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Hepcidin Prohormone ELISA 研究用

1. 6 6 1 6 2 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 REALISATION DU TEST Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s a temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d viter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon 1 2 3 NOAA 11 12 13 14 Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 100 uL d Assay Buffer dans chaque puits D poser 50 uL de chaque Standard Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s D poser 100 uL Biotin Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes Il est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape In
2. 5 A Alv olos de E Brunnar i Nnyadaxia Microtiterwells microtitulagao Miknatitarenands Mikrotiterplatta MikpOTIT O OTAOEWG Antiserum Anti soro Antiserum Antiserum AVTIOP6G Enzyme Conjugado enzim tico Enzymkonjugat Enzymkonjugat ZULEUYHEVO EVZUUO Conjugate Enzyme Complexo enzim tico Enzymkompleks Enzymkomplex ZUNTT OKO EVZUNOU Complex Substrate Solu o de substrato Substratoplgsning Substratl sning CIE Solution UTTOOTPWHATOG Stop Solution Solu o de paragem Stopoplgsning Stopp l sning AidAuya TEPUATIOUO Zero Standard Padr o zero Standard O Standard O Np rurro Mnd v Standard Calibrador Standard Standard Np rurra Control Controlo Kontrol Kontroll E EYXOS Assay Buffer Tamp o de teste Assay buffer Assay Buffer a A Aupa Wash Solution Solu o de lavagem Vaskebuffer Tvatt l sning AldAupa TT UDEWG 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1NHCI 1N HO 1N HO 1NHCI 1NHCI Sample Diluent Conjugate Diluent Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 34
3. Vorbereitung der Reagenzien Enth lt lt 0 020 Methylisothiazolon und lt 0 020 Bromnitrodioxan als Konservierungsstoff Kontrollwerte und bereiche entnehmen Sie bitte dem Fl schchenetikett oder dem QC Datenblatt 4 Assay Buffer Assaypuffer 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Enth lt lt 0 020 Methylisothiazolon und lt 0 020 Bromnitrodioxan als Konservierungsstoff 5 Biotin Conjugate Biotinkonjugat 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Prohepcidinfragment mit Biotin konjugiert Enth lt lt 0 020 Methylisothiazolon und lt 0 020 Bromnitrodioxan als Konservierungsstoff 6 Enzyme Complex Enzymkomplex 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Enth lt Meerrettichperoxidase Enth lt lt 0 020 Methylisothiazolon und lt 0 020 Bromnitrodioxan als Konservierungsstoff 7 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 8 Stop Solution Stoppl sung 1 Flaschchen 14 mL gebrauchsfertig Enth lt 0 5M H2SO Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen 9 Wash Solution Waschl sung 40X konzentriert 1 Fl schchen 30 mL Siehe Vorbereitung der Reagenzien 4 1 1 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenlesegerat mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Prazisions Mikropipette
4. N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 11 REFERENCES Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 32 DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 SYMBOLS USED WITH DRG ELISA S D TAE AAA Sym bol English Deutsch Fran ais Espanol Italiano Nur f r Seulement dans le S lo para uso en FRO For research use only Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n da iva European Conformity CE Konfirmit ts Conforme aux normes Conformidad europea Conformit europea kennzeichnung europ ennes Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consultez le Mode d emploi Consulte las Instrucciones Consulti le istruzioni In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Diagnostic in vitro Diagn stico in vitro Diagnostica in vitro Hol Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat LOT Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage T
5. comprador referidos al punto 10 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 11 REFERENCIAS Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 26 u I D WAG NIAAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DRG Hepcidin Prohormone ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de pro hepcidine dans le s rum Seulement dans le cadre de recherches 2 PRINCIPE DU TEST Le kit DRG Hepcidin Prohormone ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique comp titive Les plaques de microtitration sont recouvertes d un anticorps polyclonal de lapin dirig contre l anticorps anti hepcidine 28 47 aa Une quantit inconnue de pro hepcidine contenue dans l chantillon et une quantit fixe d hepcidine conjugu e a la mol cule de biotine entrent en comp tition avec les anticorps anti pro hepcidine immobilis s dans les puits Apr s incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de peroxidase li e est inversement proportionnelle la concentration de pro hepcidine contenue dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de coloration obtenue est inversement proportionnel
6. hombres y mujeres 80 58 9 158 1 104 5 8 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 8 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre O 1000 ng mL 8 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 8 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media menos dos desviaciones est ndar de 21 r plicas del Est ndar 0 y result ser lt 3 95 ng mL 8 4 Precisi n Consultar el manual de usuario en ingl s 8 5 Exactitud 8 5 1 Control de Calidad Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos apropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los
7. 0 mL Aqua dest Note The reconstituted standards are stable for 6 days at 2 8 For longer storage freeze at 20 Control Reconstitute the lyophilized content with 1 0 mL Aqua dest and let stand for 10 minutes in minimum Mix the control several times before use Note The reconstituted control is stable for 6 days at 2 8 For longer storage freeze at 20 TC Wash Solution Dilute 30 mL of concentrated Wash Solution with 1170 mL deionized water to a final volume of 1200 mL The diluted Wash Solution is stable for 2 weeks at room temperature Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 3 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 4 4 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets see chapter 13 4 5 Damaged Test Kits In case of any severe damage of the test kit or components DRG have to be informed written latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solution has been found After this they should be disposed according to the official regulations 5 SPECIMEN Serum can be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens Please note Samples containing sodium azide should not be used in the assay 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipunc
8. Saugf higes Papier Aqua dest 4 2 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 8 C ihre Reaktivitat bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem Offnen sollten alle Reagenzien bei 2 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten ge ffnete Kits zwei Monate ihre Reaktivit t 4 3 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Standards Rekonstituieren Sie den Iyophilisierten Inhalt der Standardfl schchen mit 1 0 mL destilliertem Wasser Achtung Bei 2 8 C sind die rekonstituierten Standards 6 Tage haltbar F r eine l ngere Aufbewahrung bei 20 einfrieren Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 10 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Control Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt des Flaschchens mit 1 0 mL destilliertem Wasser und lassen Sie das Flaschchen mindestens 10 Minuten ruhen Vor Gebrauch die Kontrolle mehrmals vorsichtig sch tteln Achtung Bei 2 8 ist die rekonstituierte Kontrolle 6 Tage haltbar F r eine l ngere Aufbewahrung bei 20 einfrieren Wash Solution Die 40 fach konzentrierte Waschl sung 30 mL mit 1170 mL
9. corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 6 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 8 4 2 Recovery The analytical recovery of Pro Hepcidin was estimated at 3 different concentrations in serum samples Increasing amounts of unlabeled Pro Hepcidin 50 ng ml 250 ng ml 500 ng ml were added to the samples with various initial Pro Hepcidin concentrations Each sample non spiked and spiked was assayed The Pro Hepcidin concentrations were measured and the percentage recovery rates were calculated Endogenous Pro Hepcidin Average Recovery Range of Recove
10. deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campione necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmente proporzionale con il tempo e con la temperatura Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 17 6 2 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Eseguimento del test Ogni analisi deve includere una curva standard 1 2 3 NOAA 11 6 3 Na Fissare i pozzetti necessari sul supporto Pipettare 100 uL Assay Buffer in ogni pozzetto Pipettare 50 uL di ogni Standard Control e campione nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso Pipettare 100 uL Biotin Conjugate in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi E molto importante raggiungere un completo mescolamento Incubare per 120 minuti a temperatura ambiente senza coptire la piastra Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 5 volte con soluzione di lavaggio diluita 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su ca
11. laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation 2500 x g 10 min 4 C Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne soit termin e Pour d autres types d chantillons un protocole d extraction particulier peut tre n cessaire 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu 24 heures 2 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test Remarque les chantillons de patients qui ont t congel s durant une longue p riode ou qui ont t decongel s de facon r p t e pr sentent de plus fortes concentrations en hepcidine que des chantillons ayant t congel s une seule fois 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure celle du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Assay Buffer et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL S rum 90 uL Assay Buffer bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Assay Buffer bien m langer Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 29
12. mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Standards Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los est ndares con 1 0 mL de agua destilada Nota Los est ndares reconstituidos son estables durante 6 d as a 2 8 C Para per odos m s largos congelar a 20 C Control Reconstituir el contenido liofilizado con 1 0 mL de agua destilada y dejar reposar como m nimo durante 10 minutos Mezclar el control varias veces antes de usar Nota El control reconstituido es estable durante 6 d as a 2 8 C Para per odos m s largos congelar a 20 C Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 22 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Wash Solution Mezclar 30 mL de la soluci n de lavado concentrada con 1170 mL de agua desionizada hasta un volumen final de 1200 mL La soluci n del lavado diluida es estable durante 2 semanas a temperatura ambiente 4 4 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 5 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n De
13. not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different e Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according the national biohazard safety guideline or regulation e Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Instruments GmbH The Safety Data Sheets fit the demands of EU Guideline 91 155 EC Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 2 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit 1 Microtiterwells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti Pro Hepcidin antibody polyclonal 2 Standard Standard 0 6 7 vials lyophilized 1 mL Concentrations 10 50 100 250 500 1000 ng mL of synthetic peptide Hepcidin 28 47 Contains lt 0 02 methylisothiazolone and lt 0 02 bromonitrodioxane as preservative See Preparation of Reagents 3 Control 1 vial lyophilized 1 mL Control value and range please refer to vial label or QC Datasheet see Reagent Preparation Contains lt 0 02 methylisothiazolone and lt 0 02 bromonitrodioxane as preservative 4 Assay Buffer 1 vial 14 mL ready to use contains lt 0 02 methylisothiazolone and lt 0 02 bromonitrodioxane as preservative 5 Biotin Conjugate 1 vial 14 mL ready to use Pr
14. verd nnter Waschl sung waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen 11 100 pL Substrate Solution in jedes Well geben 12 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 13 Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 100 pL Stop Solution in jedes Well abstoppen 14 Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen ak D gt o 6 3 Ergebnisermittlung 1 Die durchschnittlichen Werte der Optischen Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen 2 Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird 3 Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt 4 Automatische Methode Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung 4PL 4 Parameter Logistics 4 Parameter Rodbard bestimmt Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben 5 Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor mu
15. y 0 02 Bromonitrodioxano BND como conservante 6 Enzyme Complex Complex enzim tico 1 vial 14 mL listo para usar contiene perossidasi di rafano Contiene lt 0 02 Metilisotiazolona MIT y 0 02 Bromonitrodioxano BND como conservante 7 Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 8 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5M H SO Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel 9 Wash Solution Soluci n de lavado 1 vial 30 mL concentrado 40X ver Preparaci n de los Reactivos 4 1 1 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lector de microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua destilada 4 2 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos conservan su actividad durante dos meses si se almacenan como se ha descrito arriba 4 3 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n
16. 000 ng mL 8 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 8 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de l analyse a t calcul e partir de la moyenne la plus faible de deux d viations standards de l analyse de 21 r plicats du Standard 0 et a t mesur e lt 3 95 ng mL 8 4 Pr cision Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 8 5 Exactitude 8 5 1 Contr le de qualit Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r sultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doi
