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Xpert GBS - Diagnostic Technology

1. File di Definizione del Saggio ADF e Istruzioni per importare ADF in sistema GX Foglietto illustrativo Note Le schede dei dati sulla sicurezza dei materiali MSDS Material Safety Data Sheet per tutti i reagenti forniti in questo saggio sono disponibili su richiesta presso l Assistenza tecnica Cepheid e sui siti Web Cepheid www cepheid com e www cepheidinternational com L albumina sierica di bovino BSA di questo prodotto stata prodotta esclusivamente da plasma bovino di origine statunitense Anche la produzione avviene negli Stati Uniti I mangimi utilizzati non contengono n proteine di ruminanti n di altri animali inoltre gli animali hanno superato il test ante e post mortem Durante il processo di produzione il materiale non entra in contatto con altri materiali di origine animale 72 300 8907 Rev D September 2011 O Materiali necessari ma non forniti Conservazione e manipolazione Conservare il kit Xpert GBS a 2 28 C Non utilizzare reagenti o cartucce oltre la data di scadenza Materiali necessari ma non forniti Sistema GeneXpert Dx il numero di catalogo varia in base alla configurazione Strumento GeneXpert computer lettore di codici a barre a penna e manuale dell operatore Stampante per le linee guida sulla compatibilit consultare il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Dx Dispositivo di raccolta Cepheid numero di parte 900 0370 Pipetta di trasferimento sterile mo
2. Hersteller Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Telefon 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Autorisierte Vertretung Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Frankreich Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E Mail cepheid cepheideurope fr C vo 300 8907 Rev D September 2011 Symboltabelle 51 Deutsch 52 300 8907 Rev D September 2011 Espanol Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Denominaci n com n Xpert GBS Nombre com n o de uso frecuente Ensayo Xpert GBS Uso previsto El uso de Cepheid Xpert GBS en el sistema GeneXpert Dx consiste en una prueba de diagn stico in vitro disefiada para detectar el ADN de estreptococos del grupo B EGB en muestras vaginales y rectales empleando la reacci n en cadena de la polimerasa RCP en tiempo real totalmente automatizada con detecci n fluorog nica del ADN amplificado El ensayo Xpert GBS est indicado para la identificaci n r pida de la colonizaci n por EGB antes y durante el parto Lautilizaci n del ensayo Xpert GBS para la evaluaci n durante el parto no debe excluir el uso de otras estrategias p ej pruebas antes del parto Los resultados de Xpert GBS durante el parto resultan utiles a fin de identificar a las candidatas para recibir una profilaxis con antibi ticos durante el parto en los casos en los que la administraci n de antibi ticos intravenosos no se vea retrasada en espera de los
3. 1 408 541 4192 Representante autorizado Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Correo electr nico cepheid cepheideurope fr CE Ivo 300 8907 Rev D September 2011 Tabla de simbolos 69 Espanol 70 300 8907 Rev D September 2011 Italiano Dispositivo medico per diagnostica in vitro Nome registrato Xpert GBS Nome comune o usuale Xpert GBS Assay Uso previsto Il test Cepheid Xpert GBS eseguito sul sistema GeneXpert Dx un test diagnostico in vitro qualitativo progettato per rilevare il DNA dello streptococco di gruppo B GBS nei campioni vaginali rettali mediante la reazione a catena della polimerasi in tempo reale PCR Polymerase Chain Reaction real time completamente automatizzata con rilevamento del dna amplificato mediante Pimpiego di sonde fluorogeniche Il test Xpert GBS Assay indicato per l identificazione rapida di colonizzazione di GBS nel periodo antepartum e intrapartum L utilizzo del test Xpert GBS per lo screening intrapartum non esclude l uso di altre strategie ad es lo screening antepartum I risultati del test Xpert GBS intrapartum sono utili per identificare le candidate per la profilassi antibiotica intrapartum quando la somministrazione per via endovenosa di antibiotici ritardata da risultati in sospeso Il test Xpert GBS Assay non fornisce risultati sulla sensibilit Per eseguire i test di sensibilit
4. 28 C lagern Reagenzien und Kartuschen die das Verfallsdatum berschritten haben d rfen nicht verwendet werden Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind Das GeneXpert Dx System die Katalognummer h ngt von der Konfiguration ab GeneXpert Instrument Computer Strichcode Leseger t und Benutzerhandbuch Drucker Kompatibilit tshinweise finden Sie im Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System Cepheid Abstrichtupfer Teilenummer 900 0370 Sterile Einweg Transferpipette nur zur Testwiederholung Erh ltliche Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind KWIK STIK MicroBioLogics Kat Nr 8164 Jeweils eine Positivkontrolle der Klasse Niedrig der Streptokokkenspezies Gruppe B eine Positivkontrolle der Klasse Mittel eine Positivkontrolle der Klasse Hoch und L acidophilus als Negativkontrolle Warnungen und Vorsichtshinweise DI 2 28 Arc Alle biologischen Proben und auch die gebrauchten Kartuschen sind als potenziell infekti s zu behandeln Da es oft unm glich ist zu bestimmen welche Probe infekti s ist sollten alle biologischen Proben mit den blichen Sorgfaltsma nahmen behandelt werden Die Richtlinien zum Umgang mit Proben sind bei der US amerikanischen CDC Center for Disease Control and Prevention US amerikanische staatliche Beh rde f r den Schutz der Bev lkerung vor Krankheiten und Seuchen und beim Clinical and Laboratory Standards Institute US amerikan
5. Aucune difference biologique n est attendue entre ces chantillons p rinataux et ceux collect s avant l accouchement 7 Valeur pr dictive positive 8 Valeur pr dictive n gative 300 8907 Rev D September 2011 Frangais Tableau 2 Performances du Test Xpert GBS et du 2 d test TAAN relatifs la culture 2nd test GBS Xpert TAAN Cat gorie Sensibilit Clinf rieur Clsup rieur Sp cificit Clinferieur Clsup rieur Sensibilit Clinf rieur Clsup rieur Sp cificit Clinf rieur CI sup rieur Total 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 77 9 71 5 83 5 96 3 94 4 97 6 178 201 561 580 155 199 567 589 Avant 85 3 76 9 91 5 98 1 95 6 99 4 74 5 64 9 82 6 97 0 94 3 98 7 l accouchement 87 102 259 264 76 102 263 271 Pendant 91 9 84 7 96 4 95 6 92 7 97 6 81 4 72 3 88 6 95 6 92 7 97 6 l accouchement 91 99 302 316 79 97 304 318 ROM 91 3 72 0 98 9 94 3 88 1 97 9 90 9 70 8 98 9 95 2 89 2 98 4 21 23 100 106 20 22 100 105 Pas de ROM 92 1 83 6 97 0 96 2 92 6 98 3 78 7 67 7 87 3 95 8 92 1 98 0 70 76 202 210 59 75 204 213 Le 2 test TAAN cible une s quence dans le g ne cfb et a t approuv au pr alable par la FDA Food and Drug Administration autorit am ricaine de surveillance des aliments et des m dicaments Sous ensemble des femmes en phase p rinatale dont les chantillons ont t collect
6. gr ce ce test car l ADN peut r sister la suite d un traitement antimicrobien De bonnes pratiques de laboratoire et le changement de gants lors de la manipulation d chantillons de patients sont recommand s afin d viter la contamination des chantillons ou des r actifs 300 8907 Rev D September 2011 26 Frangais Valeurs attendues Le SGB infecte le vagin ou le rectum d environ 10 30 des femmes enceintes L infection SGB peut tre passag re chronique ou ponctuelle Dans le cadre des soins pr nataux la culture de d pistage du SGB du vagin et du rectum vers la fin de la grossesse peut aider d tecter les femmes qui sont susceptibles d tre infect es par le SGB au moment de leur accouchement 2 Dans plusieurs tudes des sensibilit s de 87 83 92 du CI et de 69 57 a 79 du CT ainsi que des sp cificit s de 96 95 98 du CT et de 92 89 94 du CT ont t signal es pour des cultures pr natales tardives afin d identifier le stade de l infection lors de l accouchement 8 Au cours d valuations cliniques du Test Xpert GBS 25 4 des femmes 201 sur 791 taient infect es par le SGB utilisation de m thodes de culture Caract ristiques des performances Performances cliniques Les caract ristiques des performances du Test Xpert GBS ont t d termin es lors d une tude de cohorte multisite qui s est d roul e dans six institutions dot es de services de maternit aux t
7. 11 Os cartuchos usados devem ser eliminados nos contentores adequados para res duos biol gicos de acordo com as pr ticas normalizadas da sua institui o Visualiza o e impress o dos resultados Para obter instru es detalhadas sobre como visualizar e imprimir os resultados consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx Controlo de qualidade Cada teste inclui os seguintes controlos internos e uma verifica o da sonda Controlo de processamento da amostra SPC assegura que a amostra foi correctamente processada O SPC constitu do por B globigii sob a forma de uma esfera desidratada e vem inclu do em todos cartuchos O SPC monitoriza a lise e o processo de elui o O SPC deve ter aprova o gerar um limite de ciclo Ct v lido numa amostra negativa e n o poder amplificar numa amostra positiva alta O SPC aprovado se preencher os crit rios de aceita o atribu dos Controlo interno IC verifica os reagentes de PCR funcionais e a aus ncia de inibi o que iria evitar a amplifica o do PCR O IC deve ter aprova o gerar um limite de ciclo Ct v lido numa amostra negativa e n o poder amplificar numa amostra positiva alta O IC aprovado se preencher os crit rios de aceita o atribu dos Verifica o da sonda antes do in cio da reac o de PCR o sistema GeneXpert Dx mede o sinal de fluoresc ncia das sondas para monitorizar a reidrata o das esferas o enchimento do t
8. 76 102 263 271 Intrapartum 91 9 84 7 96 4 95 6 92 7 97 6 81 4 72 3 88 6 95 6 92 7 97 6 91 99 302 316 79 97 304 318 ROM 91 3 72 0 98 9 94 3 88 1 97 9 90 9 70 8 98 9 95 2 89 2 98 4 21 23 100 106 20 22 100 105 No ROM3 92 1 83 6 97 0 96 2 92 6 98 3 78 7 67 7 87 3 95 8 92 1 98 0 70 76 202 210 59 75 204 213 Il saggio 24 NAAT individua una sequenza nel gene cfb ed stato approvato dall FDA in precedenza 2 Sottoinsieme delle donne intrapartum i cui campioni sono stati prelevati dopo la rottura della membrana ROM 3 Sottoinsieme delle donne intrapartum i cui campioni sono stati prelevati prima la rottura della membrana ROM La tabella seguente mostra un confronto diretto dei due test di PCR Xpert GBS e and NAAT Table 3 Confronto diretto dei due test di PCR Pos con coltura Neg con coltura ND con coltura Totale 2 NAAT pos 2 NAAT neg Irrisolto 2 NAAT pos 2 NAAT neg Irrisolto 2 dNAAT pos 2 NAAT neg Irrisolto Xpert GBS Posta 149 27 2 10 9 0 0 0 0 197 Xpert GBS 6 17 0 11 549 1 0 3 0 587 Neg con Xpert GBS Invalid Erver 0 0 0 1 9 0 0 0 0 10 No Result Do 165 44 2 22 567 1 0 3 0 794 Totale 2 4 NAAT 300 8907 Rev D September 2011 81 Italiano La tabella 4 mostra il numero di pazienti testate in ognuno dei sei laboratori clinici che hanno partecipato alla valutazione e la prestazione stimata per il test Xpert GBS rispetto ai risultati della coltura Ta
9. Figure 2 Ventana View Results Ver resultados del sistema GeneXpert Dx 60 300 8907 Rev D September 2011 Motivos para repetir el ensayo o comenzar procedimientos alternativos Motivos para repetir el ensayo o comenzar procedimientos alternativos Repita la prueba o comience procedimientos alternativos en caso de obtener uno de los siguientes resultados Error la prueba se ha anulado porque ha fallado un componente del sistema se ha alcanzado la presi n m xima o ha fallado la comprobaci n de sonda Invalid No v lido el CPM o el control interno fallan si el resultado de EGB es negativo Un resultado no v lido puede deberse tambi n a las burbujas de aire del tubo de reacci n No Result Sin resultado el operador ha detenido la prueba se ha producido un fallo de alimentaci n durante la prueba o se han detectado problemas en el cartucho En caso de haber l quido en el compartimento S del cartucho utilice una pipeta de transferencia para transferir todo el l quido al compartimento S de otro cartucho y a continuaci n Si no hay l quido utilice unas pinzas est riles para transferir el hisopo a otro cartucho y repita la prueba a partir de A ada el reactivo 1 al compartimento 1 del cartucho Otra posibilidad es preparar otro cartucho con un segundo hisopo y repetir la prueba Limitaciones El rendimiento del ensayo Xpert GBS se ha establecido mediante el sistema Cepheid GeneXpert Dx con muestras vaginales y recta
10. PPV dopo la NPV 8 dopo la Categoria 4 con 4 con 4 ripetizione del test ripetizione del test ripetizione del test ripetizione del test paziente Risultati N totale coltura coltura 95 confidenza 95 confidenza 95 confidenza 95 confidenza Tutte le Pos con Xpert GBS 197 186 178 168 19 18 pazienti 88 6 96 7 90 4 96 1 Neg con Xpert GBS 584 540 23 20 561 520 No Result 10 65 0 13 10 52 83 3 92 6 94 9 98 0 85 4 94 1 94 2 97 5 Totale 791 201 590 Antepartum Pos con Xpert GBS 92 88 87 83 5 5 85 3 98 1 94 6 94 5 Neg con Xpert GBS 274 253 15 13 259 240 No Result 7 32 0 6 7 26 76 9 91 5 95 6 99 4 87 8 98 2 94 1 96 9 Totale 373 102 271 Intrapartum Pos con Xpert GBS 105 98 91 85 14 13 91 9 95 6 86 7 97 4 Neg con Xpert GBS 310 287 8 7 302 280 No Result2 3 33 0 7 306 84 7 96 5 92 7 97 6 78 6 92 5 95 0 98 9 Totale 418 99 319 ROM Pos con Xpert GBS 27 24 21 19 6 5 91 3 94 3 77 8 98 0 Neg con Xpert GBS 102 92 2 2 100 90 No Result 0 13 0 2 oan 72 0 98 9 88 1 97 9 57 7 91 4 93 1 99 8 Totale 129 23 106 No ROM Pos con Xpert GBS 78 74 70 66 8 8 92 1 96 2 89 7 97 1 Neg con Xpert GBS 208 195 6 5 202 190 No Result 3 20 0 5 3 15 83 6 97 1 92 6 98 3 80 8 95 5 93 8 98 9 Totale 289 76 213 Tutti i risultati con Xpert GBS mostrati corrispondono alla ripetizione
11. Table 3 Comparaci n directa de las dos pruebas de RCP Cultivo Pos Cultivo Neg Cultivo S D Segundo Segundo Segundo Segundo Segundo Segundo NAAT Pos NAAT Neg No resuelto NAAT Pos NAAT Neg No resuelto NAAT Pos NAAT Neg No resuelto Total Xpert GBS 27 2 10 9 0 0 0 0 197 Xpert GBS Pos 6 17 0 11 549 1 0 3 0 587 Xpert GBS Neg No v lido Error E y i 1 i E 0 o 0 10 Sin resultado eee Eee 165 44 2 22 567 1 0 3 0 794 Total segundo NAAT 300 8907 Rev D September 2011 Anilisis del tiempo hasta obtenci n de resultados La tabla 4 muestra el n mero de pacientes analizados en cada uno de los seis laboratorios clinicos participantes en la evaluaci n y el rendimiento estimado de la prueba Xpert GBS en comparaci n con los resultados de los cultivos Table 4 Comparaci n entre centros Xpert GBS sin resultados Sensibilidad Especificidad Centrode Pacientes Pacientes pruebas antes del durante Total Cultivo Tras 95 95 clinicas parto elparto pacientes positivo Prevalencia Inicialmente repetici n Estimaci n 95 inferior superior Estimaci n 95 inferior superior 1 0 51 51 11 21 6 4 1 72 7 39 0 94 0 92 3 79 1 98 4 2 113 5 118 31 26 3 12 2 90 3 74 2 98 0 97 6 91 8 99 7 3 94 0 94 17 18 1 9 1 76 5 50 1 93 2 100 0 95 3 100 0 4 64 175 239 75 31 4 13 2 85 3 75 3 92 4 96 3 92 1 98 6 5 22 152 174 38 21 8 16 1 97 4 86 2 99 9 94 8 89 6 97 9 6 80 35 115 29 25 2 11 3 96 6 8
12. Wipe away excessive amounts of secretion or discharge 2 Remove both marked swabs from the transport container 3 Carefully insert both marked swabs into the patient s vagina Sample secretions from the mucosa of the lower one third part of the vagina Rotate the swabs three times to ensure uniform sample on both swabs 4 Using the same marked swabs carefully insert both swabs approximately 2 5 cm beyond the anal sphincter and gently rotate to sample anal crypts 5 Place both marked swabs in the transport container 6 Ifthe specimens will be processed within 24 hours store at room temperature If the specimens will be tested after 24 hours refrigerate until testing is performed Specimens stored at 2 8 C are stable for up to six days Procedure Preparing the Cartridge Important Start the test within 15 minutes of adding the sample to the cartridge Note Only one swab is required The second swab is extra and can be used for susceptibility testing Culture isolates are needed for performing susceptibility testing as recommended for penicillin allergic women Do not add 2 swabs to any one cartridge To add the sample into the cartridge Xpert GBS 1 2 3 Remove the cartridge from the package Open the cartridge lid Remove the marked swabs from the container Gently brush the two swabs together using a twirling motion so that equal amount of sample is on each swab 300 8907 Rev D September 2011 3 English Inse
13. disposition Des isolats de culture sont n cessaires la r alisation de tests de pr disposition comme recommand chez les femmes allergiques la p nicilline N ouvrez pas le couvercle de la cartouche Xpert GBS sauf pour ajouter un chantillon N utilisez pas une cartouche qui est tomb e ou qui a t secou e apres avoir ajout l chantillon N ouvrez pas les cartouches usag es sauf pour proc der un nouveau test et uniquement pour retirer l chantillon lu de la chambre S l aide d une pipette Chaque cartouche GBS Xpert usage unique est utilis e pour effectuer un test Ne r utilisez pas les cartouches utilis es Adressez vous au personnel de votre tablissement charg de la gestion environnementale des d chets afin de conna tre les proc dures correctes de mise au rebut des cartouches usag es et des r actifs non utilis s Ces quipements peuvent pr senter les caract ristiques des d chets dangereux selon la loi f d rale sur la conservation et la r cup ration des ressources Resource Conservation and Recovery Act RCRA de l EPA et donc n cessiter des mesures de mise au rebut sp cifiques Consultez les r glementations r gionales et locales qui peuvent diff rer de la r glementation f d rale Les tablissements situ s hors des Etats Unis doivent consulter la l gislation de leur pays relative l limination des d chets dangereux Stockez le kit GBS Xpert entre 2 et 28 HO Le r actif 2 cont
14. eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 7 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition Yancey MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 gt Paoletti Lawrence C Ph D Research Interests Accessed 07 19 2006 lt http www channing harvard edu paoletti htm gt Assistance Pour b n ficier d une assistance contactez Cepheid en utilisant l une des informations relatives aux contacts suivantes Assurez vous de communiquer le num ro de s rie de l appareil et le num ro d identification du lot d agents r actifs lorsque vous appelez ou envoyez un courrier lectronique Am rique du Nord Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations relatives aux contacts suivantes T l 1 888 838 3222 Option 2 Courrier lectronique techsupport cepheid com Vous pouvez joindre l assistance technique de Cepheid par t l phone du lundi au vendredi de 5h00 17h00 heure du Pacifique Union europ enne Pour b n ficier d une assistance technique utilisez les informations relatives aux contacts suivantes T l 33 563 82 53 19 Courrier lectroniqu
15. 35 y 37 de gestaci n Esta prueba no se puede utilizar para diferenciar a los portadores de estreptococos del grupo B de los pacientes que tienen infecci n por estreptococos Los resultados de la prueba pueden verse afectados por un tratamiento antibi tico concurrente Por lo tanto el xito o el fracaso terap utico no se pueden evaluar con esta prueba debido a que el ADN puede persistir tras el tratamiento antimicrobiano Se recomienda la aplicaci n de las pr cticas correctas de laboratorio y cambiarse de guantes al manipular cada muestra de paciente para evitar la contaminaci n cruzada de las muestras o los reactivos Valores previstos Aproximadamente entre el 10 y 30 de las mujeres embarazadas est n colonizadas con EGB en la vagina o el recto La colonizaci n por EGB puede ser transitoria cr nica o intermitente La detecci n de EGB mediante cultivo en la vagina y el recto al final de la gestaci n durante la asistencia prenatal permite identificar a aquellas mujeres con probabilidades de ser colonizadas con EGB en el momento del parto 2 En varios estudios se han descrito unos niveles de sensibilidad del 87 83 92 CI y el 69 57 79 CT y unos niveles 300 8907 Rev D September 2011 61 Espanol de especificidad del 96 95 98 CI y el 92 89 94 CT en el caso de los cultivos prenatales al final del embarazo para la identificaci n del estado de colonizaci n en el momento del parto Durante las eva
16. 52 Total 791 201 590 Anteparto Xpert GBS Pos 92 88 87 83 5 5 85 3 98 1 94 6 94 5 Xpert GBS Neg 274 253 15 13 259 240 76 9 a 91 5 95 6 A 99 4 87 8 A 98 2 94 1 A 96 9 Sem resultado 7 32 0 6 7 26 Total 373 102 271 Intraparto Xpert GBS Pos 105 98 91 85 14 13 91 9 95 6 86 7 97 4 Xpert GBS Neg 310 287 8 7 302 280 84 7 A 96 5 92 7 A 97 6 78 6 A 92 5 95 0 A 98 9 Sem resultado 3 33 0 7 3 26 Total 418 99 319 RM gt Xpert GBS Pos 27 24 21 19 6 5 91 3 94 3 77 8 98 0 Xpert GBS Neg 102 92 2 2 100 90 72 0 A 98 9 88 1 A 97 9 57 7 A 91 4 93 1 A 99 8 Sem resultado 0 13 0 2 0 11 Total 129 23 106 Sem RM Xpert GBS Pos 78 74 70 66 8 8 92 1 96 2 89 7 97 1 Xpert GBS Neg 208 195 6 5 202 190 83 6 A 97 1 92 6 A 98 3 80 8 A 95 5 93 8 A 98 9 Sem resultado 3 20 065 3 15 Total 289 76 213 Todos os resultados Xpert GBS apresentados foram obtidos ap s a repeti o do teste Os resultados iniciais do teste s o apresentados entre par ntesis 2 Sem resultados num teste Xpert GBS pode dever se a um teste inv lido um erro do sistema ou a um teste sem resultado quando a presen a ou a aus ncia de DNA de EGB n o p de ser notificada 3 Foram exclu das das an lises tr s mulheres em intraparto sem resultados por cultura 4 A preval ncia global da coloniza o por EGB determinada por cultura de 25 3 5 Subconj
17. Kartusche Polymerase Inhibitor Komplex BSA Bovine Serum Albumin Kiigelchen 2 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche Primer Sonden dNTPs DNA f r die interne Kontrolle IC BSA Bovine Serum Albumin Kiigelchen 3 gefriergetrocknet 1 pro Kartusche Probenverarbeitungskontrolle SPC 2000 B globigii Sporen fiir die Probenvorbereitungskontrolle Reagenz 1 Tris Puffer EDTA Tenside 3 0 ml pro Kartusche Reagenz 2 Natriumhydroxid 3 0 ml pro Kartusche CD 1 pro set Untersuchungsdefinitionsdateien ADF Anweisungen an die ADF in die Software GX importieren Packungsbeilage Hinweis e Fiir alle in diesem Kit verwendeten Reagenzien erhalten Sie vom Cepheid Kundendienst auf Nachfrage die entsprechenden Sicherheitsdatenbl tter Zudem k nnen Sie diese Datenbl tter jederzeit auch auf der Internetseite von Cepheid www cepheid com und www cepheidinternational com einsehen Das Rinderserum Albumin BSA in diesem Produkt wurde ausschlie lich aus Rinderplasma hergestellt das aus den USA stammt Auch die Herstellung des BSA erfolgte in den USA Die Tiere erhielten keinerlei Wiederk uer oder anderes Tierprotein mit dem Futter und wurden ante und post mortem Tests unterzogen Bei der Verarbeitung wurde das Material nicht mit anderen Tiermaterialien vermischt 36 300 8907 Rev D September 2011 e e Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind Lagerung und Handhabung Das Xpert GBS Kit bei 2
18. Polymerase Kettenreaktion PCR mit fluorgenem Nachweis der amplifizierten DNA Das Xpert GBS Testverfahren ist schnellen GBS Infizierung vor und w hrend der Entbindung vorgesehen Durch den Einsatz des Xpert GBS Tests beim Screening w hrend der Entbindung sollten andere Verfahren beispielsweise Tests vor der Entbindung nicht ausgeschlossen werden Die Ergebnisse des Xpert GBS Tests w hrend der Entbindung sind hilfreich um diejenigen Frauen zu ermitteln die f r eine Antibiotikaprophylaxe w hrend der Entbindung in Frage kommen da hierbei die intraven se Verabreichung von Antibiotika nicht wegen noch ausstehender Ergebnisse verz gert wird Der Xpert GBS Test liefert keine Ergebnisse im Hinblick auf die Sensibilit t Zur Durchf hrung eines Sensibilit tstests der bei Frauen mit Penicillinallergie empfehlenswert ist werden Kulturisolate ben tigt Zusammenfassung und Erkl rung Die bakterielle GBS Infektion geht mit einer schweren Erkrankung bei Neugeborenen einher deren M tter mit den Mikroorganismen infiziert sind Die GBS Ubertragung erfolgt vor der Entbindung antepartum oder wahrend der Entbindung intrapartum von den mit GBS infizierten Frauen auf deren Kinder In den Vereinigten Staaten ist die GBS Infektion die Haupttodesursache bei Neugeborenen bei denen es zu einer Sepsis Pneumonie oder Meningitis kommt 123 Gegenw rtig wird bei schwangeren Frauen zur Pr vention der GBS Erkrankung standardm ig in der 35 bis 37 S
19. amplificazione dell acido nucleico NAAT Il test stato eseguito in laboratori clinici affiliati a ciascun istituto nonch all area travaglio e parto Nello studio sono state incluse donne nel periodo intrapartum e antepartum Per l arruolamento nella parte ntrapartum dello studio era necessario il consenso scritto delle donne essere in travaglio e non avere alcuna controindicazione all esame vaginale per esempio sanguinamento Per l arruolamento nella parte antepartum dello studio era necessario il consenso scritto delle donne essere alla 35a 37a settimana di gestazione e non avere alcuna controindicazione all esame vaginale per esempio sanguinamento Inoltre nessuna delle donne arruolate presentava placenta previa non c era alcuna indicazione urgente di procedere al parto e non era stato utilizzato alcun tipo di antibiotico nella settimana precedente il ricovero me Sono stati prelevati campioni vaginali rettali da ciascuna delle 794 pazienti eleggibili utilizzando due set di tamponi marcati dispositivi di raccolta Cepheid Uno dei tamponi del primo set stato utilizzato per la coltura Il secondo set di tamponi marcati stato diviso nel modo seguente un tampone stato utilizzato nel test Xpert GBS Assay sul sistema GeneXpert Dx l altro stato utilizzato nel saggio and NAAT Il saggio 2 NAAT individua una sequenza nel gene cfb ed era stato approvato dall FDA in precedenza I risultati di questo test non sono s
20. campione con I SPC Bacillus globigii sotto forma di una microsfera all interno della cartuccia e il reagente di trattamento catturando il materiale cellulare su un filtro lisando le cellule ed eluendo il DNA La soluzione di DNA viene quindi miscelata con i reagenti di PCR che sono in forma disidratata e trasferita nella provetta di reazione integrata dove si realizza la reazione di amplificazione e rilevamento in Real Time PCR I risultati sono interpolati dal sistema GeneXpert Dx a partire dai segnali di fluorescenza misurati e dagli algoritmi di calcolo predefiniti Per l esecuzione dell analisi sono necessari circa 50 minuti o meno Reagenti e strumenti Materiale fornito Il kit Xpert GBS GXGBS 100N 10 contiene reagenti sufficienti per elaborare 10 campioni dei pazienti o di controllo qualita Il kit contiene il seguente materiale Cartucce Xpert GBS con provette di reazione integrate 10 Microsfera 1 congelata disidratata 1 per cartuccia Complesso polimerasi inibitore BSA albumina sierica di bovino Microsfera 2 congelata disidratata 1 per cartuccia Primer Sonde e dNTP DNA controllo interno IC BSA albumina sierica di bovino Microsfera 3 congelata disidratata 1 per cartuccia e Controllo elaborazione del campione SPC 2000 spore di B globigii controllo preparazione spore Reagente 1 Tris Buffer EDTA surfattanti 3 0 ml per cartuccia Reagente 2 idrossido di sodio 3 0 ml per cartuccia CD 1 per kit
21. con un movimento rotatorio in modo che su ciascun tampone sia presente lo stesso quantitativo di campione 4 Inserire uno dei tamponi nella camera S della cartuccia Xpert GBS Non inserire entrambi i tamponi nella cartuccia Riporre il secondo tampone nella provetta di prelievo trasporto per il successivo test di sensibilit antimicrobica per le pazienti GBS positive Per eseguire i test di sensibilit sono necessari isolati colturali come consigliato per le donne allergiche alla penicillina 5 Sollevare il tampone in modo che la marcatura nera sia centrata nella tacca 6 Rompere il tampone spezzando l asta verso destra 7 Chiudere il coperchio della cartuccia S Campione Figure 1 Cartuccia Xpert GBS vista superiore 74 300 8907 Rev D September 2011 Controllo di qualita Avvio dell analisi Questa sezione elenca i passaggi di base dell esecuzione dell analisi Per istruzioni dettagliate vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert 1 2 N o 11 Accendere lo strumento GeneXpert Dx e successivamente il PC il software GeneXpert si avvia automaticamente Connettersi al software del sistema GeneXpert Dx con il proprio nome utilizzatore e la password Nella finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx fare clic su Create Test Crea analisi Verr visualizzata la finestra di dialogo Scan Cartridge Barcode Analizza codice a barre cartuccia Eseguire la scansione del codice a bar
22. del test i risultati iniziali sono tra parentesi L esito No results per iltest Xpert GBS pu essere dovuto a un test non valido un errore del sistema o alla mancanza di risultato quando non pu essere determinata la presenza o l assenza del DNA di GBS 3 Sono state escluse dall analisi tre donne del braccio intrapartum con nessun risultato dalla coltura 4La prevalenza totale della colonizzazione da GBS risultata pari al 25 3 in base al metodo colturale 5 Sottoinsieme delle donne intrapartum i cui campioni sono stati prelevati dopo la rottura della membrana ROM 6 Sottoinsieme delle donne intrapartum i cui campioni sono stati prelevati prima la rottura della membrana ROM Non attesa alcuna differenza biologica tra questi campioni intrapartum e quelli prelevati antepartum 7 Valore predittivo positivo 8 Valore predittivo negativo 80 300 8907 Rev D September 2011 Caratteristiche sulle prestazioni Table 2 Prestazione del test Xpert GBS e 24 NAAT rispetto alla coltura Xpert GPS and NAAT Categoria Sensibilit Clinferiore Clsuperiore Specificit Clinferiore Clsuperiore Sensibilit Clinferiore Clsuperiore Specificit Clinferiore CI superiore Complessivi 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 77 9 71 5 83 5 96 3 94 4 97 6 178 201 561 580 155 199 567 589 Antepartum 85 3 76 9 91 5 98 1 95 6 99 4 74 5 64 9 82 6 97 0 94 3 98 7 87 102 259 264
23. dem Z chten von Kulturen oder auf Nukleins ureamplifikationstests Nucleic Acid Amplification Test NAAT basierendes Screening Programm Die Tests wurden in klinischen Labors durchgef hrt die an die jeweilige Institution und die jeweilige Entbindungsstation angegliedert waren In die Studie wurden sowohl Patientinnen w hrend der Entbindung als auch Patientinnen vor der Entbindung einbezogen Um an dem Teil der Studie teilzunehmen bei dem Frauen w hrend der Entbindung untersucht wurden mussten die Frauen schriftlich zugestimmt haben und in den Wehen liegen und durften keine Kontraindikationen gegen eine vaginale Untersuchung beispielsweise Blutungen aufweisen Um an dem Teil der Studie teilzunehmen bei dem Frauen vor der Entbindung untersucht wurden mussten die Frauen schriftlich zugestimmt haben und in der 35 bis 37 Schwangerschaftswoche sein ferner durften sie keine Kontraindikationen gegen eine vaginale Untersuchung beispielsweise Blutungen aufweisen Bei allen Patientinnen durften in der Woche vor Beginn der Teilnahme keine Anzeichen f r eine Placenta praevia und keine dringende Notwendigkeit f r die Einleitung der Geburt vorliegen ferner durften keine Antibiotika verabreicht werden Die Proben aus Vagina und Rektum wurden bei jeder der 794 teilnehmenden Patientinnen unter Verwendung von zwei S tzen markierter Abstrichtupfer Abstrichinstrumente von Cepheid entnommen Einer der Abstrichtupfer aus dem ersten Satz wurde zum Z chten
24. der gr n blinkenden Anzeige ffnen und die Kartusche laden Die T r schlie en Der Test beginnt und die gr ne Lampe h rt auf zu blinken Wenn der Test abgeschlossen ist geht die Lampe aus Die Modult r kann erst ge ffnet und die Kartusche entnommen werden wenn das System die T r entriegelt hat Falls absolut erforderlich kann das Probeneluat mit einer Transferpipette aus der mit S gekennzeichneten Kartuschenkammer entnommen werden Dieses Eluat kann als Backup f r den zugeh rigen zweiten Abstrich verwendet werden der bei der Patientin zur Durchf hrung des Sensibilit tstests durch das Mikrobiologielabor genommen wurde Das Z chten von Kulturen aus Xpert GBS Reagenz 1 wurde nicht validiert Die Labore m ssen ihre eigenen Verfahren zum Z chten von Kulturen validieren oder mit dem zweiten Abstrichtupfer eine kulturbasierte Identifikation und einen Sensibilit tstest durchf hren Die gebrauchten Kartuschen sind gem den Standardverfahren Ihrer Institution in entsprechenden Probenabfallbeh ltern zu entsorgen Anzeigen und Drucken der Ergebnisse Siehe das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System f r genaue Informationen zum Anzeigen und Drucken der Ergebnisse 300 8907 Rev D September 2011 39 Deutsch CONTROL Qualit tskontrolle Jeder Test beinhaltet die folgenden internen Kontrollen sowie eine Sondenpr fung Probenverarbeitungskontrolle SPC Sicher stellen dass die Probe ordnungsgem verarbeitet wurde
