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300-8501 Rev D Xpert HemosIL CE-IVD PI_MultiLang.book

1. Utilizar el cartucho antes de que transcurran 30 minutos despu s de abrir la tapa A Materiales necesarios pero no suministrados Xn R22 R36 38 Ud Sistema GeneXpert Dx el n mero de cat logo depende de la configuraci n instrumento GeneXpert ordenador esciner para c digo de barras y el Manual del Operador del GeneXpert Dx Nota El n mero de cat logo del sistema GeneXpert Dx depende de la configuraci n Contactar con Cepheid para consultar la configuraci n requerida con su correspondiente n mero de cat logo Versi n de Software del GeneXpert Dx 4 0 o superior Pipeta con puntas de filtro para dispensar 50 uL de sangre total anticoagulada con citrato o EDTA HemosIL FII amp FV DNA Control P N 0020003500 Advertencias y Precauciones Nocivo si se ingiere R22 irritante para ojos y piel R36 38 Tratar todas las muestras biol gicas incluidos los cartuchos usados como si fueran agentes potencialmente infecciosos Debido a que a menudo no es posible conocer qu muestras son infecciosas todas las muestras biol gicas deber an tratarse con las precauciones generales Las pautas para la manipulaci n de muestras se encuentran disponibles en los centros de Control y Prevenci n de Estados Unidos y en el Instituto de Est ndars de Laboratorio y Cl nico antiguamente Comit Nacional de Estandarizaci n del Laboratorio Cl nico Seguir los procedimientos de seguridad de sus instituciones para trab
2. NO RESULT A presen a ou aus ncia dos alelos normal ou mutante do Factor II Factor V n o podem ser determinados repita o ensaio Os dados recolhidos foram insuficientes por exemplo tal pode suceder se o operador tiver parado um teste que estava em progresso NO RESULT SEM RESULTADO Probe Check verifica o da sonda NA N o aplic vel Raz es para repetir o ensaio Repita o ensaio utilizando um novo cartucho n o re utilize o cartucho novos reagentes l quidos 1 e 2 e uma nova al quota de sangue total em citrato de s dio ou EDTA Um resultado INVALID INVALIDO indica que a amostra n o foi adequadamente processado ou o PCR foi inibido Um resultado ERROR ERRO indica que o controlo de verifica o da sonda falhou e que o ensaio foi abortado o que se dever provavelmente ao enchimento inadequado de um tubo de reac o um problema de integridade da sonda de reagente foi detectado ou porque os limites da press o m xima foram excedidos ou ainda porque houve falha de um componente do sistema ONO RESULT SEM RESULTADO indica que os dados recolhidos foram insuficientes Por exemplo tal pode suceder se o operador tiver parado um teste que estava em progresso a ser realizado Limita es O desempenho do Xpert HemosIL Factor II amp Factor V foi validado utilizando o procedimento fornecido apenas no folheto informativo As modifica es destes procedimentos podem alterar o desempenho do ensaio Os
3. Site 1 Site 2 Site 3 concord ncia ID da amostra Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 total por amostra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor Il HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor VNOR Factor INOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor VHOM Factor INOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Factor V HET concord ncia 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 total por operador a a de A a X Sem resultados discordantes Uma amostra foi indeterminada depois de reanalisada 300 8501 Rev D September 2011 97 Portugu s Tableau 5 Resumo dos resultados de reprodutibilidade por Operador Factor V Site 1 Site 2 Site 3 concord ncia total por ID da amostra Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Op Op 2 amostra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor Il HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 6
4. d chantillons Nombre Nombre de la premi re d invalides lors issue de la corrects d invalides Agr ment d chantill s rie de la premi re premiere s rie incluant les incluant les incluant les G notype onstest d analyses s rie d analyses d analyses r analyses r analyses r analyses Facteur II G20210A Sauvage 968 927 41 95 8 963 5 99 5 HET 50 48 2 96 0 48 2 96 0 HOM 7 7 0 100 0 7 0 100 Overall 1025 gt 982 43 95 8 1018 7 99 3 Facteur V G1691A Sauvage 895 860 35 96 1 889 6 99 3 HET 114 108 6 94 7 113 1 99 1 HOM 12 11 1 91 7 12 0 100 0 Overall 1021 979 42 95 9 1014 7 99 3 Aucun r sultat discordant Les r sultats invalides se r f rent des r sultats ind termin s PLes r sultats du s quen age bi directionnel pour le facteur II n taient pas disponibles pour 4 chantillons Les r sultats du s quencage bi directionnel pour le facteur V n taient pas disponibles pour 8 chantillons Le g notype Sauvage est normal Sp cificit analytique Afin de d terminer la sp cificit analytique du test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V des s quences de g ne normal contenant des silent single nucleotide polymorphisms SNPs dans la r gion d appariement de la sonde ou l ext rieur de cette zone ont t synth tis es La pr sence de SNP dans la r gion d appariement de la sonde a donn lieu dans la majorit des cas l obtention d un r sultat invalide Quand le
5. 4 Technical standards and guidelines Venous thromboembolism Factor V Leiden and prothrombin G20210A testing A disease specific supplement to the standards and guidelines for clinical genetics laboratories Elaine B Spector Wayne W Grody Carla J Matteson Glenn E Palomaki Daniel B Bellissimo Daynna J Wolff Linda A Bradley Thomas W Prior Gerald Feldman Bradley W Popovich Michael S Watson and C Sue Richards ACMG Standards and Guidelines July August 2005 Vol 7 No 6 5 Centers or Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Grody WW Griffin JH Taylor AK et al American college of medical genetic consensus statement on factor V leiden mutation testing Genetics in Medicine 2001 3 2 139 148 32 300 8501 Rev D September 2011 Tableau des Symboles Tableau 8 Signification des symboles wo lt 3 gt ER Signification Num ro de r f rence Dispositif m dical de diagnostic in vitro Ne pas r utiliser Attention consulter les documents joints Fabricant Contient le n cessaire pour lt n gt tests
6. Contr le jae gt od CONTROL Marquage CE Conformit europ enne M Mm Mandataire tabli dans la Communaut europ enne E El Temp rature dirig e ta o o ES Risque Biologique La Manufacturer Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Authorized Representative Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Distributed exclusively by Q Instrumentation Laboratory C vo 300 8501 Rev D September 2011 Tableau des Symboles 33 Frangais 34 300 8501 Rev D September 2011 Deutsch In Vitro Diagnostikum Markenname Xpert HemosIL FI amp FV Gebr uchlicher Name Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Verwendung Der Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit ist ein qualitativer in vitro diagnostischer Genotypisierungstest f r die Erfassung von Faktor II und Faktor V Allelen aus Natriumcitrat oder EDTA Vollblut Der Test wird auf dem Cepheid GeneXpert Dx System durchgef hrt Dieser Test dient zur Bereitstellung von Ergebnissen f r Faktor II G20210A und Faktor V Leiden G1691A Mutationen zur Unterst tzung der Diagnose von Patienten mit Verdacht auf eine Thrombophilie Prinzip und Zusammenfassung Der Zusammenhang von Faktor II G20210A und Faktor V Leiden G1691A
7. 92 300 8501 Rev D September 2011 Controlo de qualidade Figure 10 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado FII e FV heterozig tico Figure 11 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado FII e FV homozig tico 300 8501 Rev D September 2011 93 Portugu s INVALID A presen a ou aus ncia dos alelos normal ou mutante do Factor II Factor V n o pode ser determinada repita o ensaio de acordo com as instru es seguintes A amostra n o foi adequadamente processada ou o PCR foi inibido INVALID a presen a ou aus ncia dos alelos normal ou mutante do Factor II Factor V n o pode ser determinada Probe Check verifica o da sonda PASS todos os resultados de verifica o da sonda passam ERROR A presen a ou aus ncia dos alelos normal ou mutante do Factor I Factor V n o pode ser determinada repita o ensaio de acordo com as instru es seguintes O Probe Check Control falhou e o ensaio abortou provavelmente devido ao enchimento inadequado de um tubo de reac o um problema de integridade da sonda foi detectado ou porque os limites da press o m xima foram excedidos ou ainda por falha de um componente do sistema ERROR Probe Check verifica o da sonda FAIL FALHOU um ou mais resultados da verifica o da sonda falharam se a verifica o da sonda passou o erro est a ser causado por uma falha de um componente do sistema
8. Accendere lo strumento GeneXpert Dx e successivamente il PC il software GeneXpert si avvia automaticamente Inserire la login e password qualora fosse stata configurata Cliccare sulla barra di navigazione Create Test Leggere con lo scanner il barcode riportato sull etichetta della cartuccia Sto e E SS I Inserire l identificativo del Campione accertarsi di inserire il corretto identificativo possibile far leggere ID campione con il lettore barcone Sample ID MT01800 Name Version Select Assay Xpert HemosiL FII 1 v Xpert HemosiL FII Xpert HemoslL FV Select Module Reagent Lot ID Xpert HemosiL Fil amp FV Combo Test Type Specimen v Sample Type other v Other Sample Type Notes Start Test Scan Cartridge Barcode Cancel Figure 2 Schermata Crea nuovo test 6 Selezionare dal men a tendina Select Assay Seleziona saggio il test da eseguire 7 Fare clic su Start Test Avvia analisi nella finestra di dialogo visualizzata digitare la password 8 Inserire la cartuccia nella posizione libera disponibile identificabile da una luce verde intermittente posta in corrispondenza del modulo 9 Chiudere lo sportellino La luce passer da un verde intermittente a fissa Quando sar finita l analisi la luce si spegnera 10 A fine analisi lo sportellino si apre e si pu rimuovere la cartuccia 11 Gettare la cartuccia utilizz
9. C ffnen Sie den Deckel der Kartusche erst wenn Sie bereit sind die Testung durchzuf hren Im Fall eines internen Druckanstieges ber die vom Hersteller festgelegte Grenze wird der Lauf automatisch abgebrochen und ein FEHLER Ergebnis angezeigt F r alle Reagenzien dieser Untersuchung sind Sicherheitsdatenbl tter MSDS Material Safety Data Sheet beim Technischen Support von Cepheid und auf Cepheids Webseites www Cepheid com www cepheidinternational com auf Anfrage erh ltlich Das bovine Serumalbumin BSA in diesem Produkt wurde ausschlie lich aus bovinen Plasmaquellen in den USA gewonnen Die Produktion des BSA erfolgte ebenfalls in den Vereinigen Staaten Die Tiere wurden weder mit Proteinen von Wiederk uern noch anderen Tieren gef ttert Die Tiere durchliefen erfolgreich die ante und post mortem Testung W hrend der Weiterverarbeitung fand keine Durchmischung mit anderen tierischen Materialien statt Probengewinnung und Lagerung Folgenden Sie der Anleitung in diesem Absatz zur Gewinnung von geeignetem Probenmaterial 1 2 3 Nur ausgebildetes und autorisiertes Personal sollte Blut in EDTA oder Natriumcitrat R hrchen abnehmen Die Blutproben d rfen nicht zentrifugiert werden oder durch Entnahme von Plasma konzentriert werden Die Blutproben sollten bei Lagerung bei Raumtemperatur 22 28 C innerhalb von 24 Stunden bearbeitet werden Die Lagerung ber 24 Stunden sollte bei 2 8 C erfolgen Die Blutproben sind bei L
10. Document M29 refer to latest edition Grody WW Griffin JH Taylor AK er al American college of medical genetic consensus statement on factor V leiden mutation testing Genetics in Medicine 2001 3 2 139 148 300 8501 Rev D September 2011 15 English Table of Symbols Tableau 8 Symbol Meaning Y lt 3 gt e Meaning Catalog number In vitro diagnostic medical device Do not re use Caution consult accompanying document Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests CONTROL Control j lt Eeg CE marking European Conformity M Mm Authorized representative in the European Community Temperature limitation Biological hazard Manufacturer Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Authorized Representative Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Distributed exclusively by Q Instrumentation Laboratory C vo 300 8501 Rev D September 2011 Frangais Dispositif m dical 4 usage Diagnostique In Vitro Marque Xpert HemosIL FI amp FV D signation commerciale Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Utilisation Le r actif Xpert HemosIL FII amp FV est un test qualitatif de typage g n tique usage diagnostique in vitro Il est utilis po
11. amp Factor V vs Secuenciaci n Bidireccional Numero de resultados Numero de Numero de Numero de correctos resultados no Concordancia Resultados Resultadosno Concordancia incluyendo los v lidos en despu s de Numero correctosenla v lidos en la en la primera que se repetici n de repetir una Genotipo Analizado primera sesi n primera sesi n sesi n repitieron sesiones sesi n Factor II G20210A wT 968 927 41 95 8 963 5 99 5 HET 50 48 2 96 0 48 2 96 0 HOM 7 7 0 100 0 7 0 100 Global 1025 982 43 95 8 1018 7 99 3 Factor V G1961A WT 895 860 35 96 1 889 6 99 3 HET 114 108 6 94 7 113 1 99 1 HOM 12 11 1 91 7 12 0 100 0 Global 1021 979 42 95 9 1014 7 99 3 a z n i No hay discordancia en los resultados Resultados no v lidos referidos a resultados indeterminados Resultados de secuenciaci n bidireccional para Factor Il no disponibles para 4 muestras Cc elit 4 A Resultados de secuenciaci n bidireccional para Factor V no disponibles para 8 muestras dwr wildtype es normal Especificidad Anal tica Para evaluar la especificidad anal tica del Ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V se sintetizaron secuencias de genes normales que conten an polimorfismos de nucle tidos simples silentes SNPs en la regi n de uni n a la sonda as como fuera de la regi n de 300 8501 Rev D September 2011 63 Espanol uni n a la sonda La presencia de SNP adicionale
12. nden zu Interferenzen bei den PCR Ergebnissen f hren und ein invalides oder fehlerhaftes Ergebnis liefern Untersuchungen mit potentiell interferierenden Substanzen haben keine Inhibition gezeigt bei Heparin bis zu 14 3 USP Units mL Bilirubin bis zu 16 mg dL zugef gtem Cholesterol bis zu 250 mg dL oder Gesamttriglyceriden Lipiden bis zu 1932 mg dL Bei Verwendung von Vollblutproben die einmalig eingefroren und wieder aufgetaut wurden wurden keine Einschr nkungen beobachtet h molysiertes Blut Bei Proben die sowohl mit EDTA als auch mit Natriumcitrat antikoaguliert wurden sind keine statistisch signifikanten Unterschiede festgestellt worden Erwartete Werte Faktor II G20210A und Faktor V Leiden G1691A Mutationen treten bei 2 bzw 5 der Bev lkerung auf Testcharakteristik Klinische Beurteilung Die Testcharakteristik des Xpert Hemosll Faktor II amp Faktor V Tests wurde in einer Multicenter Studie an sieben Institutionen durch Vergleich des Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkits mit der bidirektionalen Sequenzierung bestimmt Es wurden die Vollblutproben eingesetzt die routinem ig zur Bestimmung von Faktor II und oder Faktor V bestimmt waren Zuerst wurden die Proben mit der Routinemethode jedes teilnehmenden Labors bestimmt und anschlie end Aliquots f r die Studientestung mit dem Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit am GeneXpert System gesammelt Die extrahierte DNA wurde zur Durchf hrung der bidi
13. partir des signaux de fluorescence mesur s puis interpr t s l aide d algorithmes afin d identifier les g notypes et enfin affich s dans la fen tre Visualiser r sultats Pour les r sultats Xpert HemosIL FII figures 3 5 300 8501 Rev D September 2011 21 Frangais Fil NORMAL Figure 3 Systeme GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat normal FII Figure 4 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat h t rozygote FII 22 300 8501 Rev D September 2011 Figure 5 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat homozygote FII Pour les r sultats Xpert HemosIL FV figures 6 8 FV NORMAL Figure 6 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat normal FV 300 8501 Rev D September 2011 Interpr tation des R sultats 23 Frangais Figure 7 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat h t rozygote FV Figure 8 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat homozygote FV 24 300 8501 Rev D September 2011 Interpr tation des R sultats Pour les r sultats Xpert HemosIL FII amp FV Combo figures 9 11 Figure 9 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat normal FII amp FV Figure 10 GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat h t rozygote FII amp F
14. 10 100 10 10 100 30 30 concord ncia total por 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 lote 98 300 8501 Rev D September 2011 Refer ncias Tableau 7 Resumo dos resultados de reprodutibilidade por lote Factor V concordancia ID da amostra Lot1 Lot 2 Lot 3 total por amostra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II HET Factor VNOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HOM Factor VNOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor VHOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor VHET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 concord ncia total por 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 lote Refer ncias 1 2 Thrombophilia as a multigenic disease B Zoeller P G de Frutos A Hillarp B Dahlback Haematologica 1999 84 59 70 Screening for inherited thrombophilia indications and therapeutic implications V De Stefano E Rossi K Paciaroni G Leone Haematologica 2002 87 1095 1108 Laboratory investigation of thrombophilia A Tripodi and P M Mannucci Clinical Chemistry 2001 47 1597 1606 Technical standards and guidelines Venous thromboembolism Factor V Leiden and prothrombin 20210G gt A testing A disease specific supplement to the standards and guidelines for clinical genetics laboratories Elaine B Spector
15. 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HOM Factor VNOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor VHOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor V HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Concordancia Total seg n 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 el Lote 66 300 8501 Rev D September 2011 Referencias Tableau 7 Resumen de Resultados de Reproducibilidad seg n Lote Factor V IDM Concordancia Total segun la uestra Lote 1 Lote 2 Lote 3 Muestra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HET Factor V NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HOM Factor V NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor V HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il NOR Factor V HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Concordancia Total seg n el 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 Lote Referencias 1 Thrombophilia as a multigenic disease B Zoeller P G de Frutos A Hillarp B Dahlback Haematologica 1999 84 59 70 2 Screening for inherited thrombophilia indications and therapeutic implications V De Stefano E Rossi K Paciaroni G Leone Haematologica 2002 87 1095 1108 3 Laboratory investigation of thrombophilia A Tripodi and PM Mannucci Clinical C
16. 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur V NOR Facteur II HOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur V NOR Facteur II NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur V HOM Facteur IINOR 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Facteur V HET Total 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 d agr ment par site Aucun r sultat discordant Un chantillon tait ind termin apr s r analyse 300 8501 Rev D September 2011 29 Frangais Tableau 3 R sultats de reproductibilit par Site Facteur V Total d Agr ment par ID chantillon Site 1 Site 2 Site 3 chantillon NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur Il HET 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur V NOR Facteur HOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 FFacteur V NOR Facteur NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur V HOM Facteur II NOR 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Facteur V HET Total 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 d agr ment par site Aucun r sultat discordant Un chantillon tait ind termin apr s r analyse Les r sultats par utilisateur sont pr sent s dans les tableaux 4 amp 5 Aucune diff rence statistiquement significative n est trouv e entre sites pour les r sultats des Facteur II p 1 000 et Facteur V
17. 9 10 98 3 59 60 NORMALE Fattore V ETERO Totale 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Concordanza per Operatore a Ri ice S A Na Nessun risultato discordante Un solo campione rimasto indeterminato dopo averlo rieseguito Tableau 5 Sommario di riproducibilit dei risultati eseguito da diversi operatori Fattore V Sito 1 Sito 2 Sito 3 Totale Concordanza da Campione ID Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Campione NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Fattore II 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 ETERO Fattore V NORMALE Fattore II OMO 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Fattore V NORMALE Fattore II 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 NORMALE Fattore VOMO Fattore II 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 NORMALE Fattore V ETERO Totale 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Concordanza per Operatorer Nessun risultato discordante Un solo campione rimasto indeterminato dopo averlo rieseguito 300 8501 Rev D September 2011 81 Italiano Per valutare la riproducibilita inter lot