17. 60 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 5 times with diluted Wash Solution 400 ul per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Add 100 ul of Substrate Solution to each well Incubate for 30 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 100 pl of Stop Solution to each well Read the OD at 450 10 nm with a microtiter plate reader within 10 minutes after adding the Stop Solution Calculation of Results Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a 4 PL 4 Parameter Logistics curve fit Other data reduction functions may give slightly different results The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account ow is listed a typical example of a standard curve with the DRG H
18. Biotin Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 120 minutes a temperatura ambiente sin cubrir la placa Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 5 veces con soluci n de lavado diluida 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 100 pL de Enzyme Complex a cada pocillo Incubar durante 60 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 5 veces con soluci n de lavado diluida 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 100 pL de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbanci
19. DUCTION The DRG Hepcidin Prohormone Enzyme Immunoassay Kit provides materials for the quantitative determination of Hepcidin Prohormone in human serum This assay is intended for research use only Hepcidin is a small cystein rich peptide produced in the liver 1 This molecule regulates the absorption of iron in the body similarly to the correlation of insulin and sugar Hepcidin was initially isolated as a 25 amino acid aa peptide in human plasma and urine exibiting antimicrobial activity 2 3 Human Hepcidin is produced from a 84 aa precursor including a putative 24 aa signal peptide Application of the present ELISA allows the detection and determination of Hepcidin Prohormone Pro Hepcidin in serum of patients suffering from several disorders of iron metabolism 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG Hepcidin Prohormone ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the principle of competitive binding The microtiter wells are coated with a polyclonal antibody directed towards an antigenic site on the Hepcidin Prohormone molecule 28 47 aa Endogenous Hepcidin Prohormone of a patient sample competes with a Hepcidin Prohormone biotin conjugate for binding to the coated antibody After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound biotin conjugate is reverse proportional to the concentration of Hepcidin Prohormone in the sample After addition of the substrate solution the intensity
20. OOO e T Fisse Diagnostics User s Manual Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 formerly EIA 4015 baal Legal Manufacturer Distributed by DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 6421 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de KERFORF HERR VALE AAR BAL D WAG NARHA User e Manual 96 01 07 baal Legal Manufacturer Distributed by DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 6421 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de AEHFORTFRRERN TAE NAAA u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido Content 1 INTRODUCTION i 2 1 INTRODUCTION i 27 2 PRINCIPLE OF THE TEST 2 2 PRINCIPE DU TEST 27 3 PRECAUTIONS i 2 3 PRECAUTIONS D UTILISATION 27 4 KIT COMPONENTS li 3 4 COMPOSITION DU KIT 28 5 SPECIMEN siciliani 4 5 CHANTILLON 29 6 TEST PROCEDURE 4 6 REALISATION DU TEST 30 7 EXPECTED VALUES iii tu 6 7 VALEURS ATTENDUES 31 8 ASSAY CHARACTERISTICS 6 8 CARACTERISTIQUES DU TEST 31 9 LIMITATIONS OF USE 7 9 LIMITES D UTILISATION 32 10 LEGAL ASPEC
21. TS ssa co noiacconaniaici incest 8 10 ASPECTS LEGAUN EE 32 11 R F RENCES ent 8 11 R F RENCES haben 32 1 EINLEITUNG iia is 9 SYMBOLS USED WITH DRG ELISASS 33 2 TEST PRINZIP cursa 9 3 VORSICHTSMABNAHMEN 9 4 BESTANDTEILE DES KITS 10 5 PROBENVORBEREITUNG 11 6 TESTDURCHF HRUNG nen 12 7 ERWARTETE WERTE 13 8 ASSAY CHARACTERISTIKA 13 9 GRENZEN DES TESTS 14 10 RECHTLICHE GRUNDLAGEN ssa ssiseneennea 14 11 REFERENZEN suis 14 1 INTRODUZIONE i 15 2 PRINCIPIO DEL TEST ssa iii 15 3 PRECAUZIONI ini 15 4 COMPONENTI DEL KIT 16 5 CAMPION coord pants 17 6 ATTUAZIONE DEL TEST 17 7 VALORI NORMAL 19 8 CARATTERISTICHE DEL TEST 19 9 LIMITAZIONE DEL TEST 20 10 ASPETTI LEGALI iii 20 11 BIBLIOGRAFIA 20 1 INTRODUCCION cacon ira 21 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO 21 3 PRECAUCIONES i 21 4 COMPONENTES DEL KIT 22 5 MUESTRAS cinica aora eins 23 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 23 7 VALORES ESPERADOS 25 8 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 25 9 LIMITACIONES DE USO 26 10 ASPECTOS LEGALES 26 11 REFERENCIAS u nasse 26 Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 1 u D TAE NAAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 A 1 INTRO
22. Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden e Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt e Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden e Materialsicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Die Materialsicherheitsdatenbl tter entsprechen den Verordnungen der EU Richtlinie 91 155 EC Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 9 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12x8 Wells einzeln brechbar mit anti Pro Hepcidin Antik rper polyklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 6 7 Fl schchen lyophilisiert je 1 0 mL Konzentrationen 10 50 100 250 500 1000 ng mL synthetisches Peptide Hepcidin 28 47 Siehe Vorbereitung der Reagenzien Enth lt lt 0 020 Methylisothiazolon und lt 0 020 Bromnitrodioxan als Konservierungsstoff 3 Control Kontrolle 1 Fl schchen lyophilisiert 1 0 mL Siehe
23. Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 2 GE idr ssido di 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Sample Diluent nee un a diluci n Diluente dei campioni me Conjugate Diluent rd Ce dilution ui diluci n Diluente del tracciante Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 33 DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 D WAG NARA Sym bol Portugues Dansk Svenska EAAnvik FRO C Conformidade comas Europaeisk Europeisk EUpwraikr normas europeias overensstemmelse verensst mmelse ZUuu p pwon Instru es de uso Brugermanual Anv ndar manual Eyxelp dio Xp oTn Diagn stico in vitro In vitro diagnostik Diagnostik in vitro in vitro DIAYVWOTIK Cat logo n Katalognummer Katalog nummer ApiBu karad you L No do lote Lot nummer Batch nummer Ap 8u g Naptidoc Indeholder Inneh ller tillr ckligt till Mepiex gevo errapk tilsttreekkeligt til n test n tester YIA n EEET OEIG RENE Temperatura de Opbevaringstemperatu F rvaringstempratur Oeppokpaoia conservag o r aTro8nkevons Prazo de validade Udigbsdato Bast fore datum Huepounvia A n Fabricante Producent Tillverkare KaraokeuaoT S Distributed by Content Conte do Indhold Inneh ll Mepiex pevo Volume No Volume N mero Volumen antal Volym antal Oykoc api
