Identification des bactéries cultivables (nouvelle version)
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1. M thodes de laboratoire Identification des bact ries cultivables E M THODE ANALYTIQUE 341 III WA b d Hu N og Applicabilit Cette m thode est utilis e pour identifier des bact ries cultivables Norme s Aucune norme Syst me d chantillonnage Matrices multiples Volume et d bit d chantillonnage recommand s NA Analyse St r omicroscopie fibre optique microscopie la lumi re transmise chromatographie en phase gazeuse Valeur minimale rapport e VMR NA Domaine d application NA Fid lit NA incertitude analytique CH NA t d Solidement implant au Qu bec depuis 1980 lFinstitut de recherche Robert Sauv en sant et en s curit du travail IRSST est un organisme de recherche scientifique reconnu internationalement pour la qualit de ses travaux RECHERCHES travaillent pour vous Mission Contribuer par la recherche la pr vention des accidents du travail et des maladies professionnelles ainsi qu la r adaptation des travailleurs qui en sont victimes Offrir les services de laboratoires et l expertise n cessaires l action du r seau public de pr vention en sant et en s curit du travail Assurer la diffusion des connaissances jouer un r le de r f rence scientifique et d expert Dot d un conseil d administration paritaire o si gent en nombre gal des repr sentants des employeurs et des travailleurs l2. lev s et analys s de mani re obtenir une pr cision quivalente celle obtenue en appliquant les m thodes d crites dans le Guide d chantillonnage des contaminants de l air en milieu de travail publi par l Institut de recherche Robert Sauv en sant et en s curit du travail Pour atteindre ces objectifs des m thodes d analyse visant quantifier le degr d exposition des travailleurs sont d velopp es et r dig es pour implanter les moyens de contr le ad quats Afin d assister les intervenants en milieu de travail lIRSST publie r vise p riodiquement et diffuse le Guide d chantillonnage des contaminants de l air en milieu de travail et la direction Services et expertises de laboratoire publie des m thodes d analyses des contaminants Ces m thodes doivent tre utilis es de concert avec les r f rences r glementaires et normatives suivantes v Loi sur la sant et la s curit du travail L R Q chapitre S 2 1 diteur officiel du Qu bec 1 ao t 2007 htto Awww2 publicationsduquebec gouv ac ca dynamicSearch telecharge php type 2 amp file S 2 1 S2_ 1 html v R glement sur la sant et la s curit du travail S 2 1 r 19 01 D cret 885 2001 diteur officiel du Qu bec 25 juillet 2007 http www2 publicationsduquebec gouv ac ca dynamicSearch telecharge php type 28file 2F 2FS 2 _1 2F S2_1R19 01 bim v Guide d chantillonnage des contaminants de l air en milieu de travail Direction de
3. IRSST est financ par la Commission de la sant et de la s curit du travail Pour en savoir plus Visitez notre site Web Vous y trouverez une information compl te et jour De plus toutes les publications dit es par l IRSST peuvent tre t l charg es gratuitement www irsst qc ca Pour conna tre l actualit de la recherche men e ou financ e par l IRSST abonnez vous gratuitement au magazine Pr vention au travail publi conjointement par l Institut et la CSST Abonnement 1 877 221 7046 D p t l gal Biblioth que et Archives nationales 2009 ISBN 978 2 89631 346 4 PDF ISBN 978 2 89631 255 9 re dition 2008 ISSN 0820 8395 IRSST Direction des communications 505 boul De Maisonneuve Ouest Montr al Qu bec H3A 3C2 T l phone 514 288 1551 T l copieur 514 288 7636 publications irsst qc ca www irsst qc ca Institut de recherche Robert Sauv en sant et en s curit du travail 2009 Avis de non responsabilit L IRSST ne donne aucune garantie relative l exactitude la fiabilit ou le caract re exhaustif de l information contenue dans ce document En aucun cas l IRSST ne saurait tre tenu responsable pour tout dommage corporel moral ou mat riel r sultant de l utilisation de cette information Notez que les contenus des documents sont prot g s par les l gislations canadiennes applicables en mati re de propri t intellectuelle Les m thodes d
