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Quantum Blue Calprotectin Extended

1. baixo 2 frascos B CALE CONSET Pronto para uso x 0 5 ml elevado Table 18 a concentra o dos controles especifica para cada lote Revision date 2015 02 03 18 24 e Vortex para extra o das fezes e Pipetas com pontas descart veis 10 200 uL e 1 mL e Centrifuga e Tubos de propileno ou poliestereno 5 mL para dilui o do extrato e Rel gio cron metro e Leitor Quantum Blue dispon vel na B HLMANN refer ncia BI POCTR ABS e Toalhetes ou papel absorvente B HLMANN LF CALE25 COLETA E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS Se os tubos de extrac o utilizados forem os mencionados na Table 17 amp necess rio menos de 1g de fezes Colha as amostras de fezes em tubos limpos e armazene refrigerado a 2 8 C at 6 dias O extrato estavel 2 7 dias a temperatura 2 8 C e 2 24 meses a temperatura lt 20 C Importante A amostra tem que ser colhida em tubos sem qualquer aditivo quimico ou biol gico PROCEDIMENTO DO ENSAIO O procedimento do ensaio consiste em 3 passos 1 Extrac o das amostras de fezes O procedimento de extra o esta descrito nas instru es de uso fornecidas com os tubos de extra o 2 Processamento de amostras e Smart Prep ou ScheBo Quick Prep Depois da extra o deixar sedimentar o extrato da amostra de fezes durante 10 minutos Diluir o sobrenadante antes do teste 1 10 com tamp o de extra o por exemplo 50 uL do extrato e 450 uL de tamp o de extra
2. E Cart o de pl stico Cart o Chip RFID 1 B CALE RCC branco Cart o Chip RFID 1 B CALE RCC720 Cart o de pl stico verde Table 16 REAGENTES amp MATERIAL FORNECIDO ADICIONALMENTE Tubos de extra o Os tubos de extra o de fezes descritos abaixo n o s o inclu dos no kit e devem ser encomendados PRECAU ES PRECAUC ES DE SEGURAN A e Nenhum reagente deste kit cont m componentes de origem humana e Amostras dos doentes devem ser manuseadas como transmissoras de doen as infecciosas e de acordo com as boas pr ticas laboratoriais e As solu es n o utilizadas devem ser eliminadas de acordo com a Regulamenta o das Entidades Governamentais Locais PRECAU ES T CNICAS Componentes do kit e Todos os reagentes e amostras devem estar temperatura ambiente 18 28 C antes do in cio do ensaio Misture bem vortex os reagentes antes de usar e Componentes n o podem ser utilizados ap s data de expira o impressa nos r tulos e N o misture reagentes de lotes diferentes e Os cassetes dos testes n o podem ser re utilizados Procedimento do teste e Ler cuidadosamente as instru es antes de executar o teste A dilui o incorreta dos reagentes condi es de manuseamento e armazenamento diferentes das indicadas na bula afetam negativamente o desempenho do teste e O leitor Quantum Blue tem que ser ligado e programado para o uso do kit Quantum Blue Calprotectin B C
3. apresentada com precis o O limite de quantifica o corresponde concentra o de calprotectina em uma imprecis o inferior a 25 CV permitindo medi es quantitativas na gama de 30 inferior LOQ de 1000 ug g mais elevado LOQ Linearidade Os resultados mostraram linearidade na leitura da gama 30 a 1000 ug g de ensaio Quantum Blue Calprotectina Extended para todas amostras Recupera o de quantidades adicionadas A recupera o varia entre 90 6 e 101 8 Repeti o 20 1 CV La repetibilidade del ensaio Quantum Blue Calprotectina Extended s o calculados de 8 amostras de fezes Na Tabela 19 os valores m dios a partir de tr s lotes diferentes de an lises s o apresentados cassetes Respeitabilidade ensaio amostras varia entre 17 9 e 23 9 CV Revision date 2015 02 03 20 24 Precis o Inter lote 20 8 CV A inter monte Quantum Blue Calprotectin Extended ensaio foi calculada para calprotectina a partir de 8 de fezes amostras contendo entre 30 e 1000 ug g de calprotectina As inter lot amostras de dados variou entre 16 1 e 24 1 CV M todo comparativo R 0 94 y 1 05 3 91 ug g 50 indiv duos testados que tinham n veis anticalprotectina dentro da faixa de medi o do ensaio indicado Quantum Blue Calprotectin Extended para calprotectina foram analisados e os resultados com os valores obtidos por ELISA para calprotectina B HLMANN fCAL c digo de EK CAL foram comparados Os dados de corre
4. 1000 ug g du systeme de dosage Quantum Blue Calprotectin Extended pour l ensemble des chantillons Recuperation La r cup ration varie de 90 6 101 8 Repetabilite 20 1 de CV La r p tabilit du dosage Quantum Blue Calprotectin Extended est calcul e a partir de huit chantillons d extraits de selles Les valeurs moyennes pour trois lots diff rents de cassettes test sont r pertori es dans la Table 19 La r p tabilit des chantillons varie de 17 9 23 9 de CV Pr cision inter lots 20 8 La pr cision inter lots du syst me de dosage Quantum Blue Calprotectin Extended a t calcul e a partir de huit chantillons d extraits de selles dont les valeurs de la calprotectine sont comprises entre 30 et 1000 ug g Les valeurs inter lots des chantillons varient de 16 1 24 1 de CV Comparaison des m thodes R 0 94 y 1 05 3 91 ug g 50 extraits de selles et pr sentant des concentrations en calprotectine dans l intervalle de mesure conseill du syst me de dosage Quantum Blue Calprotectin Extended sont analys s selon le mode op ratoire de dosage Les r sultats sont ensuite compar s aux valeurs obtenues avec le dosage ELISA BUHLMANN fCAL r f rence EK CAL Les r sultats de corr lation sont illustr s sur la Figure 3 BUHLMANN LF CALE25 ITALIANO USO PREVISTO Il test BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended un immunodosaggio per la determinazione quantitat
5. e None of the reagents of this test contains components of human origin e Patient specimens should be handled as if capable of transmitting infections and should be handled in accordance with Good Laboratory Practice GLP using appropriate precautions e Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations TECHNICAL PRECAUTIONS Kit components e All reagents and test samples must be equilibrated to room temperature 18 28 C before starting the assay Mix well vortex the reagents before use e Components must not be used after the expiry date printed on the labels e Do not mix different lots of reagents e Test Cassettes cannot be re used Test Procedure e Read carefully the instructions prior to carrying out the test Test performance will be adversely affected if reagents are incorrectly diluted handled or stored under conditions other than those as detailed in this instruction for use e The Quantum Blue Reader must be switched on and programmed for the Quantum Blue Calprotectin assay B CALE RCC or B CALE RCC720 before starting the assay see Quantum Blue Reader Manual e Use the RFID Chip Card in order to change lot specific test parameters e Patient samples that are not properly handled may cause inaccurate results e In order to receive reliable and quantitative results it is important to homogenize the stool sample entirely in the Extraction Device e Diluted sam
6. o e misture bem Deixe os extratos dilu dos estabilizarem durante pelo menos 5 minutos a 18 28 antes de continuar com o procedimento do teste passo no 3 e Dispositivo CALEX Cap Depois da extra o deixar sedimentar o extrato da amostra de fezes durante 10 minutos com a tampa branca do dispositivo virada para baixo abrir a tampa azul O sobrenadante pode ser utilizado sem qualquer dilui o adicional com o ensaio de escoamento lateral 3 Procedimento de imunocromatografia e leitura Dois m todos alternativos podem ser carregados a partir do respectivo cart o chip RFID B CALE RCC ou B CALE RCC720 Selecione um dos cart es com chip RFID antes de iniciar os experimentos Coloque o m todo de teste a partir da RFID Chip Card 3 1 M todo lt B CALE RCC720 gt com cron metro interno e Use o cart o de pl stico verde e Coloque o cassete do teste no suporte de cassete do leitor e Adicione 60 uL do extrato das fezes dilu do no cassete do teste e Feche o dispositivo do cassete no leitor e inicie a medi o pressionando ENTER lt START gt e A leitura do cassete inicia automaticamente ap s 12 minutos 720 segundos 3 2 M todo lt B CALE RCC gt sem cron metro interno e Use o cart o de pl stico brancho e Adicione 60 uL do extrato das fezes dilu do no cassete do teste e Incube durante 12 minutos 1 minuto usando um cron metro e Coloque o cassete do teste no suporte de cassete do leitor
7. Ca P B CALEX C200 50 tubes comprenant chacun B CAL RD Smart Prep spatules et fonds de tube 50 tubes comprenant chacun c ne amp embout du doseur pr remplis avec 1 3 mL de tampon d extraction pr ts a l emploi ScheBo tu B CAL SO50 Quick Prep Table 8 Contr les _ Les contr les pour le test B HLMANN Quantum Blue LF CALE25 peuvent tre command s s par ment i i PR CAUTIONS PR CAUTIONS DE S CURIT e Aucun des r actifs de ce test ne contient de composants d origine humaine e Les chantillons des patients doivent tre manipul s en respectant les bonnes pratiques de laboratoire et avec les pr cautions requises comme s ils taient susceptibles de transmettre des infections e Toute solution non utilis e doit tre limin e conform ment aux r glementations locales et nationales en vigueur PR CAUTIONS TECHNIQUES Composants du kit e Tous les r actifs et chantillons tester doivent tre quilibr s temp rature ambiante 18 28 C avant de d marrer le dosage Bien m langer vortex les r actifs avant utilisation e Les constituants ne doivent pas tre utilis s au del de la date d expiration imprim e sur les tiquettes e Ne pas m langer des r actifs de lots diff rents e Les cassettes test sont usage unique Proc dure de test e Lire attentivement les instructions avant d effectuer le test Les performances du test peuvent se d grader e
8. Die Repeatability liegt zwischen 17 9 23 9 CV Inter lot Pr zision 20 8 CV Die Inter Lot Pr zision der Quantum Blue Calprotectin Extended Tests wurde berechnet mit Hilfe von 8 Stuhlextrakten mit Calprotectingehalten zwischen 30 und 1000 ug g Die errechneten CVs lagen zwischen 16 1 und 24 1 Methodenvergleich R 0 94 y 1 05 3 91 ug g 50 Stuhlextrakte von Patienten mit Messwerte innerhalb des angegebenen Quantum Blue Calprotectin Extended Test Messbereiches zeigten wurden gemaB der Anleitung angesetzt gemessen und verglichen mit den Ergebnissen die im BUHLMANN fCAL ELISA Bestellcode EK CAL gewonnen wurden Die Korrelation wird in Figure 3 dargestellt B HLMANN LF CALE25 FRANCAIS UTILISATION PREVUE Le test immunologique BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended est concu pour la determination quantitative de concentrations de calprotectine dans des chantillons de selles ref 1 6 en association avec le B HLMANN Quantum Blue Reader Uniquement pour utilisation professionnelle Canada Taiwan Utilisation en laboratoire uniquement STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION DES REACTIFS Tous les composants du kit sont stables 2 8 C jusqu la date d expiration imprim e sur les tiquettes PRINCIPE DU TEST Le test permet la mesure s lective de l antig ne de la calprotectine par un dosage immunologique de type sandwich Un anticorps monoclonal de capture mAb hautement sp
