ATB® BLSE
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1. 1 16 2 SCAZ Ceftazidime Sulbactam i DER oase ol on Len ooe oe Le o e e ee reer e e e e e CONTROLE QUALITE Klebsiella pneumoniae Test positif Test positif S S S R ATCC 700603 CAZ C CTT oo ooo l a Escherichia coli r P ATCC 25922 Test n gatif Test n gatif TABLE DES SYMBOLES p BIBLIOGRAPHIE p l ul 69280 Marcy l Etoile France bioM rieux sa T l 33 0 4 78 87 20 00 2D au capital de 11 879 045 Fax 33 0 4 78 87 20 90 S 673 620 399 RCS LYON http www biomerieux com Imprim en France BIOM RIEUX Le logo est une marque d pos e et prot g e qui est la propri t exclusive de bioM rieux sa ou de l une de ses filiales2. parer une suspension bact rienne d opacit quivalente l talon 0 5 de McFarland Comparer au t moin d opacit du kit McFarland Standard ou utiliser le Densitom tre ATB ou le DENSIMAT se reporter au manuel d utilisation Fran ais 1 ATB BLSE Deux m thodes culture en bouillon jusqu obtention de l opacit indiqu e mise en suspension de 1 ou plusieurs colonies utiliser pr f rentiellement des souches fra chement cultiv es dans une ampoule d API Suspension Medium ou d API NaCl 0 85 Medium ouvrir l ampoule comme indiqu au paragraphe Pr cautions d utilisation de la notice du produit Cette suspension doit tre utilis e extemporan ment NOTE il est recommand de contr ler la puret de l inoculum et de r isoler dans le cas de cultures mixtes e Transf rer 10 ul de cette suspension dans ATB Medium l aide d une oese calibr e ou d une pipette Inoculation de la galerie e Inoculation MANUELLE Homog n iser ATB Medium avec la Pipette Electronique ATB en vitant la formation de bulles Inoculer la galerie en distribuant 135 ul d ATB Medium par cupule avec la Pipette Electronique ATB environ 2 x 105 germes ml ou 3 x 104 germes cupule e Inoculation AUTOMATIQUE Se reporter au manuel d utilisation de l inoculateur ATB e Mettre un couvercle sur la galerie e Incuber 18 24 heures 36 2 C en a robiose LECTURE ET INTERPRETATION L interpr tation d
3. rifier la standardisation de la m thode suivie des contr les de qualit p riodiques avec les souches tests indiqu es pour cette galerie doivent tre r alis s voir tableau Contr le de Qualit de cette notice Il est de la responsabilit de l utilisateur de s assurer que le contr le de qualit est mis en oeuvre conform ment la l gislation locale en vigueur LIMITES DU TEST e Un temps d attente entre les diverses tapes de la manipulation de la pr paration de linoculum l incubation de la galerie peut affecter les r sultats e Seules des cultures pures contenant un seul type de microorganisme doivent tre utilis es Des cultures mixtes ou contamin es peuvent affecter les r sultats e Chez certains genres d ent robact ries les BLSE sont parfois exprim es en association avec une hyperproduction de c phalosporinase par exemple Enterobacter le r sultat obtenu dans un tel cas entre dans la cat gorie Test non informatif NI d crit pr c demment e Chez de rares souches les BLSE peuvent tre exprim es tr s bas niveau notamment Proteus et apparent s Dans ce cas on observe une absence de croissance dans toutes les cupules Aztr onam CMI lt 0 5 mg l et Aztr onam Sulbactam CMI lt 0 06 mg l et dans toutes les cupules Ceftazidime CMI lt 0 5 mg l et Ceftazidime Sulbactam CMI lt 0 06 mg l RESULTATS ATTENDUS Les profils de r sistance des tests antibiotiques variant en fonc
4. Les tests SCTX1 et SCTX2 permettent de mesurer le niveau de restauration de l activit du C fotaxime CTX en pr sence de Sulbactam S chez les ent robact ries productrices de BLSE sans pr juger du succ s ou de l chec th rapeutique en cas d utilisation de ces mol cules en l association Pour linterpr tation des r sultats 4 cas de figure peuvent se pr senter SCTX1 Sensible et SCTX2 Sensible restauration d activit compl te SCTX1 R sistant et SCTX2 Sensible restauration d activit partielle SCTX1 R sistant et SCTX2 R sistant restauration d activit incompl te ou absence de restauration SCTX1 Sensible et SCTX2 R sistant r sultat non interpr table Fran ais 2 ATB BLSE NOTES e Avant d effectuer la lecture automatique il est conseill d essuyer les ventuelles gouttelettes sur la partie centrale de la galerie afin de permettre la reconnaissance du code de la galerie par le lecteur e L absence de croissance dans une ou deux cupule s t moin invalide l antibiogramme qui doit tre recommenc e Un r sultat c C est un non sens N r p ter le test avec une nouvelle galerie e En lecture visuelle une croissance limit e la p riph rie de la cupule doit tre lue n gative e Une galerie dont les cupules sont partiellement dess ch es suite l incubation peut induire de faux r sultats L antibiogramme doit tre recommenc CONTROLE DE QUALITE Pour v
