Sérums d`agglutination de salmonelles
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1. S rums d agglutination de salmonelles FR 1 DOMAINE D APPLICATION Les s rums d agglutination de salmonelles sont destin s tre utilis s dans des tests d agglutination sur lame et en tube pour l identification s rologique des cultures de salmonelles des fins pid miologiques et diagnostiques Les s rums appropri s peuvent galement tre utilis s en tant qu antis rums t moins pour les suspensions color es de salmonelles et les antis rums H de salmonelles peuvent tre utilis s lors des proc dures de changement de phase 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST Le genre salmonelles est classifi dans le sch ma de Kauffmann White en s rotypes selon la nature des antig nes somatiques O et flagellaires H qui sont identifi s par les tests d agglutination Comme de nombreuses correspondances antig niques existent entre les salmonelles et des organismes d autres genres les proc dures d identification doivent comporter outre les tests s rologiques des techniques biochimiques et de culture Les s rums d agglutination sont destin s avant tout aux tests de confirmation mais peuvent tre galement utilis s avec les pr cautions d usage pour les tests de d pistage Les s rums sont absorb s de mani re liminer les agglutinines vis vis d autres antig nes de salmonelles ainsi que l agglutinine a paracolonique Les s rums d agglutination somatiques de salmonelles s rie ZC2. Serological Reagents for Bacterial Diagnosis Mon Bull Min Hlth 1961 20 134 ZC26 R30958201 2 ml ZC27 R30958301 2 ml ZC28 R30958401 2 ml ZC29 R30958501 2 ml ZC30 R30958601 2 ml ZC31 R30958701 2 ml ZC32 R30958801 2 ml ZC33 R30958901 2 ml ZC34 R30959001 2 ml ZC35 R30959101 2 ml ZC36 R30959201 2 ml ZC37 R30959301 2 ml ZD17 R30161401 2 ml ZD18 R30161501 2 ml ZD19 R30161601 2 ml ZD20 R30161701 2 ml ZD21 R30161801 2 ml ZD22 R30161901 2 ml ZD23 R30162001 2 ml ZD24 R30162101 2 ml ZD25 R30162201 2 ml ZD26 R30162301 2 ml ZD27 R30162401 2 ml ZD28 R30162501 2 ml ZD29 R30162601 2 ml L D ZD30 R30162701 2 ml ZD31 R30162801 2 ml ZD32 R30162901 2 ml ZD33 R30163001 2 ml ZD34 R30163101 2 ml ZD35 R30163201 2 ml ZD36 R30163301 2 ml ZD37 R30163401 2 ml ZD38 R30163501 2 ml ZD39 R30163601 2 ml gende des symboles R f rence de catalogue Dispositif m dical de diagnostic in vitro Consulter le mode d emploi Limite de temp rature temp rature de conservation Code de lot num ro de lot A utiliser avant date de p remption RER TITRE Derni re dilution montrant une agglutination positive ni CE IFU X7823A R vis Octobre 2013 Fabriqu par Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT UK Pour t
3. cause de la faible motilit des organismes Cette derni re peut tre am lior e par une sous culture sur g lose inclin e humidifi e sur g lose 0 5 en bo te de P tri ou sur g lose 0 2 en tube de Craigie Apr s incubation l extr mit la plus avanc e de la culture est pr lev e Pr parer une suspension bact rienne de faible concentration environ 10 organismes par ml Pr parer des dilutions en s rie d antis rum dans des volumes de 0 5 ml allant de 1 10 1 320 pour la d termination des facteurs O et Vi et de 1 25 1 800 pour les facteurs H Introduire 0 5 ml de la suspension d antig ne dans chaque tube Ceci a pour effet de doubler la dilution d antis rum Pr voir un tube t moin contenant uniquement la suspension et du s rum physiologique Donner une chiquenaude aux tubes pour en m langer le contenu Laisser incuber les tubes de facteur O 50 C pendant 4 heures les tubes de facteur Vi 37 C pendant 2 heures puis entre 2 et 8 C pendant 18 heures les amener temp rature ambiante 18 30 C avant lecture et les tubes de facteur H 50 C pendant 2 heures Donner une chiquenaude aux tubes puis observer l agglutination sur un fond fortement clair Etape 1 Etape 2 Etape 3 Etape 4 Etape 5 Etape 6 Inversion de phase La plupart des s rotypes de salmonelles poss dent des antig nes H diphasiques Les deux phases apparaissent souvent en culture