9. O resultado do teste da calprotectina obtido com o BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin pode ser confirmado com outros biomarcadores p e Prote na C reactiva ou por repeti o da calprotectina B HLMANN fCALM ELISA ou utilizando um segundo cassete e comparado com o score CDAI e o estado cl nico do doente antes de qualquer tomada de decis o cl nica e ou terap utica Durante a monitoriza o terap utica o resultado do teste da calprotectina o teste BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended pode ser interpretado por compara o com resultados anteriores e com o contexto cl nico do doente B HLMANN LF CALE25 VALORES ESPERADOS Calculando a calprotectina fecal amp uma maneira confi vel e simples de distinguir doengas intestinais funcionais org nicos As informa es a seguir com BUHLMANN fCAL ELISA c digo EK CAL foram estabelecidos Em um estudo cl nico 401 pacientes sintom ticos consecutivos programados para colonoscopia Table 18 foi investigada O exame endosc pico mostrou 273 pacientes com dist rbios funcionais enquanto 128 pacientes que sofrem de v rias doen as org nicas colite doen a de Crohn ulcerac o diverticulite p lipos adenomas cancer ou doengas inflamat rias An lise ROC AUC 0 935 Curva resultou num valor de limiar ptimo de 50 g g Ao aplicar este limite voc pode chegar a uma sensibilidade clinica de 84 4 e uma especificidade de 94 5 na diferenciac o entre doencas org
10. cifique de la calprotectine est d pos sur la membrane test Un second anticorps monoclonal conjugu a de Tor colloidal permettant la d tection est pr sent sur la bande de lib ration du conjugu Il est lib r dans le syst me apr s ajout de l chantillon de selle extrait et dilu Le conjugu calprotectine anti calprotectine or se lie l anticorps anti calprotectine d pos sur la membrane test ligne test et le restant du conjugu or anti calprotectine qui n a pas r agi se lie l anticorps de ch vre anti souris d pos sur la membrane test ligne contr le Les intensit s de signal de la ligne de test et de la ligne de contr le sont mesur es quantitativement par le BUHLMANN Quantum Blue Reader REACTIFS FOURNIS ET PREPARATION R actifs Quantit Code Commentaires Ve Scell e sous vide Cassette test 25 pieces B LFCALUS TC dana sachet Tampon d extraction E B CAL EX Pr t l emploi Carte en plastique Carte puce RFID 1 piece B CALE RCC blanche Carte puce RFID 1 piece B CALE RCC720 Cate en plastique Table 7 REACTIFS ET MATERIEL FOURNIS SELON LA DEMANDE Dispositifs d extraction de selles Les tubes d extraction de selles d crits ci apr amp s ne sont pas inclus dans le kit Ils peuvent tre command s en m me temps que le kit 50 ou 200 dispositifs pr remplis avec 5 mL de tampon d extraction pr ts l emploi B CALEX C50 CALEX
11. e Precione ENTER lt START gt no leitor Quantum Blue para fazer a leitura da cassete Nota Por favor leia as instru es do Manual do Leitor Quantum Blue Reader para conhecer as fun es iniciar e operar o leitor especialmente como selecionar m todos e introduzir os par metros atrav s da leitura do cart o RFDI e tempos dos diferentes passos ii data validade dos reagentes e iii condi es armazenamento e incuba o A autocalibra o do leitor Quantum Blue calibration check quando iniciado tem que ser v lida VALIDA O DOS RESULTADOS Num resultado v lido a Linha de Controlo C tem que ser sempre vis vel ver Figuras 1A e 1B E um teste de controle validac o que n o pode ser usado para interpretar a Linha de Teste T Se a Linha de Teste T n o for detect vel ap s os 12 min de incuba o Figura 1A a concentra o de calprotectina presente na amostra inferior ao limite de detec o Se a Linha de Teste T for detect vel ap s os 12 min de incuba o Figura 1B a concentra o da calprotectina presente calculada pelo leitor Quantum Blue Se apenas a Linha de Teste T for detect vel ap s os 12 min de incuba o Figura 1C o resultado do teste inv lido e o teste de calprotectina tem que ser repetido com outro cassete Se nem a Linha de Controle C nem a Linha de Teste T forem detect veis ap s 12 min de incuba o Figura 1D o resultado do teste inv lido e o tes
12. marrage du lecteur Quantum Blue Remarque consulter le mode d emploi du Quantum Blue Reader pour plus de d tails concernant les fonctions de base l initialisation et l utilisation du lecteur en particulier comment choisir la m thode de test et charger les param tres de lot de la carte puce RFID en vue de mesurer des chantillons e Y technique on v rifiera les param tres suivants i pipetage dispositifs de contr le de la temp rature et du temps ii date d expiration des r actifs et iii conditions de conservation et d incubation L auto v rification effectu e lors de la mise en marche du lecteur Quantum Blue doit tre valide VALIDATION DES RESULTATS Pour valider un r sultat de test la ligne de contr le C doit toujours tre visible voir Figures 1A et 1B Cette ligne est uniquement utilis e comme contr le fonctionnel du test et ne peut servir l interpr tation de la ligne de test T Si la ligne de test T n est pas d tectable au bout de 12 minutes de temps d incubation Figure 1A cela signifie qu aucune quantit d tectable de calprotectine n est pr sente dans l chantillon de selle Si une ligne de test T est d tectable au bout de 12 minutes de temps d incubation Figure 1B la quantit de calprotectine pr sente dans l chantillon de selle est calcul e par le Quantum Blue Reader Si seule la ligne de test T est d tectable apr s 12 minutes de temps d incubation
13. nicas e funcionais O valor limite sugerido para adultos lt 50 ug g podem ser utilizados em crian as com idade entre 4 17 anos independentemente do sexo ref 7 Enquanto concentra es anticalprotectina fecais em adultos e crian as s o semelhantes as concentra es de rec m nascidos pode ser significativamente aumentada ref 6 Valores inferiores a 50 ug g Valores de calprotectina lt 50 ug g n o s o indicativos da inflama o do trato gastrointestinal Poder levar se em considera o continuar a vigiar o doente e retestar a amostra com o EK CAL or LF CAL ref 4 Valores elevados entre 50 e 200 ug g Valores de calprotectina entre 50 e 200 ug g podem significar uma doen a leve org nica como inflama o do trato gastrointestinal A fraca resposta inflamat ria nesta gama sugere a repeti o da quantifica o e outras investiga es Valores elevados superiores a 200 ug g Valores de calprotectina gt 200 ug g s o indicativos de doen a org nica ativa com inflama o do trato gastrointestinal Sugerem se investiga es adicionais a indicar pelos especialistas CARACTER STICAS DO DESEMPENHO Limite do Branco LoB lt 20 ug g calprotectina Limite de Detec o LoD lt 30 ug g calprotectina Limite de Quantifica o LoQ LoQ inferior lt 30 ug g calprotectina LoQ superior 21000 ug g calprotectina O LoQ estabelecida a partir de 14 extratos de fezes Na Figura 2 o perfil resultante
14. 1 Extracci n de las muestras de heces La extracci n se describe en las instrucciones de uso entregadas con los respectivos dispositivos de extracci n 2 Procesamiento de las muestras e Smart Prep o ScheBo Quick Prep Diluir las extractos de heces 1 10 con tampon de extracci n e g 50 uL extracto y 450 uL tampon de extracci n y mezclar bien Dejar reposar las muestras diluidas al menos 5 minutos a 18 28 antes de proceder con el pasos paso no 3 e Dispositivo CALEX Cap e Despu s de la extracci n dejar que el extracto de heces asiente durante 10 minutos con la cabeza blanca del dispositivo hacia abajo Desenrosque la tapa de color azul El sobrenadante se puede utilizar sin diluci n adicional en el ensayo de flujo lateral 3 Procedimiento de ensayo de flujo lateral y lectura de los resultados Dos m todos alternativos se pueden cargar desde la tarjeta chip RFID respectiva B CALE RCC o B CALE RCC720 Seleccione una de las tarjetas con chip RFID antes de comenzar los experimentos Cargue el m todo de prueba de la tarjeta de chip RFID 3 1 M todo lt B CALE RCC720 gt con cron metro interno e Use la tarjeta de plastico verde e Cargue el casete de prueba en el portacasetes de prueba del lector e A ada 60 ul de muestra de heces diluida en el puerto de carga de muestra del casete de prueba e Cierre el portacasetes e inicie la medici n pulsando el bot n de inicio e EI barrido se inicia autom tica
15. 1000 ug g LoQ superior Linealidad Los resultados mostraron linealidad dentro del rango de medici n indicado de 30 a 1000 ug g del ensayo Quantum Blue Calprotectina Extended para la totalidad de muestras Recuperaci n de cantidades a adidas La linealidad var a entre 90 6 y 101 8 Repetibilidad 20 1 CV La repetibilidad del ensayo Quantum Blue Calprotectina Extended se calcul a partir de 8 muestras de heces En la Table 19 se presentan los valores medios de tres lotes diferentes de casetes de an lisis La respetabilidad del ensayo de las muestras var a entre 17 9 y 23 9 CV Precisi n interlote 20 8 CV La precisi n interlote del ensayo Quantum Blue Calprotectina Extended se calcul a partir de 8 muestras de heces extra das que conten an entre 30 y 1000 ug g de calprotectina Los datos interlote de las muestras variaron entre 16 1 y 24 1 CV Comparaci n de m todos R 0 94 y 1 05 3 91 pg g Se analizaron 50 extractos de heces que presentaban concentraciones de calprotectina dentro del rango de medici n indicado del ensayo Quantum Blue Calprotectina Extended y se compararon los resultados con los valores obtenidos con el m todo ELISA para calprotectina de B HLMANN fCAL c digo para pedidos EK CAL Los datos de correlaci n se ilustran en la Figure 3 B HLMANN LF CALE25 PORTUGUES APLICA O DO TESTE O B HLMANN Quantum Blue Calprotectina Extended um imunoensaio desenhado para a
16. Calprotectin Konzentration in der Stuhlprobe durch den Quantum Blue Reader berechnet Falls nach der Inkubation nur die Testbande T sichtbar ist Figur 1C ist das Resultat ung ltig und der Test muss mit einer neuen Testkassette wiederholt werden Falls weder die Kontrollbande C noch die Testbande T nach der Inkubation nachweisbar sind Figur 1D ist das Resultat ung ltig und der Test muss mit einer neuen Testkassette wiederholt werden Da der Quantum Blue Reader eine quantitative Bestimmung der Test T und der Kontrollbande C erlaubt wird eine zus tzliche Validit tspr fung durchgef hrt Falls die Signalintensit t der Kontrollbande C nach der Inkubation einen bestimmten Wert unterschreitet ist das Resultat ung ltig und der Test muss mit einer neuen Testkassette wiederholt werden STANDARDISIERUNG UND INTERPRETATION DER RESULTATE Der Lateral Flow Test wurde mit Hilfe des B HLMANN fCAL ELISA kalibriert Art Nr EK CAL Der BUHLMANN Quantum Blue Reader verwendet fiir die Berechnung der Calprotectin Konzentration eine Lot abhangige Standardkurve Der messbare Bereich liegt zwischen 30 und 1000 ug g Um ein quantitatives Ergebnis zu erhalten k nnen Proben ber 1000 ug g mit dem BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Assay High Range order Code LF CHR25 erneut gemessen werden QUALIT TSKONTROLLE e Falls die Ergebnisse des Testes nicht innerhalb der erwarteten Bereiche liegen und wiederholte Me
17. Figure 1C le r sultat du test n est pas valable et le dosage de la calprotectine doit tre r p t en utilisant une cassette test Dans le cas o ni la ligne de contr le C ni la ligne de test T ne sont d tectables au bout de 12 minutes de temps d incubation Figure 1D le r sultat du test n est pas valable et le dosage de la calprotectine doit tre r p t en utilisant une nouvelle cassette test Etant donn que le Quantum Blue Reader permet une valuation quantitative des lignes de test T et de contr le C une v rification suppl mentaire de la validit de la ligne de contr le C est effectu e Si l intensit du signal de la ligne de contr le C est en dessous d un seuil au bout de 12 minutes de temps d incubation le r sultat du test est galement non valide et le dosage de la calprotectine doit tre r p t en utilisant une nouvelle cassette test CONTROLE DE QUALITE e Si la pr cision du dosage n est pas corr l e avec les limites tablies et que la r p tition exclut toute erreur Revision date 2015 02 03 10 24 STANDARDISATION Le dosage en flux lat ral est calibr avec le test B HLMANN fCAL ELISA code de commande EK CAL Le B HLMANN Quantum Blue Reader utilise une courbe standard sp cifique du lot pour calculer la concentration de calprotectine La gamme de mesure se situe entre 30 et 1000 ug g Pour les mesures quantitatives les chantillons inconnus qui ont des valeu