18. Analyte Result Detail Errors History Support Assay Name Xpert HemoslL FII Version 1 Test Result J For In vitro Diagnostic Use Only n Legend su Bi Z FI 202106 Primary al Mi 7 FI 202108 Primary R E 300 A E 5 2007 uw y 1007 Figure 3 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione normale per il Fattore Il 300 8501 Rev D September 2011 73 Italiano Figure 4 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione mutato eterozigote per il Fattore Il Figure 5 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione mutato omozigote per il Fattore Il 74 300 8501 Rev D September 2011 Interpretazione dei Risultati Per i risultati del test Xpert HemosIL FV figure 6 7 e 8 FV NORMAL Figure 6 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione normale per il Fattore V Figure 7 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione mutato eterozigote per il Fattore V 300 8501 Rev D September 2011 75 Italiano Figure 8 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione mutato omozigote per il Fattore V Per i risultati del test Xpert HemosIL FII amp FV Combo figure 9 10 e 11 Figure 9 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione normale per entrambi i geni 76 300 8501 Rev D September 201 Interpretazi
19. Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Tel 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Autorisierte Vertretung Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Exklusiver Vertrieb durch a Instrumentation Laboratory CE 52 300 8501 Rev D September 2011 Espanol Para su uso en Diagn stico m dico in vitro Nombre patentado Xpert HemosIL FI amp FV Nombre habitual o comun Ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Aplicacion El ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V es un test cualitativo de diagn stico in vitro de genotipado para la detecci n r pida de los alelos para el Factor II y el Factor V utilizando sangre total anticoagulada con citrato s dico o EDTA EI test se procesa en el Sistema de Cepheid GeneXpert Dx Este test se utiliza para proporcionar resultados para las mutaciones del Factor II G20210A y Factor V Leiden G1691A como ayuda en el diagn stico en individuos con sospecha de presentar trombofilia Resumen La asociaci n de las mutaciones Factor II G20210A y Factor V Leiden G1691A con un riesgo aumentado de sufrir trombosis venosa est muy bien documentada 1 2 3 4 La mutaci n del Factor II o Protrombina G20210A se refiere a la transici n de una G por una A en el nucle tico 20210 de la regi n 3 no traducida del gen y se asocia a un incremento de los niveles plasm ticos
20. Deutsch Tableau 3 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeit pro Zentrum Faktor V Gesamt Ubereinstimmung Probentypen Zentrum 1 Zentrum 2 Zentrum 3 pro Probe Normal 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor Il Heteroz 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor V Normal Faktor Il Homoz 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor V Normal Faktor IINormal 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor V Homoz Faktor IINormal 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Faktor V Heteroz Gesamt 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 Ubereinstimmung pro Zentrum 2 Keine diskrepanten Ergebnisse Eine Probe war auch nach Wiederholung nicht zu ermitteln Eine Zusammenfassung der Ergebnisse pro Anwender ist in Tabelle 4 und 5 aufgef hrt Es wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede in den Ergebnissen zwischen den Zentren fiir Faktor II p 1 000 oder Faktor V p 1 000 festgestellt Tableau 4 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeit pro Anwender Faktor Il Zentrum 1 Zentrum 2 Zentrum 3 Gesamt Ubereinstimmung Probentypen Anw Anw 2 Anw 1 Anw 2 Anw 1 Anw 2 pro Probe Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor Il Heteroz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor V
21. Factor II NOR Factor V HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Total Agreement by Lot 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 References 1 2 Thrombophilia as a multigenic disease B Zoeller P G de Frutos A Hillarp B Dahlback Haematologica 1999 84 59 70 Screening for inherited thrombophilia indications and therapeutic implications V De Stefano E Rossi K Paciaroni G Leone Haematologica 2002 87 1095 1108 Laboratory investigation of thrombophilia A Tripodi and P M Mannucci Clinical Chemistry 2001 47 1597 1606 Technical standards and guidelines Venous thromboembolism Factor V Leiden and prothrombin G20210A testing A disease specific supplement to the standards and guidelines for clinical genetics laboratories Elaine B Spector Wayne W Grody Carla J Matteson Glenn E Palomaki Daniel B Bellissimo Daynna J Wolff Linda A Bradley Thomas W Prior Gerald Feldman Bradley W Popovich Michael S Watson and C Sue Richards ACMG Standards and Guidelines July August 2005 Vol 7 No 6 Centers or Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline
22. Fattore V NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore II NORMALE Fattore VOMO 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore II NORMALE Fattore V ETERO 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Totale Concordanza per Lotto 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 300 8501 Rev D September 2011 Bibliografia Bibliografia 1 Thrombophilia as a multigenic disease B Zoeller P G de Frutos A Hillarp B Dahlback Haematologica 1999 84 59 70 2 Screening for inherited thrombophilia indications and therapeutic implications V De Stefano E Rossi K Paciaroni G Leone Haematologica 2002 87 1095 1108 3 Laboratory investigation of thrombophilia A Tripodi and PM Mannucci Clinical Chemistry 2001 47 1597 1606 4 Technical standards and guidelines Venous thromboembolism Factor V Leiden and prothrombin 20210G gt A testing A disease specific supplement to the standards and guidelines for clinical genetics laboratories Elaine B Spector Wayne W Grody Carla J Matteson Glenn E Palomaki Daniel B Bellissimo Daynna J Wolff Linda A Bradley Thomas W Prior Gerald Feldman Bradley W Popovich Michael S Watson and C Sue Richards ACMG Standards and Guidelines July August 2005 Vol 7 No 6 5 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond
23. Mutationen mit einem erh hten Risiko f r ven se Thrombosen ist sehr gut dokumentiert gt gt 4 Die Faktor II oder Prothrombin G20210A Mutation ist ein G nach A Wechsel am Nukleotid 20210 in der 3 untranslatierten Region des Gens und f hrt zu erh hten Plasmaspiegeln von Prothrombin Faktor V Leiden G1691A ist ein G nach A Wechsel am Nukleotid Position 1691 des Faktor V Gens und f hrt zu einem Austausch der Aminos ure Arginin durch Glutamin im Faktor V Protein Dieses wiederum bedingt eine Resistenz f r die Spaltung durch aktiviertes Protein C APC Die H ufigkeiten von Faktor II G20210A und Faktor V Leiden G1691A Mutationen in der Normalbev lkerung liegen bei 2 bzw 5 Testmethode Das GeneXpert Dx System automatisiert und integriert die Probenreinigung Nukleins ure Amplifikation und Detektion der Target Sequenz im Vollblut mittels der real time PCR Untersuchung Das System besteht aus einem Analysenger t einem Computer einem Hand Barcodescanner und einer vorinstallierten Software die die Messung von Testen und die Visualisierung der Ergebnisse erm glicht Es erfordert den Einsatz von single use Einwegkartuschen die die PCR Reagenzien beinhalten und zur Durchf hrung des PCR Prozesses dienen Da die Kartuschen verschlossen sind ist eine Kreuz Kontamination zwischen Proben ausgeschlossen Die ausf hrliche Beschreibung des Systems ist dem GeneXpert Dx Ger te Bedienerhandbuch zu entnehmen Der Xpert HemosIL Faktor II
24. Normal Faktor Il Homoz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor V Normal Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor V Homoz Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Faktor V Heteroz Gesamt 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Ubereinstimmung pro Anwender 2 Keine diskrepanten Ergebnisse Eine Probe war auch nach Wiederholung nicht zu ermitteln 48 300 8501 Rev D September 2011 Testcharakteristik Tableau 5 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeit pro Anwender Faktor V Zentrum 1 Zentrum 2 Zentrum 3 Gesamt Ubereinstimmung Probentypen Anw Anw 2 Anw Anw 2 Anw 1 Anw 2 pro Probe Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor Il Heteroz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor V Normal Faktor Il Homoz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor V Normal Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Faktor V Homoz Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 1
25. Test SO o ENE ON 38 W hlen Sie aus dem Drop down Men der Testliste den entsprechenden Test aus der durchgef hrt werden soll Wahlen Sie Start Test Die Software fordert Sie zur Eingabe Ihres Passwortes auf ffnen Sie die Instrumentenmodulklappe bei der eine gr ne Anzeigeleuchte blinkt und laden Sie die Kartusche Schlie en Sie die Klappe Der Test wird gestartet die gr ne Anzeigeleuchte blinkt nicht mehr Nach Beenden des Tests erlischt die gr ne Anzeige 300 8501 Rev D September 2011 Anzeige und Ausdruck von Testergebnissen 10 Wenn das System die T r entriegelt ffnen Sie die Modulklappe und entfernen Sie die Kartusche 11 Entsorgen Sie die benutzten Kartuschen in einem geeigneten Abfallbeh lter beachten Sie Ihre laborinternen Sicherheitsvorschriften Anzeige und Ausdruck von Testergebnissen Die ausf hrliche Beschreibung ist dem GeneXpert Dx Ger te Bedienerhandbuch zu entnehmen Qualit tskontrolle Jeder Testkit beinhaltet eine Probenverarbeitungskontrolle PVK Probenverarbeitungskontrolle PVK Vor dem Start der PCR Reaktion misst das GeneXpert Dx System das Fluoreszenzsignal der Probe um die Reagenz Rehydrierung die korrekte Bef llung in der Kartusche die Probenintegrit t und die Farbstoff Stabilit t zu berpr fen Die PVK gilt als bestanden wenn die festgelegten Akzeptanzkriterien erf llt sind Externe Kontrollen Die HemosIL FII amp FV DNA Kontrolle Art Nr 0020003500 wurde f r
26. Unis d Am rique partir de plasmas bovins exclusivement d origine USA Aucune prot ine de ruminant ou d autre origine animale n a fait partie de l alimentation des animaux source de la BSA Ces derniers ont fait l objet de tests ante et post mortem Durant le proc d de fabrication tout contact avec d autres produits d origine animale a t soigneusement vit Recueil et transport des sp cimens A Pour obtenir un sp cimen de patient conforme suivre les instructions ci dessous 1 Seuls les personnels form s et agr s sont habilit s pr lever du sang sur tubes contenant de PEDTA ou du citrate trisodique 2 Ne pas centrifuger ou concentrer l chantillon de sang par limination du plasma 3 Le sang doit tre trait dans les 24 heures suivant le pr l vement quand il est conserv 4 temp rature ambiante 22 28 C Les chantillons peuvent tre conserv s 2 8 C si le stockage exc de les 24 heures Dans ces conditions l chantillon est stable jusqu 15 jours Les chantillons de sang peuvent tre galement conserv s jusqu 3 mois 20 C ou 80 C Utiliser un cong lateur adapt Tous les chantillons doivent tre enti rement d congeler temp rature ambiante Eviter de congeler d congeler les chantillons plus de 2 fois 4 M langer l chantillon 5 fois par inversion avant distribution dans la cartouche Proc dure Pr paration de la cartouche Important Commencer l analy
27. Wayne W Grody Carla J Matteson Glenn E Palomaki Daniel B Bellissimo Daynna J Wolff Linda A Bradley Thomas W Prior Gerald Feldman Bradley W Popovich Michael S Watson and C Sue Richards ACMG Standards and Guidelines July August 2005 Vol 7 No 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition Grody WW Griffin JH Taylor AK et al American college of medical genetic consensus statement on factor V leiden mutation testing Genetics in Medicine 2001 3 2 139 148 300 8501 Rev D September 2011 99 Portugu s Tabela de Simbolos Tableau 8 Significado dos simbolos Simbolos Significado Numero de refer ncia Dispositivo m dico para diagn stico in vitro N o reutilizar Cuidado consultar documenta o anexa Fabricante Cont m suficiente para lt n gt testes Controlo CONTROL j lt E gt ea Marca o CE Conformidade Europeia M Mm Representante autorizado na Comunidade Europeia Limites de temperatura Risco biol gico a dale Fabricante Cepheid 904 Car
28. amp Faktor V Testkit beinhaltet Reagenzien f r die Bestimmung von normalen und mutanten Faktor II und Faktor V Allelen aus Natriumcitrat oder EDTA Vollblut Jeder Testkit enth lt eine Probenverarbeitungskontrolle PVK die die Reagenz Rehydrierung die korrekte Bef llung mit PCR Reagenz in der Kartusche die Probenintegrit t und die Farbstoff Stabilit t berpr ft Die Primer und Sonden im Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit bestimmen den Genotyp des Faktor II Gens an der Position 20210 und oder den des Faktor V Gens an der Position 1691 300 8501 Rev D September 2011 35 Deutsch Reagenzien und System Y Inhalt Der Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit enth lt ausreichend Reagenzien zur Durchf hrung von 10 Proben oder Qualit tskontrollen Folgende Komponenten sind in der Packung enthalten Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Kartuschen mit integrierten Reaktionskammern 10 Bead 1 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche Polymerase dNTP s bovines Serumalbumin BSA Bead 2 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche Primer Sonden BSA Reagenz 1 Tris Puffer EDTA Tween 20 TET 3 0 mL pro Kartusche Reagenz 2 Tris Puffer GHCI Sarkosyl Tween 20 GHCI 3 0 mL pro Kartusche e CD Testdefinition ADF Anleitung f r den Import des ADF in die GX Software Packungsbeilage Lagerung und Haltbarkeit Az Lagern Sie die Xpert HemosIL Faktor IT amp Faktor V Kartuschen und R
29. and one wildtype allele for Factor II gene and with normal wildtype alleles for Factor V 3 a sample homozygous for Factor II mutation i e two mutant alleles for Factor II gene and with normal wildtype alleles for Factor V 4 a sample with normal wildtype alleles for Factor II and homozygous for Factor V mutation i e two mutant alleles for Factor V gene 5 a sample with normal wildtype alleles for Factor II and heterozygous for Factor V mutation i e one mutant and one wildtype allele for Factor V gene A summary of the results by site is shown in tables 2 and 3 There was no statistically significant difference in results among sites for either Factor II p 1 000 or Factor V p 1 000 Tableau 2 Summary of Reproducibility Results by Site Factor Il Total Agreement by Specimen ID Site 1 Site 2 Site 3 Sample NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HET Factor VNOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HOM Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor V HOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor VHET 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Total Agreement by Site 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 a A No discordant results One sample was indeterminate after retest 12 300 8501 Rev D September 2011 Table
30. apenas para diagn stico In Vitro Nome patenteado Xpert HemosIL FII amp FV Nome comum ou usual Ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Utiliza o prevista O kit de ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V um teste in vitro de genotipagem qualitativa para a detec o dos alelos do Factor II e Factor V em sangue total anticoagulado com citrato de s dio ou EDTA O teste realizado no instrumento Cepheid GeneXpert Dx System e destina se a fornecer resultados para as muta es no Factor II G20210A e Factor V Leiden G1691A como auxiliar no diagn stico de indiv duos com suspeita de trombofilia Resumo e explica o A associa o das muta es do Factor II 20210A e Factor V Leiden 1691A a um aumento do risco de trombose venosa est bem documentado 2 4 Na muta o do Factor II FIT ou muta o da protrombina 20210A a muta o uma transi o de G para A no nucle tido 20210 na regi o 3 n o transcrita do gene e est associada a n veis plasm ticos de protrombina aumentados O Factor V FV Leiden 1691A refere se a uma transi o de G para A no nucle tido 1691 do gene FV resultando na substitui o do amino cido Arginina por Glutamina na prote na EV causando resist ncia clivagem pela prote na C activada APC As muta es FII 20210A e FV Leiden G1691A est o presentes em 2 e 5 da popula o em geral respectivamente Pri
31. bi directional sequencing for both Factor II and Factor V Tableau 1 Xpert HemoslL Performance vs Bi directional Sequencing Number of Number of Number of Correct Calls Number of Agreement Number Correct Calls Invalid Callson Agreement on Including Invalid Calls After Repeat Genotype Tested on First Run First Run First Run Repeat Run on Repeat Run Run Factor II G20210A wrt 968 927 41 95 8 963 5 99 5 HET 50 48 2 96 0 48 2 96 0 HOM 7 7 0 100 0 7 0 100 Overall 1025 982 43 95 8 1018 7 99 3 Factor V G1691A WT 895 860 35 96 1 889 6 99 3 HET 114 108 6 94 7 113 1 99 1 HOM 12 11 1 91 7 12 0 100 0 Overall 1021 979 42 95 9 1014 7 99 3 a b No discordant results Invalid results refer to indeterminate results Bi directional sequencing results for Factor Il were not available for 4 specimens Cao a Bi directional sequencing results for Factor V were not available for 8 specimens d WT wildtype is normal Analytical Specificity To evaluate the analytical specificity of the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay normal gene sequences containing silent single nucleotide polymorphisms SNPs in the probe binding region as well as outside the probe binding region were synthesized The presence of the additional SNP in the probe binding region in most cases resulted in an invalid result When a valid result was obtained it gave the correct genotype The pr
32. de Protrombina El Factor V Leiden G1691A se refiere a la transici n de una G por una A en el nucle tido de la posici n 1691 del gen del Factor V lo que provoca una sustituci n del amino cido Arginina por Glutamina en la prote na Factor V lo que la hace resistente a la acci n inhibidora de la Prote na C Activada APC Las mutaciones FII G20210A y Factor V G1691A est n presentes en el 2 y 5 respectivamente de la poblaci n general Principio del M todo El Sistema GeneXpert Dx automatiza e integra la purificaci n de la muestra la amplificaci n de los cidos nucleicos y la detecci n de la secuencia objetivo en sangre total utilizando la reacci n en cadena de la polimerasa PCR en Tiempo Real El sistema se compone de un instrumento y un ordenador personal con un lector de c digo de barras que lleva cargado el software para procesar tests y visualizar resultados El sistema requiere del uso de cartuchos desechables de un solo uso que contienen los reactivos de la PCR y albergan todo el proceso de PCR Los cartuchos al ser independientes eliminan la contaminaci n entre muestras Para la descripci n completa del sistema consultar el Manual del Operador del Sistema GeneXpert Dx El kit Xpert HemosIL Factor II amp Factor V contiene los reactivos para la detecci n de los alelos normales y mutados del Factor II y Factor V utilizando sangre total anticoagulada con citrato s dico o EDTA En cada cartucho se realiza un Chequ
33. del Factor II Factor V no se puede determinar repetir el ensayo La muestra no fue procesada correctamente o se produjo una inhibici n de la PCR NO VALIDO La presencia o ausencia de los alelos Factor II Factor V no se pueden determinar Probe Check Chequeo de la sonda PASS el resultado del chequeo de todas las sondas est en rango ERROR Si la presencia o ausencia de los alelos normales y mutantes de Factor II Factor V no se puede determinar repetir el ensayo siguiendo las instrucciones que se muestran m s abajo El chequeo de las sondas no ha sido satisfactorio y posiblemente la sesi n se ha abortado debido posiblemente al incorrecto llenado de los tubos de reacci n o a la detecci n de un problema con la integridad de la sonda Tambi n se pueden producir errores debido a que se hayan superado los l mites de presi n m xima o al fallo de alg n componente del sistema ERROR Probe Check Chequeo de la sonda FAIL Ha fallado el chequeo de una o m s sondas Si la sonda ha superado los resultados del chequeo el error est causado por un fallo de un componente del sistema NO RESULTADO Si la presencia o ausencia de los alelos normales y mutantes de Factor II Factor V no se puede determinar repetir el ensayo siguiendo las instrucciones que se muestran m s abajo Se han obtenido datos insuficientes para calcular los resultados de un test por ejemplo esto puede suceder si el operador detiene un test que se esta
34. el proceso se abortar de forma autom tica y se informar un resultado de ERROR Las fichas de informacion referentes a la seguridad del material MSDS Material Safety Data Sheet para todos los reactivos del kit est n disponibles seg n petici n en las p ginas Web siguientes www Cepheid com www cepheidinternational com o directamente al soporte t cnico de Cepheid La Alb mina S rica Bovina BSA de este producto fue exclusivamente obtenida de plasma bovino original procedente de Estados Unidos La fabricaci n de la BSA fue tambi n realizada en Estados Unidos Los animales no fueron alimentados ni con prote nas de rumiante ni con otras prote nas animales los animales pasaron un chequeo antes y despu s de su muerte Durante dicho proceso no hubo contacto del material con ning n otro material animal Obtenci n y Almacenamiento de la Muestra Para obtener la muestra adecuadamente seguir atentamente las instrucciones de esta secci n 1 2 4 Solamente personal autorizado y formado deberfan extraer sangre utilizando tubos con anticoagulante EDTA o citrato s dico No centrifugar o concentrar la muestra de sangre extrayendo plasma La sangre deber a procesarse durante las 24 horas posteriores a la extracci n si se guarda a temperatura ambiente 22 28 C Las muestras deben ser almacenadas a 2 8 C si se guardan m s de 24 horas La sangre se mantiene estable durante 15 dias si se almacena a 2 8 C Las muestras de sangre
