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C. difficile

1. e 1 seul chantillon a donn un r sultat non valide avec l instrument REACTIONS CROISEES Les r action crois e ont t effectu es avec des chantillons de selles positifs et n gatifs inocul s avec des organismes bact riens ou fongiques une concentration finale de 1 2 x 10 ou virale allant de 1 x 10 TCIDso mL Aucun des organismes suivants pr sents dans les selles n a r agi avec le test illumigene C difficile Aeromonas hydrophila Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Candida albicans Citrobacter freundii Clostridium sordellii Clostridium perfringens Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Escherichia coli Escherichia coli 0157 H7 Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Listeria monocytogenes Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas fluorescens Salmonella Groups B E Serratia liquefaciens Serratia marcescens Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Adenovirus Types 40 et 41 Coxsackievirus Echovirus Rotavirus TESTS POUR LES SUBSTANCES INTERFERENTES Les substances suivantes pr sentes dans les selles humaines aux concentrations indiqu es n ont provoqu aucune interf rence s
2. 4 Remueva la tapa de la punta con gotero del Ensamble y oprimalo para obtener entre cinco y diez gotas de muestra que se deben recoger en un Tubo limpio de Extracci n illumigene 5 Repita los pasos de preparaci n de la muestra con todas las muestras que van a ser procesadas 6 Caliente los Tubos de Extracci n que contienen la muestra mezclada en un ba o seco con el bloque calefactor a 95 C durante 10 2 minutos Retire los tubos del bafio seco y m zclelos en un agitador vorticial por 10 segundos Una vez extraidas las muestras pueden ser retenidas a 2 8 C por 4 horas O pueden ser congeladas y almacenadas a lt 20 C por 1 dia antes de ser a adidas al Tamp n de Reacci n Muestras extra das pueden ser congeladas y descongeladas una vez PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA Este ensayo debe ser realizado siguiendo las regulaciones de acreditaci n locales estatales o federales NOTA Se pueden procesar un m ximo de 10 muestras por cada illumipro 10 1 2 3 Transfiera 50 uL de la muestra extra da a un tubo con Tamp n de Reacci n de illumigene adecuadamente marcado Mezcle en un agitador vorticial por 10 segundos el tubo con Tamp n de Reacci n que contiene la muestra extra da Repita los pasos 1 y 2 con todas las muestras que van a ser analizadas antes de proseguir Por cada muestra saque un Dispositivo para la Prueba illumigene C difficile de la bolsa protectora en la que vienen Abra cuidadosamente el dispositivo su
3. Zusammen mit drei weiteren Genen bilden sie einen 19 6 kb Pathogenit tslokus mit dem Namen PaLoc REAGENZIEN ENTHALTENE MATERIALIEN Die H chstzahl der mit diesem Testkit durchf hrbaren Tests ist auf der Aussenseite der Packung angegeben 1 illumigene C difficile Probenvorbereitungsapparat Probennahmeeinheit bestehend aus Probenvorbereitungskammer Tropferspitze Verschlusskappe und Probenverd nnungspuffer mit phosphatgepufferter Kochsalzl sung und Formalin behandelter Staphylococcus aureus mit Natriumazid 0 09 als Konservierungsmittel 2 illumigene Reaktionspuffer Tris gepufferte L sung mit Natriumazid 0 09 als Konservierungsmittel 3 illumigene C difficile Testger t Zwei separate Kammern die Trockenreagenz Lyosph ren aus DNA Polymerase Desoxyribonukleosid Triphosphate dNTPs und entweder f r C difficile spezifischem Primer TEST Kammer oder S aureus Primer KONTROLL Kammer enthalten 4 Probennahmebirstchen 5 illumigene Probenextraktionsr hrchen SEPARAT BESTELLBARE MATERIALIEN illumigene Kit zur externen Kontrolle Bestell Nr 279920 BEN TIGTE ABER NICHT ENTHALTENE MATERIALIEN 1 Einmal Handschuhe aus Latex puderfrei 2 DNAse RNAse freie aerosolresistente Pipettenspitzen 3 Extraktionskontrolle bekannte positive klinische Probe oder eine negative Probe die mit toxigenen C difficile beimpft wurde NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE GER TSCHAFTEN Trockenbad mit 12 mm Heizblock 95 C Kapazi
4. nico Ale 25 30 83 29 30 97 28 30 93 82 90 91 Total 99 104 95 2 89 2 97 9 546 573 95 3 93 2 96 7 30 30 100 30 30 100 30 30 100 90 90 100 Lugar 1 ni 80 0 3765 904 58 60 97 6 88 6 99 1 Positivo 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 100 Lugar 2 12 12 100 75 7 100 62 67 92 5 83 7 96 8 z 1 muestra gener un resultado inv lido por instrumento Lugar 3 20 20 100 83 9 100 87 92 94 6 87 9 97 7 Lugar 4 8 8 100 67 6 100 36 39 92 3 79 7 97 3 ESTUDIOS DE REACTIVIDAD CRUZADA Lugar 5 55 59 93 2 83 8 97 3 303 315 96 2 93 5 97 8 Se realizaron estudios de reactividad cruzada con muestras positivas y negativas de Tabla 3 ndice de inv lidos por localidad Evaluaci n de las Localidades Cl nicas Luger Total de Inv lidos por Inv lidos por TARA en Inv lidos Ensayo Instrumentos indice de Inv lidos Lugar 1 3 3 0 3 68 4 4 Lugar 2 1 0 1 1 80 1 3 Lugar 3 8 1 7 8 120 6 7 Lugar 4 1 1 0 1 48 2 1 Lugar 5 7 6 1 7 381 1 8 Total 20 11 697 1 6 9 697 1 3 20 697 2 9 1 muestra permaneci inv lida luego de repetir la prueba con la muestra original Tabla 4 Resultados por edad del paciente Muestras Positivas Muestras Negativas De S illumigene I illumigene I aciente Cultivo Sensitividad Cultivo Especificidad 7 bacteriano PAS bacteriano ac
5. rie N mero de serie Seriennummer Recycle do not dispose of as general waste Riciclare non eliminare come rifiuto generico Recycler ne pas jeter dans une poubelle Recicle no deseche como basura general Recycling Produkt nicht ber den Hausm ll entsorgen Test Device Dispositivo test Dispositif de test Dispositivo de Prueba Testger t Extraction tube Provette per l estrazione Tubes d Extraction Tubo de Extraci n R hrchen zur Probenextraktion Date of manufacture Data di fabbricazione Date de fabrication Fecha de fabricaci n Herstellungsdatum For IVD Performance Evaluation Only Soltanto per valutazione delle prestazioni R actifs IVD reserv s l valuation des performances S lo para evaluaci n del funcionamiento Nur zur IVD Leistungsbewertung TASER RADIATION Avoid Exposure lo Beam 7 RADIAZIONE LASER Evitare l espos ne al raggio RAYONNEMENT LASER Eviter toute exposition au faisceau Radiaci n Laser Evite Exposici n a los Rayos LASERSTRAHLUNG Direkten Kontakt mit dem Strahl vermeiden HOT SURFACE Keep hands Away from Hot Surfaces 7 Superficie calda tenere le mani lontane dalle superfici calde SURFACES CHAUDES Ne pas toucher les surfaces chaudes Superficie Caliente Mantenga las manos alejadas de la superficie caliente Heike Oberfl che Kontakt mit hei en Oberfl chen vermeiden PG ES LA CAUTION Laser
6. 2007858 IX XXIII A B 32 CFU test 8864 x A IB 64 CFU test ASSAY REAKTIVIT T Die folgenden C difficile Bestandskulturen verschiedener Quellen ergaben beim Testen mit illumigene C difficile positive Reaktionen bei 64 CFU test Typ 0 St mme 10463 2004111 2004205 2005070 2005257 2008029 2008162 2008341 2008351 2009066 2009099 B1 G1 J7 K12 Y1 Typ Ill 2004052 2004118 2007431 BI17 BI8 Typ V 2005325 2006240 2008188 2009018 2009065 BK6 Typ VIII 43598 2008016 CF1 Typ X 8864 Typ XII 2007435 Typ IX XXIII 2007858 Unbekannte Typs 2009132 2009155 2009277 REPRODUZIERBARKEIT F r die Durchf hrung von Pr zisionsstudien wurden codierte Profile von 10 Proben an drei unabh ngige Labors geliefert Die Proben waren innerhalb der einzelnen Profile sortiert um so ihre Identit t zu verschleiern Die Profile umfassten k nstlich hergestellte Proben an der Assay Nachweisgrenze n 3 sowie gerade eben unterhalb der Nachweisgrenze z B hoch negative Proben n 3 Au erdem umfassten die Profile uncharakterisierte positive n 2 und negative n 2 Proben Die Testdurchf hrung erfolgte an jedem Standort f nf Tage lang Schwankungen von Assay zu Assay durch verschiedene Benutzer pro Tag Schwankungen innerhalb eines Assays Drei illumigene C difficile Kitchargennummern wurden f r die Studie ben tzt Die Testergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgef hrt Virenkonzentrationen bei einem Minimum vo
7. 3 79 7 97 3 Site 5 55 59 93 2 83 8 97 3 303 315 96 2 93 5 97 8 Table 3 Taux de r sultats non valides par site Evaluation du Site Clinique Site Total non Tests non Echec de Taux de non valides valides Pinstrument valides Site 1 3 3 0 3 68 4 4 Site 2 1 0 1 1 80 1 3 Site 3 8 1 7 8 120 6 7 Site 4 1 1 0 1 48 2 1 Site 5 ih 6 1 7 381 1 8 Total 20 11 697 1 6 9 697 1 3 20 697 2 9 1 seul chantillon est observ non valide apr s r p tition du test a partir de la selle originale chantillons justes en dessous de la limite de positivit a savoir chantillon n gatif lev n 3 Les panels comprenaient galement des positifs n 2 et n gatifs n 2 non caract ris s Les tests ont t effectu s par des op rateurs diff rents sur chaque site le m me jour variabilit intra dosage pendant cing jours variabilit inter test Trois lots de illumigene C difficile ont t utilis s dans cette tude Les r sultats sont donn s dans la table ci dessous Site 1 Site 2 Site 3 Total Type Pourcentage de Pourcentage de Pourcentage de Pourcentage de d chantillon concordance concordance concordance concordance N gatif 20 20 100 20 20 100 19 19 100 59 59 100 N gatif lev 25 30 83 29 30 97 28 30 93 82 90 91 Positif faible 30 30 100 30 30 100 30 30 100 90 90 100 Positif 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 100
8. 697 campioni di pazienti qualificati campioni sono stati raccolti da 274 39 3 uomini e 419 60 1 donne In 4 0 6 casi dei pazienti il sesso non era noto gruppi di et dei pazienti variavano da 2 anni a 96 anni Non sono state osservate differenze nelle prestazioni del test in base all et o al sesso dei pazienti Le tabelle 2 e 4 mostrano le prestazioni del test per sito clinico ed et del paziente la tabella 3 riassume l informazione della percentuale dei risultati non validi per sito mascherare l identit dei campioni pannelli includevano campioni artificiali prodotti al limite di rilevazione del test n 3 e appena sotto il limite del bianco cio campione alto negativo n 3 pannelli inoltre includevano campioni non caratterizzati positivi n 2 e negativi n 2 L analisi stata eseguita da differenti operatori in ciascun sito lo stesso giorno variabilit intra saggio per cinque giorni variabilit inter saggio Tre lotti di illumigene C difficile sono stati utilizzati in questo studio risultati sono presentati nella abella seguente Sito 1 Sito 2 Sito 3 Totale Tipo di Percentuale di Percentuale di Percentuale di Percentuale di Campione concordanza concordanza concordanza concordanza Negativo 20 20 100 20 20 100 19 19 100 59 59 100 Alto Negativo 25 30 83 29 30 97 28 30 93 82 90 91 Basso Positivo 30 30 100 30 30 100 30 30 100 90 90 100 Positivo 20 20 100 20 20 100 20 20
9. Citotoxigenico Citotoxigenico 22 12 a os 10 11 90 9 62 3 98 4 75 79 94 9 87 7 98 0 mart 5 5 100 56 6 100 53 56 94 6 85 4 98 2 gt 21 a os 83 87 95 4 88 8 98 2 417 437 95 4 93 0 97 0 Edad m pa 6 co desconocida 1 1 100 20 7 100 1 1 100 20 7 100 SENSIBILIDAD ANALITICA La sensitividad analitica de este ensayo para C difficile fue basado en 20 pruebas por cada mensurado y con una probabilidad declarada ej 95 donde 19 20 replicas son positivas de obtener un resultado positivo en los siguientes niveles de mensurados ID de Cepa Toxinotipo Fenotipo LoD Prueba VPI 10463 0 A B 4 CFU prueba 2007431 III NAP1 A B 32 CFU prueba CFI VIII A B 64 CFU prueba 2006240 V NAP7 A B 32 CFU prueba BI8 Il A B 64 CFU prueba 2007858 IX XXIII A B 32 CFU prueba 8864 X A B 64 CFU prueba REACTIVAD DE LA PRUEBA Los siguientes cultivos de reserva obtenidos de diferentes fuentes fueron analizados y produjeron reacciones positivas a una concentraci n de 64 CFU prueba con la Prueba illumigene C difficile Tipo 0 Cepas 10463 2004111 2004205 2005070 2005257 2008029 2008162 2008341 2008351 2009066 2009099 B1 G1 J7 K12 Y1 Tipo Ill 2004052 2004118 2007431 BI17 BI8 Tipo V 2005325 2006240 2008188 2009018 2009065 BK6 Tipo VIII 43598 2008016 CF1 Tipo X 8864 Tipo XII 2007435 Tipo IX XXIII 2007858 Tipo desconocido 2009132 2009155 2009277 R
10. POSITIVO NEGATIVO Controllo di Estrazione NON VALIDO POSITIVO NEGATIVO Controllo Positivo NON VALIDO POSITIVO Controllo A NEGATIVO Negativo NON VALIDO POZZETTO VUOTO NESSUNO CONTROLLO QUALIT 1 Ciascun dispositivo contiene un controllo interno che verifica l eventuale inibizione dell amplificazione e l efficacia dei reagenti e dell analisi dei campioni 2 Una buona pratica di laboratorio richiede l uso dei reagenti di controllo Gli utenti devono attenersi alle linee guida vigenti locali statali e nazionali per l esecuzione dell analisi dei controlli di qualit esterni 3 reagenti del controllo esterno illumigene C difficile sono forniti separatamente numero di catalogo 279920 La reattivit di ciascun nuovo lotto e ciascuna nuova spedizione di illumigene C difficile deve essere verificata alla consegna e prima dell uso Le analisi del controllo esterno devono essere eseguite quindi in accordo con le linee guida vigenti locali statali e nazionali Il test del kit illumigene C difficile non deve essere usato per l analisi del paziente se controlli esterni non producono i risultati corretti 4 Un dispositivo differente deve essere utilizzato per ciascun reagente di controllo esterno 5 NON estrarre i campioni del Controllo Positivo o Negativo 6 Un Controllo di Estrazione campione clinico noto positivo o campione negativo inoculato con C dif
11. Radiation ATTENZIONE Radiazione laser AVERTISSEMENT Rayonnement laser Precauci n Radiaci n Laser WARNUNG Laserstrahlung AS CAUTION Protect from water ATTENZIONE Proteggere dall acqua AVERTISSEMENT Prot ger de l humidit Precauci n Proteja del agua WARNUNG Vor Feuchtigkeit schitzen A CAUTION Risk of Danger ATTENZIONE Pericolo I AVERTISSEMENT Risques de danger Precauci n Peligroso WARNUNG Risikogefahr For technical assistance call Technical Support Services at 800 343 3858 between the hours of 8AM and 6PM USA Eastern Standard Time To place an order call Customer Service Department at 800 543 1980 15
12. ampie Result NEL PIEIAHON asymptomatically at very high rates Colonization at rates up to 50 and higher POSITIVE Sample contains toxigenic C difficile strain have been reported in infants and rates up to 32 in cystic fibrosis patients with the pathogen locus PaLoc 6 This assay does not identify antimicrobial susceptibility ae a 7 This test detects but does not differentiate the NAP1 Ribotype 027 strain from poe NEGATIVE No toxigenic C difficile detected other toxingenic strains of C difficile s enel No reportable result Repeat the test 8 The detection of bacterial nucleic acid is dependent on proper specimen collection pecImern using the original stool sample handling including transportation and storage and preparation dilution and INVALID Inhibitory patient specimen improper sample extraction Failure to follow instructions for collection handling and preparation preparation reagent failure instrument failure may cause incorrect results or internal control failure POSITIVE Valid Extraction Control Extractions SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS performed correctly illumigene C difficile was evaluated in 2010 by four independent clinical test sites located Extraction Failure Do not report test in the Midwestern and Southern regions of the United States and the manufacturer NEGATIVE result Repeat the extraction process for Overall performance information is shown in Table 1 Extraction all stool samples No reportable