4. University of Michigan and ACGIH Oct 4 6 1988 Ann Arbor Michigan No ref 964 lt 341 gt M thode 341 Identification des bact ries cultivables Diffus No R vision 3 Date de diffusion 2009 02 09 14 45 58
5. minutes d attente pour que les particules se soient d pos es il faut mettre un produit d sinfectant alcool eau de javel sur la surface contamin e et recouvrir pour laisser agir Apr s une trentaine de minutes bien nettoyer la surface contamin e Il faut autoclaver tout le mat riel qui a t en contact avec le contaminant Le port d un masque N 95 est n cessaire lors du nettoyage Selon l ampleur du d versement le professionnel responsable pourrait demander que toute les surfaces murs comptoirs b chers ayant possiblement t en contact avec le contaminant soient d contamin es 10 R F RENCES 1 2 Microbial Identification System Operating manual Version 6 MIDI Inc Newark Delaware 1998 Bergey s Manual of Determinative Bacteriology Holt J G Krieg N R Sneath PH A Staley J T et Williams S T Ninth edition Williams amp Wilkins Baltimore 1994 Bergey s Manual of Systematic Bacteriology Murray R G E Brenner J D Bryant M P Holt G J Krieg R N Moulder J W Pfennig N Sneath P H A Staley J T Mair N S Sharpe M E et Williams S T vol 1 et 2 Williams amp Wilkins Baltimore 1986 Manuel d utilisation des plaques d identification et manuel contr le de qualit BIOLOG 11 BIBLIOGRAPHIE 1 2 Microbiological Methods Collins C H Sixth Edition Butterworths London 409p 1989 Assessing Bioaerosols in Indoor Environment Workshop sponsored by the
6. analyses ou d talonnage sont celles mises au point ou retenues par l IRSST pour l ex cution de ses diff rents mandats Elles peuvent requ rir l utilisation de mat riels d op rations ou d quipements dangereux Ces m thodes n ont pas pour but de mentionner tous les probl mes de s curit associ s avec leur utilisation C est la responsabilit de l utilisateur d tablir les pratiques de sant et de s curit appropri es L utilisation des donn es incluses dans ces m thodes se fera aux seuls risques de l utilisateur l IRSST se d gage de toute responsabilit relative aux erreurs ou aux dommages qui d couleraient de telle utilisation et de telle application Les hyperliens qui apparaissent dans ce document ont t valid s au moment de la publication Cliquez recherche i www irsst qc ca Cette publication est disponible en version PDF sur le site Web de l IRSST www irsst qc ca M thodes de laboratoire Identification des bact ries cultivables EZ M THODE ANALYTIQUE 341 Responsable technique de la m thode Genevi ve Marchand Ph D microbiologiste Services et expertises de laboratoire IRSST Approbation Genevi ve Marchand Ph D microbiologiste Marie Claude Barrette M Sc chimiste responsable du programme d assurance qualit et Jacques Lesage M Sc chimiste directeur Services et expertises de laboratoire IRSST Autorisation pour publication Marie Larue M Sc pr sidente directrice
