FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein
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1. 9 FLEX Polyclonal Rabbit CE Anti Glial Fibrillary Acidic Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS524 ENGLISH Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation 117288 003 For in vitro diagnostic use FLEX Polyclonal Rabbit Anti Glial Fibrillary Acidic Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments Glial fibrillary acidic protein GFAP is the principal intermediate filament of mature astrocytes 1 and this antibody is useful for the identification of astrocytes in the central nervous system CNS under normal and pathological conditions 2 4 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist GFAP is a 50 kDa intracytoplasmic filamentous protein that constitutes a portion of the cytoskeleton in astrocytes and it has proved to be the most specific marker for cells of astrocytic origin In the central rod domain of the molecule GFAP shares considerable str2. se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 Les tapes de coloration et
3. Num ro de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 117288 003 IS524 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
4. coloration d crit dans les Caract ristiques de performance IS524 EFG MNIV 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117288 003 Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre le cerveau et le c lon et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS600 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique Tissus sains les anticorps marquent les astrocytes dans le cerveau 3 les cellu
5. de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps polyclonal de lapin pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium GFAP isol e partir de moelle pini re bovine L anticorps a t absorb en phase solide en utilisant des prot ines de serums humain et bovin Dans l immuno lectrophor se crois e avec 50 uL d anticorps concentr par cm de gel aucune r action avec 2 uL de plasma humain et 2 uL de s rum bovin n est observ e L anticorps r v le un pr cipit net GFAP avec un extrait de cerveau bovin Coloration bleu de Coomassie Lors d un test ELISA indirect l anticorps ne pr sente aucune r action avec le plasma humain et le s rum bovin 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement exp
6. la GFAP partage une homologie de structure consid rable avec les autres filaments interm diaires 5 D un point de vue fonctionnel on pense que la GFAP est importante dans la motilit et la forme des astrocytes en fournissant une stabilit structurale aux prolongements astrocytaires 1 A la suite d une l sion du SNC humain provoqu e par un traumatisme des troubles g n tiques ou des produits chimiques les astrocytes prolif rent et pr sentent une hypertrophie extensive du corps cellulaire et des prolongements De plus la GFAP fait l objet d une r gulation positive cons quente A l oppos lors d une malignit croissante des astrocytes il y a perte progressive de la production de GFAP Par cons quent les astrocytomes malins pr sentent moins de cellules tumorales color es positivement et intens ment la GFAP que les astrocytomes moins malins et les chantillons de cerveau sain 5 En dehors du SNC des m thodes de d tection sensibles peuvent montrer la pr sence de GFAP dans les cellules de Schwann dans les cellules gliales ent riques dans les n oplasmes des glandes salivaires et dans les carcinomes r naux m tastatiques De plus la r activit immunologique de la GFAP a t d montr e dans le cartilage piglottique les pituicytes les oligodendrocytes immatures les m ningiomes papillaires 1 et les cellules myo pith liales du sein 6 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique
7. les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL Programme automatique GFAP sans contre coloration ou GFAPH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de
8. 595 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren Als Visualisierungssystem wird EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 empfohlen Die F rbeschritte und und erforderliche aber Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert en HE Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 ul Anwendungsvolumen aterialien Autoprogramm GFAP ohne Gegenf rbung oder GFAPH mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angep