18. del lotto dalla carta chip RFID 3 1 Metodo lt B CALE RCC720 gt con timer interno e Utilizzare la carta di plastica verde e Caricare la card sul supporto per cassetta test del Reader e Aggiungere 60 ul di estratto di feci diluito sulla porta d carico del campione nella card e Chiudere il supporto per cassetta e iniziare la misurazione premendo il pulsante di avvio e La scansione inizia automaticamente dopo 12 minuti 720 secondi 3 2 Metodo lt B CALE RCC gt senza timer interno e Utilizzare la carta di plastica bianca e Aggiungere 60 ul di estratto di feci diluito sulla porta di carico del campione nella card e Incubare per 12 minuti 1 minuto impostare un timer manuale e Caricare la card sul supporto per cassetta test del Reader e Scansionare la cassetta con il Quantum Blue Reader premendo il pulsante lt ENTER gt immediatamente Importante Consultare il manuale del Quantum Blue Reader per informazioni sulle funzioni di base e su come avviare e mettere in funzione il Reader in particolare per informazioni sulla selezione dei metodi di analisi e su come caricare i parametri specifici del lotto dalla carta chip RFID in modo da poter quantificare i campioni Revision date 2015 02 03 13 24 VALIDAZIONE DEI RISULTATI Per un risultato valido la banda di controllo C deve in ogni caso essere visibile vedere Figure 1A e 1B Tale banda rappresenta unicamente un controllo funzionale del test e non p
19. determina o quantitativa de valores de calprotectina em fezes humanas ref 1 6 a ser utilizado em combina o com o leitor B HLMANN Quantum Blue Para uso profissional Canada Taiwan s para uso laboratorial ARMAZENAMENTO E VALIDADE DOS REAGENTES Todos os componentes do kit s o est veis a 2 8 C at a data de expirac o impressa nos r tulos PRINCIPIO DO TESTE Este teste permite a determinac o quantitativa do antig nio da calprotectina mediante um imunoensaio tipo sanduiche A membrana do teste revestida com um anticorpo de captura monoclonal mAB altamente especifico para a calprotectina Um segundo anticorpo de detecc o monoclonal conjugado com ouro coloidal encontra se na zona de dispensac o e liberta se aquando da adic o do extrato diluido da amostra de fezes O complexo calprotectina anti calprotectina conjugado com ouro coloidal liga se ao anticorpo monoclonal anti calprotetctina que reveste a membrana do teste linha do teste e o conjugado anti calprotectina com ouro coloidal livre liga se ao anticorpo de cabra que reveste a membrana linha de controle As intensidades dos sinais da linha de teste e de controle s o quantificadas pelo leitor B HLMANN Quantum Blue REAGENTES FORNECIDOS E PREPARA O Quantida Reagentes de C digo Observa es 25 Embalagem Cassete do Teste Unidades B LFCALUS TC solada a V cuo Tamp o de Extra o eg B CAL EX Pronto para uso
20. fCAL ELISA codice EK CAL Il BUHLMANN Quantum Blue Reader utilizza una curva standard lotto specifica per calcolare la concentrazione di Calprotectina L intervallo del dosaggio compreso tra 30 e 1000 ug g Per le determinazioni quantitative i campioni non noti con concentrazioni superiore a 1000 ug g possono essere rianalizzati con il saggio BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin High Range codice LF CHR25 LIMITAZIONI reagenti forniti in questo kit sono ottimizzati per dosare la Calprotectina umana da campioni di feci dopo procedura di estrazione I valori di calprotectina dovrebbero essere utilizzati come ausilio supplementare a disposizione del medico per effettuare una diagnosi Prima di prendere qualsiasi decisione clinica e o terapeutica il risultato del test della calprotectina ottenuto con il dosaggio rapido BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin pu essere confermato misurando altri biomarcatori come ad esempio la proteina reattiva B HLMANN LF CALE25 C o vipetendo il test della calprotectina BUHLMANN fCAL ELISA codice EK CAL o utilizzando una seconda card e confrontando i risultati con il punteggio CDAI e lo stato clinico del paziente e Nel monitoraggio della terapia un risultato del test ottenuto con il dosaggio rapido B HLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended pu essere interpretato mediante confronto del risultato con i risultati precedenti e nel contesto del quadro clinico del pazien
21. indicativos de inflamaci n del tracto gastrointestinal No es probable que pacientes con niveles bajos de Calprotectina fecal precisen de procedimientos invasivos adicionales para determinar la causa de la inflamaci n ref 4 Valores elevados entre 50 ug g y 200 ug g Los valores de calprotectina entre 50 ug g y 200 ug g pueden ser representativos de un trastorno org nico leve La baja respuesta inflamatoria mostrada dentro de ese intervalo puede sugerir la repetici n de la medida y la realizaci n de investigaciones adicionales Valores elevados por encima de 200 ug g Los valores de calprotectina gt 200 ug g son indicativos de un trastorno org nico activo con inflamaci n del tracto gastrointestinal Sugieren llevar a cabo investigaciones adicionales apropiadas y procedimientos curativos por parte de especialistas Revision date 2015 02 03 17 24 CARACTER STICAS DEL RENDIMIENTO L mite para el blanco LoB lt 20 ug g de calprotectina L mite de Detecci n LoD lt 30 ug g de calprotectina L mite de Cuantificaci n LoQ LoQ inferior lt 30 ug g de calprotectina LoQ superior 21000 ug g de calprotectina El LoQ se ha establecido a partir de 14 extractos de heces En la Figure 2 se muestra el perfil de precisi n resultante El l mite de cuantificaci n corresponde a la concentraci n de calprotectina con una imprecisi n inferior a 25 CV permitiendo mediciones cuantitativas en el rango de 30 LoQ inferior a
22. instruction for use delivered with the respective extraction devices 2 Sample processing e Smart Prep or ScheBo Quick Prep After extraction let the stool extract settle for 10 minutes Dilute the supernatant 1 10 with extraction buffer e g 50 ul extract and 450 uL extraction buffer and mix well Let the samples equilibrate for at least 5 minutes at 18 28 C prior to proceeding to the next step step no 3 e CALEX Cap Device After extraction let the stool extract settle for 10 minutes with the white head of the device down Unscrew the blue cap The supernatant can be used without further dilution in the lateral flow assay 3 Lateral Flow Assay Procedure and Readout Two alternative methods can be loaded from the respective RFID Chip card B CALE RCC or B CALE RCC720 Select one of the RFID chip cards before starting the experiments Load the test method from the RFID Chip Card 3 1 Method lt B CALE RCC720 gt with internal timer e Use the green plastic card e Load the test cassette onto the test cassette holder of the Reader e Add 60 ul of diluted stool extract onto the sample loading port of the test cassette e Close the cassette holder and start the measurement by pressing the start button e The scan starts automatically after 12 minutes 720 seconds 3 2 Method lt B CALE RCC gt without internal timer e Use the white plastic card e Add 60 ul of diluted stool extract onto the sample loading po
23. ALE RCC o B CALE RCC 720 antes do inicio do teste ver manual do Leitor Quantum Blue e Utilize o cart o branco RFID para modificar para os par metros espec ficos do lote do teste e Amostras de doentes manuseadas podem conduzir a resultados err neos e De forma a obter resultados quantitativos vi veis importante homogeneizar totalmente o amostra no tubo de extra o e As amostras dilu das devem ser usadas dentro de poucas horas e n o devem ser armazenadas por um incorretamente separadamente per odo de tempo muito longo Dispositivo 50 ou 200 dispositivos com 5 2 CALEX CE0 e E importante centrifugar os extratos com Smart Prep ou CALEX Ca mL tamp o de extra o pronto ScheBo Quick Prep antes do armazenamento 5 min p B CALEX C200 S gt para uso a 3 000 x g Ap s a centrifuga o o sobrenadante Smart Prep x Aa an de B CAL RD deve ser transferido para um tubo novo Com Cap P ge CALEX dispositivo pode armazenamento os extratos Schebo 50 tubos consistindo de tubo diretamente com o dispositivo Para reutilizac o re l Tu suporte do dosador amp dosador x S dic o d It 2 tul Quick Prep com 1 3 mL de tamp o de B CAL SO50 medi o dos extratos consulte o passo 2 no cap tulo extrac o pronto para uso Procedimento de Ensaio Table 17 MATERIAIS NECESS RIOS MAS N O FORNECEDOS Controles Os controles para o Quantum Blue LF CAL25 da BUHLMANN podem ser encomendados em separado Controlos
24. B CALE RCC plastica blanca E R Tarjeta de Tarjeta chip RFID 1 unidad B CALE RCC720 plastica verde Table 13 REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS PREVIO PEDIDO Dispositivos de extracci n fecal Los dispositivos de extracci n fecal que se describen a continuaci n no se incluyen en el kit y el que se elija debe ser pedido con el kit SW 50 o 200 dispositivos contienen E y Dispositivos 5 mL tamp n de extracci n Sn CALEX Cap listos para uso 50 tubos constituyendo di E Smart Prep esp tulas y fondos BEN SAD 50 tubos de extracci n Becker constituyendo di tubo cono amp ScheBo Quick punta dosifiatora B CAL SO50 Prep contienen 1 3 mL de tamp n de extracci n listos para usar Table 14 Controles El set de controles para ser utilizados facultativemente con el Kit Quantum Blue LF CAL25 puede ser pedido adicionalmente PRECAUCIONES PRECAUCIONES DE SEGURIDAD e Ninguno de los reactivos de esta prueba tiene componentes de origen humano e Las muestras de pacientes se deben manejar como si pudieran transmitir infecciones manipul ndose conforme a buenas pr cticas de laboratorio tomando las precauciones apropiadas e La soluci n no utilizada se debe desechar conforme a las normativas locales estatales y federales PRECAUCIONES T CNICAS Componentes del kit e Deje que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente 18 28 C y m zclelos bien con agitador d
25. INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS e EI an lisis de flujo lateral se calibra con B HLMANN fCAL ELISA c digo para pedidos EK CAL e El lector Quantum Blue de BUHLMANN utiliza una curva est ndar espec fica del lote para calcular la concentraci n de calprotectina El rango de ensayo es entre 30 y 1000 ug g e Para obtener resultados cuantitativos muestras con concentraciones por encima de 1000 ug g pueden repetirse con el ensayo BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin High Range assay c digo LF CHR25 16 24 LIMITACIONES e Los reactivos incluidos en este kit estan optimizados para medir calprotectina humana en muestras de heces extraidas BUHLMANN LF CALE25 e Los valores de calprotectina fecal deben utilizarse como datos complementarios para ayudar al m dico a establecer un diagn stico e Los resultados de an lisis de calprotectina obtenidos con el ensayo rapido B HLMANN Quantum Blue para calprotectina pueden confirmarse midiendo otros biomarcadores como la proteina C reactiva o repitiendo el an lisis de calprotectina BUHLMANN fCAL ELISA o utilizando un segundo cartucho de an lisis y compar ndolos con el ndice CDAI y el estado cl nico del paciente antes de tomar cualquier decisi n cl nica y o terap utica e Durante el seguimiento de una terapia los resultados de an lisis de calprotectina obtenidos con el ensayo r pido BUHLMANN Quantum Blue Extended para calprotectina pueden interpretarse c