24. a DRG Instruments GmbH regolamenti di sicurezza corrispondono alle norme EU 91 155 EC Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 15 u D VAG NIAAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti 12x8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti proormone epcidina anticorpo policlonale 2 Standard Standard 0 6 7 flaconi liofillizzati 1 mL Concentrazione 10 50 100 250 500 1000 ng mL synthetic peptide Hepcidin 28 47 vedi preparazionedei reagenti Contiene lt 0 02 methylisithiazolone lt 0 02 bromonitrodioxane come conservante 3 Control Controllo 1 flacone liofillizzato 1 mL valori dei controlli sono indicati sull etichetta dei flaconi o sulla descrizione QC vedi preparazione dei reagenti Contiene lt 0 02 methylisithiazolone lt 0 02 bromonitrodioxane come conservante 4 Assay Buffer Tampone del test 1 flacone 14 mL pronto all uso Contiene lt 0 02 methylisithiazolone lt 0 02 bromonitrodioxane come conservante 5 Biotin Conjugate Tracciante biotinilato 1 flacone 14 mL pronto all uso frammento della pro epcidina coniugato alla biotina Contiene lt 0 02 methylisithiazolone lt 0 02 bromonitrodioxane come conservante 6 Enzyme Complex Complesso enzimatico 1 flacone 14 mL pronto all uso Contiene perossidasi di rafano Contiene lt 0 02 methylisithiazolone l
25. a media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Log sticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n Abajo aparece un ejemplo t pico de una curva est ndar con el DRG Hepcidin Prohormone ELISA Unidades pticas 450 nm Standard O 0 ng mL Standard 1 10 ng ml Standard 2 50 ng mL Standard 3 100 ng mL Standard 4 250 ng mL Standard 5 500 ng mL Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 24 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DRG Hepcidin Prohormone ELISA se observaron los siguientes valores Poblaci n N v lido Percentil 5 95 valor medio Numero medio Median
26. acionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 21 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12x8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti Prohormona Hepcidina policlonal 2 Standard Standard 0 6 Est ndar 7 viales liofilizados 1 mL Concentraciones 10 50 100 250 500 1000 ng mL synthetic peptide Hepcidin 28 47 Ver Preparaci n de los Reactivos contiene lt 0 02 Metilisotiazolona MIT y 0 02 Bromonitrodioxano BND como conservante 3 Control 1 vial liofilizado 1 mL ver Preparaci n de los Reactivos Referir los valores y rangos del control a la etiqueta del vial o a la Hoja de datos QC Contiene lt 0 02 Metilisotiazolona MIT y 0 02 Bromonitrodioxano BND como conservante 4 Assay Buffer Tampon de ensayo 1 vial 14 mL listo para usar Contiene lt 0 02 Metilisotiazolona MIT y 0 02 Bromonitrodioxano BND como conservante 5 Biotin Conjugate Conjugado Biotina 1 vial 14 mL listo para usar Fragmento Prohepcidina conjugado con biotina Contiene lt 0 02 Metilisotiazolona MIT
27. and cell specific localization in the liver and its regulation in hereditary hemochromatosis chronic renal insufficiency and renal anemia GUT 2004 53 735 743 2 Krause A Neitz S Magert HJ et al LEAP 1 a novel highly disulfide bonded human peptide exhibits antimicrobial activity FEBS Lett 2000 480 147 150 3 Park CH Valore EV Waring AJ et al Hepcidin a urinary antimicrobial peptide synthesized in the liver J Biol Chem 2001 276 7806 7810 Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 8 u D RENATE DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 1 EINLEITUNG Der DRG Hepcidin Prohormone ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Hepcidin Prohormon in Humanserum eingesetzt Nur f r Forschungszwecke 2 TESTPRINZIP Der DRG Hepcidin Prohormone ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf dem Prinzip der kompetitiven Bindung basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem polyklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine Antik rper Bindungsstelle des Hepcidin Prohormon Molek ls 28 47 aa gerichtet ist W hrend der Inkubation konkurriert das Hepcidin Prohormon aus der Probe mit dem Hepcidin Prohormon Biotinkonjugat um die freien Bindungsstellen auf den beschichteten Wells Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt Anschlie end wird die Substratl sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensit t der gebildeten Farbe ist umgekehrt proportional der Hepci
28. cisi consultare la metodica in inglese 8 5 Esattezza 8 5 1 Controllo qualit consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo i risultati dei pazienti devono essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d incubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o direttamente la ditta DRG 8 5 2 Ritrovato Per dettagli p
29. controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente 8 5 2 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 8 5 3 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 25 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 9 LIMITACIONES DE USO 9 1 Sustancias que pueden interferir Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados 9 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de Prohormona Hepcidina en una muestra 9 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo 10 ASPECTOS LEGALES 10 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivo
30. cuber pendant 120 minutes temp rature ambiante sans couvrir la plaque D canter le contenu des puits et rincer les puits 5 fois avec de la solution de lavage dilu e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage Ajouter 100 uL d Enzyme Complex chaque puits Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante D canter le contenu des puits et rincer les puits 5 fois avec de la solution de lavage dilu e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Ajouter 100 uL de Substrate Solution chaque puits Incuber pendant 30 minutes a temp rature ambiante Stopper la r action enzymatique en ajoutant 100 pL de Stop Solution a chaque puits Lire la densit optique a 450410 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contrdles et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses L utilisation de
31. destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 1200 mL verd nnen Die verd nnte Waschl sung ist bei Raumtemperatur f r 2 Wochen stabil 4 4 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Spezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 5 Besch digte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem den offiziellen Richtlinien entsorgt werden 5 PROBENVORBEREITUNG Serum kann in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lip mische ikterische und oder stark h molysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden 5 1 Probenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette 02 1388 001 gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation 2500 x g 10 Minuten bei 4 C abtrennen Aliquots m ssen bei 20 C eingefroren werden Fur anderes Probenmaterial kann eine spezielle Extraktion erforderlich sein 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut verschlossen sein und k nnen vor Testb
32. din Prohormon Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen 3 VORSICHTSMARNAHMEN e Nur f r Forschungszwecke e Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt e Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HbsAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden e Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen e Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden e Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden e Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren e Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen e Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden e Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch
33. eginn bis zu 24 Stunden bei 2 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung ACHTUNG Bei Patientenproben die ber einen l ngeren Zeitraum oder mehrfach eingefroren waren ergeben sich h here Pro Hepcidin Konzentrationen als bei frisch gewonnenen Proben die nur einmal eingefroren wurden 5 3 Probenverdiinnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Assay Buffer weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Serum 90 uL Assay Buffer gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Assay Buffer gr ndlich mischen Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 11 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 6 TESTDURCHFUHRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden Fur jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschlep
34. emperature Lagerungstemperatur Temp rature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza Ena Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributtore Content Content Inhalt Contenu Contenido Contenuto Volume No Volume No Volumen Anzahl Volume Num ro Volumen N mero Volume Quantita Microtiterwells Microtiterwells Mikrotiterwells nen Placas multipocillo Micropozzetti Antiserum Antiserum Antiserum Antis rum Antisuero Antisiero Enzyme Enzyme Conjugate Enzymkonjugat Conjugu enzymatique Conjugado enzim tico Tracciante enzimatico Conjugate Enzyme Enzyme Complex Enzymkomplex Complexe Complex enzim tico Complesso enzimatico Complex enzymatique Substrate Substrate Solution Substratl sung Solution substrat Soluci n de sustrato Soluzione di substrato Solution Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Standard 0 Est ndar 0 Standard zero Standard Standard Standard Standard Est ndar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tampon de ensayo Tampone del test
35. epcidin Prohormone ELISA Standard 0 0 ng mL Standard 1 10 ng mL Standard 3 100 ng mL Standard 4 250 ng mL Standard 5 500 ng mL Standard 6 1000 ng mL Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 5 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 7 EXPECTED VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study conducted with apparently normal healthy adults using the DRG Hepcidin Prohormone ELISA the following values are observed Population Valid N 5 95 Percentile Mean Median males and females 80 58 9 158 1 104 5 8 ASSAY CHARACTERISTICS 8 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 1000 ng mL 8 2 Analytical Sensitivity The analytical sensitivity was calculated from the mean minus two standard deviations of twenty one 21 replicate analyses of Standard O and was found to be lt 3 95 ng mL 8 3 Precision 8 3 1 Intra Assay Variation The within assay variability is shown below Sample n La SD st eve 8 3 2 Inter Assay Variation The between assay variability is shown below Sample Lo ESD reis OV 8 4 Accuracy 8 4 1 Quality Control It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the
36. flacon concentr 40X voir Pr paration des r actifs 1 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De Peau distill e Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au del de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant deux mois s ils sont stock s comme pr c demment mentionn Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 28 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 4 3 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test a temp rature ambiante avant utilisation Standards Reconstituer le contenu lyophilis des flacons de standards avec 1 0 mL d eau distill e Remarque Les standards reconstitut s sont stables 6 jours 2 8 C Pour un stockage prolong congeler 20 Control Reconstituer le contenu lyophilis avec 1 0 mL d eau distill e et laisser i
37. g mL synthetic peptide Hepcidin 28 47 Voir Pr paration des r actifs contient lt 0 02 M thylisothiazolone MIT e lt 0 02 Bromonitrodioxane BND comme agent de conservation Control Contr le 1 flacon lyophilis 1 mL voir Pr paration des r actifs Les valeurs contr les et limites sont indiqu es sur l tiquette du flacon ou sur la fiche QC Contient lt 0 02 M thylisothiazolone MIT e lt 0 02 Bromonitrodioxane BND comme agent de conservation Assay Buffer Tampon d essai 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient lt 0 02 M thylisothiazolone MIT e lt 0 02 Bromonitrodioxane BND comme agent de conservation Biotin Conjugate Conjugu biotine 1 flacon 14 mL pr t l emploi fragment de pro hepcidine conjugu la biotine contient lt 0 02 M thylisothiazolone MIT e lt 0 02 Bromonitrodioxane BND comme agent de conservation Enzyme Complex Complexe enzymatique 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient HRP contient lt 0 02 M thylisothiazolone MIT e lt 0 02 Bromonitrodioxane BND comme agent de conservation Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient 0 5M de H2S04 Eviter les contacts avec la solution stop Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau Wash Solution Solution de lavage 1
38. giorni a 2 8 Per periodi piu lunghi congelare a 20C Control Ricostituire il contenuto liofillizzato con 1 0 mL acqua distillata e far riposare per almeno 10 minuti Mescolare alcune volte prima dell uso Nota Il controllo ricostituito stabili per 6 giorni a 2 8 C Per periodi piu lunghi congelare a 20 Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 16 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Wash Solution Diluire 30 mL della soluzione di lavaggio concentrata con 1170 mL di acqua deionizzata fino ad un volume finale di 1200 mL La soluzione di lavaggio diluita stabile per 2 settimane a temperatura ambiente 4 4 Smaltimento del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire secondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per questo prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 45 Test kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali 5 CAMPIONI Siero pu essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipemici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per ques
39. i precisi consultare la metodica in inglese 8 5 3 Linearit Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 19 u D IZEARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 9 LIMITAZIONE DEL TEST 9 1 Sostanze interferenti Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati 9 2 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostanza farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di proormone epcidina nel campione 9 3 Effetto Hook di alti dosaggi Nessun effetto gancio effetto hook stato osservato in questo test 10 ASPETTI LEGALI 10 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente secondo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattare la ditta DRG 10 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultat
40. i dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 10 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 10 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromettere la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 10 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore 11 BIBLIOGRAFIA Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 20 D TAE NAAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DRG Hepcidin Prohormone proporciona los materiales necesarios para