13. bundesstaatliche nationale und lokale Richtlinien bez glich des Einsatzes externer Qualit tskontrollen 3 Die illumigene C difficile externen Kontrollen sind separat erh ltlich Bestellnummer 279920 Die Reaktivit t jeder neuen Kit Chargennummer und jeder neuen Lieferung eines illumigene C difficile Tests sollte nach Erhalt und vor Verwendung gepr ft werden Allerdings ist die Anzahl der zus tzlich durchzuf hrenden Tests mit externen Kontrollen abh ngig von den rtlichen staatlichen oder bundesstaatlichen Bestimmungen sowie zulassungsbeh rdlichen Auflagen Den illumigene C difficile Test Kit nicht verwenden wenn die Kontrolltests keine korrekten Ergebnisse erbringen 4 F r jede Kontrolle muss ein separates Ger t verwendet werden 5 Die externen positiven und negativen Kontrollen NICHT extrahieren 6 Eine Extraktionskontrolle bekannte positive klinische Probe oder eine negative Probe die mit toxigenen C difficile beimpft wurde sollte in jedem Extraktionsdurchlauf eingeplant werden Die Extraktionskontrolle sollte in der gleichen Weise wie eine Patientenprobe analysiert werden ERWARTETE WERTE Die H ufigkeit von antibiotika assoziierter Diarrhoe durch C difficile ist abh ngig von verschiedenen Faktoren einschlieRlich der Patientenpopulation Art der Institution und Epidemiologie Die berichtete Inzidenz von C difficile assoziierten Erkrankungen bei Patienten mit Verdacht einer antibiotika assoziierten Erkrankung
14. dopo ripetizione dell analisi dal campione originale Tabella 4 Risultati per et del paziente Campioni Positivi Campioni Negativi Eta del illumigene illumigene paziente coltura er 95 CI coltura Freie 95 Cl tossigenica A tossigenica S gt 2 12 anni 10 11 90 9 62 3 98 4 75 79 94 9 87 7 98 0 ee 515 100 56 6 100 53 56 94 6 85 4 98 2 gt 21 anni 83 87 95 4 88 8 98 2 417 437 95 4 93 0 97 0 Et non nota 1 1 100 20 7 100 1 1 100 20 7 100 SENSIBILITA ANALITICA La sensibilit analitica di questo test per C difficile stata determinata con 20 replicati per ciascun analita e con una probabilit fissata ad es 95 dovo 19 20 replicati erano positivi di ottenere risultati positivi ai seguenti livelli di analiti osservati nel caso non si seguano le istruzioni per la raccolta la manipolazione e la siii 7 preparazione Ceppo ID Tossinotipo Fenotipo LoD Test VPI 10463 0 A B 4 CFU test PRESTAZIONI SPECIFICHE RE l 2007431 III NAP1 A B 32 CFU test illumigene C difficile stato valutato nel 2010 da quattro laboratori clinici indipendenti situati nel Midwest e nel sud degli Stati Uniti e dal produttore L informazione globale CFI VIII A B 64 CFU test delle prestazioni mostrata in Tabella 1 2006240 V NAP7 A B 32 CFU test Tabella 1 Risultati globali delle prestazioni BIG Il RUE 64 GFU
15. laboratoire lors des tests Traiter tous les chantillons et dispositifs de test usag s comme infectieux Ne pas manger boire ou fumer dans les zones o les chantillons ou les r actifs sont manipul s 3 Porter des gants jetables lors de la manipulation des chantillons et se laver les mains soigneusement apr s la proc dure 4 Des programmes de contr le de la qualit l usage des laboratoires de diagnostic mol culaire doivent tre utilis s 5 La solution de dilution de l chantillon illumigene contient des organismes inactiv s a la formaline et qui doivent toutefois tre manipul s comme tant potentiellement infectieux 6 Le dispositif de test illumigene C difficile contient des r actifs lyophilis s La pochette de protection ne doit tre ouverte que juste avant d effectuer le test 7 Le dispositif de test illumigene C difficile comprend un m canisme de verrouillage con u pour emp cher la contamination de la zone de test avec le produit de amplification NE PAS utiliser le dispositif si son m canisme de verrouillage est endommag 8 Eliminer les dispositifs de test illumigene imm diatement apr s leur utilisation en s assurant de bien laisser le verrou en place Si le dispositif tait ouvert apr s la proc dure la zone de test pourrait tre contamin e avec le produit de amplification DUREE DE CONSERVATION ET STOCKAGE La date de p remption de la trousse est indiqu e sur l tiquette de celle c
16. locus de pathog nicit PaLoc POSITIF NEGATIF Aucun C difficile non toxinog ne d tect Patient Aucun rendu de r sultat R p ter le test partir de l chantillon de selle original Echantillon inhibiteur pr paration de l chantillon incorrecte erreur de l incubateur lecteur chec du contr le interne NON VALIDE Contr le d extraction valide Les extractions ont t effectu es correctement Echec de l extraction Ne pas rendre le r sultat de test R p ter le processus d extraction pour tous les chantillons de selle Aucun rendu de r sultat Ne pas rendre le r sultat de test R p ter le processus d extraction pour tous les chantillons de selle Echantillon inhibiteur pr paration de l chantillon incorrecte r actif non op rant erreur de l incubateur lecteur ou chec du contr le interne POSITIF NEGATIF Contr le de Pextraction NON VALIDE Contr le Positif R sultat de Contr le Positif valide Les r actifs sont actifs au moment de leur utilisation l illumipro 10 fonctionne correctement R sultat de Contr le incorrect R p ter le test de contr le comme premi re tape pour d terminer la cause de l echec En cas d chec r p t contacter les services techniques de Meridian ou votre distributeur local Aucun rendu de r sultat R p ter l enti ret du test en utilisant les selles originales Pr paration de l chantillon i
17. los 9 LIS DER gt DE y reactivos falla del instrumento o falla de los controles 8 La detecci n del cido nucleico bacteriano depende de la recolecci n apropiada de internos la muestra el manejo incluyendo transporte y almacenaje y la preparaci n Control de Extracci n Valido Extracci n ejecutada diluci n y extracci n El no seguir instrucciones para la recolecci n de muestra POSITIVO Cortectament manejo y preparaci n puede causar resultados incorrectos Falla en la Extracci n No reporte los resultados A NEGATIVO Repita el paso de extracci n para todas las CARACTER STICAS DE FUNCIONAMIENTO nat 4 Cenad muestras illumigene C difficile fue evaluado en el 2010 en cuatro instituciones indendientes SAR Resultado NO reportable No reporte el resultado localizadas en las regions del Medio Oeste y Sur de los Estados Unidos La informaci n Repita el paso de extracci n para todas las a cerca de la ejecuci n se encuentra en la Tabla 1 INV LIDO Muestras BER ee Muestra inhibitoria preparaci n inadecuada de la Tabla 1 Data Comprensiva de Ejecuci n muestra falla de los reactivos falla del instrumento o falla de los controles internos 5 F FO Resultado de Control Positivo Valido Reactivos Cultivo bacteriano illumigene C dificile POSITIVO activos al momento de uso illumipro 10 funcion Citotoxig nico Positivo Negativo Total correctamente Resultado de Control Incorrecto Repita la prueba Positivo 99 5 104 de control co
18. mL Prilosec 0 5 mg mL Tagamet 0 5 mg mL TUMS 0 5 mg mL Vancomycin 12 5 mg mL wei e Blutk rperchen 5 VIV Vollblut 5 V V REFERENCES 1 Nagamine K Hase T Notoni T Accelerated reaction by loop mediated isothermal amplifications using loop primers Mol Cell Probes 2002 16 223 29 2 Mori Y Kitao M Tomita N Notoni T Real time turbidimetry of LAMP reaction for quantitating template DNA J Biochem Biophys 2004 59 145 47 3 Rupnik M Heterogeneity of large clostridial toxins importance of Clostridium difficile toxinotypes Microbiol Rev 2008 32 541 55 4 US Department of Health and Human Services PHS CDC NIH Biosafety in microbiology and biomedical laboratories Washington DC US Government Printing Office 2007 CLSI MM3 A2 Molecular diagnostic methods for infectious disease approved guideline 2nd ed Wayne PA Clinical Laboratory Standards Institute 2006 6 Wilkins TD Lyerly DM Clostridium difficile testing after 20 years still challenging J Clin Microbiol 2003 41 531 4 7 Johnson S Gerding DN Clostridium difficile associated diarrhea Clin Infect Dis 1998 26 1027 34 8 Lyerly DM Krivan HC Wilkins TD Clostridium difficile its disease and toxins Clin Microbiol Rev 1988 1 1 18 CE SN11176 REV 07 10 Meridian Bioscience Europe France Le Quadra 455 Promenade des Anglais 06299 Nice Cedex 3 France Tel 33 4 93 18 72 10 Fax 33 4 93 18 72 11 e mail info meridianbioscie
19. over collection of stool may lead to clogging of the sample collection device 3 Add the Sample Collection Brush to the illumigene C difficile Sample Preparation Apparatus containing Sample Diluent and secure the cap For stool in Cary Blair based media transfer 200 uL of specimen to the illumigene C difficile Sample Preparation Apparatus and secure the cap Vortex the Sample Preparation Apparatus for a minimum of 10 seconds Specimen in illumigene C difficile Sample Preparation Apparatus prior to extraction may be held at 2 27 C for up to 24 hours prior to testing 4 Remove the tip cap from the Sample Preparation Apparatus and squeeze five to ten drops of sample into a clean illumigene Extraction Tube 5 Repeat Sample Preparation Steps for all samples to be processed 6 Heat the illumigene Extraction Tubes containing mixed sample in a dry bath heat block at 95 C for 10 2 minutes 7 Remove the tubes from the dry bath heat block and vortex for approximately 10 seconds Extracted Samples may be held at 2 8 C for 4 hours OR may be frozen and stored at lt 20 C for 1 day prior to addition to Reaction Buffer Extracted Samples may be frozen and thawed once TEST PROCEDURE This test should be performed per applicable local state or federal regulations or accrediting agencies NOTE A maximum of 10 samples can be processed in a single illumipro 10 run 1 Transfer 50 uL of extracted sample to an appropriately labeled illumigene Rea
20. ritiene che l esposizione alla maggior parte degli antibiotici favorisca la proliferazione di C difficile tossigenico distruggendo l equilibrio della normale flora intestinale Si ritiene che due grandi tossine proteiche TcdA o tossina A e TcdB tossina B siano i fattori primari della virulenza del C difficile Queste tossine sono codificate da due geni differenti chiamati rispettivamente tcdA e tcdB Insieme con altri tre geni formano il locus di patogenicit di 19 6 kb chiamato PaLoc REAGENTI MATERIALI FORNITI Il numero massimo di analisi eseguibili con questo kit indicato sulla confezione esterna 1 Dispositivo per la preparazione dei campioni illumigene C difficile unit per la raccolta del campione costituita da unit per la preparazione del campione contagocce tappo e Tampone di diluizione del campione soluzione tampone fosfato e Staphylococcus aureus fissato in formalina con sodio azide 0 09 come conservante 2 Tampone di reazione illumigene soluzione tampone Tris contenente sodio azide 0 09 come conservante 3 Dispositivo di analisi illumigene C difficile due provette separate contenenti granuli liofilizzati di reagente composto da DNA polimerasi deossiribonucleoside trifosfato ANTP e primer specifici per C difficile provetta TEST o primer per S aureus provetta CONTROLLO 4 Spazzolini per la raccolta dei campioni 5 Provette per l estrazione illumigene MATERIALI FORNITI SEPARATAMENTE Kit di co
21. soon as possible but may be held up to 24 hours at 21 27 C or 5 days at 2 8 C Samples that will not be tested within these times should be frozen immediately upon receipt and stored at lt 20 C until tested Specimens may be frozen and thawed once Human stool samples preserved in Cary Blair based media Samples should be transported and stored at 2 8 C prior to testing Samples should be tested as soon as possible but may be held up to 5 days at 2 8 C Samples that will not be tested within this time should be frozen immediately upon receipt and stored at lt 20 C until tested Specimens may be frozen and thawed once REAGENT PREPARATION Ensure kit reagents are at room temperature 21 27 C before use Incorrect results may be obtained if reagents are not brought to room temperature prior to use SPECIMEN PREPARATION NOTE Ensure that the illumipro 10 instrument is powered on and required performance verifications have been completed prior to initiation of SPECIMEN PREPARATION Refer to the illumipro 10 Operator s Manual for further information regarding instrument set up and operation 1 Mix stool sample thoroughly 2 Collect mixed sample specimen using Sample Collection Brush a Liquid Stool Immerse Sample Collection Brush completely into specimen b Semi solid Stool Rotate Sample Collection Brush over specimen surface lightly coating the surfaces of the brush bristles Approximately one half of the brush should be coated
22. tampon de dilution de l chantillon tampon phosphate salin et Staphylococcus aureus trait la formaline avec azoture de sodium 0 09 comme conservateur 2 Tampon de r action illumigene tampon Tris contenant de l azoture de sodium 0 09 comme conservateur 3 Dispositif de test illumigene C difficile deux compartiments s par s contenant des billes de r actifs Iyophilisees comportant l ADN polym rase des d soxyribonucl osides triphosphates dNTPs et soit des amorces sp cifiques de C difficile compartiment de TEST soit des amorces pour S aureus compartiment de CONTROLE 4 Brosses d chantillonnage 5 Tubes d extraction illumigene MATERIEL FOURNI SEPAREMENT Trousse de R actifs de contr le externe illumigene r f rence 279920 MATERIEL NON FOURNI 1 Gants en latex jetables non poudr s 2 Embouts de pipettes sans d soxyribonucl ase ribonucl ase r sistant aux a rosols 3 Contr le d extraction tel un chantillon de selle positif ou un chantillon de selle n gatif inocul avec une souche C difficile toxinog ne EQUIPEMENT NON FOURNI Bloc chauffant pour microtubes de 12 mm pouvant atteindre 95 C M langeur vortex Minuterie Micropipette pouvant distribuer 50 uL Micropipette pouvant distribuer 200 uL illumipro 10 DRAPNA PRECAUTIONS D EMPLOI 1 Tous les r actifs sont pour usage in vitro uniquement 2 Suivre les r gles de bios curit de niveau 2 et les bonnes pratiques de
23. test 2007858 IX XXIII A B 32 CFU test Coltura batterica illumigene C difficile 8864 x A IB 64 CFU test citotossica iti i k Positivo Negativo Totale REATTIVIT DEL TEST Positivo 99 5 104 Le seguenti colture di C difficile provenienti da fonti diverse sono state analizzate e x hanno prodotto risultati positive a 64 CFU test con illumigene C difficile Negativo 27 546 573 Tipo 0 Ceppi 10463 2004111 2004205 2005070 2005257 2008029 2008162 Totale 126 551 677 2008341 2008351 2009066 2009099 B1 G1 J7 K12 Y1 Tipo III 2004052 2004118 2007431 BI17 BI8 Tipo V 2005325 2006240 2008188 2009018 2009065 BK6 Tipo 95 CI VIII 43598 2008016 CF1 Tipo X 8864 Tipo XII 2007435 Tipo IX XXIII 2007858 Tipo Sensibilit 99 104 95 2 89 2 97 9 Non noto 2009132 2009155 2009277 Specificit 546 573 95 3 93 2 96 7 RIPRODUCIBILIT Pannelli di 10 campioni codificati in cieco sono stati forniti a tre laboratori indipendenti per Correlazione 645 677 95 3 93 4 96 6 studi di precisione campioni sono stati suddivisi a caso entro ciascun pannello per 15 27 risultati falsi positivi erano positivi ad un altro test molecolare approvato FDA Food and Drug Administration Dei rimanenti 12 risultati falsi positivi 8 erano positivi ad un test approvato FDA per il rilevamento di GDH 2 5 risultati falsi positivi erano negativi ad un altro test molecolare approvato FDA Sono stati valutati un totale di
