Rosco Diagnostica
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1. Apr s incubation les bo tes de P tri sont examin es et les diam tres des zones d inhibition autour des comprim s sont mesur s et compar s aux tableaux interpr tatifs de zone pour les antibiotiques consid r s individuellement afin de d terminer l agent ou les agents convenant le mieux pour l antibioth rapie Les comprim s Neo Sensitabs sont normalis s selon les concentrations critiques recommand s par le CLSI NCCLS et EUCAST En outre les comprim s Neo Sensitabs sont adapt s aux concentrations critiques recommand s par Les groupes de normalisation de tests de sensibilit dans France et Royaume Uni On peut trouver les crit res interpr tatifs des diam tres de zone pour les diff rents pays dans le Guide Neo Sensitabs de l utilisateur www rosco dk R actifs Les comprim s Neo Sensitabs ont un diam tre de 9 mm et contiennent des antimicrobiens cristallins soigneusement m lang s un granul protecteur Un code unique 5 caract res est imprim des deux c t s du comprim Les comprim s Neo Sensitabs sont livr s en cartouches de 50 comprim s chacune Les cartouches peuvent tre utilis es avec un distributeur Neo Sensitabs Les appareils distributeurs d livrent 7 9 12 ou 16 comprim s Neo Sensitabs en une fois et aucune pression suppl mentaire sur les comprim s n est n cessaire car la distribution est automatique Stockage Conservation 1 D s r ception v rifier le symbole de temp ratur2. la Vancomycine VRE Vancomycin resistant enterococci La d tection de VRE par la m thode de diffusion n cessite les tapes suivantes 1 Comprim s Neo Sensitabs Vancomycine 5 ug 2 Incubation pendant 24 heures compl tes 3 Examen attentif de la zone d inhibition Les souches sensibles pr sentent un bord net dans la zone tandis que les souches r sistantes ont un bord flou Pour obtenir plus d informations lire le Guide de l utilisateur Neo Sensitabs www rosco dk R sistance de haut niveau aux aminoglycosides HLR High level aminoglycoside resistance La r sistance de haut niveau aux aminoglycosides indique qu un isolat d ent rocoque ne sera pas touch de mani re synergique par une combinaison p nicilline ou glycopeptide plus aminoglycoside Le d pistage de la r sistance de haut niveau la gentamicine et la streptomycine devra tre effectu e sur les isolats d ent rocoques d origine sanguine ou du LCR liquide c phalo rachidien Des comprim s Neo Sensitabs teneur lev e tels que la Gentamicine 250 ug la Kkanamycine 500 ug et la Streptomycine 500 ug sont utilis s pour le d pistage de ce type de r sistance LIMITATIONS DES M THODES DE DIFFUSION Les comprim s Neo Sensitabs ont pour objet de proposer des essais de sensibilit antimicrobienne rapides et pr cis Des r sultats acceptables tir s des souches de contr le de qualit ne garantissent pas de r sultats pr cis avec tous les isolats de patie
3. tableaux et indiquent le fonctionnement correct de toute la proc dure R SULTATS Comparer le diam tre de zone enregistr avec celui des tableaux Les r sultats obtenus avec un organisme sp cifique peuvent tre d clar s Sensibles S Interm diaires I or R sistants RY Sensibles S On peut s attendre ce que l infection caus e par la souche test e r agisse une dose normale de l agent antimicrobien pr sent dans le comprim Crit res S sont sp cifi s seuls Pour certaines combinaisons d organismes antimicrobiens l absence de souches r sistantes emp che la d finition de toute cat gorie autre que Sensible Pour les souches produisant des r sultats sugg rant non sensibles les r sultats des tests d identification des organismes et de sensibilit antimicrobienne doivent tre confirm s Par la suite les organismes isol s doivent tre soumis un Laboratoire de r f rence pour des essais plus pouss s Interm diaire I La cat gorie interm diaire implique de la substance l utilisation en clinique sur les sites corporels o les m dicaments sont concentr s par ex l urine ou lorsqu une dose lev e d un produit antimicrobien peut tre utilis par ex b talactames La cat gorie interm diaire comprend galement une zone tampon qui devrait emp cher les petits facteurs DB V0004E 3 6 Rosco DIAGNOSTICA CE techniques incontr l s de provoquer des divergences significatives da