5. REF 14 109 ATB BLSE 08939C FR 2003 02 IVD Mise en vidence des R lactamases spectre tendu chez les ent robact ries INTRODUCTION ET OBJET DU TEST La galerie ATB BLSE permet de mettre en vidence la pr sence de R lactamases spectre tendu BLSE chez les ent robact ries Elle est utilis e en compl ment de lantibiogramme des ent robact ries en cas de suspicion de BLSE PRINCIPE La galerie ATB BLSE comporte 16 paires de cupules La premi re paire sans antibiotique sert de t moin de croissance Les 15 suivantes contiennent des antibiotiques plusieurs concentrations Le test consiste en la mise en vidence d une synergie entre Ceftazidime ou Aztr onam et un inhibiteur de R lactamases Sulbactam La synergie est montr e par un abaissement des CMI en pr sence de l inhibiteur La bact rie tester est mise en suspension puis transf r e dans le milieu de culture et inocul e dans la galerie Apr s incubation la lecture de la croissance se fait soit visuellement soit avec l automate ATB ou mini API PRESENTATION Coffret pour 10 tests 10 galeries ATB BLSE en emballage individuel avec d shydratant 10 couvercles d incubation 1 notice COMPOSITION DE LA GALERIE La composition de la galerie ATB BLSE est mentionn e dans le Tableau d interpr tation de cette notice REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS R actifs et instruments API Suspension Me
6. at tait ind termin et dans 1 des cas faussement n gatif Taux de concordance Le taux de concordance des tests CTT et IMI obtenu partir de 100 souches est de 96 Aucune erreur majeure ou tr s majeure n a t mise en vidence ELIMINATION DES DECHETS Les r actifs non utilis s peuvent tre limin s comme d chets non dangereux Eliminer les r actifs utilis s ainsi que les mat riels usage unique contamin s en suivant les proc dures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectieux Il incombe chaque laboratoire de g rer les d chets et les effluents qu il produit selon leur nature et leur dangerosit et d en assurer ou faire assurer le traitement et l limination selon les r glementations applicables Fran ais 3 ATB BLSE 089390 FR 2003 02 TABLEAU D INTERPRETATION Den em Dane PER 0 ne Sulbactam DETTE RE ae Le fes p Aztr onam 4 A SATM Aztr onam S lbactar TM 4 5 ATM SATM Aztr ne SECRET Sulbactam N Ceftazidime noe Ceftazidime 32 4 4 CMI ATM 8 mg l CMI SATM 0 5 mg l donc BLSE la CMI passe de 8 0 5 4 dilutions 0 12 0 25 0 5 0 12 0 25 CMI SCAZ 1 mg l donc 0 5 BLSE la CMI passe 4 32 0 12 de 32 1 5 dilutions A Ceftazidime Ceftazidime a Ceftazidime oaz SCAZ Ceftazidime S ibact r ES Ceftazidime D CMI CAZ 32 mg l
7. dium R f 70 700 ou 70 640 ou 20 150 ou API NaCl 0 85 Medium R f 20 070 ou 20 040 ou 20 230 en fonction de la galerie d identification utilis e ATB Medium R f 14 960 ou 14 920 McFarland Standard R f 70 900 ou DENSIMAT R f 99 234 ou Densitom tre ATB Pipette Electronique ATB consulter bioM rieux ou Inoculateur ATB et Embouts R f 15 710 Automate ATB ou mini API avec logiciel consulter bioM rieux Mat riel Oeses calibr es de 10 ul ou pipette Prot ge ampoules Portoir pour ampoules Equipement g n ral de laboratoire de bact riologie bioM rieux sa PRECAUTIONS D UTILISATION e Pour diagnostic in vitro uniquement e Pour usage professionnel uniquement e Les pr l vements cultures bact riennes et produits ensemenc s doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux et doivent tre manipul s de fa on appropri e Les techniques aseptiques et les pr cautions usuelles de manipulation pour le groupe bact rien tudi doivent tre respect es tout au long de la manipulation se r f rer NCCLS M29 A Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood Body Fluids and Tissue Approved Guideline December 1997 Pour informations compl mentaires sur les pr cautions de manipulation se r f rer Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories HHS Publication No CDC 93 8395 3rd Edi
8. es tests de mise en vidence d une R lactamase spectre tendu est r aliser par l utilisateur par comparaison des CMI de l antibiotique seul et en pr sence de l inhibiteur D termination de la C M I e Aztr onam ATM e Ceftazidime CAZ e Aztr onam Sulbactam SATM e Ceftazidime Sulbactam SCAZ Pour les concentrations voir Tableau d interpr tation La CMI est d termin e par la plus basse concentration sans culture visible Tests de mise en vidence d une BLSE e Inhibiteur Sulbactam e Antibiotiques Aztr onam ATM et Ceftazidime CAZ La mise en vidence d une BLSE repose sur 2 anti biotiques ou tests pour obtenir une meilleure d tection Test positif P Un test est dit positif lorsque l on observe un cart de 4 dilutions au moins entre l antibiotique test seul et l antibiotique en pr sence d inhibiteur cet cart de CMI peut tre observ sur le couple Aztr onam Aztr onam Sulbactam et ou Ceftazidime Ceftazidime Sulbactam bioM rieux sa 08939C FR 2003 02 Test n gatif N Un test est dit n gatif dans les 2 cas suivants cart inf rieur ou gal 3 dilutions entre l antibiotique test seul Aztr onam ou Ceftazidime et l antibiotique en pr sence d inhibiteur Sulbactam la CMI de la Ceftazidime ou de l Aztr onam est lt 0 5 mg l Test non informatif NI Un test est dit non informatif dans le cas suivant CMI Aztr onam gt 8 mg l e