35. el programa de QC Externo del Ensayo Xpert HemosIL FI amp FV Como alternativa pueden utilizarse muestras de sangre total con citrato s dico o EDTA como anticoagulante de Factor II Factor V normal heterocigoto u homocigoto en la formaci n de usuarios las pruebas de validaci n y el QC externo del ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Se requiere material basado en c lulas No utilizar ADN extra do Los controles externos se pueden utilizar de acuerdo con las organizaciones acreditadas locales estatales o federales seg n sea el caso Interpretaci n de resultados Los resultados son interpretados por el sisteme GeneXpert Dx a partir de las sefiales fluorescentes medidas las cuales se procesan por unos algoritmos de c lculo con el fin de identificar los genotipos Y stos se pueden consultar en las siguientes ventanas de Visualizaci n de Resultados Para los resultados del test Xpert HemosIL FII figuras de la 3 a la 5 Test Result Analyte Result Detail Errors History Support Assay Name Xpert HemoslL FII Version 1 Test Result For In vitro Diagnostic Use Only Legend B 500 e FI 202106 Primary 1 Fl 202104 Primary 400 a 300 i i a 4 S 2007 Pa E FA 1007 f Figure 3 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de Factor Il Normal 300 8501 Rev D September 2011 57 Espa
36. ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V utilizado para processar um teste N o torne a utilizar cartuchos gastos Consulte o pessoal respons vel pelos res duos ambientais da institui o para obter informa es sobre a elimina o adequada dos cartuchos usados e dos reagentes n o utilizados Este material pode apresentar caracter sticas de res duos perigosos de acordo com a lei federal Resource Conservation and Recovery Act RCRA Lei da Recupera o e Conserva o dos Recursos da Associa o de Protec o Ambiental Environmental Protection Agency dos EUA e deve cumprir os requisitos espec ficos sobre elimina o Consulte os regulamentos locais e estatais podem diferir dos regulamentos de elimina o federais As institui es fora dos EUA devem consultar os requisitos sobre a elimina o ambiental de res duos perigosos do pa s Conserve o kit de ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V a 2 28 C N o abra a tampa do cartucho at estar pronto para realizar o teste Se ocorrer um aumento da press o interna acima do limite pr determinado pelo fabricante a an lise aborta automaticamente e ser notificado um resultado de ERROR erro As fichas de seguran a para todos os reagentes fornecidos com este ensaio est o dispon veis por solicita o ao Cepheid Technical Support e encontram se no sites da Cepheid www cepheid com e www cepheidinternational com A albumina s rica bovina BSA deste produto
37. entro 24 ore Se conservati a 2 8 C possono essere analizzati oltre le 24 ore Il sangue stabile per 15 giorni a 2 8 C I campioni possono essere conservati a 20 C e 80 C fino a 3 mesi Lasciare scongelare il campione di sangue a temperatura ambiente Evitare di congelare e congelare per pi di due volte Invertire il campione per 5 volte prima di dispensarlo nella cartuccia Procedura Preparazione della Cartuccia Important Avviare il test entro 15 minuti dall aggiunta del campione alla cartuccia S Campione Figure 1 Xpert HemosiL FII amp FV cartuccia vista dall alto Per aggiungere il campione alla cartuccia 1 Rimuovere la cartuccia dalla confezione Non necessario mantenere la cartuccia a temperatura ambiente prima dell uso 2 3 4 Miscelare il campione in modo da renderlo pi omogeneo Aprire la cartuccia e trasferire nel compartimento indicato con la lettere S 50 uL di sangue intero utilizzando una pipetta con P P H 8 Pip puntali provvisti di filtro Chiudere la cartuccia 300 8501 Rev D September 2011 71 Italiano Procedura Analitica Important Prima di iniziare l analisi verificare che nel software siano stati inseriti i protocolli di definizione dei test Xpert HemoslL FII Xpert HemosIL FV e Xpert HemoslL FII amp FV Combo protocolli sono presenti nel CD all interno di ciascun Kit La seguente lista riporta le procedure da eseguire per avviare l analisi
38. faut d un des composants du syst me ERREUR Contr le Sondes ECHEC un ou plusieurs r sultat s du contr le de sondes est ou sont en chec si le contr le de sondes est accept alors l erreur est li e un autre composant du syst me AUCUN RESULTAT Si la pr sence ou Pabsence d all les normaux ou mut s Facteur II Facteur V ne peut tre d termin e r it rer le test selon les instructions ci dessous Un nombre insuffisant de donn es a t collect pour que le syst me soit en mesure de donner un r sultat par exemple l utilisateur a arr t un test en cours d ex cution AUCUN RESULTAT Contr le de Sondes NA non applicable 26 300 8501 Rev D September 2011 Causes de r p tition d un test Causes de r p tition d un test R p ter le test avec une nouvelle cartouche ne pas r utiliser la cartouche pr c demment utilis e de nouveaux r actifs liquides 1 amp 2 et un nouvel chantillon de sang total citrate de sodium ou EDTA e INVALIDE un r sultat invalide est l indication que l chantillon n a pas t trait dans des conditions optimales ou que la r action de PCR est inhib e e ERREUR un r sultat en erreur est indication que le Contr le de Sondes est en chec et que le test a t interrompu par le syst me Ceci peut tre d 4 un remplissage incorrect du tube r actionnel ou un d faut d int grit de sonde s Lerreur peut tre galement li e
39. foi exclusivamente produzida com plasma bovino com origem nos EUA O fabrico da BSA tamb m decorreu nos EUA Nenhuma prote na de ruminante ou outra prote na animal foi administrada aos animais os animais passaram em testes pr e p s mortem Durante o processamento n o houve mistura do material com outros materiais de origem animal Colheita e conserva o de amostras Para obter amostras adequadas siga escrupulosamente as instru es desta sec o 1 Apenas profissionais treinados e habilitados devem colher sangue em tubos anticoagulantes com EDTA ou citrato de s dio 2 O sangue deve ser processado no per odo de 24 horas quando conservado temperatura ambiente 22 28 C As amostras devem ser conservadas entre 2 8 C por per odos superiores a 24 horas O sangue est vel at 15 dias desde que conservado a 20 C ou 80 C at 3 meses 3 Deixe que o sangue congelado descongele temperatura ambiente durante 3 5 minutos antes de o inserir no cartucho Deixe o sangue congelado equilibrar a temperatura ambiente descongelando completamente N o recomendado congelar descongelar o sangue mais do que 2 vezes 4 Misture a amostra invertendo 5 vezes antes de a colocar no cartucho Procedimento Cuidados Important Inicie o teste no per odo de 15 minutos ap s adi o da amostra ao cartucho S Amostra Figure 1 Cartucho do ensaio Xpert HemosiL Factor Il amp Factor V vista de cima 300 8501 Rev D S
40. il personale addetto alla gestione dei rifiuti per il corretto smaltimento delle cartucce e dei reagenti inutilizzati Questo materiale richiede una procedura specifica di smaltimento secondo le normative EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA Verificare le norme statali e locali in quanto potrebbero differire dalle disposizioni federali sopracitate Istituzioni al di fuori degli USA devono controllare le norme locali per lo smaltimento dei rifiuti pericolosi Conservare il kit Xpert HemosIL FIT amp FV a 2 28 C Aprire il coperchio della cartuccia solo prima di eseguire il test Nel caso di aumenti di pressione interna al di sopra del limite prestabilito dal produttore la corsa si interrompe automaticamente e verr segnalato un risultato di errore Le schede di sicurezza per tutti i reagenti possono essere richiesti al supporto tecnico della Cepheid e presenti sul suo sito ufficiale www cepheid com o www cepheidinternational com Lalbumina di siero bovino BSA prodotta da plasma di derivazione bovina negli Stati Uniti Gli animali hanno superato tutti i test ante e post mortem a conferma di non essere stati alimentati con proteine animali Preparazione dei Campioni e Conservazione Seguire le seguenti istruzioni per la raccolta dei campioni 1 2 4 Utilizzare solo sangue intero raccolto in EDTA o Sodio Citrato Non centrifugare o concentrare il sangue I campioni conservati a 15 30 C devono essere analizzati
41. n 20 in 8 volumi che variano da 5 uL a 250 uL Anche se il test pu tollerare diversi volumi da 15 uL 100 pL 50 uL il volume del campione raccomandato per ridurre al minimo il rischio di errori derivanti da un campione limitato e in eccesso Riproducibilit Un gruppo di 5 campioni ciascuno con un particolare genotipo stato testato in duplicato da due diversi operatori su 5 giorni diversi in ciascuno dei tre siti 3 campioni x 2 volte al giorno x 2 operatori per sito x 5 giorni x 3 siti Sono stati usati diversi kit dello stesso lotto di Xpert HemosIL Fattore II e Fattore V in ciascuno dei 3 siti di test I test sono stati eseguiti rispettando la procedura Xpert HemosIL FII amp FV Risultati sono riassunti nelle tabelle 2 5 Pannello di studio 1 Un campione NORMALE wildtype per entrambi gli alleli sia del FII che del FV 2 Un campione eterozigote per il Fattore II vale a dire un allele mutato ed uno wildtype per il fattore II e con entrambi gli alleli NORMALI wildtype per il fattore V 300 8501 Rev D September 2011 79 Italiano 3 Un campione omozigote per la mutazione del fattore II vale a dire due alleli mutanti del gene per il fattore II e con NORMALI wildtype alleli per il fattore V 4 Un campione con NORMALI wildtype alleli per il fattore II e omozigoti per la mutazione del fattore V vale a dire due alleli mutanti del gene per il fattore V 5 Un campione con NORMALI wildtype alleli per il fatto
42. ou EDTA avec embout muni d un filtre r sistant aux a rosols HemosIL FII amp FV DNA Control Ref 0020003500 Pr cautions Nocif en cas d ingestion R22 irritant pour les yeux et la peau R36 38 Manipuler les chantillons biologiques y compris les cartouches comme s ils taient potentiellement infectieux Comme il est impossible de d terminer avec certitude qu un chantillon biologique est indemne de toute contamination manipuler les chantillons avec les pr cautions d usage Se r f rer aux recommandations pour la manipulation des chantillons disponible aupr s des U S Centers for Disease Control and Prevention and the Clinical et du Laboratory Standards Institute anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards Se conformer aux instructions de s curit en vigueur dans votre laboratoire pour manipuler les produits chimiques et les chantillons biologiques e Utiliser les cartouches avant la date de p remption indiqu e sur le coffret Ne pas ouvrir le couvercle de la cartouche Xpert HemosIL Factor 11 amp Factor V except lors de l ajout de l chantillon e Ne pas utiliser une cartouche tant tomb e ou ayant t agit e violemment apr s l ajout de l chantillon 18 300 8501 Rev D September 2011 Recueil et transport des sp cimens Chaque cartouche a usage unique Xpert HemosIL Factor II amp Factor V est pr vue pour la r alisation d un test Ne pas r utiliser un
43. p 1 000 Tableau 4 R sultats de reproductibilit par utilisateur Facteur Il Site 1 Site 2 Site 3 Total i 4 d Agr ment par ID chantillon Util 1 Util 2 Util 1 Util 2 Util 1 Util 2 chantillon NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur II HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur V NOR Facteur II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur V NOR Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur V HOM Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Facteur V HET Total 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 d agr ment par 299 300 utilisateur Aucun r sultat discordant Un chantillon tait ind termin apr s r analyse 30 300 8501 Rev D September 2011 Caract ristiques et performances Tableau 5 R sultats de reproductibilit par utilisateur Facteur V Site 1 Site 2 Site 3 Total i d Agr ment par ID chantillon Util 1 Util 2 Util 1 Util 2 Util 1 Util 2 chantillon NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur
44. pueden tambi n guardarse hasta 3 meses a 20 C o 80 C Se recomienda el uso de un vial de almacenamiento compatible con la congelaci n Descongelar completamente la sangre a temperatura ambiente No se recomienda congelar y descongelar la sangre mas de 1 vez Homogeneizar la muestra por inversi n 5 veces antes de dispensarla en el cartucho Procedimiento Preparacion del cartucho Important Empezar el test antes de que transcurran 15 minutos despu s de dispensar la muestra en el cartucho S Muestra Figure 1 Cartucho de Xpert HemosiL Factor Il amp Factor V visto desde arriba 300 8501 Rev D September 2011 55 Espanol Para dispensar la muestra en el cartucho 1 Sacar el cartucho del kit 2 No es necesario mantener el cartucho a temperatura ambiente antes de usarlo 3 Mezclar la muestra por inversi n del tubo m ltiples veces hasta homogenizarla 4 Abrir la tapa del cartucho Utilizando una pipeta con puntas de filtro dispensar 50 pL de sangre total anticoagulada con citrato o EDTA en la pared del fondo del compartimento S del cartucho Xpert HemosIL Factor II amp Factor V 5 Cerrarla tapa del cartucho Iniciar el Test Important Antes de iniciar el test aseg rese de que los archivos correspondientes a la definici n de los tests Xpert HemoslL FII XpertHemosiL FV y XpertHemoslL FII amp FV Combo se encuentran en el software Los archivos con la definici n de los tests estan en el CD suminis
45. qualit Le coffret contient le mat riel suivant 10 cartouches Xpert HemosIL Factor II amp Factor V avec 10 tubes de r action int gr s e Particule 1 congel e sec 1 par cartouche Polym rase dNTPs Albumine S rique Bovine BSA Particule 2 congel e sec 1 par cartouche Amorces Sondes BSA e R actif 1 Tampon Tris EDTA Tween 20 TET 3 0 mL par cartouche R actif2 Tampon Tris GHCI Sarkosyl Tween 20 GHCI 3 0 mL par cartouche e CD Fichier de param trage ADF Instructions d importation du fichier ADF dans le logiciel GX Notice Stockage et manipulation Stocker les cartouches Xpert HemosIL FII amp FV et les r actifs entre 2 C et 28 C Ne pas utiliser les cartouches au del de la date de p remption Ne pas ouvrir la cartouche avant d tre en mesure de r aliser le test Utiliser la cartouche dans les 30 minutes suivant l ouverture du couvercle A Mat riels n cessaires mais non fournis Xn R22 R36 38 WW Syst me GeneXpert Dx R f rence variable en fonction de la configuration instrument GeneXpert ordinateur lecteur code barres et manuel d utilisation systeme GeneXpert Dx Note La r f rence du systeme GeneXpert Dx varie en fonction de la configuration Contacter Cepheid ou le distributeur I L pour plus d informations Logiciel GeneXpert version 4 0 et sup rieure Pipette permettant de distribuer 50 uL de sang total Citrate de sodium
46. resultados do ensaio devem ser interpretados juntamente com outros dados cl nicos e laboratoriais muta es raras do Factor V A1696G G1689A e A1692C e outras SNPs adicionais na regi o de liga o da sonda podem interferir com a detec o do alvo e dar um resultado INVALID Subst ncias Interferentes Doentes tratados com heparina e transfus es de sangue podem ter amostras de sangue que interferem potencialmente com os resultados de PCR e levam a resultados inv lidos ou errados Os estudos de subst ncias potencialmente interferentes n o demonstraram inibi o at 14 3 USP unidades mL de heparina 16 mg dL de bilirrubina 250 mg dL de colesterol adicionados ou 1932 mg dL de triglic ridos totais l pidos N o foi observada qualquer inibi o utilizando amostras de sangue total que foram submetidas a um ciclo de congela o descongela o sangue hemolizado N o foi observada signific ncia estat stica entre amostras emparelhadas com EDTA ou citrato de s dio Valores esperados As muta es do Factor II G20210A e Factor V Leiden G1691A est o presentes em 2 e 5 da popula o em geral respectivamente E 94 300 8501 Rev D September 2011 Caracteristicas de desempenho Caracteristicas de desempenho Desempenho cl nico do ensaio Xpert HemoslL As caracter sticas de desempenho do Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay foram determinadas num estudo investigacional multic ntrico 7 institui es compar
47. sent s dans les tableaux 2 5 28 300 8501 Rev D September 2011 Caract ristiques et performances Panel chantillons 1 Un chantillon avec des all les normaux type sauvage pour les Facteurs II amp V 2 Un chantillon h t rozygote pour la mutation du Facteur II i e un all le mutant amp un all le sauvage pour le gene du Facteur II et normal pour les all les du Facteur V type sauvage 3 Un chantillon homozygote pour la mutation du Facteur II i e deux all les mutants pour le g ne du Facteur II et normal pour les all les du Facteur V type sauvage 4 Un chantillon normal pour les all les du Facteur II type sauvage et homozygote pour la mutation du Facteur V i e deux all les mutants pour le g ne du Facteur V 5 Un chantillon normal pour les all les du Facteur II type sauvage et h t rozygote pour la mutation du Facteur V i e un all le mutant amp un all le sauvage pour le gene du Facteur V Les r sultats par site sont pr sent s dans les tableaux 2 amp 3 Aucune diff rence statistiquement significative n a t trouv e entre les r sultats des diff rents sites pour le Facteur II p 1 000 ou le Facteur V p 1 000 Table 2 R sultats de reproductibilit par Site Facteur Il Total d Agr ment par ID chantillon Site 1 Site 2 Site 3 chantillon NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Facteur Il HET 100 20 20 100
48. un d passement de la pression limite ou un d faut de l un des composants du syst me AUCUN RESULTAT Pabsence de r sultat est Pindication qu un nombre insuffisant de donn es a t collect Par exemple l utilisateur a arr t un test en cours d ex cution Limitations Les performances du test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V ont t valid es en utilisant la proc dure d crite dans la notice du coffret uniquement Toute modification de cette proc dure peut entra ner une alt ration des performances du test Les r sultats du test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V doivent tre interpr t s en conjonction avec les autres donn es du laboratoire et les donn es cliniques disponibles De rares mutations du facteur V A1696G G1689A et A1692C ou tout autre SNP peuvent appara tre dans la zone d appariement de la sonde pouvant entra ner une interf rence avec la d tection de la cible Ce ph nom ne donnera lieu un r sultat INVALIDE Limites de la m thode et substances interf rant avec celle ci Les chantillons issus de patients sous traitement Ph parine ou transfus s peuvent potentiellement donner lieu des interf rences avec la r action de PCR et entra ner l obtention de r sultats invalides ou erron s Une tude portant sur les interf rences potentielles a montr qu aucune interf rence nest d tect e avec Ph parine jusqu 14 3 unit s USP ml la bilirubine jusqu 16
49. 0 20 20 100 60 60 Fattore II NORMALE Fattore VOMO 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore II NORMALE Fattore V ETERO 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Totale Concordanza per sito 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 a e or Nessun risultato discordante Un solo campione rimasto indeterminato dopo averlo rieseguito Una sintesi dei risultati eseguiti dai diversi operatori riportata nella tabella 4 e 5 Non vi stata alcuna differenza statisticamente significativa nei risultati fra il Fattore II p 1 000 o il Fattore V p 1 000 80 300 8501 Rev D September 2011 Prestazioni Tableau 4 Sommario della riproducibilit dei risultati eseguiti da diversi operatori Fattore Il Sito 1 Sito 2 Sito 3 Totale Concordanza da Campione ID Op 1 Op 2 Opl Op 2 Op 1 Op 2 Campione NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Fattore Il 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 ETERO Fattore V NORMALE Fattore II OMO 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Fattore V NORMALE Fattore II 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 NORMALE Fattore VOMO Fattore II 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0
50. 0 60 Factor V NOR Factor II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V HOM Factor II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Factor V HET concord ncia 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 total por lote a E ne g 7 A Sem resultados discordantes Uma amostra foi indeterminada depois de reanalisada Para avaliar a reprodutibilidade inter lote o painel de 5 amostras acima descrito foi analisado 2 vezes por dia ao longo de 5 dias de an lises utilizando cada um dos 3 lotes num nico laborat rio 5 amostras x 2 an lises por dia x 3 lotes x 5 dias Nas Tabelas 6 e 7 surge um resumo dos resultados por lote N o houve diferen a estatisticamente significativa nos resultados entre lotes para qualquer um dos factores Factor II p 1 000 ou Factor V p 1 000 Tableau 6 Resumo dos resultados de reprodutibilidade por lote Factor Il concord ncia ID da amostra Lot1 Lot 2 Lot 3 total por amostra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HET Factor VNOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HOM Factor V NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor VHOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II NOR Factor V HET 100 10 10 100 10
51. 00 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Faktor V Heteroz Gesamt 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Ubereinstimmung pro Anwender Keine diskrepanten Ergebnisse Eine Probe war auch nach Wiederholung nicht zu ermitteln Zur Ermittlung der Reproduzierbarkeit innerhalb der verwendeten Chargen wurde das Panel der f nf Proben wie oben beschrieben zweimal t glich ber f nf Tage unter Verwendung der drei verschiedenen Testkit Chargen in einem Zentrum untersucht 5 Proben x 2 L ufe pro Tag x 3 Chargen x 5 Tage Eine Zusammenfassung der Ergebnisse pro Charge ist in Tabelle 6 und 7 aufgef hrt Es wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede in den Ergebnissen zwischen den einzelnen Chargen f r Faktor II p 1 000 oder Faktor V p 1 000 festgestellt 300 8501 Rev D September 2011 49 Deutsch Tableau 6 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeit pro Charge Faktor Il Gesamt Ubereinstimmung pro Probentypen Charge 1 Charge 2 Charge 3 Probe Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor Il Heteroz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Normal Faktor Il Homoz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Normal Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Homoz Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Hetero