25. di scadenza CONTROL Controllo Rappresentante autorizzato nella Comunita europea Boa o Limitazione della temperatura o Na Rischio biologico Produttore Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Telefono 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Rappresentante autorizzato Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Francia Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E mail cepheid cepheideurope fr C Lo 86 300 8907 Rev D September 2011 Portugu s Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Nome patenteado Xpert GBS Nome comum ou usual Ensaio Xpert GBS Utiliza o prevista O ensaio Xpert GBS da Cepheid efectuado no sistema GeneXpert Dx um teste qualitativo de diagn stico in vitro concebido para detectar DNA de estreptococos do Grupo B EGB em zaragatoas vaginais rectais usando a t cnica de PCR polymerase chain reaction reac o em cadeia da polimerase automatizada em tempo real com detec o fluorog nica do DNA amplificado A utiliza o do ensaio Xpert GBS est indicada para a identifica o r pida da coloniza o por EGB no anteparto e intraparto A utiliza o do Xpert GBS para o rastreio intraparto n o deve impedir a utiliza o de outras estrat gias por exemplo testes no anteparto Os resultados Xpert GBS obtidos no intraparto s o teis na identifica o de candidatas para a profilaxia antibi tica intraparto quando a ad
26. die DNA nach einer antimikrobiellen Therapie u U weiterhin vorhanden ist Es wird empfohlen die anerkannten Laborpraktiken einzuhalten und die Handschuhe im Umgang mit den Proben verschiedener Patienten zu wechseln um eine Kontaminierung der Proben und der Reagenzien zu vermeiden Erwartete Werte Zwischen 10 und 30 der schwangeren Frauen sind vaginal oder rektal mit GBS infiziert Die GBS Infektion kann transitorisch chronisch oder intermittierend sein Beim Screening von Kulturen aus Vagina und Rektum auf GBS gegen Ende der Schwangerschaft im Rahmen der Schwangerschaftsvorsorge lassen sich Frauen erkennen bei denen eine Infektion mit GBS w hrend der Entbindung wahrscheinlich ist 23 In verschiedenen Studien wurden gegen Ende der Schwangerschaft angesetzten Kulturen im Hinblick auf den Kolonisationsstatus zum Zeitpunkt der Entbindung Sensibilit ten von 87 83 92 CT und 69 57 79 CI und Spezifit ten von 96 95 98 CI und 92 89 94 CD ermittelt W hrend der klinischen Auswertungen f r den Xpert GBS Test zeigten sich 25 4 der Frauen 201 von 791 im Kulturverfahren als mit GBS kolonisiert 300 8907 Rev D September 2011 43 Deutsch Leistungsmerkmale Klinische Leistung Die Leistungsmerkmale des Xpert GBS Tests wurden in den Vereinigten Staaten im Rahmen einer multizentrischen Prospektiv Forschungsstudie an sechs Institutionen mit Entbindungsstationen festgelegt Jede Institution verf gte ber ein auf
27. el comienzo de la prueba hasta la obtenci n de los resultados En los casos en los que se desconocen los resultados de EGB en el momento del parto el enfoque basado en el riesgo resulta menos eficaz a la hora de identificar a las madres colonizadas que la evaluaci n antes del parto y no es posible llevar a cabo las pruebas de sensibilidad para las pacientes con alergia a la penicilina En el caso de las mujeres que no han recibido asistencia prenatal que pueden tener un parto prematuro o cuyos resultados de EGB no se conocen en el momento del parto una prueba durante el parto puede proporcionar resultados a tiempo para administrar antibidticos antes de completar el parto si es necesario La prueba Xpert GBS puede realizarse 24 horas al dia 7 d as a la semana y es f cil de llevar a cabo Las posibles ventajas con respecto a las pruebas durante el parto son la disminuci n del uso de antibi ticos innecesarios en el caso de mujeres en las que no est indicada la profilaxis por otro motivo y un tratamiento adecuado en el caso de las mujeres colonizadas con EGB lo que implica a su vez una reducci n del riesgo de septicemia y meningitis neonatal Para garantizar la eficacia de una prueba de EGB durante el parto en el caso de las mujeres embarazadas que acuden al parto sin unos resultados de EGB definitivos es necesario realizar una r pida recogida de muestras y que la prueba tenga la capacidad de proporcionar los resultados con la suficiente rapide
28. lors du Test Xpert GBS sur le GeneXpert Dx system l autre a t utilis lors du 294 test TAAN Le 2 test TAAN cible une s quence dans le g ne cfb et a t approuv au pr alable par la FDA Food and Drug Administration autorit am ricaine de surveillance des aliments et des m dicaments Les r sultats de ce test n ont pas t utilis s dans les estimations des performances Apr s leur utilisation dans ces tests chacun de ces cotons tiges a galement t plac dans un bouillon de culture LIM incub mis en subculture dans de la g lose au sang et observ la recherche de SGB Chaque institution a utilis la technique de culture recommand e par les directives des CDC de 2002 culture microbiologique en milieu liquide s lectif bouillon LIM constitu de bouillon de Todd Hewitt compl t par 15 ug ml d acide nalidixique et 10 pg ml de colistine suivie d une incubation de 18 24 h et une subculture dans de la g lose au sang Une identification sp cifique des colonies de SGB a t r alis e a l aide de tests d agglutination sur lame R sultats g n raux Les caract ristiques des performances du Test Xpert GBS ont t d termin es partir de l valuation du test de laboratoire obtenu aupr s d chantillons de 794 patientes observ es 373 en phase pr natale et 421 en phase p rinatale Trois femmes n ont pas eu de r sultat par culture et ont t exclues des analyses aucune n tait positive au Test Xpe
29. nei primi 30 minuti del test Quando si esegue il test intrapartum la ripetizione del test pu essere impossibile e dipender dalle pratiche e dalle politiche di ciascun istituto La coordinazione tra i medici e il laboratorio in cui viene eseguito il test importante per non ritardare la somministrazione degli antibiotici mentre si in attesa dei risultati La Figura 2 mostra la finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx View Results Visualizza risultati Nella finestra visualizzato Error Status Stato di errore Fare clic sulla scheda Errors Errori per visualizzare le descrizioni degli errori Test and Analyte Result Detail E Assay Name XpertGBSO3 E Version 3 Test Result BREE Analyte Result For In Vitro Diagnostics Use Only Legend e SPC Primary y GBS Primary 1 __ IC Primary 400 300 200 Fluorescence 100 Cycles Figure 2 Finestra GeneXpert Dx System Sistema GeneXpert Dx View Results Visualizza risultati 300 8907 Rev D September 2011 77 Italiano Motivi per ripetere l analisi o intraprendere procedure alternative Ripetere l analisi o intraprendere procedure alternative se si verifica uno dei seguenti risultati Error Errore l analisi stata interrotta perch si verificato un guasto di un componente del sistema st
30. o foi aprovada GBS NO RESULT EGB SEM RESULTADO SPC NO RESULT SPC SEM RESULTADO IC NO RESULT IC SEM RESULTADO Probe Check FAIL Verifica o da sonda N O APROVADA Se a verifica o da sonda for aprovada o erro causado por uma falha de um componente do sistema NO RESULT SEM RESULTADO N o pode ser determinada a presen a ou aus ncia de EGB O operador interrompeu o teste ocorreu uma falha de energia durante o teste ou foram detectados problemas no cartucho GBS NO RESULT EGB SEM RESULTADO SPC NO RESULT SPC SEM RESULTADO IC NO RESULT IC SEM RESULTADO Probe Check NA Verifica o da sonda n o aplic vel Note Se obteve INVALID ERROR ou NO RESULT o teste poder ser repetido ou poder o ser iniciados m todos alternativos No caso de um resultado ERROR cancelamento por press o m xima ou insucesso da verifica o da sonda repita imediatamente o teste ensaie a segunda zaragatoa ou inicie m todos alternativos Os resultados ERROR podem ocorrer nos primeiros 30 minutos do teste Quando se fazem testes intraparto a repeti o do teste poder n o ser exequivel e vai depender das pr ticas e pol ticas de cada institui o A coordena o entre os m dicos e o laborat rio importante para n o atrasar a administra o dos antibi ticos enquanto se aguarda pelos resultados A Figure 2 mostra a janela View Results Ver resultados do s
31. ore e 2 44 ore per i 30 soggetti che hanno dato risultati validi al secondo tentativo Table 5 Tempo occorrente dall inizio al risultato del test per l individuazione di GBS per 390 soggetti intrapartum Complessivi Risultato al primo tentativo Risultato al secondo tentativo Media ore 1 84 1 76 2 74 1 48 1 47 2 44 Mediana ore Specificita analitica E stato testato il DNA genomico purificato ottenuto commercialmente da 101 ceppi di cui 28 streptococchi 73 altre specie inclusi i ceppi filogeneticamente correlati a S agalactiae altra microflora batteri e lieviti comunemente rilevata nella flora vaginale e rettale e DNA umano Sono state eseguite tre repliche a 1 5 ng 25 pl di reazione 2 x 105 copie equivalenti di genoma per reazione Nessuno degli isolati di 28 streptococchi non GBS risultato positivo Dei 73 ceppi restanti quattro Enterococcus gallinarium Staphylococcus simulans Micrococcus luteus e Propionibacterium acnes sono risultati debolmente positivi in una delle sei repliche oo 3 300 8907 Rev D September 2011 Sensibilita analitica Sensibilita analitica La sensibilit analitica o limite di rilevamento LOD stata determinata con 11 ceppi di S agalactiae Sono stati identificati 9 sierotipi di GBS la Ib II III IV V VI VII and VIII La maggioranza dei casi di sepsi neonatale da GBS stata attribuita ai sierotipi da 1 a 4 la Ib II o II Il sierotipo V di GBS risultato essere u
32. resultados Elensayo Xpert GBS no proporciona resultados de sensibilidad a los antibi ticos Se precisan cepas cl nicas para realizar las pruebas de sensibilidad recomendadas en el caso de pacientes con alergia a la penicilina Resumen y explicaci n La infecci n bacteriana por EGB est relacionada con enfermedades graves de los reci n nacidos de mujeres colonizadas con el microorganismo La transmisi n de EGB se produce de las mujeres colonizadas con EGB a los reci n nacidos antes o durante el parto En Estados Unidos la infecci n por EGB es la principal causa de muerte entre los reci n nacidos que desarrollan septicemia neumonia o meningitis b2 En la actualidad las normas asistenciales para la prevenci n de las enfermedades por EGB consisten en la detecci n sistem tica de mujeres embarazadas entre las semanas 35 y 37 de gestaci n para determinar el estado de colonizaci n por EGB2 La mayoria de las pruebas para la detecci n de EGB antes del parto se realizan mediante un cultivo y suelen ser necesarios de dos a tres dias para la obtenci n de los resultados Este tiempo puede ser adecuado para obtener resultados del cultivo de EGB antes del parto en la mayoria de las mujeres no obstante es posible que algunas mujeres no cuenten con los resultados de EGB al comienzo del parto El Xpert GBS desarrollado por Cepheid para la detecci n de EGB directamente a partir de muestras vaginales y rectales tarda un m ximo de 50 minutos desde
33. s apr s la rupture de la membrane ROM 3Sous ensemble des femmes en phase p rinatale dont les chantillons ont t collect s avant la rupture de la membrane ROM Le tableau suivant pr sente une comparaison directe de 2 tests de PCR le Test Xpert GBS et le 2nd test TAAN Tableau 3 Comparaison directe des deux tests de PCR Resultats de culture positifs R sultats de culture n gatifs R sultats de culture non disponibles 24 test TAAN 2 test TAAN 24 test TAAN 2 test TAAN ad test TAAN 2 test TAAN Total du Test positif n gatif Non r solu positif n gatif Non r solu positif n gatif Non r solu Xpert GBS 27 2 10 9 0 0 0 0 197 Positif au GBS Xpert 199 PERS 17 0 11 549 1 0 3 0 587 N gatif au GBS Xpert Non valide Erreur 0 o o 1 3 0 o 9 o 10 Pas de r sultat aana 165 44 2 22 567 1 0 3 0 794 Total du 2 dtest TAAN 28 300 8907 Rev D September 2011 Analyse du temps d ex cution Le tableau 4 pr sente le nombre de patients test s dans chacun des sites des six laboratoires cliniques participant l valuation et les performances estim es du Test Xpert GBS compar es aux r sultats de la culture Tableau 4 Comparaison site par site Test Xpert GBS sans r sultat Sensibilit Sp cificit Site des Patientes Patientes Nombre R sultats tests en phase en phase total de de culture Apr s Inf rieure Sup rieure Inf rieure Sup rieure cliniques pr natale p rinatale patientes
34. seconde tentative Tableau 5 Temps d ex cution partir du lancement initial du test jusqu au signalement des r sultats de SGB des 390 patientes en phase p rinatale R sultats lors R sultats lors Total de la premi re tentative de la seconde tentative Moyen heures 184 178 274 1 48 1 47 2 44 Interm diaire heures Sp cificit analytique L ADN obtenu dans le commerce g nomique et purifi partir de 101 souches repr sentant 28 streptocoques 73 autres esp ces comprenant des souches phylog n tiquement proches du S agalactiae d autres microflores bact ries et levures g n ralement pr sentes dans la flore vaginale et anale et de l ADN humain ont t test s Des r plicats des trois ont t test s avec la r action 1 5 ng 25 pl env 2 x 10 copies de g nome quivalentes par r action Aucun des 28 isolats streptococciques non SGB n a t test positif Parmi les 73 souches restantes quatre d entre elles Enterococcus gallinarum Staphylococcus simulans Micrococcus luteus et Propionibacterium acnes ont t faiblement positives dans l un des six r plicats 300 8907 Rev D September 2011 29 Frangais Sensibilite analytique La sensibilit analytique ou limite de detection LDD a t d termin e l aide de 11 souches de S agalactiae Neuf s rotypes de SGB distincts ont t identifi s Ia Ib II III IV V VI VII et VIII La plupart des cas de septic mies n onatales provo
35. testes os resultados positivos aumentaram para 178 201 ou 88 6 Das mulheres 590 apresentaram culturas negativas e 520 eram inicialmente negativas com o teste Xpert GBS 88 1 assim como 561 ap s repeti o do teste 95 1 300 8907 Rev D September 2011 95 Portugu s A Table 1 mostra os testes Xpert GBS com base nos resultados positivos e negativos das culturas de EGB para 791 participantes 3 participantes tinham culturas com crescimento excessivo ou que n o puderam de outra forma serem interpretadas A sensibilidade especificidade e estimativas do valor negativo e positivo apresentadas s o baseadas nos resultados ap s a repeti o do teste Ap s repeti o do teste 10 casos continuaram n o conclusivos n 781 Table 1 Resultados do ensaio Xpert GBS e desempenho estimado por categoria de paciente Pacientes Pacientes com com 7 Sensibilidade ap s Especificidade ap s VPP ap s VPN ap s Categoria eultura cultura arepetic o do teste a repeti o do teste a repeti o do teste a repeti o do teste de paciente Resultados N Total positiva negativa 95 de confianga 95 de confianga 95 de confianga 95 de confianga Todos as Xpert GBS Pos 197 186 178 168 19 18 pacientes 88 6 96 7 90 4 96 1 Xpert GBS Neg 584 540 23 20 561 520 83 3 a 92 6 94 9 A 98 0 85 4 A 94 1 94 2 A 97 5 Sem resultado 10 65 0 13 10
36. tests de pr disposition comme recommand chez les femmes allergiques la p nicilline 5 Soulevez le couvillon pour centrer la marque entaille sur l encoche 6 Brisez le couvillon en tordant la tige vers la droite 7 Fermez le couvercle de la cartouche S chantillon Figure 1 Cartouche GBS Xpert vue du dessus 20 300 8907 Rev D September 2011 Proc dure D marrage du test Cette section r pertorie les tapes de base de la r alisation du test Pour obtenir des instructions d taill es consultez le Manuel dutilisation du GeneXpert Dx system 1 2 10 11 Mettre sous tension l instrument GeneXpert Dx puis l ordinateur le logiciel GeneXpert d marrera automatiquement Ouvrez une session du logiciel du GeneXpert Dx system en utilisant votre nom d utilisateur et votre mot de passe Dans la fen tre du GeneXpert Dx system cliquez sur Create Test Cr er le test La boite de dialogue Lire le code barres de la cartouche s affiche Scannez le code barres sur la cartouche GBS Xpert La fen tre Cr er le test apparait En utilisant les informations du code barres le logiciel remplit automatiquement les cases des champs suivants Selectionner le test Num ro d identification du lot de r actifs Cartouche SN et Date limite d utilisation Dans la case Sample ID Num ro d identification de l chantillon scannez ou saisissez le num ro d identification de l chantillon Assurez vous de saisir le n
37. utilizzo di Xpert GBS Assay da altre fonti cliniche e le caratteristiche sulle prestazioni di questo test non sono note per altri tipi di campioni Risultati errati dell analisi potrebbero verificarsi in seguito a errori di raccolta del campione manipolazione o conservazione errata errori tecnici scambio di campioni o presenza nel campione di un numero di organismi inferiore alla soglia di sensibilit analitica del test Per evitare risultati errati necessario attenersi scrupolosamente alle istruzioni descritte in questo foglio illustrativo e al documento contenente le istruzioni relative al protocollo di raccolta dei campioni vaginali rettali Il prelievo del tampone sia dal terzo inferiore della vagina sia da retto aumenta significativamente la resa rispetto all esecuzione del tampone solo a livello della cervice o della vagina senza anche il prelievo dal retto Il rilevamento dello streptococco di gruppo B dipende dal numero di organismi presenti nel campione pertanto l affidabilit dei risultati dipende dalla raccolta dalla manipolazione e dalla conservazione appropriate del campione Si consiglia di eseguire l analisi tra la 35a e la 37a settimana di gestazione per migliorare la sensibilit e la specificit di identificazione di donne che rimangono colonizzate al momento del parto Il training del personale che utilizza il sistema GeneXpert Dx importante per garantire risultati accurati e tempestivi La ripetizione del test Xpert GBS
38. 0 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 1 3 x 10 CFU 19 29 tampone Concordanza 120 120 120 120 120 120 360 360 100 totale concordanza 100 100 100 100 100 Hntervallo atteso dei valori di Ct tutti i valori erano compresi negli intervalli attesi 300 8907 Rev D September 2011 Riferimenti bibliografici Riferimenti bibliografici 1 Schrag et al A population based comparison of strategies to prevent early onset group B streptococcal disease in neonates 8 pop p g P y group p NEJM 2002 247 4 233 239 2 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease MMWR 2002 51 No RR 11 1 26 3 Schuchat A Epidemiology of Group B Streptococcal Disease in the United States Shifting Paradigms Clin Micro Rev 1998 11 3 497 513 4 Davis et al Multicenter Study of a Rapid Molecular Based Assay for the Diagnosis of Group B Streptococcus Colonization in Pregnant Women C Infectious Disease 2004 30 1129 35 5 Puopolo et al Early Onset Group B Streptococcal Disease in the Era of Maternal Screening Pediatrics 2005 115 1240 1246 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 7 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory worker
39. 120 120 120 120 360 360 100 Agreement 100 100 100 100 100 Expected range of Ct values all values were within expected ranges 300 8907 Rev D September 2011 English References i Schrag et al A population based comparison of strategies to prevent early onset group B streptococcal disease in neonates NEJM 2002 247 4 233 239 2 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease MMWR 2002 51 No RR 11 1 26 3 Schuchat A Epidemiology of Group B Streptococcal Disease in the United States Shifting Paradigms Clin Micro Rev 1998 11 3 497 513 4 Davis et al Multicenter Study ofa Rapid Molecular Based Assay for the Diagnosis of Group B Streptococcus Colonization in Pregnant Women C Infectious Disease 2004 30 1129 35 5 Puopolo et al Early Onset Group B Streptococcal Disease in the Era of Maternal Screening Pediatrics 2005 115 1240 1246 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 7 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition i Yancey MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening
40. 2 2 99 9 98 8 93 5 100 0 Total 373 418 791 201 25 4 65 10 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 Nota El centro 6 no pudo obtener 3 resultados de cultivo BAP dentro del parto An lisis del tiempo hasta obtenci n de resultados A continuaci n se describe el tiempo hasta la obtenci n de resultados para las 390 pacientes dentro del parto incluidas en el ensayo cl nico El tiempo medio hasta la obtenci n de resultados desde el momento de inicio del Xpert GBS hasta la comunicaci n de resultados fue de 1 84 horas total de 390 pacientes El tiempo medio hasta la obtenci n de resultados para las 360 pacientes que obtuvieron resultados v lidos al primer intento fue de 1 76 horas El tiempo medio hasta la obtenci n de resultados para las 30 pacientes que obtuvieron resultados v lidos al segundo intento fue de 2 74 horas La mediana del tiempo hasta la obtenci n de resultados para las 360 pacientes que obtuvieron resultados v lidos al primer intento fue de 1 47 horas y 2 44 horas para las 30 pacientes que obtuvieron resultados v lidos al segundo intento Table 5 Tiempo hasta la obtenci n de resultados desde el momento de inicio del ensayo hasta la comunicaci n de resultados de EGB para 390 pacientes dentro del parto Resultados al primer Resultados al segundo General intento intento Media horas 1 84 1 76 2 74 1 48 1 47 2 44 Mediana horas Especificidad anal tica Se analiz el ADN gen mico purificado ob
41. 29 Gesamtiibereinstimmu 120 120 120 120 120 120 360 360 100 ng Ubereinstimmung in 100 100 100 100 100 TErwarteter Bereich an Ct Werten alle Werte lagen innerhalb der erwarteten Bereiche 300 8907 Rev D September 2011 49 Deutsch Quellenangaben i Schrag et al A population based comparison of strategies to prevent early onset group B streptococcal disease in neonates NEJM 2002 247 4 233 239 2 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease MMWR 2002 51 No RR 11 1 26 3 Schuchat A Epidemiology of Group B Streptococcal Disease in the United States Shifting Paradigms Clin Micro Rev 1998 11 3 497 513 4 Davis et al Multicenter Study of a Rapid Molecular Based Assay for the Diagnosis of Group B Streptococcus Colonization in Pregnant Women C Infectious Disease 2004 30 1129 35 5 Puopolo et al Early Onset Group B Streptococcal Disease in the Era of Maternal Screening Pediatrics 2005 115 1240 1246 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY und McKinney RW eds 1993 HHS Publikationsnummer CDC 93 8395 7 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 siehe letzte Ausgabe i Yance
42. 3 79 1 98 4 2 113 5 118 31 26 3 12 2 90 3 74 2 98 0 97 6 91 8 99 7 3 94 0 94 17 18 1 9 1 76 5 50 1 93 2 100 0 95 3 100 0 4 64 175 239 75 31 4 13 2 85 3 75 3 92 4 96 3 92 1 98 6 5 22 152 174 38 21 8 16 1 97 4 86 2 99 9 94 8 89 6 97 9 6 80 35 115 29 25 2 11 3 96 6 82 2 99 9 98 8 93 5 100 0 373 418 791 201 25 4 65 10 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 Insgesamt Hinweis An Standort 6 fehlten 3 BAP Intrapartum Ergebnisse aus Kulturverfahren Analyse der Durchlaufzeit Im Folgenden sind die Durchlaufzeiten der 390 Intrapartum Patientinnen die an der klinischen Studie teilgenommen haben beschrieben Die mittlere Durchlaufzeit ab dem urspr nglichen Start des Xpert GBS Tests bis zum Ergebnis betrug 1 84 Stunden alle 390 Patientinnen Die mittlere Durchlaufzeit bei den 360 Patientinnen bei denen beim ersten Versuch g ltige Ergebnisse erzielt wurden betrug 1 76 Stunden Die mittlere Durchlaufzeit bei den 30 Patientinnen bei denen beim zweiten Versuch g ltige Ergebnisse erzielt wurden betrug 2 74 Stunden Die mediane Durchlaufzeit lag bei den 360 Proben deren Ergebnisse beim ersten Versuch g ltig waren bei 1 47 Stunden und bei 2 44 Stunden bei den 30 Patientinnen deren Ergebnisse beim zweiten Versuch g ltig waren Table 5 Durchlaufzeit vom urspr nglichen Testbeginn bis zum GBS Testergebnis bei 390 Intrapartum Patientinnen Ergebnis nach erstem Insgesamt Versu
43. 3 5 118 31 26 3 12 2 90 3 74 2 98 0 97 6 91 8 99 7 3 94 0 94 17 18 1 9 al 76 5 50 1 93 2 100 0 95 3 100 0 4 64 175 239 75 31 4 13 2 85 3 75 3 92 4 96 3 92 1 98 6 5 22 152 174 38 21 8 16 1 97 4 86 2 99 9 94 8 89 6 97 9 6 80 35 115 29 25 2 11 3 96 6 82 2 99 9 98 8 93 5 100 0 Total 373 418 791 201 25 4 65 10 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 Note O local 6 tinha 3 resultados da cultura intraparto em gelose de sangue em falta An lise do prazo de execu o O prazo de execu o para as 390 participantes intraparto inclu das no ensaio cl nico descrito a seguir O prazo de execu o m dio desde o come o do ensaio Xpert GBS inicial at entrega dos resultados foi de 1 84 horas todas as 390 participantes O prazo de execu o m dio para as 360 participantes com resultados v lidos na primeira tentativa foi de 1 76 horas O prazo de execu o m dio para as 30 participantes com resultados v lidos na segunda tentativa foi de 2 74 horas A mediana do prazo de execu o para as 360 participantes com resultados v lidos na primeira tentativa foi de 1 47 horas e de 2 44 horas para as 30 participantes com resultados v lidos na segunda tentativa Table 5 Prazo de execu o desde o come o do teste inicial at entrega dos resultados de EGB para as 390 participantes intraparto Global Resultado na primeira tentativa Resultado na segunda tentativa M dia horas 1 84 1 76 2 74 Mediana
44. 373 102 271 Intrapartum Xpert GBS 105 98 91 85 14 13 Pos 91 9 95 6 86 7 97 4 310 287 8 7 302 280 ae 84 7 92 7 78 6 95 0 eg 96 5 97 6 92 5 98 9 Kein 3 33 0 7 3 26 Ergebnis Insgesamt 418 99 319 Blasensprung Xpert GBS 27 24 21 19 6 5 5 Pos 91 3 94 3 77 8 98 0 102 92 2 2 100 90 Ne 72 0 88 1 57 7 93 1 eg 98 9 97 9 91 4 99 8 Kein 0 13 0 2 0 11 Ergebnis Insgesamt 129 23 106 Kein Xpert GBS 78 74 70 66 8 8 Blasensprung Pos 92 1 96 2 89 7 97 1 6 208 195 6 5 202 190 o 83 6 92 6 80 8 93 8 eg 97 1 98 3 95 5 98 9 Kein 3 20 0 5 3 15 Ergebnis Insgesamt 289 76 213 Die genannten Xpert GBS Ergebnisse sind allesamt Ergebnisse nach einer Testwiederholung Die urspr nglichen Ergebnisse stehen in Klammern 300 8907 Rev D September 2011 45 Deutsch Das Ergebnis No result Kein Ergebnis bei einem Xpert GBS Test kann auf einen ung ltigen Test einen Systemfehler oder auf das Ergebnis No Result Kein Ergebnis zur ckzuf hren sein wenn nicht ermittelt werden konnte ob GBS DNA vorhanden war oder nicht 3 Drei Patientinnen ohne Ergebnis im Kulturverfahren vor der Entbindung wurden aus den Analysen ausgeschlossen 4 Die Gesamtpr valenz der GBS Kolonisierung liegt gem Kulturverfahren bei 25 3 5 Die Untergruppe der Frauen w hrend der Entbindung bei denen nach dem Blasensprung Proben entnomme
45. 94 pacientes seleccionables con dos conjuntos de hisopos con marca dispositivos de recogida Cepheid Se emple uno de los hisopos del primer conjunto para preparar el cultivo El segundo conjunto de hisopos con marca se dividi un hisopo se utiliz en el ensayo Xpert GBS del sistema GeneXpert Dx y el otro se utiliz en el segundo ensayo NAAT El segundo ensayo NAAT detecta una secuencia objetivo en el gen cfb y ha recibido la aprobaci n previa por parte de la FDA Los resultados de esta prueba no se emplearon en estimaciones del rendimiento Tras su uso en estas pruebas cada uno de estos hisopos se coloc tambi n en un caldo de cultivo LIM se prepar un subcultivo en una placa de agar sangre BAP y se observ la presencia de EGB Cada centro emple la t cnica de cultivo recomendada en las directrices del CDC de 20022 un cultivo microbiol gico en un caldo de cultivo selectivo caldo LIM consistente en un caldo de cultivo Todd Hewitt complementado con 15 pg ml de cido nalid xico y 10 ug ml de colistina seguido de una incubaci n durante de 18 a 24 horas y un subcultivo en BAP Se procedi a una identificaci n espec fica de colonias que apuntara la presencia de EGB mediante pruebas de aglutinaci n de la extensi n Resultados generales Las caracter sticas de rendimiento del ensayo Xpert GBS se determinaron a partir de la evaluaci n de las pruebas de laboratorio realizadas en muestras de 794 pacientes de maternidad 373 antes
46. Assay quando il risultato INVALID ERROR e NO RESULT dipende dalle pratiche e dalle politiche di ciascun istituto Devono essere disponibili delle procedure alternative ad es consigliata la coltura con brodo di arricchimento selettivo per 18 24 ore Per eseguire i test di sensibilit sono necessari isolati colturali come consigliato per le donne allergiche alla penicillina Per le colture i campioni dei tamponi rimasti devono essere posti in sistemi di trasporto adeguati e allestita la coltura per 4 giorni I metodi per la preparazione di colture dal reagente 2 Xpert GBS non sono stati valutati I laboratori devono validare le proprie procedure di coltivazione o utilizzare il secondo tampone raccolto per eseguire l identificazione colturale e il test di sensibilit Un risultato positivo dell analisi non indica necessariamente la presenza di organismi vitali E tuttavia presuntivo per la presenza di streptococco di gruppo B Il test intrapartum con il test Xpert GBS Assay deve essere utilizzato in aggiunta ad altri metodi disponibili e non come sostituto del test antepartum eseguito alla 35a 37a settimana di gestazione Il test non destinato a differenziare i portatori di streptococco di gruppo B da quelli con infezione streptococcica I risultati del test potrebbero anche essere condizionati da terapia antibiotica concomitante Perci non possibile valutare il successo 0 il fallimento terapeutico tramite questo test poich i
47. Bei der SPC handelt es sich um B g obigii in Form eines Trockenk gelchens das Bestandteil einer jeden Kartusche ist Bei der SPC werden der Lyse und der Elutionsvorgang berwacht Die SPC sollte erfolgreich verlaufen einen g ltigen Zyklusgrenzwert Ct in einer Negativprobe generieren und darf in einer hochgradig positiven Probe nicht amplifizieren Die SPC gilt als bestanden wenn sie die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Interne Kontrolle IC berpr ft die Funktionst chtigkeit der PCR Reagenzien und ob Inhibitoren vorhanden sind durch die die PCR Amplifikation verhindert w rde Die IC sollte erfolgreich verlaufen einen g ltigen Ct in einer Negativprobe generieren und darf in einer hochgradig positiven Probe nicht amplifizieren Die IC gilt als bestanden wenn sie die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Sondenpriifung Vor Beginn der PCR Reaktion misst das GeneXpert Dx System das Fluoreszenzsignal aus den Sonden um die Dehydrierung der Reagenzk gelchen die Bef llung des Reaktionsgef es die Sondenintegrit t und die Farbstabilit t zu berwachen Die Sondenpr fung gilt als bestanden wenn sie die vorbestimmten Akzeptanzkriterien erf llt Externe Kontrolle KWIK STIK MicroBioLogics Katalog Nr 8164 kann f r Schulungen Leistungstests und externe Qualit tskontrollen des GeneXpert Dx System verwendet werden Externe Kontrollen k nnen je nach Anwendungsgebiet nach Ma gabe der anerkannte
48. Consulte o pessoal respons vel pelos res duos ambientais da institui o para obter informa es sobre a elimina o adequada dos cartuchos usados e dos reagentes n o utilizados Este material pode apresentar caracter sticas de res duos perigosos de acordo com a lei federal Resource Conservation and Recovery Act RCRA Lei da Recupera o e Conserva o dos Recursos da Associa o de Protec o Ambiental Environmental Protection Agency dos EUA e deve cumprir os requisitos espec ficos sobre elimina o Consulte os regulamentos locais e estatais podem diferir dos regulamentos de elimina o federais As institui es fora dos EUA devem consultar os requisitos sobre a elimina o ambiental de res duos perigosos do pa s Conserve o kit Xpert GBS a 2 28 C O reagente 2 contem Hidroxido de Sodio pH gt 12 5 R34 EU Risk que corrosivo para os olhos e a pele e requeira uma prote o dos olhos e da pele Colheita e transporte das amostras JAN Para obter uma amostra adequada siga cuidadosamente as instru es desta sec o Usando um dispositivo de colheita Cepheid colha as amostras de acordo com as recomenda es do CDC Deve ser aplicado o seguinte protocolo 1 2 Limpe o excesso de secre es ou supura o Retire as duas zaragatoas marcadas do contentor de transporte Com cuidado insira as duas zaragatoas marcadas na vagina da paciente Recolha secre es da mucosa do ter o inferior da vagina R