26. OC curve analysis AUC 0 935 By applying this cut off for differentiation between organic and functional diseases a clinical sensitivity of 84 4 and a specificity of 94 5 can be reached The suggested cut off level for adults 50 ug g can be used for children aged from 4 to 17 years regardless of sex ref 7 Although fecal Calprotectin levels from adults and children are reported comparable in general levels of newborns can be significantly increased ref 6 These data support the following recommendation for interpretation of results Values below 50 ug g Calprotectin values lt 50 ug g are not indicative of inflammation in the gastrointestinal tract Patient samples with low levels are likely not to be in need of further invasive procedures to determine the inflammation cause ref 4 Elevated values between 50 and 200 ug g Calprotectin values between 50 and 200 ug g can represent mild organic disease such as inflammation caused by NSAIDs mild diverticulitis and IBD in remission phase The low inflammatory response shown within this range may suggest repeating the measurement and performing further investigations Elevated values above 200 ug g Calprotectin values gt 200 ug g are indicative of active organic disease with inflammation in the gastrointestinal tract Appropriate further investigative and curative procedures by specialists are suggested PERFORMANCE CHARACTERISTICS Limit of Blank LoB lt 20 ug g calp
27. PA BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended Quantitative Lateral Flow Assay LF CALE25 25 tests Revision date 2015 02 03 B HLMANN LABORATORIES AG English page Baselstrasse 55 Deutsch Seite CH 4124 Sch nenbuch Switzerland Fran ais page Tel 41 61 487 1212 Italiano pagina 12 Fax 41 61 487 1234 Espanol p gina 14 info buhlmannlabs ch Portugu s pagina 18 Oo Revision date 2015 02 03 2 24 B HLMANN LF CALE25 ENGLISH INTENDED USE B HLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended assay is an immunoassay designed for the quantitative determination of Calprotectin concentrations in human stool samples ref 1 6 in combination with the BUHLMANN Quantum Blue Reader For professional use only Canada Taiwan For laboratory use only STORAGE AND SHELF LIFE OF REAGENTS All kit components are stable at 2 8 C until the expiration date printed on the labels PRINCIPLE OF THE ASSAY The test is designed for the selective measurement of Calprotectin antigen by sandwich immunoassay A monoclonal capture antibody mAb being highly specific for Calprotectin is coated onto the test membrane A second monoclonal detection antibody conjugated to gold colloids is deposited onto the conjugate release pad and released into the reaction system after addition of the extracted and diluted stool sample The Calprotectin anti Calprotectin gold conjugate binds to the anti Calprotectin antibody coated on the t
28. ard di rilevazione 25 unita B LFCALUS TC ih busta laminata Tampone di estrazione l o B CAL EX Pronto per l uso e Carta RFID Carta chip RFID 1 unita B CALE RCC bianca Carta chip RFID 1 unita B cALE RCC720 Carta RFID verde Table 10 REAGENTI E MATERIALI FORNITI SU RICHIESTA Dispositivi di estrazione delle feci dispositivi di estrazione delle feci descritte di seguito non sono forniti nel kit e occorre ordinare l uno o l altro insieme al kit PRECAUZIONI PRECAUZIONI DI SICUREZZA e Nessuno dei reagenti di componenti di origine umana e campioni dei pazienti vanno gestiti adottando le precauzioni appropriate come se fossero potenzialmente infetti e in conformit alle Buone prassi di laboratorio BPL e La soluzione inutilizzata va smaltita nel rispetto delle disposizioni locali regionali e nazionali in materia PRECAUZIONI TECHNICHE Componenti del kit e Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente 18 28 C prima di iniziare l analisi Miscelare bene con vortex i reagenti primi dell uso e componenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza riportata sulle etichette e Non mischiare reagenti di lotti diversi e Le card di rilevazione non vanno riutilizzate questo test contiene Procedura del test e Leggere attentamente le istruzioni prima di eseguire il test Le prestazioni del test subiranno un effetto negativo se si utilizzano reagenti dilu
29. cherheitsvorkehrungen sollten getroffen werden e Ungebrauchte L sungen sollten gem der gesetzlichen Bestimmungen entsorgt werden TECHNISCHE VORSICHTSMASSNAHMEN Kit Komponenten e S mtliche Reagenzien und Proben m ssen vor der Testdurchf hrung auf Raumtemperatur 18 28 C quilibriert werden Die Reagenzien gut mischen Vortex vor dem Gebrauch e Die Reagenzien d rfen nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwendet werden e Mischen Sie nicht Reagenzien verschiedener Kit lots e Die Testkassetten d rfen nicht wiederverwendet werden Testablauf e Lesen Sie die Testanleitung vor der Testdurchf hrung sorgf ltig durch Die Leistungsdaten k nnen negativ beeinflusst werden wenn Reagenzien nicht korrekt verd nnt behandelt oder unter Bedingungen gelagert werden die von denen in der Arbettsanleitung beschriebenen abweichen e Vor Testbeginn muss der Quantum Blue Reader eingeschaltet werden Calprotectin assay B CALE RCC bzw B CALE RCC720 muss programmiert sein siehe Quantum Blue Reader Handbuch e Benutzen Sie die weisse RFID Chipkarte um die testspezifischen Parameter zu andern e UnsachgemaBe Handhabung der Patientenproben k nnen zu unbrauchbaren Resultaten f hren e Um verl ssliche quantitative Resultate zu erhalten ist es wichtig dass die im Extraktionsr hrchen befindliche Stuhl probe vollstandig homogenisiert wird e Verd nnte Extrakte sollten innerhalb einiger Stunden abgearbeitet werd
30. ck cono amp tappo dosatore contenenti B CAL SO50 Prep 1 3 mL di tampone di estrazione pronto all uso Table 11 Controlli Il set di controlli per il Kit Quantum Blue LF CALE25 possono essere ordinati separatamente i 2 fl i Controlli path B CALE CONSET Pronto all uso alto basso 0 5 ml Table 12 concentrazioni di Calprotectina lotto specifiche Revision date 2015 02 03 12 24 MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI e Miscelatore vortex per l estrazione delle feci e Pipette di precisione con puntali monouso 10 200 ul e 1ml e Centrifuga e Provette in polipropilene o polistirene di 5 ml per la diluizione degli estratti e Timer facoltativo e Quantum Blue Reader fornito da B HLMANN codice BI POCTR ABS e Salviette o carta da blotting B HLMANN LF CALE25 RACCOLTA E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Se si utilizzano i dispositivi di estrazione suggeriti vedere tabelle 11 la procedura richiede meno di 1 g di feci native per l estrazione Prelevare il campione di feci in provette o contenitori campioni possono conservati a 2 8 C per 6 giorni Gli estratti sono stabili a 2 8 C per almeno 7 giorni e a lt 20 C per almeno 24 mesi Importante il campione deve essere prelevato senza l aggiunta di additivi chimici o biologici nel dispositivo di CONTROLLO DI QUALIT Se la precisione del dosaggio non correla con i limiti stabiliti e la ripetizione del test esclude errori tecnici s
31. de de commande EK CAL Dans une tude clinique 401 patients symptomatiques devant subir une coloscopie ont t tudi s Table 18 L examen endoscopique a montr que 273 patients presentaient des maladies fonctionnelles tandis que 128 patients avaient diff rentes maladies organiques colite maladie de Crohn ulc re diverticulite polypes ad nomes cancer ou maladies infectieuses L analyse des courbes ROC ASC 0 935 a permis d tablir une valeur seuil clinique optimale de 50 ug g Pour diff rencier une maladie organique d une maladie fonctionnelle l application de ce seuil permet d atteindre une sensibilit et une sp cificit cliniques de 84 4 et de 94 5 respectivement Le niveau sugg r de la valeur seuil pour les adultes lt 50 ug g peut tre utilis pour les enfants g s de 4 17 ans des deux sexes r f 7 Tandis que les taux f caux de calprotectine des enfants et des adultes sont comparables les taux relev s chez le nouveau n peuvent tre significativement augment s r f 6 Valeurs inf rieures 50 ug g Les valeurs de calprotectine lt 50 ug g ne sont pas indicatives d une inflammation au niveau du tractus gastro intestinal Les chantillons de patients ayant un niveau bas de calprotectine f cale ne n cessitent donc plus aucune proc dure invasive pour d terminer la cause de l inflammation r f 4 Valeurs lev es entre 50 et 200 ug g Les valeurs de calprotectine obte
32. den wurde Kontrollbande Die Signalintensit t der Testbande und der Kontrollbande wird durch den Quantum Blue Reader quantifiziert GELIEFERTE REAGENZIEN UND VORBEREITUNG Reagenz Menge Art Nr Kommentar In einem Test Kassette 25 St ck B LFCALUS TC Folienbeutel vakuumdicht Extraktionspuffer 1 Flaseh B CAL EX Gebrauchsfertig 125 mL RFID Chip Karte 1 St ck B CALE RCC Weisse Plastikkarte RFID Chip Karte 1 St ck B CALE RCC720 Gr ne Plastikkarte Table 4 REAGENZIEN amp MATERIAL ZUS TZLICH ERH LTLICH Stuhlextraktionsr hrchen Extraktionsr hrchen werden zur Stuhlextraktion ben tigt aber nicht mitgeliefert Eines der Devices muss zus tzlich zum Kit bestellt werden CALEX Cap 50 oder 200 R hrchen gef llt 2 d Extraktionsr hr mit 5 mL Extraktionspuffer II chen gebrauchsfertig 50 R hrchen bestehend aus Smart Prep Spatel und B den B CAL RD 50 R hrchen bestehend aus heBo Quick R hrchen Konus und EEO Quic Dosierspitze gef llt mit 1 3 mL B CAL SO50 rep Extraktionspuffer gebrauchsfertig Table 5 Kontrollen Kontrollen f r B HLMANN Quantum Blue LF CALE25 k nnen separat bestellt werden VORSICHTSMASSNAHMEN SICHERHEITSMASSNAHMEN e Keiner der Kitbestandteile enth lt Material menschlicher Herkunft e Alle Patientenproben sollten gem Gute Laborpraxis GLP als potentiell infekti s behandelt werden und die entsprechenden Si
33. e v rtice antes de ser utilizados e Los componentes no deben utilizarse despu s de la fecha de caducidad impresa en las etiquetas e No se deben mezclar reactivos de lotes diferentes e Los casetes de prueba no deben ser reutilizados Procedimiento de an lisis e Lea atentamente las instrucciones antes de realizar el ensayo El rendimiento del ensayo se ver gravemente afectado si los reactivos son incorrectamente diluidos modificados o almacenados en condiciones distintas a las que se detallan en estas instrucciones de uso e El lector Quantum Blue debe ponerse en funcionamiento y programarse para el an lisis de Calprotectin B CALE RCC o B CALE RCC720 antes de iniciar el an lisis v ase el manual del lector Quantum Blue e Utilizare la tarjeta blanca con chip RFID para modificare los par metros de prueba espec ficos de lote e A fin de obtener unos resultados fiables y cuantitativos es importante homogeneizar completamente la muestra de heces en el dispositivo de extracci n Una manipulaci n incorrecta de las muestras de pacientes puede dar lugar a la obtenci n de resultados inexactos e Las muestras diluidas deber n utilizarse en un plazo de varias horas y no pueden conservarse durante un tiempo m s prolongado e Es importante centrifu ugar los extractos con Smart Prep o ScheBo Quick Prep antes de la conservaci n 5 minutos a 3 000 x g Despu s de la centrifugaci n el sobrenadante debe transferirse en