52. 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V HOM Factor II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Factor V HET Concordancia 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Total segun el Usuario ae A Sin resultados discordantes Una muestra no pudo determinarse despu s de volverse a procesar Para evaluar la reproducibilidad entre lotes el panel de 5 muestras descrito anteriormente se analiz dos veces por d a durante cinco dias utilizando tres lotes de ensayo en cada lugar de an lisis 5 muestras x 2 veces por d a x 3 lotes x 5 d as En las tablas 6 y 7 se muestra un resumen de los resultados seg n el lote No se encontraron diferencias estadisticamente significativas entre los resultados seg n el lote ni para el Factor II p 1 000 ni para el Factor V p 1 000 Tableau 6 Resumen de Resultados de Reproducibilidad seg n Lote Factor Il Concordancia Total segun la ID Muestra Lote 1 Lote 2 Lote 3 Muestra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HET Factor VNOR 100
53. 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor VHOM Factor INOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Factor V HET Total 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Agreement by Operator a N No discordant results One sample was indeterminate after retest 300 8501 Rev D September 2011 English Tableau 5 Summary of Reproducibility Results by Operator Factor V Site 1 Site 2 Site 3 Total Agreement by Specimen ID Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Sample NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor Il HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor INOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V HOM Factor INOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Factor V HET Total 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Agreement by Operator a a No discordant results One sample was indeterminate after retest To assess the between lot reproducibility the 5 specimen panel descri
54. B Spector Wayne W Grody Carla J Matteson Glenn E Palomaki Daniel B Bellissimo Daynna J Wolff Linda A Bradley Thomas W Prior Gerald Feldman Bradley W Popovich Michael S Watson and C Sue Richards ACMG Standards and Guidelines July August 2005 Vol 7 No 6 Centers or Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition Grody WW Griffin JH Taylor AK et al American college of medical genetic consensus statement on factor V leiden mutation testing Genetics in Medicine 2001 3 2 139 148 300 8501 Rev D September 2011 51 Deutsch Tabelle der Symbole Tablelle 8 Symbolbedeutung y lt 3 gt e Bedeutung Bestellnummer In vitro Diagnostikum Nicht wieder verwenden Achtung beigefiigtes Dokument zu Rate ziehen Hersteller Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests CONTROL Kontrolle par e g E CE Kennzeichnung Einhaltung der EU Richtlinien M an Bevollm chtigter in der Europ ischen Gemeinschaft Temperatureinschr nkungen Biologische Gefahr a dale Hersteller Cepheid 904
55. GeneXpert Xpert HemosiIL Factor Il amp Factor V GXFIIFV 10 E Cepheid QS instrumentation Laboratory For In Vitro Diagnostic use Only C 300 8501 Rev D September 2011 Cepheid The Cepheid logo Cepheid GeneXpert and Xpert are trademarks of Cepheid This product is manufactured and sold under license from bioM rieux SA under US patents 6 043 035 and 6 518 016 and counterpart patents worldwide This product is made and sold under license from DxS Limited under US Patent No 6 326 145 and counterpart patents worldwide NO OTHER RIGHTS ARE CONVEYED EXPRESSLY BY IMPLICATION OR BY ESTOPPEL TO ANY OTHER PATENTS FURTHERMORE NO RIGHTS FOR RESALE ARE CONFERRED WITH THE PURCHASE OF THIS PRODUCT HemoslL is a registered trademark of Instrumentation Laboratory English For In Vitro Diagnostic Use Only Proprietary Name Xpert HemosIL FI amp FV Common or Usual Name Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Intended Use The Xpert HemosIL Factor 11 amp Factor V Assay is a qualitative in vitro diagnostic genotyping test for the detection of Factor II and Factor V alleles from sodium citrate or EDTA anticoagulated whole blood The test is performed on the Cepheid GeneXpert Dx System This test is intended to provide results for Factor II G20210A and Factor V Leiden G1691A mutations as an aid in the diagnosis in individuals with suspected thrombophilia Su
56. II HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur V NOR Facteur II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur V NOR Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Facteur V HOM Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Facteur V HET Total 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 d agr ment par 299 300 utilisateur Aucun r sultat discordant Un chantillon tait ind termin apr s r analyse Afin de d terminer la reproductibilit entre lots les 5 chantillons du panel d crit plus haut ont t analys s 2 fois par jour durant 5 jours en utilisant chacun des 3 lots sur un seul site 5 chantillons x 2 s ries par jour x 3 lots x 5 jours Les r sultats par lot sont pr sent s dans les tableaux 6 amp 7 Aucune diff rence statistiquement significative ma t trouv e entre lots pour les r sultats des Facteur II p 1 000 et Facteur V p 1 000 Tableau 6 R sultats de reproductibilit par Lot Facteur Il Total d Agr ment par ID chantillon Lot1 Lot 2 Lot 3 chantillon NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur II HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur NOR Fa
57. JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Grody WW Griffin JH Taylor AK et al American college of medical genetic consensus statement on factor V leiden mutation testing Genetics in Medicine 2001 3 2 139 148 300 8501 Rev D September 2011 83 Italiano Tabella dei simboli Tableau 8 Significato dei simboli n 3 gt 2 o Significato Numero di catalogo Dispositivo medico diagnostico in vitro Non riutilizzare Attenzione consultare le istruzioni Produttore Contiene quantita sufficiente per n test CONTROL Controllo j lt E gt ea Marchio CE Conformit europea M an Rappresentante autorizzato per la Comunita Europea Limiti di Temperatura Rischio biologico a dale Produttore Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Authorized Representative Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Distributed exclusively by a Instrumentation Laboratory C v0 84 300 8501 Rev D September 2011 Portugu s Dispositivo m dico
58. Mutation d h zwei mutante Allele f r Faktor II Gen und mit normalen Wildtyp Allelen f r Faktor V 4 eine Probe mit normalen Wildtyp Allelen f r Faktor II und homozygoter Faktor V Mutation d h zwei mutante Allele f r Faktor V Gen 5 eine Probe mit normalen Wildtyp Allelen f r Faktor II und heterozygoter Faktor V Mutation d h ein mutantes und ein Wildtyp Allel f r Faktor V Gen Eine Zusammenfassung der Ergebnisse pro Zentrum ist in Tabelle 2 und 3 aufgef hrt Es wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede in den Ergebnissen zwischen den Zentren f r Faktor II p 1 000 oder Faktor V p 1 000 festgestellt Tableau 2 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeit pro Zentrum Faktor Il Gesamt bereinstimmung Probentypen Zentrum 1 Zentrum 2 Zentrum 3 pro Probe Normal 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor Il Heteroz 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor V Normal Faktor Il Homoz 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor V Normal Faktor Il Normal 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Faktor V Homoz Faktor Il Normal 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Faktor V Heteroz Gesamt 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 Ubereinstimmung pro Zentrum 2 Keine diskrepanten Ergebnisse Eine Probe war auch nach Wiederholung nicht zu ermitteln 300 8501 Rev D September 2011 47
59. OR Factor VHOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor V HET 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 concord ncia total por 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 laborat rio Sem resultados discordantes Uma amostra foi indeterminada depois de reanalisada 96 300 8501 Rev D September 2011 Caracteristicas de desempenho Tableau 3 Resumo dos resultados de reprodutibilidade por laborat rio Factor V concordancia ID da amostra Site 1 Site 2 Site 3 total por amostra NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HET Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HOM Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor V HOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor V HET 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 concord ncia total por 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 amostra 2 N Sem resultados discordantes Uma amostra foi indeterminada depois de reanalisada A Tabela 4 amp 5 tem o resumo dos resultados por operador N o h diferen a estatisticamente significativa nos resultados entre laborat rios para qualquer um dos factores Factor II p 1 000 ou Factor V p 1 000 Tableau 4 Resumo dos resultados de reprodutibilidade por Operador Factor Il
60. V 300 8501 Rev D September 2011 25 Frangais Test Result Analyte Result Detail Errors History Support Assay Name Xpert HemosIL FII amp FV Combo Version 1 Il HOMOZYGOUS HOMOZYGOUS For In vitro Diagnostic Use Only Test Result Legend w Fil 202106 Primary wi 4 ru 202108 Primary r 4 FV 16916 Primary 7 2 FV 16914 Primary Fluorescence 7 Figure n GeneXpert Dx Fen tre Visualiser r sultats r sultat homozygote FII amp FV INVALIDES Si la pr sence ou Pabsence d all les normaux ou mut s Facteur II Facteur V ne peut tre d termin e r it rer le test selon les instructions ci dessous L chantillon ma pas t trait dans des conditions optimales ou la r action de PCR est inhib e INVALIDE La pr sence ou Pabsence d all les normaux ou mut s Facteur II Facteur V ne peut tre d termin e Contr le Sondes ACCEPTES Tous les r sultats du contr le de sondes sont valid s ERREUR Sila pr sence ou Pabsence d all les normaux ou mut s Facteur II Facteur V ne peut tre d termin e r it rer le test selon les instructions ci dessous Le contr le de sondes est en chec Ce dernier peut tre d 4 un remplissage incorrect du tube r actionnel 4 un d faut d int grit de sonde Cela peut tre galement d au d passement de la pression limite dans la cartouche ou un d
61. V cont m reagentes suficientes para processar 10 amostras ou amostras de controlo de qualidade O kit cont m o seguinte cartuchos do ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V com 10 tubos de reac o integrados esfera 1 seca por congelamento 1 por cartucho Polimerase dNTPs BSA albumina s rica bovina esfera 2 seca por congelamento 1 por cartucho Primers Sondas BSA albumina s rica bovina e Reagente 1 tamp o Tris EDTA Tween 20 TET 3 0 mL por cartucho Reagente 2 tamp o Tris GHCI Sarkosyl Tween 20 GHCL 3 0 mL por cartucho e CD Ficheiro de defini o do ensaio ADF Instru es para importar o ADF para o software GX Folheto informativo Conserva o e Manipula o Conserve os cartuchos e os reagentes do ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V a 2 28 C N o utilize cartuchos fora do prazo de validade N o abra um cartucho at estar pronto para realizar o teste Utilize o cartucho no per odo de 30 minutos depois de abrir a tampa A Materiais necess rios mas n o fornecidos Xn R22 R36 38 Dq GeneXpert Dx System n de cat logo varia com a configura o instrumento GeneXpert computador varinha leitora de c digo de barras e Manual do operador GeneXpert Dx System Nota o n de cat logo do The GeneXpert Dx System varia com a configura o Contacte a Cepheid para obter a configura o desejada e o n de cat logo correspondente Sof
62. a lt n gt tests CONTROL Control j lt E gt ea Marca CE Conformidad europea M Mm Representante autorizado en la Comunidad Europea L mite de temperatura Peligro biol gico a dale Fabricante Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Representante Autorizado Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Distribuido exclusivamente por Q Instrumentation Laboratory CE 68 300 8501 Rev D September 2011 Italiano Per uso diagnostico in vitro Nome del Prodotto Xpert HemosIL FI amp FV Nome Prodotto Xpert HemosIL Fattore II amp Fattore V Assay Xpert HemosIL Fattore II amp Fattore V Utilizzo Xpert HemosIL FI amp FV un test genetico qualitativo per la determinazione delle mutazioni del Fattore II G20210A e del Fattore V Leiden 1691G gt A su sangue intero con EDTA o con sodio citrato Il test pu essere eseguito solo sullo strumento GeneXpert Dx System della Cepheid e contribuisce alla diagnosi in pazienti con sospetta trombofilia Introduzione L associazione delle mutazioni del Fattore II G20210A e del Fattore V Leiden G1691A incrementa il rischio di un evento tromboembolico come ben documentato in letteratura 3 4 La mutazione del Fattore II riguarda una regione non trascritta in posizione 3 del gene attraverso la sost
63. aborinternen Sicherheitsvorschriften zum Umgang mit Chemikalien und biologischen Probenmaterialien Verwenden Sie die Kartuschen vor Ablauf des auf dem Testkit angegebenen Verfalldatums ffnen Sie den Deckel der Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Kartusche nur wenn die Probe zugef gt werden soll Verwenden Sie keine Kartusche die umgefallen ist oder gesch ttelt wurde nachdem die Probe pipettiert wurde Verwenden Sie keine Kartusche mit besch digten Reaktionskammern 36 300 8501 Rev D September 2011 JE Acc Probengewinnung und Lagerung Jede Einmalkartusche Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V ist zur Durchf hrung eines Testes vorgesehen Benutzte Kartuschen nicht wieder verwenden Kontaktieren Sie den Umweltbeauftragten fiir Abfallentsorgung Ihrer Institution fiir die sachgerechte Entsorgung von benutzten Kartuschen und unbenutzten Reagenzien Diese Materialien k nnen Eigenschaften aufweisen die dem Bundesamt der Vereinigten Staaten EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA f r gef hrlichen Abfall unterliegen und daher spezifische Abfallbeseitigungsvorschriften erfordern berpr fen Sie die staatlichen und lokalen Vorschriften da diese von den Bundesvorschriften der Vereinigten Staaten abweichen k nnen Institutionen au erhalb der USA sollten die L ndervorschriften f r die Entsorgung von gef hrlichem Abfall berpr fen Lagern Sie die Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkartuschen bei 2 28
64. actor II HOM Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor V HOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il NOR Factor VHET 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Concordancia Total 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 seg n el Lugar des 2 Sin resultados discordantes Una muestra no pudo determinarse despu s de volverse a procesar 64 300 8501 Rev D September 2011 Especificaciones del ensayo Tableau 3 Resumen de Resultados de Reproducibilidad seg n el Lugar Factor V Concordancia Total segun la ID Muestra Lugar1 Lugar 2 Lugar 3 Muestra NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HET Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HOM Factor V 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 NOR Factor II NOR Factor V 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 HOM Factor II NOR Factor V HET 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Concordancia Total 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 segun el Lugar Ac 2 Sin resultados discordantes Una muestra no pudo determinarse despu s de volverse a procesar En las Tablas 4 y 5 se muestra un resumen de los resultados seg n el usuario No se encontraron diferencias estadisticamente significativas entre los resultados seg n el usuario ni para el Fa
65. agerung bei 2 8 C bis zu 15 Tage stabil Die Proben k nnen auch bei 20 C oder 80 C bis zu 3 Monate aufbewahrt werden Die Verwendung eines gefriertauglichen Gef es wird empfohlen Alle eingefrorenen Blutproben sollten bei Raumtemperatur vollstandig aufgetaut werden Es wird empfohlen die Blutproben nicht mehr als einmal einzufrieren und wieder aufzutauen 4 Mischen Sie die Probe f nfmal ber Kopf bevor sie in die Kartusche pipettiert wird Durchf hrung Vorbereitung der Kartusche Wichtig Starten Sie den Test innerhalb von 15 Minuten nachdem Sie die Probe in die Kartusche gegeben haben S Probe Figure 1 Xpert HemosiL Faktor Il amp Faktor V Testkartusche Blick von oben Beim Zuf gen der Probe in die Kartusche bitte beachten 300 8501 Rev D September 2011 37 Deutsch gt A NA 5 Entnehmen Sie die Kartusche aus dem Testkit Die Kartusche muss vor Verwendung nicht auf Raumtemperatur vorgewirmt werden Mischen Sie das Probengef mehrmals ber Kopf bis es homogen ist ffnen Sie den Deckel der Kartusche Verwenden Sie eine Pipette mit einer Aerosol resistenten Pipettenspitze und berf hren Sie 50 pL der Natriumcitrat oder EDTA antikoagulierten Blutprobe auf den Boden der S Kammer der Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Kartusche Verschlie en Sie den Deckel der Kartusche Starten des Tests Wichtig Vergewissern Sie sich dass die Xpert HemosIL FII Xpert HemosIL FV und Xpert Hemo
66. ajar con la manipulaci n de muestras biol gicas y qu micas Utilizar los cartuchos antes de la fecha de caducidad indicada en el kit e No abrir la tapa del cartucho del test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V excepto cuando se dispense la muestra No utilizar cartuchos que se hayan ca do o hayan sido agitados despu s de dispensar la muestra e No utilizar cartuchos que tengan el tubo de reacci n da ado por ejemplo roto o doblado 54 300 8501 Rev D September 2011 428 Obtenci n y Almacenamiento de la Muestra Cada cartucho del test Xpert HemosIL Factor 11 amp Factor V es de un solo uso y se utiliza para procesar un test No reutilizar cartuchos usados Siga las normas de seguridad de su instituci n para desechar de forma adecuada los cartuchos usados y los reactivos no usados Este material tiene que seguir las directrices de la EPA y de la Agencia de Protecci n ambiental de los EEUU para el desecho de materiales peligrosos Se deben comprobar las reglamentaciones de seguridad locales y estatales ya que stas pueden variar de las federales Las instituciones que se encuentren fuera de Estados Unidos deben seguir las recomendaciones vigentes en su pais para eliminar el material peligroso Almacenar el kit Xpert HemosIL Factor 11 amp Factor V a 2 28 C No abrir la tapa del cartucho hasta el momento de procesar el test En el caso en que la presi n interna sobrepase los limites establecidos por el fabricante
67. ando o Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay com sequencia o bidireccional As amostras incluiam aqueles cujos cuidados de rotina implicavam colheitas de sangue total para analisar o Factor IT e ou Factor V as amostras foram inicialmente testadas por m todos de rotina utilizados em cada um dos laborat rios participantes e depois foram colhidas al quotas para estudar o Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay no GeneXpert O DNA em excesso foi enviado para um laborat rio contratado para sequencia o bidireccional O desempenho do Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay foi calculado relativamente aos resultados da sequencia o bidireccional Resultados totais Xpert HemoslL Factor Il amp Factor V Assay Foram analisadas 1018 amostras para o Factor II com o Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay e por sequencia o bidireccional Foram analisadas 1014 para o Factor V com o Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay e por sequencia o bidireccional Para suplementar a dimens o da amostra homozig tica tamb m foram analisadas seis amostras homozig ticas de DNA gen mico para o Factor II e cinco amostras homozig ticas para o Factor V pelo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay e sequencia o bidireccional Os resultados s o apresentados na Tabela 1 O Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay demonstrou exactid o total de 99 3 relativamente sequencia o bidireccional para o Factor II e Fac
68. as in progress Limitations The performance of the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay was validated using the procedures provided in this package insert only Modifications to these procedures may alter the performance of the test Results from the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay should be interpreted in conjunction with other laboratory and clinical data available to the clinician Rare Factor V mutations A1696G G1689A and A1692C and any additional SNPs in the probe binding region may interfere with the target detection and yield an INVALID result Interfering Substances Patients on heparin therapy and blood transfusion patients may have blood specimens that potentially interfere with the PCR results and lead to invalid or erroneous results Studies of potentially interfering substances showed no inhibition from up to 14 3 USP units mL heparin 16 mg dL bilirubin 250 mg dL added cholesterol or 1932 mg dL total triglycerides lipids No inhibition was observed using whole blood samples which had gone through one freeze thaw cycle hemolyzed blood No statistical significance was observed between matched specimens drawn into EDTA or sodium citrate Expected Values Factor II G20210A and Factor V Leiden G1691A mutations are present in 2 and 5 of the general population respectively Performance Characteristics Clinical Performance Performance characteristics of the Xpert HemosIL Factor II amp Facto