49. Controllo sonda AMMESSO L SPC e o l IC non riuscito ERROR ERRORE Non pu essere determinata l assenza o la presenza di GBS Si verificato un guasto di un componente del sistema stata raggiunta la pressione massima o il controllo della sonda non riuscito GBS NO RESULT NESSUN RISULTATO SPC NO RESULT NESSUN RISULTATO IC NO RESULT NESSUN RISULTATO Probe Check FAIL Controllo sonda RESPINTO Se il controllo della sonda stato superato si verificato un errore di un componente del sitema NO RESULT NESSUN RISULTATO Non pu essere determinata l assenza o la presenza di GBS L operatore ha interrotto l analisi si verificata un interruzione dell alimentazione durante l analisi oppure sono stati rilevati dei problemi nella cartuccia 76 300 8907 Rev D September 2011 Interpretazione dei risultati GBS NO RESULT NESSUN RISULTATO SPC NO RESULT NESSUN RISULTATO IC NO RESULT NESSUN RISULTATO Probe Check NA non applicabile Nota Se il risultato INVALID NON VALIDO ERROR ERRORE o NO RESULT NESSUN RISULTATO si deve ripetere il test o eseguire un metodo alternativo Nel caso di un risultato ERROR ERRORE interruzione pressione massima o controllo sonda non riuscito rieseguire immediatamente il test o analizzare il secondo tampone o intraprendere dei metodi alternativi I risultati ERROR ERRORE si possono verificare
50. GeneXpert Pi d By CEPHEID INNOVATION Xpert GBS GXGBS 100N 10 E Cepheid In Vitro Diagnostic Medical Device C 300 8907 Rev D September 2011 Copyright Cepheid Cepheid the Cepheid logo GeneXpert and Xpert are trademarks of Cepheid This product is licensed under US Patent Nos 5 582 989 and 5 851 767 and corresponding claims of any non US counterpart s thereof The purchase of this product includes a limited non transferable license under U S Patents Nos 6 787 338 6 503 720 and 6 303 305 and claims 9 10 11 56 76 80 and 107 of U S Patent No 6 174 670 and corresponding claims in patents and patent applications outside the United States owned by the University of Utah Research Foundation and licensed to Idaho Technology Inc to use only this amount of product and only in an instrument marketed distributed sold leased or otherwise transferred using a Cepheid trademark No right is conveyed expressly by implication or estoppel under any other patent or patent claims owned by the University of Utah Research Foundation or Idaho Technology Inc Without lim iting the foregoing no right title or license is herein granted with respect to the uses that are proprietary to Idaho Technology or the University of Utah Research Foundation of fluorescence double stranded nucleic acid binding dyes specifically including but not limited to SYBR Green I LCGreen I or LCGreen Plus This product is sold under licens
51. HEC IC FAIL CI CHEC Probe Check PASS Contr le de la sonde R USSITE Le CTE et ou le CI a chou ERROR ERREUR Impossible de d terminer la pr sence ou l absence de SGB chec d un composant du syst me la pression maximale a t atteinte ou le contr le de la sonde a chou GBS NO RESULT SGB PAS DE R SULTAT SPC NO RESULT CTE PAS DE R SULTAT IC NO RESULT CI PAS DE R SULTAT Probe Check FAIL Contr le de la sonde CHEC Si le contr le de la sonde a r ussi l erreur est provoqu e par l chec d un composant du syst me NO RESULT PAS DE R SULTAT Impossible de d terminer la pr sence ou l absence de SGB L op rateur a arr t le test une coupure de courant a eu lieu au cours du test ou des probl mes ont t d tect s dans la cartouche GBS NO RESULT SGB PAS DE R SULTAT SPC NO RESULT CTE PAS DE R SULTAT IC NO RESULT CI PAS DE R SULTAT Probe Check NA not applicable Contr le de la sonde SO sans objet Note Si vous avez obtenu INVALID NON VALIDE ERROR ERREUR ou NO RESULT PAS DE R SULTAT le test peut tre r p t ou d autres m thodes peuvent tre utilis es Dans l ventualit du r sultat ERROR ERREUR arr t de la pression maximale ou chec du contr le de la sonde proc dez imm diatement un nouveau test analysez le second couvillon ou recourez d autres m thodes
52. Le r sultat ERROR ERREUR peut se produire au cours des 30 premi res minutes du test Lors de la r alisation d un test p rinatal il peut tre impossible de proc der un nouveau test cela d pendra des pratiques et des strat gies de chaque installation La coordination entre les cliniciens et le laboratoire de test est importante pour ne pas retarder l administration d antibiotiques lorsque les r sultats sont en attente La Figure 2 montre la fen tre de GeneXpert Dx System View Results Afficher les r sultats Comme vous pouvez le constater l Etat de l erreur est affich dans la fen tre Cliquez sur l onglet Erreurs pour afficher la description des erreurs 300 8907 Rev D September 2011 23 Frangais Far in Vitro Diagnostics Use Only Figure 2 Fen tre Afficher les r sultats du GeneXpert Dx system 24 300 8907 Rev D September 2011 Raisons pour lesquelles le test doit tre recommenc ou pour recourir d autres proc dures Raisons pour lesquelles le test doit tre recommence ou pour recourir d autres proc dures R p tez le test ou recourez a d autres proc dures si l un des r sultats de test suivants se produit Error Erreur le test a t interrompu car un composant du syst me a chou la pression maximale a t atteinte ou le contr le de la sonde a chou Invalid Non valide le CTE et ou le CI a chou lorsque SGB est n gatif Un r sultat non valide peut galemen
53. Note As Fichas de Dados de Seguran a Material Safety Data Sheets MSDS para todos os reagentes fornecidos com este ensaio encontram se dispon veis mediante solicita o ao Apoio T cnico da Cepheid e est o dispon veis nos Web sites da Cepheid www cepheid com e www cepheidinternational com A albumina s rica bovina BSA deste produto foi produzida exclusivamente a partir de plasma bovino com origem nos EUA O fabrico da BSA tamb m decorreu nos EUA Nenhuma prote na de ruminante ou outra prote na animal foi administrada aos animais os animais foram aprovados em testes ante e post mortem Durante o processamento n o houve mistura do material com outros materiais de origem animal Conserva o e manuseamento 28 fe Conserve o kit Xpert GBSa2 28 C z Nao utilize reagentes ou cartuchos fora do prazo da validade 88 300 8907 Rev D September 2011 Materiais necess rios n o fornecidos Materiais necess rios n o fornecidos Sistema GeneXpert Dx a refer ncia varia com a configura o instrumento GeneXpert computador leitor de c digos de barras e Manual do utilizador Impressora consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx para obter as orienta es de compatibilidade Dispositivo de colheita Cepheid ref 900 0370 Pipeta de transfer ncia esterilizada descart vel apenas para a repeti o do teste Materiais dispon veis n o fornecidos KWIK STIK MicroBioLogics ref 8164 para a es
54. Probe Check PASS Comprobacion de sonda APROBADO El segundo hisopo correspondiente de la paciente en el tubo de recogida transporte puede ser utilizado para pruebas de sensibilidad antimicrobiana Si es necesario puede remitirse el cartucho usado al laboratorio de microbiolog a para que realice una prueba de sensibilidad de respaldo NEGATIVE NEGATIVO No se ha detectado el cido nucleico de EGB objetivo se puede suponer la ausencia de colonizaci n por EGB GBS NEG SPC PASS APROBADO IC PASS APROBADO Probe Check PASS Comprobacion de sonda APROBADO 58 300 8907 Rev D September 2011 Interpretaci n de los resultados INVALID NO V LIDO No se puede determinar la presencia o ausencia de EGB CI y CPM IC y SPC no cumplen los criterios de aceptaci n o se han formado burbujas de aire en el tubo de reacci n GBS INVALID NO V LIDO SPC FAIL NO APROBADO IC FAIL NO APROBADO Probe Check PASS Comprobacion de sonda APROBADO Error de CPM o CI ERROR No se puede determinar la presencia o ausencia de EGB Ha fallado un componente del sistema se ha alcanzado la presi n m xima o ha fallado la comprobaci n de sonda GBS NO RESULT SIN RESULTADO SPC NO RESULT SIN RESULTADO IC NO RESULT SIN RESULTADO Probe Check FAIL NO APROBADO Si la comprobaci n de sonda es correcta el error se debe a un fallo de un componente del sistema NO RESULT
55. R process Because the cartridges are self contained cross contamination concerns are minimized For a full description of the system see the GeneXpert Dx System Operator Manual The Xpert GBS Assay includes reagents for the simultaneous detection of the target GBS DNA a sample processing control SPC to monitor processing conditions and an internal control IC to monitor PCR conditions and the absence of reaction inhibition The probe check feature verifies reagent rehydration PCR tube filling in the cartridge probe integrity and dye stability The GBS primers and probe detect a target within a 3 DNA region adjacent to the cfb gene of agalactiae After collecting and transporting a swab sample to the GeneXpert testing area the swab is inserted into the Xpert GBS cartridge The GeneXpert Dx System performs sample preparation by eluting the specimen material from the swab mixing the sample reagent with 300 8907 Rev D September 2011 1 English the SPC Bacillus globigii in the form of a bead within the cartridge and treatment reagent capturing cellular material on a filter lysing the cells and eluting the DNA The DNA solution is then mixed with dry PCR reagents and transferred into the integrated reaction tube for real time PCR and detection The results are interpolated by the GeneXpert Dx System from measured fluorescent signals and embedded calculation algorithms Results may be viewed and may be printed The test process takes a
56. S nen Sen 91 9 95 6 86 7 97 4 NES 84 7 96 5 92 7 97 6 78 6 92 5 95 0 98 9 Sin 3 33 0 7 3 26 resultados Total 418 99 319 RDM3 Xpert GBS Pos 27 24 21 19 6 5 Xpert GBS 102103 20 100 00 91 3 94 3 77 8 98 0 Neg 72 0 98 9 88 1 97 9 57 7 91 4 93 1 99 8 Sin 0 13 0 2 0 11 resultados Total 129 23 106 Sin RDM Xpert GBS Pos 78 74 70 66 8 8 Xpert GBS OE as 615 LON 92 1 96 2 89 7 97 1 Neg 83 6 97 1 92 6 98 3 80 8 95 5 93 8 98 9 Sin 3 20 0 5 3 15 resultados Total 289 76 213 Todos los resultados de Xpert GBS se muestran tras repetir la prueba Los resultados iniciales de la prueba entre par ntesis 2 Sin resultados de una prueba Xpert GBS puede deberse a una prueba no v lida a un error del sistema o a una ausencia de resultado cuando no se puede registrar la presencia o ausencia de ADN de EGB 3 Se excluyeron del an lisis tres mujeres durante el parto que no presentaron resultados mediante cultivo 4 La prevalencia global de la colonizaci n por EGB determinada por cultivo es del 25 3 5 El subgrupo de mujeres dentro del parto a las que se les recogi la muestra tras la rotura de la membrana RDM SE subgrupo de mujeres dentro del parto a las que se les recogi la muestra antes de la rotura de la membrana RDM No se esperan diferencias biol gicas entre las muestras dentro de parto y las recogidas antes del parto 7 Valor d
57. SIN RESULTADO No se puede determinar la presencia o ausencia de EGB El operador ha detenido la prueba se ha producido un fallo de alimentaci n durante la prueba o se han detectado problemas en el cartucho GBS NO RESULT SIN RESULTADO SPC NO RESULT SIN RESULTADO IC NO RESULT SIN RESULTADO Probe Check NA no aplicable Nota Si obtiene un mensaje INVALID NO V LIDO ERROR o NO RESULT SIN RESULTADO puede repetirse la prueba o comenzar m todos alternativos En caso de obtener un resultado ERROR anulaci n por presi n m xima o fallo en la comprobaci n de sonda repita la prueba de inmediato o analice el segundo hisopo o comience m todos alternativos Se pueden producir resultados de ERROR durante los primeros 30 minutos de la prueba Mientras se realizan pruebas durante el parto puede que no sea posible repetir la prueba dependiendo de las pr cticas y pol ticas de cada centro Es importante la coordinaci n entre los m dicos y el laboratorio de an lisis al objeto de que la administraci n de antibi ticos no se vea retrasada en espera de los resultados La figura 2 muestra la ventana View Results Ver resultados del Sistema GeneXpert Dx Como se puede observar en la ventana aparece el Error Status Estado de error Haga clic en la ficha Errors Errores para ver las descripciones de los errores 300 8907 Rev D September 2011 59 Espanol For In Vitro Diagnostics Use Only
58. September 2011 Espanol Bibliografia 1 Schrag et al A population based comparison of strategies to prevent early onset group B streptococcal disease in neonates NEJM 2002 247 4 233 239 2 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease MMWR 2002 51 No RR 11 1 26 3 Schuchat A Epidemiology of Group B Streptococcal Disease in the United States Shifting Paradigms Clin Micro Rev 1998 11 3 497 513 4 Davis et al Multicenter Study ofa Rapid Molecular Based Assay for the Diagnosis of Group B Streptococcus Colonization in Pregnant Women C Infectious Disease 2004 30 1129 35 5 Puopolo et al Early Onset Group B Streptococcal Disease in the Era of Maternal Screening Pediatrics 2005 115 1240 1246 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 7 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition Yancey MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 Paoletti Lawrence C Ph D Research Inte
59. Turnaround Time Analysis Table 4 shows the number of patients tested at each of the six clinical laboratory sites participating in the evaluation and the estimated performance for Xpert GBS testing compared to culture findings Table 4 Site to Site Comparison Xpert GBS with No Results Sensitivity Specificity ClinicalTest Antepartum Intrapartum Total Culture Site Patients Patients Patients Positive Prevalence Initially Repeating Estimate Lower 95 Upper 95 Estimate Lower 95 Upper 95 1 0 51 51 11 21 6 4 1 72 7 39 0 94 0 92 3 79 1 98 4 2 113 5 118 31 26 3 12 2 90 3 74 2 98 0 97 6 91 8 99 7 3 94 0 94 17 18 1 9 1 76 5 50 1 93 2 100 0 95 3 100 0 4 64 175 239 75 31 4 13 2 85 3 75 3 92 4 96 3 92 1 98 6 5 22 152 174 38 21 8 16 1 97 4 86 2 99 9 94 8 89 6 97 9 6 80 35 115 29 25 2 11 3 96 6 82 2 99 9 98 8 93 5 100 0 Total 373 418 791 201 25 4 65 10 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 Note Site 6 had 3 missing BAP intrapartum culture results Turnaround Time Analysis The turnaround time for the 390 intrapartum subjects enrolled in the clinical trial are described below The mean turnaround time from the time of Xpert GBS initial run start to result reporting was 1 84 hours all 390 subjects The mean turnaround time for the 360 subjects that gave valid results on first attempt was 1 76 hours The mean turnaround time for the 30 subjects that gave valid results on secon
60. a que se realice la prueba Las muestras almacenadas entre 2 y 8 C son estables durante un per odo m ximo de seis d as Procedimiento Preparaci n del cartucho Importante Inicie la prueba en un plazo de 15 minutos tras a adir la muestra al cartucho Nota S lo es necesario un hisopo El segundo hisopo es adicional y se puede utilizar para las pruebas de sensibilidad a los antibi ticos Se precisan cepas cl nicas para realizar las pruebas de sensibilidad recomendadas en el caso de pacientes con alergia a la penicilina No introduzca dos hisopos en ning n cartucho Para a adir la muestra al cartucho Xpert GBS 1 2 oom Saque el cartucho del envase Abra la tapa del cartucho Extraiga los hisopos con marca del recipiente Frote suavemente los dos hisopos entre si girandolos de modo que ambos se impregnen de la misma cantidad de muestra Introduzca uno de los hisopos en el compartimento S del cartucho Xpert GBS No introduzca ambos hisopos en el cartucho Devuelva el segundo hisopo al tubo de recogida transporte para la realizaci n posterior de pruebas de sensibilidad antimicrobiana por parte del laboratorio de microbiologia para los pacientes positivos para EGB Se precisan cepas clinicas para realizar las pruebas de sensibilidad recomendadas en el caso de pacientes con alergia a la penicilina Suba el hisopo de modo que la marca de muesca est centrada en la ranura Para romper el hisopo parta el eje hacia la d
61. a sonde r ussit s il r pond aux crit res d acceptation attribu s Contr les externes KWIK STIK MicroBioLogics catalogue n 8164 peut tre utilis pour la formation l essai d aptitude et le contr le qualit externe du GeneXpert Dx system Les contr les externes peuvent tre utilis s en accord avec les organisations d accr ditation locales nationales f d rales comme appropri Suivez la proc dure de contr le externe de MicroBioLogics d crite ci dessous 1 D chirez l tui au niveau de l entaille et retirez le KWIK STIK 2 Pincez le bas de l ampoule pour lib rer le liquide hydratant dans le c ne 3 Veillez tenir verticalement et tapoter pour faciliter l coulement du liquide travers la tige dans le fond de l unit contenant la pastille 4 Pour faciliter la dissolution de la pastille des cellules lyophilis es crasez la pastille et pincez doucement la chambre du fond 5 D tachez le KWIK STIK pour lib rer le couvillon et placez ce dernier dans la chambre S de la cartouche GBS Xpert 6 Le couvillon KWIK STIK est maintenant pr t pour le Test Xpert GBS Le contr le positif de niveau faible compte aux alentours de 620 bact ries souches couvillon env 36 Ct de SGB et le contr le n gatif 17 000 bact ries souches couvillon de Lactobacillus acidophilus 0 Ct ou gt 42 Ct Interpr tation des r sultats Les r sultats sont interpol s par le GeneXpert Dx system 4 partir de signaux fluor
62. able 1 shows Xpert GBS testing based on the positive and negative GBS culture findings for 791 subjects 3 subjects had cultures that were overgrown or could not be otherwise interpreted The sensitivity specificity and negative and positive value estimates shown are based on results after repeat testing After repeat testing 10 cases remained unresolved n 781 Table 1 Xpert GBS Results and Estimated Performance by Patient Category i Culture Cultur e Sensitivity after Specificity after PPV after repeat NPV 8 after repeat Patient 4 Positive Negative repeat testing repeat testing testing testing Category Results Total N Patients Patients 95 confidence 95 confidence 95 confidence 95 confidence All Patients Xpert GBS Pos 197 186 178 168 19 18 88 6 96 7 90 4 96 1 Xpert GBS Neg 584 540 23 20 561 520 83 3 92 6 94 9 98 0 85 4 94 1 94 2 97 5 No Result 10 65 0 13 10 52 Total 7913 2014 590 Antepartum Xpert GBS Pos 92 88 87 83 5 5 85 3 98 1 94 6 94 5 Xpert GBS Neg 274 253 15 13 259 240 76 9 91 5 95 6 99 4 87 8 98 2 94 1 96 9 No Result 7 32 0 6 7 26 Total 373 102 271 Intrapartum Xpert GBS Pos 105 98 91 85 14 13 91 9 95 6 86 7 97 4 Xpert GBS Neg 310 287 8 7 302 280 84 7 96 5 92 7 97 6 78 6 92 5 95 0 98 9 No Result 3 33 0 7 3 26 Total 418 99 319 ROM Xp
63. adri colonizzate da GBS e inoltre non possibile eseguire il test della sensibilit per le madri allergiche alla penicillina Per le donne che non hanno ricevuto alcuna cura prenatale o a rischio di parto pretermine o i cui risultati del test GBS non sono noti al momento del parto il test intrapartum pu fornire risultati in un tempo tale da consentire la somministrazione antibiotica prima del parto se necessario Il test Xpert GBS pu essere eseguito 24 ore su 24 7 giorni su 7 senza disagio L impatto potenziale del test intrapartum consiste nella riduzione della somministrazione di antibiotici non necessari a donne che non richiedono la profilassi e nella somministrazione di un trattamento adeguato alle donne colonizzate da GBS con la conseguente diminuzione del rischio di sepsi o di meningite neonatale L efficacia del test intrapartum per l identificazione di GBS nelle gestanti che iniziano il travaglio e il parto senza che sia noto lo stato della colonizzazione da GBS richiede il rapido prelievo del campione e la capacit di fornire i risultati abbastanza rapidamente per poter iniziare prima del parto la profilassi antibiotica della durata consigliata Principio della procedura Il sistema GeneXpert Dx consente di automatizzare e integrare la lisi del campione la purificazione e l amplificazione degli acidi nucleici e il rilevamento della sequenza bersaglio in campioni complessi utilizzando la PCR in Real Time RT PCR e la PCR Real Time
64. al with other animal materials JE Storage and Handling AC Store the Xpert GBS kit at 2 28 C o Do not use reagents or cartridges that have passed the expiration date Materials Required but Not Provided GeneXpert Dx System catalog number varies by configuration GeneXpert instrument computer barcode wand reader and Operator Manual Printer See GeneXpert Dx System Operator Manual for compatibility guidelines Cepheid Collection Device part number 900 0370 Disposable sterile transfer pipette for retest only 300 8907 Rev D September 2011 Materials Available but Not Provided Materials Available but Not Provided KWIK STIK MicroBioLogics cat no 8164 one each of Streptococcus species Group B low level positive control moderate level positive control high level positive control and L acidophilus as a negative control Warnings and Precautions UY Ae Treat all biological specimens including used cartridges as if capable of transmitting infectious agents Because it is often impossible to know which might be infectious all biological specimens should be treated with universal precautions Guidelines for specimen handling are available from the U S Center for Disease Control and Prevention and the Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards Follow your institution s safety procedures for working with chemicals and
65. ales Los centros que se encuentran fuera de los EE UU deben comprobar los requisitos para la eliminaci n de residuos de su pais Conserve el kit Xpert GBS entre 2 y 28 C el reactivo 2 contiene hidr xido de sodio pH gt 12 5 R34 EY Risk que es corrosivo para los ojos y la piel y requiere protecci n de los ojos y de la piel a Recogida y transporte de muestras AN N Para obtener una muestra adecuada siga atentamente las instrucciones de esta secci n Con el dispositivo de recogida Cepheid recoja las muestras de acuerdo con las recomendaciones del CDC Debe emplearse el siguiente procedimiento 1 2 Retire los restos de secreci n o flujo Extraiga ambos hisopos con marca del recipiente de transporte Introduzca con cuidado ambos hisopos con marca en la vagina de la paciente Recoja una muestra de las secreciones de la mucosa de la tercera parte inferior de la vagina Gire los hisopos tres veces para garantizar la recogida uniforme de la muestra en ambos hisopos 300 8907 Rev D September 2011 55 Espa ol 4 Introduzca con cuidado estos mismos hisopos con marca aproximadamente 2 5 cm dentro del esf nter y g relos suavemente para recoger la muestra de la cripta anal 5 Introduzca ambos hisopos con marca en el recipiente de transporte 6 Silas muestras se van a procesar en 24 horas cons rvelas a temperatura ambiente Si las muestras se van a analizar despu s de 24 horas debe conservarlas refrigeradas hast
66. alha de energia durante o teste ou foram detectados problemas no cartucho Se existir l quido na c mara S do cartucho use uma pipeta de transfer ncia para transferir todo o l quido para a c mara S de um cartucho novo e volte a repetir o teste Se n o existir l quido use pin as esterilizadas para transferir a zaragatoa para um cartucho novo e volte a repetir o teste a partir do passo Adicione o Reagente 1 c mara 1 do cartucho Em alternativa prepare um cartucho novo usando a segunda zaragatoa e volte a repetir o teste 300 8907 Rev D September 2011 93 Portugu s Limitagoes O desempenho do ensaio Xpert GBS foi estabelecido com o sistema GeneXpert Dx da Cepheid com amostras vaginais rectais de pacientes no anteparto e intraparto recolhidas com o dispositivo de colheita Cepheid ref 900 0370 Este produto s pode ser usado com o sistema GeneXpert Dx N o recomendada a utiliza o de sistemas de colheita e transporte de amostras diferentes dos listados na sec o Materiais necess rios n o fornecidos A utiliza o do ensaio Xpert GBS de outras fontes cl nicas n o foi avaliada e as caracter sticas do desempenho do teste com outros tipos de amostra s o desconhecidas Podem ocorrer resultados de teste errados devido a colheita de amostra incorrecta manuseamento e conserva o da amostra erro t cnico troca de amostras ou porque o n mero de organismos na amostra est abaixo do limite de dete
67. and or the IC failed ERROR Presence or absence of GBS cannot be determined A system component failed the maximum pressure was reached or the probe check failed GBS NO RESULT SPC NO RESULT JIC NO RESULT Probe Check FAIL If the probe check passed the error is caused by a system component failure NO RESULT Presence or absence of GBS cannot be determined The operator stopped the test a power failure occurred during the test or problems were detected in the cartridge GBS NO RESULT SPC NO RESULT IC NO RESULT Probe Check NA not applicable Note If you obtain an INVALID ERROR or NO RESULT testing may be repeated or alternate methods initiated In the event of an ERROR result maximum pressure abort or probe check failure immediately perform retest or run second swab or initiate alternate methods ERROR results may happen within first 30 minutes of the test When performing intrapartum testing repeat testing may not be feasible and will depend on practices and policies within each facility Coordination between clinicians and the testing laboratory is important to not delay administration of antibiotics while results are pending 6 300 8907 Rev D September 2011 Reasons to Repeat the Assay or Initiate Alternate Procedures Figure 2 shows the GeneXpert Dx System View Results window As you can see the Error Status is displayed on the window Click the Erro
68. antillons non infectieux R actif 1 Tris Buffer EDTA surfactants 3 0 mL par cartouche R actif 2 Hydroxyde de Sodium 3 0 mL par cartouche CD 1 par kit Fichier de d finition de test ADF Instructions pour importer les ADF dans le logiciel GX Notice Note Les fiches techniques de donn es de s curit MSDS Material Safety Data Sheets de tous les r actifs fournis avec ce test sont disponibles aupr s de l Assistance technique de Cepheid et sur les sites Web de Cepheid www cepheid com et www cepheidinternational com Le s rum albumine bovin SAB de ce produit a t extrait exclusivement partir de plasma bovin provenant des Etats Unis La fabrication du SAB est galement r alis e aux Etats Unis Les aliments des animaux ne contenaient pas de prot ine de ruminant ou d autre prot ine animale les animaux ont subi des tests ante et post mortem Au cours du processus aucun m lange ne s est produit avec d autres mati res animales 18 300 8907 Rev D September 2011 Mat riel requis mais non fourni Stockage et manipulation O Stockez le kit GBS Xpert entre 2 et 28 C N utilisez pas les r actifs ou les cartouches dont la date d expiration est d pass e Mat riel requis mais non fourni GeneXpert Dx system la r f rence varie en fonction de la configuration Appareil GeneXpert ordinateur lecteur de codes barres et manuel d utilisation Imprimante consultez le Manuel d utilisati
69. ap s a ruptura das membranas ruptura das membranas RM 3 Subconjunto de mulheres em intraparto com amostras colhidas antes da ruptura das membranas RM A tabela seguinte mostra uma compara o directa entre os 2 testes por PCR o ensaio Xpert GBS e o 2 NAAT Table 3 Compara o directa entre os dois testes por PCR Xpert GBS Pos Xpert GBS Neg Inv lido Erro Sem resultado 2 NAAT total Cultura Pos Cultura Neg Cultura ND Xpert 22 NAAT Pos 22 NAAT Neg N o conclusivo 22 NAAT Pos 2 NAAT Neg N o conclusivo 22 NAAT Pos 2 NAAT Neg N o conclusivo GBS total SS o 149 27 2 10 9 0 0 0 0 197 6 17 0 11 549 1 0 3 0 587 0 0 0 1 9 0 0 0 0 10 O Qu__RJ R o gt _Qz_ gt gt __Q_Q o_o o RJ c ur r o o NI 165 44 2 22 567 1 0 3 0 794 300 8907 Rev D September 2011 97 Portugu s A Table 4 mostra o n mero de pacientes testadas em cada um dos seis laborat rios cl nicos dos locais participantes na avalia o e o desempenho estimado para o teste Xpert GBS comparado com os resultados das culturas Table 4 Compara o entre centros Xpert GBS com Sem resultados Sensibilidade Especificidade Local de testes Pacientesno Pacientesno Total de Cultura Com 95 95 95 95 cl nicos anteparto intraparto pacientes Positiva Preval ncia Inicialmente repeti o Estimativa inferior superior Estimativa inferior superior 1 0 51 51 11 21 6 4 1 72 7 39 0 94 0 92 3 79 1 98 4 2 11
70. ata raggiunta la pressione massima o il controllo sonda non riuscito Invalid Non valido l SPC e o ITC non sono riusciti con GBS negativo Un risultato non valido pu anche essere causato dalle bolle d aria presenti nella provetta di reazione No Result Nessun risultato l operatore ha interrotto l analisi si verificata un interruzione dell alimentazione durante l analisi oppure sono stati rilevati dei problemi nella cartuccia Se c del liquido nella camera S della cartuccia utilizzare una pipetta di trasferimento per trasferire tutto il liquido alla camera S di una nuova cartuccia quindi ripetere l analisi Se non vi liquido utilizzare pinzette sterili per trasferire il tampone a una nuova cartuccia quindi ripetere il test dal punto Aggiungi il reagente 1 nella camera della cartuccia 1 In alternativa preparare una nuova cartuccia utilizzando il secondo tampone e quindi ripetere il test Limitazioni 78 Le prestazioni del test Xpert GBS Assay sono state stabilite con il sistema Cepheid GeneXpert DX con campioni vaginali rettali di pazienti nei periodi antepartum e intrapartum prelevati con il dispositivo di raccolta Cepheid numero di parte 900 0370 Pertanto questo prodotto pu essere utilizzato solamente con il sistema GeneXpert DX Inoltre non consigliato l utilizzo di sistemi di raccolta e trasporto campioni diversi da quelli elencati nella sezione Materiali necessari ma non forniti Non stato valutato l
71. ats Unis Chaque institution disposait d un programme de d pistage bas sur la culture ou sur le test d amplification de l acide nucl ique TAAN Le test a t r alis dans des laboratoires cliniques affili s chaque institution ainsi que dans la salle d accouchement Les patientes en phase d accouchement et celles n ayant pas encore accouch ont t incluses dans l tude Pour tre retenues dans la partie p rinatale de l tude les femmes devaient fournir leur consentement crit tre dans la phase de travail et ne pr senter aucune contre indication l examen vaginal par exemple des saignements Pour tre retenues dans la partie pr natale de l tude les femmes devaient fournir leur consentement crit tre enceintes de 35 37 semaines et ne pr senter aucune contre indication l examen vaginal par exemple des saignements En outre il n a t tabli aucun signe de placenta praevia aucune indication urgente de proc der l accouchement et aucune utilisation d antibiotiques au cours de la semaine pr c dant l admission de toutes les patientes Des chantillons vaginaux rectaux ont t pr lev s chez chacune des 794 patientes admissibles l aide de deux s ries de cotons tiges comportant une marque appareils de collecte de Cepheid L un des cotons tiges de la premi re s rie a t utilis pour la culture La seconde s rie de cotons tiges comportant une marque a t divis e un couvillon a t utilis