7. anismes leur d veloppement v Une surpopulation v L envahissement de microorganismes sur un p tri qui rend l isolement difficile v L obtention d une culture pure de chaque colonie i 3 MAT RIEL v G loses Trypticase de soya Autres selon les besoins Tige boucl e Microscope lumi re transmise muni d un contraste de phase Oculaire 10X ou 12 5X Objectifs ex 10X 40X 60X et 100X Lame et lamelle St r omicroscope 20X 120X Source lumineuse fibre optique Chromatographe en phase gazeuse avec colonne de silice fondue Base de donn es informatique Sherlock Base de donn es informatique Biolog R frig rateur temp rature constante 4 C 3 C Incubateur 25 C 2 C Autoclave 121 C 15 PSI Hotte flux laminaire e NENR RSR NS SUR 4 R ACTIFS Eau st rile Coloration de GRAM Produits Biolog R actifs oxydase R actifs catalase Huile immersion LR D No ref 964 lt 341 gt M thode 341 Identification des bact ries cultivables Diffus No R vision 3 Date de diffusion 2009 02 09 14 45 58 d M thode analytique 341 Identification des bact ries cultivables Page 6 5 CHANTILLONNAGE Non applicable 6 PROTOCOLE ANALYTIQUE 6 1 6 2 6 3 6 4 6 5 6 6 6 7 6 8 Faire le repiquage en culture pure de toutes les colonies diff rentes retrouv es sur le p tri d origine Confirmer la puret de la colonie au st r omic
8. g n rale Pr sidence direction g n rale IRSST Ce document technique a t financ par l IRSST Les conclusions et recommandations sont celles des auteurs CONFORM MENT AUX POLITIQUES DE L IRSST Les r sultats des travaux de recherche publi s dans ce document ont fait l objet d une valuation par des pairs TABLE DES MATI RES NN d d N al Ne E 1 Principe de la m thode near lenennensanenins 2 JEE inaani Et D ET EE DE CG S Eeiapntlengage eet EE NR EE WEN 7 Param tres d application nee 7 1 Limite de d tection et limite de quantification 7 2 Fid lit 7 3 Exactitude 7 4 incertitude de mesure 8 Contr le d IL 8 1 Contr le inter laboratoire 8 2 Contr le des produits utilis s e ET AIEEE IDIL EAEE EAE E EEE EEE AAT E EETA A EE AT 10 E EE KR LEE M thode analytique 341 Identification des bact ries cultivables t Page 4 Pr ambule La Loi sur la sant et la s curit du travail au Qu bec a comme objet l limination la source des dangers pour la sant la s curit et l int grit physique des travailleurs Des valeurs d exposition admissibles VEA aux substances chimiques ont t fix es l annexe 1 du R glement sur la sant et la s curit de travail RSST L article 44 de ce r glement intitul M thodes sp cifie que Ces gaz ces fum es ces vapeurs ces poussi res et ces brouillards pr sents dans le milieu de travail doivent tre pr
9. it correspondre celle attendue 8 2 2 Un contr le de qualit est r alis sur les plaques d identification BIOLOG ou autres pour chaque nouveau lot re u Des souches pour contr le de qualit sont inocul es dans les plaques d identification respectives Les r actions biochimiques sont connues pour ces microorganismes et les r sultats doivent correspondre aux r actions attendues No ref 964 lt 341 gt M thode 341 Identification des bact ries cultivables Diffus No R vision 3 Date de diffusion 2009 02 09 14 45 58 d M thode analytique 341 Identification des bact ries cultivables Page 8 9 SANT ET S CURIT 9 1 9 2 D versement mineur Lors d un petit d versement quelques p tris de microorganismes le technicien doit mettre un produit d sinfectant alcool eau de javel sur la surface contamin e Recouvrir ensuite puis quitter le laboratoire pendant environ trente 30 minutes pour que les particules se d posent Mettre une affiche sur la porte du laboratoire afin d en limiter l acc s si n cessaire Apr s ce trente minutes bien nettoyer la surface Il faut autoclaver tout le mat riel qui a t en contact avec le contaminant D versement majeur Lors d un gros d versement plusieurs p tris le technicien doit sortir du laboratoire mettre une affiche sur la porte pour limiter l acc s au laboratoire puis aviser le professionnel responsable et son sup rieur Apr s 30