69. ata negli appositi contenitori Visualizzazione e stampa dei risultati Per istruzioni su come visualizzare e stampare i risultati vedere il Manuale dell operatore di GeneXpert Dx System Controllo di Qualit Ogni analisi esegue un probe check control PCC Probe check control PCC Prima di effettuare l analisi lo strumento effettua un controllo della fluorescenza emessa dalla sonda dopo reidratazione Tale controllo verifica l integrit della stessa Controlli Esterni Il Kit HemosIL FII amp FV DNA Control PN 0020003500 stato progettato e validato come Controllo di Qualit Esterno per il test Xpert HemosIL FII amp FV 72 300 8501 Rev D September 2011 Interpretazione dei Risultati In alternativa pu essere utilizzato un campione di sangue intero Fattore II Fattore V normale eterozigote o omozigote in sodio citrato o EDTA per l addestramento il test di rendimento e come Controllo di Qualit Esterno per il test Xpert HemosIL FII amp FV richiesto l uso di materiale cellulare Non usare DNA estratto Controlli di Qualit Esterni dovrebbero essere usati in accordo con le organizzazioni locali Interpretazione dei Risultati I risultati sono interpolati dalla misura della fluorescenza emessa dalle sonde e attraverso degli algoritmi viene identificato e segnalato a video nella schermata di visualizzazione dei risultati Per i risultati del test Xpert HemosIL FII figure 3 4 e 5 test Resun
70. au 3 Summary of Reproducibility Results by Site Factor V Performance Characteristics Total Agreement by Specimen ID Site 1 Site 2 Site 3 Sample NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II HET Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II HOM Factor VNOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor VHOM 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II NOR Factor V HET 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Total Agreement by Site 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 No discordant results One sample was indeterminate after retest A summary of the results by operator is shown in tables 4 and 5 There was no statistically significant difference in results among sites for either Factor II p 1 000 or Factor V p 1 000 Tableau 4 Summary of Reproducibility Results by Operator Factor Il Site 1 Site 2 Site 3 Total Agreement by Specimen ID Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Op 1 Op 2 Sample NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor Il HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor VNOR Factor INOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10
71. ay sono specifiche per la determinazione del genotipo del FII alla posizione 20210 e o del FV alla posizione 1691 300 8501 Rev D September 2011 69 Italiano Composizione Y Il kit contiene i reagenti sufficienti ad eseguire 10 determinazioni o controlli di qualit ed composto da 10 cartucce di HemosIL Fattore II amp Fattore V con camere di processamento separate contenenti i seguenti reattivi in forma liofila Inun compartimento ci sono in forma liofila i seguenti reattivi Polimerasi dNTPs Albumina Bovina BSA In un compartimento ci sono in forma liofila i seguenti reattivi Primers Probes BSA Reagente 1 Tris buffer EDTA Tween 20 TET 3 0 mL per cartuccia e Reagente 2 Tris Buffer GHCI Sarkosyl Tween 20 GHCI 3 0 mL per cartuccia e CD contenente File di definizione del Test ADF Istruzione di come importare il protocollo nel GX Software Inserto Conservazione e Stabilit dei reagenti JE Mantenere le cartucce e i reagenti ad una temperatura compresa tra 2 28 C Non usare le cartucce fuori dalla data di scadenza Non aprire la cartuccia fino al momento di eseguire il test e Usare la cartuccia entro 30 minuti dall apertura del coperchio A Reagenti Ausiliari I seguenti prodotti non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati separatamente Strumento GeneXpert computer barcode scanner e manuale operatore dello Strumento Note Lo strumento pres
72. ba procesando NO RESULTADO Probe Check Chequeo de la sonda NA No Aplica MOTIVOS PARA REPETIR UN ENSAYO Repetir el test usando un cartucho nuevo no reutilizar un cartucho reactivos l quidos 1 y 2 nuevos y una nueva al cuota de sangre total anticoagulada con citrato o EDTA en los siguientes casos Un resultado NO V LIDO indica que la muestra no fue procesada adecuadamente o bien se produjo una inhibici n de la PCR Un resultado ERROR indica que el chequeo de las sondas no ha sido satisfactorio y que el ensayo fue abortado posiblemente debido al incorrecto llenado de los tubos de reacci n o a un problema en la integridad de la sonda Los errores pueden tambi n ser producidos debido a que se han superado los l mites de presi n m xima o a un fallo en alg n componente del sistema Un NO RESULTADO indica que se han obtenido datos insuficientes para calcular los resultados del test Por ejemplo el operador par un test que se estaba procesando Limitaciones Las especificaciones del ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V fueron validadas siguiendo el procedimiento descrito en su ficha t cnica Modificaciones en este procedimiento pueden alterar la funcionalidad de dicho test Los resultados del Ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V deben interpretarse en combinaci n con otros datos cl nicos y de laboratorio disponibles para el cl nico Mutaciones raras del Factor V A1696G G1689A y A1692C y c
73. bed above was analyzed two times per day over 5 testing days using each of three assay lots at a single testing site 5 specimens x 2 runs per dayx 3 lotsx 5 days A summary of the results by lot is shown in tables 6 and 7 There was no statistically significant difference in results between lots for either Factor II p 1 000 or Factor V p 1 000 Tableau 6 Summary of Reproducibility Results by Lot Factor Il Total Agreement by Specimen ID Lot 1 Lot 2 Lot 3 Sample NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II HET Factor V 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 NOR Factor II HOM Factor V 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 NOR Factor II NOR Factor V 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 HOM Factor II NOR Factor V 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 HET Total Agreement by Lot 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 300 8501 Rev D September 2011 References Tableau 7 Summary of Reproducibility Results by Lot Factor V Total Agreement by Specimen ID Lot1 Lot 2 Lot 3 Sample NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor Il HET Factor VNOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Factor II HOM Factor V 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 NOR Factor II NOR Factor V 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 HOM
74. ch Figure 4 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige heterozygotes Messergebnis fiir FII Fil HOMOZYGOUS Figure 5 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige homozygotes Messergebnis f r FII F r Xpert HemosIL FV Messergebnisse Abbildungen 6 8 40 300 8501 Rev D September 2011 Interpretation der Ergebnisse FV NORMAL Figure 6 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige normales Messergebnis fiir FV Figure 7 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige heterozygotes Messergebnis f r FV 300 8501 Rev D September 2011 41 Deutsch Figure 8 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige homozygotes Messergebnis fiir FV F r Xpert HemosIL FII amp FV Kombi Messergebnisse Abbildungen 9 11 Figure 9 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige normales Messergebnis f r FII amp FV 42 300 8501 Rev D September 2011 ISI ISI ISI ISI NM Figure n GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige homozygotes Messergebnis fiir FII amp FV 300 8501 Rev D September 2011 Interpretation der Ergebnisse 43 Deutsch Invalides Ergebnis Die An oder Abwesenheit von Faktor II Faktor V normalen und mutanten Allelen konnte nicht bestimmt werden wiederholen Sie den Test nach der unten aufgef hrten Anleitung Die Probe wurde nicht richtig aufbereitet oder die PCR wurde gehemmt Invalides Ergebnis Die An
75. cteur II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V NOR Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V HOM Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V HET Total 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 d agr ment par lot 300 8501 Rev D September 2011 31 Frangais Tableau 7 R sultats de reproductibilit par Lot Facteur V Total d Agr ment par ID chantillon Lot 1 Lot 2 Lot 3 chantillon NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur II HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V NOR Facteur II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V NOR Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V HOM Facteur II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Facteur V HET Total 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 d agr ment par lot R f rences 1 Thrombophilia as a multigenic disease B Zoeller P G de Frutos A Hillarp B Dahlback Haematologica 1999 84 59 70 2 Screening for inherited thrombophilia indications and therapeutic implications V De Stefano E Rossi K Paciaroni G Leone Haematologica 2002 87 1095 1108 3 Laboratory investigation of thrombophilia A Tripodi and PM Mannucci Clinical Chemistry 2001 47 1597 1606
76. ctor II p 1 000 ni para el Factor V p 1 000 Tableau 4 Resumen de Resultados de Reproducibilidad seg n Usuario Factor Il Lugar 1 Lugar 2 Lugar 3 Concordancia Total segun la ID Muestra Us 1 Us 2 Us Us 2 Us 1 Us 2 Muestra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor Il HET 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II HOM 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V NOR Factor II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor V HOM Factor II NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 90 0 9 10 98 3 59 60 Factor V HET Concordancia 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 50 50 98 0 49 50 99 7 299 300 Total segun el Usuario Ac 2 Sin resultados discordantes Una muestra no pudo determinarse despu s de volverse a procesar 300 8501 Rev D September 2011 65 Espanol Tableau 5 Resumen de Resultados de Reproducibilidad seg n Usuario Factor V Lugar Lugar 2 Lugar 3 Concordancia Total segun la ID Muestra Us 1 Us 2 Us 1 Us 2 Us 1 Us 2 Muestra NOR 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 60 60 Factor Il HET
77. das externe Qualit tsprogramm des Xpert HemosIL FII amp FV Testes hergestellt und validiert Alternativ k nnen normale heterozygote oder homozygote Faktor II Faktor V Vollblutproben Natriumcitrat oder EDTA antikoaguliert zu bungszwecken als Leistungstest und als externe Qualit tskontrolle f r den Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Test verwendet werden Zellbasiertes Material ist notwendig Verwenden Sie keine extrahierte DNA Externe Qualit tskontrollen sollten in Abh ngigkeit von der Zust ndigkeit in bereinstimmung mit den jeweiligen Vorschriften der lokalen regionalen und staatlichen Organisationen durchgef hrt werden Interpretation der Ergebnisse Die Ergebnisse werden vom GeneXpert Dx System durch die gemessenen Fluoreszenzsignale und die eingebauten Algorithmen interpretiert um den Genotyp zu identifizieren Anzeige der Ergebnisse in den folgenden Fenstern F r Xpert HemosIL FII Messergebnisse Abbildungen 3 5 If Test Result i Analyte Result i Detail i Errors History i Support Assay Name Xpert HemoslL FII Version 1 Test Result For In vitro Diagnostic Use Only Legend a 1 500 Z Fl 202106 Primary PA 2 4 Fil 202104 Primary g Fa 5 300 ai a A E 5 2007 di pre g x Figure 3 GeneXpert Dx System Fenster Ergebnisanzeige normales Messergebnis fiir FII 300 8501 Rev D September 2011 39 Deuts
78. das para realizar por rutina la determinaci n del Factor II y del Factor V en sangre total En primer lugar las muestras se procesaron por los m todos de rutina usados en el laboratorio participante A continuaci n las muestras se alicuotaron y se realiz el test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V en el GeneXpert El DNA en exceso se enviaba a un laboratorio contratado para que realizaran la secuenciaci n bidireccional La evaluaci n del Ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V se hizo en relaci n a los resultados de la secuenciaci n bidireccional Resultados Globales Ensayo Xpert HemoslL Factor Il amp Factor V Se procesaron un total de 1018 muestras para Factor II tanto por el m todo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V como por secuenciaci n bidireccional Un total de 1014 se procesaron para el Factor V tanto por el m todo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V como por secuenciaci n bidireccional Adem s para aumentar la cantidad de muestras homozigotas se procesaron tambi n 6 muestras humanas homozigotas para Factor II y cinco homozigotas para Factor V tanto por el m todo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V como por la secuenciaci n bidireccional Los resultados se muestran en la Tabla 1 El ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor V present una exactitud global relativa del 99 3 en relaci n a la secuenciaci n bidireccional para Factor II y Factor V Tableau 1 Evaluaci n de Xpert HemoslL Factor Il
79. e cartouche ayant servi Eliminer les cartouches Xpert HemosIL Factor II amp Factor V usag es ainsi que les r actifs non utilis s conform ment aux directives de s curit de votre tablissement Les caract ristiques de risques de ces mat riels peuvent correspondre aux recommandations de federal EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA faisant appel des proc dures sp cifiques d limination V rifier les proc dures d limination en vigueur localement et pouvant diff r es de celles en vigueur aux USA Il est recommand aux tablissements situ s hors des USA de v rifier les proc dures d limination des d chets en vigueur localement Stocker le coffret Xpert HemosIL Factor II amp Factor V 2 28 C A Ne pas ouvrir le couvercle de la cartouche avant d tre en mesure de r aliser le test Si durant les diff rentes tapes la pression interne de la cartouche se trouve un niveau sup rieur celui d fini par le fabricant le test en cours est automatiquement arr t et une ERREUR est indiqu e en lieu et place du r sultat Les fiches techniques de donn es de s curit Material Safety Data Sheets MSDS de tous les r actifs fournis dans ce test sont disponibles aupr s de l Assistance technique de Cepheid et sur les sites Web de Cepheid www cepheid com et www cepheidinternational com L Albumine S rique Bovine BSA utilis e dans ce r actif a t produite sur le territoire des Etats
80. e Version Select Assay xpert HemosiL FII 1 M Select Module Xpert HemosiL FII 1 Xpert HemoslL FV 1 Reagent Lot ID xpert HemosiL Fil amp FV Combo 1 Test Type Specimen v Sample Type other v Other Sample Type Notes Start Test Scan Cartridge Barcode Cancel Figure 2 Create Test window From the Select Assay drop down menu select the appropriate assay to be run Click Start Test In the dialog box that appears type your password Open the instrument module door with the blinking green light and load the cartridge SO es o JON Close the door The test starts and the green light stops blinking When the test is finished the light turns off 10 When the system releases the door lock open the module door and remove the cartridge 11 Dispose of the used cartridges in the appropriate specimen waste containers according to your institution s standard practices Viewing and Printing Results For detailed instructions on how to view and print the results see the GeneXpert Dx System Operator Manual Quality Control Each test includes a probe check PCC Probe check control PCC Before the start of the PCR reaction the GeneXpert Dx System measures the fluorescence signal from the probes to monitor bead rehydration reaction tube filling probe integrity and dye stability Probe Check passes if it meets the assigned acceptance criteria External Controls HemosIL FI amp FV DNA Control P N 0020003500 has been designed and va
81. eagenzien bei 2 28 C Verwenden Sie keine Kartuschen mit abgelaufenem Verfalldatum ffnen Sie die Kartusche erst wenn Sie bereit sind die Testung durchzufihren Verwenden Sie die Kartuschen innerhalb von 30 Minuten nach ffnen des Deckels AN Zus tzlich ben tigte Materialien GeneXpert Dx System Artikelnummer abh ngig von der Konfiguration GeneXpert Ger t Computer Barcode Scanner und GeneXpert Dx Ger te Bedienerhandbuch Hinweis Die Artikelnummer des GeneXpert Dx Systems variiert je nach Konfiguration bitte kontaktieren Sie hierzu Cepheid GeneXpert Dx Software 4 0 oder h her Pipette mit Aerosol resistenten Pipettenspitzen zur Pipettierung von 50 uL Natriumcitrat oder EDTA Vollblut HemosIL FII amp FV DNA Kontrolle Art Nr 0020003500 Warnung und Vorsichtsma nahmen Xn R22 a Gesundheitssch dlich beim Verschlucken R22 Reizt die Augen und Haut R36 38 bi Behandeln Sie alle biologischen Proben inklusive der benutzten Kartuschen als m gliche bertr ger von infekti sen Erregern Oft ist es nicht vorher zu sehen welcher Bestandteil infekti s sein k nnte daher sollten alle biologischen Proben mit den allgemeinen Vorsichtsma nahmen behandelt werden Richtlinien zur Probenbehandlung sind erh ltlich bei den U S Centers for Disease Control and Prevention und dem Clinical and Laboratory Standards Institut ehemals National Committee for Clinical Laboratory Standards Beachten Sie Ihre l
82. enta diverse configurazioni possibili contattare la Cepheid per quella pi adatta alle esigenze del proprio laboratorio Controlli di qualit esterni Possono essere utilizzati campioni di sangue citratati o con EDTA sia normali che patologici GeneXpert Dx Software versione 4 0 o superiori e Pipette per dispensare i 50 uL di sangue con puntali contenenti un filtro HemosIL FII amp FV DNA Control PN 0020003500 Avvertenze e precauzioni Xn r2 e Nocivo per ingestione R22 Irritante per gli occhi e la pelle R36 38 R36 38 O Tutti i prodotti devono essere trattati come potenzialmenti infetti Fare riferimento alle linee guida rilasciate e disponibili presso PU S Center for Disease Control and Prevention and the Clinical and Laboratory Standards Institute ex National Committee for Clinical Laboratory Standards Seguire attentamente le procedure di sicurezza per la manipolazione dei campioni biologici e sostanze chimiche Usarele cartucce entro la data di scadenza riportata sul kit Aprire il coperchio della cartuccia Xpert HemosIL Fattore II amp Fattore V solo per aggiungere il campione Non usare una cartuccia che sia accidentalmente caduta o che sia stata agitata dopo l aggiunta del campione Non usare la cartuccia se danneggiata Ogni cartuccia esegue un solo test Non riutilizzare 70 300 8501 Rev D September 2011 2 28 Preparazione dei Campioni e Conservazione Consultare
83. eo de Comprobaci n de la Sonda PPC que verifica la rehidrataci n de los reactivos el llenado del tubo de la PCR del cartucho la integridad de la sonda y la estabilidad de la sefial de la misma Los primers y las sondas del kit Xpert HemosIL Factor II amp Factor V determinan el genotipado del gen del Factor II en la posici n 20210 y o del gen del Factor V en la posici n 1691 300 8501 Rev D September 2011 53 2 28 24 Espafiol Reactivos e Instrumentacion Material suministrado El kit Xpert HemosIL Factor II amp Factor V contiene los reactivos suficientes para procesar 10 muestras o controles de calidad El kit incluye los componentes siguientes Cartuchos Xpert HemosIL Factor II amp Factor V con los tubos de reacci n integrados 10 Perla 1 liofilizado 1 por cartucho Polimerasa dNTPs Albtimina de Suero Bovino BSA Perla 2 liofilizado 1 por cartucho Primers Sondas BSA e Reactivo 1 Tris Buffer EDTA Tween 20 TET 3 0 mL por cartucho Reactivo 2 Tris Buffer GHCI Sarkosyl Tween 20 GHCI 3 0 mL por cartucho e CD Archivo definici n del test ADF Instrucciones para importar el archivo ADF al software del GX Ficha t cnica Almacenamiento y manejo Almacenar los cartuchos y los reactivos de Xpert HemosIL Factor II amp Factor V a 2 28 C No utilizar cartuchos cuya fecha de caducidad haya vencido No abrir los cartuchos hasta el momento de procesar el test
84. eptember 2011 87 Portugu s Para adicionar a amostra ao cartucho 1 Removao cartucho do kit N o necess rio que o cartucho esteja temperatura ambiente antes de utilizar 2 3 Fa a a mistura invertendo o cartucho v rias vezes at homogeneizar 4 Abra a tampa do cartucho Utilizando uma pipeta com uma ponta de filtro resistente a aeross is transfira 50 uL de uma amostra de sangue anticoagulado com EDTA ou citrato de s dio para a parede do fundo da abertura S do cartucho do ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V 5 Feche a tampa do cartucho Iniciando o teste Important Antes de iniciar o teste assegure se que os ficheiros de defini o s o importados para o software Os ficheiros est o no CD fornecido Esta sec o lista os passos b sicos para realizar o teste Para obter instru es detalhadas consulte o Manual do operador do GeneXpert Dx System 1 Ligue o instrumento GeneXpert Dx e em seguida ligue o computador o software GeneXpert iniciar se automaticamente Ligue se ao GeneXpert Dx System software com o nome de utilizador e palavra passe Najanela GeneXpert Dx System clique em Create Test Surge a janela Create Test 2 3 4 Registe o c digo de barras do cartucho 5 Na caixa Sample ID registe com o scanner ou digite a ID da amostra Assegure se que digita a ID correcta da amostra Em alternativa fa a scan do c digo de barras A ID da amostra est associada aos re