41. ion of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 10 2 Therapeutical Consequences Therapeutical consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 10 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutical consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutical consequences 10 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 10 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer 11 REFERENCES 1 Kulaksiz H et al Pro hepcidin expression
42. iqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test e Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es e L limination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non doit tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique e La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Les fiches de s curit sont en accord avec les directives europ ennes EU 91 155 EC Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 27 4 1 4 2 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 COMPOSITION DU KIT Contenu du kit Microtiterwells Plaques de micro titratio 12x8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps anti pro hepcidine polyclonal Standard Standard 0 6 7 flacons lyophilis s 1 mL Concentrations 10 50 100 250 500 1000 n
43. la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante partir de la courbe talon M thode automatique Les r sultats dans le IFU ont t calcul s de facon automatique en utilisant une courbe de r gression 4 PL 4 Parameter Logistics D autres fonctions logistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 30 u D WAG NARHA DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 Ci dessous est repr sent un exemple typique de courbe talon r alis e avec le DRG Hepcidin Prohormone ELISA Standard O 0 ng mL Standard 6 1000 ng mL 7 VALEURS ATTENDUES Il est fortement recommand a chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales Dans une tude r alis e avec des adultes normaux et sains a l aide du kit DRG Hepcidin Prohormone ELISA les valeurs suivantes sont observ es m diane dE Population Valid N 5 95 Pourcentage valeur moyenne Median hommes et femmes 80 58 9 158 1 104 5 8 CARACTERISTIQUES DU TEST 8 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre 0 1
44. la determinaci n cuantitativa del Prohormona Hepcidina en suero S lo para uso en investigaci n 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG Hepcidin Prohormone ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio de uni n competitiva Las placas multipocillo est n recubiertas de anticuerpo policlonal de conejo dirigido contra el anticuerpo anti Hepcidina 28 47 aa Una cantidad desconocida de Prohepcidina presente en la muestra y una cantidad fija de Hepcidina conjugada con biotina compiten por los sitios de uni n de los anticuerpos Prohepcidina inmovilizados en los pocillos Despu s de la incubaci n el conjugado no unido se lava La cantidad de conjugado unido es inversamente proporcional a la concentraci n de Prohormona Hepcidina en la muestra Despu s de la adici n de la soluci n sustrato la intensidad de color desarrollado es inversamente proporcional a la concentraci n de Prohormona Hepcidina en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES e S lo para uso en investigaci n e Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material e Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV III HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci
45. le la concentration de pro hepcidine contenue dans l chantillon 3 PRECAUTIONS D UTILISATION e Seulement dans le cadre de recherches e Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets e Tous les r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH IIl le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution e Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H2SQ Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau e Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons e Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s e Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats e L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits risque biologique e Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage e Tous les volumes ind
46. n como potencialmente biopeligrosos e Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel e Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas e No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados e Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos e El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit e Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados e No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes e Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n n
47. ncuber au minimum 10 minutes M langer le contr le plusieurs fois avant utilisation Remarque Le contr le reconstitut est stable 6 jours a 2 8 C Pour un stockage prolong congeler 20 Wash Solution Diluer 30 mL de solution de lavage concentr e avec 1170 mL d eau d sionis e pour un volume final de 1200 mL Remarque La solution de lavage dilu e est stable deux semaines temp rature ambiante 4 4 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 5 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur 5 ECHANTILLON S rum peuvent tre utilis s pour ce test Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette 02 1388 001
48. nstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 10 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 10 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entstanden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 11 REFERENZEN Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 14 u D WAG NAAR DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG Hepcidin Prohormone ELISA contiene materiale per la determinazione quanti
49. nzen Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen 9 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des Hepcidin Prohormon Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 9 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt in diesem Test nicht auf 10 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 10 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebenen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 10 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 10 1 genannten Voraussetzungen berei
50. o Hepcidin fragment conjugated to biotin contains lt 0 02 methylisothiazolone and lt 0 02 bromonitrodioxane as preservative 6 Enzyme Complex 1 vial 14mL ready to use contains horseradish Peroxidase contains lt 0 02 methylisothiazolone and lt 0 02 bromonitrodioxane as preservative 7 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 8 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5M H2SO4 Avoid contact with the stop solution lt may cause skin irritations and burns 9 Wash Solution 1 vial 30 mL 40X concentrated see Preparation of Reagents 4 1 1 Equipment and material required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Aqua dest 4 2 Storage and stability of the Kit When stored at 2 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 8 C Microtiter wells must be stored at 2 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for two months if stored as described above 4 3 Preparation of Reagents Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Standards Reconstitute the lyophilized contents of the standard vial with 1