72. ble 4 Confronto tra laboratori Xpert GBS con No Results Sensibilit Specificit Pazienti Pazienti Pazienti Pos con Dopo Inferiore Superiore Inferiore Superiore Laboratorio antepartum intrapartum totali coltura Prevalenza Primotest ripetizione Stima 95 95 Stima 95 95 1 0 51 51 11 21 6 4 Y 72 7 39 0 94 0 92 3 79 1 98 4 2 113 5 118 31 26 3 12 2 90 3 74 2 98 0 97 6 91 8 99 7 3 94 0 94 17 18 1 9 1 76 5 50 1 93 2 100 0 95 3 100 0 4 64 175 239 75 31 4 13 2 85 3 75 3 92 4 96 3 92 1 98 6 5 22 152 174 38 21 8 16 3 97 4 86 2 99 9 94 8 89 6 97 9 6 80 35 115 29 25 2 11 3 96 6 82 2 99 9 98 8 93 5 100 0 Totale 373 418 791 201 25 4 65 10 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 Note Illaboratorio 6 ha avuto tre risultati mancanti per le colture intrapartum su BAP Tempo occorrente per l analisi Il tempo occorrente per i 390 soggetti intrapartum arruolati nella sperimentazione clinica amp descritto di seguito Il tempo occorrente medio dal momento d inizio del test Xpert GBS fino al risultato stato di 1 84 ore per tutti i 390 soggetti Il tempo occorrente medio per i 360 soggetti che hanno dato risultati validi al primo tentativo stato di 1 76 ore Il tempo occorrente medio per i 30 soggetti che hanno dato risultati validi al secondo tentativo stato di 2 74 ore Il tempo occorrente mediano per i 360 campioni che hanno dato risultati validi al primo tentativo stato di 1 47
73. c o do teste necess rio o cumprimento cuidadoso das instru es deste folheto e do documento Protocolo de colheita de amostras vaginais rectais para evitar resultados errados recolha de amostras da zona inferior da vagina e do recto aumenta substancialmente o rendimento por compara o com a recolha de amostra do colo do tero ou ainda da vagina sem recolher amostras do recto Como a detec o de estreptococos do Grupo B depende do n mero de organismos presentes na amostra os resultados fidedignos dependem da correcta colheita manuseamento e conserva o da amostra Recomenda se a execu o do teste s 35 37 semanas de gesta o para melhorar a sensibilidade e a especificidade da detec o em mulheres que ainda est o colonizadas no momento do parto forma o do pessoal que utiliza o sistema GeneXpert Dx importante para garantir resultados exactos e atempados A repeti o do ensaio Xpert GBS quando os resultados s o INVALID ERROR e NO RESULT INV LIDO ERRO e SEM RESULTADO deve depender das pr ticas e pol ticas de cada institui o Devem estar dispon veis procedimentos alternativos por exemplo culturas conforme recomendado com caldo selectivo de enriquecimento durante 18 a 24 h S o necess rios isolados de culturas para efectuar os testes de susceptibilidade conforme recomendado para as mulheres al rgicas penicilina Para efectuar as culturas as zaragatoas restantes devem ser colocadas em sistema
74. ccouchement GBS Xpert 91 9 95 6 86 7 97 4 i 310 28 8 302 280 Lu h 104287 u 280 g4 7 96 5 927 97 6 78 6 92 5 95 0 98 9 per Pas de r sultat 3 33 0 7 3 26 Total 418 99 319 ROM5 Positif au 27 24 21 19 6 5 GBS Xpert 91 3 94 3 77 8 98 0 i 02 92 2 2 00 90 Ba 3 192132 a we 720 989 88 1 97 9 57 7 91 4 93 1 99 8 per Pas de r sultat 0 13 0 2 0 11 Total 129 23 106 Pas de ROM Positif au 78 74 70 66 8 8 GBS Xpert 92 1 96 2 89 7 97 1 i 208 6 202 0 34 2 133 Si 090 83 6 97 1 92 6 98 3 80 8 95 5 93 8 98 9 per Pas de r sultat 3 20 0 5 3 15 Total 289 76 213 Tous les r sultats du Test Xpert GBS sont pr sent s apr s avoir r p t le test Les r sultats du test initial sont entre parenth ses Pas de r sultat partir d un Test Xpert GBS peut tre d un test non valide une erreur du syst me ou lorsque la pr sence ou l absence d ADN du SGB n a pas pu tre signal e 3 Trois femmes en phase p rinatale dont la culture est sans r sultat sont exclues des analyses 4 La pr valence globale de l infection SGB comme d termin e par la culture est de 25 3 5 Sous ensemble des femmes en phase p rinatale dont les chantillons ont t collect s apr s la rupture de la membrane ROM Sous ensemble des femmes en phase p rinatale dont les chantillons ont t collect s avant la rupture de la membrane ROM
75. ch Ergebnis nach zweitem Versuch Mittelwert Stunden 184 1 76 2 74 Medianwert 1 48 1 47 2 44 Stunden Analytische Spezifit t Es wurde in blicher Weise gewonnene gereinigte genomische DNA aus 101 St mmen untersucht darunter 28 Streptokokken und 73 andere Spezies einschlie lich St mmen die phylogenetisch verwandt zu agalactiae waren ferner wurden sonstige h ufig in der Vaginal und Darmflora anzutreffende Mikroflora Bakterien und Hefen sowie menschliche DNA untersucht Von dreien wurden Replikate bei einer Konzentration von 1 5 ng 25 pl pro Reaktion getestet 2 x 10 quivalente Genomkopien pro Reaktion Keines der 28 Streptokokkenisolate nicht GBS wurde positiv getestet Von den verbleibenden 73 St mmen waren vier Enterococcus gallinarium Staphylococcus simulans Micrococcus luteus und Propionibacterium acnes in einem von sechs Replikaten schwach positiv 300 8907 Rev D September 2011 47 Deutsch Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t oder Nachweisgrenze Limit Of Detection LOD wurde unter Verwendung von 11 S agalactiae St mmen festgelegt Es wurden neun verschiedene GBS Serotypen identifiziert Ia Ib II III IV V VI VII und VII Die meisten F lle von Sepsis bei Neugeborenen die durch GBS hervorgerufen werden werden einem von 4 Serotypen zugeschrieben Ia Ib II oder III GBS des Typs V ist als wichtige Ursache f r GBS Infektionen in den Vereinigten Staaten in Erscheinung getreten und di
76. chwangerschaftswache ein Screening durchgef hrt um festzustellen inwieweit sie mit GBS besiedelt sind Die meisten GBS Tests vor der Entbindung werden durchgef hrt indem Kulturen angesetzt werden bis die endg ltigen Ergebnisse vorliegen dauert es in der Regel zwei bis drei Tage Dieser zeitliche Rahmen ist bei den meisten Frauen ausreichend um Ergebnisse aus GBS Kulturen vor der Entbindung zu erlangen bei einigen Frauen liegen die GBS Ergebnisse jedoch u U beim Einsetzen der Wehen noch nicht vor Der von Cepheid entwickelte Xpert GBS Test zum Nachweis von GBS direkt aus Abstrichen aus Vagina und Rektum dauert ab Testbeginn h chstens ca 50 Minuten Wenn der GBS Status w hrend der Wehen unbekannt ist ist der risikobasierte Ansatz zur Erkennung kolonisierter M tter weniger effektiv als das Screening vor der Entbindung und die Durchf hrung eines Sensibilit tstests bei Frauen mit Penicillinallergie ist nicht m glich Bei Frauen bei denen keine Vorsorgeuntersuchungen durchgef hrt wurden oder bei denen eine vorzeitige Entbindung m glich ist oder deren GBS Testergebnisse zum Zeitpunkt der Entbindung nicht vorliegen kann ebenfalls der Test angewendet werden nn tige Antibiotikagaben an Frauen verhindern bei denen ansonsten keine Indikation f r eine Prophylaxe gegeben ist w hrend Frauen die mit GBS infiziert sind angemessen behandelt werden k nnen sodass es bei Neugeborenen seltener zu Sepsis oder Meningitis kommt Ein wirksamer GBS Tes
77. ckez les 4 temp rature ambiante Si les chantillons doivent tre trait s apr s 24 heures r frig rez les jusqu la r alisation du test Les chantillons stock s entre 2 et 8 C sont stables jusqu six jours Proc dure Pr paration de la cartouche Important D marrez le test dans les 15 minutes qui suivent l ajout de l chantillon la cartouche Note Un seul couvillon est requis Le second couvillon est en suppl ment et peut tre utilis pour des tests de pr disposition Des isolats de culture sont n cessaires la r alisation de tests de pr disposition comme recommand chez les femmes allergiques la p nicilline Ne mettez pas les 2 cotons tiges dans une cartouche Pour ajouter l chantillon dans la cartouche Xpert GBS 1 Enlevez la cartouche de l emballage 2 Ouvrez le couvercle de la cartouche 3 Retirez les cotons tiges comportant une marque du r cipient Frottez doucement les deux cotons tiges l un contre l autre en les faisant pivoter pour qu une quantit gale d chantillon se trouve sur chacun d eux 4 Ins rez un des cotons tiges dans la chambre S de la cartouche GBS Xpert N ins rez pas les deux cotons tiges dans la cartouche Replacez le second couvillon dans le tube de collecte transport pour un test ult rieur de pr disposition antimicrobien par le laboratoire de microbiologie pour les patientes positives au SGB Des isolats de culture sont n cessaires la r alisation de
78. cluded in each cartridge The SPC monitors the lysis and elution processing The SPC should pass generate a valid cycle threshold Ct in a negative sample and may not amplify in a high positive sample The SPC passes if it meets the assigned acceptance criteria Internal control IC Verifies functional PCR reagents and the absence of inhibition that would prevent PCR amplification The IC should pass generate a valid Ct in a negative sample and may not amplify in a high positive sample The IC passes if it meets the assigned acceptance criteria Probe check Before the start of the PCR reaction the GeneXpert Dx System measures the fluorescence signal from the probes to monitor bead rehydration reaction tube filling probe integrity and dye stability Probe Check passes if it meets the assigned acceptance criteria External controls KWIK STIK MicroBioLogics catalog no 8164 may be used for training proficiency testing and external QC of the GeneXpert Dx System External controls may be used in accordance with local state federal accrediting organizations as applicable Follow the MicroBioLogics external control procedure described below 1 Tear open pouch at notch and remove the KWIK STIK 2 Pinch the bottom of the ampoule in the cap to release the hydrating fluid 3 Hold vertically and tap to facilitate flow of fluid through shaft into bottom of unit containing pellet 4 To facilitate dissolution of the lyophilize
79. con retrotrascrizione RRT PCR Il sistema composto da uno strumento un personal computer e dal software gi installato per l esecuzione di analisi su campioni raccolti e per la visualizzazione dei risultati Il sistema richiede l uso di cartucce GeneXpert monouso nelle cartucce sono contenuti i reagenti per la PCR e sempre nella cartuccia avviene la reazione di PCR Poich le cartucce monouso e indipendententi i rischi di contaminazione crociata sono ridotti al minimo Per una descrizione completa del sistema vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Dx 300 8907 Rev D September 2011 71 Italiano Il test Xpert GBS Assay include reagenti per il rilevamento simultaneo di DNA bersaglio di GBS un controllo di processamento del campione SPC per monitorare le condizioni di elaborazione un controllo interno IC per monitorare le condizioni della PCR e l assenza di inibitori della reazione di amplificazione La funzione controllo sonda verifica la reidratazione dei reagenti il riempimento della provetta PCR nella cartuccia l integrita della sonda e la stabilita del fluoroforo I primer GBS e la sonda rilevano un DNA bersaglio all interno della regione 3 del DNA adiacente al gene cfb di S agalactiae Una volta prelevato e trasportato in laboratorio il scovolo inserito nella cartuccia GBS Xpert Il sistema GeneXpert Dx esegue la preparazione del campione eluendo il materiale del campione dal tampone miscelando il reagente del
80. cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 gt Paoletti Lawrence C Ph D Research Interests Accessed 07 19 2006 lt http www channing harvard edu paoletti htm gt Assistance For assistance contact Cepheid using one of the following contact details Make sure you provide the instrument serial number and reagent lot ID when you call or email North America For technical support use the following contact details Tel 1 888 838 3222 Option 2 Email techsupport cepheid com You can reach Cepheid Technical Support by telephone Monday through Friday from 5 A M to 5 P M Pacific Time European Union For technical support use the following contact details Tel 33 563 82 53 19 Email support cepheideurope Other Locations Contact your local Cepheid representative 14 300 8907 Rev D September 2011 Table of Symbols Symbol Meaning Catalog number In vitro diagnostic medical device Do not reuse Caution consult accompanying document Manufacturer Contains sufficient for lt n gt tests Expiration date CONTROL Control CE marking European Conformity Alm El CN N Authorized representative in the European Community Temperature limitation N D S Biological hazard Manufacturer Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA Phone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Authorized Representati
81. d as an important cause of GBS infection in the United States and strains of types VI and VII have become prevalent among Japanese women Quantitated cultures were tested in four replicates Table 6 shows the lowest concentration of each subtype resulting in a positive result in all four replicates Table 6 Limit of detection obtained for each serotype tested Serotype CFU Swab ATCC 12973 II 250 la c 250 Ib c 250 Il 250 Ill 250 IV 250 IVc 250 V 250 VI 250 VII 250 Vill 250 12 300 8907 Rev D September 2011 Reproducibility Reproducibility A panel of specimens with varying concentrations of GBS and Lactobacillus acidophilus negative were tested in triplicate on 10 different days at each of the three sites 4 specimens x 3 x 10 days x 3 sites One lot of Xpert GBS kits was used at each of the 3 testing sites according to the Xpert GBS procedure Table 7 Summary of reproducibility results Sample CFU Expected Results Swab Site 1 Site 2 Site 3 Ct Range Total Agreement Total Agreement GBS Negative 30 30 30 30 30 30 Negative 90 90 100 L acidophilus 0 or gt 42 1 7 x 104 CFU swab GBS Low 30 30 30 30 30 30 Positive 90 90 100 6 2 x 10 CFU swab 31 to 41 GBS Moderate 30 30 30 30 30 30 Positive 90 90 100 8 3 x 10 CFU swab 27 to 37 GBS High 30 30 30 30 30 30 Positive 90 90 100 1 3 x 10 CFU swab 19 to 29 Total Agreement 120 120
82. d attempt was 2 74 hours The median turnaround time for 360 specimens that gave valid results on first attempt was 1 47 hours and 2 44 hours for the 30 subjects that gave valid results on second attempt Table 5 Turnaround Time from Initial Run Start to GBS Result Reporting 390 Intrapartum Subjects Overall Result on First Attempt Result on Second Attempt Mean hours 1 84 1 76 2 74 Median hours 1 48 1 47 2 44 Analytical Specificity Commercially obtained purified genomic DNA from 101 strains representing 28 Streptococci 73 other species including strains phylogenetically related to agalactiae other microflora bacteria and yeasts commonly found in vaginal and anal flora and human DNA were tested Replicates of three were tested at 1 5 ng 25 pl reaction 2 x 10 equivalent genome copies per reaction None of the 28 Streptococcal isolates non GBS tested positive Of the remaining 73 strains four Enterococcus gallinarium Staphylococcus simulans Micrococcus luteus and Propionibacterium acnes were weakly positive in one of six replicates 300 8907 Rev D September 2011 n English Analytical Sensitivity The analytical sensitivity or limit of detection LOD was determined using 11 S agalactiae strains Nine distinct GBS serotypes have been identified Ia Ib II III IV V VI VII and VIII Most cases of neonatal sepsis caused by GBS are attributed to 1 of 4 serotypes Ta Ib II or III GBS type V has emerge
83. d cell pellet crush the pellet and gently pinch the bottom chamber 5 Pull apart the KWIK STIK to release the swab and place the swab in the Xpert GBS cartridge chamber S 6 The KWIK STIK swab is now ready for Xpert GBS testing The low level positive control approximates 620 CFU swab 36 Ct of GBS and the negative control approximates 17 000 CFU swab of Lactobacillus acidophilus 0 Ct or gt 42 Ct Interpretation of Results The results are interpolated by the GeneXpert Dx System from measured fluorescent signals and embedded calculation algorithms and will be shown in the View Results window Possible results are POSITIVE GBS target nucleic acid is detected presumptive for GBS colonization SPC NA not applicable e IC NA not applicable Probe check PASS The patient s matching second paired swab in the collection transport tube may be used for antimicrobial susceptibility testing If necessary the used cartridge can be sent to the microbiology laboratory for back up susceptibility testing 300 8907 Rev D September 2011 5 English NEGATIVE GBS target nucleic acid is not detected presumed not colonized for GBS GBS NEG SPC PASS e JC PASS Probe Check PASS INVALID Presence or absence of GBS cannot be determined IC and or SPC does not meet acceptance criteria or air bubbles formed in the reaction tube GBS INVALID SPC FAIL JC FAIL Probe Check PASS The SPC
84. d in the intrapartum portion of the study women had to provide written consent be in labor and have no contraindication to vaginal examination for example bleeding To be enrolled in the antepartum portion of the study women had to provide written consent be at 35 37 weeks gestation and have no contraindication to vaginal examination for example bleeding There was also no evidence of placenta previa no urgent indication to proceed to delivery and no antibiotic used in the week prior to admission for all subjects Vaginal rectal specimens were collected from each of 794 eligible subjects using two sets of marked swabs Cepheid Collection Devices One of the swabs from the first set was used for culturing The second set of marked swabs was divided one swab was used in the Xpert GBS Assay on the GeneXpert Dx System the other was used in the 2 NAAT assay The 2 4 NAAT assay targets a sequence in the cfb gene and was previously FDA cleared Results from this test were not used in performance estimations After use in these tests each of these swabs was also placed into LIM culture broth incubated subcultured onto blood agar plate BAP and observed for GBS Each institution used the culture technique recommended in the 2002 CDC guidelines microbiological culture in selective broth medium LIM broth which is Todd Hewitt broth supplemented with 15 ug ml of nalidixic acid and 10 ug ml of colistin followed by 18 24 h incubation and subcu
85. dad de la sonda y la estabilidad del fluorocromo Los iniciadores y la sonda de EGB detectan un a diana dentro de una regi n de ADN 3 adyacente al gen cfd de S agalactiae Tras recoger y transportar una muestra al rea de pruebas de GeneXpert insertar el escobillo dentro del cartucho Xpert GBS El sistema GeneXpert Dx prepara la muestra mediante la diluci n del material de muestra del hisopo la mezcla del reactivo de la muestra con el CPM Bacillus globigii en forma de perla en el cartucho y el reactivo de tratamiento la captura del material celular en un filtro la lisis de las c lulas y la diluci n del ADN A continuaci n la soluci n de ADN se mezcla con los reactivos secos de RCP y se transfiere al tubo de reacci n integrado para la realizaci n de la RCP y la detecci n en tiempo real El sistema GeneXpert Dx interpola los resultados a partir de las se ales de fluorescencia medidas y los algoritmos de c lculo integrados Los resultados pueden visualizarse e imprimirse La prueba tiene una duraci n m xima aproximada de 50 minutos Reactivos e instrumentos Material suministrado El kit Xpert GBS GXGBS 100N 10 contiene reactivos suficientes para procesar 10 muestras de paciente o de control de calidad El kit incluye lo siguiente Cartuchos Xpert GBS con tubos de reacci n integrados 10 Perla 1 liofilizada 1 por cartucho Compuesto de polimerasa e inhibidor BSA seroalb mina bovina Perla 2 liofilizada 1 por cartucho In
86. de gestaci n a fin de mejorar la sensibilidad y especificidad de la detecci n de las mujeres que sigan estando colonizadas en el momento del parto Es importante la formaci n del personal que utilice el sistema GeneXpert Dx al objeto de garantizar unos resultados exactos y a tiempo e La repetici n del ensayo Xpert GBS tras obtener resultados INVALID NO V LIDO ERROR y NO RESULT SIN RESULTADO depende de las pr cticas y pol ticas de cada centro Debe disponerse de procedimientos alternativos p ej cultivo seg n las recomendaciones en caldo de cultivo enriquecido selectivo durante de 18 a 24 h Se precisan cepas cl nicas para realizar las pruebas de sensibilidad recomendadas en el caso de pacientes con alergia a la penicilina Para los cultivos los hisopos restantes deben colocarse en sistemas de transporte apropiados y realizar el cultivo en un plazo de 4 d as El cultivo con el reactivo 1 de Xpert GBS no se ha validado Los laboratorios deben validar sus propios procedimientos de cultivo o utilizar el segundo hisopo para realizar una identificaci n basada en el cultivo y las pruebas de sensibilidad Un resultado de prueba positivo no indica necesariamente la presencia de un organismo viable No obstante se puede suponer la presencia de estreptococos del grupo B Debe emplearse el ensayo Xpert GBS durante el parto como complemento de otros m todos disponibles y no como sustituci n de la prueba antes del parto entre las semanas
87. del parto y 421 durante el parto Tres mujeres no presentaron resultados mediante cultivo y se excluyeron de los an lisis 0 fueron Xpert GBS positivas y 3 Xpert GBS negativas dejando 791 resultados de cultivos susceptibles de evaluaci n Se realiz un cultivo de todas las pacientes seg n lo descrito anteriormente y la mayor parte tambi n se evalu mediante el segundo NAAT de EGB El segundo ensayo NAAT detecta una secuencia objetivo en el gen cfb y ha recibido la aprobaci n previa por parte de la FDA Los resultados de esta prueba no se emplearon en estimaciones del rendimiento De los 791 casos el ensayo Xpert GBS produjo 726 resultados comunicables al primer intento 91 8 Se obtuvieron 65 resultados no comunicables es decir no v lido error o sin resultado 55 de estos casos se resolvieron tras repetir la prueba En total 201 obtuvieron cultivos positivos para EGB bien del nico hisopo empleado para el cultivo o de los hisopos diluidos con las pruebas Xpert GBS y segundo ensayo NAAT El ensayo Xpert GBS produjo 168 resultados positivos inicialmente 168 201 83 6 Tras repetir la prueba los resultados positivos aumentaron hasta 178 201 o un 88 6 590 mujeres presentaron cultivos negativos y 520 fueron negativos inicialmente con la prueba Xpert GBS 88 1 y 561 tras repetir la prueba 95 1 La tabla 1 muestra la prueba Xpert GBS basada en los resultados positivos y negativos para EGB a partir de los cultivos de 791 paciente
88. duplicadas Table 6 L mite de detecci n obtenido para cada serotipo analizado Serotipo UFC hisopo ATCC 12973 11 250 la c 250 Ib c 250 Il 250 Ill 250 IV 250 IVc 250 V 250 VI 250 Vil 250 VII 250 66 300 8907 Rev D September 2011 Reproducibilidad Reproducibilidad Se analiz un panel de muestras con distintas concentraciones de EGB y Lactobacillus acidophilus negativo por triplicado en 10 d as distintos en cada uno de los tres centros 4 muestras x 3 x 10 d as x 3 centros Se utiliz un lote de kits Xpert GBS en cada uno de los 3 centros de prueba seg n el procedimiento Xpert GBS Table 7 Resumen de los resultados de reproducibilidad Resultados esperados UFC en la muestra intervalo de Correspondenci total de hisopo Centro1 Centro 2 Centro 3 Uc a total correspondencia EGB negativo 30 30 30 30 30 30 Negativo 90 90 100 L acidophilus 0 6 gt 42 1 7 x 104 UFC hisopo EGB bajo 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 6 2 x 10 UFC de 31 a 41 hisopo EGB moderado 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 8 3 x 103 UFC de 27 a 37 hisopo EGB alto 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 1 3 x 10 UFC hisopo de 19 a 29 Correspondencia 120 120 120 120 120 120 360 360 100 total de 100 100 100 100 100 correspondencia Hntervalo esperado de valores de Uc Todos los valores se encontraron dentro de los intervalos esperados 300 8907 Rev D
89. e techsupport cepheideurope fr Autres sites Contactez votre repr sentant local Cepheid 32 300 8907 Rev D September 2011 Tableau des symboles Symbole Signification Numero catalogue A ne pas r utiliser Fabricant Date limite d utilisation CONTROL Contr le nee aR A Risque biologique Fabricant Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 USA T l 1 408 541 4191 T l copie 1 408 541 4192 Repr sentant agr Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France T l 33 563 82 53 00 T l copie 33 563 82 53 01 Courrier lectronique cepheid cepheideurope fr C Ivo 300 8907 Rev D September 2011 Appareil a usage medical de diagnostic in vitro Attention consultez le document d accompagnement Contenu suffisant pour lt n gt tests Mandataire de la Communaut europ enne Limitation de la temp rature Tableau des symboles 33 Frangais 34 300 8907 Rev D September 2011 Deutsch Medizinisches Ger t zur In vitro Diagnostik Markenname Xpert GBS blicher Name Xpert GBS Test Verwendungszweck Beim Cepheid Xpert GBS Test der mit dem GeneXpert Dx System ausgef hrt wird handelt es sich um einen Qualitats In vitro Diagnostiktest Er ist f r den DNA Nachweis von Streptokokken der Gruppe B GBS in Abstrichen aus Vagina und Rektum ausgelegt Zum Nachweis der amplifizierten DNA verwendet die voll automatisierte Echtzeit
90. e St mme der Typen VI und VIII sind unter Japanerinnen weit verbreitet Quantifizierte Kulturen wurden in vier Replikaten getestet In Tabelle 6 ist die niedrigste Konzentration jedes Subtyps in einem positiven Ergebnis in allen vier Replikaten dargestellt Table 6 Nachweisgrenze zu jedem getesteten Serotyp Serotyp CFU Abstrich ATCC 12973 11 250 la c 250 Ib c 250 Il 250 Ill 250 IV 250 IVc 250 V 250 VI 250 Vil 250 VII 250 48 300 8907 Rev D September 2011 Reproduzierbarkeit Reproduzierbarkeit Eine Auswahl von Proben mit unterschiedlichen Konzentrationen von GBS und Lactobacillus acidophilus negativ wurde an 10 verschiedenen Tagen an jedem der drei Standorte dreifach getestet 4 Proben x 3 x 10 Tage x 3 Standorte An jedem der 3 Teststandorte wurde gem dem Xpert GBS Verfahren eine Charge Xpert GBS Kits verwendet Table 7 Zusammenfassung der Reproduktionsergebnisse Erwartete Ergebnisse Gesamt berein Gesamt berein Proben CFU Abstrich Standort Standort 2 Standort 3 Ct Bereich stimmung stimmung in GBS Negativ 30 30 30 30 30 30 Negativ 90 90 100 L acidophilus 0 oder gt 42 1 7 x 104 CFU Abstrich GBS Niedrig 30 30 30 30 30 30 Positiv 90 90 100 6 2 x 10 CFU Abstrich 31 bis 41 GBS Mittel 30 30 30 30 30 30 Positiv 90 90 100 8 3 x 103 CFU Abstrich 27 bis 37 GBS Hoch 30 30 30 30 30 30 Positiv 90 90 100 1 3 x 10 CFU Abstrich 19 bis
91. e from Molecular Probes Inc THE PURCHASE OF THIS PRODUCT ALLOWS THE PURCHASER TO USE IT FOR THE PERFORMANCE OF DIAGNOSTIC SERVICES FOR HUMAN IN VITRO DIAGNOSTICS NO GENERAL PATENT OR OTHER LICENSE OF ANY KIND OTHER THAN THIS SPECIFIC RIGHT OF USE FROM PURCHASE IS GRANTED HEREBY NO OTHER RIGHTS ARE CONVEYED EXPRESSLY BY IMPLICATION OR BY ESTOPPEL TO ANY OTHER PATENTS FURTHERMORE NO RIGHTS FOR RESALE ARE CONFERRED WITH THE PURCHASE OF THIS PRODUCT Cepheid Cepheid Europe 904 CARIBBEAN DRIVE VIRA SOLELH SUNNYVALE CA 94089 1189 81470 MAURENS SCOPONT FRANCE TEL 1 408 541 4191 TEL 33 5 63 82 53 00 Fax 1 408 541 4192 Fax 33 5 63 82 53 01 TECHNICAL SUPPORT TOLL FREE 1 888 838 3222 TECHNICAL SUPPORT 33 5 63 82 53 19 English In Vitro Diagnostic Medical Device Proprietary Name Xpert GBS Common or Usual Name Xpert GBS Assay Intended Use The Cepheid Xpert GBS performed on the GeneXpert Dx System is a qualitative in vitro diagnostic test designed to detect Group B Streptococcus GBS DNA from vaginal rectal swab specimens using fully automated real time polymerase chain reaction PCR with fluorogenic detection of the amplified DNA Xpert GBS Assay testing is indicated for rapid identification of antepartum and intrapartum GBS colonization The use of the Xpert GBS for intrapartum screening should not preclude the use of other strategies e g antepartum testing Intrapartum Xpert GBS results are useful to iden
92. e unsachgem e Probenentnahme zur ckzuf hren sein ferner auf die Handhabung und Lagerung technisches Versagen Probenvermischung oder auf den Umstand dass die Zahl der Organismen in der Probe durch den Test nicht nachzuweisen ist Zur Vermeidung fehlerhafter Ergebnisse sind die Anweisungen in diesem Abschnitt und die Anweisungen im Protokoll zur Entnahme von Proben aus Vagina und Rektum einzuhalten Gegen ber einer Probenentnahme vom Geb rmutterhals oder nur aus der Vagina ohne gleichzeitig auch eine Probe aus dem Rektum zu entnehmen verbessert die Abstrichnahme aus der unteren Vagina und dem Rektum das Ergebnis wesentlich Da der Nachweis von Streptokokken der Gruppe B von der Anzahl der Organismen in der Probe abh ngig ist ist die ordnungsgem e Entnahme Handhabung und Lagerung der Proben zur Erzielung verl sslicher Ergebnisse unverzichtbar Es wird empfohlen in der 35 bis 37 Schwangerschaftswoche einen Test durchzuf hren um die Sensitivit t und die Spezifit t im Hinblick auf den Nachweis bei Frauen zu verbessern die zum Zeitpunkt der Entbindung weiterhin kolonisiert sind Die Schulung des Personals das mit dem GeneXpert Dx System umgeht ist zur Sicherstellung genauer und rechtzeitig vorliegender Ergebnisse von gro er Bedeutung Die erneute Durchf hrung des Xpert GBS Tests wenn das Ergebnis INVALID UNG LTIG ERROR FEHLER oder NO RESULT KEIN ERGEBNIS lautet sollte von den Vorgehensweisen und Richtlin
93. eening and susceptibility testing for penicillin allergic women is not possible For women who have had no prenatal care or who might deliver preterm or whose GBS test results are unknown at the time of delivery intrapartum testing can provide results in time to administer antibiotics before delivery if required Xpert GBS testing can be done 24 hours a day 7 days a week and can be conveniently performed The potential impact to intrapartum testing is decreased use of unnecessary antibiotics in women not otherwise indicated for prophylaxis while providing adequate treatment of GBS colonized women with the resulting decreased risk of neonatal sepsis or meningitis Effective intrapartum GBS testing for pregnant women who come to labor and delivery without a known GBS status requires prompt specimen collection and capability of providing results quickly enough to initiate recommended duration of antibiotic prophylaxis prior to delivery Principle of the Procedure The GeneXpert Dx System automates and integrates sample lysis nucleic acid purification and amplification and detection of the target sequence in complex samples using real time and reverse transcription Polymerase Chain Reaction RT PCR The system consists of an instrument personal computer and preloaded software for running tests on collected samples and viewing the results The system requires the use of single use disposable GeneXpert cartridges that hold the PCR reagents and host the PC
94. egionalen und L ndervorschriften da diese von den Entsorgungsvorschriften des Bundes abweichen k nnen Das Xpert GBS Kit bei 2 28 C lagern Reagenz 2 enth lt Natriumhydroxid ph gt 12 5 R34 EU Risiko welches f r Augen und Haut tzend ist Die Handhabung ben tigt daher Augen und Hautschutz Probensammlung und transport N Zur Gewinnung geeigneter Proben sind die Anweisungen in diesem Abschnitt streng zu befolgen Die Proben sind gem den CDC Empfehlungen mit dem Cepheid Abstrichtupfer zu nehmen Es ist wie folgt vorzugehen 1 2 3 bersch ssige Sekrete oder Ausfluss wegwischen Die beiden markierten Abstrichtupfer aus dem Transportbeh lter nehmen Die beiden markierten Abstrichtupfer vorsichtig in die Vagina der Patientin einf hren Eine Probe des Sekrets aus der Schleimhaut im unteren Drittel der Vagina entnehmen Die Abstrichtupfer dreimal drehen um sicherzustellen dass die Proben an beiden Abstrichtupfern bereinstimmen Dieselben beiden markierten Abstrichtupfer vorsichtig ca 2 5 cm durch den Analsphinkter hindurch einf hren und zur Probenentnahme an den Sinus anales vorsichtig drehen 300 8907 Rev D September 2011 37 Deutsch 5 Die beiden markierten Abstrichtupfer in den Transportbeh lter legen 6 Falls die Proben innerhalb von 24 Stunden verarbeitet werden bei Raumtemperatur lagern Falls die Proben nach Ablauf von 24 Stunden getestet werden bis zur Durchf hrung des Tests k hlen la
95. eid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont Fran a Telefone 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 E mail cepheid cepheideurope fr Ce Ivo 102 300 8907 Rev D September 2011