4. Rosco DIAGNOSTICA CE NEO SENSITABS MODE D EMPLOI R vision DBVO004F Date de publication 12 04 2013 Langue Fran ais NEO SENSITABS Tests de sensibilit pour antibiogramme Fabricant Rosco Diagnostica A S Taastrupgaardsvej 30 DK 2630 Taastrup Danemark www rosco dk Utilisation pr vue Les comprim s NEO SENSITABS sont utilis s pour r aliser des tests de sensibilit aux antibiotiques in vitro semi quantitatifs par la m thode de diffusion du comprim disque sur milieu g los d organismes non exigeants croissance rapide certains pathog nes bact riens exigeants et levures Principes de la methode Des comprim s Neo Sensitabs contenant une vari t d agents antimicrobiens sont appliqu s sur la surface d un milieu g los propre inocul avec une culture pure provenant d isolats cliniques Organismes non exigeants y compris Enterobacteriaceae Staphylococcus spp Pseudomonas spp Acinetobacter spp Enterococcus spp et Vibrio cholerae peuvent tre test s sur un milieu ne comportant ni sang ni autre additif comme le milieu g los de M ller Hinton I MH Haemophilus influenzae exige un milieu de test Haemophilus HTM Neisseria gonorrhoeae de GC agar base GCA Streptococcus pneumoniae et d autres streptocoques exigent un milieu M ller Hinton II 5 sang MH B Levures doivent tre test es sur un milieu RPMI 1640 ou un milieu shadomy modifi et les ana robies n cessitent des proc dures sp ciales
5. ation l interpr tation du diam tre de la zone l entreposage le stockage et la conservation des comprim s Neo Sensitabs ainsi que de l utilisation de cultures de contr le Sp cimen Le sp cimen doit tre absolument typique du lieu de l infection il faut donc s efforcer d obtenir un chantillon repr sentatif de la bact rie pathog ne correspondante Voir les instructions sur la pr paration de l inoculum METHODE Mat riel fourni Comprim s Neo Sensitabs selon l tiquette Mat riel n cessaire mais non fourni Milieu de culture r actifs organismes de contr le de qualit et mat riel de laboratoire n cessaire pour r aliser un test de sensibilit par la m thode de diffusion sur milieu g los l aide d une proc dure standardis e Pr parer une suspension ayant une turbidit correspondant au standard McFarland 0 5 en ajoutant 0 5 ml de 0 048 M BaCl 1 175 poids volume BaCL 2H 0 99 5 ml de 0 18 M HSO 1 vol vol tout en m langeant constamment Une pr paration standard peut galement tre achet e V rifier en utilisant un spectrophotom tre ayant un faisceau optique de 1 cm et une cuvette adapt e l absorbance 625 nm doit tre de 0 08 0 10 I Mode d emploi Bact ries I 1 Standardisation de l inoculum selon les directives CLSI NCCLS et EUCAST M thode directe de suspension des colonies Une turbidit quivalente la norme BaSO McFarland 0 5 peut tre d velopp e en faisan
6. bition totale sont mesur s sur la base de l inspection visuelle g n rale Les zones sont mesur es jusqu au millim tre entier le plus proche IL Mode d emploi levure II 1 Pr paration de l inoculum L inoculum devrait uniquement se traduire par une croissance confluente Pour la plupart des souches l inoculum devrait contenir environ 5x10 d UFC ml McFarland 0 5 dilu 1 1 avec une solution saline Pour Candida krusei utiliser un quivalent inoculum McFarland 0 5 dilu 1 10 et pour Cryptococcus spp utiliser un quivalent inoculum McFarland 1 0 non dilu II 2 Ensemencement a Les bo tes sont s ch es pendant 20 25 minutes 35 C avant l inoculation b Verser 0 5 ml bo te de 9 cm or 1 0 ml bo te de 14 cm de l inoculum pr par sur la surface de la g lose noyage et le liquide exc dentaire est aussit t enlev avec une pipette c La bo te ouverte est s ch e pendant 10 minutes 35 C et les comprim s sont plac s la surface de la g lose IL3 Incubation et lecture des bo tes L incubation 35 C pendant la nuit convient pour la plupart des souches isol es dans des infections syst miques L examen et la lecture de la bo te doivent avoir lieu au bout de 18 24 heures Si la croissance n est pas encore visible sur des souches particuli res on peut r incuber les bo tes pendant une dur e allant jusqu 24 heures suppl mentaires Pour Cryptococcus spp incuber 30 C
