de l tex anti CRP CRP aglutinadas Calcio CA Los primeros m todos usados para analizar el calcio comprendieron la precipitaci n del calcio con un exceso de aniones Los m todos de precipitaci n son complicados y suelen ser imprecisos El m todo de referencia para el calcio es la espectroscop a por absorci n at mica sin embargo este m todo no es adecuado para uso rutinario Los m todos espectrofotom tricos mediante o cresolftaleina complexona CPC o arsenazo III como indicadores metalocr micos son los que se utilizan con mayor frecuencia 2 E
38. rmacos o qu micos y luego analizadas Consulte la Tabla 2 para ver una lista de las sustancias ex genas y terap uticas evaluadas Consulte la TABLA 3 para ver una lista de los analitos donde se observ interferencia Tabla 2 Sustancias ex genas y terap uticas evaluadas Interferente potencial Concentraci n m xima probada mg dl salvo donde se indiquen otras unidades Paracetamol 100 Acetoacetato 102 cido acetilsalic lico 50 Ampicilina 30 cido asc rbico excepto CRP 20 cido asc rbico s lo CRP 3 Cafe na 10 Cloruro de calcio excepto CRP 20 Cloruro de calcio s lo CRP ND Cefalotina Keflin 400 Cloranfenicol 100 Cimetidina 16 L dopa 5 Dopamina excepto CRP 19 Dopamina solo CRP 13 Epinefrina 1 Eritromicina 10 Glutationa 30 Hidroclorotiazida oe Ibuprofeno 50 Isoniacida 4 a cetoglutarato excepto CRP 5 a cetoglutarato s lo CRP ND Cetoprofen 50 Lidocaina 1 Lactato excepto CRP 230 Lactato de litio s lo CRP 84 Meticilina 100 Metotrexato 0 5 Metildopa s lo AST GLU TP y UA 0 5 Metildopa todos los demas ND Page 71 of 103 Tabla 2 Sustancias terap uticas o ex genas evaluadas continuaci n Interferente potencial Concentraci n m xima probada mg dl salvo donde se indiquen otras unidades Metronidazol 5 Nafcilina 1 Nitrofurantoina 20 Oxacilina 1 Oxaloacetato 132 Penicilina G 100 Fenitoina 5 5 Difenilhidantoina 3 Prolina 4 Piruvato excepto CRP 44 Piruvato s lo CRP ND
39. rum J Clin Chem Clin Biochem 1976 14 421 427 Shaw LM et al IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes Part 4 IFCC method for y glutamyltransferase J Clin Chem Clin Biochem 1983 21 633 646 Folin O et al A system of blood analysis J Biol Chem 1919 38 81 110 Somogyi M A reagent for the copper iodometric determination of very small amounts of sugar J Biol Chem 1937 117 771 776 Nelson N et al A photometric adaption of the Somogyi method for the determination of glucose J Biol 1944 153 375 380 Kaplan LA Glucose In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2nd ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 850 856 Koller A Kaplan LA Total serum protein In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1057 1060 Reigler E Eine kolorimetrische Bestimmungsmethode des Eiweisses Z Anal Chem 1914 53 242 245 Weichselbaum TE An accurate and rapid method for the determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma Am J Clin Path 1946 16 40 49 Doumas BT et al A candidate reference method for determination of total protein in serum I Development and validation Clin Chem 1981 27 1642 1650 Page 80 of 103 69 70 71 72 Feichtmeir TV Wrenn HT Direct determination of uric acid using uricase Am J Clin Pathol 1955 25 833 839 74 75 76
40. s anti rat n HAMA hasta 115 ng ml no causa interferencias Las muestras de pacientes que hayan recibido preparados que incluyan anticuerpos monoclonales de rat n para el diagn stico o el tratamiento pueden contener HAMA e El factor reumatoide con una concentraci n de hasta 644 U ml no causa interferencias e Nose ha observado ning n efecto de saturaci n a dosis altas efecto prozona en este ensayo para concentraciones de CRP de hasta 1 000 mg l e Todo resultado para una prueba particular que supere los valores del an lisis deber analizarse por otro m todo de prueba homologada o ser enviado a un laboratorio de referencia No diluya la muestra ni vuelva a analizarla en el analizador qu mico xpress de Piccolo Advertencia Pruebas exhaustivas del sistema de analizador qu mico xpress de Piccolo han demostrado que en casos muy raros la muestra aplicada al disco reactivo podr a no fluir con facilidad a la c mara de la muestra Debido al flujo irregular puede analizarse una cantidad inadecuada de muestra y los resultados obtenidos pueden quedar fuera de los valores de referencia La muestra puede volverse a analizar con un nuevo disco reactivo Interferencia Se probaron sustancias como factores de interferencia con los analitos Se prepararon mezclas de suero humano Cada obst culo potencial se evalu a una concentraci n basada en los niveles de prueba en la directriz EP7 P excepto CRP del CLSI antiguamente NCCLS y la dir