96. erecha Cierre la tapa del cartucho S Muestra Figure 1 Cartucho Xpert GBS vista superior 56 300 8907 Rev D September 2011 Procedimiento Inicio de la prueba En esta secci n se incluyen los pasos b sicos para realizar la prueba Si desea obtener instrucciones detalladas consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx 1 2 10 11 Encender primero el instrumento GeneXpert Dx y luego el ordenador el software GeneXpert se iniciar autom ticamente Inicie una sesi n en el software del sistema GeneXpert Dx con su nombre de usuario y contrase a En la ventana del sistema GeneXpert Dx haga clic en Create Test Crear prueba Aparece el cuadro de di logo Scan Cartridge Barcode Escanear c digo de barras de cartucho Escanee el c digo de barras del cartucho Xpert GBS Aparece la ventana Create Test Crear prueba Utilizando la informaci n del c digo de barras el software rellenar autom ticamente los cuadros de los siguientes campos Select Assay Seleccionar ensayo Reagent Lot ID Id de lote de reactivos Cartridge SN No de serie del cartucho y Expiration Date Fecha de caducidad En el cuadro Sample ID Id de muestra escanee o escriba el Id de muestra Aseg rese de escribir el Id de muestra correcto El Id de muestra est asociado a los resultados de la prueba y se muestra en la ventana View Results Ver resultados y en todos los informes Haga clic en Start Test I
97. ert GBS Pos 27 24 21 19 6 5 91 3 94 3 77 8 98 0 Xpert GBS Neg 102 92 2 2 100 90 72 0 98 9 88 1 97 9 57 7 91 4 93 1 99 8 No Result 0 13 0 2 0 11 Total 129 23 106 No ROM Xpert GBS Pos 78 74 70 66 8 8 92 1 96 2 89 7 97 1 Xpert GBS Neg 208 195 6 5 202 190 83 6 97 1 92 6 98 3 80 8 95 5 93 8 98 9 No Result 3 20 0 5 3 15 Total 289 76 213 1 All Xpert GBS results are shown after repeat testing Initial test results are shown in parenthesis 2 No results from an Xpert GBS test could be due to an invalid test a system error or a no result when the presence or absence of GBS DNA could not be reported 3 Three intrapartum women with no results by culture are excluded from the analyses 4 Overall prevalence of GBS colonization as determined by culture is 25 3 5 The subset of intrapartum women who had specimens collected after membrane rupture rupture of membrane ROM 6 The subset of intrapartum women who had specimens collected before membrane rupture ROM There would be no biological differences expected between these intrapartum specimens and those collected antepartum 7 Positive predictive value 8 Negative predictive value 300 8907 Rev D September 2011 9 Table 2 Performance of Xpert GBS and 2 d NAAT Test Relative to Culture Xpert and GPS NAAT Category Sensitivity LowerCl UpperCl Specificity LowerCI UpperCl Sensitivity L
98. escents mesur s et d algorithmes de calcul int gr s Ils seront affich s dans la fen tre View Results Afficher les r sultats Les r sultats possibles sont POSITIVE POSITIF L acide nucl ique cible du SGB est d tect infection SGB pr sum e SPC NA not applicable CTE SO sans objet IC NA not applicable CI SO sans objet Probe check PASS Contr le de la sonde R USSITE Envoyez au laboratoire de microbiologie le second couvillon correspondant a la patiente dans le tube de collecte transport pour un test de pr disposition antimicrobien Si n cessaire la cartouche usag e peut tre envoy e au laboratoire de microbiologie pour sauvegarder le test de pr disposition Des isolats de culture sont n cessaires la r alisation de tests de pr disposition comme recommand chez les femmes allergiques 4 la p nicilline NEGATIVE NEGATIF L acide nucl ique cible du SGB n a pas t d tect non infection A SGB pr sum e GBS NEG SGB NEG SPC PASS CTE R USSITE IC PASS CI R USSITE Probe Check PASS Contr le de la sonde R USSITE 22 300 8907 Rev D September 2011 Interpretation des r sultats INVALID NON VALIDE Impossible de d terminer la pr sence ou l absence de SGB Le CI et ou le CTE ne r pondent pas aux crit res d acceptation ou des bulles d air se sont form es dans le tube de r action GBS INVALID SGB INVALIDE SPC FAIL CTE C
99. esentados na janela View Results Ver resultados Os resultados poss veis s o POSITIVE POSITIVO Foi detectado o cido nucleico alvo do EGB presum vel coloniza o por EGB SPC NA SPC n o aplic vel IC NA IC n o aplic vel Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA A segunda zaragatoa da paciente no tubo de colheita transporte pode ser efectuada para testes de susceptibilidade antimicrobiana Se necess rio o cartucho usado pode ser enviado para o laborat rio de microbiologia para testes de susceptibilidade de reserva 300 8907 Rev D September 2011 91 Portugu s NEGATIVE NEGATIVO N o foi detectado o cido nucleico alvo do EGB presum vel aus ncia de coloniza o por EGB GBS NEG EGB NEG SPC PASS SPC APROVADO IC PASS IC APROVADO Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA INVALID INVALIDO N o pode ser determinada a presen a ou aus ncia de EGB O IC e ou SPC n o preenchem os crit rios de aceita o ou ocorreu forma o de bolhas de ar no tubo de reac o GBS INVALID EGB INV LIDO SPC FAIL SPC N O APROVADO IC FAIL IC NAO APROVADO Probe Check PASS Verifica o da sonda APROVADA O SPC e ou IC n o foram aprovados ERROR ERRO N o pode ser determinada a presen a ou aus ncia de EGB Ocorreu uma falha num componente do sistema foi alcan ada a press o m xima ou a verifica o da sonda n
100. externos pueden emplearse de acuerdo con las organizaciones de acreditaci n locales estatales y federales seg n corresponda Siga el procedimiento de control externo de MicroBioLogics descrito a continuaci n 1 Abra la bolsa rasg ndola por la muesca y retire el KWIK STIK 2 Perfore la parte inferior de la ampolla con la tapa para liberar el l quido hidratante 3 Mant ngala en posici n vertical mientras la golpea ligeramente para facilitar el flujo del l quido a trav s del eje hasta el fondo de la unidad que contiene el precipitado 4 A fin de facilitar la disoluci n del precipitado celular liofilizado apl stelo y frote suavemente contra el compartimento inferior 5 Tire del KWIK STIK para liberar el hisopo y col quelo en el compartimento S del cartucho Xpert GBS 6 Ahora el hisopo KWIK STIK est listo para la prueba Xpert GBS El control positivo de nivel bajo se aproxima a 620 UFC hisopo 36 Uc de EGB y el control negativo se aproxima a 17 000 UFC hisopo de Lactobacillus acidophilus 0 Uc o gt 42 Uc Interpretaci n de los resultados El sistema GeneXpert Dx interpola los resultados a partir de las se ales de fluorescencia medidas y los algoritmos de c lculo integrados y se mostrar n en la ventana Ver resultados Los resultados posibles son POSITIVE POSITIVO Se ha detectado el cido nucleico de EGB objetivo se puede suponer la colonizaci n por EGB SPC NA no aplicable IC NA no aplicable
101. ger Proben die bei 2 bis 8 C gelagert werden sind bis zu sechs Tagen haltbar Prozedur Vorbereiten der Kartusche Wichtig Den Test innerhalb von 15 Minuten nach Einf llen der Probe in die Kartusche beginnen Hinweis Es wird nur ein Abstrichtupfer ben tigt Der zweite Abstrichtupfer ist ein zus tzlicher Tupfer der f r den Sensibilit tstest verwendet werden kann Zur Durchf hrung eines Sensibilit tstests der bei Frauen mit Penicillinallergie empfehlenswert ist werden Kulturisolate ben tigt Nicht zwei Abstrichtupfer auf einmal zu einer Kartusche hinzuf gen Laden der Probe in die Kartusche Xpert GBS 1 2 3 an Die Kartusche aus der Verpackung nehmen Den Kartuschendeckel ffnen Den markierten Abstrichtupfer aus dem Beh lter nehmen Die beiden Abstrichtupfer vorsichtig mit einer Drehbewegung aneinander reiben sodass sich an beiden Tupfern dieselbe Menge Probenmaterial befindet Einen Tupfer in die Xpert GBS Kartuschenkammer S einschieben e Nicht beide Tupfer in die Kartusche einschieben Den zweiten Abstrichtupfer zum anschlie enden Testen der antimikrobiellen Sensibilit t durch das Mikrobiologielabor f r GBS positive Patientinnen in den Sammel Transportbeh lter legen Zur Durchf hrung eines Sensibilit tstests der bei Frauen mit Penicillinallergie empfehlenswert ist werden Kulturisolate ben tigt Den Abstrichtupfer so anheben dass die schwarze Markierung in der Aussparung zentriert ist Den Tu
102. handling biological samples The Xpert GBS Assay does not provide susceptibility results Culture isolates are needed for performing susceptibility testing as recommended for penicillin allergic women Do not open the Xpert GBS cartridge lid except when adding the sample Do not load a cartridge that has been dropped or shaken after you have added the sample Do not open used cartridges except for retest and then only to remove eluted sample from the S chamber with a pipet Each single use Xpert GBS cartridge is used to process one test Do not reuse spent cartridges Consult your institution s environmental waste personnel on proper disposal of used cartridges and unused reagents This material may exhibit characteristics of federal EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA hazardous waste requiring specific disposal requirements Check state and local regulations as they may differ from federal disposal regulations Institutions outside the USA should check their country hazardous waste disposal requirements Store the Xpert GBS kit at 2 28 C Reagent 2 contains sodium hydroxide pH gt 12 5 R34 EU Risk which is corrosive to eyes and skin requiring eye and skin protection A Specimen Collection and Transport LEN To obtain adequate specimen follow the instructions in this section closely Using the Cepheid Collection Device collect specimens according to CDC recommendations The following procedure should be used 1
103. he View Results window and all the reports Click Start Test In the dialog box that appears type your password Open the instrument module door with the blinking green light and load the cartridge Close the door The test starts and the green light stops blinking When the test is finished the light turns off Wait until the system releases the door lock before opening the module door and removing the cartridge If absolutely necessary the sample eluate can be retrieved from the cartridge chamber marked S with a transfer pipette This eluate can be used as a back up to the paired second swab taken from the patient for susceptibility testing by the microbiology laboratory Culturing from Xpert GBS Reagent 1 has not been validated Laboratories must validate their own culturing procedures or use the second swab collected to perform culture based identification and susceptibility testing The used cartridges should be disposed in the appropriate specimen waste containers according to your institution s standard practices Viewing and Printing Results For detailed instructions on how to view and print the results see the GeneXpert Dx System Operator Manual 300 8907 Rev D September 2011 Quality Control Quality Control Each test includes the following internal controls and a probe check Sample processing control SPC Ensures the sample was correctly processed The SPC is B g obigii in the form of a dry bead and is in
104. horas 1 48 1 47 2 44 Especificidade anal tica Foi testado DNA humano e DNA gen mico purificado obtido comercialmente de 101 estirpes representando 28 estreptococos 73 outras esp cies incluindo estirpes filogeneticamente relacionadas com o S agalactiae e outra microflora bact rias e leveduras usualmente encontrada na flora vagina e anal Foram testadas r plicas de tr s numa reac o 1 5 ng 25 pl 2 x 10 c pias gen micas equivalentes por reac o Nenhum dos 28 isolados estreptoc cicos n o EGB apresentou resultados positivos Das restantes 73 estirpes quatro Enterococcus gallinarium Staphylococcus simulans Micrococcus luteus e Propionibacterium acnes apresentaram resultados positivos fracos numa das seis r plicas NO 8 300 8907 Rev D September 2011 Sensibilidade analitica Sensibilidade analitica A sensibilidade analitica ou limite de detecg o LD foi determinado usando 11 estirpes de S agalactiae Foram identificados nove ser tipos distintos de EGB Ia Ib II HI IV V VI VII e VIII A maioria dos casos de s psis neonatal causada por EGB atribu da a 1 de 4 ser tipos Ia Ib II ou III O EGB tipo V tem vindo a revelar se uma causa importante de infec o por EGB nos EUA e tem aumentado a preval ncia das estirpes dos tipos VI e VIII entre as mulheres japonesas As culturas quantificadas foram testadas em quatro r plicas A Table 6 apresenta a concentrag o mais baixa de cada subtipo que resulta n
105. i utilizzati per le stime della prestazione Dei 791 casi sono stati riportati 726 risultati con il test Xpert GBS Assay al primo tentativo 91 8 Vi sono stati 65 risultati non riportabili ovvero invalid error o no result 55 di questi si sono risolti ripetendo il test In totale 201 donne avevano colture positive per GBS sia dal singolo campione usato per la coltura sia dai tamponi eluiti dopo l analisi con i test Xpert GBS e 2nd NAAT Il test Xpert GBS Assay inizialmente ha riportato 168 risultati positivi 168 201 83 6 Ripetendo il test i risultati positivi sono aumentati a 178 201 88 6 Cinquecentonovanta 590 donne hanno avuto colture negative e 520 sono risultate inizialmente negative con il test Xpert GBS 88 1 e 561 dopo la ripetizione del test 95 1 300 8907 Rev D September 2011 79 Italiano La tabella 1 mostra il test Xpert GBS in base ai risultati positivi e negativi della coltura per 791 soggetti per 3 la coltura era cresciuta eccessivamente o non poteva essere interpretata La sensibilita la specificita e le stime dei valori negativi e positivi mostrate sono basate sui risultati dopo la ripetizione del test Dopo la ripetizione del test sono rimasti irrisolti 10 casi n 781 Table Risultati secondo il test Xpert GBS e prestazione stimata per categoria di pazienti Pazienti Pazienti positive negative Sensibilit dopola Specificit dopola
106. iagn stico de un resultado positivo 8 Valor diagn stico de un resultado negativo 300 8907 Rev D September 2011 Espanol Table 2 Rendimiento de las pruebas Xpert GBS y segundo NAAT Relativo al cultivo Xpert Segundo GPS NAAT Categoria Sensibilidad Clinferior Clsuperior Especificidad Clinferior Clsuperior Sensibilidad Clinferior Clsuperior Especificidad Clinferior Cl superior General 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 77 9 71 5 83 5 96 3 94 4 97 6 178 201 561 580 155 199 567 589 Antes del 85 3 76 9 91 5 98 1 95 6 99 4 74 5 64 9 82 6 97 0 94 3 98 7 ERA 87 102 259 264 76 102 263 271 Durante el 91 9 84 7 96 4 95 6 92 7 97 6 81 4 72 3 88 6 95 6 92 7 97 6 a 91 99 302 316 79 97 304 318 RDM 91 3 72 0 98 9 94 3 88 1 97 9 90 9 70 8 98 9 95 2 89 2 98 4 21 23 100 106 20 22 100 105 Sin RDM3 92 1 83 6 97 0 96 2 92 6 98 3 78 7 67 7 87 3 95 8 92 1 98 0 70 76 202 210 59 75 204 213 El segundo ensayo NAAT detecta una secuencia objetivo en el gen cfb y ha recibido la aprobaci n previa por parte de la FDA Subgrupo de mujeres dentro del parto a las que se les recogi la muestra tras la rotura de la membrana RDM 3 Subgrupo de mujeres dentro del parto a las que se les recogi la muestra antes de la rotura de la membrana RDM La siguiente tabla recoge una comparaci n directa de las dos pruebas de RCP Xpert GBS y segundo NAAT
107. iciadores Sondas dNTPs ADN de control interno CI BSA seroalb mina bovina Perla 3 liofilizada 1 por cartucho Control de procesamiento de muestra CPM 2000 esporas de B globigii con esporas de control de preparaci n Reactivo 1 Tamp n Tris EDTA surfactantes 3 0 ml por cartucho Reactivo 2 Hidr xido de sodio 3 0 ml por cartucho CD 1 por kit Archivo de definici n del ensayo ADF Instrucciones para importer el ADF en el sistema GX Instrucciones Notas Las hojas de datos de seguridad de los materiales MSDS Material Safety Data Sheets correspondientes a todos los reactivos suministrados con este equipo se pueden solicitar al servicio t cnico de Cepheid y tambi n est n disponibles en los sitios web de Cepheid www cepheid com y www cepheidinternational com La seroalbiimina bovina BSA contenida en este producto se ha fabricado exclusivamente a partir de plasma bovino recogido en los Estados Unidos Asimismo la fabricaci n de la BSA se lleva a cabo en los Estados Unidos Los animales no han sido alimentados con prote nas de rumiantes ni con ninguna otra prote na animal los animales han superado pruebas anteriores y posteriores a la muerte Durante el procesamiento no se produjo combinaci n del material con otros materiales de origen animal 54 300 8907 Rev D September 2011 O Material necesario pero no suministrado Almacenamiento y manipulaci n Conserve el kit Xpert GBS e
108. idge using the second swab and then rerun the test Limitations The performance of Xpert GBS Assay was established with the Cepheid GeneXpert Dx System with vaginal rectal specimens from antepartum and intrapartum patients collected with the Cepheid Collection Device part number 900 0370 This product can only be used with the GeneXpert Dx System The use of specimen collection and transport system other than those listed in the Materials Required but Not Provided section is not recommended The use of the Xpert GBS Assay from other clinical sources has not been assessed and performance characteristics of this test are unknown for other specimen types Erroneous test results might occur from improper specimen collection technical error sample mix up or because the number of organisms in the specimen is not detected by the test Careful compliance to the instructions in this insert and to the Vaginal Rectal Specimen Collection Protocol instructions document is necessary to avoid erroneous results Swabbing both the lower vagina and rectum increases the yield substantially compared with sampling the cervix or sampling the vagina without also swabbing the rectum 300 8907 Rev D September 2011 7 English Because detection of Group B Streptococcus is dependent on the number of organisms present in the sample reliable results are dependent on proper specimen collection handling and storage Testing at 35 37 weeks gestation is recommended
109. ien der jeweiligen Einrichtung abh ngig gemacht werden Es sollten Alternativverfahren wie z B das Z chten von Kulturen ber 18 24 Stunden mit einer selektiven Anreicherungsbouillon zur Verf gung stehen Zur Durchf hrung eines Sensibilit tstests der bei Frauen mit Penicillinallergie empfehlenswert ist werden Kulturisolate ben tigt Zum Z chten von Kulturen sind verbleibende Abstrichproben in entsprechende Transportsysteme zu legen und ber 4 Tage zu z chten Das Z chten von Kulturen aus Xpert GBS Reagenz 1 wurde nicht validiert Die Labore m ssen ihre eigenen Verfahren zum Z chten von Kulturen validieren oder mit dem zweiten Abstrichtupfer eine kulturbasierte Identifikation und einen Sensibilit tstest durchf hren Ein positives Testergebnis weist nicht zwingend auf das Vorhandensein lebensf higer Organismen hin Es l sst jedoch vermuten dass Streptokokken der Gruppe B vorhanden sind Das Testverfahren mit dem Xpert GBS Test w hrend der Entbindung sollte erg nzend zu anderen verf gbaren Methoden eingesetzt werden und nicht die vorgeburtlichen Tests in der 35 bis 37 Schwangerschaftswoche ersetzen Der Test ist nicht dazu vorgesehen zwischen Tr gern von Streptokokken der Gruppe B und Personen mit einer Streptokokkeninfektion zu unterscheiden Die Ergebnisse werden u U durch eine parallele Antibiotikatherapie beeinflusst Der Therapieerfolg bzw das Therapieversagen k nnen daher nicht mit diesem Test bewertet werden da
110. ient de l hydroxyde de Sodium pH gt 12 5 R34 EU Risk qui est corrosif pour les yeux et la peau et n cessite une protection des yeux et de la peau Collecte d chantillons et transport N 2 2 2 Pour obtenir un chantillon appropri suivez attentivement les instructions pr sent es dans cette section Grace l appareil de collecte de Cepheid prelevez des chantillons conform ment aux recommandations des CDC Centers for Disease Control and Prevention centres pour le contr le et la pr vention des maladies La proc dure suivante doit tre utilis e 1 2 Essuyez les restes de s cr tion ou liminez les Retirez du r cipient de transport les deux cotons tiges comportant une marque Introduisez d licatement les deux cotons tiges comportant une marque dans le vagin de la patiente Pr levez des chantillons des s cr tions de la muqueuse du tiers inf rieur du vagin Faites pivoter les cotons tiges trois fois pour garantir un chantillon uniforme sur les deux cotons tiges Introduisez d licatement les deux m mes cotons tiges comportant une marque dans le sphincter anal une profondeur d environ 2 5 cm puis faites les pivoter doucement pour pr lever des chantillons des cryptes anales 300 8907 Rev D September 2011 19 Frangais 5 Placez les deux cotons tiges comportant une marque dans le r cipient de transport 6 Siles chantillons doivent tre trait s dans les 24 heures sto
111. ilure cannot be assessed using this test because DNA might persist following antimicrobial therapy Good laboratory practices and changing gloves between handling patient specimens are recommended to avoid contamination of specimens or reagents Expected Values Approximately 10 30 of pregnant women are colonized with GBS in the vagina or rectum GBS colonization can be transient chronic or intermittent Culture screening of both the vagina and rectum for GBS late in gestation during prenatal care can detect women who are likely to be colonized with GBS at the time of delivery In various studies sensitivities of 87 83 92 CI and 69 57 79 CT and specificities of 96 95 98 CT and 92 89 94 CI have been reported for late prenatal cultures for identifying colonization status at delivery During clinical evaluations for the Xpert GBS assay 25 4 201 of 791 women were colonized with GBS by culture methods Performance Characteristics Clinical Performance Performance characteristics of the Xpert GBS Assay were determined in a multi site prospective investigational study at six institutions with maternity services in the United States Each institution had a culture based or nucleic acid amplification test NAAT based screening program Testing was done in clinical laboratories affiliated with each institution as well as the labor and delivery area Both intrapartum and antepartum subjects were included in the study To be enrolle
112. impression des r sultats Pour obtenir des instructions d taill es sur la mani re d afficher et d imprimer les r sultats consultez le Manuel d utilisation du GeneXpert Dx system 300 8907 Rev D September 2011 21 Frangais Contr le qualite Chaque test comprend les contr les internes suivants ainsi qu un contr le de la sonde Contr le du traitement de l chantillon CTE garantit que l chantillon a t correctement trait Le CTE B globigii est sous forme de billes de r actifs il est inclus dans chaque cartouche Le CTE contr le la lyse et l lution Le CTE doit r ussir g n rer un seuil de cycle Ct valide dans un chantillon n gatif et ne pas s amplifier dans un chantillon positif lev Le CTE r ussit s il r pond aux crit res d acceptation attribu s Contr le interne CI contr le les r actifs fonctionnels de la PCR et l absence d inhibition qui peut emp cher l amplification par PCR Le CI doit r ussir g n rer un Ct valide dans un chantillon n gatif et ne pas s amplifier dans un chantillon positif lev Le CI r ussit s il r pond aux crit res d acceptation attribu s Contr le de la sonde avant de d marrer la r action PCR le GeneXpert Dx system mesure le signal de fluorescence partir des sondes afin de contr ler la r hydratation des billes de r actifs le remplissage des tubes de r action l int grit de la sonde et la stabilit du fluorochrome Le contr le de l
113. inem Stromausfall gekommen oder es sind Probleme im Zusammenhang mit der Kartusche aufgetreten Wenn sich in der Kammer S der Kartusche Fluid befindet das gesamte Fluid mit einer Transferpipette in die Kammer S einer neuen Kartusche bertragen und den Test hiermit ab erneut durchf hren Ist kein Fluid vorhanden den Abstrichtupfer mittels einer sterilen Pinzette in eine neue Kartusche bertragen und den Test ab Reagenz 1 in die Kartuschenkammer 1 laden erneut durchf hren Alternativ mit dem zweiten Abstrichtupfer eine neue Kartusche vorbereiten und den Test erneut durchf hren 42 300 8907 Rev D September 2011 Einschr nkungen Einschr nkungen Die Durchf hrung des Xpert GBS Tests wurde in Verbindung mit dem Cepheid GeneXpert Dx System eingerichtet und zwar mit Proben aus Vagina und Rektum von Patientinnen vor und w hrend der Entbindung welche mit dem Abstrichinstrument von Cepheid Teilenummer 900 0370 entnommen wurden Dieses Produkt kann ausschlie lich in Verbindung mit dem GeneXpert Dx System verwendet werden Die Verwendung eines Systems zur Probenentnahme und zum Transport das nicht im Abschnitt Materialien die nicht im Lieferumfang enthalten sind aufgef hrt ist wird nicht empfohlen Der Einsatz des Xpert GBS Tests anderer klinischer Quellen wurde nicht beurteilt ferner sind die Durchf hrungseigenschaften dieses Tests bei anderen Probentypen nicht bekannt Fehlerhafte Testergebnisse k nnen auf ein
114. iques et des strat gies au sein de chaque installation D autres proc dures par ex des cultures recommand es de 18 24 h avec bouillon d enrichissement s lectif doivent tre disponibles Des isolats de culture sont n cessaires 4 la r alisation de tests de pr disposition comme recommand chez les femmes allergiques la p nicilline Pour la culture les chantillons pr lev s l aide des cotons tiges restants doivent tre plac s dans des syst mes de transport appropri s et mis en culture dans les 4 jours La culture partir du r actif 1 GBS Xpert n a pas t valid e Les laboratoires doivent valider leurs propres proc dures de culture ou utiliser le second couvillon collect afin de proc der l identification bas e sur la culture et un test de pr disposition Un r sultat de test positif n indique pas forc ment la pr sence d organisme viable Cependant il suppose la pr sence de Streptocoques du Groupe B Le test p rinatal l aide du Test Xpert GBS doit venir en compl ment d autres m thodes disponibles et ne doit pas tre utilis pour remplacer le test pr natal chez les femmes enceintes de 35 37 semaines Le test n est pas destin diff rencier les porteurs de Streptocoques du Groupe B de ceux pr sentant une infection streptococcique Le test peut galement tre affect par la prise simultan e d antibiotiques Par cons quent le succ s ou l chec th rapeutique ne peut pas tre valu
115. isches Institut f r Standards in Klinik und Labor fr her National Committee for Clinical Laboratory Standards erh ltlich Es sind die Sicherheitsprozeduren der jeweiligen Institution f r den Umgang mit Chemikalien und die Handhabung von biologischen Proben zu beachten Der Xpert GBS Test liefert keine Ergebnisse im Hinblick auf die Sensibilit t Zur Durchf hrung eines Sensibilit tstests der bei Frauen mit Penicillinallergie empfehlenswert ist werden Kulturisolate ben tigt Der Xpert GBS Kartuschendeckel darf nur ge ffnet werden um die Probe einzuf llen Kartuschen die nach Einf llen der Probe fallen gelassen oder gesch ttelt wurden d rfen nicht verwendet werden Gebrauchte Kartuschen d rfen nur zur Testwiederholung ge ffnet werden und dann auch nur um die eluierte Probe mit einer Pipette aus der Kammer S zu entnehmen Jede Xpert GBS Einwegkartusche dient zur Durchf hrung eines einzigen Tests Gebrauchte Kartuschen nicht erneut verwenden F r eine ordnungsgem e Entsorgung gebrauchter Probenkartuschen und nicht verwendeter Reagenzien fragen Sie bitte den Umweltbeauftragten Ihrer Einrichtung Dieses Material kann nach dem f deralen EPA Resource conservation and Recovery Act RCRA Eigenschaften von Sonderm ll besitzen der besondere Entsorgungsbedingungen vorschreibt Einrichtungen au erhalb der USA m ssen ihre l nderspezifischen Entsorgungsbedingungen f r Sonderm ll konsultieren Pr fen Sie bitte auch die r
116. istema GeneXpert Dx Como pode ver o Error Status Estado do erro visualizado na janela Clique no separador Errors Erros para aceder descri o dos erros 92 300 8907 Rev D September 2011 Test and Analyte Result Detail Errors History Motivos para repetir um ensaio ou dar inicio a procedimentos alternativos Assay Name xpert GBS G3 Version 3 Test Result BESTIE Analyte Ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result SPC 32 8 299 0 MA PASS GBS 35 0 233 0 POS PASS IC Bile 258 0 NA PASS For In Vitro Diagnostics Use Only Legend mm ri SPC Primary xi GBS Primary fg IC Primary 300 8 E 8 8 200 E El i 100 0 10 20 30 40 Cycles Figure 2 Sistema GeneXpert Dx Janela View Results Ver resultados Motivos para repetir um ensaio ou dar in cio a procedimentos alternativos Repita o teste ou d in cio a procedimentos alternativos caso ocorra um dos seguintes resultados de teste Error Erro o teste foi cancelado porque correu uma falha num componente do sistema foi alcan ada a press o m xima ou a verifica o da sonda n o foi aprovada Invalid Inv lido o SPC e ou o IC n o foram aprovados quando o EGB negativo Um resultado inv lido tamb m pode ser causado por bolhas de ar no tubo de reac o No Result Sem resultado o operador interrompeu o teste ocorreu uma f
117. l DNA potrebbe persistere dopo la terapia antimicrobica Per evitare la contaminazione dei campioni o dei reagenti si raccomanda di seguire le buone pratiche di laboratorio e di cambiare i guanti dopo ogni manipolazione dei campioni dei pazienti 300 8907 Rev D September 2011 Valori previsti Valori previsti Il 10 30 circa delle donne gravide colonizzato da GBS nella vagina o nel retto La colonizzazione da GBS pu essere transitoria cronica o intermittente Lo screening delle colture della vagina e del retto per GBS nell ultima fase della gestazione durante le cure prenatali pu identificare le donne che hanno la probabilit di essere colonizzate da GBS al momento del parto 3 In vari studi sono stati riportati valori di sensibilita pari all 87 83 92 CT e al 69 57 79 CT e di specificita pari al 96 95 98 CI e al 92 89 94 CT per colture prenatali tardive per l identificazione dello stato di colonizzazione al momento del parto Durante le valutazioni cliniche del test Xpert GBS Assay il 25 4 201 su 791 delle donne era colonizzato da GBS secondo i metodi colturali Caratteristiche sulle prestazioni Prestazioni cliniche Le caratteristiche sulle prestazioni di Xpert GBS Assay sono state determinate in uno studio sperimentale prospettico in pi laboratori presso sei istituti con servizi di maternit negli Stati Uniti Ciascun istituto aveva un programma di screening basato su coltura o su test di
118. l campione Aprire le cartucce usate solo per rieseguire il test e rimuovere solo il campione eluito dalla camera S con una pipetta Ciascuna cartuccia Xpert GBS monouso utilizzata per elaborare un analisi Non riutilizzare le cartucce usate Consultare il personale addetto allo smaltimento dei rifiuti ambientali del proprio istituto per il corretto smaltimento delle cartucce usate e dei reagenti non utilizzati Questo materiale pu rientrare tra i rifiuti pericolosi in base alla normativa stabilita dalla EPA Resource Conservation and Recovery Act RCRA e richiedere requisiti di smaltimento specifici Controllare le normative regionali e locali che possono differire dalla normativa nazionale sullo smaltimento Gli istituti al di fuori degli USA devono controllare le normative sullo smaltimento dei rifiuti pericolosi del proprio paese Conservare il kit Xpert GBS a 2 28 C Il reattivo 2 contiene Idrossido di Sodio pH gt 12 5 R34 EU Risk che e corrosivo per gli occhi e la pelle e necessita une IN protezione degli occhi e della pelle x Raccolta e trasporto dei campioni AN Per ottenere un campione adeguato attenersi scrupolosamente alle istruzioni riportate in questa sezione Utilizzando il dispositivo di raccolta Cepheid prelevare i campioni attenendosi ai suggerimenti dei CDC Utilizzare la seguente procedura 1 Rimuovere la quantita in eccesso di secrezione o escrezione 2 Rimuovere entrambi i tamponi marcati dal contenitore di t
119. leccionar ensaio Reagent Lot ID ID do lote de reagente Cartridge SN N s rie do cartucho e Expiration Date Prazo de validade 5 Na caixa Sample ID ID da amostra leia ou introduza a ID da amostra Certifique se de que introduz a ID da amostra correcta A ID da amostra est associada aos resultados do teste e apresentada na janela View Results Ver resultados e em todos os relat rios 6 Clique em Start Test Iniciar teste Na caixa de di logo apresentada introduza a sua palavra passe 90 300 8907 Rev D September 2011 Controlo de qualidade 7 Abra a porta do m dulo do instrumento com a luz verde a piscar e coloque o cartucho 8 Feche a porta O teste inicia se e a luz verde p ra de piscar Quando o teste termina a luz desliga se 9 Antes de abrir a porta do m dulo e retirar o cartucho aguarde at o sistema desbloquear a porta 10 Se for absolutamente necess rio o eluato da amostra pode ser recuperado da c mara do cartucho assinalada com um S usando uma pipeta de transfer ncia Este eluato pode ser usado como reserva da segunda zaragatoa n o utilizada e recolhida da paciente para os testes de susceptibilidade efectuados pelo laborat rio de microbiologia As culturas a partir do Reagente 1 Xpert GBS ainda n o foram validadas Os laborat rios devem validar os seus procedimentos de cultura ou usar a segunda zaragatoa recolhida para efectuar a identifica o baseada em culturas e os testes de susceptibilidade