7. e sur le r cipient ext rieur Les comprim s Neo Sensitabs portant le symbole de 2 C 8 C doivent tre conserv s au r frig rateur et les comprim s Neo Sensitabs portant 25 C comme symbole sup rieur de temp rature sur le r cipient ext rieur doivent tre stock s temp rature ambiante 2 Si les comprim s Neo Sensitabs sont stock s dans un r frig rateur il faudra laisser la cartouche atteindre la temp rature ambiante pendant 30 minutes 1 heure avant de les ouvrir afin d viter toute condensation d eau sur les comprim s 3 Les comprim s Neo Sensitabs portant un symbole de temp rature situ entre 2 C et 8 C peuvent tre laiss s temp rature ambiante pendant 2 mois sans perte d efficacit notable 4 Les cartouches ouvertes plac es dans le distributeur doivent tre utilis es dans les deux mois pour les comprim s Neo Sensitabs portant le symbole de temp rature 2 C 8 C et dans les 12 mois pour les comprim s Neo Sensitabs portant le symbole de temp rature inf rieur 25 C La date limite d utilisation sur les cartouches s applique seulement aux cartouches intactes conservees la temp rature correcte DBVO004E 1 6 Rosco DIAGNOSTICA CE Pr cautions d emploi Suivre le mode d emploi L efficacit de Neo Sensitabs ne d pend pas seulement de la charge des comprim s mais aussi de l utilisation de param tres corrects pour l inoculum les bo tes de g lose la temp rature d incub
8. mprim C ftazidime clavulanate et C fepime Clavulanate sont tr s utiles pour les tests de confirmation de l ESBL Pour obtenir plus d informations lire le Guide de l utilisateur Neo Sensitabs www rosco dk Toutes les souches d ESBL doivent tre d clar es r sistantes toutes les p nicillines aux c phalosporines et l aztr oname Staphylocoques r sistants la m thicilline Le d pistage de la r sistance de type MRSA et la m thicilline oxacilline dans les staphylocoques coagulase n gatifs doit tre effectu en utilisant d oxacilline 1 ug et de la c foxitine La r sistance indique que tous les b ta lactames doivent tre donn s comme r sistants Pour obtenir plus d informations lire le Guide de l utilisateur Neo Sensitabs www rosco dk Les staphylocoques aureus sensibilit diminu e la vancomycine h VISA VISA GISA et VRSA La r sistance la vancomycine des Staphylocoques aureus VRSA doit tre recherch e l aide de la Vancomycine 5 ug mais la capacit des disques de d tecter VRSA est m connue e a pas valu car il n y a que quelques cas de VRSA isol s travers le monde Les souches sensibilit r duite la Vancomycine hVISA et VISA GISA ne peuvent donc tre d tect es par la m thode classique de diffusion Des informations compl mentaires peuvent tre obtenue dans le Guide de l utilisateur Neo Sensitabs ou sur le site web www rosco dk Ent rocoques r sistants
9. ns les interpr tations ainsi lorsqu une zone tombe dans la gamme interm diaire les r sultats peuvent tre consid r s comme quivoques et si des m dicaments alternatifs ne sont pas disponibles la r alisation d une CMI peut tre indiqu e R sistant R Dans ce cas le produit antimicrobien ne peut pas tre recommand pour un traitement D pistage et tests de confirmation pour les b ta lactamases large spectre ESBL Extended Spectrum Beta Lactamases Les b ta lactamases transf rables d origine plasmidiques qui cr ent une r sistance l gard des c phalosporines de troisi me g n ration et monobactames par ex aztr oname ont t d crites chez Klebsiella pneumoniae K oxytoca E coli et autres Ent robacteriac es Ces enzymes sont class es comme b ta lactamases large spectre ESBL et ont t impliqu s dans la r sistance clinique aux monolactames et aux c phalosporines large spectre Certaines de ces souches manifesteront des zones d inhibition inf rieures celles des souches normales sensibles mais sup rieures aux concentration critiques standard pour certaines c phalosporines large spectre ou pour l aztr oname Ces souches peuvent tre d pist es en utilisant les concentration critiques appropri s pour les ESBL La plupart des ESBL sont inhib s par l acide clavulanique le tazobactame ou le sulbactame et peuvent tre ais ment d tect s par le test de synergie double disque co