10. ntification pour v rifier les caract ristiques biochimiques de la souche identifier Effectuer une inoculation des plaques en suivant les recommandations du manufacturier pour inoculer et lire les r actions biochimiques 2 No ref 964 lt 341 gt M thode 341 Identification des bact ries cultivables Diffus No R vision 3 Date de diffusion 2009 02 09 14 45 58 M thode analytique 341 Identification des bact ries cultivables t Page 7 7 PARAM TRES D APPLICATION 7 1 Limite de d tection et limite de quantification Non applicable 7 2 Fid lit Non applicable 7 3 Exactitude Non applicable 7 4 incertitude de mesure Non applicable 8 CONTR LE DE QUALIT 8 1 Contr le inter laboratoire Un contr le de qualit interlaboratoires est effectu avec AIHA American Industrial Hygiene Association Les chantillons sont achemin s au laboratoire trois reprises chaque ann e Chaque s rie d chantillons contient au moins trois inconnus de bact ries qui nous proviennent sous forme lyophilis e Dans certains envois des chantillons d eau ou de poussi res contenant une ou plusieurs bact ries doivent galement tre trait s 8 2 Contr le des produits utilis s 8 2 1 Un contr le de qualit est effectu pour chaque coloration de Gram Les lames utilis es pour r aliser les colorations de Gram sont inocul es avec une bact rie Gram positif et une Gram n gatif La coloration obtenue do
11. roscope Si une culture mixte est identifi e il faut tenter nouveau l isolement des colonies pr sentes Il faut s assurer de ne pas doubler l identification d un isolement d j r alis partir du p tri de d part Bien comparer les repiquages avec la colonie de d part D autres milieux de culture peuvent tre utilis s pour faciliter l identification de certains genres Pour chaque colonie isol e en culture pure v rifier les caract ristiques macroscopiques de la colonie dimension couleur texture pigmentation du milieu etc Un montage humide effectu l aide de l eau pepton e permet de v rifier les caract ristiques microscopiques de la bact rie d crites dans les livres de r f rence 23 Un test d oxydase permet de v rifier la pr sence du cytochrome C caract ristique certains genres bact riens Une coloration de Gram permet de diff rencier entre les bact ries Gram positif et celles Gram n gatif Selon les r sultats des tests biochimiques faire une analyse du profil en acide gras ou une analyse par tests biochimiques tel que d crit ci dessous 6 8 1 En pr sence d un Gram positif ou d un Gram n gatif l oxidase positive effectuer l analyse du profil en acides gras selon la m thode IRSST 344 6 8 2 En pr sence d un Gram n gatif l oxidase n gative effectuer une identification partir des plaques d identification de BIOLOG ou Microscan ou d autres syst mes d ide
12. s op rations IRSST T 06 Guide technique Montr al Qu bec mars 2005 http www irsst qc ca files documents PubIRSST T 06 pdf NIOSH National Institute for Occupational Safety and Health ISO Guide 30 Termes et d finitions utilis s en rapport avec les mat riaux de r f rence 2 dition 1992 ISO Vocabulaire international des termes fondamentaux et g n raux de m trologie 2 dition 1993 KO OK OK American Industrial Hygiene Association AIHA organisme qui accr dite le laboratoire de l IRSST dans le domaine de l analyse des contaminants chimiques en milieu de travail et pour l analyse environnementale microbiologique Par ailleurs toute la terminologie utilis e dans cette m thode est d crite dans l instruction de travail 1 G 014 du syst me de gestion documentaire associ e au syst me qualit de l IRSST No ref 964 lt 341 gt M thode 341 Identification des bact ries cultivables Diffus No R vision 3 Date de diffusion 2009 02 09 14 45 58 M thode analytique 341 Identification des bact ries cultivables t Page 5 1 PRINCIPE DE LA M THODE Isoler en culture pure des colonies de bact ries Proc der leur identification partir de caract risations macro et microscopiques du profil en acide gras m thode IRSST 344 ainsi que de tests biochimiques 2 INTERF RENCES La sensibilit de cette m thode varie selon v La rencontre des conditions de croissance des microorg
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