24. y el Tamp n de Diluci n de muestra soluci n tamponada con fosfato y Staphylococcus aureus tratado con formol y azida de sodio 0 09 como conservante 2 Tampon de Reacci n de illumigene Soluci n tamponada con Tris que contiene azida de sodio 0 09 como conservante 3 Dispositivo para la Prueba illumigene C difficile Dos c maras separadas que contienen liosferas de reactivo seco compuestas por DNA polimerasa desoxinucle sidos trifosfato dNTPs y ya sea cebadores espec ficos para C difficile camara de TEST o cebadores para S aureus c mara de CONTROL 4 Escobillas para recolecci n de muestras 5 Tubos para Extracci n illumigene MATERIALES PROPORCIONADOS POR SEPARADO Equipo de Control Externo illumigene n mero de cat logo 279920 MATERIALES NO PROPORCIONADOS 1 Guantes de l tex desechables sin talco 2 Puntas para micropipetas con protecci n contra aerosoles libres de DNAasa y RNAasa 3 Control de Extracci n muestras cl nicas confirmadas como positivas o muestras negativas con C difficile toxig nico a adido EQUIPOS NO PROPORCIONADOS 1 Ba o seco con bloque calefactor de 12 mm capaz de alcanzar los 95 C 2 Agitador vorticial V rtex 3 Cron metro de intervalos 4 Micropipeta capaz de dispensar 50 uL 5 Micropipeta capaz de dispensar 200 uL 6 illumipro 10 PRECAUCIONES 1 Todos los reactivos son para uso diagn stico in vitro solamente 2 Siga las pr cticas de Bioseguridad de Nivel 2 duran
25. 10 fue de 15 5 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 1 La prueba no distingue entre organismos viables y organismos no viables 2 Los resultados de la prueba deben usarse simult neamente con la informaci n disponible a partir de la evaluaci n cl nica del paciente y de otros procedimientos diagn sticos 3 Esta prueba es para uso de muestras de heces no formadas preservadas o sin preservar solamente Caracter sticas de ejecuci n de otro tipo de muestra cl nica Reporte de no han sido establecidas 1D do Muestra Resultados Interpretaci n 4 Las caracter sticas de ejecuci n para muestras de pacientes de menos de dos a os Muestra contiene C difficile toxig nico el cual de edad no han sido establecidas POSITIVO contiene el locus de patogenicidad PaLoc 5 Dos grupos distintos han sido identificados el cual pueden albergar C difficile asintom ticamente en ndices altos Colonizaci n a indices de 50 o m s han sido NEGATIVO No se detecta C difficile toxig nico reportado en infantes y en indices hasta 32 en pacientes de fibrosis qu stica Muestra de 6 Este ensayo no identifica suseptibilidad antimicrobiana Paciente Resultado NO reportable Repita la prueba 7 Este prueba detecta pero no diferencia la cepa NAP1 Ribotipo 027 de otras cepas y usando la muestra original Muestra inhibitoria toxig nicas de C difficile INVALIDO preparaci n inadecuada de la muestra falla de
26. 100 60 60 100 1 campione ha generato un risultato del test non valido per errore dello strumento STUDI SULLA CROSS REATTIVIT Studi sulla cross reattivit sono stati eseguiti utilizzando campioni fecali positivi e negativi inoculati con batteri o funghi con una concentrazione finale di 1 2 x 10 o virus a un minimo di 1 x 10 TCIDso mL Nessuno dei seguenti organismi inoculati nei campioni fecali ha interferito con illumigene C difficile Aeromonas hydrophila Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Candida albicans Citrobacter freundii Clostridium sordellii Clostridium perfringens Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Escherichia coli Escherichia coli 0157 H7 Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Listeria monocytogenes Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas fluorescens Salmonella Groups B E Serratia liquefaciens Serratia marcescens Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Adenovirus Types 40 e 41 Coxsackievirus Echovirus Rotavirus ANALISI DI SOSTANZE INTERFERENTI stato osservato che le seguenti sostanze se presenti nelle concentrazioni solvente diluente saturato indicate non i
27. 8 sample Site 3 20 20 100 83 9 100 87 92 94 6 87 9 97 7 Site 4 8 8 100 67 6 100 36 39 92 3 79 7 97 3 QUALITY CONTROL Site 5 55 59 93 2 83 8 97 3 303 315 96 2 93 5 97 8 1 Each device contains an internal control well that controls for amplification inhibition assay reagents and sample processing effectiveness Table 3 Invalid rates by site 2 Good laboratory practice recommends the use of control materials Users should follow the appropriate federal state and local guidelines concerning the running of dat E x external quality controls Clinical Site Evaluation 3 illumigene C difficile External Control Reagents are supplied separately Catalog Site Total A Invalid Instrument Invalid Rat 279920 It is recommended that the reactivity of each new lot and each new Invalids OS Invalids A shipment of illumigene C difficile be verified on receipt and before use External Site 1 3 3 0 3 68 4 4 control tests should be performed thereafter in accordance with appropriate federal Site 2 1 0 1 1 80 1 39 state and local guidelines The illumigene C difficile test kit should not be used in ite 1 3 patient testing if the external controls do not produce the correct results Site 3 8 1 7 8 120 6 7 4 A separate device must be used for each external control reagent Site 4 1 1 0 1 48 2 1 5 DO NOT extract the Positive or Negative Control samples x A 6 An Extraction Control a known positive or clinical sample or negat
28. DER REAGENZIEN Sicherstellen dass die Kit Reagenzien vor der Verwendung Zimmertemperatur 21 27 C erreicht haben Werden die Reagenzien vor dem Einsatz nicht auf Zimmertemperatur gebracht kann dies zu inkorrekten Ergebnissen f hren PROBENNAHME UND VORBEREITUNG HINWEIS Sicherstellen dass das illumipro 10 Ger t eingeschaltet ist und die erforderlichen Leistungs berpr fungen vor dem Einleiten der PROBENVORBEREITUNG abgeschlossen wurden Bez glich weiterer Angaben zur Einrichtung und Bedienung des Ger ts bitte das illumipro 10 Benutzerhandbuch einsehen 1 Stuhlprobe gr ndlich mischen 2 Mit Hilfe des Probennahmeb rstchens eine gemischte Probe entnehmen a Fl ssiger Stuhl Das Probennahmeb rstchen vollst ndig in die Probe eintauchen b Halbfester Stuhl Das Probennahmeb rstchen ber die Probenoberfl che drehen sodass die Borsten leicht beschichtet werden Etwa die halbe B rste sollte beschichtet sein eine zu gro e Probenmenge k nnte das Probennahmeger t verstopfen 3 Das Probennahmeb rstchen in den illumigene C difficile Probenvorbereitungsapparat mit dem Probenverd nnungspuffer einbringen und die Verschlusskappe anbringen F r Stuhlproben im Cary Blair Medium 200 uL der Probe in den illumigene C difficile Probenvorbereitungsapparat einbringen und die Verschlusskappe anbringen Den Probenvorbereitungsapparat mindestens 10 Sekunden lang mit dem Vortexmischer mischen Proben im illumigene C difficile Probenvorb
29. Das Ger t sorgf ltig ffnen und die R hrchen so halten dass das lyophilisierte Reagenz nach dem ffnen nicht herausfallt Das Ger t auf einer ebenen Fl che oder in einem Gestell platzieren 5 Mit Hilfe einer neuen Pipettenspitze 50 uL des Reaktionspufferr hrchens mit extrahierter Probe in die TEST Kammer wei e Kugel des illumigene Testger ts transferieren Keine Luftblasen einbringen Mit Hilfe einer neuen Pipettenspitze 50 uL des Reaktionspufferr hrchens mit extrahierter Probe in die KONTROLL Kammer gelbe Kugel des illumigene Ger ts transferieren Keine Luftblasen einbringen Das illumigene Testger t schlie en und die Verschlusslasche gut fixieren 6 Das illumigene C difficile Testger t auf die Arbeitsfl che klopfen um den Inhalt zu mischen und Luftblasen zu entfernen Sorgf ltig berpr fen dass keine Luftblasen in den illumigene Testger ten brig bleiben T Das illumigene Testger t in den illumipro 10 geben und die Amplifikationsreaktion und den Nachweis starten Die Ergebnisse werden nach dem Abschluss des Laufs angezeigt AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Positive Kontrolle NEGATIV Proben ID a Interpretation POSITIV Proben die toxigene C difficile St mme mit dem Pathogenit tslokus PaLoc aufweisen NEGATIV Kein Nachweis von toxigenen C difficile St mmen Kein auswertbares Ergebnis Den Test mit Patientenproben der urspr nglichen Stuhlprobe wiederholen Inhibitoren in der Patient
30. EPRODUCIBILIDAD Paneles de 10 muestras codificados a ciegas fueron suplidos a tres laboratorios independientes para estudios de precisi n Las muestras estaban mezcladas en diferente orden para poder ocultar su identidad El panel inclu a muestras artificiales manufacturadas al l mite de detecci n de la prueba n 3 y justo debajo del limite del blanco ej Muestras negativas altas n 3 El panel tambi n inclu a muestras sin caracterizar positivas n 2 y negativas n 2 El an lisis fue ejecutado por diferentes operadores en cada localidad el mismo d a variabilidad intra ensayo por 5 d as variabilidad inter ensayo Tres lotes de illumigene C difficile fueron usado en este estudio Los resultados se encuentran en la tabla siguiente 11 materia fecal inoculada con organismos bacterianos o con hongos a una concentraci n final de 1 2 x 10 o con virus a una concentraci n desde a un minimo de 1 x 10 TCIDso mL Ninguno de los siguientes organismos presents en la materia fecal reaccion con la prueba illumigene C difficile Aeromonas hydrophila Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Candida albicans Citrobacter freundii Clostridium sordellii Clostridium perfringens Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Escherichia coli Escherichia coli 0157 H7 Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Listeria monocytogenes
31. G illumigene c difficile DNA Amplification Assay for the Detection of Cytotoxigenic C difficile in Stool Specimens 280050 In vitro diagnostic medical device INTENDED USE The illumigene C difficile DNA amplification assay performed on the illumipro 10 is a qualitative in vitro diagnostic test for the direct detection of toxigenic C difficile in human stool specimens from patients suspected of having Clostridium difficile associated disease CDAD The illumigene C difficile assay utilizes loop mediated isothermal DNA amplification LAMP technology to detect the pathogenicity locus PaLoc of toxigenic Clostridium difficile The Clostridium difficile PaLoc is a gene segment present in all known toxigenic C difficile strains The C difficile PaLoc codes for both the Toxin A gene tcdA and the Toxin B gene tcdB has conserved border regions and is found at the same site on the C difficile genome for all toxigenic strains The illumigene C difficile assay detects the PaLoc by targeting a partial DNA fragment on the Toxin A gene The tcdA target region was selected as an intact region remaining in all known A B and A B toxinotypes illumigene C difficile is intended for use in hospital reference or state laboratory settings The device is not intended for point of care use SUMMARY AND EXPLANATION OF THE TEST The illumigene C difficile DNA molecular assay is based on loop mediated amplification technology which uses s
32. PARACI N DE LA MUESTRA Tipo de Muestra Heces no formadas indicativas de CDAD Muestras de materia fecal humana sin conservar Las muestras deben ser transportadas y almacenarse a una temperatura de 2 8 C antes de analizarse Las muestras deben analizarse tan pronto como sea posible pero pueden mantenerse hasta 24 horas a 21 27 Co 5 d as a 2 8 C Las muestras que no van a ser analizadas antes de este tiempo deben congelarse tan pronto como se reciban y almacenarse a una temperatura lt 20 C hasta que vayan a ser analizadas Las muestras pueden congelarse y descongelarse una vez Muestras de materia fecal humana conservadas en medio de transporte Cary Blair Las muestras deben ser transportadas y almacenadas a 2 8 C antes de analizarlas Las muestras deben analizarse tan pronto como sea posible pero pueden mantenerse hasta 5 d as a 2 8 C Las muestras que no van a ser analizadas antes de este tiempo deben congelarse tan pronto como se reciban y almacenarse a una temperatura lt 20 C hasta que vayan a ser analizadas Las muestras pueden congelarse y descongelarse una vez PREPARACI N DE REACTIVOS Aseg rese de que los reactivos hayan alcanzado la temperatura ambiente 21 27 C antes de usarlos Resultados incorrectos pueden resultar si los reactivos no alcanzan temperatura ambiente antes de ser usados RECOLECCI N Y PREPARACI N DE LA MUESTRA NOTA Aseg rese de que el instrumento illumipro 10 est encendido y de que las verificacion
33. PaLoc de C difficile toxinog ne partir d chantillons de selle de patients que l on soupgonne atteints de diarrh e associ e la pr sence de cet organisme Les r sultats de ce test sont mesur s l aide de l incubateur lecteur illumipro 10 de Meridian PRINCIPE DU TEST Le Clostridium difficile toxinog ne est une des causes principales de diarrh e et de colite il constitue l agent causal de virtuellement tous les cas de colite pseudomembraneuse Bien qu environ 2 des adultes sains soient colonis s par C difficile la plupart des patients acqui rent cet organisme en tant qu infection nosocomiale Il est g n ralement admis que l exposition la plupart des antibiotiques permet la prolif ration de C difficile toxinog ne en perturbant la flore intestinale normale Les facteurs de virulence principaux de C difficile sont vraisemblablement deux toxines de grande taille TcdA ou toxine A et TcdB ou toxine B Ces toxines sont cod es par deux g nes diff rents appel s tcdA et tcdB En association avec trois autres g nes elles forment un locus de pathog nicit de 19 6 kb appel PaLoc MATERIEL FOURNI Le nombre maximal de tests pouvant tre r alis s partir de ce coffret est indiqu sur la boite 1 Systeme Pr paration de l Echantillon SPEC illumigene C difficile unit d echantillonnage consistant en un compartiment de pr paration de l chantillon un embout compte gouttes un capuchon et du
34. Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas fluorescens Salmonella Groups B E Serratia liquefaciens Serratia marcescens Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Adenovirus Types 40 y 41 Coxsackievirus Echovirus Rotavirus PRUEBAS PARA SUBSTANCIAS INTERFERENTES Las siguientes substancias a las concentraciones especificadas de solvente diluyente saturado no interfirieron con los resultados de la prueba a las concentraciones finales anotadas Solfato de bario 5 mg mL grasa fecal equivalente a 2 65 mg de cido este rico m s 1 3 mg de cido palm tico por mL hemoglobina como metahemoglobina 3 2 mg mL IgA 5 mg mL Imodium ADO 0 00667 mg mL Kaopectate 0 87 mg mL Metronidazole 12 5 mg mL mucina 3 33 mg mL Mylanta 4 2 mg mL Pepto Bismol 0 87 mg mL Prilosec 0 5 mg mL Tagamet 0 5 mg mL TUMS 0 5 mg mL Vancomycin 12 5 mg mL gl bulos blancos 5 V V sangre total 5 V V G illumigene ditficite DNA Amplifikationsassay zum Nachweis von toxigenen C difficile Stammen in Stuhlproben 280050 In vitro Diagnostikum VERWENDUNGSZWECK Der am illumipro 10 durchgef hrte DNA Amplifikationsassay illumigene C difficile ist ein qualitativer In vitro Diagnostiktest f r den direkten Nachweis von toxigenen C difficile in Human
35. Stuhlproben von Patienten die vermutlich an einer mit Clostridium difficile assoziierten Erkrankung Clostridium difficile associated disease kurz CDAD leiden Der illumigene C difficile Assay verwendet eine DNA LAMP Technik Loop mediated Isothermal Amplification um den Pathogenit tslokus PaLoc der toxigenen Clostridium difficile St mme nachzuweisen Beim Clostridium difficile PaLoc handelt es sich um ein Gensegment das alle bekannte toxigene C difficile St mme aufweisen Der C difficile PaLoc kodiert f r das Toxin A Gen tcdA sowie auch f r das Toxin B Gen tcdB umfasst konservierte Grenzregionen und tritt bei allen toxigenen St mmen an derselben Stelle des C difficile Genoms auf Der illumigene C difficile Assay weist den PaLoc nach indem er auf ein partielles DNA Fragment des Toxin A Gens abzielt Es wurde tcdA als Zielregion gew hlt die eine konservierte Region ist und sich in allen bekannten toxigenen Clostridium difficile St mmen A B und A B befindet illumigene C difficile ist f r den Einsatz in Krankenhauslabors Referenzlabors oder staatlichen Laboratorien vorgesehen Das Produkt ist nicht f r den Einsatz am Behandlungsort vorgesehen ZUSAMMENFASSUNG UND ERLAUTERUNG DES TESTS Der illumigene C difficile DNA Amplifikationsassay beruht auf der LAMP Technik Loop mediated Isothermal Amplification die speziell f r den PaLoc Pathogenit tslokus entwickelte Primer einsetzt um f r eine spezifische und konti