9. t CMI Aztr onam Sulbactam gt 1 mg l ou CMI Ceftazidime gt 32 mg l et CMI Ceftazidime Sulbactam gt 4 mg l La pr sence de BLSE R lactamase spectre tendu est tablie sur la base d au moins un test positif Soient les cas P P ou P N ou P NI En pratique gr ce au d calage des concentrations une BLSE est sign e par une croissance dans la cupule de gauche et une absence de croissance dans la cupule de droite voir Tableau d interpr tation pour exemple L absence de BLSE est tablie sur la base de 2 tests n gatifs Soit le cas N N Le r sultat ind termin on ne peut pas exclure une BLSE est tabli dans le cas d une association entre 2 tests non informatifs ou d un test non informatif et d un test n gatif Soient les cas NI NI ou N NI Autres tests e C fot tan CTT e Imip n me IMI e C fotaxime Sulbactam SCTX1 SCTX2 Rechercher dans chaque cupule la pr sence d un trouble par lecture visuelle ou automatique par lautomate ATB ou mini API se reporter aux manuels d utilisation Pour les antibiotiques test s deux concentrations CTT IMI Aspect des cupules R sultats La souche est C C C C clair clair S SENSIBLE trouble clair INTERMEDIAIRE trouble trouble R RESISTANTE Pour les antibiotiques test s une seule concentration SCTX1 SCTX2 Aspect de la cupule R sultat La souche est clair S SENSIBLE trouble R RESISTANTE
10. tion May 1993 ou la r glementation en vigueur dans le pays d utilisation Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption Avant utilisation s assurer de l int grit de l emballage des galeries Ne pas utiliser de galeries ayant subi une alt ration phy sique cupule d form e sachet d shydratant ouvert Les performances pr sent es sont obtenues avec la m thodologie indiqu e dans cette notice Toute d viation de m thodologie peut alt rer les r sultats L interpr tation et la validation des r sultats de l antibiogramme doit tre faite en tenant compte du contexte clinique de l origine du pr l vement de l identification de la souche ventuellement des r sultats de tests compl mentaires et des recommandations locales en vigueur CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries se conservent 2 8 C l obscurit jusqu la date limite d utilisation indiqu e sur le coffret ECHANTILLONS PRELEVEMENT ET PREPARATION La galerie ATB BLSE ne doit pas tre utilis e directement partir des pr l vements d origine clinique ou autres Les microorganismes tester doivent dans un premier temps tre isol s sur un milieu de culture adapt selon les techniques usuelles de bact riologie MODE OPERATOIRE Pr paration de la galerie e Sortir la galerie de son emballage e Noter l identifiant de la bact rie tester sur la languette lat rale de la galerie Pr paration de l inoculum e Pr
11. tion de la zone g ographique les r sultats attendus sont donc directement d pendants de l cologie microbienne locale esp ces m canismes de r sistance bioM rieux sa 08939C FR 2003 02 PERFORMANCES Les performances de la galerie ATB BLSE ont t d termin es en utilisant deux souchiers comprenant les genres bact riens ou esp ces suivants Souchier 1 Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Escherichia coli Klebsiella oxytoca Klebsiella ozanae Klebsiella pneumoniae Proteus mirabillis Serratia marcescens Souchier 2 Escherichia Cedecea Enterobacter Hafnia Klebsiella Citrobacter Proteus Morganella Providencia Serratia Yersinia Le premier souchier a permis d tablir le taux de d tection par la galerie ATB BLSE des souches productrices de R lactamase spectre tendu Le second souchier a permis d tablir le taux de concordance des cat gorisations pour le C fot tan CTT et l Imip n me IMI Les cat gorisations de r f rence ont t d termin es partir des r sultats de CMI tablies avec la m thode de dilution en g lose et compar es celles obtenues avec ces tests Il y a concordance lorsque les cat gorisations cliniques des deux m thodes sont identiques D tection des BLSE L tude portant sur 108 souches d ent robact ries a montr que la galerie ATB BLSE d tecte correctement 88 d entre elles Dans 11 des cas le r sult
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