9. Evidence for a neuronal element and possible relationship to ganglion cell tumors Am J Surg Pathol 1996 20 80 5 9 Giangaspero F Chieco P Ceccarelli C Lisignoli G Pozzuoli R Gambacorta M et al Desmoplastic versus classic medulloblastoma comparison of DNA content histopathology and differentiation Virchows Arch A Pathol Anat 1991 418 207 14 10 Kawahara E Oda Y Ooi A Katsuda S Nakanishi I Umeda S Expression of glial fibrillary acidic protein GFAP in peripheral nerve sheath tumors A comparative study of immunoreactivity of GFAP vimentin S 100 protein and neurofilament in 38 schwannomas and 18 neurofibromas Am J Surg Pathol 1988 12 115 20 11 Thompson L Bouffard JP Sandberg GD Mena H Primary ear and temporal bone meningiomas a clinicopathologic study of 36 cases with a review of the literature Mod Pathol 2003 16 236 45Kawahara g gt O0 0 EE N Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Use by R f rence catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Dispositif m dical de diagnostic in vitro Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant In vitro Diagnostikum Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation
10. P Immunreaktivit t in Epiglottis Pituizyten unreifen Oligodendrozyten papill ren Meningiomen 1 und Myoepithelzellen der Brust 6 nachgewiesen Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger polyklonaler Kaninchen Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Aus dem R ckenmark von Rindern isoliertes GFAP Der Antik rper wurde einer Festphasen Absorption mit Serumproteinen vom Menschen und von Rindern unterzogen Bei der gekreuzten Immunoelektrophorese unter der Verwendung von 50 uL konzentriertem Antik rper per cm Geloberfl che wurde keine Reaktion mit 2 uL menschlichem Plasma und 2 uL Rinderserum beobachtet Bei Rinderhirnextrakt weist der Antik rper ein klar ersichtliches Pr zipitat GFAP auf F rbung Coomassie Brilliant Blue Beim indirekten ELISA Verfahren zeigt der Antik rper keine Reaktion mit Humanplasma und Rinderserum 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch
11. and non neoplastic diseases of the breast the percentage of myoepithelial cells reactive with the antibody was greatly increased as compared to the normal breast while positivity was not encountered in the malignant cells of 183 breast carcinomas of different types 6 The antibody did not label meningiomas in a study including 36 patients 11 Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Polyclonal Rabbit Anti Glial Fibrillary Acidic Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destine a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus La prot ine acide fibrillaire gliale GFAP est le principal filament intermediaire des astrocytes matures 1 et cet anticorps est utile pour l identification des astrocytes dans le systeme nerveux central SNC dans des conditions normales et pathologiques 2 4 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi La GFAP est une prot ine filamenteuse intracytoplasmique de 50 kDa constituant une partie du cytosquelette des astrocytes Il a t prouv que cette prot ine est le marqueur le plus sp cifique des cellules d origine astrocytaire Dans le domaine central en forme de b tonnet de la mol cule
12. assten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe muss Zellen aus Dickdarm und Gehirngewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS600 Auswertung der F rbung Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen ein zytoplasmatisches F rbemuster auf Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert Astrozyten im Gehirn 3 Follikelsternzellen der Hypophyse 7 Schwann Zellen und enterische Gliazellen Zus tzlich werden myoepitheliale Zellen der Brust 6 markiert Die Astrozyten des Gehirns weisen eine m ige bis starke F rbereaktion auf Im Dickdarm weisen die Ganglienzellen im Auerbach Plexus und dem Meissner schen Plexus eine schwache bis m ige F rbereaktion auf Keine F rbung wurde in Blase Bindegewebe Leber Iym
13. ement 4 cas sur 31 de MB de type classique ont montr ce type de cellules n oplasiques mais des cellules morphologie d astrocytes r actifs positives la GFAP ont t observ es dans 27 cas sur 31 de MB classique 9 L anticorps a galement marqu 15 cas sur 38 de schwannomes 38 et 2 cas de neurofibrome plexiforme alors que 16 cas de neurofibrome dermique taient n gatifs 10 Dans diverses maladies n oplasiques et non n oplasiques du sein le pourcentage de cellules myo pith liales r actives l anticorps a t consid rablement augment par rapport au sein normal alors qu aucune positivit n a t rencontr e dans les cellules malignes de 183 carcinomes du sein de types diff rents 6 L anticorps n a marqu aucun m ningiome dans une tude portant sur 36 patients 11 Zur In vitro Diagnostik FLEX Polyclonal Rabbit Anti Glial Fibrillary Acidic Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Gliafibrill res azides Protein GFAP ist das vorwiegende intermedi re Filament reifer Astrozyten 1 und der Antik rper hat sich u a als n tzliches Hilfsmittel zum Nachweis von Astrozyten im Zentralnervensystem ZNS unter normalen und pathologischen Bedingungen erwiesen 2 4 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeignet
14. en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden GFAP ist ein intrazytoplastisches Filamentprotein 50 kDa das am Aufbau des Zytoskeletts von Astrozyten beteiligt ist und erwiesenerma en der spezifischste Marker f r Zellen astrozytischen Ursprungs Im Zentralbereich des Molek ls weist GFAP betr chtliche strukturelle Ubereinstimmungen mit den anderen Intermedi rfilament Proteinen auf 5 Was seine Funktion angeht so wird angenommen dass GFAP eine wichtige Rolle hinsichtlich Beweglichkeit und Form der Astrozyten spielt indem es den astrozytischen Prozessen strukturelle Stabilit t verleiht 1 Nach einer durch ein Trauma genetische Defekte oder Chemikalien hervorgerufenen Sch digung des menschlichen ZNS proliferieren Astrozyten und weisen eine extensive Hypertrophie des Zellk rpers und der Zellprozesse auf und GFAP wird deutlich nach oben reguliert Im Gegensatz nimmt die GFAP Produktion mit zunehmender Astrozyten Malignit t immer weiter ab Maligne Astrozytome besitzen daher weniger Tumorzellen die eine positive intensive GFAP F rbung aufweisen als weniger maligne Astrozytome und normale Gehirnproben 5 Au erhalb des ZNS l sst sich GFAP mit empfindlichen Detektionsmethoden in Schwann Zellen enterischen Gliazellen Speicheldr senneoplasmen und metastasierenden Nierenkarzinomen nachweisen Ferner wurde GFA
15. erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen IS524 EFG MNIV 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9
16. glia cells Additionally myoepithelial cells of the breast 6 are labeled In brain the astrocytes show a moderate to strong staining reaction In colon the ganglion cells in the Auerbach and Meissners plexus show weak to moderate staining reaction No staining is observed in bladder connective tissue liver lymphatic tissue muscle pancreas skin and ureter Abnormal tissues All of 23 glioblastoma multiforme GBM were labeled by the antibody In 20 of the 23 GBMs at least 50 of malignant cells were positive for GFAP Only 3 of 22 cases of carcinoma metastatic to the brain were labeled This labeling was focal and limited to less than 10 of malignant cells 3 5 5 hemispheric astrocytomas of the rare granular type showed focal GFAP positivity with the antibody 4 which also labeled 7 7 pleomorphic xanthoastrocytomas 8 and anterior lobe folliculo stellate cells in 20 20 pituitary neoplasms 7 In medulloblastoma MB of the desmoplastic variant the antibody labeled 8 11 cases The labeling appeared as focal areas of GFAP positive cells with neoplastic morphology Only 4 31 MBs of the classic variant showed this type of neoplastic cells but in classic MB GFAP positive cells with the morphology of reactive astrocytes were observed in 27 31 cases 9 The antibody has also been shown to label 15 38 schwannomas 38 and 2 cases of plexiform neurofibroma while 16 cases of dermal neurofibroma were negative 10 In various neoplastic
17. in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist
18. in and 0 015 mol L sodium azide GFAP isolated from cow spinal cord The antibody has been solid phase absorbed with human and cow serum proteins In crossed immunoelectrophoresis using 50 uL concentrated antibody per cm gel area no reaction with 2 uL human plasma and 2 uL cow serum is observed The antibody shows one distinct precipitate GFAP with cow brain extract Staining Coomassie Brilliant Blue In indirect ELISA the antibody shows no reaction with human plasma and cow serum 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously w
19. ith patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immu
20. les folliculo stellaires de l hypophyse 7 les cellules de Schwann et les cellules gliales enteriques De plus les cellules myo pith liales du sein 6 sont galement marqu es Dans le cerveau les astrocytes pr sentent une coloration mod r e forte Dans le c lon les cellules de ganglionnaries dans les plexus d Auerbach et de Meissner pr sentent une coloration faible mod r e Aucune coloration n est observ e dans la vessie le tissu conjonctif le foie les tissus lymphatiques les muscles le pancr as la peau et l uretre Tissus tumoraux Les 23 glioblastomes multiformes GBM ont t marqu s par l anticorps Dans 20 cas sur 23 de GBM au moins 50 des cellules malignes taient positives la GFAP Seulement 3 cas sur 22 de carcinome avec m tastases c r brales ont t marqu s Ce marquage tait localis et limit moins de 10 des cellules malignes 3 5 cas sur 5 d astrocytomes h misph riques de type granulaire rare ont montr une positivit localis e la GFAP avec l anticorps 4 L anticorps a galement marqu 7 cas sur 7 de xanthoastrocytomes polymorphes 8 et a marqu des cellules folliculo stellaires du lobe ant rieur dans 20 cas sur 20 de n oplasmes pituitaires 7 L anticorps a marqu 8 cas sur 11 de m dulloblastome MB de type desmoplasique Le marquage est apparu sous forme de zones localis es dans les cellules de morphologie n oplasique positives la GFAP Seul