120. les de pacientes antes y durante el parto obtenidas con el dispositivo de recogida Cepheid n mero de referencia 900 0370 Este producto s lo se puede utilizar con el sistema GeneXpert Dx No se recomienda el uso de un sistema de recogida y transporte de muestras distinto de los especificados en la secci n Material necesario no suministrado El uso del ensayo Xpert GBS de otra procedencia cl nica no se ha evaluado y las caracter sticas de rendimiento de esta prueba se desconocen para otro tipos de muestras Se pueden obtener resultados err neos debido a una recogida de muestras incorrecta manipulaci n o almacenamiento de muestras recomendado en caso de error t cnico mezcla de la muestra o debido a que la prueba no detecta el n mero de organismos de la muestra Se deben seguir atentamente las instrucciones de este documento y las instrucciones del Protocolo de recogida de muestras vaginales y rectales para evitar resultados err neos La toma de muestras con hisopo tanto en la parte inferior de la vagina como en el recto aumenta significativamente el rendimiento en comparaci n con la toma de muestras en el cuello uterino o la vagina sin pasar el hisopo por el recto Debido a que la detecci n de estreptococos del grupo B depende del n mero de organismos presentes en la muestra los resultados fiables dependen de la recogida manipulaci n y almacenamiento correctos de las muestras Se recomienda realizar una prueba entre las semanas 35 y 37
121. lonisierung ist wahrscheinlich SPC NA keine Angaben IC NA keine Angaben Sondenpriifung PASS BESTANDEN Der zugeh rige zweite Abstrichtupfer der Patientin im Sammel Transportbeh lter kann zur Durchf hrung eines antimikrobiellen Sensibilit tstests benutzt werden Falls erforderlich kann die gebrauchte Kartusche als Backup f r den Sensibilit tstest an das Mikrobiologielabor gesendet werden NEGATIVE NEGATIV Es wurde keine GBS Nukleins ure nachgewiesen eine GBS Kolonisierung ist nicht wahrscheinlich GBS NEG SPC PASS BESTANDEN IC PASS BESTANDEN Sondenpr fung PASS BESTANDEN 40 300 8907 Rev D September 2011 Interpretation der Ergebnisse INVALID UNG LTIG Es kann nicht ermittelt werden ob GBS vorhanden sind oder nicht IC und oder SPC erf llt erf llen die Akzeptanzkriterien nicht oder im Reaktionsgef haben sich Luftblasen gebildet GBS INVALID UNG LTIG SPC FAIL NICHT BESTANDEN IC FAIL NICHT BESTANDEN Sondenpr fung PASS BESTANDEN Die SPC und oder die IC wurde n nicht bestanden ERROR FEHLER Es kann nicht ermittelt werden ob GBS vorhanden sind oder nicht Eine Systemkomponente ist ausgefallen der Maximaldruck wurde erreicht oder die Sondenpr fung wurde nicht bestanden GBS NO RESULT KEIN ERGEBNIS SPC NO RESULT KEIN ERGEBNIS IC NO RESULT KEIN ERGEBNIS Sondenpr fung FAIL NICHT BESTANDEN Wenn die S
122. lture onto BAP Specific identification of colonies suggestive of GBS was done with slide agglutination tests Overall Results The performance characteristics of the Xpert GBS Assay were determined from the evaluation of laboratory testing done on specimens from 794 maternity patients 373 antepartum and 421 intrapartum Three women had no results by culture and were excluded from analyses 0 were Xpert GBS positive and 3 were Xpert GBS negative leaving 791 culture results that could be evaluated All subjects had culturing done as described above and most also had a 2 GBS NAAT performed The 2 4 NAAT targets a sequence in the cfb gene and was previously FDA cleared results from this test were not used in performance estimations Of the 791 cases the Xpert 8 300 8907 Rev D September 2011 Performance Characteristics GBS assay yielded 726 reportable results on the first attempt 91 8 There were 65 non reportable results i e invalid error or no result 55 of these cases resolved upon repeat testing Overall 201 women had cultures positive for GBS either from the single swab used for culture or the eluted swabs from Xpert GBS and 2 d NAAT testing The Xpert GBS assay yielded 168 positive results initially 168 201 83 6 After repeat testing the positive results increased to 178 201 or 88 6 590 women had negative cultures and 520 were negative initially with Xpert GBS testing 88 1 and 561 after repeat testing 95 1 T
123. luaciones clinicas del ensayo Xpert GBS el 25 4 201 de 791 de las mujeres resultaron estar colonizadas con EGB mediante m todos de cultivo Caracteristicas de funcionamiento Resultados clinicos Las caracteristicas de funcionamiento del ensayo Xpert GBS se han determinado en un estudio de investigaci n realizado en seis centros con servicios de maternidad en Estados Unidos Cada centro ha dispuesto de un programa de detecci n basado en una prueba de cultivo o de amplificaci n de cido nucleico NAAT Las pruebas se han realizado en varios laboratorios clinicos asociados a cada centro y al rea de partos En el estudio han participado mujeres antes y durante y el parto Para participar en el estudio durante el parto las pacientes debieron presentar un consentimiento por escrito para especificar que estaban de parto y no presentaban ninguna contraindicaci n para la exploraci n vaginal por ejemplo hemorragia Para participar en el estudio antes del parto las pacientes debieron presentar un consentimiento por escrito para especificar que se encontraban entre las semanas 35 y 37 de gestaci n y no presentaban ninguna contraindicaci n para la exploraci n vaginal por ejemplo hemorragia No se observaron pruebas de placenta previa ni ninguna indicaci n urgente para provocar el parto y no se utiliz ningun antibi tico en la semana anterior al ingreso de todas las pacientes Se recogieron muestras vaginales y rectales de cada una de las 7
124. ministra o intravenosa dos antibi ticos n o atrasada pela espera dos resultados O ensaio Xpert GBS n o fornece resultados de susceptibilidade S o necess rios isolados de culturas para efectuar os testes de susceptibilidade conforme recomendado para as mulheres al rgicas penicilina Resumo e explica o A infec o bacteriana por EGB est associada com doen as graves em rec m nascidos nascidos de gr vidas colonizadas por esse microrganismo O EGB transmitido pelas mulheres colonizadas com EGB aos seus filhos antes do parto anteparto ou durante o parto intraparto Nos EUA a infec o por EGB a principal causa de morte dos rec m nascidos que desenvolvem s psis pneumonia ou meningite 123 Hoje em dia a norma para a preven o do doen a neonatal por EGB o rastreio das gr vidas s 35 37 semanas de gesta o para determinar o seu estado de coloniza o pelo EGB A maioria dos testes de EGB anteparto efectuada atrav s de cultura e normalmente os resultados finais demoram dois a tr s dias Para a maioria das mulheres este intervalo de tempo pode ser adequado para a obten o de resultados de cultura de EGB anteparto contudo para algumas mulheres os resultados EGB poder o n o estar dispon veis no momento do in cio do trabalho de parto O ensaio Xpert GBS desenvolvido pela Cepheid para detectar os EGB directamente de zaragatoas vaginais rectais demora cerca de 50 minutos ou menos desde que o tes
125. n lokalen einzelstaatlichen und bundesstaatlichen Organisationen verwendet werden Es sind die weiter unten beschriebenen externen MicroBioLogics Kontrollverfahren anzuwenden 1 Den Beutel am Einschnitt aufrei en und den KWIK STIK entnehmen 2 Den unteren Teil der Ampulle in den Deckel dr cken um das hydrierende Fluid freizusetzen 3 Vertikal halten und punktieren um den Fl ssigkeits Flow durch den Schaft in den unteren Bereich des Ger ts mit den K gelchen zu erleichtern 4 Um die Aufl sung des lyophilisierten Zellk gelchens zu erleichtern das K gelchen zerdr cken und den unteren Kammerbereich vorsichtig zusammendr cken 5 Den KWIK STIK auseinanderziehen um den Abstrichtupfer freizugeben und den Tupfer in die Kammer S in die Xpert GBS Kartusche legen 6 Der KWIK STIK Abstrichtupfer ist nun zur Durchf hrung des Xpert GBS Testverfahrens bereit Die Positivkontrolle der Klasse Niedrig erreicht nahezu 620 CFU Abstrichtupfer 36 Ct an GBS w hrend die Negativkontrolle nahezu 17 000 CFU Abstrichtupfer an Lactobacillus acidophilus 0 Ct oder gt 42 Ct erreicht Interpretation der Ergebnisse Das GeneXpert Dx System interpoliert die Ergebnisse aus gemessenen Fluoreszenzsignalen und eingebetteten Berechnungsalgorithmen die Ergebnisse werden im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen angezeigt Die folgenden Ergebnisse sind m glich POSITIVE POSITIV Es wurde GBS Nukleins ure nachgewiesen eine GBS Ko
126. n sono stati valutati I laboratori devono validare le proprie procedure di coltivazione o utilizzare il secondo tampone raccolto per eseguire l identificazione colturale e il test di sensibilit Le cartucce utilizzate devono essere smaltite negli appositi contenitori per rifiuti in base alle pratiche standard dell istituto Visualizzazione e stampa dei risultati Per istruzioni su come visualizzare e stampare i risultati vedere il Manuale dell operatore del sistema GeneXpert Controllo di qualit Ogni analisi include i seguenti controlli interni e un controllo sonda San ple processing control SPC Controllo di processamento del campione assicura la corretta elaborazione del campione L SPC B globigii sotto forma di una microsfera disidratata ed incluso in ogni cartuccia L SPC monitora la lisi e il processo di eluizione L SPC deve essere superato generare una soglia del ciclo Ct valida in un campione negativo e pu non aumentare in un campione altamente positivo L SPC viene superato se soddisfa i criteri di accettazione assegnati Internal control IC Controllo interno verifica la funzionalit dei reagenti della reazione di amplificazione PCR e l assenza di inibizione che bloccherebbe l amplificazione della DNA L IC deve essere superato generare una Ct valida in un campione negativo e pu non aumentare in un campione altamente positivo L IC viene superato se soddisfa i criteri di accettazione assegnati Pr
127. n vorliegen Mit der Sondenpr fungsfunktion werden die Dehydrierung der Reagenzien die Bef llung des PCR Gef es in der Kartusche die Sondenintegrit t und die Farbstabilit t berpr ft Die GBS Primer und die Sonde erkennen ein Ziel innerhalb einer 3 DNA Region neben dem cfb Gen von agalactiae Nachdem ein Abstrich genommen und dorthin gebracht wurde der Abstrichtupfer wird in die Xpert GBS Kartusche eingef hrt Das GeneXpert Dx System f hrt die Probenvorbereitung durch indem es das Probenmaterial aus dem Abstrich eluiert das Probenreagenz mit der SPC Bacillus globigii in Form eines K gelchens in der Kartusche und dem Behandlungsreagenz vermischt das Zellmaterial auf einem Filter einf ngt die Zellen lysiert und die DNA eluiert Anschlie end wird die DNA L sung mit PCR Trockenreagenzien gemischt und zur Echtzeit PCR bzw zum Echtzeit Nachweis in das integrierte Reaktionsgef bertragen Das GeneXpert Dx System interpoliert die Ergebnisse aus gemessenen Fluoreszenzsignalen und eingebetteten Berechnungalgorithmen Die Ergebnisse k nnen angezeigt und gedruckt werden Das Testverfahren dauert h chstens ca 50 Minuten Reagenzien und Instrumente Im Lieferumfang enthaltenes Material Das Xpert GBS Kit GXGBS 100N 10 enth lt Reagenzien zur Verarbeitung von 10 Patienten oder Qualit tskontrollproben Das Kit enth lt Folgendes Xpert GBS Kartuschen mit integrierten Reaktionsgef en 10 K gelchen gefriergetrocknet 1 pro
128. n wurden 6 Die Untergruppe der Frauen w hrend der Entbindung bei denen vor dem Blasensprung Proben entnommen wurden Unterschiede zwischen den vor der Entbindung entnommenen Proben und den w hrend der Entbindung genommenen Proben gab es hierbei nicht 7 Positiver Vorhersagewert 8 Negativer Vorhersagewert Table 2 Leistung des Xpert GBS und des zweiten NAAT Tests im Verh ltnis zum Kulturverfahren Xpert Zweiter GPS NAAT Kategorie Sensitivit t Unterer CI ObererCl Spezifit t UntererCl ObererCl Sensitivit t Unterer CI ObererCl Spezifit t Unterer CI Oberer CI Insgesamt 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 77 9 71 5 83 5 96 3 94 4 97 6 178 201 561 580 155 199 567 589 Antepartum 85 3 76 9 91 5 98 1 95 6 99 4 74 5 64 9 82 6 97 0 94 3 98 7 87 102 259 264 76 102 263 271 Intrapartum 91 9 84 7 96 4 95 6 92 7 97 6 81 4 72 3 88 6 95 6 92 7 97 6 91 99 302 316 79 97 304 318 Blasensprung 91 3 72 0 98 9 94 3 88 1 97 9 90 9 70 8 98 9 95 2 89 2 98 4 21 23 100 106 20 22 100 105 Kein 92 1 83 6 97 0 96 2 92 6 98 3 78 7 67 7 87 3 95 8 92 1 98 0 Blasensprung3 70 76 202 210 59 75 204 213 Ziel des zweiten NAAT Tests war eine Sequenz im cfb Gen der Test war zuvor von der US amerikanischen Arzneimittelbeh rde zugelassen worden Die folgende Tabelle enth lt einen direkten Vergleich der beiden PCR Tests de
129. na causa importante di infezione da GBS negli Stati Uniti e i ceppi VI e VIII sono diventati prevalenti tra le donne giapponesi Le colture quantificate sono state testate in quattro repliche La tabella 6 mostra la concentrazione minima di ciascun sottotipo che produce un risultato positivo in tutte e quattro le repliche Table 6 Limite di rilevamento ottenuto per ogni sierotipo analizzato Sierotipo CFU tampone ATCC 12973 11 250 la c 250 Ib c 250 Il 250 Ill 250 IV 250 IVc 250 V 250 VI 250 VII 250 VIII 250 300 8907 Rev D September 2011 83 Italiano Riproducibilita Un pannello di campioni a concentrazioni variabili di GBS e Lactobacillus acidophilus negativo amp stato analizzato in triplicato in 10 giorni diversi in ciascuno dei tre laboratori 4 campioni x 3 x 10 giorni x 3 laboratori In ognuno dei 3 laboratori stato utilizzato un lotto dei kit Xpert GBS secondo la procedura Xpert GBS Table 7 Riepilogo dei risultati di riproducibilit CFU campione Risultati attesi Concordanza concordanza tampone Laboratorio 1 Laboratorio 2 Laboratorio 3 Intervallo Ct totale totale GBS negativo 30 30 30 30 30 30 Negativo 90 90 100 L acidophilus 0 0 gt 42 1 7 x 104 CFU tampone GBS basso 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 6 2 x 10 CFU 31 41 tampone GBS moderato 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 8 3 x 103 CFU 27 37 tampone GBS alto 3
130. niciar prueba En el cuadro de di logo que aparece escriba su contrase a Abra la puerta del m dulo del instrumento mientras la luz est parpadeando en verde y cargue el cartucho Cierre la puerta La prueba se inicia y la luz verde deja de parpadear Una vez finalizada la prueba la luz se apaga Espere hasta que el sistema desbloquee la puerta para abrir la puerta del m dulo y retirar el cartucho Si resulta absolutamente necesario puede recuperarse la muestra diluida del compartimento marcado como S del cartucho con ayuda de una pipeta de transferencia Esta muestra diluida puede emplearse como muestra de respaldo del segundo hisopo tomado de la paciente para las pruebas de sensibilidad antimicrobiana por parte del laboratorio de microbiolog a El cultivo con el reactivo 1 de Xpert GBS no se ha validado Los laboratorios deben validar sus propios procedimientos de cultivo o utilizar el segundo hisopo para realizar una identificaci n basada en el cultivo y las pruebas de sensibilidad Los cartuchos usados deben desecharse en los contenedores de residuos de muestras apropiados de acuerdo con las pr cticas est ndar del centro Visualizaci n e impresi n de los resultados Si desea obtener instrucciones detalladas sobre c mo ver e imprimir los resultados consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx 300 8907 Rev D September 2011 57 Espanol Control de calidad Cada prueba incluye los siguientes controles inter
131. nos y una comprobaci n de sonda Sample processing control SPC Control de procesamiento de muestra CPM garantiza que la muestra se ha procesado correctamente El CPM es B g obigii en forma de perla seca y se incluye en cada cartucho El CPM controla el procesamiento de la lisis y de la diluci n El CPM debe ser apto generar un umbral de ciclo Uc v lido en una muestra negativa y puede no amplificar en una muestra de positivo alto El CPM es correcto si cumple los criterios de aceptaci n asignados Internal control IC Control interno CI verifica la funcionalidad de los reactivos de la RCP y la ausencia de inhibici n que evitar a la amplificaci n por RCP El CI debe ser apto generar un Uc v lido en una muestra negativa y puede no amplificar en una muestra de positivo alto El control interno es correcto si cumple los criterios de aceptaci n asignados Probe check Comprobaci n de sonda antes de iniciar la reacci n en cadena de la polimerasa el sistema GeneXpert Dx mide la se al de fluorescencia de las sondas para controlar la rehidrataci n de las perlas el llenado del tubo de reacci n la integridad de la sonda y la estabilidad del fluorocromo La comprobaci n de sonda es correcta si cumple los criterios de aceptaci n asignados External controls Controles externos KWIK STIK MicroBioLogics ref 8164 puede emplearse para formaci n prueba de evaluaci n y CC externo del sistema GeneXpert Dx Los controles
132. nouso solo per ripetere l analisi Materiali necessari ma non forniti KWIK STIK MicroBioLogics cat no 8164 un controllo positivo basso un controllo positivo moderato un controllo positivo alto per ogni specie di streptococco gruppo B e L acidophilus come controllo negativo Avvertenze e precauzioni DY Trattare tutti i campioni biologici incluse le cartucce usate come se fossero in grado di trasmettere agenti infettivi Poich amp spesso impossibile sapere quale campione potrebbe essere infettivo tutti i campioni biologici devono essere trattati adottando le precauzioni universali Le linee guida per la manipolazione dei campioni sono disponibili presso gli U S Center for Disease Control and Prevention Centro per il controllo e la prevenzione delle malattie e il Clinical and Laboratory Standards Institute Istituto per gli standard clinici e di laboratorio in precedenza denominato National Committee for Clinical Laboratory Standards Attenersi alle procedure di sicurezza del proprio istituto relative alla manipolazione di sostanze chimiche e di campioni biologici Xpert GBS Assay non fornisce risultati della sensibilita Per eseguire i test di sensibilita sono necessari isolati colturali come consigliato per le donne allergiche alla penicillina Non aprire il coperchio della cartuccia Xpert GBS eccetto quando si aggiunge il campione Non utilizzare una cartuccia che amp caduta o stata scossa dopo aver aggiunto i
133. nster GeneXpert Dx System View Results Ergebnisse anzeigen In dem Fenster wird der Fehlerstatus angezeigt Klicken Sie auf die Registerkarte Errors Fehler um die Fehlerbeschreibungen anzuzeigen Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name XpertGES G3 Version 3 Test Result ROSIE Analyte ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result SPC 328 299 0 NA PASS GBS 35 0 233 0 Pos PASS IC 31 2 258 0 NA PASS For In Vitro Diagnostics Use Only Legend o z 4 SPC Primary GBS Primary 1 IC Primary 300 8 e 8 8 200 e 100 o 10 20 30 40 Cycles Figure 2 Das Fenster View Results Ergebnisse anzeigen im GeneXpert Dx System Ld Gr nde f r eine Wiederholung des Tests oder f r die Anwendung anderer Verfahren Den Test wiederholen oder andere Verfahren anwenden wenn es zu einem der folgenden Testergebnisse kommt Error Fehler Der Test wurde abgebrochen da eine Systemkomponente ausgefallen ist der Maximaldruck erreicht wurde oder die Sondenpr fung nicht bestanden wurde Invalid Ung ltig Die SPC und oder die IC waren bei negativen GBS Ergebnis nicht erfolgreich Ung ltige Ergebnisse k nnen auch durch Luftblasen im Reaktionsgef verursacht werden No Result Kein Ergebnis Der Verantwortliche hat den Test abgebrochen w hrend des Tests ist es zu e
134. nte 18 a 24 horas e subcultura em gelose de sangue A identifica o espec fica das col nias sugestivas de EGB foi feita atrav s de testes de aglutina o em l mina Resultados totais As caracter sticas de desempenho do ensaio Xpert GBS foram determinadas a partir da avalia o dos testes laboratoriais efectuados com as amostras das 794 pacientes da maternidade 373 em anteparto e 421 em intraparto Tr s mulheres n o tiveram resultados nas culturas e foram exclu das das an lises 0 foram Xpert GBS positivo e 3 foram Xpert GBS negativo restando 791 resultados de culturas que podiam ser avaliados Foram feitas culturas para todas as participantes conforme descrito anteriormente e para a maioria tamb m foi efectuado um 2 NAAT para EGB O 2 NAAT tem como alvo uma sequ ncia no gene cfd e aprovado pela FDA os resultados deste teste n o foram usados nas estimativas do desempenho Dos 791 casos o ensaio Xpert GBS produziu 726 resultados report veis na primeira tentativa 91 8 Obtiveram se 65 resultados n o report veis ou seja inv lidos com erro ou sem resultado destes casos 55 foram solucionados mediante a repeti o do teste Globalmente 201 mulheres apresentaram culturas positivas para EGB quer a partir da zaragatoa nica usada para a cultura quer a partir das zaragatoas elu das do teste Xpert GBS e do 2 NAAT Inicialmente o ensaio Xpert GBS produziu 168 resultados positivos 168 201 83 6 Ap s repeti o dos
135. ntre 2 y 28 C No utilice reactivos o cartuchos despu s de la fecha de caducidad indicada Material necesario pero no suministrado Sistema GeneXpert Dx el n mero de referencia varia seg n la configuraci n Instrumento GeneXpert ordenador lector manual de c digos de barras y Manual del operador Impresora consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx para conocer las indicaciones sobre compatibilidad Dispositivo de recogida Cepheid n mero de referencia 900 0370 Pipeta de transferencia est ril desechable s lo para la repetici n de pruebas Material disponible pero no suministrado KWIK STIK MicroBioLogics ref 8164 control positivo de nivel bajo control positivo de nivel moderado control positivo de nivel alto de la especie estreptococos grupo B y L acidophilus como control negativo una unidad de cada uno de ellos Advertencias y precauciones UY JE 7 2 IN e J IN Trate todas las muestras biol gicas incluidos los cartuchos usados como posibles agentes de transmisi n de infecciones Dado que es imposible determinar los posibles focos de infecci n todas las muestras biol gicas se deben tratar teniendo en cuenta las precauciones universales Las directrices para la manipulaci n de muestras se pueden consultar en U S Center for Disease Control and Prevention Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades de EE UU y el Clinical and Laboratory Standards Institute Instit
136. o cartucho Xpert GBS Nao insira as duas zaragatoas no cartucho Volte a colocar a segunda zaragatoa no tubo de colheita transporte para os testes de susceptibilidade antimicrobiana posteriores a serem efectuados pelo laborat rio de microbiologia para as pacientes EGB positivo S o necess rios isolados de culturas para efectuar os testes de susceptibilidade conforme recomendado para as mulheres al rgicas penicilina Eleve a zaragatoa de modo a que o trago fique centrado no entalhe Quebre a zaragatoa empurrando a respectiva haste para a direita Feche a tampa do cartucho S Amostra Figure 1 Cartucho Xpert GBS vista de cima In cio do teste Esta sec o lista os passos b sicos para realizar o teste Para obter instru es detalhadas consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx 1 Ligue o instrumento GeneXpert Dx e em seguida ligue o computador o software GeneXpert iniciar se automaticamente 2 Inicie sess o no software do sistema GeneXpert Dx utilizando o nome de utilizador e a palavra passe 3 Na janela do sistema GeneXpert Dx clique em Create Test Criar teste apresentada a caixa de di logo Scan Cartridge Barcode Ler c digo de barras do cartucho 4 Leia o c digo de barras do cartucho Xpert GBS apresentada a janela Create Test Criar teste Utilizando as informa es do c digo de barras o software vai preencher automaticamente as caixas dos campos seguintes Select Assay Se
137. obe check Controllo sonda prima dell avvio della reazione PCR il sistema GeneXpert Dx misura il segnale di fluorescenza dalle sonde per monitorare la reidratazione delle microsfere il riempimento della provetta di reazione l integrit della sonda e la stabilit del fluoroforo Il controllo sonda viene superato se soddisfa i criteri di accettazione assegnati External controls Controlli esterni KWIK STIK MicroBioLogics cat no 8164 pu essere utilizzato per il training il test di competenza e il CQ esterno del sistema GeneXpert Dx I controlli esterni possono essere utilizzati in accordo con le organizzazioni di accreditamento locali statali e federali se applicabile Attenersi alla procedura per il controllo esterno MicroBioLogics descritta di seguito Strappare a livello della tacca per aprire la busta e rimuovere il KWIK STIK Premere la parte inferiore dell ampolla nel tappo per rilasciare il liquido idratante Tenere in posizione verticale e picchiettare delicatamente per facilitare il flusso del liquido attraverso il collo nella parte inferiore dell unit che contiene il pellet 300 8907 Rev D September 2011 75 Italiano 4 Per facilitare la risospensione del pellet di cellule liofilizzato schiacciare il pellet e premere delicatamente la parte inferiore della camera 5 Staccare il KWIK STIK per rilasciare il tampone e porre quest ultimo nella camera S della cartuccia Xpert GBS 6 Il tampone KWIK STIK pronto pe
138. ode as zaragatoas tr s vezes para garantir uma amostra uniforme nas duas zaragatoas Usando as mesmas duas zaragatoas marcadas insira as a roximadamente 2 5 cm para al m do esf ncter anal e rode as suavemente 3 gt para recolher amostras das criptas anais Coloque as duas zaragatoas marcadas no contentor de transporte Se as amostras v o ser processadas nas 24 horas seguintes conserve as temperatura ambiente Se as amostras n o v o ser testadas nas 24 horas seguintes refrigere as at ao momento do teste As amostras conservadas a 2 8 C s o est veis at seis dias 300 8907 Rev D September 2011 89 Portugu s Procedimento Preparag o do cartucho Important Inicie o teste nos 15 minutos seguintes adi o da amostra ao cartucho Note Apenas necess ria uma zaragatoa segunda zaragatoa suplementar e pode ser usada para os testes de susceptibilidade S o necess rios isolados de culturas para efectuar os testes de susceptibilidade conforme recomendado para as mulheres al rgicas penicilina N o adicione 2 zaragatoas a um nico cartucho Para adicionar a amostra ao cartucho XpertGBS 1 2 Mm O Retire o cartucho da embalagem Abra a tampa do cartucho Retire as zaragatoas marcadas do contentor Com um movimento rotativo friccione suavemente as zaragatoas uma na outra de modo a que haja uma quantidade igual de amostras nas duas zaragatoas Insira uma das zaragatoas na c mara S d
139. ografia Bibliografia 1 Schrag et al A population based comparison of strategies to prevent early onset group B streptococcal disease in neonates NEJM 2002 247 4 233 239 2 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease MMWR 2002 51 No RR 11 1 26 3 Schuchat A Epidemiology of Group B Streptococcal Disease in the United States Shifting Paradigms Clin Micro Rev 1998 11 3 497 513 4 Davis et al Multicenter Study of a Rapid Molecular Based Assay for the Diagnosis of Group B Streptococcus Colonization in Pregnant Women C Infectious Disease 2004 30 1129 35 5 Puopolo et al Early Onset Group B Streptococcal Disease in the Era of Maternal Screening Pediatrics 2005 115 1240 1246 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW eds 1993 HHS Publication number CDC 93 8395 7 Clinical and Laboratory Standards Institute anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections Approved Guideline Documento M29 refere se edi o mais recente 8 Yancey MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 Paoletti Lawrence C Ph D Research Inte
140. on du GeneXpert Dx system pour obtenir des indications de compatibilit Appareil de collecte de Cepheid r f rence 900 0370 Pipette de transfert jetable et st rile uniquement pour effectuer un nouveau test Mat riel disponible mais non fourni KWIK STIK MicroBioLogics catalogue n 8164 un contr le positif de niveau faible un contr le positif de niveau moyen un contr le positif de niveau lev et un contr le n gatif de L acidophilus pour chacune des esp ces de Streptocoque Groupe B Avertissements et pr cautions DY 2 28 Fi de a A Traitez tous les chantillons biologiques y compris les cartouches usag es comme s ils taient susceptibles de transmettre des agents infectieux Tous les chantillons biologiques doivent tre trait s avec des pr cautions identiques car il est souvent impossible de savoir lequel peut tre infectieux Les U S Centers for Disease Control and Prevention Centres am ricains pour le contr le et la pr vention des maladies et le Clinical and Laboratory Standards Institute Institut des normes cliniques et de laboratoire anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards tiennent disposition des directives concernant la manipulation des chantillons Respectez les proc dures de s curit de votre institution pour la manipulation de produits chimiques et d chantillons biologiques Le Test Xpert GBS ne fournit pas de r sultats relatifs la pr
141. ondenpr fung bestanden wurde wurde der Fehler durch den Ausfall einer Systemkomponente verursacht NO RESULT KEIN ERGEBNIS Es kann nicht ermittelt werden ob GBS vorhanden sind oder nicht Der Verantwortliche hat den Test abgebrochen w hrend des Tests ist es zu einem Stromausfall gekommen oder es sind Probleme im Zusammenhang mit der Kartusche aufgetreten GBS NO RESULT KEIN ERGEBNIS SPC NO RESULT KEIN ERGEBNIS IC NO RESULT KEIN ERGEBNIS Sondenpr fung NA keine Angaben Hinweis Wenn als Ergebnis INVALID UNG LTIG ERROR FEHLER oder NO RESULT KEIN ERGEBNIS angezeigt wird kann der Test wiederholt werden oder es k nnen andere Methoden angewandt werden Falls als Ergebnis ERROR FEHLER angezeigt wird Abbruch bei Maximaldruck oder Sondenpr fung nicht bestanden ist unverz glich eine Testwiederholung oder ein Test mit dem zweiten Abstrichtupfer durchzuf hren oder es sind andere Methoden anzuwenden Das Ergebnis ERROR FEHLER kann in den ersten 30 Minuten des Tests auftreten Bei einer Testdurchf hrung w hrend der Entbindung ist eine Testwiederholung u U nicht m glich und von den Vorgehensweisen und Richtlinien der jeweiligen Einrichtung abh ngig Die Koordination zwischen den rzten und dem Testlabor ist wichtig damit Antibiotikagaben solange die Ergebnisse noch ausstehen nicht verz gert werden 300 8907 Rev D September 2011 41 Deutsch Abbildung 2 zeigt das Fe
142. os de RI PCR transcriptase reversa PCR em tempo real O sistema composto por um instrumento um computador e software pr instalado para efectuar testes em amostras colhidas e visualizar os resultados O sistema requer a utiliza o de cartuchos GeneXpert descart veis de utiliza o nica que cont m os reagentes de PCR e onde decorre o processo de PCR Como os cartuchos s o aut nomos a contamina o cruzada minimizada Para uma descri o completa do sistema consulte o Manual do utilizador do sistema GeneXpert Dx O ensaio Xpert GBS inclui reagentes para a detec o simult nea de DNA alvo de EGB um controlo de processamento de amostras SPC para monitorizar as condi es de processamento e um controlo interno IC para monitorizar as condi es do PCR e a aus ncia de inibi o da reac o A verifica o da sonda verifica a reidrata o dos reagentes o enchimento do tubo de PCR no cartucho 300 8907 Rev D September 2011 87 Portugu s a integridade da sonda e a estabilidade do corante Os primers de EGB e a sonda detectam um alvo na regi o 3 do DNA adjacente ao gene cfb do S agalactiae Ap s a colheita e o transporte de uma zaragatoa da amostra para a zona de ensaio do GeneXpert o cotonete amp inserto no cartucho GBS Xpert O sistema GeneXpert Dx efectua a preparag o da amostra eluindo a amostra da zaragatoa misturando o reagente de amostra com o SPC Bacillus globigii sob a forma de uma esfera dentro do ca