85. esence of an additional SNP outside the probe binding region resulted in the correct genotyping call Analytical Sensitivity Studies were performed to determine the minimum and maximum amount of input patient specimen for both EDTA and sodium citrate anticoagulated whole blood needed to obtain a correct genotype such that the lower bound of the 95 confidence interval for the estimated correct call fraction is greater than 95 300 8501 Rev D September 2011 11 English EDTA and sodium citrate anticoagulated blood samples were tested n 20 at 8 volumes varying from 5 pL to 250 pL Although the assay can tolerate varying volumes from 15 pL 100 pL 50 pL is the recommended sample volume to minimize the risk of errors associated with limited and excess sample Reproducibility A panel of 5 specimens consisting of one of each specimen type listed below was tested in duplicate by two different operators on 5 different days at each of three sites 3 specimens x 2 times day x 2 operators per site x 5 days x 3 sites One lot of Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay kit was used at each of the 3 testing sites Xpert HemosIL Factor II amp Factor V assays were performed according to the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V procedure Results are summarized in Tables 2 5 Study panel 1 a sample with normal wildtype alleles for both Factor II amp Factor V 2 a sample heterozygous for Factor II mutation i e one mutant
86. figures 3 through 5 Test Result Analyte Result Detail Errors History Support Assay Name Xpert HemoslL FII Version 1 Test Result II For In vitro Diagnostic Use Only 4 e 2 Fl 202106 Primary ll e 2 FI 202104 Primary o we 5 snot a 1 A 3 2007 Cd i E 1007 E a Figure 3 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado normal do Factor Il 300 8501 Rev D September 2011 89 Portugu s Figure 4 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado do Factor Il heterozig tico Figure 5 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado do Factor Il homozig tico 90 300 8501 Rev D September 2011 Controlo de qualidade For Xpert HemosIL FV Results figures 6 through 8 FV NORMAL Figure 6 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado normal do Factor V Figure 7 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado do Factor V heterozig tico 300 8501 Rev D September 2011 91 Portugu s Figure 8 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado do Factor V homozig tico For Xpert HemosIL FII amp FV Combo Results figures 9 through 11 Figure 9 GeneXpert Dx System Janela de visualiza o de resultados resultado normal Fil e FV
87. form testing Use the cartridge within 30 minutes after opening the lid A Materials Required but Not Provided GeneXpert Dx System catalog number varies by configuration GeneXpert instrument computer barcode scanner and GeneXpert Dx System Operator Manual Note The GeneXpert Dx System catalog number varies by configuration Contact Cepheid for the desired configuration and corresponding catalog number GeneXpert Dx Software version 4 0 or higher Pipette to dispense 50 pL sodium citrate or EDTA anticoagulated blood with aerosol resistant filter tips HemosIL FII amp FV DNA Control P N 0020003500 Warnings and Precautions Xn R22 o R36 38 Harmful if swallowed R22 Irritating to eyes and skin R36 38 Treat all biological specimens including used cartridges as if capable of transmitting infectious agents Because it is often impossible to know which might be infectious all biological specimens should be treated with universal precautions Guidelines for specimen handling are available from the U S Centers for Disease Control and Prevention and the Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Follow your institution s safety procedures for working with chemicals and handling biological samples Use the cartridges before the expiration date indicated on the kit Do not open the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay cartridge lid except when adding sam
88. giciel du GeneXpert Dx 3 Dans la fen tre du syst me GeneXpert Dx cliquer sur Cr er Test La fen tre Cr er Test appara t 4 Lire le code barres de la cartouche avec le lecteur 5 Dans la fen tre ID chantillon entrer PID chantillon ou la lire Paide du lecteur code barres S assurer que PID chantillon est correcte dans le cas d une saisie manuelle LID chantillon est associ e aux r sultats du test et appara t dans la fen tre Visualiser R sultats et sur tous les rapports 20 300 8501 Rev D September 2011 Visualiser et imprimer les r sultats Create Test ES Sample ID MT01800 Name Version Select Assay Xpert HemosiL FII 1 Select Module Xpert HemosiL Fil Xpert HemoslL FV Reagent Lot ID xpert HemosiL Fil amp FV Combo Test Type Specimen v Sample Type other Other Sample Type Notes Start Test Scan Cartridge Barcode Cancel Figure 2 Fen tre s lection d un test 6 A partir du menu de s lection des tests s lectionner le test appropri 7 Cliquer sur D marrer Test Dans la bo te de dialogue qui appara t saisir votre mot de passe 8 Ouvrir la porte du module de l instrument lorsque le voyant vert clignote charger la cartouche 9 Refermer la porte Le test d marre et le voyant vert cesse de clignoter Lorsque Panalyse est termin e le voyant s teint 10 Lorsque le systeme d verroui
89. hemistry 2001 47 1597 1606 4 Technical standards and guidelines Venous thromboembolism Factor V Leiden and prothrombin 20210G gt A testing A disease specific supplement to the standards and guidelines for clinical genetics laboratories Elaine B Spector Wayne W Grody Carla J Matteson Glenn E Palomaki Daniel B Bellissimo Daynna J Wolff Linda A Bradley Thomas W Prior Gerald Feldman Bradley W Popovich Michael S Watson and C Sue Richards ACMG Standards and Guidelines July August 2005 Vol 7 No 6 5 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 6 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition 7 Grody WW Griffin JH Taylor AK et al American college of medical genetic consensus statement on factor V leiden mutation testing Genetics in Medicine 2001 3 2 139 148 300 8501 Rev D September 2011 67 Espanol Tabla de Simbolos Tableau 8 Significado de los simbolos Simbolo Significado Numero de cat logo Dispositivo m dico para uso diagn stico in vitro No reutilizar Precauci n consultar el documento anexo Fabricante Contiene suficiente par
90. ibbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Representante autorizado Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Distribuido exclusivamente por Q Instrumentation Laboratory CE 300 8501 Rev D September 2011
91. inem neuen Aliquot der Natriumcitrat oder EDTA antikoagulierten Vollblutprobe Ein invalides Ergebnis zeigt an dass die Probe nicht korrekt aufbereitet oder die PCR gehemmt wurde Ein fehlerhaftes Ergebnis zeigt an dass ein Fehler bei der PVK aufgetreten ist und der Test m glicherweise auf Grund von unsachgem er F llung der Reaktionskammern oder Probenintegrationsproblemen abgebrochen wurde Fehler k nnen ebenso auftreten bei berschreitungen der maximalen Druckbegrenzung oder Systemkomponentenfehlern Die Anzeige kein Ergebnis zeigt an dass unzureichende Daten erfasst wurden z B hat der Anwender den Test w hrend des Messvorgangs gestoppt Einschr nkungen Die Testcharakteristik des Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V wurde nur anhand der in dieser Packungsbeilage aufgef hrten Anleitungen validiert nderungen dieser Anleitung k nnen die Testcharakteristik ver ndern Die Ergebnisse des Xpert HemosIL Faktor 11 amp Faktor V Testkits sollten in Verbindung mit anderen dem Kliniker zur Verf gung stehenden Laborergebnissen und klinischen Daten interpretiert werden Seltene Faktor V Mutationen G1696A G1689A und A1692C und jegliche zus tzliche SNPs in der Bindungsregion der Sonde k nnen mit der Zielsequenz interferieren und zu einem invaliden Ergebnis f hren Interferierende Substanzen Blutproben von Patienten unter Heparintherapie und von Patienten die Bluttransfusionen erhalten haben k nnen unter Umst
92. ing to instructions below The Probe Check control failed and the assay aborted possibly due to an improperly filled reaction tube or a probe integrity problem was detected Errors may also be caused by exceeding the maximum pressure limits or a system component failure ERROR Probe Check FAIL one or more of the probe check results fail If the probe check passed the error is caused by a system component failure NO RESULT Presence or absence of Factor II Factor V normal and mutant alleles cannot be determined repeat assay according to instructions below Insufficient data were collected to produce an assay result for example this can occur if the operator stopped a test that was in progress NO RESULT Probe Check NA not applicable Reasons to Repeat the Assay Repeat the assay using a new cartridge do not re use the cartridge new liquid reagents 1 and 2 and a new aliquot of sodium citrate or EDTA anticoagulated whole blood e An INVALID result indicates that the sample was not properly processed or PCR was inhibited An ERROR result indicates that the Probe Check control failed and the assay was aborted possibly due to an improperly filled reaction tube or a reagent probe integrity problem was detected Errors may also be caused by exceeding the maximum pressure limits or a system component failure ANO RESULT indicates that insufficient data were collected For example the operator stopped a test that w
93. ituzione di una G con una ed associato ad un incremento nel plasma del livello di protrombina Il fattore V Leiden anch essa una mutazione puntiforme G gt A del gene ci comporta una sostituzione aminoacidica Arginina in Glutammica nella proteina conferendone una resistenza alla Proteina C attivata APC FII G20210A e il FV Leiden sono mutazioni presenti rispettivamente nel 2 e 5 della popolazione Principio del metodo Il GeneXpert un sistema completamente integrato che automatizza i tre processi necessari per eseguire una Real Time PCR preparazione del campione amplificazione e rilevamento della sequenza target Il sistema consiste di un modulo analitico e di un modulo di controllo costituito da un PC laptop o desktop un lettore bar code ed un software di gestione della procedura analitica Il sistema richiede l uso di una cartuccia che contiene i reagenti necessari per l esecuzione della real time PCR e rilevazione delle mutazioni del FV e del FII Inoltre essendo un sistema chiuso si evitano qualsiasi forma di cross contaminazione tra differenti campioni Per ciascuna determinazione viene eseguito un Probe Check Control che verifica l integrit delle sonde la corretta reidratazione dei reagenti e la corretta ricostituzione dei compartimenti Per una completa descrizione del sistema si prega di fare riferimento al Manuale Operatore dello strumento I primer e le probe nel kit Xpert HemosIL Fattore II amp Fattore V Ass
94. lidated for the External QC program of Xpert HemosIL FII amp FV Assay 4 300 8501 Rev D September 2011 Interpretation of Results Alternatively Normal heterozygous or homozygous Factor II Factor V whole blood samples sodium citrate or EDTA anticoagulant may also be used for training proficiency testing and external QC of the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay Cell based material is required Do not use extracted DNA External controls may be used in accordance with local state and federal accrediting organizations as applicable Interpretation of Results The results are interpreted by the GeneXpert Dx System from measured fluorescent signals and embedded algorithms to identify genotypes and are shown in the following View Results windows For Xpert HemosIL FII Results figures 3 through 5 Test Result Analyte Result Detail Errors History Support Assay Name Xpert HemosiL FII Version 1 Test Result INTA For In vitro Diagnostic Use Only Legend Fil 202106 Primary e 4 FI 202104 Primary Fluorescence Cycles Figure 3 GeneXpert Dx System View Results window Factor Il normal result 300 8501 Rev D September 2011 5 English Figure 4 GeneXpert Dx System View Results window Factor Il heterozygous result Fil HOMOZYGOUS Figure 5 GeneXpert Dx System View Results window Factor Il homozygous res
95. lle la porte l ouvrir et retirer la cartouche usag e 11 Jeter la cartouche usag e dans un conteneur appropri en concordance avec les pratiques de votre laboratoire Visualiser et imprimer les r sultats Pour de plus amples informations relatives ces fonctions se r f rer au manuel d utilisation du syst me GeneXpert Dx Contr le de Qualit Chaque test int gre un contr le de sondes PCC Contr le de Sondes PCC Avant que la r action de PCR ne commence le syst me GeneXpert Dx mesure le signal de fluorescence des sondes afin de contr ler la r hydratation des particules le remplissage du tube r actionnel Pint grit des sondes et la stabilit des colorants Les r sultats du contr le de sondes sont accept s si ceux ci se trouvent dans les limites d acceptabilit Contr les externes de qualit HemosIL FII amp FV DNA Control R f 0020003500 a t con u et valid pour tre utilis comme contr le externe de qualit pour le test Xpert HemosIL FI amp FV De fa on alternative des chantillons de sang total citrate de sodium ou EDTA issus de patients normaux h t rozygotes ou homozygotes pour le facteur II facteur V peuvent galement tre utilis s des fins de formation d valuation de comp tence et de contr le qualit externe dans le cadre de l utilisation du test Xpert HemosIL Factor 11 amp Factor V Interpr tation des R sultats Les r sultats sont interpol s par le systeme GeneXpert Dx
96. mg dl 160 mg l le cholest rol surcharge jusqu 250 mg dl 2 5 g 1 les triglyc rides totaux quivalent lipides jusqu a 1932 mg l 19 3 g l Aucune inhibition nest observ e avec des chantillons de sang total ayant subi une cong lation d cong lation h molyse Aucune diff rence statistiquement significative nest observ e entre les r sultats obtenus avec des chantillons de sang pr lev sur EDTA et ceux obtenus avec des chantillons de sang pr lev sur citrate de sodium Valeurs attendues Les mutations des Facteurs II G20210A et V Leiden G1691A sont pr sentes dans 2 et 5 de la population g n rale respectivement Caract ristiques et performances Performances Cliniques Les performances du test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V ont t valu es au cours d une tude prospective multi centrique dans 7 sites Les r sultats du test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V ont t compar s ceux obtenus avec la m thode de s quen age bi directionnel Les chantillons de patients cons cutifs inclus dans cette tude chantillons de sang total pr lev s des fins de d termination en routine des Facteurs II V ont t analys s en premier lieu en utilisant la m thode de routine dans chaque centre participant Ces chantillons ont t ensuite aliquot s et collect s pour tre analys s avec le r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V sur le GeneXpert Lexc s d ADN a t transmi
97. mmary and Explanation The association of Factor II G20210A and Factor V Leiden G1691A mutations with an increased risk for venous thrombosis has been well documented 34 The Factor II or Prothrombin G20210A mutation refers to the G to A transition at nucleotide 20210 in the 3 untranslated region of the gene and is associated with increased plasma levels of prothrombin Factor V Leiden G1691A refers to the G to A transition at nucleotide position 1691 of the Factor V gene resulting in the substitution of the amino acid arginine by glutamine in the Factor V protein causing resistance to cleavage by Activated Protein C APC Factor II G20210A and Factor V Leiden G1691A mutations are present in 2 and 5 of the general population respectively Principle of the Procedure The GeneXpert Dx System automates and integrates sample purification nucleic acid amplification and detection of the target sequence in whole blood using real time PCR assays The system consists of an instrument personal computer handheld barcode scanner and preloaded software for running tests and viewing the results The system requires the use of single use disposable cartridges that hold the PCR reagents and host the PCR process Because the cartridges are self contained cross contamination between samples is eliminated For a full description of the system see the GeneXpert Dx System Operator Manual The Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay includes
98. n a de SNP adicional na regi o de liga o da sonda na maioria dos casos resultou num resultado inv lido Quando se obteve um resultado v lido o gen tipo era o correcto A presen a de um SNP adicional for a da regi o de liga o da sonda resultou numa atribui o correcta da genotipagem Sensibilidade anal tica Foram efectuados estudos para determinar a quantidade m xima e m nima de input de amostras de sangue total de doentes com EDTA ou citrato de s dio necess ria para obter o gen tipo correcto de modo a que o limite inferior do intervalo de confian a a 95 para a frac o estimada de correct call superior a 95 Foram analisadas amostras de sangue anticoaguladas com EDTA e citrato de s dio n 20 a 8 volumes variando de 5 pL a 250 uL Embora o ensaio possa tolerar volumes vari veis de 15 pL 100 pL 50 pL o volume recomendado da amostra para minimizar o risco de erros associados com amostra limitada e em excesso Reprodutibilidade Painel de 5 amostras consistindo numa de cada tipo de amostra listado a seguir foi analisado em duplicado por 2 operadores diferentes em 5 dias diferentes em cada um dos 3 laborat rios 3 amostras x 2 vezes dia x 2 operadores por laborat rio x 5 dias x 3 laborat rios Um lote de kits de Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay foi utilizado em cada um dos 3 laborat rios Os ensaios Xpert HemosIL Factor II amp Factor V foram realizados de acordo com o procedimento Xpe
99. nc pio do Procedimento O GeneXpert Dx System automatiza e integra a purifica o da amostra a amplifica o dos cidos n cleicos e a detec o da sequ ncia alvo em amostras de sangue total com o ensaio RT PCR em tempo real Este sistema consiste num instrumento computador pessoal scanner manual de c digo de barras e software pr carregado para analisar testes e visualizar os resultados O sistema requer a utiliza o de cartuchos descart veis de uso nico que t m os reagentes PCR e onde decorre o processo de PCR Como os cartuchos s o auto contidos a contamina o cruzada entre amostras eliminada Para uma descri o completa do sistema consulte o GeneXpert Dx System Operator Manual O ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V inclui reagentes para a detec o dos alelos normais e mutantes do Factor II e do Factor V a partir de sangue total anticoagulado Cada cartucho de ensaio utiliza um Probe Check Control controlo de verifica o de sonda PCC que verifica a re hidrata o do reagente o enchimento do tubo de PCR no cartucho integridade da sonda e estabilidade do corante Os primers e as sondas no ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V determinam o gen tipo do gene Factor II na posi o 20210 e ou gene do Factor V na posi o 1691 300 8501 Rev D September 2011 85 2 28 C Portugu s Reagentes e Instrumentos Material fornecido O kit de ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor
100. no le seguenti condizioni INVALID si verifica se il campione non stato correttamente processato o che la PCR stata inibita e ERROR Errore dovuto al non superamento del Probe Check Control dovuta alla non corretta ricostituzione dei reagenti o alle sonde non integre L errore pu verificarsi se viene superato il limite superiore di pressione interna o se un componente hardware presenta qualche problema e NO RESULT Insufficienti dati per produrre un risultato dovuto per esempio ad interruzione del processo analitico da parte dell operatore Limitazioni le performance del test Xpert HemosIL FII amp FV sono state validate utilizzando la procedura descritta nell inserto Modifiche della procedura potrebbero alterare le performance del test Rare mutazioni del FV A1696G G1689A e A1692G e altre SNPs potrebbero interferire con la corretta sequenza target e dare un risultato INVALIDO Sostanze interferenti Eseguire il test utilizzando campioni di sangue con EDTA o sodio citrato L utilizzo di campioni eparinati inibiscono la PCR Studi di sostanze potenzialmente interferenti non ha mostrato alcuna inibizione fino a 3 unit USP mL di eparina 16 mg dL bilirubina 250 mg dL colesterolo aggiunto o 1932 mg dL trigliceridi totali lipidi Alcuna inibizione stata osservata usando campioni di sangue intero che era passato attraverso un ciclo di congelamento decongelamento sangue emoli
101. nol Figure 4 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de Factor Il Heterozigoto Figure 5 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de Factor Il Homozigoto 58 300 8501 Rev D September 2011 Interpretacion de resultados Para los resultados del test Xpert HemosIL FV figuras de la 6 a la 8 FV NORMAL Figure 6 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de Factor V Normal Figure 7 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de Factor V Heterozigoto 300 8501 Rev D September 2011 59 Espanol FV HOMOZYGOUS Figure 8 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de Factor V Homozigoto Para los resultados del test Xpert HemosIL FII amp FV Combo figuras de la 9 a la 11 Fil NORMAL Figure 9 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de FII amp FV Normal 60 300 8501 Rev D September 2011 Interpretaci n de resultados SaS OSS Figure 10 Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de FII amp FV Heterozigoto Figure n Sistema Genexpert Dx Ventana de Visualizaci n de Resultados Resultado de FII amp FV Homozigoto 300 8501 Rev D September 2011 61 Espanol NO V LIDO Si la presencia o ausencia de los alelos normales y mutados