51. of colour developed is reverse proportional to the concentration of Hepcidin Prohormone in the patient sample 3 PRECAUTIONS e This kit is for in vitro diagnostic use only This assay is intended for research use only e For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets e All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H SO It may cause skin irritation and burns Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results e Handling should be in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation e Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels e All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers e Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised
52. ontr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter la DRG 10 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du test sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 10 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 10 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de facon n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 10 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides
53. plo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Assay Buffer mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Assay Buffer mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 23 6 2 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de est ndares om PWN 11 12 13 14 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 100 pL de Assay Buffer a cada pocillo Dispensar 50 uL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 100 pL de
54. pungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchfuhrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Flaschchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist 6 2 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen 100 uL Assay Buffer in jedes Well geben Je 50 uL Standards Control und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 100 uL Biotin Conjugate in jedes Well geben Fur 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 120 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Platte nicht abdecken 7 Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells Smal mit verd nnter Waschl sung waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugfahigem Papier entfernen Achtung Die Sensitivitat und Prazision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 8 100 uL Enzyme Complex in jedes Well geben 9 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 10 Den Inhalt der Wells kraftig aussch tteln Wells Smal mit
55. r fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge und sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 13 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Die Daten zu 8 5 2 Wiederfindung 8 5 3 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 GRENZEN DES TESTS 9 1 Interfere
56. r each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 4 6 2 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 Assay Procedure Each run must include a standard curve om PWN 11 12 13 14 Bel Secure the desired number of Microtiter wells in the holder Dispense 100 pl of Assay Buffer into appropriate wells Dispense 50 pl of each Standard Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 100 ul Biotin Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 120 minutes at room temperature without covering the plate Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 5 times with diluted Wash Solution 400 ul per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 ul of Enzyme Complex to each well Incubate for
57. re evitato perch contiene 0 5 M H SO L acido solforico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni e Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose e Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici e Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi e L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive e Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit e Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato e Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati consigliabile di non utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente e componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive e regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditt
58. rta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio Pipettare 100 uL Enzyme Complex in ogni pozzetto Incubare per 60 minuti a temperatura ambiente Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 5 volte con soluzione di lavaggio diluita 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Aggiungere 100 uL della Substrate Solution ad ogni pozzetto 12 13 14 Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 100 ut della Stop Solution ad ogni pozzetto Determinare la densit ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution Rilevamento dei risultati Determinare i valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni Costruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica OD di ogni standard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle OD si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazioni sull asse orizzontale X Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard Metodo automatico risultati in IFU sono stati calcolati automaticamente usando un fitting avvicinamento con il 4 PL 4 Parameter Logistics Altri funzioni
59. ry ng mL 273 8 91 8 94 3 116 8 89 2 98 7 94 5 105 7 8 4 3 Linearity The linearity of the assay was evaluated by diluting of the samples serum having different Pro Hepcidin levels with Assay Buffer The Pro Hepcidin content in the diluted samples was assayed by the ELISA Three dilutions were performed for each sample and the percentage recovery rates were calculated Endogenous Pro Hepcidin Average Recovery Range of Recovery ng mL 501 6 306 1082 157 5 107 9 106 3 107 2 179 4 104 6 92 3 111 6 9 LIMITATIONS OF USE 9 1 Interfering Substances Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results 9 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of Hepcidin Prohormone in a sample 9 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 7 u D WAG NARA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 10 LEGAL ASPECTS 10 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precis
60. s control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 10 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 10 1 Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 10 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del
61. spu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette 02 1388 001 permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n 2500 x g 10 min a 4 C Para otros tipos de materiales es necesario un protocolo especial de extracci n 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 24 horas a 2 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo Tener en cuenta Las muestras de pacientes que han estado congeladas durante per odos m s largos o que han sido descongeladas varias veces muestran concentraciones m s elevadas de Hepcidina que las muestras frescas que s lo han sido congeladas una vez 5 3 Diluci n de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Assay Buffer y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejem
62. ss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 12 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG Hepcidin Prohormone ELISA gezeigt Standard Optische Dichte 450nm Standard O 0 ng mL Standard 1 10 ng mLI Standard 2 50 ng mL 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsenen untersucht Dabei ergaben sich mit dem DRG Hepcidin Prohormone ELISA folgende Werte Population NI 5 95 Perzentile Mittelwert Median M nner und Frauen 80 58 9 158 1 104 5 8 ASSAY CHARACTERISTIKA 8 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 0 1000 ng mL 8 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivitat Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 8 3 Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert minus der zweifachen Standardabweichung des Standards O n 21 betr gt lt 3 95 ng mL 8 4 Pr zision Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 8 5 Testgenauigkeit 8 5 1 Qualitats Kontrolle Es wird empfohlen die Kontrollproben gem den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berp
63. t 0 02 bromonitrodioxane come conservante 7 Substrate Solution Soluzione di substrato 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 8 Stop Solution Soluzione d arresto 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5M H2504 Evitare il contatto con la soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni 9 Wash Solution Soluzione di lavaggio 1 flacone 30 mL concentrata 40X vedi preparazione dei reagenti 4 1 1 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micropipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua distillata 4 2 Magazzinaggio e stabilit del kit A 2 8 C i reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente Test kits aperti rimangono attivi per due mesi se magazzinati alle condizioni sopra descritte 4 3 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente Standards Ricostituire il contenuto liofillizzato dei flaconi con gli standard con 1 0 mL acqua distillata Nota Gli standard ricostituiti sono stabili per 6
64. tativa di proormone epcidina in siero Solo a scopo di ricerca 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test Hepcidin Prohormone ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul principio del legame competitivo micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo policlonale diretto contro un unico sito antigenico della molecola proormone epcidina 28 47 aa Una quantita ignota di pro epcidina presente nel campione e una quantita fissa di epcidina 28 47 coniugata alla biotina competono per i siti di legame dell anticorpo pro epcidina immobilizzato sui pozzetti Dopo l incubazione il coniugato non legato lavato via La quantit della coniugata legata inversamente proporzionale alla concentrazione di proormone epcidina nel campione Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato inversamente proporzionale alla concentrazione di proormone epcidina nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI e Solo a scopo di ricerca e Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza e Tutti i componenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HosAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento e Il contatto con la Stop Solution dovrebbe esse
65. to test 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette 02 1388 001 far coagulare e separare il siero centrifugando 2500 x g 10 min a 4 C Per materiali diversi di campioni un protocollo speciale di estrazione puo essere necessario 5 2 Magazzinaggio dei campioni campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 24 ore a 2 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 C prima dell analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso Nota bene Campioni congelati per un lungo periodo o ripetutamente scongelati portano a concentrazioni di epcidina piu alti rispetto a campioni freschi congelati solo una volta 5 3 Diluizione dei campioni Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con Assay Buffer e nuovamente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto Esempio a diluizione 1 10 10 uL siero 90 uL Assay Buffer agitare bene b diluizione 1 100 10 uL della diluizione a 90 uL Assay Buffer agitare bene 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo
66. ture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at 2500 x g for 10 min at 4 C Aliquots should be stored at 20 C For other sample material a special extraction protocol may be necessary 5 2 Specimen Storage Specimens should be capped and may be stored for up to 24 hours at 2 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing Note Samples from patients which were frozen for a longer period or which were repeatedly thawed show higher Pro Hepcidin concentrations than freshly collected samples which were frozen only once 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Assay Buffer and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a Dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Assay Buffer mix thoroughly b Dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Assay Buffer mix thoroughly 6 TEST PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips fo
67. usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione In seguito riportato un esempio di una curva standard con DRG Hepcidin Prohormone ELISA Standard 1 10 ng mLI Standard 2 50 ng mL Standard 3 100 ng mL Standard 4 250 ng mL Standard 5 500 ng mL Standard 6 1000 ng mL Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 18 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA ElA 4644 7 VALORI NORMALI E consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali In uno studio condotto su persone apparentemente sane usando il test DRG Hepcidin Prohormone ELISA i seguenti valori sono stati ottenuti _uomini e donne 80 589 1581 1045 922 8 CARATTERISTICHE DEL TEST 8 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra O 1000 ng mL 8 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 8 3 Sensitivita analitica La sensitivit analitica stata calcolata dai valori medi meno due deviazioni standard di 21 repliche dello Standard 0 ed erano lt 3 95 ng mL 8 4 Precisione Per dettagli piu pre
68. vent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG Vers 13 0 Effective 01 2007 vk 31 u D TAE AAA DRG Hepcidin Prohormone ELISA EIA 4644 8 5 2 Recouvrement Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 8 5 3 Lin arit Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 LIMITES D UTILISATION 9 1 Substances parasites Toute utilisation impropre des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats 9 2 Drogues parasites Jusqu a pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de pro hepcidine dans un chantillon 9 3 Effet de surdosage Aucun effet de surdose n a t observ avec ce test 10 ASPECTS LEGAUX 10 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de c

Hepcidin Prohormone ELISA 研究用

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