4. mais si l on n en d tecte qu une seule il peut tre n cessaire d isoler et d identifier l autre phase Ceci peut tre r alis par sous culture ou sous culture en s rie sur g lose 0 5 en bo te de P tri ou sur g lose 0 2 en tube de Craigie contenant du s rum d agglutination 1 pour la phase identifiable Apr s incubation l autre phase est recherch e sur le bord le plus avanc de la culture 8 RESULTATS Agglutination sur lame L agglutination doit tre forte et clairement visible au bout d une minute Il ne doit se produire aucune agglutination visible dans la solution t moin de s rum physiologique si ce n est pas le cas la suspension n est pas appropri e pour une analyse par cette m thode Dans certaines souches O l agglutination peut tre masqu e par la pr sence d antig ne Vi Ce dernier peut tre identifi par agglutination sur lame ou en tube l aide du s rum d agglutination de salmonelles Vi Si antig ne Vi est pr sent il doit tre d truit en chauffant une suspension d organismes dans du s rum physiologique 100 C pendant une heure Cette suspension est ensuite centrifug e le culot remis en suspension dans du s rum physiologique et les antig nes O doivent tre nouveau recherch s l aide d antis rums O Il convient de rappeler que l antig ne Vi n est pas sp cifique des salmonelles Agglutination en tube En cas de r action O ou Vi pos
5. riel utilis pour le nettoyage des claboussures y compris les gants doit tre limin comme s il s agissait de d chets biologiquement dangereux Ne pas effectuer de pipetages la bouche Pour manipuler les chantillons et effectuer le dosage porter des gants usage unique et des lunettes de protection Une fois le test termin se laver soigneusement les mains Les antis rums somatiques de salmonelles contiennent 0 5 de ph nol et les antis rums flagellaires de salmonelles 0 1 de l azoture de sodium Bien que leur concentration soit faible ces deux produits sont connus comme tant toxiques par ingestion et par contact avec la peau Ne pas avaler les r actifs Si l un d entre eux entre en contact avec la peau ou les yeux laver la surface en rin ant imm diatement et abondamment l eau Conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire il est fortement recommand de traiter les chantillons et r actifs comme s ils taient potentiellement infectieux et de les manipuler avec toutes les pr cautions n cessaires 5 2 Precautions d analyse 5 2 1 Ne pas utiliser les antis rums au del de la date de p remption indiqu e Eviter la contamination microbiologique des antis rums ceci pouvant provoquer des r sultats erron s et r duire la dur e de vie du produit 5 2 2 Ne pas modifier la proc dure du test ni les temps d incubation ou la temp rature Ne pas diluer 5 2 3 Apr s emplo
6. sont destin s l identification des antig nes O par un test d agglutination sur lame mais peuvent galement tre utilis s dans des tests de confirmation en tube Les s rums d agglutination flagellaires de salmonelles s rie ZD sont destin s l identification des antig nes H Les s rums polyvalents sont utilis s dans les tests d agglutination sur lame Les s rums monovalents peuvent galement tre utilis s pour des tests pr liminaires sur lame mais les r sultats obtenus de cette mani re devront tre confirm s par agglutination en tube Les antig nes H de phase 1 tr s r pandus peuvent tre identifi s l exception du facteur i par des tests d agglutination sur lame l aide de s rums de diagnostic rapide tableau 1 Tableau 1 Sch ma des r actions d agglutination des s rums de diagnostic rapide avec leurs s rotypes H correspondants Antig ne S rum 1 S rum 2 S rum 3 b _ d E G _ _ k L r Pour les s rotypes H poss dant des d terminants communs par exemple le groupe G fg gm gp gq gst les s rums polyvalents d sign s par des lettres majuscules doivent r agir approximativement au m me titre avec des organismes poss dant ce facteur lors de tests d agglutination en tube Les s rums d sign s par des lettres minuscules doivent r agir vis vis des organismes porteurs d antig nes homologues une diluti