143. owerCl UpperCl Specificity LowerCl Upper Cl Overall 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 77 9 71 5 83 5 96 3 94 4 97 6 178 201 561 580 155 199 567 589 Antepartu 85 3 76 9 91 5 98 1 95 6 99 4 74 5 64 9 82 6 97 0 94 3 98 7 m 87 102 259 264 76 102 263 271 Intrapartu 91 9 84 7 96 4 95 6 92 7 97 6 81 4 72 3 88 6 95 6 92 7 97 6 m 91 99 302 316 79 97 304 318 ROM 91 3 72 0 98 9 94 3 88 1 97 9 90 9 70 8 98 9 95 2 89 2 98 4 21 23 100 106 20 22 100 105 No ROM 92 1 83 6 97 0 96 2 92 6 98 3 78 7 67 7 87 3 95 8 92 1 98 0 70 76 202 210 59 75 204 213 The 2 4 NAAT targets a sequence in the cfb gene and was previously FDA cleared 2 Subset of intrapartum women who had specimens collected after membrane rupture rupture of membrane ROM 3 Subset of intrapartum women who had specimens collected before membrane rupture ROM The following table shows a direct comparison of the 2 PCR tests Xpert GBS and and NAAT Table 3 Direct Comparison of the Two PCR Tests Xpert GBS Pos Xpert GBS Neg Invalid Error No Result Total 2 NAAT Culture Pos Culture Neg Culture ND Total Xpert 2 NAAT Pos 2 dNAATNeg Unresolved 2 NAATPos 2 NAATNeg Unresolved 2 dNAATPos 2 dNAATNeg Unresolved GBS 149 27 2 10 9 0 0 0 0 197 6 17 0 11 549 1 0 3 0 587 0 0 0 1 9 0 0 0 0 10 165 44 2 22 567 1 0 3 0 794 o 300 8907 Rev D September 2011
144. p cie Streptococcus Grupo B um controlo positivo baixo um controlo positivo moderado e um controlo positivo alto e L acidophilus como controlo negativo Advert ncias e precau es UL Trate todas as amostras biol gicas incluindo os cartuchos usados como sendo capazes de transmitir agentes infecciosos Como muitas vezes imposs vel saber quais podem ser infecciosas todas as amostras biol gicas devem ser tratadas com precaug es universais As directivas para o manuseamento de amostras est o dispon veis no Center for Disease Control and Prevention CDC e no Clinical and Laboratory Standards Institute anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards dos EUA Siga os procedimentos de seguranga da sua instituig o para trabalhar com produtos qu micos e manusear amostras biol gicas O ensaio Xpert GBS n o fornece resultados de susceptibilidade S o necess rios isolados de culturas para efectuar os testes de susceptibilidade conforme recomendado para as mulheres al rgicas penicilina N o abra a tampa do cartucho Xpert GBS excepto para adicionar a amostra N o utilize um cartucho que caiu ou que foi agitado depois de ter adicionado a amostra N o abra um cartucho usado excepto para repetir um teste e nesse caso apenas para retirar a amostra elu da da c mara S com uma pipeta Cada cartucho Xpert GBS de utiliza o nica utilizado para processar um teste N o reutilize cartuchos usados
145. pfer durch Abknicken des Schafts nach rechts abbrechen Den Kartuschendeckel schlie en S Probe Figure 1 Xpert GBS Kartusche Draufsicht 38 300 8907 Rev D September 2011 Prozedur Testbeginn In diesem Abschnitt werden die Grundschritte der Testausf hrung beschrieben F r genauere Anweisungen das Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System verwenden 1 2 3 10 11 Schalten Sie das GeneXpert Dx System ein und anschlie end den Computer Die GeneXpert Software startet automatisch Mit Ihrem Benutzernamen und Kennwort bei der GeneXpert Dx Systemsoftware anmelden Im Fenster GeneXpert Dx System auf Create Test Test erstellen klicken Daraufhin wird das Dialogfeld Scan Cartridge Barcode Probenbeh lter Strichcode scannen angezeigt Den Strichcode der Xpert GBS Kartusche einscannen Das Fenster Create Test Test erstellen wird ge ffnet Mithilfe der Strichcodeinformationen gibt die Software automatisch die Daten in die folgenden Felder ein Select Assay Untersuchung ausw hlen Reagent Lot ID Reagenzienchargen ID Cartridge SN Kartuschen SN und Expiration Date Verfallsdatum Die Sample ID Proben ID in das Feld einscannen oder tippen Die Proben ID h ngt mit den Testergebnissen zusammen und wird im Fenster View Results Ergebnisse anzeigen und in allen Berichten angezeigt Auf Start Test Test starten klicken Das Kennwort in das angezeigte Dialogfeld eingeben Die T r des Instrumentenmoduls mit
146. pistage pr natal pour l identification des m res infect es et le test de pr disposition pour les femmes allergiques la p nicilline n est pas possible Pour les femmes n ayant b n fici d aucun soin pr natal celles pouvant accoucher avant terme ou celles dont les r sultats au test de SGB sont inconnus lors de l accouchement le test p rinatal peut fournir des r sultats et permettre d administrer temps des antibiotiques avant l accouchement si n cessaire Le Test Xpert GBS peut tre effectu tr s facilement 24 heures sur 24 7 jours sur 7 Le recours au test p rinatal peut entra ner une diminution de l utilisation d antibiotiques superflus chez les femmes pour lesquelles la prophylaxie n est pas indiqu e ainsi que l application d un traitement ad quat chez les femmes infect es par le SGB afin de r duire le risque de septic mies et de m ningites n onatales L efficacit d un test p rinatal de SGB chez les femmes enceintes qui commencent leur travail et accouchent sans que le taux de SGB soit connu n cessite la collecte rapide d chantillons et la capacit de fournir des r sultats rapidement afin de commencer l antibioprophylaxie comme recommand avant l accouchement Principe de la proc dure Le GeneXpert Dx system automatise et int gre la lyse d chantillons la purification et l amplification d acide nucl ique et la d tection de la sequence cible dans des chantillons complexes en utilisant la Transcription Inve
147. positifs Pr valence Initialement r p tition Estimation 95 95 Estimation 95 95 1 0 51 51 11 21 6 4 1 72 7 39 0 94 0 92 3 79 1 98 4 2 113 5 118 31 26 3 12 2 90 3 74 2 98 0 97 6 91 8 99 7 3 94 0 94 17 18 1 9 1 76 5 50 1 93 2 100 0 95 3 100 0 4 64 175 239 75 314 13 2 85 3 75 3 92 4 96 3 92 1 98 6 5 22 152 174 38 21 8 16 1 97 4 86 2 99 9 94 8 89 6 97 9 6 80 35 115 29 25 2 11 3 96 6 82 2 99 9 98 8 93 5 100 0 Total 373 418 791 201 25 4 65 10 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 Remarque Pour le site 6 3 r sultats de culture p rinatale dans de la g lose du sang taient manquants Analyse du temps d ex cution Les temps d ex cution pour les 390 sujets en phase p rinatale retenus pour le test clinique sont d crits ci dessous Le temps d ex cution moyen a partir du d but de la r alisation initiale du Test Xpert GBS jusqu au signalement des r sultats tait de 1 84 heures tous les 390 sujets Le temps d ex cution moyen pour les 360 sujets ayant donn des r sultats valides la premi re tentative tait de 1 76 heures Le temps d ex cution moyen pour les 30 sujets ayant donn des r sultats valides la seconde tentative tait de 2 74 heures Le temps d ex cution interm diaire pour les 360 chantillons ayant donn des r sultats valides tait de 1 47 heures et de 2 44 heures pour les 30 sujets ayant donn des r sultats valides lors de la
148. pproximately 50 minutes or less Reagents and Instruments Material Provided The Xpert GBS kit GXGBS 100N 10 contains sufficient reagents to process 10 patient or quality control specimens The kit contains the following Xpert GBS Assay Cartridges with integrated reaction tubes 10 Bead 1 freeze dried 1 per cartridge Polymerase inhibitor complex BSA bovine serum albumin Bead 2 freeze dried 1 per cartridge Primers Probes dNTPs Internal control DNA IC BSA bovine serum albumin Bead 3 freeze dried 1 per cartridge Sample Processing Control SPC 2000 B globigii spores preparation control spores Reagent 1 Tris Buffer EDTA surfactants 3 0 mL per cartridge Reagent 2 Sodium Hydroxide 3 0 mL per cartridge CD 1 per kit Assay Definition File ADF Instructions to import ADF into GX software Package Insert Note Material Safety Data Sheets MSDS for all reagents provided with this assay are available upon request from Cepheid Technical Support and are available on Cepheid s websites www cepheid com and www cepheidinternational com The bovine serum albumin BSA in this product was produced exclusively from bovine plasma sourced in the United States The manufacturing of the BSA is also performed in the United States No ruminant protein or other animal protein was fed to the animals the animals passed ante and post mortem testing During processing there was no commingling of the materi
149. ptember 2011 Leistungsmerkmale Tabelle 1 zeigt das Xpert GBS Testverfahren basierend auf den positiven und negativen Ergebnissen der GBS Kulturen bei 791 Patientinnen bei 3 Patientinnen waren die Kulturen berwachsen oder konnten aus anderen Gr nden nicht interpretiert werden Die dargestellten Auswertungen der Sensitivit t der Spezifit t und der negativen und positiven Werte basieren auf den Ergebnissen nach der Testwiederholung Nach der Testwiederholung waren noch 10 F lle ungekl rt n 781 Table Xpert GBS Ergebnisse und Leistungsbewertung nach Patientenkategorie Patientinnen Patientinnen a s Ne FER RA ii 1 A PR A ensitivit t nac pezifit t nac nac nacl Patienten E a N mit positiv er mit negativer Testwiederholung Testwiederholung Testwiederholung Testwiederholung kategorie Ergebnisse insgesamt Kultur Kultur Zuverl ssigkeit 95 Zuverl ssigkeit 95 Zuverl ssigkeit 95 Zuverl ssigkeit 95 Alle Xpert GBS 197 186 178 168 19 18 Patientinnen Pos 88 6 96 7 90 4 96 1 584 540 23 20 561 520 i 83 3 94 9 85 4 94 2 eg 92 6 98 0 94 1 97 5 Kein 10 65 0 13 10 52 Ergebnis Insgesamt 7913 201 590 Antepartum Xpert GBS 92 88 87 83 5 5 Pos 85 3 98 94 6 94 5 274 253 15 13 259 240 on 76 9 95 6 87 8 94 1 eg 91 5 99 4 98 2 96 9 Kein 7 32 0 6 7 26 Ergebnis Insgesamt
150. qu es par le SGB sont attribu s a l un des quatre s rotypes suivants Ia Ib II ou III Le SGB de type V est apparu comme une cause importante d infection au SGB aux Etats Unis et des souches des types VI et VIII sont r pandues chez les Japonaises Des cultures quantitatives ont t test es en quatre r plicats Le tableau 6 pr sente la concentration la plus faible de chaque sous type donnant un r sultat positif dans les quatre r plicats Tableau 6 Limite de d tection obtenue pour chaque s rotype test S rotype Bact rie souche couvillon ATCC 12973 11 250 la c 250 Ib c 250 Il 250 III 250 IV 250 IVc 250 V 250 VI 250 VII 250 VIII 250 30 300 8907 Rev D September 2011 Reproductibilite Reproductibilite Une s rie d chantillons pr sentant des concentrations variables de SGB et de Lactobacillus acidophilus n gative a t test e en trois exemplaires pendant 10 jours distincts sur chacun des trois sites 4 chantillons x 3 x 10 jours x 3 sites Un lot de kits GBS Xpert a t utilis sur chacun des 3 sites de test conform ment a la proc dure GBS Xpert Tableau 7 R sum des r sultats de reproductibilit Echantillon de bact rie souche R sultats attendus couvillon Site1 Site 2 Site 3 plage du Ct Accord total Accord total N gatif au SGB 30 30 30 30 30 30 N gatif 90 90 100 L acidophilus 0 ou gt 42 1 7 x 104 Bact rie souche co
151. r il test Xpert GBS Il controllo positivo basso contiene circa 620 CFU tampone 36 Ct di GBS e il controllo negativo 17 000 CFU tampone di Lactobacillus acidophilus 0 Ct o gt 42 Ct Interpretazione dei risultati I risultati sono interpolati dal sistema GeneXpert Dx a partire dai segnali di fluorescenza misurati e dagli algoritmi di calcolo predefiniti e sono visualizzati nella finestra View Results Visualizza risultati I risultati possibili sono POSITIVE POSITIVO L acido nucleico bersaglio di GBS viene rilevato presunta colonizzazione di GBS SPC NA non applicabile e IC NA non applicabile Probe check PASS Controllo sonda AMMESSO Il secondo tampone prelevato in doppio conservato nella provetta di prelievo trasporto pu essere utilizzato per il test di sensibilit antimicrobica Se necessario la cartuccia utilizzata pu essere inviata al laboratorio di microbiologia come back up per il test di sensibilit NEGATIVE NEGATIVO L acido nucleico bersaglio di GBS non viene rilevato nessuna colonizzazione presunta di GBS GBS NEG SPC PASS e IC PASS Probe Check PASS Controllo sonda AMMESSO INVALID NON VALIDO Non pu essere determinata l assenza o la presenza di GBS L IC e o I SPC non soddisfano i criteri di accettazione o si sono formate bolle d aria nella provetta di reazione GBS INVALID NON VALIDO SPC FAIL RESPINTO IC FAIL RESPINTO Probe Check PASS
152. r nas 35 37 semanas de gesta o e n o terem contra indica es relativamente a exame vaginal por exemplo hemorragia Igualmente e para todas as participantes n o havia evid ncia de placenta pr via n o havia qualquer indica o de proceder ao parto com urg ncia e n o tinham sido usados antibi ticos na semana anterior ao internamento 94 300 8907 Rev D September 2011 Caracteristicas de desempenho Foram colhidas amostras vaginais rectais de todas as 794 participantes elegiveis usando dois conjuntos de zaragatoas marcadas Dispositivos de colheita Cepheid Uma das zaragatoas do primeiro conjunto foi usada para cultura O segundo conjunto de zaragatoas marcadas foi dividido da seguinte forma uma zaragatoa foi usada no ensaio Xpert GBS Assay no sistema GeneXpert Dx a outra foi usada no 2 ensaio NAAT O 2 ensaio NAAT tem como alvo uma sequ ncia no gene cfb e aprovado pela FDA Os resultados deste teste n o foram usados nas estimativas do desempenho Ap s a utiliza o nestes testes cada uma das zaragatoas foi colocada num caldo de cultura LIM incubada subcultivada em placas de gelose de sangue e observada quanto presen a de EGB Todas as institui es usaram a t cnica de cultura recomendada nas orienta es do CDC de 2002 cultura microbiol gica em meio de cultura selectivo caldo LIM ou seja caldo Todd Hewitt suplementado com 15 ug ml de cido nalid xico e 10 pg ml de colistina seguida por uma incuba o dura
153. rasporto 3 Inserire con cautela i tamponi marcati nella vagina della paziente Campionare le secrezioni dalla mucosa del terzo inferiore della vagina Ruotare tre volte i tamponi per assicurare l uniformit del campione su entrambi i tamponi 4 Inserire con cautela gli stessi tamponi marcati oltre lo sfintere anale per circa 2 5 cm e ruotarli delicatamente per prelevare il campione dalle cripte anali 5 Collocare entrambi i tamponi marcati nel contenitore di trasporto 6 Sei campioni vengono elaborati entro 24 ore conservare a temperatura ambiente Se i campioni saranno analizzati dopo 24 ore 2 DICI o 1 refrigerare finch non viene eseguita l analisi I campioni conservati a 2 8 C sono stabili per un massimo di sei giorni 300 8907 Rev D September 2011 73 Italiano Procedura Preparazione della cartuccia Important Avviare l analisi entro 15 minuti dall aggiunta del campione nella cartuccia Note richiesto un solo tampone Il secondo tampone supplementare e pu essere usato per il test di sensibilit Per eseguire i test di sensibilit sono necessari isolati colturali come consigliato per le donne allergiche alla penicillina Non aggiungere due tamponi a ogni cartuccia Per aggiungere il campione nella cartuccia Xpert GBS 1 Rimuovere la cartuccia dalla confezione 2 Aprire il coperchio della cartuccia 3 Rimuovere i tamponi marcati dal contenitore Far sfiorare delicatamente i due tamponi
154. ravidez durante os cuidados pr natais pode detectar mulheres com probabilidade de estarem colonizadas com EGB no momento no parto Em v rios estudos foram registadas sensibilidades de 87 IC de 83 a 92 e de 69 IC de 57 a 79 e especificidades de 96 IC de 95 a 98 e de 92 IC de 89 a 94 para culturas pr natais tardias efectuadas para a identifica o do estado de coloniza o no momento do parto Durante as avalia es cl nicas do ensaio Xpert GBS 25 4 201 de 791 das mulheres estavam colonizadas com EGB com m todos de cultura Caracter sticas de desempenho Desempenho cl nico As caracter sticas de desempenho do ensaio Xpert GBS foram determinadas num estudo investigacional prospectivo multic ntrico realizado em seis institui es com servi os de maternidade nos EUA Cada institui o tinha um programa de rastreio baseado em culturas ou num teste de amplifica o de cidos nucleicos NAAT Os testes foram efectuados em laborat rios cl nicos ligados a cada institui o assim como ao bloco de partos No estudo foram inclu das participantes tanto na fase intraparto como anteparto Para serem inclu das no ramo intraparto do estudo as mulheres tinham que dar o seu consentimento por escrito estar em trabalho de parto e n o terem contra indica es relativamente a exame vaginal por exemplo hemorragia Para serem inclu das no ramo anteparto do estudo as mulheres tinham que dar o seu consentimento por escrito esta
155. re sulla cartuccia Xpert GBS Verr visualizzata la finestra Create Test Crea analisi Utilizzando le informazioni del codice a barre il software completa automaticamente i campi seguenti delle caselle Select Assay Seleziona saggio Reagent Lot ID ID lotto reagenti Cartridge SN Cartuccia SN ed Expiration Date Data di scadenza Nella casella Sample ID ID campione eseguire la scansione o digitare l ID del campione Accertarsi di digitare correttamente l ID del campione L ID del campione associato ai risultati dell analisi ed mostrato nella finestra View Results Visualizza risultati e in tutti i referti Fare clic su Start Test Avvia analisi nella finestra di dialogo visualizzata digitare la password Aprire lo sportello del modulo dello strumento con la spia verde lampeggiante e caricare la cartuccia Chiudere lo sportello L analisi viene avviata e la spia verde cessa di lampeggiare Al termine dell analisi la spia si spegne Attendere che il sistema sblocchi il meccanismo di chiusura dello sportello prima di aprire lo sportello del modulo e rimuovere la cartuccia Se assolutamente necessario possibile recuperare l eluito del campione dalla camera S della cartuccia con una pipetta di trasferimento Questo eluito pu essere utilizzato dal laboratorio di microbiologia come back up per il secondo tampone del prelievo in doppio per il test di sensibilit I metodi per la preparazione di colture dal reagente 1 Xpert GBS no
156. rests Accessed 07 19 2006 lt http www channing harvard edu paoletti htm gt Asistencia Si desea obtener asistencia puede ponerse en contacto con Cepheid mediante los siguientes datos de contacto No olvide facilitar el n mero de serie del instrumento y el Id del lote de reactivos si realiza una llamada o env a un correo electr nico Estados Unidos Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 1 888 838 3222 Opci n 2 Correo electr nico techsupport cepheid com Puede ponerse en contacto con Cepheid por tel fono de lunes a viernes y de 5 a m a 5 p m hora del Pac fico Uni n Europea Para acceder al servicio t cnico utilice los siguientes datos de contacto Tel 33 563 82 53 00 Correo electr nico techsupport cepheideurope fr Otras oficinas P ngase en contacto con su representante local de Cepheid 68 300 8907 Rev D September 2011 Tabla de simbolos Simbolo Significado Numero de referencia O Producto sanitario para diagn stico in vitro No reutilizar Precauci n consultar el documento adjunto Fabricante Contiene suficiente cantidad para lt n gt pruebas Fecha de caducidad CONTROL Control Representante autorizado en la Uni n Europea Er lt E gt e L mite de temperatura o N o N Riesgo biol gico Fabricante Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 EE UU Tel fono 1 408 541 4191 Fax
157. rests Acedido em 19 07 2006 lt http www channing harvard edu paoletti htm gt Assist ncia Para obter assist ncia contacte a Cepheid atrav s de uma das seguintes informa es de contacto No seu contacto telef nico ou quando enviar uma mensagem de e mail certifique se de que indica o n mero de s rie do instrumento e a ID do lote de reagente Am rica do Norte Para obter apoio t cnico utilize as seguintes informac es de contacto Telefone 1 888 838 3222 Op o 2 E mail techsupport cepheid com Pode contactar o Apoio T cnico Cepheid atrav s do telefone de 2 a 6 feira das 5h as 17h hora do Pac fico Uni o Europeia Para obter apoio t cnico utilize as seguintes informa es de contacto Telefone 33 563 82 53 19 E mail techsupport cepheideurope fr Outras localiza es Contacte o representante Cepheid local 300 8907 Rev D September 2011 101 Portugu s Tabela de simbolos Simbolo Significado Refer ncia Dispositivo m dico para diagn stico in vitro N o reutilizar Ateng o consultar os documentos anexos Fabricante Conteudo suficiente para lt n gt testes Prazo de validade Controlo Representante autorizado na Comunidade Europeia a jr lt e gt eii 428 Limites de temperatura ob Risco biol gico VW Fabricante Cepheid 904 Caribbean Drive Sunnyvale CA 94089 1189 EUA Telefone 1 408 541 4191 Fax 1 408 541 4192 Representante autorizado Ceph
158. rs tab to view the error descriptions Test and Analyte Result Detail Errors History Assay Name per GES G3 Version 3 Test Result BOSNE Analyte Ct EndPt Analyte Result Probe Name Check Result SPC 32 8 299 0 NA PASS GBS 35 0 233 0 POS PASS Ic 312 258 0 NA PASS For In Vitro Diagnostics Use Only Legend 5a e SPC Primary 7 GBS Primary IC Primary 300 8 e 8 200 E e 100 0 10 20 30 40 Cycles ld Figure 2 GeneXpert Dx System View Results window Reasons to Repeat the Assay or Initiate Alternate Procedures Repeat the test or initiate alternate procedures if one of the following test results occurs Error The test was aborted because a system component failed the maximum pressure was reached or the probe check failed Invalid The SPC and or the IC failed when GBS is negative An invalid result can also be caused by air bubbles in the reaction tube No Result The operator stopped the test a power failure occurred during the test or problems were detected in the cartridge If there is fluid in the cartridge S chamber use a transfer pipette to transfer all the fluid to the S chamber of a new cartridge and then rerun the test If there is no fluid use sterile tweezers to transfer the swab to a new cartridge and then rerun the test Alternatively prepare a new cartr
159. rse Amplification en Chaine par Polym rase RT PCR Le syst me est compos d un appareil d un ordinateur personnel et d un logiciel pr charg pour effectuer des tests sur des chantillons pr lev s et afficher les r sultats Le syst me requiert l utilisation de cartouches jetables et usage unique GeneXpert cartouches qui contiennent les r actifs PCR et abritent la proc dure de PCR Les probl mes de contamination crois e sont minimis s car les cartouches sont ind pendantes Pour obtenir une description compl te du syst me consultez le Manuel d utilisation du GeneXpert Dx system Le Test Xpert GBS comprend des r actifs pour la detection simultan e de l ADN du SGB un contr le du traitement de l chantillon CTE pour surveiller les conditions de traitement et un contr le interne CI pour contr ler les conditions de la PCR et l absence 300 8907 Rev D September 2011 17 Frangais d inhibiteurs dans la r action La fonction de contr le de la sonde consiste v rifier la r hydratation des r actifs le remplissage des tubes de PCR dans la cartouche l int grit de la sonde et la stabilit du fluorochrome Les amorces et la sonde de SGB d tectent une cible dans la r gion 3 adjacente au g ne cfb du S agalactiae Apres avoir collect et transport un chantillon pr lev a l aide d un couvillon vers la zone de test GeneXpert l couvillon est inserr dans la cartouche GBS Xpert Le GeneXpert Dx system r ali
160. rt GBS et les trois taient negatives au Test Xpert GBS 791 r sultats de la culture ont ainsi pu tre valu s Tous les sujets avaient subi un test de culture comme d crit ci dessus et la plupart avaient galement subi un 294 test TAAN SGB Le 2 test TAAN cible une s quence du g ne cfb et a t approuv au pr alable par la FDA les r sultats de ce test n ont pas t utilis s dans les estimations des performances Sur les 791 cas le Test Xpert GBS a produit 726 r sultats significatifs la premi re tentative 91 8 65 r sultats n taient pas significatifs c a d non valides erreur ou pas de r sultat 55 de ces cas ont t r solus en r p tant le test Dans l ensemble les cultures de 201 femmes taient positives au SGB a partir du couvillon unique utilis pour la culture ou des cotons tiges lu s partir du Test Xpert GBS et du 294 test TAAN Le Test Xpert GBS a initialement produit 168 r sultats positifs 168 201 83 6 Apr s avoir r p t le test les r sultats positifs sont pass s 178 201 soit 88 6 Les cultures de 590 femmes taient negatives 520 taient initialement negatives avec le Test Xpert GBS 88 1 et 561 l taient apr s avoir r p t le test 95 1 26 300 8907 Rev D September 2011 Caracteristiques des performances Le tableau 1 pr sente le Test Xpert GBS bas sur les r sultats positifs et n gatifs de la culture de SGB pour 791 sujets les cultures de 3 sujets a
161. rt one of the swabs into the Xpert GBS cartridge chamber S Do not insert both swabs into the cartridge Return the second swab into the collection transport tube for subsequent antimicrobial susceptibility testing by the microbiology laboratory for GBS positive patients Culture isolates are needed for performing susceptibility testing as recommended for penicillin allergic women Raise the swab so that the score mark is centered in the notch Break the swab by snapping the shaft to the right Close the cartridge lid S Sample Figure1 Xpert GBS cartridge top view Starting the Test This section lists the basic steps of running the test For detailed instructions see the GeneXpert Dx System Operator Manual 1 2 3 Nn OS 11 Turn on the GeneXpert Dx instrument and then turn on the computer the GeneXpert software will launch automatically Log on to the GeneXpert Dx System software using your user name and password In the GeneXpert Dx System window click Create Test The Scan Cartridge Barcode dialog box appears Scan the barcode on the Xpert GBS cartridge The Create Test window appears Using the barcode information the software automatically fills the boxes for the following fields Select Assay Reagent Lot ID Cartridge SN and Expiration Date In the Sample ID box scan or type the sample ID Make sure you type the correct sample ID The sample ID is associated with the test results and is shown in t
162. rtucho com o reagente de tratamento capturando o material celular num filtro lisando as c lulas e eluindo o DNA De seguida a solu o de DNA misturada com os reagentes de PCR desidratados e transferida para o tubo de reac o integrado para ser efectuado o PCR em tempo real e a detec o Os resultados s o interpolados pelo sistema GeneXpert Dx a partir dos sinais de fluoresc ncia medidos e dos algoritmos de c lculo incorporados Os resultados podem ser visualizados e impressos O processo de teste demora cerca de 50 minutos ou menos Reagentes e instrumentos Material fornecido O kit Xpert GBS GXGBS 100N 10 cont m reagentes suficientes para processar 10 amostras de pacientes ou amostras de controlo da qualidade O kit cont m os seguintes itens Cartuchos do ensaio Xpert GBS com tubos de reac o integrados 10 Esfera 1 liofilizada 1por cartucho Complexo polimerase inibidor BSA albumina s rica bovina Esfera 2 liofilizada 1por cartucho Primers Sondas e dNTP DNA de controlo interno IC BSA albumina s rica bovina Esfera 3 liofilizada 1por cartucho Controlo de processamento da amostra SPC 2000 esporos de B globigii esporos de controlo da prepara o Reagente 1 Tamp o Tris EDTA tensioactivos 3 0 ml por cartucho Reagente 2 Hidr xido de s dio 3 0 ml por cartucho CD 1 por kit ficheiro de defini o de ensaio ADF Instru es para importar ADF em sistema GX Instru es
163. s 3 pacientes presentaron cultivos con excesivo crecimiento o no interpretables por otra raz n Las estimaciones de sensibilidad especificidad y valores negativos y positivos mostradas se basan en los resultados tras repetir la prueba Tras repetir la prueba 10 casos siguieron sin resolver n 781 62 300 8907 Rev D September 2011 Caracteristicas de funcionamiento Table 1 Resultados de Xpert GBS y rendimiento estimado por categoria de paciente Pacientes Pacientes oe con Sensibilidad t E ificidad t PPV ti ti NPV t ti r E a ensibilidad tras specificidad tras ras repetir ras repetir Categoria 1 cultivos cultivos 1 repetir la prueba repetir la prueba la prueba la prueba de paciente Resultados Total N positivos negativos 95 de confianza 95 de confianza 95 de confianza 95 de confianza Todos los Xpert GBS Pos 197 186 178 168 19 18 pacientes Xpert GBS O l si 88 6 96 7 90 4 96 1 3 92 6 194 9 98 0 85 4 94 1 94 2 97 5 Neg 83 3 92 6 94 9 98 0 85 4 94 1 94 2 97 5 Sin 10 65 0 13 10 52 resultados Total 7913 201 590 Antes del Xpert GBS Pos 92 88 87 83 gt 65 parto Xpert GBS EGEA TOA ES O 85 3 98 1 94 6 94 5 Neg 76 9 91 5 95 6 99 4 87 8 98 2 94 1 96 9 Sin 7 32 0 6 7 26 resultados Total 373 102 271 Durante Xpert GBS Pos 105 98 91 85 14 13 el parto Xpert GB
164. s Xpert GBS und des zweiten NAAT Tests Die Untergruppe der Frauen w hrend der Entbindung bei denen nach dem Blasensprung Proben entnommen wurden 3 Die Untergruppe der Frauen w hrend der Entbindung bei denen vor dem Blasensprung Proben entnommen wurden Table 3 Direkter Vergleich der beiden PCR Tests Xpert GBS Pos Xpert GBS Neg Ung ltig Fehler Kein Ergebnis Zweiter NAAT insgesamt Kultur Pos Kultur Neg Kultur ND 2Zweiter 2Zweiter 2Zweiter 2Zweiter 2Zweiter 2Zweiter NAAT Pos NAAT Neg Ungel st NAAT Pos NAAT Neg Ungel st NAAT Pos NAAT Neg Ungel st 149 27 2 10 9 0 0 0 0 6 17 0 11 549 1 0 3 0 0 0 0 1 9 0 0 0 0 165 44 567 1 Xpert GBS insgesamt 197 587 10 794 300 8907 Rev D September 2011 Analyse der Durchlaufzeit Tabelle 4 enth lt die Anzahl der Patientinnen die an jedem der sechs Klinik Laborstandorte getestet wurden die an der Auswertung teilgenommen haben sowie die Leistungsbewertung der Xpert GBS Tests im Vergleich zu den Ergebnissen des Kulturverfahrens Table 4 Vergleich zwischen den verschiedenen Standorten Xpert GBS ohne Ergebnis Sensitivit t Spezifit t Antepartum Intrapartum Patientinnen Kultur Wieder Unterer Oberer Unterer Oberer Teststandort Patientinnen Patientinnen Insgesamt Positiv Pr valenz Urspr nglich holung Bewertung 95 Wert 95 Wert Bewertung 95 Wert 95 Wert 1 0 51 51 11 21 6 4 1 72 7 39 0 94 0 92
165. s de transporte adequados e semeadas nos 4 dias seguintes As culturas a partir do Reagente 1 Xpert GBS ainda n o foram validadas Os laborat rios devem validar os seus procedimentos de cultura ou usar a segunda zaragatoa recolhida para efectuar a identifica o baseada em culturas e os testes de susceptibilidade Um resultado positivo n o indica necessariamente a presen a de um organismo vi vel Indica no entanto a presen a presum vel de estreptococos do Grupo B teste intraparto com o ensaio Xpert GBS deve ser usado como teste complementar de outros m todos dispon veis e n o deve ser usado para substituir o teste anteparto s 35 37 semanas de gesta o O teste n o se destina a diferenciar entre portadores de estreptococos do Grupo B e indiv duos com infec o estreptoc cica Os resultados do teste tamb m podem ser afectados por antibioterapia concomitante Por conseguinte o sucesso ou insucesso terap utico n o pode ser avaliado com este teste porque o DNA pode persistir ap s a terapia antimicrobiana As boas pr ticas laboratoriais e a troca de luvas entre amostras de pacientes s o recomendadas para evitar a contamina o de amostras e reagentes Valores esperados Aproximadamente 10 a 30 das gr vidas est o colonizadas com EGB na vagina ou recto A coloniza o por EGB pode ser transit ria cr nica ou intermitente O rastreio atrav s de culturas vaginais e rectais da coloniza o tardia por EGB na g
166. s femmes allergiques la p nicilline R sum et explication L infection bact rienne due au SGB est associ e une maladie grave chez les nouveau n s mis au monde par des femmes infect es par le micro organisme La transmission de SGB se produit entre les femmes infect es par le SGB et leurs enfants avant la naissance transmission pr natale ou pendant l accouchement transmission p rinatale Aux Etats Unis l infection 4 SGB est la cause de d c s la plus importante chez les nouveau n s qui d veloppent des septic mies des pneumonies ou des m ningites 123 Actuellement la norme de soin en mati re de pr vention de la maladie n onatale li e au SGB est un d pistage chez les femmes enceintes de 35 37 semaines pour d terminer un ventuel taux de SGB La plupart des tests pr nataux de SGB sont r alis s par culture et leurs r sultats sont g n ralement disponibles apr s deux ou trois jours Ce d lai peut tre adapt pour obtenir les r sultats de la culture de SGB avant l accouchement pour la majorit des femmes cependant certaines femmes peuvent ne pas disposer des r sultats des tests au d but de l accouchement Le Test Xpert GBS d velopp par Cepheid pour d tecter le SGB directement partir d chantillons vaginaux rectaux pr lev s l aide d couvillons dure environ 50 minutes Lorsque le taux de SGB est inconnu au moment de l accouchement l approche bas e sur les risques est moins efficace que le d