36. age illumigene illumigene I Sensitivity 3 I Specificity Toxigenic Cl Toxigenic Incl culture culture 22 12 years 10 11 90 9 62 3 98 4 75 79 94 9 87 7 98 0 gt 12 to 21 years 5 5 100 56 6 100 53 56 94 6 85 4 98 2 gt 21 years 83 87 95 4 88 8 98 2 417 437 95 4 93 0 97 0 Age Unknown 1 1 100 20 7 100 1 1 100 20 7 100 ANALYTICAL SENSITIVITY The analytical sensitivity of this assay for C difficile was based on 20 replicates for each measurand and with a stated probability eg 95 where 19 20 replicates are positive of obtaining positive responses at the following levels of the measurands Strain ID Toxinotype Phenotype LoD Test VPI 10463 0 A B 4 CFU test 2007431 III NAP1 A B 32 CFU test CFI VIII A B 64 CFU test 2006240 V NAP7 A B 32 CFU test BI8 IN A B 64 CFU test 2007858 IX XXIII A B 32 CFU test 8864 x A IB 64 CFU test ASSAY REACTIVITY The following C difficile stock cultures from different sources were tested and produced positive reactions at 64 CFU test with illumigene C difficile Type 0 Strains 10463 2004111 2004205 2005070 2005257 2008029 2008162 2008341 2008351 2009066 2009099 B1 G1 J7 K12 Y1 Type Ill 2004052 2004118 2007431 BI17 BI8 Type V 2005325 2006240 2008188 2009018 2009065 BK6 Type VIII 43598 2008016 CF1 Type X 8864 Type XII 2007435 Type IX XXIII 2007858 Unknow
37. amente le provette di reazione per assicurarsi che non siano rimaste bolle d aria nella provetta 7 Inserire il dispositivo di analisi illumigene nello strumento illumipro 10 e dare inizio alla reazione di amplificazione e rilevamento risultati saranno visualizzati alla fine del ciclo INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Identificativo Risultato del campione Riportato POSITIVO Interpretazione Il campione contiene il ceppo C difficile tossigenico con il locus patogeno PaLoc NEGATIVO Nessun C difficile tossigenico rilevato Nessun Panalisi originale Campione del paziente con effetto inibitorio preparazione del campione errata deterioramento del reagente fallimento dello strumento o fallimento del controllo interno Controllo di Estrazione valido Estrazioni eseguite correttamente Fallimento dell Estrazione Non refertare il risultato del test Ripetere il procedimento di estrazione per tutti i campioni fecali Nessun risultato refertabile Non refertare il risultato del test Ripetere il procedimento di estrazione per tutti i campioni fecali Campione del paziente con effetto inibitorio preparazione del campione errata deterioramento del reagente fallimento dello strumento o fallimento del controllo interno Risultato del controllo positive valido reagenti sono reattivi al momento dell utilizzo l illumipro 10 funziona correttamente Risultato del controllo non corretto Ripetere l analisi d
38. case de non respect des r sultats incorrects peuvent tre observ s PREPARATION DES ECHANTILLONS REMARQUE s assurer que l appareil illumipro 10 est allum et que les v rifications de performance ECHANTILLONS requises sont termin es avant d initier la PREPARATION DES Se rapporter au manuel d utilisation de l illumipro 10 pour plus d informations au sujet de la mise en place et l op ration de l appareil 1 2 Bien m langer l chantillon de selle Utiliser la brosse d chantillonnage pour pr lever le sp cimen m lang a Selle liquide immerger compl tement la brosse d chantillonnage dans le sp cimen b Selle semi solide imprimer un mouvement de rotation la brosse d chantillonnage sur la surface du sp cimen afin de couvrir l g rement la surface des poils de brosse Environ la moiti de la brosse doit tre recouverte une quantit excessive de selle peut entra ner le colmatage du dispositif de collecte de l chantillon Ins rer la brosse d chantillonnage dans le Syst me de pr paration de l Echantillon illumigene C difficile contenant le diluant et fermer le capuchon Pour les selles conserv es dans un milieu de type Cary Blair transf rer 200 uL d chantillon dans le Syst me de pr paration de l Echantillon illumigene C difficile et fermer le capuchon M langer le Systeme de Pr paration de l Echantillon au vortex pendant au moins 10 secondes Le sp cimen dans le Syst me de P
39. co en muestras de materia fecal diarr ica de pacientes que se sospecha que tienen diarrea asociada con C difficile CDAD en ingl s Los resultados de la prueba se determinan mediante el Incubador Lector illumipro 10 de Meridian PRINCIPIOS BIOL GICOS El Clostridium difficile toxig nico es una de las principales causas de diarrea y colitis asociadas con el uso de antibi ticos y es el agente etiol gico de casi todos los casos de colitis seudomembranosa A pesar de que aproximadamente un 2 de los adultos sanos est n colonizados con C difficile muchos pacientes contraen este microorganismo a trav s de una infecci n hospitalaria Se cree que el tratamiento con la mayor a de los antibi ticos permite la proliferaci n del C difficile toxig nico porque alteran la flora intestinal normal Se cree que dos prote nas grandes TcdA o toxina A y TcdB o toxina B son los factores de virulencia principales producidos por C difficile Estas toxinas est n codificadas en dos genes distintos que se denominan tcdA y tcdB respectivamente Junto con tres genes m s constituyen un locus de patogenicidad de 19 6 Kb llamado PaLoc REACTIVOS MATERIALES PROPORCIONADOS El n mero m ximo de pruebas que se puede obtener con este equipo est indicado en el exterior de la caja 1 Ensamble para preparar las muestras de illumigene C difficile La unidad de muestreo consiste en una c mara para preparaci n de muestra una punta con gotero una tapa
40. creditamento NOTA in un unico ciclo illumipro 10 si possono analizzare massimo dieci campioni 1 Trasferire 50 uL di campione estratto in una provetta con il tampone di reazione illumigene adeguatamente etichettata 2 Agitare con il vortex la provetta con il tampone di reazione contenente il campione estratto per circa 10 secondi 3 Prima di continuare ripetere i punti 1 e 2 per tutti i campioni da analizzare 4 Estrarre dalla busta di protezione un dispositivo di analisi illumigene C difficile per ciascun campione da analizzare Aprire il dispositivo con attenzione maneggiando le provette in modo da evitare la dispersione del reagente liofilizzato dopo l apertura Porre il dispositivo su una superficie piana o inserirlo in un portaprovette di misura adeguata 5 Utilizzando un nuovo puntale per pipette trasferire 50 uL dalla provetta con il tampone di reazione contenente il campione estratto nella provetta TEST sfera bianca del dispositivo di analisi illumigene Evitare di inserire bolle d aria Utilizzando un nuovo puntale per pipette trasferire 50 uL dalla provetta di reazione contenente il campione estratto nella provetta CONTROLLO sfera gialla del dispositivo illumigene Evitare di inserire bolle d aria Chiudere il dispositivo di analisi illumigene fissando bene la linguetta di chiusura 6 Picchiettare il dispositivo sulla superficie di lavoro per miscelarne il contenuto e rimuovere eventuali bolle d aria Esaminare attent
41. ction Buffer tube 2 Vortex the Reaction Buffer Tube containing extracted sample for approximately 10 seconds 3 Repeat steps 1 and 2 for all the samples to be analyzed before proceeding 4 Remove 1 illumigene C difficile Test Device from its protective pouch per sample Carefully open the device holding the tubes such that the lyophilized reagent will not fall out upon opening Place device on a flat surface or in a rack that can accommodate the device 5 Using a new pipette tip transfer 50 uL from the Reaction Buffer tube containing extracted sample to the TEST chamber White Bead of the illumigene Test Device Do not insert air bubbles Using a new pipette tip transfer 50 uL from the Reaction Buffer tube containing extracted sample to the CONTROL chamber Yellow Bead of the illumigene Test Device Do not insert air bubbles Close the illumigene Test Device and fasten the latch securely 6 Tap device on the bench top to mix and to remove air bubbles Carefully examine the reaction tubes to ensure that there are no air bubbles left in the tube 7 Insert the illumigene Test Device into the illumipro 10 and initiate amplification reaction and detection Results will be displayed at the conclusion of the run INTERPRETATION OF RESULTS s le ID Reported Int tati 5 Two distinct groups have been identified that can harbor C difficile
42. e 3 Ung ltigkeitsquote nach klinischem Standort Klinische Ort Auswertung y is Ung ltige Test Pontine Ungiiltigkeitsquote Ergebnisse ergebnisse ergebnisse Ort 1 3 3 0 3 68 4 4 Ort 2 1 0 1 1 80 1 3 Ort 3 8 1 7 8 120 6 7 Ort 4 1 1 0 1 48 2 1 Ort 5 7 6 1 7 381 1 8 Gesamt 20 11 697 1 6 9 697 1 3 20 697 2 9 Eine Probe blieb ung ltig nach wiederholtem Test der Originalprobe Tabelle 4 Leistungsmerkmale nach Patientenalter Positive Proben Negative Proben Patientenalter illumigene illumigene I Sensitivit t I Spezifit t Toxigene SM Toxigene 95 NI Kultur Kultur 22 12 Jahren 10 11 90 9 62 3 98 4 75 79 94 9 87 7 98 0 da 5 5 100 56 6 100 53 56 94 6 85 4 98 2 gt 21 Jahren 83 87 95 4 88 8 98 2 417 437 95 4 93 0 97 0 Poni 1 1 100 20 7 100 1 1 100 20 7 100 TESTEMPFINDLICHKEIT Die Testempfindlichkeit dieses Assays f r C difficile st tzt sich auf 20 Wiederholungstests f r jedes Mass bei einer Wahrscheinlichkeitsangabe z B 95 mit 19 20 positiven Wiederholungstests zur Erzielung positiver Reaktionen bei den folgenden Niveaus der Masseinheiten Stamm ID Toxinotyp Phanotyp LoD Test VPI 10463 0 A B 4 CFU test 2007431 Ill NAP1 A B 32 CFU test CFI VII A B 64 CFU test 2006240 V NAP7 A B 32 CFU test BI8 Ill A B 64 CFU test
43. el controllo come prima verifica per identificare la causa dell insuccesso Se si ripetono risultati non corretti contattare il servizio di assistenza tecnica Meridian oppure il distributore locale Nessun risultato refertabile Ripetere l analisi dall inizio utilizzando i campioni fecali originali Preparazione del campione errata deterioramento del reagente fallimento dello strumento o fallimento del controllo interno Risultato del controllo non corretto Ripetere l analisi del controllo come prima verifica per identificare la causa dell insuccesso Se si ripetono risultati non corretti contattare il servizio di assistenza tecnica Meridian oppure il distributore locale Risultato del controllo negative valido reagenti sono reattivi al momento dell utilizzo l illumipro 10 funziona correttamente Nessun risultato refertabile Ripetere l analisi dall inizio utilizzando i campioni fecali originali Preparazione del campione errata deterioramento del reagente fallimento dello strumento o fallimento del controllo interno Nessun dispositivo di analisi illumigene nel pozzetto dell illumipro 10 O Il dispositivo di analisi illumigene presente compromesso a causa dell errata preparazione del campione dispositivo sporco o impropriamente alloggiato Ripetere il test utilizzando il campione originale risultato refertabile Ripetere Campione del a a utilizzando il campione fecale Paziente NON VALIDO
44. en de la toxina B tcdB tiene regiones conservadas en sus extremos y se encuentra en el mismo sitio del genoma de C difficile de todas las cepas toxigenicas La prueba illumigene C difficile detecta el PaLoc mediante el reconocimiento espec fico de un fragmento de DNA en el gen de la toxina A La regi n blanco de tcdA que se seleccion es una regi n que se conserva intacta en todas las cepas conocidas de toxinotipos A B y A B El uso de la prueba illumigene C difficile es para hospitales y laboratorios de tipo de referencia o estatales El uso indicado de la prueba no es para punto de cuido RESUMEN Y EXPLICACI N DE LA PRUEBA La prueba de amplificaci n de DNA illumigene C difficile se basa en la tecnologia de amplificaci n isotermica de lazo mediado que utiliza cebadores dise ados espec ficamente para el locus de patogenicidad PaLoc con el objeto de proporcionar una amplificaci n isot rmica de DNA continua y especifica Un producto intermediario de esta amplificaci n es la formaci n de pirofosfato de magnesio que forma un precipitado blanco que confiere turbidez a la soluci n de reacci n La presencia de turbidez significa que la reacci n es positiva mientras que la ausencia de turbidez significa que la reacci n es negativa La prueba illumigene C difficile contiene cebadores que amplifican espec ficamente una regi n de 204 pb en la secuencia conservada 5 del gen tcdA dentro del PaLoc en el C difficile toxig ni
45. enprobe UNGULTIG unsachgem e Probenvorbereitung Versagen des Reagenzes Versagen des Instruments oder Versagen der internen Kontrolle G ltige Extraktionskontrolle Einwandfreie POSITIV Durchf hrung der Extraktionen Versagen der Extraktion Kein auswertbares Testergebnis Den NEGATI Extraktionsprozess f r alle Proben wiederholen Kein auswertbares Ergebnis Das Extraktionskontrolle Testergebnis nicht anwenden Den Extraktionsprozess f r alle Proben wiederholen UNG LTIG Inhibitoren in der Patientenprobe unsachgem e Probenvorbereitung Versagen des Reagenzes Versagen des Instruments oder Versagen der internen Kontrolle G ltiges positives Kontrollergebnis Die POSITIV Reagenzien waren w hrend der Testdurchf hrung aktiv illumipro 10 ist einwandfrei gelaufen Unkorrektes Kontrollergebnis Wenn die erwarteten Reaktionen f r die Kontrollen nicht beobachtet werden zur Ermittlung der Ursache des Versagens als Erstes die Kontrolltests wiederholen Lassen sich auch bei wiederholten Tests die erwarteten Reaktionen nicht erzielen bitte rufen Sie den Technischen Support von Meridian Bioscience an USA 001 800 343 3858 oder wenden Sie sich an Ihren zust ndigen Auslieferer UNG LTIG Kein auswertbares Ergebnis Den ganzen Test mit den urspr nglichen Stuhlproben wiederholen Unsachgem e Probenvorbereitung Versagen des Reagenzes Versagen des Instruments oder Versagen der internen Kontrolle Negative K
46. ereitungsapparat k nnen vor der Extraktion bei 2 27 C bis zu 24 Stunden aufbewahrt werden 4 Die Spitzenkappe des Probenvorbereitungsapparats entfernen und f nf bis zehn Tropfen der Probe in ein sauberes illumigene Probenextraktionsr hrchen auspressen 5 Die Probenvorbereitungsschritte f r alle zu verarbeitenden Proben wiederholen 6 Die Probenextraktionsr hrchen mit dem illumigene Probengemisch 10 2 Minuten lang in einem Trockenbad Heizblock bei 95 C erhitzen 7 Die R hrchen aus dem Trockenbad Heizblock nehmen und etwa 10 Sekunden lang mit dem Vortexmischer mischen Die extrahierten Proben k nnen jedoch bei 2 8 C bis zu 4 Stunden ODER bei lt 20 C 1 Tag vor Zugabe in das Reaktionspufferr hrchen aufbewahrt werden Extrahierte Proben k nnen einmal eingefroren und aufgetaut werden TESTDURCHF HRUNG Den Test gem der einschl gigen lokalen bundesstaatlichen oder nationalen bzw zulassungsbeh rdlichen Auflagen durchf hren HINWEIS Bei einem einzigen illumipro 10 Lauf k nnen maximal 10 Proben verarbeitet werden 1 50 UL extrahierte Probe in ein entsprechend gekennzeichnetes illumigene Reaktionspufferr hrchen transferieren Zi Das Reaktionspufferr hrchen mit der extrahierten Probe ca 10 Sekunden lang mit dem Vortexmischer mischen 3 Vor dem weiteren Vorgehen die Schritte 1 und 2 fur alle zu analysierenden Proben durchf hren 4 F r jede Probe ein illumigene C difficile Testgerat aus dem Schutzbeutel nehmen