7. ZC12 R30956801 5787 Salmonella newbrunswick 3 15 Iv 1 7 ZC13 R30956901 3048 Salmonella typhimurium 4 5 i 1 2 ZC14 R30957001 3048 Salmonella typhimurium 4 5 i 1 2 ZC15 R30957101 5745 Salmonella bareilly 6 7 y 1 5 ZC16 R30957201 6947 Salmonella virginia 8 d ZC17 R30957301 5765 Salmonella enteritidis 1 9 12 gm ZC18 R30957401 6021 Citrobacter ballerupensis ZC19 R30957501 5783 Salmonella zanzibar 3 10 k 1 5 ZC20 R30957601 6016 Salmonella rubislaw 11 r enx ZC21 R30957701 6533 Salmonella grumpensis 13 22 d 1 7 ZC22 R30957801 5794 Salmonella carrau 6 14 24 y 1 7 ZC23 R30957901 5787 Salmonella newbrunswick 3 15 Iv 1 7 ZC24 R30958001 5797 Salmonella gaminara 16 d 1 7 ZC25 R30958101 5798 Salmonella kirkee 17 b 1 2 ZC26 R30958201 8271 Salmonella blukwa 1872 ZC27 R30958301 6759 Salmonella taksony 1 3 19 i z ZC28 R30958401 5799 Salmonella kentucky 8 20 i z ZC29 R30958501 5800 Salmonella minnesota 21 b enx ZC30 R30958601 5732 Salmonella schleissheim 4 12 27 b ZC31 R30958701 6020 Salmonella telaviv 28 y enz ZC32 R30958801 9918 Salmonella godesberg 30 gm ZC33 R30958901 6586 Salmonella adelaide 35 fg ZC34 R30959001 8492 Salmonella mgulani 38 i 1 2 ZC35 R30959101 6851 Salmonella champaign 39 k 1 5 ZC36 R30959201 7898 Salmonella allandale 1 40 k 1 6 ZC37 R30959301 7401 Salmonella waycross 41 2 2 T moin n gatif pour tous les codes ZC et ZD Hafnia alvei NCTC 8535 Organisme de cat gorie 3 Tableau 4 Cultures t moins positives sal
8. pour les s rums d agglutination de salmonelles O ZC et les s rums d agglutination de salmonelles H 2D sont indiqu s respectivement dans les tableaux 3 et 4 Si un antis rum pr sente une agglutination avec une culture n gative connue ou ne pr sente aucune agglutination avec une culture positive connue il doit tre jet Tableau 3 Cultures t moins positives salmonelles O ZC 7 Taylor J 1967 The isolation and identification of salmonellae A C P Broadsheet No 58 3 Remel Stained Salmonella Suspension Instructions for Use Kauffman White Scheme 15 CONDITIONNEMENT ZC11 R30956701 2 ml ZC12 R30956801 2 ml ZC13 R30956901 2 ml ZC14 R30957001 2 ml ZC15 R30957101 2 ml ZC16 R30957201 2 ml ZC17 R30957301 2 ml ZC18 R30957401 2 ml ZC19 R30957501 2 ml ZC20 R30957601 2 ml ZC21 R30957701 2 ml ZC22 R30957801 2 ml ZC23 R30957901 2 ml ZC24 R30958001 2 ml ZC25 R30958101 2 ml ZDO2 R30959801 2 ml ZDO3 R30959901 2 ml ZDO4 R30160101 2 ml ZDO5 R30160201 2 ml ZDO6 R30160301 2 ml ZDO7 R30160401 2 ml ZDO8 R30160501 2 ml ZDO9 R30160601 2 ml ZD10 R30160701 2 ml ZD11 R30160801 2 ml ZD12 R30160901 2 ml ZD13 R30161001 2 ml ZD14 R30161101 2 ml ZD15 R30161201 2 ml ZD16 R30161301 2 ml R f rence R f Esp ces de salmonelles Structure NCTC antig nique ZC11 R30956701 10431 Salmonella paratyphi A 1 2 12 a
9. 7 R30162401 10214 Salmonella kaolack 47 z 1 6 ZD28 R30162501 7401 Salmonella waycross 41 22 ZD29 R30162601 5799 Salmonella kentucky 8 20 i z ZD30 R30162701 7405 Salmonella illinois 3 15 34 z 1 5 ZD31 R30162801 Salmonella simsbury 159 192 ZD32 R30162901 6388 Salmonella tennessee 67 12 ZD33 R30163001 7411 Salmonella weslaco Az ZD34 R30163101 8572 Salmonella fresno 9 46 z ZD35 R30163201 5785 Salmonella newington 3 15 34 eh 1 6 ZD36 R30163301 3048 Salmonella typhimurium 4 5 i 1 2 ZD37 R30163401 7409 Salmonella donna 30 lv 1 5 ZD38 R30163501 5785 ZD39 R30163601 6480 3 15 34 eh 1 6 1 6 14 25 d 1 7 Salmonella newington Salmonella florida REMARQUE Toutes les cultures font partie de la cat gorie 2 sauf indication contraire manant du comit consultatif britannique sur les pathog nes dangereux the