167. s from occupationally acquired infections Approved Guideline Document M29 refer to latest edition E Yancey MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 Paoletti Lawrence C Ph D Research Interests Accesso 07 19 2006 lt http www channing harvard edu paoletti htm gt Assistenza Per ricevere assistenza contattare Cepheid a uno dei seguenti recapiti Quando si contatta l Assistenza tramite telefono o posta elettronica accertarsi di fornire il numero di serie dello strumento e l ID del lotto reagenti Nord America Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 1 888 838 3222 opzione 2 E mail techsupport cepheid com possibile contattare telefonicamente l Assistenza tecnica Cepheid dal luned al venerd dalle 5 alle 17 Pacifico Unione Europea Per l assistenza tecnica utilizzare i seguenti recapiti Tel 33 563 82 53 00 E mail techsupport cepheideurope fr Altri Paesi Contattare il rappresentante Cepheid locale 300 8907 Rev D September 2011 85 Italiano Tabella dei simboli Simbolo Significato Numero di catologo Dispositivo medico per diagnostica in vitro Non riutilizzare e sl El Attenzione consultare la documentazione allegata Produttore Contiene quantita sufficiente per lt n gt analisi Data
168. se la pr paration des chantillons en luant le mat riel de l chantillon partir de l chantillon en m langeant le r actif d chantillon avec le SPC bacillus globigii sous forme de billes de r actifs l int rieur de la cartouche et le r actif de traitement en capturant le mat riel cellulaire sur un filtre en lysant les cellules et en luant l ADN La solution d ADN est alors m lang e des r actifs PCR secs puis est transf r e dans le tube de r action int gr en vue d une PCR en temps r el et d une detection Les r sultats sont interpol s par le GeneXpert Dx system partir de signaux fluorescents mesur s et d algorithmes de calcul int gr s Les r sultats peuvent tre visualis s et imprim s Le test dure environ 50 minutes Reactifs et appareils Mat riel fourni Le kit GBS Xpert GXGBS 100N 10 contient suffisamment de r actifs pour traiter les chantillons de 10 patients ou contr les qualit Le kit contient ce qui suit Cartouches GBS Xpert avec tubes de r action int gr s 10 Billes de r actifs lyophilis s 1 1 par cartouche Ensemble polym rase inhibiteur SAB s rum albumine bovin Billes de r actifs lyophilis s 2 1 par cartouche Amorces Sondes dNTPs ADN de contr le interne CI SAB s rum albumine bovin Billes de r actifs lyophilis s 3 1 par cartouche e Contr le du traitement de l chantillon CTE env 2 ooo spores de B globigii de pr paration d ch
169. sono necessari isolati colturali come consigliato per le donne allergiche alla penicillina Riepilogo e spiegazione L infezione batterica da GBS associata a malattia grave nei neonati nati da donne colonizzate dal microrganismo La trasmissione dell infezione da GBS avviene da donne colonizzate da GBS ai rispettivi neonati prima della nascita antepartum o durante la nascita intrapartum Negli Stati Uniti l infezione da GBS la causa principale di morte nei neonati che sviluppano sepsi polmonite o meningite 1 23 Attualmente lo standard di cura per la prevenzione della patologia neonatale da GBS lo screening delle donne alla 35a 37a settimana di gestazione per determinare il loro stato di colonizzazione da GBS La maggior parte dei test antepartum per l identificazione di GBS viene eseguita mediante coltura e generalmente richiede due tre giorni per ottenere i risultati Questa tempistica pu essere adatta per la maggior parte delle donne tuttavia alcune possono non avere i risultati del test antepartum disponibili al momento dell inizio del travaglio Il test Xpert GBS sviluppato da Cepheid per l identificazione di GBS direttamente da campioni di tamponi vaginali rettali fornisce il risultato in circa 50 minuti o meno Quando non si conosce lo stato della colonizzazione di GBS al momento del travaglio l approccio diagnostico basato sulla percentuale di rischio meno efficace dello screening antepartum nell identificazione delle m
170. t tre provoqu par des bulles d air dans le tube de r action No Result Pas de r sultat l op rateur a arr t le test une coupure de courant a eu lieu au cours du test ou des probl mes ont t d tect s dans la cartouche Si du liquide se trouve dans la chambre S de la cartouche utilisez une pipette de transfert pour transf rer tout le liquide vers la chambre S d une nouvelle cartouche puis effectuez 4 nouveau le test S il n y a pas de liquide utilisez des pinces st riles pour transf rer le couvillon vers une nouvelle cartouche puis effectuez nouveau le test partir de la section Ajoutez le r actif 1 dans la chambre 1 de la cartouche Sinon pr parez une nouvelle cartouche en utilisant le second couvillon puis effectuez 4 nouveau le test Restrictions Les performances du Test Xpert GBS ont t tablies grace au GeneXpert Dx system de Cepheid avec des chantillons vaginaux et rectaux pr lev s sur des patientes avant et pendant l accouchement a l aide de l appareil de collecte de Cepheid r f rence 900 0370 Ce produit peut tre utilis uniquement avec le GeneXpert Dx system L utilisation d un systeme de collecte et de transport des chantillons autre que ceux r pertori s dans la section Mat riel requis mais non fourni n est pas recommand e L utilisation du Test Xpert GBS partir d autres sources cliniques n a pas t contr l e et les caract ristiques des performances de ce test sont inconn
171. t w hrend der Entbindung f r Schwangere bei denen die Wehen einsetzen ohne dass ein GBS Status bekannt ist setzt voraus dass unverz glich ein Abstrich genommen wird und dass die Ergebnisse schnell genug vorliegen sodass noch vor der Entbindung mit der Antibiotikaprophylaxe unter Einhaltung der empfohlenen Dauer begonnen werden kann Prinzipien der Prozedur Das GeneXpert Dx System automatisiert und integriert die Lyse der Probe die Reinigung und Amplifikation von Nukleins uren und den Nachweis der Zielsequenz in komplexen Proben mittels reverser Transkriptase Polymerase Kettenreaktion RT PCR in Echtzeit Das System besteht aus einem Instrument und einem PC mit vorinstallierter Software die zur Ausf hrung von Tests an entnommenen Proben und zur Anzeige der Ergebnisse dient Das System sieht die Verwendung von GeneXpert Einwegkartuschen vor die die PCR Reagenzien enthalten und in denen der PCR Prozess abl uft Da die Kartuschen in sich abgeschlossen sind wird das Kreuzkontaminationsrisiko minimiert Eine vollst ndige Beschreibung des Systems ist im Benutzerhandbuch zum GeneXpert Dx System zu finden 300 8907 Rev D September 2011 35 Deutsch Der Xpert GBS Test beinhaltet Reagenzien zum gleichzeitigen Nachweis der GBS Ziel DNA eine Probenverarbeitungskontrolle SPC zur berwachung der Verarbeitungsbedingungen und eine interne Kontrolle IC zur berwachung der PCR Bedingungen und zur Sicherstellung dass keine Reaktionsinhibitore
172. tati utilizzati nelle stime di prestazione Dopo l utilizzo in questi test ognuno di questi tamponi stato posto anche nel brodo di coltura LIM incubato ed stata eseguita una subcoltura su piastra di agar sangue BAP e la piastra stata osservata per la presenza di GBS Ogni istituto ha utilizzato la tecnica di coltura consigliata nelle linee guida 2002 dei CDC coltura microbiologica in terreno liquido selettivo brodo LIM ovvero brodo Todd Hewitt integrato con 15 ug ml di acido nalidixico e da 10 ug ml di colistina seguita da incubazione per 18 24 ore e subcoltura su terreno solido di agar sangue stata eseguita l identificazione specifica di colonie indicative di GBS con i test di agglutinazione su vetrino Risultati completi Le caratteristiche sulle prestazioni del test Xpert GBS Assay sono state determinate dalla valutazione dei test di laboratorio eseguiti su campioni di 794 gestanti 373 nel periodo antepartum e 421 nel periodo intrapartum Tre donne non hanno avuto risultati dalla coltura e sono state escluse dall analisi 0 sono risultate positive con il test Xpert GBS e 3 negative con il test Xpert GBS pertanto sono rimaste 791 risultati di coltura valutabili Tutti i campioni sono stati testati con coltura come descritto sopra e la maggioranza anche con un test 224 NAAT per GBS Il saggio 2nd NAAT individua una sequenza nel gene cfd ed era stato approvato dall FDA in precedenza i risultati di questo test non sono stat
173. te iniciado Quando o estado de EGB desconhecido na altura do parto a abordagem baseada no risco menos eficaz na identifica o das m es colonizadas do que o rastreio anteparto e os testes de susceptibilidade n o s o poss veis para as mulheres al rgicas penicilina Para as mulheres sem cuidados pr natais em risco de parto pr termo ou cujos resultados de EGB s o desconhecidos na altura do parto o teste intraparto pode proporcionar resultados a tempo de serem administrados antibi ticos antes do parto se necess rio O ensaio Xpert GBS pode ser feito 24 horas por dia 7 dias por semana e sem inconvenientes O impacto potencial para os testes intraparto a diminui o da utiliza o de antibi ticos desnecess rios em mulheres sem outras indica es para a profilaxia fornecendo ao mesmo tempo o tratamento adequado s mulheres colonizadas por EGB com o resultante risco diminu do de s psis e meningite neonatal O teste eficaz de EGB intraparto em gr vidas que entram em trabalho de parto sem um estado de EGB conhecido requer uma r pida colheita de amostras e a capacidade de fornecer resultados com a rapidez suficiente para iniciar a profilaxia antibi tica com a dura o recomendada antes do parto Princ pio do procedimento O sistema GeneXpert Dx automatiza e integra a lise das amostras a purifica o e amplifica o dos cidos nucleicos e a detec o das sequ ncias alvo em amostras complexas utilizando ensai
174. tenido comercialmente de 101 cepas compuestas por 28 estreptococos 73 especies distintas incluidas cepas relacionadas filogen ticamente con S agalactiae otra microflora bacterias y hongos detectada normalmente en la flora vaginal y anal y ADN humano Se analizaron muestras duplicadas de estos tres productos en una reacci n de 1 5 ng 25 pl 2 x 10 equivalente a las copias del genoma por reacci n Ninguna de las 28 cepas de estreptococos no EGB ofreci un resultado positivo De las 73 cepas restantes cuatro Enterococcus gallinarium Staphylococcus simulans Micrococcus luteus y Propionibacterium acnes dieron un resultado positivo bajo en una de las seis muestras duplicadas 300 8907 Rev D September 2011 65 Espanol Sensibilidad analitica La sensibilidad anal tica o el l mite de detecci n se determinaron con 11 cepas de S agalactiae Se han identificado nueve serotipos distintos de EGB Ia Ib II III IV V VI VII y VII La mayor parte de los casos de septicemia neonatal causada por EGB se atribuye a 1 de estos 4 serotipos la Ib II o III El tipo V de EGB se ha revelado como una causa importante de la infecci n por EGB en los Estados Unidos mientras que las cepas de los tipos VI y VIII predominan entre las mujeres japonesas Se analizaron cultivos cuantificados en cuatro muestras duplicadas En la tabla 6 se muestra la concentraci n m nima de cada subtipo resultante en un resultado positivo para las cuatro muestras
175. tify candidates for intrapartum antibiotic prophylaxis when administration of intravenous antibiotics is not delayed pending results The Xpert GBS assay does not provide susceptibility results Culture isolates are needed for performing susceptibility testing as recommended for penicillin allergic women Summary and Explanation GBS bacterial infection is associated with serious illness in newborns born to women who are colonized with the microorganism Transmission of GBS occurs from GBS colonized women to their newborn before birth antepartum or during birth intrapartum In the United States GBS infection is the major cause of death in newborns who develop sepsis pneumonia or meningitis 123 Currently the standard of care for preventing neonatal GBS disease is screening pregnant women at 35 37 weeks of gestation to determine their GBS colonization status Most antepartum GBS testing is performed by culture and typically takes two to three days to finalize results This timing might be adequate for obtaining antepartum GBS culture results for the majority of women however some women may not have GBS results available at the onset of labor The Xpert GBS developed by Cepheid for detecting GBS directly from vaginal rectal swab specimens takes about 50 minutes or less after testing is initiated When GBS status is unknown at the time of labor the risk based approach is less effective in identifying colonized mothers than antepartum scr
176. to improve sensitivity and specificity of detection of women who remain colonized at the time of delivery Training for personnel using the GeneXpert Dx System is important to assure accurate and timely results Rerunning the Xpert GBS Assay when results are INVALID ERROR and NO RESULT should depend on practices and policies within each facility Alternate procedures e g culturing as recommended with selective enrichment broth for 18 24 h should be available Culture isolates are needed for performing susceptibility testing as recommended for penicillin allergic women For culturing remaining swab specimens should be placed in appropriate transport systems and cultured within 4 days Culturing from Xpert GBS Reagent 1 has not been validated Laboratories must validate their own culturing procedures or use the second swab collected to perform culture based identification and susceptibility testing A positive test result does not necessarily indicate the presence of viable organism It is however presumptive for the presence of Group B Streptococcus Intrapartum testing with Xpert GBS assay should be used as an adjunct to other methods available and not used to replace antepartum testing at 35 37 weeks gestation The test is not intended to differentiate carriers of Group B Streptococcus from those with streptococcal infection Test results might also be affected by concurrent antibiotic therapy Therefore therapeutic success or fa
177. ubo de reac o a integridade da sonda e a estabilidade do corante A verifica o da sonda aprovada se preencher os crit rios de aceita o atribu dos Controlos externos o KWIK STIK MicroBioLogics ref 8164 pode ser utilizado para forma o testes de profici ncia e controlo de qualidade externo do sistema GeneXpert Dx Os controlos externos podem ser utilizados de acordo com os organismos de acredita o locais regionais e nacionais conforme aplic vel Siga o procedimento do controlo externo da MicroBioLogics descrito a seguir Abra a bolsa no entalhe e retire o KWIK STIK Aperte o fundo da ampola na tampa para libertar o l quido hidratante Segure na vertical e bata levemente para facilitar a passagem do l quido pela haste at ao fundo da unidade que cont m o pellet Para facilitar a dissolu o do pellet de c lulas liofilizadas esmague o e aperte suavemente a c mara inferior SE PON ae Rasgue o KWIK STIK para libertar a zaragatoa e insira a na c mara S do cartucho Xpert GBS 6 A zaragatoa KWIK STIK est pronta para ser analisada com o Xpert GBS O controlo positivo baixo tem cerca de 620 UFC zaragatoa 36 Ct de EGB e o controlo negativo tem cerca de 17 000 UFC zaragatoa de Lactobacillus acidophilus O Ct ou gt 42 Ct Interpreta o dos resultados Os resultados s o interpolados pelo sistema GeneXpert Dx a partir dos sinais de fluoresc ncia medidos e dos algoritmos de c lculo incorporados sendo apr
178. ues pour les autres types d chantillons Des r sultats de test erron s peuvent tre la cons quence d une collecte d chantillon inad quate d une manipulation ou d un stockage inopportuns d une erreur technique d une confusion dans les chantillons ou de la non d tection par le test d un certain nombre d organismes dans l chantillon Il est n cessaire de respecter scrupuleusement les instructions de cette notice et du document pr sentant le protocole de collecte des chantillons vaginaux rectaux afin d viter les r sultats erron s Le pr l vement dans la partie inf rieure du vagin et du rectum produit de meilleurs r sultats par rapport l chantillonnage du col de Put rus ou du vagin sans pr l vement du rectum La fiabilit des r sultats d pend d une collecte d chantillon ad quate d une manipulation et d un stockage opportuns car la detection des Streptocoques du Groupe B repose sur le nombre d organismes presents dans l chantillon Le test chez les femmes enceintes de 35 37 semaines est recommand pour am liorer la sensibilit et la sp cificit de la detection des femmes toujours infect es au moment de l accouchement La formation du personnel utilisant le GeneXpert Dx system est importante pour garantir des r sultats pr cis et opportuns Le fait de recommencer le Test Xpert GBS lorsque les r sultats sont INVALID NON VALIDE ERROR ERREUR et NO RESULT PAS DE RESULTAT doit d pendre des prat
179. um ro d identification exact de l chantillon Le num ro d identification de l chantillon est associ aux r sultats du test et il est affich dans la fen tre View Results Afficher les r sultats et dans tous les rapports Cliquez sur Start Test D marrer le test Dans la bo te de dialogue qui appara t saisissez votre mot de passe Ouvrez la porte du module de l appareil o le voyant vert clignote et chargez la cartouche Fermez la porte Le test d marre et le voyant vert cesse de clignoter Lorsque le test est termin le voyant s teint Attendez que le syst me d verrouille la porte du module avant de l ouvrir et de retirer la cartouche En cas d absolue n cessit l luat de l chantillon peut tre r cup r dans la chambre marqu e S de la cartouche l aide d une pipette de transfert Cet luat peut tre utilis comme une sauvegarde du second couvillon pr lev sur la patiente pour le test de pr disposition par le laboratoire de microbiologie La culture partir du r actif 1 GBS Xpert n a pas t valid e Les laboratoires doivent valider leurs propres proc dures de culture ou utiliser le second couvillon collect afin de proc der l identification bas e sur la culture et un test de pr disposition Les cartouches usag es doivent tre limin es dans les conteneurs d chets pour les chantillons appropri s conform ment aux gt pratiques standard de votre institution Affichage et
180. um resultado positivo nas quatro r plicas Table 6 Limite de detecc o obtido para cada ser tipo testado Ser tipo UFC zaragatoa ATCC 12973 Il 250 la c 250 Ib c 250 Il 250 Ill 250 IV 250 IVc 250 V 250 VI 250 Vil 250 VII 250 300 8907 Rev D September 2011 99 Portugu s Reprodutibilidade Um painel de amostras com concentrag es vari veis de EGB e Lactobacillus acidophilus negativo foi testado em triplicado em 10 dias diferentes em cada um dos tr s locais 4 amostras x 3 x 10 dias x 3 locais Foi usado um lote de kits Xpert GBS em todos os 3 locais de teste de acordo com o procedimento do Xpert GBS Table 7 Resumo dos resultados da reprodutibilidade Resultados esperados Concordancia concordancia Amostra UFC zaragatoa Local Local 2 Local 3 Intervalo Ct total total EGB Negativo 30 30 30 30 30 30 Negativo 90 90 100 L acidophilus 0 ou gt 42 1 7 x 104 UFC zaragatoa EGB Baixo 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 6 2 x 10 UFC zaragatoa 31 a 41 EGB Moderado 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 8 3 x 103 UFC zaragatoa 27 a 37 EGB Alto 30 30 30 30 30 30 Positivo 90 90 100 1 3 x 10 UFC zaragatoa 19 a 29 Concord ncia total 120 120 120 120 120 120 360 360 100 de concord ncia 100 100 100 100 100 Intervalo esperado dos valores de Ct todos os valores dentro dos intervalos esperados 100 300 8907 Rev D September 2011 Bibli
181. unto de mulheres em intraparto com amostras colhidas ap s a ruptura das membranas ruptura das membranas RM 6 Subconjunto de mulheres em intraparto com amostras colhidas antes da ruptura das membranas RM N o seriam de esperar diferengas biol gicas entre as amostras colhidas no intraparto e as colhidas no anteparto 7 Valor preditivo positivo 8 Valor preditivo negativo 96 300 8907 Rev D September 2011 Caracteristicas de desempenho Table 2 Desempenho do ensaio Xpert GBS e do 2 NAAT em rela o as culturas Xpert 2 GPS NAAT Categoria Sensibilidade ICinferior IC superior Especificidade ICinferior IC superior Sensibilidade ICinferior IC superior Especificidade ICinferior IC superior Global 88 6 83 3 92 6 96 7 94 9 98 0 77 9 71 5 83 5 96 3 94 4 97 6 178 201 561 580 155 199 567 589 Anteparto 85 3 76 9 91 5 98 1 95 6 99 4 74 5 64 9 82 6 97 0 94 3 98 7 87 102 259 264 76 102 263 271 Intraparto 91 9 84 7 96 4 95 6 92 7 97 6 81 4 72 3 88 6 95 6 92 7 97 6 91 99 302 316 79 97 304 318 RM 91 3 72 0 98 9 94 3 88 1 97 9 90 9 70 8 98 9 95 2 89 2 98 4 21 23 100 106 20 22 100 105 Sem RM3 92 1 83 6 97 0 96 2 92 6 98 3 78 7 67 7 87 3 95 8 92 1 98 0 70 76 202 210 59 75 204 213 O 2 ensaio NAAT tem como alvo uma sequ ncia no gene cfb e aprovado pela FDA 2 Subconjunto de mulheres em intraparto com amostras colhidas
182. uto de Estandares Clinicos y de Laboratorio anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards Comit Nacional de Control de Est ndares de Laboratorio Siga los procedimientos de seguridad de su centro para trabajar con productos quimicos y manipular las muestras bioldgicas El ensayo Xpert GBS no proporciona resultados de sensibilidad a los antibi ticos Se precisan cepas clinicas para realizar las pruebas de sensibilidad recomendadas en el caso de pacientes con alergia a la penicilina No abra la tapa del cartucho Xpert GBS salvo para afiadir la muestra No use un cartucho que se haya caido o movido despu s de afiadir la muestra No abra los cartuchos usados salvo para repetir la prueba y una vez abiertos retire la muestra diluida del compartimento S exclusivamente con ayuda de una pipeta Cada cartucho Xpert GBS de un solo uso se utiliza para procesar una prueba No reutilice los cartuchos Para eliminar correctamente los cartuchos usados y no utilizados reactivos consulte al personal de su instituci n encargado de eliminar los residuos Puede que este material tenga algunas caracteristicas que requieran una eliminaci n de residuos especifica contemplada en la Resource Conservation and Recovery Act RCRA o Ley de Conservaci n y Recuperaci n de recursos de la Agencia de Protecci n Ambiental de EE UU Compruebe la normativa local y estatal ya que stas pueden ser diferentes a las normativas de eliminaci n feder
183. uvillon SGB faible 30 30 30 30 30 30 Positif 90 90 100 6 2 x 10 Bact rie 31 41 souche couvillon SGB mod r 30 30 30 30 30 30 Positif 90 90 100 8 3 x 103 Bact rie 27 37 souche couvillon SGB lev 30 30 30 30 30 30 Positif 90 90 100 1 3 x 10 Bact rie 19 29 souche couvillon Accord total 120 120 120 120 120 120 360 360 100 Accord 100 100 100 100 100 1Plage attendue de valeurs de Ct toutes les valeurs taient comprises dans les plages attendues 300 8907 Rev D September 2011 31 Frangais References 1 Schrag et al A population based comparison of strategies to prevent early onset group B streptococcal disease in neonates NEJM 2002 247 4 233 239 2 Centers for Disease Control and Prevention Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease MMWR 2002 51 No RR 11 1 26 3 Schuchat A Epidemiology of Group B Streptococcal Disease in the United States Shifting Paradigms Clin Micro Rev 1998 11 3 497 513 4 Davis et al Multicenter Study ofa Rapid Molecular Based Assay for the Diagnosis of Group B Streptococcus Colonization in Pregnant Women C Infectious Disease 2004 30 1129 35 5 Puopolo et al Early Onset Group B Streptococcal Disease in the Era of Maternal Screening Pediatrics 2005 115 1240 1246 6 Centers for Disease Control and Prevention Biosafety in microbiological and biomedical laboratories Richmond JY and McKinney RW
184. vaient prolif r ou ne pouvaient pas tre interpr t es La sensibilit la sp cificit et les estimations des valeurs negatives et positives affich es sont bas es sur des r sultats obtenus apr s avoir r p t le test Apr s avoir r p t le test 10 cas sont demeur s non r solus n 781 Tableau1 R sultats du Test Xpert GBS et performances estim es par cat gorie de patiente Cat gorie de Patientes dont la cultureest cultureest Patientes dont la Sensibilit apr s Sp cificit apr s VPP valeur VPN valeur pr dictive positive pr dictive negative 8 apr s avoir r p t apr s avoir r p t 4 1 1 avoir r p t le test avoir r p t le test le test le test patiente R sultats Total N positive n gative 95 de certitude 95 de certitude 95 de certitude 95 de certitude Toutes les Positif au 197 186 178 168 19 18 patientes GBS Xpert 88 6 96 7 90 4 96 1 i 8 0 23 20 6 20 ne a 0 5616520 13 3_926 949 980 85 4 94 1 94 2 97 5 per Pas de r sultat 10 65 0 13 10 52 Total 791 201 590 Avant Positif au 92 88 87 83 5 5 l accouchement GBS Xpert 85 3 98 1 94 6 94 5 i 2 253 3 259 240 re 74 253 1503 259 240 769 9150 95 6 994 87 8 982 94 1 96 9 per Pas de r sultat 7 32 0 6 7 26 Total 373 102 271 Pendant Positif au 105 98 91 85 14 13 l a
185. ve Cepheid Europe Vira Solelh 81470 Maurens Scopont France Tel 33 563 82 53 00 Fax 33 563 82 53 01 Email cepheid cepheideurope fr CE IvD 300 8907 Rev D September 2011 Table of Symbols English 300 8907 Rev D September 2011 Frangais Dispositif m dical pour diagnostic in vitro Nom d pos Xpert GBS Nom d usage Test Xpert GBS Utilisation pr vue Le Test Xpert GBS de Cepheid effectu dans le GeneXpert Dx system est un test de diagnostic in vitro qualitatif congu pour d tecter l ADN du Streptocoque du Groupe B SGB dans des chantillons vaginaux rectaux pr lev s l aide d couvillons gr ce la r action de polym risation en cha ne PCR en temps r el automatis e avec une d tection fluorog nique de l ADN amplifi Le Test Xpert GBS est indiqu pour identifier rapidement une infection SGB avant et pendant l accouchement L utilisation du Test Xpert GBS pour un d pistage p rinatal ne doit pas exclure l utilisation d autres strat gies par exemple le test pr natal Les r sultats du test p rinatal GBS Xpert sont utiles pour identifier les candidats l antibioprophylaxie p rinatale lorsque l administration d antibiotiques intraveineux n est pas retard e par des r sultats en attente Le Test Xpert GBS ne fournit pas de r sultats relatifs la pr disposition Des isolats de culture sont n cessaires la r alisation de tests de pr disposition comme recommand chez le
186. von Kulturen verwendet Der zweite Satz markierter Abstrichtupfer wurde unterteilt Ein Tupfer wurde f r den Xpert GBS Test auf dem GeneXpert Dx System verwendet w hrend der andere Tupfer f r den zweiten NAAT Test verwendet wurde Ziel des zweiten NAAT Tests war eine Sequenz im cfb Gen der Test war zuvor von der US amerikanischen Arzneimittelbeh rde zugelassen worden Die Ergebnisse dieses Tests wurden nicht zur Leistungsbewertung herangezogen Nachdem sie im Rahmen dieser Tests verwendet worden waren wurden alle Abstrichtupfer au erdem in LIM Kulturbouillon eingesetzt inkubiert auf einer Blutagarplatte BAP subkultiviert und auf GBS hin beobachtet Jede Institution wandte das in den CDC Richtlinien von 2002 empfohlene Kulturverfahren an Mikrobiologische Kultur in selektiver N hrbouillon LIM N hrbouillon also Todd Hewitt N hrbouillon supplementiert durch 15 ug ml Nalidixins ure und 10 pg ml Colistin gefolgt von 18 bis 24 st ndiger Inkubation und Subkultivierung auf BAP Die spezifische Identifikation der Kolonien in denen sich Hinweise auf GBS fanden erfolgte anhand von Objekttr ger Agglutinationstests Gesamtergebnisse Die Leistungsmerkmale des Xpert GBS Tests wurden durch Auswertung von Labortests ermittelt die an Proben von 794 Schwangeren durchgef hrt wurden und zwar in 373 F llen vor der Entbindung und in 421 F llen w hrend der Entbindung Drei Frauen hatten im Kulturverfahren keine Ergebnisse und wurden aus den Anal
187. y MK Schuchat A Brown LK Ventura VL Markenson GR The accuracy of late antenatal screening cultures in predicting genital group B streptococcal colonization at delivery Obstet Gynecol 1996 88 811 15 Paoletti Lawrence C Ph D Research Interests Abruf 19 07 2006 lt http www channing harvard edu paoletti htm gt Unterst tzung Wenn Sie Unterst tzung ben tigen wenden Sie sich mithilfe der folgenden Kontaktdaten an Cepheid Geben Sie bei Ihrem Anruf bzw in Ihrer E Mail auf jeden Fall die Seriennummer des Instruments und die Chargen ID des Reagenz an Nordamerika Kontaktdaten f r Technischen Support Tel 1 888 838 3222 Option 2 E Mail techsupport cepheid com Sie k nnen den technischen Support von Cepheid montags bis freitags von 5 00 bis to 17 00 Uhr pazifischer Zeit erreichen EU Kontaktdaten f r Technischen Support Tel 33 563 82 53 00 E Mail techsupport cepheideurope fr Andere Standorte Wenden Sie sich an Ihre lokale Cepheid Niederlassung 50 300 8907 Rev D September 2011 Symboltabelle Bedeutung u lt 3 gt e Katalog Nr Medizinisches Ger t zur In vitro Diagnostik Nicht wiederverwenden SE Vorsicht beiliegendes Dokument konsultieren Hersteller Reicht f r lt n gt Tests Verfallsdatum CONTROL Kontrolle Autorisierte Vertretung in der Europ ischen Gemeinschaft Ei N o Temperaturbegrenzung z N o oO Biologische Gefahr e
188. ysen ausgeschlossen 0 waren Xpert GBS positiv und 3 waren Xpert GBS negativ sodass 791 Kulturergebnisse verblieben die ausgewertet werden konnten Bei allen Patientinnen war das Kulturverfahren wie vorstehend beschrieben durchgef hrt worden und bei den meisten war au erdem ein zweiter GBS NAAT durchgef hrt worden Ziel des zweiten NAAT ist eine Sequenz im cfb Gen der Test war zuvor von der US amerikanischen Arzneimittelbeh rde genehmigt worden und seine Ergebnisse wurden nicht zur Leistungsbewertung herangezogen Von den 791 F llen wurden mit dem Xpert GBS Test im ersten Versuch 726 verwertbare Ergebnisse 91 8 erzielt 65 Ergebnisse waren nicht verwertbar d h sie lauteten Invalid Ung ltig Error Fehler oder No Result Kein Ergebnis bei 55 dieser 65 F lle traten diese Probleme bei einer Testwiederholung nicht mehr auf Insgesamt waren die Kulturen bei 201 Frauen GBS positiv entweder auf Grund des einzelnen f r das Kulturverfahren verwendeten Abstrichs oder auf Grund der eluierten Abstriche aus dem Xpert GBS und dem zweiten NAAT Test Der Xpert GBS Test erzielte anf nglich 168 positive Ergebnisse 168 201 83 6 Nach der Wiederholung des Tests stiegen die positiven Ergebnisse auf 178 201 bzw auf 88 6 an 590 Frauen hatten im Kulturverfahren negative Ergebnisse mit dem Xpert GBS Test waren anf nglich 520 Testergebnisse negativ 88 1 nach der Testwiederholung waren es 561 95 1 44 300 8907 Rev D Se
189. z para iniciar la duraci n recomendada de profilaxis con antibi ticos antes del momento del parto Principio del procedimiento El sistema GeneXpert Dx automatiza e integra la lisis de muestras la purificaci n y amplificaci n del cido nucleico y la detecci n de la secuencia diana en muestras complejas mediante una reacci n en cadena de la polimerasa en tiempo real TR RCP y en caso necesario de transcripci n inversa TI RCP El sistema consta de un instrumento un ordenador personal y un software cargado previamente para la realizaci n de pruebas con las muestras recogidas y la visualizaci n de los resultados Este sistema requiere el uso de cartuchos GeneXpert desechables de un solo uso para los reactivos y el proceso de RCP Dado que los cartuchos son independientes se minimiza el riesgo de contaminaci n cruzada Si desea obtener una descripci n detallada del sistema consulte el Manual del operador del sistema GeneXpert Dx 300 8907 Rev D September 2011 53 Espanol El ensayo Xpert GBS incluye reactivos para la detecci n simult nea del ADN de EGB objetivo un control de procesamiento de la muestra CPM para controlar las condiciones del procesamiento y un control interno CI para controlar las condiciones de la RCP y garantizar que no se produzca la inhibici n de la reacci n Mediante la funci n de comprobaci n de sonda se comprueba la rehidrataci n de los reactivos el Ilenado del tubo de RCP en el cartucho la integri

Xpert GBS - Diagnostic Technology

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