47. eron procedimiento completo usando la muestra obtenidas de 274 hombres 39 3 y 419 mujeres 60 1 En 4 de las muestras 0 6 INV LIDO original Muestra inhibitoria preparaci n inadecuada el g nero fue desconocido El grupo de las edades fue de 2 a os de edad a 96 a os de de la muestra falla de los reactivos falla del edad No se observ diferencia en la ejecuci n de la prueba basado en el g nero de los instrumento o falla de los controles internos pacientes Las Tablas 2 y 4 demuestran la ejecuci n de la prueba por localidad del No Dispositivo de Prueba illumigene en el pocillo del estudio cl nico y edad de los pacientes Tabla 3 resume el ndice de muestras inv lidas Pd por localidad de estudio POCILLO NINGUNO El Dispositivo de Prueba illumigene presente es VAC O dudoso dado una falla en la preparaci n de la muestra dispositivo sucio o introducido inapropiadamente Repita la prueba usando la muestra original 10 Tabla 2 Caracter sticas de Ejecuci n por Localidad Lugar 1 Lugar 2 Lugar 3 Total FE 3 Tipo de Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de Muestras Positivas Muestras Negativas Muestra acuerdo acuerdo acuerdo acuerdo Lugar illumigene illumigene Negativo 20 20 100 20 20 100 19 19 100 59 59 100 Cultivo Sensitividad 95 Cl Cultivo Especificidad 95 Cl N bacteriano bacteriano legativo Gitotoxig nico Citotoxig
48. es de funcionamiento requeridas para el mismo se hayan completado antes de iniciar la PREPARACI N DE LA MUESTRA Consulte el Manual del operador de illumipro 10 para obtener informaci n adicional sobre c mo configurar y operar el instrumento E Mezcle la muestra de materia fecal cuidadosamente 2 Recoja la muestra mezclada mediante la Escobilla para recolecci n de muestra a Materia fecal l quida Sumerja completamente en la muestra la Escobilla para recolecci n de muestra b Materia fecal s lida o semis lida Rote la Escobilla para recolecci n de muestra sobre la superficie de la muestra recubriendo ligeramente la superficie de las cerdas de la Escobilla Debe cubrirse aproximadamente la mitad de la Escobilla la recolecci n excesiva de materia fecal puede hacer que se obstruya el dispositivo para recolectar la muestra di Coloque la Escobilla para Recolecci n de Muestra dentro del Ensamble para preparar la muestra que contiene el Tamp n de Diluci n de Muestra illumigene C difficile y cierre la tapa Si la muestra est en medio de Cary Blair a ada con una micropipeta 200 uL de muestra al Ensamble para preparar la muestra que contiene el Tamp n de Diluci n de Muestra illumigene C difficile y cierre la tapa Agite la mezcla en un agitador vorticial v rtex por lo menos 10 segundos Muestras en el Ensamble para preparar muestras illumigene C difficile pueden ser retenidas a 2 27 C hasta 24 horas antes del paso de extraci n
49. estellnummer Do not freeze Non congelare Ne pas congeler No congelar Nicht Einfrieren Consult Instructions for Use Consultare le istruzioni per l uso Consulter les instructions d utilisation Consulte las instrucciones de uso Gebrauchsanweisung beachten Restriction of Hazardous Substances Restrizione all uso di sostanze pericolose Limitation de substances dangereuses Restricci n de Substancias Nocivas Beschr nkung der Verwendung bestimmter gef hrlicher Stoffe Manufacturer Fabbricante Fabricant Fabricante Hersteller Caution consult accompanying documents Attenzione vedere le istruzioni per l uso Attention voir notice d instructions Atenci n ver instrucciones de uso Achtung Begleitdokumente beachten Contains sufficient for lt n gt tests Contenuto sufficiente per n saggi Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Inhalt ausreichend f r lt n gt Pr fungen Reaction Buffer Tampone di reazione Solution de r action tamponn e Tamp n de Reacci n Reaktionspuffer Temperature limitation Limiti di temperatura Limites de temp rature Limite de temperatura Temperaturbegrenzung ETL Registered Mark Certified Marchio di certificazione registrato a livello nazionale Certifi Conforme ETL Marca de Certificaci n Registrada Nacional ETL Konform beglaubigt Serial number Numero di serie Num ro de s
50. ficile tossigenico dovrebbe essere incluso in ogni fase di estrazione Il controllo di estrazione deve essere trattato come un campione VALORI ATTESI La frequenza d insorgenza di diarrea associata agli antibiotici causata da C difficile dipende da differenti fattori tra cui la popolazione dei pazienti il tipo di istituto e l epidemiologia L incidenza di infezioni associate a C difficile CDAD in pazienti sospetti di avere patologie associate a terapia antibiotica del 15 20 sebbene in differenti strutture si possono rilevare percentuali al di sotto o al di sopra di tale intervallo L incidenza di C difficile tossigenico durante il periodo 2010 di questo studio stata pari al 15 5 LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA 1 Il test non fa distinzione fra organismi vitali e non vitali 2 I risultati del test devono essere utilizzati insieme alle informazioni ricavate dall esame clinico del paziente e da altre procedure diagnostiche 3 Questo test per uso esclusivo con campioni fecali non formati con conservante o senza conservante Le prestazioni del test non sono state stabilite con altri tipi di campioni clinici 4 Le prestazioni del test per campioni di pazienti con et inferiore a due anni non ono state stabilite 5 Due distinti gruppi sono stati identificati come portatori asintomatici a elevate percentuali Colonizzazioni a percentuali fino al 50 e oltre sono state osservate nei bambini e percentuali fino al 32 nei pazienti c
51. i Conserver la trousse entre 2 et 27 C PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS Type d chantillon selle non form e qui prend la forme du r cipient de patient suspect de maladie associ e au C difficile CDAD Echantillons de selle humaine sans conservateur les chantillons de selle doivent tre transport s et conserv s 2 8 C avant de proc der au test Les chantillons doivent tre test s d s que possible mais peuvent tre conserv s jusqu 24H 21 27 C ou 5 jours 2 8 C Les chantillons qui ne seront pas test s dans ces laps de temps doivent tre congel s imm diatement apr s r ception et conserv s lt 20 C jusqu au moment du test Les chantillons peuvent tre congel s et d congel s une seule fois Echantillons de selles humaines conserv s dans un milieu de Cary Blair les chantillons doivent tre transport s et conserv s entre 2 et 8 C avant d effectuer le test Les chantillons doivent tre test s d s que possible mais peuvent tre conserv s jusqu 5 jours entre 2 et 8 C Les chantillons qui ne seront pas test s dans ce d lai doivent tre congel s imm diatement apr s r ception et stock s lt 20 C jusqu au moment d effectuer le test Les chantillons peuvent tre congel s et d congel s une seule fois PREPARATION DES REACTIFS S assurer que les r actifs de la trousse sont bien temp rature ambiante 21 27 C avant de les utiliser En
52. ifficile Aeromonas hydrophila Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Candida albicans Citrobacter freundii Clostridium sordellii Clostridium perfringens Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Escherichia coli Escherichia coli 0157 H7 Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Listeria monocytogenes Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas fluorescens Salmonella Groups B E Serratia liquefaciens Serratia marcescens Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Adenovirus Types 40 and 41 Coxsackievirus Echovirus Rotavirus TESTS FOR INTERFERING SUBSTANCES The following substances at the specified saturated solvent diluents concentrations do not interfere with test results in the final concentrations listed Barium sulfate 5 mg mL fecal fat equivalent to 2 65 mg stearic plus 1 3 mg palmitic acids per mL hemoglobin as methemoglobin 3 2 mg mL IgA 5 mg mL Imodium AD 0 00667 mg mL Kaopectate 0 87 mg mL Metronidazole 12 5 mg mL mucin 3 33 mg mL Mylanta 4 2 mg mL Pepto Bismol 0 87 mg mL Prilosec 0 5 mg mL Tagamet 0 5 mg mL TUMS 0 5 mg mL Vancomycin 12 5 mg mL white blood cells 5 V V whole blo
53. ifs avec un test GDH approuv par la FDA al atoire pour chaque panel afin de masquer l identit de l chantillon Les panels 2 5 r sultats faussement n gatifs ont t observ s n gatifs avec un autre test mol culaire comprenaient des chantillons artificiels la limite de d tection du test n 3 et des approuv par la FDA Un total de 697 chantillons de patients qualifi s a t valu Les chantillons ont t pr lev s sur 274 39 3 hommes et 419 60 1 femmes Dans le cas de 4 0 6 des patients le sexe n est pas connu Les groupes d ge des patients varie de 2 ans 96 ans Aucune diff rence dans les performances des tests n a t observ e en fonction de l ge du patient ou de sexe Les tables 2 et 4 montrent la performance du test par site et selon l ge des patients la table 3 r sume les renseignements sur le taux de r sultats non valides par site Table 2 Performances par site Echantillons Positifs Echantillons N gatifs Site illumigene illumigene Sp cificit Culture Sensibilit 95 IC Culture Li 95 IC cytotoxique cytotoxique y Total 99 104 95 2 89 2 97 9 546 573 95 3 93 2 96 7 Site 1 4 5 80 0 37 6 96 4 58 60 97 6 88 6 99 1 Site 2 12 12 100 75 7 100 62 67 92 5 83 7 96 8 Site 3 20 20 100 83 9 100 87 92 94 6 87 9 97 7 Site 4 8 8 100 67 6 100 36 39 92
54. inog nes connues de C difficile Le locus PaLoc de C difficile comprend la fois le g ne de la toxine A tcdA et celui de la toxine B tcdB Il contient des r gions conserv es aux extr mit s et se trouve au m me site du g nome de C difficile dans toutes les souches toxinog nes Le test illumigene C difficile d tecte le locus PaLoc en ciblant un fragment d ADN faisant partie du g ne de la toxine A La r gion cible de tcdA choisie est une r gion restant intacte pour tous les toxinotypes A B ou A B connus Le test illumigene C difficile est congu pour tre utilis dans les h pitaux les centres de r f rence ou les laboratoires m dicaux Le produit n est pas destin aux points sant RESUME ET EXPLICATION DU TEST Le test d amplification de ADN illumigene C difficile est fond sur la technique dite LAMP qui utilise des amorces sp cifiques du locus de pathog nicit PaLoc pour permettre l amplification isotherme sp cifique et continue de l ADN Un produit secondaire form lors de cette amplification le pyrophosphate de magn sium forme un pr cipit blanc entra nant la turbidit de la solution de r action La pr sence de turbidit indique une r action positive alors que son absence repr sente une r action n gative Le test illumigene C difficile inclut des amorces qui amplifient sp cifiquement une r gion de 204 pb pb pour paire de bases parmi la s quence conserv e en 5 du g ne tcdA dans le locus
55. ive sample Site 5 7 6 1 7 381 1 8 spiked with toxigenic C difficile should be included in each extraction run The Total 20 11 697 1 6 9 697 1 3 20 697 2 9 Extraction Control should be treated as a sample 1 Specimen remained invalid after repeat testing from the original sample EXPECTED VALUES The frequency of antibiotic associated diarrhea caused by C difficile is dependent on several factors including patient population type of institution and epidemiology The incidence of CDAD in patients suspected of having antibiotic associated disease is 15 20 although different facilities may find positive rates above or below this range The incidence of toxinogenic C difficile during the 2010 period of this study was 15 5 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 1 Assay does not distinguish between viable and non viable organisms 2 Test results are to be used in conjunction with information available from the patient clinical evaluation and other diagnostic procedures 3 This test is for use with unformed stool samples preserved or unpreserved only Performance characteristic of other clinical specimens types have not been established 4 The performance characteristics for specimens from patients less than two years of age have not been established Table 4 Results by patient age Positive Samples Negative Samples Patient
56. jetando los tubos de tal manera que el reactivo liofilizado no se caiga al abrirlo Coloque el dispositivo en una superficie plana o en una gradilla que pueda acomodarlo Usando una punta de pipeta nueva transfiera 50 uL del tubo con Tamp n de Reacci n que contiene la muestra extra da a la c mara de TEST perla blanca del Dispositivo para la Prueba illumigene No introduzca burbujas Usando una punta de pipeta nueva transfiera 50 uL del tubo de Tamp n de Reacci n que contiene la muestra extra da a la c mara de CONTROL perla amarilla del Dispositivo para la Prueba illumigene No introduzca burbujas Cierre el Dispositivo para la Prueba illumigene y ajuste el cierre de modo que quede seguro Golpe el dispositivo ligeramente sobre la mesa con el objeto de mezclar y eliminar las burbujas Examine cuidadosamente los tubos de reacci n para asegurarse que no quedan burbujas de aire Introduzca cada Dispositivo para la Prueba illumigene dentro del illumipro 10 e inicie la reacci n de amplificaci n y detecci n Los resultados se mostrar n al concluir la prueba INTERPRETACI N DE RESULTADOS CONTROL DE CALIDAD 1 Cada dispositivo contiene un pocillo de control interno que controla la inhibici n de la amplificaci n los reactivos de la prueba y la eficacia del procesamiento de la muestra 2 Una buena pr ctica de laboratorio recomienda el uso de sustancias de control Los usuarios deben ce irse a las pau
57. lecular assay POSITIVE peter of Da Gua ete a A total of 697 qualified patient samples were evaluated Samples were collected from 274 Sep ar bee Us SONICA 39 3 males and 419 60 1 females In the case of 4 0 6 of the patients sex was N Be Ka US or your not known The age groups of patients range from 2 years of age to 96 years of age No Negative pl A ESA SL differences in test performance were observed based on patient age or sex Tables 2 and Control Valid negative control result Reagents 4 show the assay performance by clinical site and patient age Table 3 summarizes NEGATIVE active at time of use illumipro 10 performing invalid rate information by site correctly No reportable result Repeat entire assay Table 2 Performance characteristics by site run using original stool samples INVALID i Improper sample preparation reagent failure Positive Samples Negative Samples instrument failure or internal control failure No illumigene Test Device in the illumipro site I sasa Cue eh otoxic ensitivi 0 otoxic ecifici o 10 Well bacterial y 997 61 bacterial ISAGI OR culture culture EMPTY WELL NONE Th Mlamigens Test Device present r is Total 99 104 95 2 89 2 97 9 546 573 95 3 93 2 96 7 compromised due to sample preparation failure dirty device or improperly seated Site 1 4 5 80 0 37 6 96 4 58 60 97 6 88 6 99 1 device Repeat the test using original Site 2 12 12 100 75 7 100 62 67 92 5 83 7 96