41. s del h gado y del ri n Enfermedades del h gado seas paratiroideas e intestinales Pancreatitis Hepatopat as incluidas hepatitis e ictericia viral shock Infecci n da o tisular y trastornos inflamatorios Calcio Enfermedades de la gl ndula paratiroides seas y nefropat as cr nicas t tanos Creatinina Enfermedad renal y control de di lisis renal Gamma glutamil transferasa GGT Hepatopat as incluidas cirrosis hep tica y tumores hep ticos primarios y secundarios Alteraciones del metabolismo de carbohidratos incluida la diabetes mellitus e hipoglucemia del adulto y juvenil Hepatopat as enfermedades del ri n o de la m dula sea alteraciones metab licas y de la nutrici n Enfermedades renales y metab licas Alteraciones renales y metab licas incluida la insuficiencia renal y la gota Glucosa Prote nas totales Nitr geno ureico en sangre BUN Acido rico Al igual que con cualquier procedimiento diagn stico de prueba hay que tener en cuenta el resto de procedimientos de prueba incluido el estado cl nico del paciente antes del diagn stico final 3 Principio del procedimiento Alanina aminotransferasa ALT La alanina aminotransferasa ALT ha sido medida mediante tres m todos Dos de estos m todos la t cnica de acoplamiento colorim trico por dinitrofenilhidracina y el an lisis enzim tico fluorescente se usan muy raramente La t cnica m s com n para la determina
42. tion of a homologous series of glycosidically substituted malto oligosaccharides and their use as amylase substrates Carbohydrate Res 1978 61 359 368 Karmen A A note on the spectrophotometric assay of glutamic oxalacetic transaminase in human blood serum J Clin Invest 1955 34 131 133 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1977 23 887 899 Bergmeyer HU et al Provisional recommendations on IFCC methods for the measurement of catalytic concentrations of enzymes Part 2 Revised IFCC method for aspartate aminotransferase Clin Chem 1978 24 720 721 Macy E Hayes T Tracy R Variability in the measurement of c reactive protein in healthy subjects implications for reference interval and epidemiological applications Clin Chem 1997 43 52 58 Page 79 of 103 13 32 33 34 35 36 Cali JP et al A reference method for the determination of total calcium in serum In Selected Methods of Clinical 38 39 40 Knoll VE et al Spezifische kreatininbetimmung im serum Z Klin Chem Klin Biochem 1970 8 582 587 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 Bibliograf a continuaci n Rifai N Tracy RP Ridker PM Clinical efficacy of an automated high sensitivity C reactive protein assay Clin Chem 1999
43. use of sodium sulfate as the globulin precipitant in the determination of proteins in blood J Biol Chem 1921 49 93 107 Howe PE The determination of proteins in blood a micro method J Biol Chem 1921 49 109 113 Wolfson WQ et al A rapid procedure for the estimation of total protein true albumin total globulin alpha globulin beta globulin and gamma globulin in 10 ml of serum Am J Clin Pathol 1948 18 723 730 Saifer A Gerstenfeld S Vacsler F Photometric microdetermination of total serum globulins by means of a tryptophan reaction Clin Chem 1961 7 626 636 Saifer A Marven T The photometric microdetermination of serum total globulins with a tryptophan reaction a modified procedure Clin Chem 1966 12 414 417 Gendler SM Albumin In Clinical Chemistry Theory Analysis and Correlation 2 ed Kaplan LA Pesce AJ eds St Louis The C V Mosby Company 1989 1029 1033 Webster D Bignell AHC Attwood EC An assessment of the suitability of bromocresol green for the determination of serum albumin Clin Chim Acta 1974 53 101 108 Louderback A Mealey EH Taylor NA A new dye binding technic using bromcresol purple for determination of albumin in serum Clin Chem 1968 14 793 794 Abstract Pinnell AE Northam BE New automated dye binding method for serum albumin determination with bromcresol purple Clin Chem 1978 24 80 86 King EJ Armstrong AR A convenient method for determining serum and bile phosphatase activity
44. uso como la base para el m todo de referencia de la glucosa Page 65 of 103 La reaccion de glucosa con adenosina trifosfato ATP catalizada por la hexoquinasa HK produce glucosa 6 fosfato G 6 P y adenosina difosfato ADP La glucosa 6 fosfato deshidrogenasa G 6 PDH cataliza la reaccion de G 6 P en 6 fosfogluconato y la reducci n de nicotinamida adenina dinucle tido NAD a NADH HK Glucosa ATP _ _ G 6 P ADP G 6 PDH G 6 P NAD _ 6 fosfogluconato NADH H La absorbencia se mide bicrom ticamente a 340 nm y 850 nm La producci n de NADH es directamente proporcional a la cantidad de glucosa en la muestra Prote nas totales TP El m todo de prote nas totales es una modificaci n de la reacci n de Biuret remarcable por su precisi n exactitud y especificidad Desarrollada originariamente por Riegler y modificada por Weichselbaum Doumas et al propusieron una reacci n de Biuret como posible m todo de referencia para las prote nas totales En la reacci n de Biuret la soluci n de prote nas es tratada con iones c pricos Cu II en un medio fuertemente alcalino Se agregan tartrato s dico de potasio y yoduro de potasio para impedir la precipitaci n de hidr xido de cobre y la autorreducci n del cobre respectivamente Los iones Cu II reaccionan con uniones peptidicas entre los tomos de ox geno carbonilo y nitr geno
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