21. lid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include brain and colon and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Rabbit Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS600 Cells labeled by the antibody display cytoplasmic staining IS524 EFG MNIV 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevu Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 117288 003 Normal tissues The antibody labels astrocytes in the brain 3 follicular stellate cells of the pituitary gland 7 Schwann cells and enteric
22. losifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur II n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de details
23. nohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram GFAP without counterstaining or GFAPH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still va
24. phatischem Gewebe Muskeln Pankreas Haut und Harnleiter beobachtet Pathologisches Gewebe Alle 23 Gliablastome GBM wurden durch den Antik rper markiert Bei 20 der insgesamt 23 GBM waren mindestens 50 der malignen Zellen GFAP positiv Nur 3 der 22 F lle von Karzinomen die Metastasen im Gehirn bildeten wurden markiert Diese Markierung war fokal und auf weniger als 10 der malignen Zellen beschr nkt 3 5 von 5 hemisph rischen Astrozytomen des seltenen granul ren Typs ergaben bei dem Antik rper ein fokal GFAP positives Ergebnis 4 der auch 7 von 7 pleomorphen Xanthoastrozytomen 8 und Follikelsternzellen des Hypophysenvorderlappens in 20 20 Hypophysenneoplasmen markierte 7 Bei Medulloblastomen MB der desmoplastischen Variante markierte der Antik rper 8 von 11 F llen Die Markierung zeigt sich in Form fokaler Bereiche von GFAP positiven Zellen mit neoplastischer Morphologie Nur 4 von 31 MB der klassischen Variante wiesen diesen Typ von neoplastischen Zellen auf aber bei klassischen MB wurden in 27 von 31 F llen GFAP positive Zellen mit der Morphologie von reaktiven Astrozyten beobachtet 9 Es zeigte sich auch dass der Antik rper 15 von 38 Schwannomen 38 und 2 F lle von plexiformen Neurofibromen markierte w hrend 16 F lle von dermalem Neurofibrom negativ waren 10 Bei verschiedenen neoplastischen und nicht neoplastischen Erkrankungen der Brust war der Prozentsatz der mit dem Antik rper reaktiven Myoepithelzellen
25. uctural homology with the other intermediate filaments 5 Functionally GFAP is thought to be important in astrocyte motility and shape by providing structural stability to astrocytic processes 1 Following injury to the human CNS caused by trauma genetic disorders or chemicals astrocytes proliferate and show extensive hypertrophy of the cell body and processes and GFAP is markedly upregulated In contrast with increasing astrocyte malignancy there is a progressive loss of GFAP production Thus malignant astrocytomas have fewer tumour cells that stain positively and intensely for GFAP than do less malignant astrocytomas and normal brain specimens 5 Outside the CNS sensitive detection methods may demonstrate GFAP in Schwann cells enteric glia cells salivary gland neoplasms and metastasizing renal carcinomas Additionally GFAP immunoreactivity has been demonstrated in epiglottic cartilage pituicytes immature oligodendrocytes papillary meningiomas 1 and myoepithelial cells of the breast 6 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use polyclonal rabbit antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing prote
26. verglichen mit der normalen Brust stark erh ht w hrend bei den malignen Zellen von 183 Brustkarzinomen unterschiedlichen Typs kein positives Resultat auftrat 6 In einer Studie mit 36 Patienten markierte der Antik rper keine Meningiome 11 References References Literatur Eng LF Ghirnikar RS Lee YL Glial fibrillary acidic protein GFAP thirty one years 1969 2000 Neurochem Res 2000 25 1439 51 Reske Nielsen E Oster S Reintoft I Astrocytes in the prenatal central nervous system Acta path microbiol immunol scand Sect A 1987 95 339 46 Oh D Prayson RA Evaluation of epithelial and keratin markers in glioblastoma multiforme An immuno histochemical study Arch Pathol Lab Med 1999 123 917 20 Geddes JF Thom M Robinson SFD Revesz T Granular cell change in astrocytic tumors Am J Surg Pathol 1996 20 55 63 Rutka JT Murakami M Dirks PB Hubbard SL Becker LE Fukuyama K et al Role of glial filaments in cells and tumors of glial origin a review J Neurosurg 1997 87 420 30 Viale G Gambacorta M Coggi G Dell Orto P Milani M Doglioni C Glial fibrillary acidic protein immunoreactivity in normal and diseased human breast Virchows Arch A Pathol Anat 1991 418 339 48 Morris CS Hitchcock E Immunocytochemistry of folliculo stellate cells of normal and neoplastic human pituitary gland J Clin Pathol 1985 38 481 8 8 Powell SZ Yachnis AT Rorke LB Rojiani AM Eskin TA Divergent differentiation in pleomorphic xantho astrocytoma
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