58. liegt bei 15 20 obwohl unterschiedliche Einrichtungen Positivraten finden k nnen die ber oder unter diesem Bereich liegen Die Inzidenz von toxigenen C difficile St mmen w hrend der 2010 Zeitstudie war 15 5 EINSCHR NKUNGEN 1 Der Assay unterscheidet nicht zwischen lebensf higen und nicht lebensf higen Organismen 2 Die Testergebnisse sind in Verbindung mit den verf gbaren Daten aus der klinischen Untersuchung des Patienten und anderen Diagnostikverfahren heranzuziehen 3 Der Test sollte nur mit ungeformtem Stuhl konserviert oder nicht getestet werden Die Leistung mit anderen Arten von klinischen Proben wurde nicht evaluiert Die Leistung mit Proben von Patienten junger als 2 Jahre wurde nicht evaluiert Es wurden zwei deutliche Gruppen identifiziert die sehr h ufig asymptomatische Tr ger von C difficile sind Bei S uglingen wurden Besiedlungsraten bis zu 50 und mehr festgestellt und bei Patienten mit Mukoviszidose Raten bis zu 32 Dieser Test indentifiziert nicht den Verdacht auf Antibiotikas Dieser Test weist den NAP1 Ribotyp 027 Stamm nach aber kann ihn nicht von anderen toxigenen C difficile St mmen differenzieren 8 Der Nachweis von bakterieller Nukleins ure ist abh ngig von einwandfreier Probenabnahme Probengewinnung inkl Transport und Lagerung und Vorbereitung Verd nnung und Extraktion Fehler die w hrend der Probenabnahme Probengewinnung und Vorbereitung Anweisungen auftrete
59. lisi 7 Il dispositivo di analisi illumigene C difficile include una linguetta di chiusura progettata per evitare la contaminazione dell area di analisi con il prodotto di amplificazione NON usare dispositivi di analisi con linguette danneggiate 8 Eliminare i dispositivi di analisi illumigene subito dopo l uso lasciando chiuse le inguette L apertura del dispositivo dopo l amplificazione pu causare la contaminazione dell area di analisi con il prodotto di amplificazione STABILIT E CONSERVAZIONE La data di scadenza indicata sull etichetta del kit Conservare il kit ad una temperatura compresa fra 2 e 27 C RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Tipo di campione campioni non formati indicativi di CDAD Campioni di feci umane senza conservanti i campioni devono essere trasportati e conservati a 2 8 C prima dell analisi campioni devono essere analizzati il prima possibile ma possono essere conservati fino a 24 ore a 21 27 C o a 5 giorni a 2 8 C campioni che non saranno analizzati entro questi tempi devono essere congelati immediatamente dopo l arrivo e e conservati a lt 20 C fino al momento dell analisi campioni possono essere congelati e scongelati una volta Campioni di feci umane conservati in terreno in base Cary Blair i campioni devono essere trasportati e conservati a 2 8 C prima dell analisi campioni devono essere analizzati il prima possibile ma possono essere conservati fino a un massi
60. lossen belassen Falls das Ger t nach der Amplifikation ge ffnet wird k nnte der Testbereich durch das Amplifikationsprodukt kontaminiert werden HALTBARKEIT UND LAGERUNG Das Verfallsdatum ist auf dem Kit Etikett angegeben Das Kit bei 2 27 C lagern PROBENNAHME UND VORBEREITUNG Probentyp ungeformte Proben die auf Clostridium difficile assoziierte Diarrhoe CDAD hindeuten Humane Stuhlproben ohne Konservierungsmittel Die Proben m ssen in luftdicht verschlossene Transportbeh lter eingegeben werden und bis zum Testen bei 2 8 C gelagert werden Die Proben sind so bald wie m glich zu testen k nnen jedoch bei 21 27 C bis zu 24 Stunden oder bei 2 8 C bis zu 5 Tagen aufbewahrt werden Proben die voraussichtlich nicht innerhalb dieses Zeitraums getestet werden sind unmittelbar nach Eingang einzufrieren und bis zum Testen bei lt 20 C zu lagern Die Proben k nnen einmal eingefroren und aufgetaut werden 12 Humane Stuhlproben in Cary Blair Medium konserviert Die Proben m ssen in luftdicht verschlossene Transportbeh lter eingegeben werden und bis zum Testen bei 2 8 C gelagert werden Die Proben sind so bald wie m glich zu testen k nnen jedoch bei 2 8 C bis zu 5 Tagen aufbewahrt werden Proben die voraussichtlich nicht innerhalb dieses Zeitraums getestet werden sind unmittelbar nach Eingang einzufrieren und bis zum Testen bei lt 20 C zu lagern Die Proben k nnen einmal eingefroren und aufgetaut werden VORBEREITUNG
61. mo di 5 giorni ad una temperatura compresa fra 2 e 8 C campioni che non possono essere analizzati entro questo tempo devono essere congelati immediatamente dopo l arrivo e conservarli a lt 20 C fino al momento dell analisi campioni possono essere congelati e scongelati una volta PREPARAZIONE DEI REAGENTI Prima dell uso accertarsi che i reagenti del kit raggiungano temperatura ambiente 21 27 C Possono verificarsi risultati incorretti se i reagenti di controllo non sono stati portati a temperatura ambiente prima dell uso PREPARAZIONE DEI CAMPIONI NOTA accertarsi che l apparecchio illumipro 10 sia acceso e le verifiche di funzionamento siano state eseguite prima di avviare la procedura di PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Consultare il Manuale dell Operatore illumipro 10 per ulteriori informazioni sulla preparazione e il funzionamento dell apparecchio 1 Miscelare bene il campione fecale 2 Raccogliere il campione miscelato utilizzando lo spazzolino per la raccolta dei campioni a Feci liquide immergere completamente lo spazzolino nel campione b Feci semisolide ruotare lo spazzolino per la raccolta del campione sulla superficie del campione in modo che il campione copra leggermente le setole dello spazzolino Ricoprire approssimativamente met dello spazzolino una quantit eccessiva di campione pu intasare il dispositivo di raccolta del campione 3 Inserire lo spazzolino per la raccolta del campione nel dispositiv
62. mo primer paso a determiner la causa de 7 NEGATIVO la falla Si se repite la falla del Control contacte el Negativo 27 546 573 Control Positivo Servicio T cnico de Meridian al 1 800 343 3858 US Total 126 551 677 o contacte su distribuidor local Resultado NO Reportable Repita el 95 CI procedimiento completo usando la muestra INVALIDO original Preparaci n inadecuada de la muestra Sensitividad 99 104 95 2 89 2 97 9 falla de los reactivos falla del instrumento o falla de E los controles internos Especificidad 546 573 95 3 93 2 96 7 Resultado de Control Incorrecto Repita la prueba Correlaci n 645 677 95 3 93 4 96 6 de control como primer paso a determiner la causa de POSITIVO la falla Si se repite la falla contacte el Servicio 15 27 muestras falsas positivas dieron resultados positivos por un ensayo molecular que ha T cnico de Meridian al 1 800 343 3858 US o sido autorizado por la FDA De los 12 falsos positivos restantes 8 dieron resultados positivos contacte su distribuidor local por un ensayo para GDH Antigeno Comun de C difficile que ha sido autorizado por la FDA Resultado de Control Negativo Valido Reactivos 2 5 muestras falsas negativas dieron resultados negativos por un ensayo molecular que ha None NEGATIVO activos al momento de uso illumipro 10 funcion sido autorizado por la FDA correctamente Resultado NO Reportable Repita el Un total de 697 muestras de pacientes cualificadas fueron analizadas Muestras fu
63. n k nnen zu ung ltigen Ergebnissen f hren qua No LEISTUNGSMERKMALE Der illumigene C difficile Test wurde 2010 bei vier unabh ngigen klinischen Labortestorten die im Mittleren Westen und in s dlichen Regionen der Vereinigten Staaten liegen und beim Hersteller evaluiert Die Testergebnisse sind in der folgende Tabelle 1 aufgef hrt Tabelle 1 Gesamte Leistungsmerkmalsdaten Zytotoxintest auf illumigene C difficile Zellkulturen Positiv Negativ Gesamt Positiv 99 5 104 Negativ 27 546 573 Gesamt 126 551 677 95 VI Sensitivit t 99 104 95 2 89 2 97 9 Spezifit t 546 573 95 3 93 2 96 7 bereinstimmung 645 677 95 3 93 4 96 6 15 der 27 falsch positiven Ergebnissen waren positiv mit einem anderen FDA cleared molecular Test Von den 12 restlichen falsch positiven Ergebnissen waren 8 positiv mit einem FDA cleared GDH Test 2 der 5 falsch negativen Ergebnissen waren negativ mit einem anderen FDA cleared molecular Test Insgesamt wurden 697 qualifizierte Patientenproben analysiert Proben stammten von 274 39 3 M nnern und 419 60 1 Frauen Bei 4 0 6 der Patienten war das Geschlecht nicht bekannt Die Altersgruppen der Patienten von denen die Proben stammten reichten von zwei Jahren bis zu 96 Lebensjahren Es zeigten sich keine auf Geschlecht oder Alter der Patienten zur ckzuf hrenden Testleistungsunterschiede In den folgende
64. n Tabellen 2 und 4 ist die Assay Leistung nach klinischem Standort und Patientenalter aufgef hrt Tabelle 3 fasst die Ung ltigkeitsquote nach klinischem Standort zusammen Tabelle 2 Leistungsmerkmale nach klinischem Standort Ort 1 Ort 2 Ort 3 Gesamt Probent ___ Prozentige Prozentige _ Prozentige __ Prozentige Positive Proben Negative Proben YP bereinstimmung bereinstimmung bereinstimmung bereinstimmung d NET lumigene Negativ 20 20 100 20 20 100 19199 100 59 59 100 mumigene dis io w i ae care Ne se ara SR ET al 25 30 83 29 30 97 28 30 93 82 90 91 fo sa 4 auf Zellkulturen Zellkulturen negativ 9 2 a hi Schwach Gasa 991104 95 2 89 2 97 9 546 573 95 3 93 2 96 7 positiv wu 100 189580 et a ON 9090 109 Oni 4 5 20 0 376 94 58 60 97 5 88 6 99 1 Positiv 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 100 Ort2 12 12 100 75 7 100 62 67 92 5 83 7 96 8 Eine Probe hat ein ung ltiges Instrumentergebnis ergeben Ort 3 20 20 100 83 9 100 87 92 94 6 87 9 97 7 n ort 4 8 8 100 67 6 100 36 39 92 3 79 7 97 3 STUDIEN ZUR KREUZREAKTIVITAT FA z Ons Es wurden Kreuzreaktivitatsstudien mit positiven und negativen Stuhlproben durchgef hrt 0 9 pur i s A 8 p 39159 232 BETTER 309 315 2 239918 die mit Bakterien oder Pilzen in Endkonzentrationen bis zu 1 2 x 10 bzw mit Tabell
65. n Type 2009132 2009155 2009277 REPRODUCIBILITY Blind coded panels of 10 samples were supplied to three independent laboratories for precision studies Samples were randomly sorted within each panel to mask sample identities The panels included contrived samples manufactured at the assay limit of detection n 3 and just below the limit of blank ie high negative sample n 3 The panels also included uncharacterized positive n 2 and negative n 2 samples Testing was performed by different operators at each site on the same day intra assay variability for five days inter assay variability Three lots of illumigene C difficile were used in this study The results are given in the table below Site 1 Site 2 Site 3 Total Sample Percent Percent Percent Percent Type agreement agreement agreement agreement Negative 20 20 100 20 20 100 19 19 100 59 59 100 High Negative 25 30 83 29 30 97 28 30 93 82 90 91 Low Positive 30 30 100 30 30 100 30 30 100 90 90 100 Positive 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 100 1 specimen generated an instrument invalid test result CROSSREACTIVITY STUDIES Crossreactivity studies were performed with positive and negative stool specimens inoculated with bacterial or fungal organisms to a final concentration of 1 2 x 10 or virus at a minimum of 1 x 10 TCIDso mL None of the following organisms in stool reacted with illumigene C d
66. n dispositif de test illumigene C difficile de sa pochette de protection pour chaque chantillon Ouvrir le dispositif avec pr caution en tenant les tubes de mani re ne pas laisser tomber les r actifs lyophilis s au moment de l ouverture Placer le dispositif sur une surface plane ou un portoir appropri En utilisant un nouvel embout de pipette transf rer 50 uL d chantillon du tube de tampon de r action vers le compartiment de TEST bille blanche du dispositif de test illumigene Faire attention ne pas introduire de bulles d air En utilisant un nouvel embout de pipette transf rer 50 uL d chantillon du tube de tampon de r action vers le compartiment de CONTROLE bille jaune du dispositif de test illumigene Faire attention ne pas introduire de bulles d air Fermer le dispositif de test illumigene et bien engager le m canisme de verrouillage Tapoter le dispositif sur la paillasse pour m langer et pour liminer les bulles d air Examiner avec attention les tubes de r action afin de s assurer qu il ne reste aucune bulle d air dans le tube Ins rer le dispositif de test illumigene dans l illumipro 10 et commencer la r action d amplification et de d tection Les r sultats s afficheront a la fin du test INTERPRETATION DES RESULTATS Identification l chantillon R sultat da report Interpr tation Echantillon de L chantillon contient une souche C difficile toxinog ne pr sentant le
67. n1 x 10 TCIDso mL beimpft waren Keine der folgenden im Stuhl vorhandenen Organismen reagierte mit illumigene C difficile Aeromonas hydrophila Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus Campylobacter jejuni Candida albicans Citrobacter freundii Clostridium sordellii Clostridium perfringens Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Escherichia coli Escherichia coli 0157 H7 Escherichia fergusonii Escherichia hermannii Helicobacter pylori Klebsiella pneumoniae Lactococcus lactis Listeria monocytogenes Peptostreptococcus anaerobius Plesiomonas shigelloides Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas fluorescens Salmonella Gruppen B E Serratia liquefaciens Serratia marcescens Shigella boydii Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Adenovirus Typen 40 und 41 Coxsackievirus Echovirus Rotavirus ST RSUBSTANZEN TESTS Die folgenden Substanzen zeigen in den angegebenen ges ttigten L sungen Verd nnungen und den aufgef hrten Endkonzentrationen keine Auswirkungen auf die Testergebnisse Bariumsulfat 5 mg mL Stuhlfette entsprechend 2 65 mg Stearins ure plus 1 3 mg Palmitins ure pro mL H moglobin in Form von Meth moglobin 3 2 mg mL IgA 5 mg mL Imodium ADO 0 00667 mg mL Kaopectate 0 87 mg mL Metronidazole 12 5 mg mL Mucin 3 33 mg mL Mylanta 4 2 mg mL Pepto Bismol 0 87 mg
68. nce fr Meridian Bioscience Inc USA Corporate Office 3471 River Hills Drive Cincinnati Ohio 45244 Telephone 513 271 3700 Orders Customer Service 800 543 1980 Technical Support Center 800 343 3858 Information Fax 513 272 5432 Ordering Fax 513 271 0124 Manufactured By Meridian Bioscience Europe s a n v Rue de l Industrie 7 1400 Nivelles Belgium Tel 32 0 67 89 59 59 Fax 32 0 67 89 59 58 Meridian Bioscience Europe e mail info mdeur be Via dell Industria 7 20020 Villa Cortese MI Italy Tel 39 0331 433636 Fax 39 0331 433616 e mail info mdeur com EC REP Authorized Representative Meridian Bioscience Europe b v Halderheiweg 6 5282 SN Boxtel The Netherlands Tel 31 411 621166 Fax 31 411 624841 e mail meridian info planet nl INTERNATIONAL SYMBOL USAGE You may see one or more of these symbols on the labeling packaging of this product Key guide to symbols Guida ai simboli Guide des symbols Guia de simbolos Erl uterung der graphischen symbole Use By Utilizzare entro Utiliser jusque Fecha de caducidad Verwendbar bis Positive control Controllo positivo Contr le positif Control positivo Positive Kontrolle Batch Code Codice del lotto Code du lot C digo de lote Chargenbezeichnung contro Negative control Controllo negativo Contr le n gatif Control negativo Negative Kontrolle In vitro diag
69. ncorrecte r actif non op rant erreur de l incubateur lecteur ou chec du contr le interne POSITIF NEGATIF NON VALIDE R sultat de Contr le incorrect R p ter le test de contr le comme premi re tape pour d terminer la cause de l chec En cas d chec r p t contacter les services techniques de Meridian ou votre distributeur local R sultat de Contr le N gatif valide sont actifs au moment de leur l illumipro 10 fonctionne correctement Aucun rendu de r sultat R p ter l enti ret du test en utilisant les selles originales Pr paration de l chantillon incorrecte r actif non op rant erreur de l incubateur lecteur ou chec du contr le interne POSITIF Les r actifs Contr le utilisation N gatif NEGATIF NON VALIDE Aucun dispositif de test dans le puits illumipro 10 OU Il n y a pas de r sultat pour le dispositif de test illumigene pr sent cause d une erreur de pr paration de l chantillon d un dispositif sale ou mal install R p ter le test en utilisant les selles originales PUITS VIDE Aucun CONTROLE DE QUALITE 1 oa Chaque dispositif contient un puits de contr le interne qui permet de d celer un probl me d inhibition de l amplification d efficacit des r actifs du test ou de traitement des chantillons Les bonnes pratiques de laboratoire recommandent Putilisation de r actifs de contr le Les utilisateur