10. nts Lorsqu on obtient des r sultats atypiques ou incoh rents il faut recommencer les essais et ou refaire les proc dures d identification pour garantir des r sultats pr cis Il faudra envisager de rendre compte des r sultats inattendus et les isolats pourraient tre envoy s des laboratoires de r f rence pour des essais plus pouss s Des r sultats dangereusement trompeurs peuvent tre obtenus lorsque certains antimicrobiens sont test s sur des micro ne 3 6 A A pa j ARN amp m organismes sp cifiques Des m canismes de r sistance dans certaines esp ces sont plus difficiles d tecter que d autres et certains r sultats peuvent para tre actifs in vitro m me si les agents antimicrobiens ne sont pas efficaces sur le plan clinique Ces combinaisons comprennent les exemples suivants e Tous les antibiotiques de la famille des b ta lactamines l exception de l oxacilline de la m thicilline sur les DB V0004E 4 6 Rosco DIAGNOSTICA CE staphylocoques r sistants la m thicilline Les c phalosporines les aminoglycosides l exception des essais de r sistance niveau lev la clindamycine et l association trim thoprime sulfam thoxazole sur les ent rocoques Les c phalosporines de premi re et deuxi me g n ration et les aminoglycosides sur Salmonella spp et Shigella spp Les c phalosporines sur Listeria spp Profil des Glycopeptides pour S aureus sensibilit r duite la Vancom
11. pendant 42 48 heures II 4 Mesure des zones d inhibition Pour les antifongiques de structure poly nique amphot ricine B et nystatine mesurer la zone claire sans croissance visible l int rieur Les colonies pr sentes l int rieur de la zone doit tre consid r es comme tant des mutants r sistants Pour les azol s imidazoles et terbinafine les zones doivent tre mesur es jusqu aux colonies de taille normale Il y a souvent une zone de croissance de colonies partiellement inhib es dont la taille est plus faible proximit du comprim qu au bord de la zone r elle Les colonies de taille petite et moyenne ne sont pas des mutants r sistants Les comprim s Neo Sensitabs imidazoles azol s contiennent de la doxycycline afin d am liorer la qualit de lecture de leurs zones Pour la fluorocytosine mesurer la zone jusqu aux colonies de taille normale Les colonies individuelles l int rieur de la zone sont habituellement des mutants r sistants ils doivent tre isol s et test s nouveau CONTR LE DE QUALIT INTERNE Les proc dures de contr le de qualit utilisant des souches ATCC doivent tre entreprises au moins une fois par semaine et chaque fois qu un nouveau lot de g lose est introduit Le diam tre mesur devrait respecter les limites du diam tre de la zone de contr le pour la combinaison sp cifique de Neo Sensitabs et de souches de contr le Les limites des souches de contr le sont fix es dans les
12. robiologique tous les 3 ou 4 jours des isolats recueillis de mani re r p t e sur des patients durant le traitement afin de d tecter la s lection des clones qui produisent constitutivement des b ta lactamases du Groupe I R F RENCES Neo Sensitabs User s Guide 2013 www rosco dk National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004 Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria Approved Standard M11 A6 6th ed NCCLS Wayne Pa USA National Committee for Clinical Laboratory Standards 2009 Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests Approved Standard M2 S10 NCCLS Wayne Pa USA National Committee for Clinical Laboratory Standards 2002 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for bacteria isolated from animals Approved Standard M31 A2 2nd ed NCCLS Wayne Pa USA Ericsson H M and J C Sherris 1971 Antibiotic susceptibility testing Report of an international collaborative study Acta Path Microbiol Scand Sec B Suppl 217 1 90 Clinical and Laboratory Standards Institute NCCLS 2013 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing M100 S23 23rd Informational Suppl CLSI Wayne Pa USA 1 2 3 4 5 6 DBVO004E 5 6