34. ebe ser visible en cualquier caso v anse las figuras 1A y 1B Se usa s lo como control funcional de la prueba y no puede usarse para la interpretaci n de la l nea de test T Si la l nea de test T no es detectable despu s de 12 minutos de incubaci n figura 1A no hay cantidades detectables de calprotectina presentes en la muestra de heces Si la l nea de test T es detectable despu s de 12 minutos de incubaci n figura 1B la cantidad de calprotectina presente en la muestra de heces se calcula mediante el lector Quantum Blue e Si s lo la linea de test T es detectable despu s de 12 minutos de tiempo de incubaci n figura 1C el resultado de la prueba no es v lido y el an lisis de calprotectina debe repetirse con un cartucho de prueba nuevo e Si ni la linea control C ni la linea de test T se detectan despu s de 12 minutos de tiempo de incubaci n figura 1D el resultado de la prueba no es valido y el an lisis de calprotectina debe repetirse con un cartucho de prueba nuevo e Como el lector Quantum Blue permite la evaluaci n cuantitativa de las lineas de test T y control C se realiza una validaci n adicional de la validez de la l nea control C Si la intensidad de la l nea control C es inferior a un umbral despu s de 12 minutos de tiempo de incubaci n el resultado de la prueba no es v lido y el an lisis de calprotectina debe repetirse con un cartucho de prueba nuevo ESTANDARIZACI N E
35. en eine endoskopische Untersuchung durchgef hrt wurde Calprotectin im Stuhl Table 18 Die endoskopische Untersuchung zeigte bei 273 Patienten eine funktionelle Erkrankung w hrend bei 128 Patienten unterschiedliche organische Erkrankungen festgestellt wurden Kolitis Morbus Crohn Divertikulitis Polypen Adenome Karzinome oder Infektions erkrankungen Die ROC Analyse AUC 0 935 ergab einen klinischen Grenzwert von 50 ug g Calprotectin Wendet man diesen Grenzwert bei der Unterscheidung zwischen organischen und funktionellen Erkrankungen an kann eine klinische Spezifit t von 84 4 und eine Sensitivit t von 94 5 erreicht werden Calprotectin Werte von Erwachsenen und Kindern zwischen 4 und 17 Jahren sind vergleichbar Ref 7 w hrend die Werte von Neugeborenen signifikant h her sind Ref 6 Diese Daten st tzen die folgenden Empfehlungen zur Beurteilung der Ergebnisse Normalwerte unter 50 ug g Calprotectin Werte lt 100 ug g deuten nicht auf eine entz ndliche Erkrankung des Darmes hin Weitere Untersuchungen durch einen Spezialisten oder eine medikament se Behandlung werden empfohlen Ref 4 Erh hte Werte zwischen 50 und 200 ug g Calprotectin Werte zwischen 50 und 200 ug g k nnen durch eine milde Form der organischen Erkrankung wie z B eine durch NSAIDs verursachte Entz ndung eine milde Form der Divertikulitis und durch IBD in einer Remissionsphase verursacht werden Da eine geringe Entz ndungsaktivit t vorha
36. en und k nnen nicht ber einen l ngeren Zeitraum gelagert werden e Es ist wichtig dass die Extrakte im Smart Prep oder ScheBo Quick Prep vor der Lagerung 5 Min bei 3 000xg zentrifugiert werden Nach der Zentrifugation muss der berstand in ein frisches R hrchen transferiert werden Mit CALEX Cap Device k nnen die Extrakte direkt im Device gelagert werden Zur Wiederverwendung wieder Messung der Extrakte siehe Schritt 2 unter dem Kapitel Arbeitsanleitung 2 Fl schchen 0 5 mL Kontrollen Niedrig Hoch B CALE CONSET Gebrauchsfertig Table 6 Lot spezifische Calprotectin Konzentration Revision date 2015 02 03 6 24 ERFORDERLICHE LABORGERATE UND HILFSMITTEL Vortex Mischer f r die Stuhlextraktion Pr zisionspipetten mit Einwegspitzen 10 200 ul und 1 ml Zentrifuge 5 ml Polypropylen oder Polystyrol Einwegr hrchen zur Durchf hrung von Extraktverd nnung Laborwecker optional e Quantum Blue Reader bei B HLMANN erh ltlich Art Nr BI POCTR ABS e Papiert cher und FlieBpapier B HLMANN LF CALE25 PROBENGEWINNUNG UND LAGERUNG F r die Stuhlextraktion mit einem Extraktionsbesteck wird weniger als 1 g native Probe ben tigt Table 5 Die Stuhlprobe muss in einem leeren Entnahmer hrchen gesammelt werden und kann mindestens 6 Tage bei 2 8 C gelagert werden Die Extrakte sind f r mindestens 7 Tage bei 2 8 C und mindestens 24 Monate bei 20 C stabil Wichtig Die Stuhl
37. est membrane test line test band and the remaining free anti Calprotectin gold conjugate binds to the goat anti mouse antibody coated on the test membrane control line control band The signal intensities of the test line and the control line are measured quantitatively by the BUHLMANN Quantum Blue Reader REAGENTS SUPPLIED AND PREPARATION Reagents Quantity Code Comments vacuum Test Cassette 25 pieces B LFCALUS TC sealed ina foil bag g 1 bottle Extraction buffer 125 mL B CAL EX Ready to use RFID Chip Card 1 piece B CALE RCC hig plastic RFID Chip Card 1 piece B CALE RCC720 SI plastic Table 1 REAGENTS amp MATERIAL SUPPLIED SUPPLEMENTARY Fecal Extraction Devices Fecal Extraction Devices described below are not delivered with the kit and either of them has to be ordered with the kit oeren 50 Les led win T 8 caLEx Can Device i B CALEX C200 ready to use 50 tubes consisting of E Smart Prep spatulas and base caps BSALRD a 50 tubes consisting of tube ScheBo Quick cone amp dosing tip gt S Prep Filled with 1 3 mL extraction P CAL S050 buffer ready to use Table 2 Controls Controls for BUHLMANN Quantum Blue LF CALE25 can be ordered separately Controls 2 vials Low High 0 5 mL B CALE CONSET Ready to use Table 3 Lot specific concentration of Calprotectin Revision date 2015 02 03 3 24 PRECAUTIONS SAFETY PRECAUTIONS
38. f incubation time Figure 1B the Calprotectin concentration present in the stool sample is calculated by the Quantum Blue Reader If only the Test Line T is detectable after 12 minutes of incubation time Figure 1C the test result is invalid and the Calprotectin assay has to be repeated using another test Cassette If neither the Control Line C nor the Test Line T are detectable after 12 minutes of incubation time Figure 1D the test result is invalid and the Calprotectin assay has to be repeated using another test Cassette As the Quantum Blue Reader allows a quantitative evaluation of the Test T and Control C Lines an additional validity check of the Control Line C is undertaken If the signal intensity of the Control Line C is below a threshold after 12 minutes of incubation time the test result is also invalid and the Calprotectin High Range assay has to be repeated using another test Cassette STANDARDIZATION AND INTERPRETATION OF RESULTS The Lateral Flow Assay is calibrated with the BUHLMANN fCAL ELISA order code EK CAL The BUHLMANN Quantum Blue Reader uses a lot specific standard curve to calculate the Calprotectin concentration The assay range is between 30 and 1000 ug g For quantitative measurements unknown samples reading above 1000 ug g can be re tested in the BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin High Range assay order code LF CHR25 LIMITATIONS The reagents supplied with this
39. i controllino gli aspetti seguenti i dispositivi di pipettaggio controllo della temperatura e timer ii data di scadenza dei reagenti e iii condizioni di conservazione e incubazione Il self test che viene eseguito quando si accende il Quantum Blue Reader deve essere valido raccolta PROCEDURA DEL TEST La procedura si compone di tre fasi distinte 1 Estrazione dei campioni di feci L estrazione descritta nelle istruzioni per l uso fornite con i rispettivi sistemi di estrazione 2 Trattamento del campione e Smart Prep o ScheBo Quick Prep Dopo l estrazione fare decantare l estratto del campione di feci per almeno 10 minuti Diluire il surnatante 1 10 con il tampone di estrazione es 50 uL di estratto e il 450 uL di tampone di estrazione e mescolare bene Lasciare equilibrare i campioni per almeno 5 minuti a 18 28 C prima di procedere alla prossima fase fase no 3 e Dispositivo CALEX Cap Dopo l estrazione fare decantare l estratto del campione di feci per almeno 10 minuti con l estremit col tappo bianco rivolta verso il basso Svitare il cappuccio blu Il supernatante pu essere utilizzato senza ulteriore diluizione nel test a flusso laterale 3 Dosaggio a flusso laterale e lettura Due metodi alternativi possono essere caricati dalla rispettiva carta chip RFID B CALE RCC o B CALE RCC720 Selezionare una delle carte chip RFID prima di iniziare gli esperimenti Caricare i parametri specifici
40. ifique pour chaque lot Revision date 2015 02 03 9 24 MATERIEL REQUIS MAIS NON FOURNI e Vortex pour l extraction des selles Pipettes de pr cision extr mit s jetables 10 200 ul etiml Centrifugeuse Tubes jetables en polypropyl ne ou polystyr ne de 5 ml minuteur facultatif Quantum Blue Reader disponible chez B HLMANN code de commande BI POCTR ABS e Papier absorbant BUHLMANN LF CALE25 PRELEVEMENT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS La proc dure n cessite moins de 1 g de selle native par extraction en utilisant un dispositif d extraction Table 8 Le prelevement de selles se fait dans des tubes ordinaires Elles se conservent au r frig rateur a 2 8 C au moins 6 jours Les extraits sont stables pendant au moins 7 jours a 2 8 C et au moins 24 mois a 20 C Important Les chantillons doivent tre pr lev s sans additifs PROCEDURE DE DOSAGE La proc dure de dosage se d roule en 3 tapes 1 Extraction des chantillons de selles La proc dure d extraction est d crite dans le manuel d utilisation fourni avec les tubes d extraction respectifs 2 Pr paration des extraits e Smart Prep ou ScheBo Quick Prep apr s extraction laisser les extraits s dimenter pendant 10 minutes Diluer l extrait au 1 10 me avec du tampon d extraction par exemple 50 ul d extrait et 450 ul de tampon d extraction et bien homog n iser Laisser les chantillons reposer pendant au moins 5 minutes tem
41. iti in modo errato gestiti o conservati diversamente da come specificato nelle presenti istruzioni per Puso e Il Quantum Blue Reader deve essere acceso e programmato per il dosaggio della Calprotectin B CALE RCC o B CALE RCC720 prima di iniziare l analisi vedere il manuale del Quantum Blue Reader e Utilizzare la carta RFID bianca per modificare i parametri del test specifici per ogni lotto e campioni manipolati in modo scorretto possono dare origine a risultati inesatti e Per ottenere risultati affidabili e quantitativi importante che i campioni di feci vengano completamente omogeneizzati con il sistema di estrazione e campioni diluiti devono essere utilizzati entro alcune ore e non possono essere conservati pi a lungo e importante che gli estratti con Smart Prep e ScheBo Quick Prep siano centrifugati 5 min a 3 000 x g prima della conservazione Dopo la centrifugazione il surnatante deve essere trasferito in una nuova provetta Con il dispositivo CALEX Cap possibile conservare gli estratti direttamente con il dispositivo Per il riutilizzo rimisurazione degli estratti vedere il passo 2 sotto il capitolo Procedura del Test Dispositivo 50 o 200 dispositivi contenenti 5 B CALEX C50 CALEX Cap mL di tampone di estrazione pronto all uso B CALEX C200 Smart Prep 50 dispositivi costituiti da spatole e g cAL RD camere di raccolta feci ar 50 dispositivi costituiti da provetta ScheBo Qui
42. iva di valori di calprotectina in campioni di feci umane ref 1 6 in associazione con lo strumento per la lettura BUHLMANN Quantum Blue Reader Solo per uso professionale Canada Taiwan Solo per uso nel laboratorio CONSERVAZIONE E VALIDITA DEI REAGENTI Tutti i componenti del kit sono stabili a 2 8 C fino alla data d scadenza riportata sulle etichette PRINCIPIO DEL TEST Il test consente la determinazione quantitativa delllantigene Calprotectina mediante un immunodosaggio a sandwich Un anticorpo monoclonale di cattura mAb molto specifico per la calprotectina riveste la membrana di rilevazione Un secondo anticorpo monoclonale di rilevazione coniugato a oro colloidale e deposto sul supporto di rilascio del coniugato viene rilasciato nel sistema di reazione in seguito all aggiunta dell estratto diluito del campione di feci Il complesso calprotectina anti calprotectina coniugato con oro si lega all anticorpo anti calprotectina legato alla membrana linea di rilevazione banda di rilevazione e Panti calprotectina coniugato con oro in eccesso si lega all anticorpo di capra anti topo legato alla membrana linea di controllo banda di controllo Le intensit di segnale della banda di rilevazione e della banda di controllo vengono misurate quantitativamente con il BUHLMANN Quantum Blue Reader REAGENTI FORNITI E PREPARAZIONE Reagenti Quantit Codice Commenti Ra S Sigillata a vuoto C