70. ne infection associ e aux antibiotiques est de 15 20 bien que des laboratoires diff rents puissent obtenir des taux de positivit sup rieurs ou inf rieurs Pendant la p riode de cette tude en 2010 une incidence de 15 5 a t observ e LIMITES DU TEST 1 Le test ne fait pas la distinction entre les organismes viables et non viables 2 Les r sultats du test doivent tre utilis s en association avec les informations disponibles d valuation clinique du patient et des autres proc dures de diagnostic 3 Ce test est uniquement destin tre utilis sur des selles non form es qui prennent la forme du r cipient conserv es ou sans conservateur Les performances du test sur d autres types d chantillons n ont pas t tablies 4 Les performances du test sur des chantillons de patients g s de moins de deux ans n ont pas t tablies 5 Deux groupes distincts porteurs asymptomatiques de C difficile taux lev s ont pu tre identifi s Des colonisations des taux de 50 ou plus ont t observ s chez les enfants ainsi que des taux jusqu 32 chez des patients atteints de fibrose kystique 6 Ce test ne pr cise pas la susceptibilit aux antibiotiques 7 Ce test d tecte mais ne distingue pas la souche NAP1 Ribotype 027 des autres souches C difficile toxinog nes 8 La d tection des acides nucl iques de la bact rie d pend du pr l vement de la manipulation y compris le transp
71. non va utilizzato come sistema di diagnostica decentralizzata SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST Il test per l analisi molecolare del DNA illumigene C difficile basato sulla tecnica di amplificazione isotermica loop mediata o tecnica LAMP che utilizza primer specificamente designati per il locus di patogenicit PaLoc allo scopo di fornire un amplificazione isotermica continua e specifica del DNA Un sotto prodotto di questa amplificazione la formazione di magnesio pirofosfato che forma un precipitato bianco rendendo torbida la soluzione di reazione Questa presenza di torbidit indica una reazione positiva mentre l assenza di torbidit indica una reazione negativa Il test illumigene C difficile contiene primer che amplificano specificatamente una regione di 204 bp della sequenza conservata in 5 del gene tcdA all interno del PaLoc di C difficile tossigenico in campioni fecali diarroici di pazienti con sospetta diarrea associata a C difficile CDAD I risultati dell analisi sono determinati mediante l utilizzo dell incubatore lettore Meridian illumipro 10 PRINCIPI BIOLOGICI Il Clostridium difficile tossigenico una delle cause principali di malattie diarroiche e coliti associate agli antibiotici ed l agente scatenante di quasi tutti i casi di colite pseudomembranosa Sebbene circa il 2 degli adulti sani sia colonizzato da C difficile molti pazienti acquisiscono questo organismo a seguito di infezione nosocomiale Si
72. nostio medical device Dispositivo medico diagnostico in vitro Dispositif medical de diagnostic in vitro Dispositivo m dico para diagn stico in vitro In Vitro Diagnostikum SMP PREP DIL SPE Sample Preparation Apparatus containing Sample Diluent Apparato per la preparazione del campione contenente il diluente del campione Syst me pour la pr paration de l chantillon diluant inclus Aparato para Preparaci n de Muestra con Diluyente de Muestra System zur Probenvorbereitung in dem sich Probenverd nnungspuffer befindet This product fulfils the requirements of Directive 98 79 EC on in vitro diagnostic medical devices Questo prodotto soddisfa i requisiti della Direttiva 98 79 CE sui dispositivi medico diagnostici in vitro Ce produ t r pond aux exigences de la Directive 98 79 CE relative aux dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro Este producto cumple con las exigencias de la Directiva 98 79 CE sobre los productos sanitarios para diagn stico in vitro Dieses Produkt entspricht den Anforderungen der Richtlinie ber In Vitro Diagnostica 98 79 EG Authorized Representative in the European Community Rappresentante Autorizzato nella Comunit Europea Mandataire dans la Communaut europ enne Representante autorizado en la Comunidad Europea Bevollm chligter in der Europ ischen Gemeinschaft Catalogue number Numero di catalogo R f rence du catalogue N mero de cat logo B
73. nterferiscono con i risultati del test alle concentrazioni finali indicate Solfato di bario 5 mg mL grasso fecale equivalente a 2 65 mg di acido stearico pi 1 3 mg di acido palmitico per mL emoglobina come metaemoglobina 3 2 mg mL IgA 5 mg mL Imodium AD 0 00667 mg mL Kaopectate 0 87 mg mL Metronidazole 12 5 mg mL mucina 3 33 mg mL Mylanta 4 2 mg mL Pepto Bismol 0 87 mg mL Prilosec 0 5 mg mL Tagamet 0 5 mg mL TUMS 0 5 mg mL Vancomycin 12 5 mg mL globuli bianchi 5 V V sangue intero 5 V V FRAN AIS G illumigene difficile Test d amplification de ADN pour la d tection de C difficile toxinog ne dans les chantillons de selles 280050 Dispositif m dical de diagnostic in vitro BUT DE LA METHODE Le test d amplification ADN illumigene C difficile obtenu l aide de l illumipro 10 est un test de diagnostic in vitro qualitatif pour la d tection en direct de Clostridium difficile toxinog ne dans les selles humaines de patientes pour lesquels une maladie associ e au Clostridium difficile est suspect e Le test illumigene C difficile utilise la technique dite LAMP loop mediated isothermal DNA amplification ou amplification isotherme de l ADN facilit e par boucle pour d tecter le locus contr lant la pathog nicit PaLoc de Clostridium difficile toxinog ne Le locus PaLoc de Clostridium difficile est un segment de g ne pr sent dans toutes les souches tox
74. ntrollo esterno illumigene Numero di catalogo 279920 MATERIALI NON FORNITI 1 Guanti di lattice monouso senza talco 2 Puntali per pipette privi di DNAse RNAse e resistenti alla contaminazione da aerosol 3 Controllo di estrazione campione clinico noto positivo o campione negativo inoculato con C difficile tossigenico DISPOSITIVI NON FORNITI f Blocco termostatico a secco con pozzetti da 12 mm temperatura massima di 95 C 2 Vortex 3 Timer 4 Micropipetta in grado di dispensare 50 uL 5 Micropipetta in grado di dispensare 200 uL 6 illumipro 10 PRECAUZIONI 1 Tutti i reagenti sono esclusivamente per uso diagnostico in vitro 2 Seguire le buone pratiche di laboratorio e il livello 2 di biosicurezza durante l analisi Trattare tutti i campioni ed i dispositivi test come in grado di trasmettere agenti infettivi Non mangiare bere o fumare nelle aree dove si maneggiano i campioni o i reagenti del kit 3 Indossare guanti monouso quando si maneggiano i campioni e in seguito lavarsi le mani con cura 4 Applicare i requisiti indicati nei Programmi di controllo di qualit per i laboratori di diagnostica molecolare 5 Il tampone di diluizione del campione illumigene contiene organismi inattivati in formalina e deve essere trattato come potenzialmente infettivo 6 Il dispositivo di analisi illumigene C difficile contiene reagenti liofilizzati Non aprire a busta di protezione finch non si pronti ad eseguire l ana
75. nuierliche isotherme DNA Amplifikation zu sorgen Ein Nebenprodukt dieser Amplifikation ist Magnesiumpyrophosphat dessen Bildung sich in Form einer wei en Ausf llung u ert und dadurch zu einer tr ben Reaktionsl sung f hrt Das Vorliegen einer Tr bung bedeutet eine positive Reaktion w hrend das Fehlen einer Tr bung eine negative Reaktion bedeutet Der illumigene C difficile Assay enth lt spezifische Primer f r die Amplifikation einer 204 bp Region der konservierten 5 Sequenz des tcdA Gens innerhalb des PaLoc des toxigenen C difficile in diarrh artigen Stuhlproben von Patienten bei denen CDAD vermutet wird Die Ergebnisse des Assays werden mit dem illumipro 10 Inkubator Leser von Meridian bestimmt TESTPRINZIP Toxigene Clostridium difficile St mme sind haupts chliche Erreger von Antibiotika assoziierter Diarrh und Kolitis und Erreger nahezu s mtlicher F lle von pseudomembran ser Kolitis Obwohl etwa 2 der gesunden Erwachsenen mit C difficile kolonisiert sind erwerben viele Patienten diesen Organismus durch eine nosokomiale Infektion Es wird davon ausgegangen dass die Wirkung der meisten Antibiotika eine Proliferation des toxigenen C difficile durch St rung der normalen Darmflora erm glicht Von zwei gro en Toxinproteinen TcdA oder Toxin A und TcdB Toxin B wird angenommen dass sie die prim ren Virulenzfaktoren von C difficile sind Diese Toxine werden von zwei unterschiedlichen Genen codiert tcdA bzw tcdB
76. o per la preparazione del campione illumigene C difficile contenente il diluente del campione chiudere bene il tappo Per feci in terreno in base Cary Blair trasferire 200 uL di campione nel dispositivo per la preparazione del campione illumigene C difficile e chiudere bene il tappo Agitare il dipositivo per la preparazione del campione con il vortex per almeno 10 secondi Prima dell estrazione il campione nel dispositivo di preparazione del campione illumigene C difficile pu essere conservato a 2 27 C fino a 24 ore prima dell analisi 4 Rimuovere il tappo dalla punta del dispositivo per la preparazione dei campioni e premere sui lati per dispensare da cinque a dieci gocce di campione in una provetta di estrazione illumigene pulita 5 Ripetere le fasi di preparazione del campione per tutti i campioni da analizzare 6 Riscaldare le provette di estrazione illumigene contenenti il campione miscelato inserendole in un bagno a secco termostatico a 95 C per 10 2 minuti 7 Togliere le provette dal bagno a secco termostatico e agitarle con il vortex per almeno 10 secondi campioni estratti possono essere conservati a 2 8 C per 4 ore O possono essere congelati e conservati a lt 20 C per 1 giorno prima dell aggiunta al buffer di reazione campioni possono essere congelati e scongelati una volta PROCEDURA DEL TEST Il test va eseguito conformemente ai requisiti stabiliti dai competenti enti locali statali nazionali o dagli enti di ac
77. od 5 V V G illumigene c difficile Test di Amplificazione di DNA per il rilevamento di C difficile citotossigenico in campioni fecali REF 280050 IVD Dispositivo medico diagnostico in vitro FINALIT D USO Il test di amplificzione di DNA illumigene C difficile eseguito sul sistema illumipro 10 un test qualitativo diagnostico in vitro per il rilevamento diretto di C difficile tossigenico in campioni di feci umane provenienti da pazienti con sospetta diarrea associata a Clostridium difficile CDAD Il test illumigene C difficile utilizza la tecnica LAMP loop mediated isothermal DNA amplification amplificazione isotermica di DNA loop mediata per rilevare il locus di patogenicit PaLoc di Clostridium difficile tossigenico Il PaLoc di Clostridium difficile un segmento di gene presente in tutti i ceppi tossigenici noti di C difficile Il PaLoc di C difficile codifica entrambi i geni della Tossina A tcdA e della Tossina B tcdB ha regioni terminali conservate e si trova nello stessa posizione sul genoma di C difficile in tutti i ceppi tossigenici Il test illumigene C difficile rileva il PaLoc identificando un frammento parziale di DNA sul gene della Tossina La regione target tcdA stata selezionata come regione conservata presente in tutti i tossinotipi conosciuti A B e A B illumigene C difficile da utilizzarsi in laboratori ospedalieri di riferimento o statali Il dispositivo
78. on fibrosi cistica 6 Questo test non identifica la suscettibilit antimicrobica 7 Questo test rileva ma non distingue il ceppo NAP1 Ribotipo 027 da altri ceppi tossigenici di C difficile 8 Il rilevamento di acido nucleico batterico dipendente dalla raccolta idonea del campione dalla manipolazione includendo il trasporto e la conservazione e la preparazione diluizione ed estrazione Risultati non corretti possono essere Tabella 2 Caratteristiche delle prestazioni per sito Campioni Positivi Campioni Negativi Sito ip Sensibilit er Specificit batterica Fee batterica sel citotossica citotossica Totale 99 104 95 2 89 2 97 9 546 573 95 3 93 2 96 7 Sito 1 4 5 80 0 37 6 96 4 58 60 97 6 88 6 99 1 Sito 2 12 12 100 75 7 100 62 67 92 5 83 7 96 8 Sito 3 20 20 100 83 9 100 87 92 94 6 87 9 97 7 Sito 4 8 8 100 67 6 100 36 39 92 3 79 7 97 3 Sito 5 55 59 93 2 83 8 97 3 303 315 96 2 93 5 97 8 Tabella 3 Percentuale di Risultati Non Validi per sito Valutazione del sito clinico Sito Totale Non Non Validi al test Errore dello Percentuale Non Validi strumento Validi Sito 1 3 3 0 3 68 4 4 Sito 2 1 0 1 1 80 1 3 Sito 3 8 1 7 8 120 6 7 Sito 4 1 1 0 1 48 2 1 Sito 5 7 6 1 7 381 1 8 Totale 20 11 697 1 6 9 697 1 3 20 697 2 9 4 campione rimasto non valido
79. ontrolle POSITIV Unkorrektes Kontrollergebnis Wenn die erwarteten Reaktionen f r die Kontrollen nicht beobachtet werden zur Ermittlung der Ursache des Versagens als Erstes die Kontrolltests wiederholen Lassen sich auch bei wiederholten Tests die erwarteten Reaktionen nicht erzielen bitte rufen Sie den Technischen Support von Meridian Bioscience an USA 001 800 343 3858 oder wenden Sie sich an Ihren zust ndigen Auslieferer NEGATIV G ltiges negatives Kontrollergebnis Die Reagenzien waren w hrend der Testdurchf hrung aktiv illumipro 10 ist einwandfrei gelaufen UNG LTIG Kein auswertbares Ergebnis Den ganzen Test mit den urspr nglichen Stuhlproben wiederholen Unsachgem e Probenvorbereitung Versagen des Reagenzes Versagen des Instruments oder Versagen der internen Kontrolle LEERE VORRICHTUNG KEINE Kein illumigenes Testger t in der illumipro 10 Vorrichtung ODER Das Ilumigene vorhandene Testger t ist wegen unsachgem er Probenvorbereitung beschmutzten Testger t oder wegen schlecht angepassten Testger ts gef hrdet Den Test mit der urspr nglichen Stuhlprobe wiederholen QUALIT TSKONTROLLE 1 Jedes Ger t besitzt eine interne Kontrollvertiefung die die Amplifikationsinhibition Assayreagenzien und Effizienz der Probenverarbeitung kontrolliert 24 Die Regeln der guten Laborpraxis empfehlen den Einsatz von Kontrollmaterialien Benutzer sollten entsprechende
80. ort et la conservation et de la pr paration dilution Table 4 R sultats selon l ge du patient Echantillons Positifs Echantillons N gatifs Age du illumigene illumigene atient Illumigene se mumigene PR E Culture y 95 IC Culture Spie 95 IC toxig nique a toxig nique d gt 2 12 ans 10 11 90 9 62 3 98 4 75 79 94 9 87 7 98 0 dr 5 5 100 56 6 100 53 56 94 6 85 4 98 2 gt 21 ans 83 87 95 4 88 8 98 2 417 437 954 93 0 97 0 Age inconnu An 100 20 7 100 An 100 20 7 100 SENSIBILITE ANALYTIQUE La sensibilit analytique de ce test pour le C difficile est bas e sur 20 r plicats pour chaque mesurande avec une probabilit fixe p ex 95 ou 19 20 r plicats sont positifs d obtenir des r ponses positives aux niveaux suivants de mesurande et extraction Des r sultats incorrects peuvent tre observ s en cas de non respect des instructions de pr l vement de manipulation et ou de pr paration eee de Toxinotype Ph notype LdD Test PERFORMANCES DU TES ope uey ER VPI 10463 0 A B 4 CFUltest La trousse illumigene C difficile a t valu e en 2010 par quatre laboratoires cliniques ind pendants situ s dans les r gions du Midwest et du Sud des Etats Unis ainsi que chez 2007431 I NAP1 A B 32 CFU test le producteur Les performances globales sont p