102. nstrument un lecteur code barres externe et un ordinateur quip d un logiciel sp cifique permettant d ex cuter le test et de visualiser les r sultats Le syst me utilise des cartouches usage unique qui contiennent les r actifs n cessaires la PCR et permettent via lordinateur de commande de r aliser le processus complet de PCR Le proc d de ces cartouches usage unique permet d viter toute contamination entre chantillons Pour une description complete du syst me se r f rer au manuel d utilisation du systeme GeneXpert Dx Le dispositif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V contient les r actifs n cessaires la d tection des all les normaux ou mutants des Facteurs II et V a partir de sang total pr lev sur citrate de sodium ou EDTA Chaque cartouche contient un contr le de sondes Probe Check Control PCC permettant de v rifier la r hydratation des r actifs le remplissage de la cartouche l int grit des sondes et la stabilit des colorants Les amorces et les sondes contenus dans la cartouche Xpert HemosIL Factor II amp Factor V permettent la caract risation g notypique du g ne du Facteur II en position 20210 et ou du g ne du Facteur V en position 1691 300 8501 Rev D September 2011 17 Y Fran ais R actifs et Instruments Mat riel fourni Le coffret Xpert HemosIL Factor II amp Factor V contient les r actifs n cessaires l analyse de 10 chantillons de patients ou de contr le de
103. nziamento bidirezionale Numero di risultati Concordanza corretti dopo dopo aver Corretti al Invalidi dopo il Concordanzaal riesecuzione Invalidi surun rieseguito il Genotipo Testati primo run primo run primo run del Test ripetuti Test Fattore II G20210A wrt 968 927 41 95 8 963 5 99 5 ETERO 50 48 2 96 0 48 2 96 0 OMO 7 7 0 100 0 7 0 100 Overall 1025 982 43 95 8 1018 7 99 3 Fattore V G1691A WT 895 860 35 96 1 889 6 99 3 ETERO 114 108 6 94 7 113 1 99 1 OMO 12 11 1 91 7 12 0 100 0 Overall 1021 979 42 95 9 1014 7 99 3 Nessun risultato discordante Il risultato Invalido si riferisce ad un resultato indeterminate bper il sequenziamento bi direzionale risultato per il FII non stato disponibile per 4 campioni Per il sequenziamento bi direzionale risultato per il FV non stato disponibile per 8 campioni WT wildtype normale Cc d Specificita analitica Per valutare la specificit analitica del kit Xpert HemosIL FII amp FV sono state sintetizzate delle sequenza con dei SNPs nella regione di legame della sonda sia fuori La presenza di tali polimorfismi determina un risultato invalido un risultato corretto espresso solo con un corretto genotipo Sensibilit analitica Sono stati condotti studi per determinare la quantit minima e massima di campione di sangue intero sia in EDTA che in sodio citrato necessario per avere un corretto risultato Sono stati analizzati
104. oder Abwesenheit von Faktor II Faktor V normalen und mutanten Allelen konnte nicht bestimmt werden PVK bestanden alle Probenchecks wurden bestanden Fehlerhaftes Ergebnis Die An oder Abwesenheit von Faktor II Faktor V normalen und mutanten Allelen konnte nicht bestimmt werden wiederholen Sie den Test nach der unten aufgef hrten Anleitung Die PVK bringt ein fehlerhaftes Ergebnis und der Test wurde m glicherweise auf Grund von unsachgem er F llung der Reaktionskammern oder Probenintegrationsproblemen abgebrochen Fehler k nnen ebenso auf Grund von Uberschreitungen der maximalen Druckbegrenzung oder eines Fehlers einer Systemkomponente auftreten Fehler e PVK Fehler einer oder mehrere Probenchecks wurden nicht bestanden Falls die PVK keinen Fehler anzeigt liegt die Ursache in einem Systemkomponentenfehler Kein Ergebnis Die An oder Abwesenheit von Faktor II Faktor V normalen und mutanten Allelen konnte nicht bestimmt werden wiederholen Sie den Test nach der unten aufgef hrten Anleitung Unzureichende Daten wurden erfasst um ein Testergebnis zu erzielen z B Anwender hat den Test w hrend des Messvorgangs gestoppt Kein Ergebnis PVK NA nicht durchf hrbar 44 300 8501 Rev D September 2011 Griinde fiir eine Testwiederholung Gr nde f r eine Testwiederholung Wiederholen Sie den Test mit einer neuen Kartusche benutzte Kartuschen nicht wieder verwenden neuen Fl ssigreagenzien 1 und 2 und e
105. olung Wiederholung Wiederholung Faktor II G20210A Wildtyp 968 927 41 95 8 963 5 99 5 Heteroz 50 48 2 96 0 48 2 96 0 Homoz 7 7 0 100 0 7 0 100 Gesamt 1025 982 43 95 8 1018 7 99 3 Faktor V G1691A Wildtyp 895 860 35 96 1 889 6 99 3 Heteroz 114 108 6 94 7 113 1 99 1 Homoz 12 11 1 91 7 12 0 100 0 Gesamt 1021 979 42 95 9 1014 7 99 3 Keine diskrepanten Ergebnisse Invalides Resultat auf Grund nicht bestimmbarem Ergebnis Ergebnis der bidirektionale Sequenzierung f r Faktor Il war nicht verf gbar f r 4 Proben Ergebnis der bidirektionale Sequenzierung fiir Faktor V war nicht verfiigbar fiir 8 Proben Awildtyp ist normal Analytische Spezifit t Zur Bestimmung der analytischen Spezifit t des Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkits wurden normale Gensequenzen mit SNPs silent single nucleotide polymorphisms in der Sondenbindungsregion und au erhalb der Sondenbindungsregion hergestellt Die Anwesenheit von zus tzlichen SNPs in der Sondenbindungsregion f hrte in den meisten F llen zu invaliden Ergebnissen Wenn ein valides Ergebnis bestimmt wurde wurde auch der korrekte Genotyp angegeben Die Anwesenheit von zus tzlichen SNPs au erhalb der Sondenbindungsregion f hrte zu korrekter Genotypisierung Analytische Sensitivit t Es wurden Studien durchgef hrt um die minimal und maximal ben tige Probenmenge f r EDTA und Natriumcitrat antikoaguliertes Vollblut zu bestimmen um den korrekten Geno
106. one dei Risultati Figure 10 GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione mutato eterozigote per entrambi i geni a 2 ei 21 a 2 Pa Figure n GeneXpert System Visualizzazione dei risultati Campione mutato omozigote per entrambi i geni 300 8501 Rev D September 2011 77 Italiano Invalidi Se non viene rilevata nessuna amplificazione del Fattore II amp Fattore V ripetere il test I motivi possono essere dovuti o un processamento errato del campione o una inibizione della PCR INVALID Incapacita di rilevare la presenza di uno o entrambi gli alleli di entrambi i geni Probe Check PASS tutte le sonde hanno superato il controllo ERRORI Se non viene rilevata nessuna amplificazione del Fattore II amp Fattore V ripetere il test Il fallimento del Probe Check Control dovuto a un incorretta ricostituzione dei reagenti problemi sull integrit della sonda o il superamento del limite superiore di pressione ERROR Probe Check FAIL Fallito tutte o una sola probe non ha superato il controllo Se si supera il Probe Check ma viene segnalato un errore pu essere dovuto ad un componente del sistema Nessun Risultato Si verifica quando non ci sono dati sufficienti per produrre un risultato per esempio se l operatore ha stoppato un esercizio in corso NO RESULT Probe Check NA non applicabile Ripetizione del Test Ripetere il test qualora si verifichi
107. ple Do not use a cartridge that has been dropped or shaken after you have added the sample Do not use a cartridge that has a damaged e g bent or broken reaction tube Each single use Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay cartridge is used to process one test Do not reuse spent cartridges 300 8501 Rev D September 2011 Specimen Collection and Transport Consult your institution s environmental waste personnel on proper disposal of used cartridges and unused reagents This material may exhibit characteristics of federal EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA hazardous waste requiring specific disposal requirements Check state and local regulations as they may differ from federal disposal regulations Institutions outside the USA should check their country hazardous waste disposal requirements Store the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay kit at 2 28 C Do not open a cartridge lid until you are ready to perform testing In the event the internal pressure rises above the pre set manufacturer limit the run will automatically abort and an ERROR result will be reported Material Safety Data Sheets MSDS for all reagents provided with this assay are available upon request from Cepheid Technical Support and are available on Cepheid s websites www cepheid com and www cepheidinternational com The bovine serum albumin BSA in this product was produced exclusively from bovine plasma sourced in the United Sta
108. que aparece escriba su contrasefia Abrir la puerta del m dulo del instrumento que tenga la luz verde parpadeando sobre la puerta y colocar el cartucho Ser DO a ta Cerrar la puerta El test empieza a procesarse y la luz verde deja de parpadear manteni ndose encendida Cuando el ensayo haya finalizado dicha luz se apagar 10 Una vez finalizado el test la puerta del m dulo se desbloquear Abrir la puerta del m dulo y sacar el cartucho 56 300 8501 Rev D September 2011 Control de Calidad 11 Deshacerse del cartucho utilizado en un deposit ndolo en un contenedor adecuado de residuos siguiendo las pr cticas estandarizadas de su instituci n Visualizaci n e impresi n de resultados Para informaci n detallada de c mo se consultan y se imprimen los resultados referirse al Manual del Operador del Sistema GeneXpert Dx Control de Calidad En cada ensayo se realiza un chequeo de la sondas PPC Probe check control PCC Antes de empezar la reacci n PCR el sistema GeneXpert Dx mide la se al fluorescente de las sondas con el fin de comprobar la correcta rehidrataci n de los reactivos el llenado de los tubos de reacci n la integridad de las sondas y la estabilidad de la se al de la misma El control del chequeo de las sondas es satisfactorio cuando todos los par metros se encuentran dentro de los criterios establecidos Controles Externos FII amp FV DNA Control PN 0020003500 se ha dise ado y validado para
109. r sultat tait valide il correspondait au g notype correct La pr sence de SNP l ext rieur de la zone d appariement de la sonde a toujours correspondu l obtention du g notype correct Sensibilit analytique Des tudes ont t r alis es afin de d terminer les quantit s minimum et maximum de sang total citrate de sodium ou EDTA n cessaires pour obtenir un g notypage correct Pour ce faire la limite basse de l intervalle de confiance 95 doit tre sup rieure 95 pour une fraction estim e correcte Des chantillons de sang total citrate de sodium ou EDTA ont t test s en utilisant 8 volumes de pr l vement diff rents variant de 5 250 ul Bien que le test puisse tol rer une variation du volume entre 15 et 100 pl 50 ul est le volume d chantillon recommand afin de minimiser les risques d erreurs li s 4 des quantit s d chantillons limit es ou en exc s Reproductibilit Un panel de 5 chantillons un chantillon de chacun de ceux d crits plus bas a t test en duplicate par deux utilisateurs diff rents durant 5 jours dans 3 sites 3 chantillons x 2 fois jour x 2 utilisateurs par site x 5 jours x 3 sites Un lot de r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V a t utilis sur les 3 sites Les tests Xpert HemosIL Factor II amp Factor V ont t r alis s conform ment la proc dure de la notice du r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Les r sultats sont pr
110. r V Assay were determined in a multi site investigational study at seven institutions by comparing the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay with bi directional sequencing 10 300 8501 Rev D September 2011 Performance Characteristics Specimens included those whose routine care called for collection of whole blood for Factor II and or Factor V testing Samples were first tested by routine methods used in each participating laboratory and then aliquots collected for study testing by the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay on the GeneXpert Excess DNA was sent to a contract laboratory for bi directional sequencing Performance of the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay was calculated relative to bi directional sequencing results Overall Results Xpert HemoslL Factor Il amp Factor V Assay A total of 1018 samples were tested for Factor II by both the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay and bi directional sequencing A total of 1014 samples were tested for Factor V by both the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay and bi directional sequencing To supplement the homozygous sample size six human genomic DNA samples homozygous for Factor II and five homozygous for Factor V were also tested by the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay and bi directional sequencing The results are presented in Table 1 The Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay demonstrated a 99 3 overall accuracy relative to
111. re II e eterozigoti per la mutazione del fattore V cio un allele mutato l altro invece wildtype del gene per il fattore V Una sintesi dei risultati da parte del sito riportata nella tabella 2 e 3 Non vi stata alcuna differenza statisticamente significativa nei risultati fra il Fattore II p 1 000 o il Fattore V p 1 000 Tableau 2 Sommario della riproducibilit dei risultati per Sito Fattore Il Totale Concordanza per Campione ID Sito 1 Sito 2 Sito 3 Campione NORMALE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore Il ETERO Fattore VNORMALE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore II OMO Fattore V NORMALE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore II NORMALE Fattore VOMO 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore II NORMALE Fattore V ETERO 100 20 20 100 20 20 95 0 19 20 98 3 59 60 Totale Concordanza per sito 100 60 60 100 60 60 98 3 59 60 99 7 299 300 Nessun risultato discordante Un solo campione rimasto indeterminato dopo averlo rieseguito Tableau 3 Sommario sulla riproducibilit per Sito Fattore V Totale Concordanza per Campione ID Sito 1 Sito 2 Sito 3 Campione NORMALE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore II ETERO Fattore VNORMALE 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Fattore II OMO Fattore V NORMALE 100 20 20 100 20 20 10
112. reagents for the detection of Factor II and Factor V normal and mutant alleles from sodium citrate or EDTA anticoagulated whole blood Each assay cartridge also contains a Probe Check Control PCC that verifies reagent rehydration PCR tube filling in the cartridge probe integrity and dye stability The primers and probes in the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay determine the genotype of the Factor II gene at position 20210 and or the Factor V gene at position 1691 300 8501 Rev D September 2011 1 English Reagents and Instruments Material Provided Y The Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay kit contains sufficient reagents to process 10 specimen or quality control samples The kit contains the following Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay Cartridges with integrated reaction tubes10 Bead 1 freeze dried 1 per cartridge Polymerase dNTPs Bovine Serum Albumin BSA Bead 2 freeze dried 1 per cartridge Primers Probes BSA Reagent 1 Tris Buffer EDTA Tween 20 TET 3 0 mL per cartridge Reagent 2 Tris Buffer GHCI Sarkosyl Tween 20 GHCI 3 0 mL per cartridge CD Assay definition file ADF Instructions to import ADF into GX software Package Insert Storage and Handling Afe Store the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay cartridges and reagents at 2 28 C Do not use cartridges that have passed the expiration date Do not open a cartridge until you are ready to per
113. rektionalen Sequenzierung an ein Vertragslabor verschickt Die Testcharakteristik des Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit wurde in Relation zu den Ergebnissen der bidirektionalen Sequenzierung kalkuliert Gesamtcharakteristik Xpert HemoslL Faktor Il amp Faktor V Testkit Insgesamt wurden 1018 Proben f r Faktor II sowohl mit dem Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Test und der bidirektionalen Sequenzierung getestet Insgesamt wurden 1014 Proben f r Faktor V sowohl mit dem Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Test und der bidirektionalen Sequenzierung untersucht Zur Aufstockung der Anzahl homozygoter Proben wurden sechs humane genomische DNA Proben homozygot f r Faktor II und f nf Proben homozygot f r Faktor V mit dem Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit und der bidirektionalen Sequenzierung getestet Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 aufgef hrt Der Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit zeigt eine Gesamt bereinstimmung von 99 3 in Relation zur bidirektionalen Sequenzierung sowohl f r Faktor II als auch f r Faktor V 300 8501 Rev D September 2011 45 Deutsch Tableau 1 Xpert HemoslL vs Bidirektionaler Sequenzierung Anzahl Anzahl Anzahl Anzahl korrekter invalider korrekter invalider berein Ergebnisse Ergebnisse in berein Anzahl Ergebnisse im Ergebnisseim stimmungim incl der stimmung nach Genotyp gesamt ersten Lauf ersten Lauf ersten Lauf Wiederh
114. rt HemosIL Factor II amp Factor V Os resultados est o resumidos nas Tabelas 2 5 Painel do estudo 1 amostra com alelos normais selvagem para o Factor II amp Factor V 2 amostra heterozig tica para muta o do Factor II i e um alelo mutante e e um selvagem para o gene do Factor II e com alelos normais selvagem para o Factor V 3 amostra homozig tica para a muta o do Factor II i e dois alelos mutantes para o gene do Factor II e com alelos normais selvagem para o Factor V 4 amostra com alelos normais selvagem para o Factor II e homozig ticos para a muta o do Factor V i e dois alelos mutantes para o gene do Factor V 5 amostra com alelos normais selvagem para o Factor II e heterozig tico para a muta o do Factor V i e um alelo mutante e um selvagem para o gene do Factor V Na tabela 2 e 3 est um resumo dos resultados por laborat rio N o h diferen a estatisticamente significativa nos resultados entre laborat rios para qualquer um dos factores Factor II p 1 000 ou Factor V p 1 000 Tableau 2 Resumo dos resultados de reprodutibilidade por laborat rio Factor Il concord ncia ID da amostra Site Site 2 Site 3 total por amostra NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II HET Factor VNOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II HOM Factor V NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor II N
115. s un laboratoire sous contrat afin d tre test en s quen age bi directionnel Les performances du r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V ont t analys es en comparaison des r sultats obtenus en s quen age bi directionnel R sultats Xpert HemoslL Factor Il amp Factor V Un total de 1018 chantillons de patients pour la d termination du Facteur II a t analys en utilisant le r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V et la m thode de s quen age bi directionnel Un total de 1014 chantillons de patients pour la d termination du Facteur V a t analys en utilisant le r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V et la m thode de s quen age bi directionnel Afin d augmenter la taille de l chantillonnage des homozygotes six chantillons d ADN g nomique humain homozygote pour le Facteur II et 5 homozygotes pour le Facteur V ont t analys s en utilisant le r actif Xpert HemosIL Factor II amp Factor V et la m thode de s quencage bi directionnel Les r sultats sont pr sent s dans le tableau 1 Le test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V montre une exactitude relative totale de 99 3 avec la m thode de s quen age bi directionnel pour le Factor II et le Facteur V 300 8501 Rev D September 2011 27 Frangais Tableau 1 Performances Xpert HemosiL vs S quen age Bi directionnel Nombre d chantillons Nombre corrects lors Nombre Agr ment
116. s en la regi n de uni n a la sonda en la mayor a de los casos dio lugar a resultados no v lidos Cuando se obtuvo un resultado v lido dio el genotipo correcto La presencia de SNP adicionales fuera de la regi n de uni n a la sonda dio resultados con el genotipo correcto Sensibilidad Analitica Se realizaron estudios para determinar la minima y la m xima cantidad de muestra de sangre del paciente anticoagulada tanto con EDTA como con citrato s dico necesaria para obtener un genotipo correcto de manera que el limite inferior del intervalo de confianza del 95 para la fracci n estimada resultado correcto fuera superior al 95 Las muestras de sangre total anticoagulada con EDTA y citrato s dico se procesaron n 20 con 8 vol menes que variaban desde 5 pL hasta 250 uL Aunque el ensayo puede tolerar variaciones de volumen de 15 pL 100 uL se recomienda un volumen de muestra de 50 uL para minimizar el riesgo de errores asociados con el defecto y el exceso de la muestra Reproducibilidad Un panel de 5 muestras una de cada tipo de los mostrados a continuaci n se procesaron por duplicado por dos usuarios distintos en 5 dias diferentes en tres lugares diferentes 3 muestras x 2 veces dia x 2 usuarios por lugar x 5 d as x 3 lugares Se utiliz un lote del kit Xpert HemosIL Factor II amp Factor V en los tres lugares diferentes El ensayo Xpert HemosIL Factor II amp Factor Vse realiz siguiendo el procedimiento del Xper
117. s not necessary to bring the cartridge to room temperature before use 2 3 4 Mix sample by inverting the tube multiple times until homogeneous Open the cartridge lid Using a pipette with an aerosol resistant tip transfer 50 uL of sodium citrate or EDTA anticoagulated blood to the bottom wall of the S opening of the Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay cartridge Close the cartridge lid English Starting the Test Important Before you start the test make sure the Xpert HemoslL FII Xpert HemoslL FV and Xpert HemoslL FII amp FV Combo Assay definition files are imported into the software The assay definition files are on the supplied CD This section lists the basic steps to run the assay For detailed instructions see the GeneXpert Dx System Operator Manual Turn on the GeneXpert Dx instrument and then turn on the computer the GeneXpert software will launch automatically Log on to the GeneXpert Dx System software using your user name and password In the GeneXpert Dx System window click Create Test The Create Test window appears Scan barcode on cartridge ul E RE TER In the Sample ID box type the sample ID Make sure you type the correct sample ID Alternatively scan the sample barcode The sample ID is associated with the test results and is shown in the View Results window and all the reports Create Test Sample ID MTO1800 Nam