43. kit are optimized to measure human Calprotectin in extracted stool samples Fecal Calprotectin values can be used as supplementary data available to the physician in establishing a diagnosis A Calprotectin test result obtained with the BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin rapid assay can be confirmed by measuring other biomarkers such as C Reactive Protein or by repeating the Calprotectin test with B HLMANN fCAL ELISA or using a second test cassette and comparing to the CDAI score and the clinical status of the patient before any clinical and or therapeutic decision is made During therapy follow up a Calprotectin test result obtained with the B HLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended assay can be interpreted by comparing the result with previous ones and in the context of the patient s clinical picture B HLMANN LF CALE25 EXPECTED VALUES Estimation of fecal Calprotectin is a reliable and simple way to distinguish organic from functional gastrointestinal diseases The following data were established with the BUHLMANN fCAL order code EK CAL In a clinical study 401 symptomatic consecutive patients scheduled for colonoscopy were investigated Table 18 Endoscopy examination showed 273 patients with functional diseases whereas 128 patients had various organic diseases colitis Crohn s ulceration diverticulitis polyps adenomas cancer or infectious diseases A clinical cut off at 50 ug g was determined by R
44. la o s o mostrados na Figura 3 B HLMANN LF CALE25 APPENDIX TABLES AND FIGURES TABELLEN UND ABBILDUNGEN TABLES ET FIGURES TABELLE E FIGURE TABLAS E FIGURAS Figure 1 Test Results G ON ri N 5 o 5 o 5 o o o 4 4 4 4 AN IN J N J Figure 1A Figure 1B Figure 1C Figure 1D Table 18 Clinical Study Lu Lactoferrin n 401 391 cut off 50 ug g 3 ug ml Sensitivity 84 4 74 2 Specificity 94 5 91 0 PPV 87 8 79 3 NPV 92 8 88 4 LR 15 4 0 17 LR 8 25 0 28 Table 19 Precision Repeatability Sample Calprotectin Repeatability No Concentration CV mean ug g Smpl 1 24 2 23 5 Smpl2 32 9 18 7 Smpl3 51 0 17 9 Smpl 4 93 7 18 3 Smpl5 298 7 19 7 Smpl6 305 9 18 2 Smpl 7 509 7 23 9 Smpl8 662 1 20 6 Revision date 2014 11 14 21 24 Figure 2 Precision Profile 50 454 4 n 407 354 S 304 A 25 g 20 n E Q ee ur O is Sen m a 104 5 0 TT rr 10 100 1000 CAL ug g Figure 3 Method Comparison 1200 1000 8 5 800 D E u 600 z O 400 y 1 05x 0 39 a R 0 94 200 Linear Fit 95 CI a Ret sa 95 Prediction Interval TO T T T T T 0 200 400 600 800 1000 EK CAL ug g BUHLMANN LF CALE25 Tibble JA et al Use of surrogate markers of inflammation and Rome criteria to distinguish organic from no
45. lo di misurazione indicato tra 30 e 1000 ug g del saggio Quantum Blue Calprotectin Extended per tutti i campioni Recupero Il recupero del saggio dei campioni varia tra 90 6 e 101 8 Ripetibilit 20 1 di CV La ripetibilita del saggio Quantum Blue Calprotectin Extended stata calcolata da otto campioni di estratti fecali valori medi di tre diversi lotti di card sono presentati in Table 19 La ripetibilit del saggio dei campioni varia tra 17 9 e 23 9 CV Precisione inter lotto 20 8 di CV La precisione inter lotto del saggio Quantum Blue Calprotectin Extended stata calcolata da otto campioni di estratti di feci contenenti tra 30 e 1000 ug g di calprotectina dati inter lotto dei campioni variavano tra 16 1 e 24 1 CV Confronto dei metodi R 0 94 y 1 05 3 91 ug g 50 estratti fecali da pazienti con concentrazioni di calprotectina all interno dell intervallo di misurazione indicato del saggio Quantum Blue Calprotectin Extended sono stati analizzati con la procedura prevista per il dosaggio i risultati sono stati confrontati con i valori ottenuti mediante la procedura di dosaggio B HLMANN fCAL ELISA codice EK CAL Le correlazioni sono illustrate in Figura 3 B HLMANN LF CALE25 ESPANOL INDICACIONES DE USO El an lisis Quantum Blue Calprotectin Extended de BUHLMANN es un inmunoensayo disefiado para la determinaci n cuantitativa de concentraciones de calprotectina en muestras de heces hu
46. lprotectina probabilmente non sono necessarie ulteriori procedure invasive per determinare le cause dell infiammazione ref 4 Valori tra 50 ug g e 200 ug g valori di Calprotectina compresi tra i 50 e i 200 ug g possono indicare malattia di lieve entit una infiammazione causata da FANS una debole diverticolite e una IBD in fase di remissione La bassa risposta infiammatoria mostrata in questo range pu suggerire di ripetere la misurazione e di eseguire ulteriori indagini Valori superiore 200 ug g Valori di Calprotectina gt 200 ug g sono indicativi di attiva malattia organica con infiammazione nel tratto gastrointestinale Sono suggerite appropriate ulteriori procedure investigative e curative eseguite da specialisti PERFORMANCE CHARATTERISTICA Limite del Bianco LoB lt 20 ug g di calprotectina Limite di rilevabilit LoD lt 30 ug g di calprotectina Limite di Quantificazione LoQ LoQ inferiore lt 30 ug g di calprotectina LoQ superiore 21000 ug g di calprotectina Il LoQ stato stabilito con 14 estratti fecali Il profilo di precisione risultante mostrato in Figure 2 Il limite di quantificazione corrisponde alla concentrazione di calprotectina con un imprecisione inferiore al 25 di CV Revision date 2015 02 03 14 24 che consente una misurazione quantitativa nel range da 30 LoQ inferiore a 1000 ug g LoQ superiore Linearit risultati mostrano una linearit all interno dell interval
47. manas ref 1 en combinaci n con el lector B HLMANN Quantum Blue S lo para uso profesionale Canada Taiwan Solo para uso en el laboratorio PRINCIPIO DEL ANALISIS El an lisis permite la determinaci n selectiva del ant geno calprotectina mediante inmunoan lisis tipo s ndwich Un anticuerpo monoclonal conjugado con oro coloidal se encuentra en la zona de dispensaci n de la muestra y se libera en el sistema despu s de a adir la muestra de heces extra da y diluida El complejo calprotectina anticalprotectina oro coloidal se unir al anticuerpo de captura monoclonal altamente espec fico para calprotectina situado en la l nea test banda test y la anticalprotectina oro coloidal libre se unir al anticuerpo que recubre la l nea control banda control Las intensidades de la se al en la l nea test y la l nea control se miden cuantitativamente mediante el lector Quantum Blue de B HLMANN REACTIVOS SUMINISTRADOS Y PREPARACI N CONSERVACI N Y PER ODO DE VALIDEZ DE LOS REACTIVOS Todos los componentes del equipo permanecen estables a una temperatura entre 2 y 8 C hasta la fecha de caducidad impresa en las etiquetas Reactivos Cantidad C digo Comentarios 25 Sellado al vac o Cartucho de prueba uinidades B LFCALUS TC en una bolsa de aluminio 7 1 frasco Tamp n de extracci n 125 mL B CAL EX Listo para usar gt i i Tarjeta de Tarjeta chip RFID 1 unidad
48. mente pasados 12 minutos 720 segundos 3 2 M todo lt B CALE RCC gt sin cron metro interno e Use la tarjeta de pl stico blanca e A ada 60 ul de muestra de heces diluida en el puerto de carga de muestra del casete de prueba e Incube la muestra durante 12 minutos 1 minuto arranque un cron metro manualmente e Cargue el casete de prueba en el portacasetes de prueba del lector e Inicie el barrido del casete con el lector Quantum Blue Reader pulsando el bot n de inicio lt ENTER gt inmediatamente Revision date 2015 02 03 Observaci n Consulte el manual del lector Quantum Blue Reader para conocer sus funciones b sicas y saber c mo ponerlo en marcha y manejarlo especialmente c mo seleccionar m todos de prueba y c mo cargar par metros espec ficos del lote desde la tarjeta chip RFID para llevar a cabo an lisis de las muestras CONTROL DE CALIDAD e Si la precisi n del an lisis no se correlaciona con los l mites establecidos y la repetici n excluye los errores en la t cnica compruebe los siguientes puntos i pipeteado control de la temperatura y tiempo ii fechas de caducidad de los reactivos y iii condiciones de conservaci n e incubaci n e La autocomprobaci n calibration check del dispositivo Quantum Blue que se realiza tras encender el lector tiene que ser v lida VALIDACI N DE LOS RESULTADOS e Para la obtenci n de un resultado v lido de la prueba la l nea control C d
49. n cas de dilution incorrecte des r actifs ou bien si ces derniers sont manipul s ou stock s dans des conditions autres que celles sp cifi es e Le Quantum Blue Reader doit tre allum et programm pour le dosage de la calprotectine B CALE RCC ou B CALE RCC720 avant de commencer le test voir le mode d emploi du Quantum Blue Reader e Utiliser la carte puce RFID blanche pour modifier les param tres du test sp cifiques pour chaque lot e Une manipulation incorrecte des chantillons a tester peut entra ner de faux r sultats e Afin d obtenir des r sultats fiables et quantitatifs il est important d homog n iser l chantillon de selle en totalit dans le dispositif d extraction e Les chantillons dilu s doivent tre utilis s dans un d lai de quelques heures et ne peuvent tre conserv s plus longtemps e Il est important de centrifuger les extraits avec Smart Prep ou ScheBo Quick Prep avant de les conserver 5 min a 3000 x g Apres centrifugation le surnageant doit tre transf r dans un nouveau tube frais de conservation Avec les tubes CALEX Cap les extraits peuvent tre stock s directement dans le dispositif d extraction Pour la r utilisation r valuation des extraits voir l tape 2 dans le chapitre Proc dure de dosage 6 2 fl S nen Contr les acons B CALE CONSET Pr ts l emploi Bas Elev 0 5 ml Table 9 Concentration en calprotectine sp c
50. nden ist empfehlen sich eine Wiederholungsmessung und weitere Untersuchungen Erh hte Werte oberhalb von 200 ug g Calprotectin Werte gt 200 ug g deuten auf eine aktive Form einer organischen Erkrankung des gastrointestinalen Traktes hin Geeignete weitere Untersuchungen durch einen Gastro enterologen und therapeutische Massnahmen werden empfohlen LEISTUNGSMERKMALE Limit of Blank LoB lt 20 ug g Calprotectin Limit of Detection LoD lt 30 ug g Calprotectin Limit of Quantification LoQ Unterer LoQ lt 30 ug g Calprotectin Oberer LoQ 21000 ug g Calprotectin Die LoD wurde ermittelt mit Hilfe von 14 Stuhlextrakten Das entsprechende Pr zisionsprofil ist in Figure 2 dargestellt Die Nachweisgrenze entspricht derjenigen Calprotectin konzentration die eine Streuung von lt 25 CV zeigt und damit eine quantitative Bestimmung innerhalb eines Bereiches von 30 unterer LoQ bis 1000 ug g oberer LoQ erm glicht Linearit t Die Ergebnisse zeigen eine Linearit t der Ergebnisse innerhalb des angegebenen Messbereiches von 30 bis 1000 ug g f r alle Quantum Blue Calprotectin Extended Test Proben Revision date 2015 02 03 8 24 Wiederfindung Die Wiederfindung variierte zwischen 90 6 101 8 Repeatability 20 1 CV Die Repeatability des Quantum Blue Calprotectin Extended Tests wurde berechnet mit Hilfe von 8 Stuhlextrakten Die Mittelwerte von 3 verschiedenen Lots von Testkassetten werden in Table 19 dargestellt