13. t une suspension avec plusieurs colonies morphologiquement similaires d une bo te de g lose 18 24 h non s lective dans une solution de 4 5 ml 0 9 de NaCl La m thode est quivalente la m thode standardis e CLSI NCCLS et n cessite moins de temps L approche est conseill e pour tester des organismes exigeants tels que Haemophilus spp N gonorrhoeae Moraxella catarrhalis les pneumocoques streptocoques ainsi que les staphylocoques la recherche d une possible m ticillinor sistance ou d une r sistance l oxacilline I 2 Ensemencement a Dans les 15 minutes qui suivent tremper un ecouvillon st rile dans la suspension pr par e et retirer l exces d inoculum en appuyant fermement sur les parois du tube b Dans les 15 minutes suivantes les ecouvillons sont utilis s pour inoculer les boites de P tri c Inoculer la surface s ch e de la bo te de g lose appropri e en striant lecouvillin sur la totalit de la surface Laisser s cher la surface pendant 3 5 minutes ou 15 minutes au maximum avant de d poser les comprim s Neo Sensitabs sur le milieu d S lectionner les comprim s appropri s tels que ceux recommand s par les crit res CLSI NCCLS Pour l tude de H influenzae N gonorrhoeae et Streptococcus spp ne pas utiliser plus de neuf 9 Neo Sensitabs par bo te de 150 mm ou quatre 4 Neo Sensitabs par bo te de 100 mm I 3 Incubation et lecture des bo tes a Dans les 15 minutes placer la bo
14. te de g lose avec la c t g lose en haut dans un incubateur 35 C Haemophilus spp N gonorrhoeae S pneumoniae et autres streptocoques doivent tre tuv s dans une atmosph re enrichie 5 de CO b Examiner les bo tes apr s 16 18 heures d incubation 20 24 h pour N gonorrhoeae S pneumoniae et autres streptocoques Une incubation de 24 heures compl tes est recommand e pour la d tection de Staphylococcus aureus r sistant la m thicilline MRSA et pour la r sistance la vancomycine de Enterococcus spp Tenir la bo te face la lumi re transmise et examiner les zones de l oxacilline et de la vancomycine la recherche d une l g re croissance colonies minute de colonies r sistant respectivement la m thicilline ou la vancomycine dans les zones apparentes d inhibition Toute croissance discernable dans la zone d inhibition indique la r sistance la m thicilline ou la vancomycine Les bords de la zone d inhibition contiennent un grand nombre de petites colonies lorsqu on utilise des comprim s de trim thoprime sulfamides et de trim thoprime sulfam thoxazole Dans ce cas DBVO004E 2 6 Rosco DIAGNOSTICA CE les zones d inhibition sont mesur es jusqu aux colonies de taille normale ne pas tenir compte de la l g re croissance et mesurer la marge la plus vidente Pour plus de d tails lire le Guide de l utilisateur Neo Sensitabs www rosco dk c Les diam tres des zones d inhi
15. ycine C phalosporines et atr onam contre des E coli K pneumoniae and P mirabilis produisant des BLSE Les rapports de routine sur les r sultats des souches isol es du LCR pourraient tre dangereusement trompeurs pour le traitement des patients lors de l utilisation des substances suivantes Substances administr es uniquement par voie orale C phalosporines de premi re et deuxi me g n ration l exception du c furoxime sodium Clindamycine Macrolides T tracyclines Fluoroquinolones Certains antimicrobiens sont associ s l mergence de r sistance durant un traitement prolong Par cons quent les isolats initialement d clar s sensibles peuvent devenir r sistants au bout de quelques jours apr s l initiation du traitement Ceci se produit le plus fr quemment sur les souches suivantes Enterobacter Citrobacter et Serratia spp avec les c phalosporines de troisi me g n ration Pseudomonas aeruginosa avec la plupart des antimicrobiens Les staphylocoques avec des quinolones Tous les isolats de Enterobacter aerogenes E cloacae Citrobacter freundii Providencia spp Proteus spp l exception de P mirabilis Serratia marcescens P aeruginosa disposent des g nes pour la production des b ta lactamases du Groupe I Par cons quent il n y a pas d information utile pour la d monstration in vitro de l induction enzymatique Les laboratoires devraient mettre l accent sur la r p tition de l examen mic
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