118. sIL FII amp FV Kombi Testdefinitionen in das System importiert wurden bevor Sie den Test starten Die Testdefinitionen werden auf einer CD zur Verf gung gestellt Dieser Abschnitt beinhaltet die wichtigsten Schritte zur Durchf hrung des Tests Die ausf hrliche Beschreibung ist dem GeneXpert Dx Gerate Bedienerhandbuch zu entnehmen 1 Sl a Te I Schalten Sie das GeneXpert Dx System ein und anschlie end den Computer Die GeneXpert Software startet automatisch Loggen Sie sich in die GeneXpert Dx Ger tesoftware ein indem Sie Ihren Benutzernamen und Ihr Passwort eingeben W hlen Sie in der GeneXpert Dx Systemsoftware Create Test an Es ffnet sich ein entsprechendes Fenster Scannen Sie den Barcode der Kartusche Im Feld Sample ID Proben ID k nnen Sie die Proben Identifikationsnummer eingeben Vergewissern Sie sich dass die Poben ID korrekt eingegeben wurde Alternativ kann der Probenbarcode eingelesen werden Die Proben ID wird dem Testergebnis zugeordnet und wird im Fenster View Results und auf allen Ausdrucken angezeigt Create Test Sample ID MT01800 Name Version Select Assay Xpert HemosiL FII 1 v Select Module Xpert HemoslL Fil Xpert HemosIL FV Reagent Lot ID xpert HemosiL Fil amp FV Combo Test Type specimen v Sample Type other v Other Sample Type Notes Start Test Scan Cartridge Barcode Cancel Figure 2 Fenster Create
119. se dans les 15 minutes suivant l ajout de l chantillon dans la cartouche S Echantillon Figure 1 Cartouche Xpert HemoslL FII amp FV vue de dessus 300 8501 Rev D September 2011 19 Frangais Pour ajouter l chantillon dans la cartouche 1 5 Sortir la cartouche du coffret Il n est pas n cessaire d quilibrer la cartouche temp rature ambiante avant utilisation 2 3 4 M langer l chantillon en proc dant plusieurs inversions jusqu compl te homog inisation Ouvrir le couvercle de la cartouche A l aide d une pipette munie d un filtre r sistant aux a rosols transf rer 50 uL d chantillon de sang total citrate de sodium ou EDTA le long de la paroi de l ouverture S de la cartouche Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Refermer le couvercle de la cartouche Commencer l analyse Important Avant de commencer l analyse s assurer que le param trage des tests Xpert HemoslL FII Xpert HemosiL FV et Xpert HemoslL FII amp FV Combo a t import dans le logiciel de l analyseur Le param trage se trouve sur le CD fourni avec le coffret Ci apr s sont donn es les instructions de base pour r aliser le test Pour plus d informations se r f rer au manuel d emploi du syst me GeneXpert Dx 1 Mettre sous tension Pinstrument GeneXpert Dx puis l ordinateur le logiciel GeneXpert d marrera automatiquement 2 Saisir votre nom utilisateur et votre mot de passe dans le lo
120. sultados do teste e surge na janela View Results e em todos os relat rios Create Test Sample ID MT01800 Name Version Select Assay Xpert HemosiL Fil 1 v Xpert HemosiL Fil Xpert HemosiL FV Select Module Reagent Lot ID xpert HemosiL Fil amp FV Combo Test Type Specimen v Sample Type other v Other Sample Type Notes Start Test Scan Cartridge Barcode Cancel ES Figure 2 Criar ajanela de teste 6 No menu dropdown do Select Assay seleccionar ensaio seleccione o ensaio pretendido para a an lise 7 Clique em Start Test Iniciar teste Na caixa de dialogo apresentada introduza a sua palavra passe 8 Abra a porta do m dulo do instrumento com a luz verde a piscar e encha o cartucho 9 Feche a porta O teste inicia se e a luz verde p ra de piscar Quando o teste termina as luzes apagam se 10 Espere at ao sistema libertar o cadeado da porta antes de abrir a porta do m dulo e remover o cartucho 88 300 8501 Rev D September 2011 Controlo de qualidade 11 Os cartuchos utilizados devem ser eliminados nos contentores adequados para res duos de amostras de acordo com as pr ticas da sua institui o Visualiza o e impress o dos resultadosVisualiza o e impress o dos resultados Para instru es detalhadas sobre como visualizar e imprimir os resultados consulte o Manual do operador GeneXpert Dx Sys
121. t HemosIL Factor II amp Factor V Los resultados est n resumidos en las Tablas 2 5 Panel del Estudio 1 Una muestra con alelos normales wildtype tanto para el Factor II como para el Factor V 2 Una muestra heterozigota para la mutaci n del Factor II es decir un alelo mutante y otro normal para el gen del Factor II y alelos normales wildtype para el Factor V 3 Una muestra homozigota para la mutaci n del Factor II es decir dos alelos mutantes para el gen del Factor II y con alelos normales wildtype para el Factor V 4 Una muestra con alelos normales wildtype para el Factor II y homozigoto para la mutaci n del Factor V es decir dos alelos mutantes para el gen del Factor V 5 Una muestra con alelos normales wildtype para el Factor II y heterozigota para la mutaci n del Factor V es decir un alelo mutante y un alelo normal para el gen del Factor V En las Tablas 2 y 3 se muestra un resumen de los resultados seg n el lugar No se encontraron diferencias estadisticamente significativas entre los resultados seg n el lugar de an lisis ni para el Factor II p 1 000 ni para el Factor V p 1 000 Tableau 2 Resumen de Resultados de Reproducibilidad seg n el Lugar Factor Il Concordancia Total segun la ID Muestra Lugar 1 Lugar 2 Lugar 3 Muestra NOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 Factor Il HET Factor VNOR 100 20 20 100 20 20 100 20 20 100 60 60 F
122. tem Controlo de qualidade Cada ensaio inclui um controlo de verifica o da sonda probe check control PCC Controlo de verifica o da sonda PCC Antes do in cio da reac o de PCR o GeneXpert Dx System mede o sinal de fluoresc ncia das sondas para monitorizar a re hidrata o das esferas o enchimento do tubo de reac o integridade da sonda e estabilidade dos corantes verifica o da sonda passa se cumpre os crit rios de aceita o atribu dos Controlos externos O HemosIL FII amp FV DNA Control PN 0020003500 foi concebido e validado para o External QC program Programa de CQ externo do Xpert HemosIL FII amp FV Assay Como alternativa tamb m podem ser utilizadas amostras de sangue total normal heterozig tico ou homozig tico para o Factor II Factor V citrato de s dio ou anticoagulante EDTA para treino testes de avalia o da prepara o e CQ externo do Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay necess rio material celular N o utilize DNA extra do Os controlos externos podem ser utilizados de acordo com os crit rios das organiza es de acredita o locais estaduais e federais conforme aplic vel Interpreta o dos Resultados Os resultados s o interpretados pelo GeneXpert Dx System a partir dos sinais fluorescentes medidos e dos algoritmos de c lculo inerentes pra identificar gen tipos e surgem nas seguintes janelas de visualiza o de resultados For Xpert HemosIL FII Results
123. tes The manufacturing of the BSA is also performed in the United States No ruminant protein or other animal protein was fed to the animals the animals passed ante and post mortem testing During processing there was no commingling of the material with other animal materials Specimen Collection and Transport A To obtain adequate specimen follow the instructions in this section closely 1 2 3 4 Only trained licensed professionals should draw blood in EDTA or sodium citrate anticoagulant tubes Do not centrifuge or concentrate the blood sample by plasma removal Blood should be processed within 24 hours when stored at room temperature 22 28 C Samples should be stored at 2 8 C if stored longer than 24 hours Blood is stable up to 15 days when stored at 2 8 C The blood samples may also be stored at 20 C or 80 C for up to 3 months Use of a freezer compatible storage vial is recommended Allow frozen blood to thaw completely at room temperature It is not recommended to freeze thaw blood more than one time Mix sample by inverting 5 times prior to dispensing into the cartridge Procedure Preparing the Cartridge Important Start the test within 15 minutes of adding the sample to the cartridge S Sample Figure 1 Xpert HemosiL Factor Il amp Factor V Assay Cartridge top view To add the sample into the cartridge 1 300 8501 Rev D September 2011 Remove the cartridge from the kit It i
124. to i 5campioni sopra descritti sono stati analizzati due volte al giorno per 5 giorni utilizzando tre lotti in un unico sito di prove 5 campioni x 2 corse al giorno x 3 lotti 5 giorni Una sintesi dei risultati da parte di molti indicata nelle tabelle 6 e 7 Non vi stata alcuna differenza statisticamente significativa nei risultati tra i lotti sia per Fattore II p 1 000 che Fattore V p 1 000 Tableau 6 Sommario della riproducibilit dei risultati per Lotto Fattore Il Totale Concordanza per Campione ID Lotto1 Lotto 2 Lotto 3 Campione NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore Il ETERO Fattore V NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore II OMO Fattore V NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore II NORMALE Fattore VOMO 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore II NORMALE Fattore V ETERO 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Totale Concordanza per Lotto 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 Tableau 7 Sommario della riproducibilit dei risultati per Lotto Fattore V Totale Concordanza per Campione ID Lotto1 Lotto 2 Lotto 3 Campione NORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore Il ETERO Fattore VNORMALE 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Fattore II OMO
125. tor V Tableau 1 Desempenho do Xpert HemoslL vs Sequencia o Bidireccional N mero de N mero de atribui es N mero de atribui es N mero de correctas atribui es correctasna atribui es Concord ncia incluindo a inv lidas na Concord ncia N mero primeira invalidas na na primeira an lise de an lise de ap s an lise de Gen tipo testado an lise primeira an lise an lise repeti o repeti o repeti o Factor II G20210A wri 968 927 41 95 8 963 5 99 5 HET 50 48 2 96 0 48 2 96 0 HOM 7 7 0 100 0 7 0 100 Total 1025 982 43 95 8 1018 7 99 3 Factor V G1691A WT 895 860 35 96 1 889 6 99 3 HET 114 108 6 94 7 113 1 99 1 HOM 12 11 1 91 7 12 0 100 0 Total 1021 979 42 95 9 1014 7 99 3 a S R are poem resultados discordantes Resultados inv lidos s o resultados indeterminate Resultados de sequencia o bidireccional para o Factor Il n o foram disponibilizados para 4 amostras a dra ad ise q Pr x Ware Rsultados de sequencia o bidireccional para o Factor V n o foram disponibilizados para 8 amostras WT selvagem normal 300 8501 Rev D September 2011 95 Portugu s Especificidade analitica Para avaliar a especificidade anal tica do Xpert HemosIL Factor II amp Factor V Assay foram sintetizadas sequ ncias g nicas normais com polimorfismos de gene nico silencioso SNPs na regi o de liga o da sonda bem como fora dessa regi o A prese
126. trado en el kit Esta secci n describe los pasos principales para realizar el test Para instrucciones m s detalladas consultar el Manual del Operador del Sistema GeneXpert Dx 1 Encender primero el instrumento GeneXpert Dx y luego el ordenador el software GeneXpert se iniciar autom ticamente 2 Entrar en el software del GeneXpert Dx utilizando el nombre y la contrasefia 3 Pulsar sobre Create Test de la ventana GeneXpert Dx System Se abre la ventana Create Test 4 Leer con el esc ner el c digo de barras del cartucho 5 En la casilla Sample ID teclear la identificaci n de la muestra Aseg rese de teclear correctamente la ID de la muestra Tambi n se puede escanear el c digo de barras de la muestra del paciente La ID de la muestra se asocia al resultado del test y aparece en la pantalla View Results y en todos los informes Create Test EN Sample ID MT01800 Name Version Select Assay Xpert HemosiL FII 1 Xpert HemosiL Fil Select Module Xpert HemoslL FV Reagent Lot ID Xpert HemosiL Fil amp FV Combo Test Type Specimen v Sample Type other v Other Sample Type Notes Start Test Scan Cartridge Barcode Cancel Figure 2 Ventana de creaci n del test Desde el men desplegable Select Assay Seleccionar ensayo seleccione el ensayo que se quiere realizar Haga clic en Start Test Iniciar prueba En el cuadro de dialogo
127. tware GeneXpert Dx vers o 4 0 ou posterior e Pipete para dispensar 50 uL de sangue anticoagulado com EDTA ou citrato de s dio com pontas de pipeta com filtro resistentes a aeross is HemosIL FII amp FV DNA Control ref P N 0020003500 Avisos e Precau es Nocivo se for ingerido R22 Irritante para os olhos e a pele R36 38 Trate todas as amostras biol gicas incluindo os cartuchos utilizados como capazes de transmitir agentes infecciosos Como muitas vezes imposs vel saber quais podem ser infecciosas todas as amostras biol gicas devem ser tratadas com precau es universais As linhas de orienta o para manipula o de reagentes est o dispon veis no U S Centers for Disease Control and Prevention and the Clinical and Laboratory Standards Institute anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards Siga os procedimentos de seguran a da sua institui o para trabalhar com compostos qu micos e manipular amostras biol gicas Use os cartuchos antes do fim do prazo de validade indicado no kit N o abra a tampa do cartucho do ensaio Xpert HemosIL Factor II amp Factor V excepto quando adicionar amostra N o utilize um cartucho que caiu ou foi agitado depois de ter adicionado a amostra 86 300 8501 Rev D September 2011 Colheita e conserva o de amostras N o utilize um cartucho que tem um tubo de reac o danificado ex dobrado ou partido Cada cartucho de uso nico do
128. typ zu bestimmen unter der Voraussetzung dass die Untergrenze des 95 Konfidenzintervalls f r die kalkulierten korrekten Ergebnisse gr er als 95 liegt EDTA und Natriumcitrat antikoagulierte Vollblutproben wurden mit acht verschiedenen Volumina von 5 uL bis 250 uL n 20 getestet Obwohl der Test Volumina von 15 uL bis 100 pL tolerieren kann liegt das empfohlene Probevolumen bei 50 uL zur Minimierung des Risikos f r fehlerhafte Ergebnisse auf Grund von zu geringem oder erh htem Probevolumen 46 300 8501 Rev D September 2011 Testcharakteristik Reproduzierbarkeit Ein Panel von 5 Proben die jeden unten aufgef hrten Probentyp beinhaltet haben wurden in Doppelbestimmung von zwei unterschiedlichen Anwendern an fiinf verschiedenen Tagen an 3 Zentren untersucht 5 Proben x zweimal taglich x 2 Anwenden pro Zentrum x 5 Tage x 3 Zentren Es wurde jeweils eine Charge Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Testkit an einer der drei Zentren eingesetzt Die Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Teste wurden analog der Xpert HemosIL Faktor II amp Faktor V Applikation untersucht Die Ergebnisse sind in den Tabellen 2 5 zusammengefasst Studien Panel 1 eine Probe mit normalen Wildtyp Allelen fiir Faktor II amp Faktor V 2 eine Probe mit heterozygoter Faktor II Mutation d h ein mutantes und ein Wildtyp Allel f r Faktor II Gen und mit normalen Wildtyp Allelen f r Faktor V 3 eine Probe mit homozygoter Faktor II
129. ualquier SNP adicional en la regi n de uni n de la sonda pueden interferir con la detecci n objetivo y dar resultados NO V LIDOS Sustancias Interferentes Pacientes que est n bajo terapia con heparina o pacientes que se hayan sometido a una transfusi n de sangre pueden tener sustancias en la sangre que interfieran potencialmente con los resultados de la PCR y den lugar a resultados no v lidos o err neos Estudios de sustancias potencialmente interferentes mostraron que no hab a inhibici n hasta 14 3 unidades USP mL de heparina 16 mg dL de bilirrubina 250 mg dL de colesterol 1932 mg dL de triglic ridos totales l pidos No se observ inhibici n al utilizar muestras de sangre total sometidas a un ciclo de congelaci n descongelaci n sangre hemolizada No hubo diferencias estad sticamente significativas entre muestras con EDTA o con citrato s dico Valores Esperados Las mutaciones para el Factor II G20210A y para el Factor V Leiden G1691A est n presentes en el 2 y 5 respectivamente de la poblaci n general 62 300 8501 Rev D September 2011 Especificaciones del ensayo Especificaciones del ensayo Evaluacion clinica Se evaluaron las especificaciones t cnicas del test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V en un estudio de investigaci n multic ntrico en el que siete centros compararon el test Xpert HemosIL Factor II amp Factor V con la secuenciaci n bidireccional Las muestras incluidas fueron las obteni
130. ult 6 300 8501 Rev D September 2011 Interpretation of Results For Xpert HemosIL FV Results figures 6 through 8 FV NORMAL Figure 6 GeneXpert Dx System View Results window Factor V normal result Figure 7 GeneXpert Dx System View Results window Factor V heterozygous result 300 8501 Rev D September 2011 7 English FV HOMOZYGOUS Figure 8 GeneXpert Dx System View Results window Factor V homozygous result For Xpert HemosIL FII amp FV Combo Results figures 9 through 11 Fil NORMAL FV NORMAL Figure 9 GeneXpert Dx System View Results window FII amp FV normal result 300 8501 Rev D September 2011 Interpretation of Results aja ADDAN Figure 10 GeneXpert Dx System View Results window FII amp FV heterozygous result Figure 11 GeneXpert Dx System View Results window FII amp FV homozygous result 300 8501 Rev D September 2011 9 English INVALID Presence or absence of Factor II Factor V normal and mutant alleles cannot be determined repeat assay according to instructions below The sample was not properly processed or PCR was inhibited INVALID Presence or absence of Factor II Factor V normal and mutant alleles cannot be determined Probe Check PASS all probe check results pass ERROR Presence or absence of Factor II Factor V normal and mutant alleles cannot be determined repeat assay accord
131. ur la d tection des all les des Facteurs II et V sur sang total pr lev sur citrate de sodium ou EDTA Le test est r alis sur les instruments Cepheid GeneXpert Dx Ce test est utilis pour la d termination des mutations des facteurs II G20210A et V Leiden G1691A comme aide au diagnostic chez les patients suspect s de thrombophilie Description Lassociation des mutations des Facteurs II G20210A et V Leiden G1691A un risque accru de thrombose veineuse est parfaitement document e 1 2 3 4 La mutation du Facteur II ou Prothrombine G20210A se traduit par le changement de G en A sur le nucl otide 20210 dans la r gion 3 non traduite du g ne et est associ e une l vation du taux plasmatique de prothrombine La mutation du Facteur V Leiden G1691A se traduit par le changement de G en A sur le nucl otide en position 1691 du g ne du Facteur V r sultant en une substitution de l acide amin Arginine par la Glutamine dans la prot ine Facteur V entra nant une r sistance au clivage par la Prot ine C Activ e PCA Les mutations des facteurs II G20210A et V Leiden G1691A sont pr sentes dans 2 et 5 de la population g n rale 7 respectivement Principe du test Le syst me GeneXpert Dx automatise et int gre l extraction des acides nucl iques leur amplification et la d tection de la sequence cible dans des chantillons de sang total en utilisant la PCR en temps r el Le syst me consiste en un i
132. z Gesamt Ubereinstimmung 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 pro Charge Tableau 7 Zusammenfassung der Reproduzierbarkeit pro Charge Faktor V Gesamt bereinstimmung pro Probentypen Charge 1 Charge 2 Charge 3 Probe Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor Il Heteroz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Normal Faktor Il Homoz 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Normal Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Homoz Faktor Il Normal 100 10 10 100 10 10 100 10 10 100 30 30 Faktor V Heteroz Gesamt Ubereinstimmung 100 50 50 100 50 50 100 50 50 100 150 150 pro Charge 300 8501 Rev D September 2011 Literatur Literatur 1 2 Thrombophilia as a multigenic disease B Zoeller P G de Frutos A Hillarp B Dahlback Haematologica 1999 84 59 70 Screening for inherited thrombophilia indications and therapeutic implications V De Stefano E Rossi K Paciaroni G Leone Haematologica 2002 87 1095 1108 Laboratory investigation of thrombophilia A Tripodi and P M Mannucci Clinical Chemistry 2001 47 1597 1606 Technical standards and guidelines Venous thromboembolism Factor V Leiden and prothrombin G20210A testing A disease specific supplement to the standards and guidelines for clinical genetics laboratories Elaine
133. zzato Non significativit statistica stata osservata per campioni raccolti o in EDTA o Sodio Citrato Valori Attesi Le mutazioni del fattore II G20210A e del fattore V G1691A sono presenti nella popolazione generale rispettivamente per il 2 e il 5 Prestazioni Le performance del kit Xpert HemosIL FII amp FV sono state valutate in uno studio multicentrico comparandolo al sequenziamento bidirezionale In tale studio i campioni erano dapprima valutati con il metodo in uso presso ciascun laboratorio poi testati con il kit Xpert HemosIL FII amp FV il DNA successivamente inviato ad un laboratorio di riferimento per il sequenziamento bidirezionale Risultati complessivi Un totale di 1 018 campioni sono stati testati per il Fattore II sia dal Xpert HemosIL FII amp FV che dal sequenziamento bidirezionale Un totale di 1 014 campioni sono stati testati per il fattore V sia dal Xpert HemosIL FII amp FV che dal sequenziamento bidirezionale Per 78 300 8501 Rev D September 2011 Prestazioni integrare campioni omozigoti sono stati testati anche sei campioni con entrambe le mutazioni sia con il kit Xpert HemosIL FII amp FV sia con il sequenziamento bidirezionale I risultati sono riportati nella tabella 1 Il fattore di Xpert HemosIL II e Fattore V analisi ha dimostrato un livello di precisione 99 3 complessivo rispetto al bi direzionale per il sequenziamento sia Fattore II e Fattore V Tableau 1 Xpert HemoslL Performance vs Seque

300-8501 Rev D Xpert HemosIL CE-IVD PI_MultiLang.book

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