51. norganic intestinal disease Gastroenterol 123 450 460 2002 Fagerhol MK Calprotectin a faecal marker of organic gastrointestinal abnormality Lancet 356 1783 4 2000 Tibble JA et al A simple method for assessing intestinal inflammation in Crohn s disease Gut 47 506 513 2000 Tschanguizi et al Stool Calprotectin as a Marker of inflammation Poster at UEGW 2007 Hessian PA and Fisher L The heterodimeric complex of MRP 8 S100A8 and MRP 14 S100A9 Antibody Revision date 2015 02 03 22 24 APPENDIX Il REFERENCES recognition epitope definition and the implications for structure Eur J Biochem 268 353 63 2001 Konikoff MR and Denson LA Role of fecal calprotec tin as a biomarker of intestinal inflammation in inflam matory bowel disease Inflamm Bowel Dis 12 6 524 34 2006 Fagerberg UL et al Colorectal inflammation is well predicted by fecal calprotectin in children with gastro intestinal symptoms J Pediatr Gastroenterol Nutr 40 450 5 2005 Jahnsen J Roseth AG Aadland E Measurement of calprotectin in faeces Tidsskr Nor Legeforen 128 743 5 2008 BUHLMANN LF CALE25 APPENDIX III SYMBOLS Symbol Explanation o Use By Verwendbar bis Utiliser jusqu au Utilizzare entro Fecha de caducidad Validade at Symbol ME Explanation Consult Instructions for Use Gebrauchsanweisung beachten Consulter le mode d emploi Consultare le istruzioni per I us
52. nues entre 50 et 200 ug g peuvent repr senter une maladie organique telle qu une inflammation caus e par les AINS une diverticulite non s v re ou un syndr me de l intestin irritable en phase de r mission La faible r ponse inflammatoire observ e dans cette gamme de concentration sugg re de r p ter la mesure et de r aliser des tests compl mentaires Valeurs lev es sup rieures 200ug g Les valeurs de calprotectine gt 200 ug g indiquent une maladie de type organique active avec inflammation du tractus gastro intestinal Il est sugg r de r aliser des examens compl mentaires et de mettre en place un traitement curatif sous le suivi de m decins sp cialistes CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE Limite de blanc LoB lt 20 ug g de calprotectine Limite de detection LoD lt 30 ug g de calprotectine Limite de quantification LoQ LoQ inf rieure lt 30 ug g de calprotectine LoQ sup rieure gt 1000 ug g de calprotectine La LoQ est obtenue a partir de 14 extraits de selles Le profil de pr cision r sultant est illustr sur la Figure 2 La limite de quantification correspond a la concentration de calprotectine avec une impr cision inf rieure a 25 de CV Il est donc possible d obtenir une mesure quantitative entre 30 LOQ inf rieure et 1000 ug g LOQ sup rieure Revision date 2015 02 03 11 24 Lin arit Les r sultats d montrent une lin arit dans l intervalle de mesure conseill 30
53. o Consulte las instrucciones de uso Consultar as intru es de uso J m n Catalogue number Bestellnummer Reference du catalogue Numero di catalogo N mero de cat logo N mero de cat logo Test Cassette Test Kassette Cassette de testi Card di rilevazione Cartucho de prueba Cassete de teste E ef Batch code Chargenbezeichnung No du lot No del lotto No de lote No do lote In Vitro Diagnostic Medical Device In Vitro Diagnostikum Dispositif medical de diagnostic in vitro Dispositivo medico diagnostico in vitro Producto sanitario para diagn stico in vitro Produto para Diagn stico in vitro Content sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenuto sufficiente per n saggi Contenudo sufficiente para lt n gt ensayos Conte do suficiente para lt n gt testes BUFIEX RCC Extraction Buffer Extraktionspuffer Tampon d extraction Tampone di estrazione Tampon de extracci n Tamp o de extrac o RFID Chip card RFID Chipkarte RFID Carte a puce RFID Carta chip RFID Tarjeta chip RFDI Cart o Chip D Temperature limitation Zul ssiger Temperaturbereich Limites de temp rature Limiti di temperatura Limite de temperatura Limite de temperatura Revision date 2015 02 03 23 24 BUHLMANN LF CALE25 Revision date 2015 02 03 24 24 B HLMANN LF CALE25
54. ompar ndolos con los resultados previos y en el contexto del cuadro cl nico del paciente VALORES ESPERADOS El c lculo de la calprotectina fecal es una manera fiable y sencilla de distinguir las enfermedades intestinales org nicas de las funcionales Se establecieron los siguientes datos con el ELISA de calprotectina de B HLMANN fCAL c digo para pedidos EK CAL En un estudio cl nico se investig a 401 pacientes consecutivos sintom ticos programados para una colonoscopia Table 18 El examen endosc pico mostr a 273 pacientes con enfermedades funcionales mientras que 128 pacientes sufr an diversas enfermedades org nicas colitis enfermedad de Crohn ulceraci n diverticulitis p lipos adenomas c ncer o enfermedades inflamatorias El an lisis de la curva ROC AUC 0 935 dio como resultado un valor umbral ptimo de 50 ug g Al aplicar este valor umbral se puede alcanzar una sensibilidad cl nica del 84 4 y una especificidad del 94 5 en la diferenciaci n entre enfermedades org nicas y funcionales El valor limite sugerido para los adultos lt 50 ug g puede usarse en los ni os de 4 a 17 a os con independencia del sexo ref 7 Si bien las concentraciones fecales de calprotectina en los adultos y los ni os son comparables las concentraciones de los reci n nacidos pueden estar significativamente aumentadas ref 6 Valores por debajo de 50 ug g Estos valores de calprotectina lt 50 ug g no son
55. p rature ambiante 18 28 C avant de proc der la prochaine tape tape 3 e Tube d extraction CALEX Cap apr s extraction laisser s dimenter les extraits pendant 10 minutes embout blanc vers le bas D vissez le bouchon bleu Le surnageant peut tre utilis sans autre dilution dans l essai en flux lat ral 3 Dosage en flux lat ral et lecture du r sultat Deux m thodes alternatives peuvent tre charg es de la carte puce RFID respective lt B CALE RCC720 gt et lt B CALE RCC gt S lectionnez l une des cartes puce RFID avant de proc der au test Charger les param tres sp cifiques au lot de r actif au moyen de la carte puce RFID 1 M thode lt B CALE RCC720 gt avec minuteur interne Utilisez la carte en plastique verte D poser la cassette test dans le tiroir du lecteur Ajouter 60 uL d extrait dilu via l orifice de chargement de la cassette test e Fermer le tiroir et lancer l analyse en appuyant sur le bouton de d marrage e La lecture d marre automatiquement apr s un d lai de 12 minutes 720 s 3 2 M thode lt B CALE RCC gt sans minuteur interne e Utilisez la carte en plastique blanche e D poser 60 uL d extrait dilu via l orifice de chargement de la cassette test e Laisser incuber pendant 12 1 minutes en utilisant un minuteur externe e Charger la cassette test dans le tiroir du lecteur e Lancer imm diatement la lecture de la cassette en appuyant sur le bouton de d
56. ples should be used within several hours and cannot be stored for a longer time period e With BUHLMANN Smart Prep and ScheBo Quick Prep it is important to centrifuge the extracts before storage Centrifuge the tubes for 5 minutes at 3000 x g After centrifugation the supernatant must be transferred into a fresh storage tube With CALEX Cap Device you can store the extracts directly with the device For re use re measurement of the extracts see step 2 under the chapter Assay Procedure MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Vortex mixer for stool extraction e Precision pipettes with disposable tips 10 200 ul and 1 ml e Centrifuge e 5 ml polypropylene or polystyrene tubes for dilution of the extracts e Timer optional e Quantum Blue Reader available from BUHLMANN order code BI POCTR ABS e Softtissues or blotting paper B HLMANN LF CALE25 SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE If the Extraction Devices are used refer to Table 2 less than 1 g of native stool will be required Collect stool samples into plain tubes The samples can be stored refrigerated at 2 8 C for at least 6 days The extracts are stable for at least 7 days at 2 8 C and for at least 24 months at lt 20 C Important The sample must be collected without any chemical or biological additives in the collection device ASSAY PROCEDURE The Assay Procedure consists of three steps 1 Extraction of stool samples The extraction is described in the
57. proben d rfen nicht mit chemischen oder biologischen Zus tzen versetzt werden ARBEITSANLEITUNG Der Arbeitsablauf gliedert sich in 3 Schritte 1 Extraktion der Stuhlproben Die Extraktion ist in der Arbeitsanleitung des gew hlten Extraktionsr hrchen beschrieben 2 Verarbeitung des Extraktes e Smart Prep oder ScheBo Quick Prep Die Extrakte nach der Extraktion 10 Minuten sedimentieren lassen Die Stuhlextrakte mit Extraktionspuffer 1 10 verd nnen z B 50 uL Extrakt 450 uL Extraktionspuffer Nach der Verd nnung gut mischen und die Proben vor Gebrauch f r mindestens 5 Minuten bei 18 28 C stehen lassen bevor Sie mit dem n chsten Schritt fortfahren 3 e CALEX Cap Device Die Extrakte nach der Extraktion 10 Minuten sedimentieren lassen mit dem weissen Verschluss nach unten Der Uberstand kann dann ohne weitere Verd nnung in dem Lateral Flow Testablauf verwendet werden 3 Lateral Flow Testablauf und Quantifizierung Es k nnen zwei alternative Methoden von der jeweiligen RFID Chipkarte geladen werden B CALE RCC oder B CALE RCC720 W hlen Sie eine der RFID Chipkarten vor dem Start der Experimente Laden Sie die testspezifischen Parameter von der RFID Chipkarte 3 1 Methode lt B CALE RCC720 gt mit internem Zeitmesser e Verwenden Sie die gr ne Chipkarte e Kassette auf den Kassettenhalter des Readers laden e 60 ul verd nnten Extrakt auf die Ladevorrichtung der Kassette aufbringen e Den Kassettenhalter
58. rotectin Limit of Detection LoD lt 30 ug g calprotectin Limit of Quantification LoQ Lower LoQ 30 ug g calprotectin Upper LoQ 21000 ug g calprotectin The LoQ has been established with 14 stool samples The resulting precision profile is shown in Figure 2 The limit of quantification corresponds to the concentration of Calprotectin with an imprecision below 25 CV allowing a quantitative measurement within the range from 30 lower LoQ to 1000 ug g upper LoQ Linearity The results showed linearity within the indicated measuring range of 30 to 1000 ug g of the Quantum Blue Calprotectin Extended assay for all samples Recovery The recovery varied between 90 6 101 8 Revision date 2015 02 03 5 24 Repeatability 20 1 mean CV The repeatability was calculated from 8 stool extract samples The mean values of three different lots of Test Cassettes are presented in Table 19 The repeatability varied between 17 9 23 9 CV Inter lot Precision 20 8 mean CV The inter lot precision of the Quantum Blue Calprotectin Extended assay was calculated from 8 stool extract samples containing between 30 and 1000 ug g calprotectin The inter lot data of the samples varied from 16 1 to 24 1 CV Method Comparison R 0 94 y 1 05 3 91 ug g 50 stool samples exhibiting calprotectin concentrations within the indicated measuring range of the Quantum Blue Calprotectin Extended assay were analyzed according to the assa
59. rs au dessus 1000 ug g peuvent tre test s nouveau avec le test de dosage BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin High Range code de commande LF CHR25 LIMITES Les r actifs fournis dans ce coffret sont optimis s pour le dosage de calprotectine dans les chantillons de selles Les valeurs de calprotectine f cale pourraient tre consid r es comme des indications suppl mentaires et permettre au m decin de poser un diagnostic Le r sultat d un dosage de calprotectine obtenu avec le dosage B HLMANN Quantum Blue Calprotectin peut tre confirm en dosant d autres marqueurs biologiques comme la prot ine C r active en r p tant le dosage de la calprotectine par BUHLMANN fCAL ELISA r f rence EK CAL ou en utilisant une seconde cassette test Comparer l indice CDAI du patient son tat clinique avant de prendre quelque d cision clinique et ou th rapeutique que ce soit B HLMANN LF CALE25 e Pendant le suivi th rapeutique interpr ter le resultat d un dosage rapide de la calprotectine a l aide du BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended en le comparant aux pr c dents dans le contexte du tableau clinique du patient INTERPRETATION DES RESULTATS L estimation du taux de calprotectine f cale est une facon facile et fiable de diff rencier les maladies organiques des maladies fonctionnelles du tractus gastro intestinal Les donn es suivantes ont t tablies avec le test BUHLMANN fCAL ELISA co
