FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human p53 Protein Clone DO
Contents
1. 9 FLEX Monoclonal Mouse Anti Human p53 Protein Clone DO 7 Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S616 ENGLISH Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 115259 003 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human p53 Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels wild type and mutant type p53 protein and is useful for the identification of p53 accumulation in human neoplasias 1 3 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist p53 is a nuclear phosphoprotein with a molecular mass of 53 kDa Wild type p53 protein is present in a wide variety of normal cells but the protein has a very short half life and thus is present in only minute amounts 1 generally below the detection level of immunohistochemical methods 4 Somatic mutation of the p53 gene is a very frequent event in the development of human neoplasia and because mutant p53 pro2. llen der Mischform 25 bis 50 positive Zellen und 1 von 3 F llen der mesenchymalen Form ber 75 positive Zellen 3 Beim Hodgkin Lymphom zeigten mindestens 65 der Zellen eine positive p53 Markierung w hrend etwa 50 der Non Hodgkin Lymphome positiv waren 2 Die neoplastischen Zellen im Dickdarm Adenokarzinom zeigten eine m ige bis starke F rbereaktion References References Literatur 1 Vojt ek B B rtek J Midgley CA Lane DP An immunochemical analysis of the human nuclear phosphoprotein p53 New monoclonal antibodies and epitope mapping using recombinant p53 J Immunol Methods 1992 151 237 44 Nieder C Petersen S Petersen C Thames HD The challenge of p53 as prognostic and predictive factor in Hodgkin s or non Hodgkin s Iymphoma review Ann Hematol 2001 80 2 8 Ramael M Lemmens G Eerdekens C Buysse C Deblier I Jacobs W et al Immunoreactivity for p53 protein in malignant mesothelioma and non neoplastic mesothelium J Pathol 1992 168 371 5 Cooper K Haffajee Z bcl 2 and p53 protein expression in follicular lymphoma J Pathol 1997 182 307 10 5 B rtek J B rtkov J Vojt amp Sek B Sta kov Z Luk J Rejthar A et al Aberrant expression of the p53 oncoprotein is a common feature of a wide spectrum of human malignancies Oncogene 1991 6 1699 703 6 Kontogeorgos G Kapranos N Thodou E Sambaziotis D Tsagarakis S Immunocytochemical accumulation of p53 in corticotroph adenomas Relations
3. clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi La p53 est une phosphoproteine nucl aire ayant une masse mol culaire de 53 kDa La prot ine p53 de type sauvage est pr sente dans un grand nombre de cellules normales mais cette prot ine a une demi vie tr s courte et n est donc pr sente qu en faible teneur 1 g n ralement en de du seuil de d tection des m thodes immunohistochimiques 4 La mutation somatique du g ne p53 est un v nement tr s fr quent dans le d veloppement des n oplasies humaines et du fait que les prot ines p53 mutantes sont souvent beaucoup plus stables que la prot ine p53 de type sauvage la prot ine p53 mutante s accumule un taux lev 1 Par exemple une accumulation de prot ine p53 a t observ e dans 76 des 212 l sions malignes humaines notamment les carcinomes du sein du c lon et de l estomac le m lanome le carcinome embryonnaire du testicule le carcinome transitionnel de la vessie le carcinome ut rin et les sarcomes des tissus mous 5 La prot ine p53 de type sauvage agit comme facteur de transcription c est dire comme modulateur qui peut soit activer soit d sactiver des g nes cruciaux Elle inhibe galement la r plication de l ADN et est une m
4. permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram p53 without counterstaining or p53H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operators Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for
5. sur 26 de type pith lial 1 25 de cellules positives 1 cas sur 7 de type mixte 25 50 de cellules positives et 1 cas sur 3 de type m senchymateux plus de 75 de cellules positives 3 Dans le lymphome de Hodgkin 65 ou plus pr sentent un marquage positif la p53 alors qu environ 50 des Iymphomes non hodgkiniens taient positifs 2 Les cellules n oplasiques de l ad nocarcinome du c lon pr sentent une coloration nucl aire mod r e forte Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human p53 Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper markiert den Wildtyp und den Mutantentyp des p53 Proteins und eignet sich f r die Identifizierung von p53 Akkumulationen in menschlichen Neoplasien 1 3 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden p53 ist ein nukle res Phosphoprotein mit einem Molekulargewicht von 53 kDa Wildtyp p53 Protein findet sich in einer Vielfalt normaler Zellen Seine Halbwertszeit ist jedoch sehr kurz so dass es nur in winzigen Mengen vorliegt 1 und die Nachweisgrenze in der Regel immunhistochemische Me
6. tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako IS616 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115259 003 Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide de Envision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L
7. utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre le c lon et l ad nocarcinome du c lon et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent g n ralement une coloration nucl aire mais une coloration cytoplasmique a t signal e dans certains cas 6 Tissus sains Dans le m soth lium sain et r actif l anticorps marque 0 cas sur 40 et dans 27 m soth liomes les cellules normales par exemple les fibroblastes et les cellules endoth liales taient n gatives 3 Dans le c lon seules des cellules pith liales basales b nignes diss min es pr sentent une coloration nucl aire faible mod r e Tissus tumoraux Dans le lymphome folliculaire une accumulation croissante de p53 dans les centroblastes a t observ e avec une volution morphologique entra nant la positivite de 1 cas sur 16 de grade I 10 cas sur 21 de grade Il et 6 cas sur 6 de grade Ill 4 Dans les m soth liomes l anticorps marque 7 cas
8. ebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen IS616 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision TM FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und und erforderliche aber Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Proto
9. ge permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS3 volume de distribution de 300 uL Autoprogram p53 sans contre coloration ou p53H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l amp tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garantit des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d
10. gns to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or
11. habt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineing
12. hip with heat shock proteins and apoptosis Pituitary 1999 1 207 12 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Use by R f rence catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Dispositif medical de diagnostic in vitro Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant In vitro Diagnostikum Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation Numero de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 115259 003 IS616 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
13. information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics IS616 EFG MNIV 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 115259 003 Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include colon and colon adenocarcinoma and the cells structures should display reaction patterns as described for these tissues in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody generally display n
14. kollen vorprogrammiert en A te Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen aterialien Autoprogram p53 ohne Gegenf rbung oder p53H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision M FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werde
15. n Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Dickdarm und Dickdarm Adenokarzinom enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Auswertung der F rbung Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen in der Regel eine nukle re F rbung auf in einigen F llen kann jedoch auch eine zytoplasmatische F rbung auftreten Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe Bei gesundem und reaktivem Mesothel markierte der Antik rper 0 von 40 F llen Bei 27 Mesotheliomen testeten die gesunden Zellen z B Fibroblasten und Endothelzellen negativ 3 In Dickdarm weisen nur die verstreuten benignen Basalepithelzellen fokal eine schwache bis m ige F rbereaktion auf Pathologisches Gewebe Beim follikul rem Lymphom wird mit morphologischer Progression eine zunehmende Akkumulation von p53 in Zentroblasten beobachtet mit resultierender Zunahme der positiven Reaktion 1 von 16 bei Grad I 10 von 21 bei Grad Il und 6 von 6 bei Grad Ill 4 Bei Mesotheliom markierte der Antik rper 7 von 26 F llen der epithelialen Form 1 bis 25 positive Zellen 1 von 7 F
16. ne the antibody labels a 53 kDa band corresponding to the mutant type p53 which is expressed by A431 The epitope recognized by the antibody is located between the N terminal amino acids 1 and 45 and possibly between amino acids 37 and 45 of the human p53 protein 1 SDS PAGE analysis of immunoprecipitates formed between lysate of the BT474 breast cancer cell line and the antibody shows reaction with a 53 kDa protein corresponding to p53 1 In immunohistochemistry the antibody labels mutant type p53 in the A431 cell line and wild type p53 in the SVK14 cell line SV40 transformed keratinocyte line 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious si
17. noklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon DO 7 1 Isotyp IgG2b Kappa Rekombinantes humanes Wildtyp p53 Protein 1 Beim Western Blotting von Lysaten der menschlichen Vulvakarzinom Zelllinie A431 markiert der Antik rper eine 53 kDa Bande die dem mutanten Typ p53 entspricht der von A431 exprimiert wird Das vom Antik rper erkannte Epitop ist zwischen den N terminalen Aminos uren 1 und 45 und m glicherweise zwischen den Aminos uren 37 und 45 des menschlichen p53 Proteins lokalisiert 1 Eine SDS PAGE Analyse der Immunpr zipitate die zwischen dem Lysat aus der BT474 Brustkrebs Zelllinie und dem Antik rper gebildet wurden zeigte eine Reaktion mit einem 53 kDa schweren p53 entsprechenden Protein 1 In der Immunhistochemie markiert der Antik rper den mutanten Typ p53 in der A431 Zelllinie und den Wildtyp p53 in der SVK14 Zelllinie SV40 transformierte keratinozyte Linie 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehand
18. ol cule de contr le des diff rentes tapes de la progression du cycle cellulaire De plus la prot ine p53 est impliqu e dans la r gulation de l apoptose 2 Dans les essais de transfection la p53 de type sauvage se comporte comme suppresseur de tumeur alors que la p53 mutante agit comme oncog ne transformant dominant 1 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone DO 7 1 Isotype IgG2b kappa Prot ine p53 recombinante humaine de type sauvage 1 Dans les analyses par Western blot du lysat de lign e cellulaire de carcinome vulvaire humain A431 l anticorps marque une bande de 53 kDa correspondant la p53 de type mutant qui est exprim e par l A431 L pitope reconnu par l anticorps est localis entre les acides amin s 1 et 45 du N terminal et ventuellement entre les acides amin s 37 et 45 de la prot ine p53 humaine 1 L immunoblo
19. t PAGE en pr sence de SDS d immunoprecipites form s entre le lysat de lign e cellulaire de cancer du sein BT474 et l anticorps pr sente une r action une prot ine de 53 kDa correspondant la p53 1 En immunohistochimie l anticorps marque la p53 de type mutant dans la lign e cellulaire A431 et la p53 de type sauvage dans la lign e cellulaire SVK14 lign e de k ratinocytes transform s par SV40 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l
20. teins often are much more stable than wild type p53 protein the mutant p53 protein accumulates to a high level 1 As examples p53 protein accumulation was observed in 76 of 212 human malignant lesions including breast colon and stomach carcinomas melanoma embryonal carcinoma of the testis transitional carcinoma of the urinary bladder uterine carcinoma and soft tissue sarcomas 5 Wild type p53 protein functions as a transcription factor i e as a modulator which can turn crucial genes either on or off It also inhibits DNA replication and is a checkpoint control molecule for progression of the cell cycle Furthermore p53 protein is involved in the regulation of apoptosis 2 In transfection assays wild type p53 behaves as a tumor suppressor while mutant p53 behaves as a dominant transforming oncogene 1 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone DO 7 1 Isotype IgG2b kappa Recombinant human wild type p53 protein 1 In Western blotting of lysate of the A431 human vulval carcinoma cell li
21. thoden unterschreitet 4 Die somatische Mutation des p53 Gens ist ein sehr h ufiges Ereignis bei der Entstehung menschlicher Neoplasien Weil mutante p53 Proteine oft bedeutend stabiler als das Wildtyp p53 Protein sind kann mutantes p53 Protein einen hohen Spiegel erreichen 1 Akkumulationen von p53 Protein wurden beispielsweise bei 76 der 212 malignen L sionen des Menschen beobachtet darunter Brust Dickdarm und Magenkarzinome Melanome embryonale Karzinome der Testes bergangskarzinome der Harnblase Uteruskarzinome und Weichteilsarkome 5 Das Wildtyp p53 Protein fungiert als Transkriptionsfaktor d h als Modulator der ausschlaggebende Gene ein und ausschalten kann Es hemmt zudem die DNA Replikation und ist ein Checkpoint Molek l f r die Zellzyklusprogression Dar ber hinaus ist das p53 Protein an der Regulation der Apoptose beteiligt 2 Bei Transfektionsassays verh lt sich das Wildtyp b53 wie ein Tumorsuppressor w hrend mutantes p53 als dominantes transformierendes Onkogen fungiert 1 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger mo
22. uclear staining but cytoplasmic staining has been reported in some cases 6 Normal tissues In normal and reactive mesothelium the antibody labels 0 40 cases and in 27 mesotheliomas normal cells e g fibroblasts and endothelial cells are negative 3 In colon only the scattered benign basal epithelial cells show a weak to moderate nuclear staining reaction Abnormal tissues In follicular lymphoma an increasing accumulation of p53 in centroblasts was observed with morphological progression resulting in 1 16 cases of grade 10 21 cases of grade Il and 6 6 cases of grade Ill being positive 4 In mesotheliomas the antibody labeled 7 26 cases of epithelial type 1 to 25 positive cells 1 7 cases of mixed type 25 to 50 positive cells and 1 3 cases of mesenchymal type more than 75 positive cells 3 In Hodgkin s lymphoma 65 or more showed positive labeling for p53 whereas around 50 of non Hodgkin s lymphomas were positive 2 The neoplastic cells in colon adenocarcinoma show a moderate to strong nuclear staining reaction Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human p53 Protein Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps marque la prot ine p53 de types sauvage et mutant et facilite l identification de l accumulation de p53 dans les n oplasies humaines 1 3 L interpr tation
23. utilisateur II ny a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L amp paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de details se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de monta
Download Pdf Manuals
Related Search