81. pecifically designed primers to the PaLoc pathogenicity locus to provide for specific and continuous isothermal DNA amplification A by product of this amplification is the formation of magnesium pyrophosphate which forms a white precipitate leading to a turbid reaction solution This presence of turbidity signifies a positive reaction while the absence of turbidity represents a negative reaction The illumigene C difficile assay contains primers that specifically amplify a 204 bp region of the conserved 5 sequence of the tcdA gene within the PaLoc of toxigenic C difficile in diarrheal stool samples from patients suspected of having C difficile associated disease CDAD The results of the assay are determined using the Meridian illumipro 10 Incubator Reader BIOLOGICAL PRINCIPLES Toxigenic Clostridium difficile is a major cause of antibiotic associated diarrhea and colitis and is the causative agent for virtually all cases of pseudomembranous colitis Although about 2 of normal healthy adults are colonized with C difficile many patients acquire this organism through nosocomial infection Exposure to most antibiotics is thought to allow proliferation of toxigenic C difficile by disrupting the normal intestinal flora Two large toxin proteins TcdA or toxin A and TcdB toxin B are thought to be the primary virulence factors of C difficile These toxins are encoded by two separate genes named tcdA and tcdB respectively Together with th
82. r paration de l Echantillon peut tre conserv avant extraction jusqu 24H 2 27 C avant de proc der au test Retirer le capuchon de l embout du Systeme de Pr paration de l Echantillon et presser sur celui ci pour dispenser entre cinq et dix gouttes d chantillon dans un tube d extraction illumigene Chauffer les tubes d extraction illumigene contenant les chantillons m lang s dans un bloc chauffant 95 C pendant 10 2 minutes Retirer les tubes du bloc chauffant et m langer au vortex pendant au moins 10 secondes Les chantillons extraits peuvent tre conserv s pendant 4H 2 8 C OU peuvent tre congel s et conserv s lt 20 C pendant 1 jour avant de l ajouter au tampon de r action Les chantillons extraits peuvent tre congel s et d congel s une seule fois PROCEDURE DE TEST Ce test doit tre r alis en fonction des exigences des r glementations locales regionales et ou nationales ou des directives des organismes d accreditation REMARQUE 10 chantillons au maximum peuvent tre analys s au cours d une seule 1 2 ex cution de l illumipro 10 Transf rer 50 uL de l chantillon extrait dans un tube de tampon de r action illumigene marqu de fagon appropri e M langer le tube de tampon de r action contenant l chantillon extrait au vortex pendant 10 secondes environ R p ter les tapes 1 et 2 pour tous les chantillons analyser avant de continuer Retirer u
83. r sent es en table 1 CFI VIII A B 64 CFU test Table 1 Performances globales 2006240 V NAP7 A B 32 CFU test BI8 Ill A B 64 CFU test illumigene C difficile 2007858 IX XXIII A B 32 CFU test Culture cytotoxique Positif N gatif Total 8864 x A IB 64 CFU test Positie 7 103 REACTIVITE DU DOSSAGE N gatif 27 546 573 Les cultures de C difficile suivantes provenant de diff rentes sources ont t test es et ont donn des r actions positives 64 CFU test avec le test illumigene C difficile Total 126 551 677 Type 0 Souches 10463 2004111 2004205 2005070 2005257 2008029 2008162 95 CI 2008341 2008351 2009066 2009099 B1 G1 J7 K12 Y1 Type Ill 2004052 2004118 2007431 BI17 BI8 Type V 2005325 2006240 2008188 2009018 2009065 BK6 Sensibilit 99 104 95 2 89 2 97 9 Type VIII 43598 2008016 CF1 Type X 8864 Type XII 2007435 Type IX XXIII 2007858 Sp cificit 546 573 95 3 93 2 96 7 Type inconnu 2009132 2009155 2009277 Corr lation 645 677 95 3 93 4 96 6 REPRODUCTIBILITE DU TEST pa STR y 15 27 des r sultats faussement positifs ont t observ s positifs avec un autre test mol culaire Des panels de 10 chantillons cod s a aveugle ont ete fournis a trois laboratoires approuv par la FDA Food and Drug Administration Des 12 r sultats faussement positifs ind pendants pour des tudes de pr cision Les chantillons ont t tri s de fa on restants 8 ont t observ s posit
84. ree additional genes they form a 19 6 kb pathogenicity locus called PaLoc REAGENTS MATERIALS PROVIDED The maximum number of tests obtained from this test kit is listed on the outer box 1 illumigene C difficile Sample Preparation Apparatus Sampling unit consisting of sample preparation chamber dropper tip cap and Sample Dilution Buffer Phosphate Buffered Saline and formalin treated Staphylococcus aureus with sodium azide 0 09 as a preservative 2 illumigene Reaction Buffer Tris buffered solution containing sodium azide 0 09 as a preservative 3 illumigene C difficile Test Device Two separate chambers containing dry reagent lyospheres comprised of DNA polymerase Deoxyribonucleoside Triphsophate dNTPs and either C difficile specific primers TEST Chamber or S aureus primers CONTROL Chamber 4 Sample Collection Brushes 5 illumigene Extraction Tubes MATERIALS PROVIDED SEPARATELY illumigene External Control Kit Catalog Number 279920 MATERIALS NOT PROVIDED 1 Disposable latex gloves powder free 2 DNAse RNAse free aerosol resistant pipette tips 3 Extraction Control known positive clinical sample or a negative sample spiked with toxigenic C difficile EQUIPMENT NOT PROVIDED Dry bath with 12 mm heat block capable of 95 C Vortex mixer Interval timer Micropipette capable of dispensing 50 uL Micropipette capable of dispensing 200 uL illumipro 10 PARONA PRECAUTIONS 1 All reagents are for in vit
85. result Do not report test Table 1 Overall performance data Control A result Repeat the extraction process for INVALID all stool samples l Cytotoxic bacterial illumigene C difficile Inhibitory patient specimen improper sample cultura ci preparation reagent failure instrument failure Positive Negative Total or internal control failure TE Ra Valid positive control result Reagents active Positive 33 gt 194 POSITIVE at time of use illumipro 10 performing Negative 27 546 573 correctly Incorrect control result Repeat control Total 126 951 677 testing as the first step in determining the root 0 95 CI NEGATIVE cause of the failure If control failures are Positive Control repeated please contact Meridian s Technical Sensitivity 99 104 95 2 89 2 97 9 Services at 1 800 343 3858 US or your local distributor Specificity 546 573 95 3 93 2 96 7 No reportable result Repeat entire assay Correlation 645 677 95 3 93 4 96 6 run using original stool samples CESSE E PA A saro ZI INVALID Improper sample preparation reagent failure 15 27 false positive results were positive by another FDA cleared molecular assay Of the instrument failure or internal control failure remaining 12 false positive results 8 were positive by a FDA cleared assay for the detection of GDH Incorrect control result Repeat control A testing as the first step in determining the root 2 5 false negative results were negative by another FDA cleared mo
86. ro diagnostic use only 2 Follow Biosafety Level 2 and Good Laboratory practices during testing Treat all specimens and used Test Devices as capable of transmitting infectious agents Do not eat drink or smoke in areas where specimens or kit reagents are handled 3 Wear disposable gloves while handling specimens and thoroughly wash hands afterwards Quality Control Programs for Molecular Testing Laboratories should be employed illumigene Sample Dilution Buffer contains formalin inactivated organisms and should be treated as potentially infectious 6 The illumigene C difficile Test Device contains lyophilized reagents The protective pouch should not be open until ready to perform the assay 7 The illumigene C difficile Test Device includes a latch feature that is designed to prevent contamination of the test area with amplification product Do NOT use Test Devices with broken latches 8 Dispose of used illumigene Test Devices immediately after processing leaving the device latch securely in place Opening the device after amplification may result in contamination of the test area with amplification product ee SHELF LIFE AND STORAGE The expiration date is indicated on the kit label Store the kit at 2 27 C SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Sample type Unformed samples indicative of CDAD Human stool samples unpreserved Samples should be transported and stored at 2 8 C prior to testing Samples should be tested as
87. s doivent suivre les directives locales r gionales et ou nationales relatives l ex cution des contr les externes de qualit Les r actifs de contr le externe illumigene C difficile peuvent tre obtenus s par ment R f rence du catalogue 279920 Il est recommand que la r activit de chaque nouveau lot et chaque nouvelle livraison de trousse illumigene C difficile soient v rifi es la r ception et avant usage Les tests de contr le externe doivent tre effectu s en fonction des exigences locales f d rales et ou nationales La trousse illumigene C difficile ne devrait pas tre utilis e pour les tests d chantillons de patient lorsque les contr les ne produisent les r sultats escompt s Un dispositif diff rent doit tre utilis pour chaque contr le externe test NE PAS extraire les contr les positif ou n gatif Un Contr le d Extraction tel un chantillon de selle positif ou un chantillon de selle n gatif inocul avec une souche C difficile toxinog ne doit tre inclus dans chaque s rie d extraction Le Contr le d Extraction doit tre trait comme un chantillon VALEURS ATTENDUES La fr quence des diarrh es associ es aux antibiotiques et provoqu es par C difficile d pend de diff rents facteurs comme la population de patients le type d institution et l epidemiologie L incidence report e des infections associ es C difficile chez les patients chez qui on soupgonne u
88. t t Vortexmischer Intervallzeitgeber Mikropipette mit Abgabekapazit t von 50 uL Mikropipette mit Abgabekapazit t von 200 uL illumipro 10 DORO D VORSICHTSMASSNAHMEN 1 S mtliche Reagenzien sind ausschlie lich f r die In vitro Diagnostik bestimmt 2 Befolgen Sie empfohlene Gesichtspunkten Bio Sicherheit Stufe 2 und gute Laborpraktiken GLP w hrend des Tests Alle Proben und verbrauchte Testger te als POTENZIELLE BIOHAZARD STOFFE behandeln In Bereichen in denen Proben oder Kit Reagenzien gehandhabt werden darf nicht gegessen getrunken oder geraucht werden 3 Bei der Handhabung von Proben stets Einmal Handschuhe tragen und danach die H nde gr ndlich waschen 4 Es sollten Qualit tssicherungsprogramme f r Labors eingesetzt werden die Molekulartests durchf hren 5 Der illumigene Probenverd nner enth lt mit Formalin inaktivierte Organismen und sollte wie potentiell biogef hrliches Material entsorgt werden 6 Das illumigene C difficile Testger t enth lt lyophilisierte Reagenzien Der Schutzbeutel sollte erst unmittelbar vor der Durchf hrung des Assays ge ffnet werden 7 Das illumigene C difficile Testger t besitzt eine Verschlusslasche die vor Kontaminierung des Testbereichs durch das Amplifikationsprodukt sch tzen soll KEINE Testger te mit defekten Verschlusslaschen verwenden 8 Gebrauchte illumigene Testger te unmittelbar nach der Verarbeitung entsorgen und die Verschlusslasche dabei fest gesch
89. tas federales estatales y locales apropiadas con respecto a c mo realizar controles de calidad externos 3 Los Reactivos de Control Externo illlumigene C difficile se suplen por separado Cat 279920 Se recomienda que la reactividad de cada lote nuevo y cada embarque nuevo de illumigene C difficile sea verificado al recibirse y antes de usar Los Controles Externos deben ser realizados peri dicamente de ah en adelante La prueba illumigene C difficile no debe ser usada para pruebas de pacientes si los controles externos no producen los resultados correctos Se debe usar un dispositivo separado por cada control externo NO Extraiga las muestras de Control Positivo o Negativo El Control de Extracci n muestras cl nica confirmadas como positivas o muestras negativas con C difficile toxig nico a adido debe ser incluido cada vez que se corre la extracci n El Control de Extracci n debe ser tratado como una muestra de paciente Oar VALORES ESPERADOS La frecuencia de la diarrea asociada a antibidticos causada por C difficile depende de varios factores incluyendo la poblaci n de pacientes el tipo de instituci n y la epidemiologia La incidencia que se reporta de enfermedad causada por C difficile en pacientes con enfermedad asociada a antibi ticos es de 15 20 aunque diferentes facilidades pueden encontrar niveles de positividad fuera de esta gama La incidencia de C difficile toxig nico durante ste studio en el 20
90. te la ejecuci n de la prueba Trate todas las muestras y los Dispositivos de Prueba como agentes capases de transmitir infecci n No coma ni beba ni fume en las reas en las que se est n manejando muestras o reactivos del equipo 3 Use guantes desechables mientras maneje las muestras y l vese las manos cuidadosamente al terminar 4 Deben emplearse los Programas de Control de Calidad para laboratorios que hacen pruebas moleculares 5 El Tamp n de Diluci n de Muestra illumigene contiene organismos inactivados con formalina y debe tratarse como si fuera potencialmente infeccioso 6 El Dispositivo para la Prueba illumigene C difficile contiene reactivos liofilizados La bolsa protectora no debe abrirse hasta que no est todo listo para realizar la prueba 7 El Dispositivo para la Prueba illumigene C difficile contiene un sistema de cierre dise ado para prevenir la contaminaci n del rea de la prueba con el producto de amplificaci n NO use Dispositivos para la Prueba con cierres da ados 8 Inmediatamente despu s del procedimiento deseche los Dispositivos para la Prueba illumigene y aseg rese de que la pesta a de cierre del dispositivo est en su sitio La apertura del dispositivo despu s de la amplificaci n puede causar contaminaci n del rea de prueba con producto de amplificaci n VIDA TIL Y ALMACENAMIENTO La fecha de caducidad est indicada en la etiqueta de la caja Almacene entre 2 27 C RECOLECCI N Y PRE
91. ur les r sultats du test sulfate de baryum 5 mg mL graisses f cales quivalentes 2 65 mg d acide st arique plus 1 3 mg d acide palmitique par mL h moglobine en tant que m th moglobine 3 2 mg mL IgA 5 mg mL Imodium ADO 0 00667 mg mL Kaopectate 0 87 mg mL Metronidazole 12 5 mg mL mucine 3 33 mg mL Mylanta 4 2 mg mL Pepto Bismol 0 87 mg mL Prilosec 0 5 mg mL Tagamet 0 5 mg mL TUMS 0 5 mg mL Vancomycin 12 5 mg mL globules blancs 5 V V sang total 5 V V G illumigene c difficile Prueba de amplificaci n de DNA para la detecci n de C difficile citotoxig nico en muestras de materia fecal 280050 Dispositivo m dico para diagn stico in vitro USO INDICADO La prueba de amplificaci n de DNA illumigene C difficile se lleva a cabo en el illumipro 10 y es una prueba in vitro diagnostica cualitativa para la detecci n directa de Clostridium dificile toxig nico en muestras de heces humanas de pacientes que se sospechan tener diarrea asociada con C difficile CDAD en ingl s La prueba illumigene C difficile utiliza la tecnolog a de amplificaci n de DNA isot rmica de lazo mediado LAMP para detectar el locus de patogenicidad PaLoc de Clostridium difficile toxig nico El PaLoc de Clostridium difficile es un segmento del gene que esta presente en todas las cepas toxig nicas de C difficile El PaLoc de C difficile codifica tanto el gen de la toxina A tcdA como el g

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