60. rt of the test cassette e Incubate for 12 minutes 1 minute set a timer manually e Load the test cassette onto the test cassette holder of the Reader e Scan the cassette with the Quantum Blue Reader by pressing the start lt ENTER gt button immediately Remark Please refer to the Quantum Blue Reader Manual to learn about the basic functions and how to initialize and operate the Reader especially how to select test methods and how to load lot specific parameters from the RFID Chip Card in order to get the samples measured QUALITY CONTROL e If the precision of the assay does not correlate with the established limits and repetition excludes errors in technique check the following issues i pipetting temperature controlling and timing devices ii expiration dates of reagents and iii storage and incubation conditions Revision date 2015 02 03 4 24 Result of the self test of the Quantum Blue Reader performed at startup of the instrument has to be valid VALIDATION OF RESULTS For a valid test result the Control Line C must be visible in any case see Figures 1A and 1B It is used as functional test control only and cannot be used for the interpretation of the Test Line T If the Test Line T is not detectable after 12 minutes of incubation time Figure 1A the concentration of Calprotectin present in the stool sample is below the detection limit If a Test Line T is detectable after 12 minutes o
61. schliessen und den Start lt ENTER gt Knopf dr cken e Der Lesevorgang startet automatisch nach 12 Minuten 720 Sek 3 2 Methode lt B CALE RCC gt ohne internen Zeitmesser e Verwenden Sie die weisse Chipkarte e 60 ul verd nnten Extrakt auf die Ladevorrichtung der Kassette aufbringen e Die Kassette f r 12 1 Minute inkubieren einen Wecker manuell einstellen e Kassette auf den Kassettenhalter des Readers laden und auslesen durch Dr cken auf den Start lt ENTER gt Knopf Hinweis Nehmen Sie das Reader Manual zu Hilfe wenn Sie mehr ber die Basisfunktionen Inbetriebnahme und Bedienung erfahren wollen insbesondere wie Testmethoden ausgew hlt werden und wie lotspezifische Parameter von der RFID Chipkarte geladen werden um die Proben messen zu k nnen Zeitmesser ii Verfallsdaten der Reagenzien iii Lagerung und Inkubationsbedingungen Der Selbsttest der beim Einschalten des Quantum Blue Readers durchgef hrt wird muss g ltig sein VALIDIERUNG DER RESULTATE Damit das Testresultat als g ltig bewertet wird muss die Kontrollbande C klar ersichtlich sein siehe Figuren 1A und 1B Diese wird nur als Funktionskontrolle verwendet und kann nicht zur Interpretation der Testbande T benutzt werden Falls die Testbande T nach 12 Minuten Inkubation nicht nachweisbar ist Figur 1A bedeutet dies dass Calprotectin nicht nachweisbar ist Falls die Testbande T nach der Inkubation nachweisbar ist wird die
62. ssungen einen Durchf hrungsfehler ausschlie en sind folgende Bedingungen zu berpr fen i Pipetten Temperatur und Revision date 2015 02 03 7 24 EINSCHR NKUNGEN Die in diesem Kit gelieferten Reagenzien sind zur Bestimmung von humanem Calprotectin in extrahierten Stuhlproben optimiert Fecale Calprotectin Werte sollten als zus tzliches Hilfsmittel genutzt werden um die Diagnosestellung des Arztes zu erleichtern Ein Wert der mit dem BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin rapid Assay ermittelt wurde kann mit der Messung anderer Biomarkers wie des C reaktiven Protein oder durch Wiederholung der Calprotectinmessung best tigt werden mit dem BUHLMANN fCAL ELISA oder unter Verwendung einer zweiten Testkassette Die Ergebnisse k nnen mit dem CDAI Score und der Klinik des Patienten verglichen werden bevor eine klinische oder therapeutische Entscheidung getroffen wird W hrend des Therapie Follow ups sollte jedes mit dem BUHLMANN Quantum Blue Calprotectin Extended Schnelltest erzielte Testergebnis im Vergleich zu den Vorergebnissen und dem klinischen Bild des Patientenbefunden werden B HLMANN LF CALE25 ERWARTETE WERTE Die Bestimmung von Calprotectin aus Stuhlproben ist eine verl ssliche und einfache Methode um organische von funktionellen gastrointestinalen Erkrankungen zu unterscheiden Die folgenden Daten wurden mit dem B HLMANN ICAL IN ELISA erhoben In einer klinischen Studie wurde von 401 Patienten bei den
63. te VALORI ATTESI La determinazione della calprotectina fecale un metodo affidabile e semplice per distinguere tra patologie gastrointestinali organiche e funzionali dati seguenti sono stati ottenuti con il B HLMANN fCAL ELISA codice EK CAL In uno studio clinico sono stati valutati 401 pazienti sintomatici consecutivi in attesa di colonscopia Table 18 All esame endoscopico 273 pazienti sono risultati affetti da patologie funzionali mentre 128 pazienti presentavano svariate patologie organiche colite morbo di Crohn ulcera diverticolite polipi adenomi neoplasie maligne o malattie infettive L analisi della curva ROC AUC 0 935 ha evidenziato un valore soglia clinico ottimale a 50 ug g Applicando tale valore soglia nella differenziazione tra patologie organiche e funzionali si ottengono valori di sensibilit e specificit clinica dell 84 4 e del 94 5 rispettivamente valori soglia indicati per gli adulti lt 50 ug g possono essere utilizzati anche per i bambini di et compresa tra 4 e 17 anni indipendentemente dal sesso ref 7 Mentre negli adulti e nei bambini i livelli di calprotectina fecale sono paragonabili i livelli riscontrati nei neonati possono essere aumentati in misura significativa ref 6 Interpretazione dei risultati Valori lt 50 ug g valori di Calprotectina lt 50 ug g non sono indicativi di una infiammazione del tratto gastrointestinale Per pazienti con bassi livelli di Ca
64. te tem que ser repetido com outro cassete Como o leitor Quantum Blue permite a avalia o quantitativa das Linhas de Teste T e de Controlo C h uma valida o adicional da Linha de Controle C Se a intensidade do sinal da Linha de Controle C for inferior determinada para esse lote ap s os 12 min de incuba o o resultado do teste inv lido e o teste de calprotectina tem que ser repetido com outro cassete CALIBRA O E INTERPRETA O DE RESULTADOS O teste de imunocromatografia est calibrado de acordo com a B HLMANN fCAL ELISA refer ncia EK CAL O leitor B HLMANN Quantum Blue utiliza uma curva de calibra o espec fica do lote para calcular a concentra o de calprotectina A gama de calibra o varia de 30 a 1000 ug g Para medic es quantitativas amostras desconhecidas com leituras superiores de 1000 ug g podem ser re testadas no Quantum Blue Calprotectina High Range BUHLMANN refer ncia LF CHR25 CONTROLE DE QUALIDADE e Se a precis o do teste n o se correlacionar com os limites estabelecidos e as repeti es exclu rem erros t cnicos verifique o seguinte i pipetagem temperatura Revision date 2015 02 03 19 24 LIMITA ES Os reagentes fornecidos com o kit est o otimizados para quantificar a calprotectina humana em extratos de amostras de fezes Os valores de calprotectina Fecal podem ser utilizados pelo cl nico como dado adicional no estabelecimento do diagn stico
65. u essere utilizzata per interpretare la banda di rilevazione T Se la banda di rilevazione T non rilevabile dopo 12 minuti di incubazione Figura 1A la concentrazione di calprotectina presente nel campione di feci al di sotto del limite di rilevazione Se la banda di rilevazione T rilevabile dopo 12 minuti di incubazione Figura 1B la concentrazione di calprotectina presente nel campione di feci viene misurata tramite il Quantum Blue Reader Se rilevabile solo la banda di rilevazione T dopo 12 minuti di incubazione Figura 1C il risultato non valido e il dosaggio della calprotectina deve essere ripetuto con una nuova card Se n la banda di controllo C n la banda di rilevazione T sono rilevabili dopo 12 minuti di incubazione Figura 1D il risultato non valido e il dosaggio della calprotectina deve essere ripetuto con una nuova card Dal momento che il Quantum Blue Reader effettua una valutazione quantitativa sia delle bande di rilevazione T che di controllo C una ulteriore verifica della banda di controllo C necessaria Se l intensit di segnale della banda di controllo C inferiore alla soglia specifica dopo 12 minuti di incubazione il risultato non valido e il dosaggio della calprotectina deve essere ripetuto con una nuova card STANDARDIZZAZIONE E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Il dosaggio a flusso laterale stato calibrato utilizzando come riferimento il saggio B HLMANN
66. un tubo de conservaci n nuevo Con CALEX Cap dispositivo puede almacenar los extractos directamente con el dispositivo Para la reutilizaci n nueva medici n de los extractos de ver el paso 2 en el cap tulo Procedimiento del an lisis Controles 2 viales alto bajo 0 5 mL B CALE CONSET Listo para usar Table 15 concentraci n de calprotectina especifico del lote Revision date 2015 02 03 15 24 MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS e V rtex para la extracci n de heces e Pipetas de precisi n con puntas desechables 10 a 200 ul y 1 ml Centr fuga e Tubos de 5 ml desechables de poliestireno o polipropileno para la preparaci n de las diluciones los extractos B HLMANN LF CALE25 e Cron metro optativo e Lector Quantum Blue disponible de B HLMANN c digo para pedidos BI POCTR ABS e Pa uelos suaves o papel secante RECOGIDA Y CONSERVACI N DE LAS MUESTRAS El procedimiento requiere menos de 1 g de heces nativas por extracci n usando el dispositivo de extracci n fecal referirse a la Table 14 Recoger la muestra de feces en tubos sencillos y conservarla refrigerada a 2 8 C hasta 6 d as Los extractos son estables a 2 8 C por lo menos 7 dias y a lt 20 por lo menos 24 meses Importante La muestra debe recogerse sin ning n aditivo qu mico o biol gico en el dispositivo de recogida PROCEDIMIENTO DEL AN LISIS El procedimiento del an lisis consiste en tres pasos
67. y procedure and compared with the values obtained by the B HLMANN fCAL order code EK CAL The correlation data are illustrated in Figure 3 BUHLMANN LF CALE25 DEUTSCH ANWENDUNGSZWECK Der Quantum Blue Calprotectin Extended assay von BUHLMANN ist ein Immunoassay zur quantitativen Bestimmung von Calprotectin Werten in humanen Stuhlproben ref 1 5 Der Test wird in Kombination mit dem Quantum Blue Reader angewandt Nur f r zur Anwendung durch medizinisches Fachpersonal geeignet Canada Taiwan Nur f r Laborzwecke geeignet LAGERUNG UND HALTBARKEIT DER REAGENZIEN S mtliche Kitkomponenten sind bei 2 8 C bis zum angegebenen Ablaufdatum haltbar PRINZIP DER METHODE Das Testprinzip beruht auf der selektiven Messung von Calprotectin mittels Sandwich Immunoassay Ein monoklonaler Fangantik rper mAk der hoch spezifisch f r Calprotectin ist wird auf eine Testmembran gebunden Ein zweiter monoklonaler Nachweisantik rper welcher mit Goldkolloide konjugiert ist wird auf dem Conjugate Release Pad aufgebracht Nach der Zugabe der extrahierten und verd nnten Stuhlprobe wird er in das Reaktions System freigesetzt Der Calprotectin Anti Calprotectin Goldkonjugat Komplex bindet an den auf der Membran gebundenen Anti Calprotectin Antik rper Testbande Das verbleibende nicht gebundene Anti Calprotectin Goldkonjugat wird von einem Ziege Anti Maus Antik rper gebunden welcher ebenfalls auf die Membran gebun

Quantum Blue Calprotectin Extended

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