Advisory Committee on Dangerous Pathogens ACDP 10 INTERPRETATION DES RESULTATS L tendue de l examen s rologique d pend de l objectif de l investigation Pour mettre en vidence du point de vue s rologique la pr sence d une salmonelle les cultures doivent tre test es avec des s rums polyvalents O polyvalents H et des s rums Vi Si une analyse plus approfondie est n cessaire il convient de d terminer l antig ne O en utilisant les s rums appropri s puis de rechercher l antig ne H le plus probable comme indiqu par le sch ma de Kauffmann White 11 LIMITES DE LA METHODE Bien qu il soit
10. i replacer les s rums la temp rature de conservation recommand e 6 PRELEVEMENT TRANSPORT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS Il est recommand d utiliser des cultures r centes sur milieux non s lectifs par exemple sur une g lose nutritive Pour de plus amples informations sur le pr l vement des chantillons et la pr paration des cultures consulter un manuel de r f rence 7 PROCEDURE Materiel fourni Les antis rums sont disponibles dans des flacons dot s de t tines et de comptes gouttes Materiel necessaire mais non fourni S rum physiologique 0 85 Lames de verre Anse bact riologique et bec bunsen Source de lumi re sur fond sombre Tubes essai et portoir Bain marie temp rature r glable avec thermom tre Chronom tre Pipettes Les suspensions color es SS01 R30855001 SS03 R30855201 SS04 R30952801 SS08 R30953201 SSO9 R30855301 SS11 R30953301 SS12 R30855401 SS13 R30953401 sont disponibles comme t moins D ROSE ES Ne 10 Centrifugeuse 11 S rum physiologique additionn de formol 0 5 ou bouillon de culture additionn de formol 7 1 Procedure du test Test d agglutination sur lame Distribuer deux gouttes s par es 40 ul chacune de s rum physiologique 0 85 sur une lame de verre Emulsionner les parties de la culture tester avecune anse dans chaque goutte de s rum physiologique 0 85 pour donner une suspension uniforme bien compacte Da
11. impossible de fournir des s rums monovalents pour tous les antig nes de salmonelles connus un large ventail de s rums est disponible il suffit l identification tr s pr cise de la majorit des types isol s de salmonelles Les antis rums fournissent uniquement une identification s rologique l identification compl te d un organisme doit se faire en association avec un test biochimique Alors que les s rums ont t absorb s pour minimiser les r actions crois es la possibilit de r actions crois es avec d autres antig nes de salmonelles ou d organismes apparent s d autres esp ces ne peut tre compl tement exclue 12 RESULTATS ATTENDUS Agglutination visible en pr sence d antig nes homologues 13 CARACTERISTIQUES SPECIFIQUES Voir le paragraphe Interpr tation des r sultats 14 BIBLIOGRAPHIE 1 Cruickshank R Duguid et al 1975 Medical Microbiology 12th Edition Volume 2 page 417 Churchill Livingstone London 2 Edwards P R and Ewing W H 1972 Identification of Enterobacteriaceae 3rd Edition Burgess Publishing Co Minneapolis 3 Farmer J J 1975 Formalinized bacterial antigens as a potential infection hazard J Clin Microbiol 2 359 4 Kauffmann F 1966 The Bacteriology of Enterobacteriaceae Munksgaard Copenhagen gt Nomenclature Committee of the International Assoc of Microbiologists Suppl to 6th Report 1958 Int Bull Bact Nomencl and Tax 8 79
12. itive une agglutination granulaire manifeste doit tre observ e alors que l agglutination H a un aspect floconneux caract ristique Un claircissement du liquide peut se produire et un s diment peut monter sous forme de masse granulaire puis se red poser au fond du tube lorsqu on donne une chiquenaude au tube Dans le cas d une r action n gative ainsi que pour la solution t moin de s rum physiologique l aspect de la suspension doit rester inchang et un tourbillonnement typique doit tre observ apr s agitation Une agglutination dans la solution t moin de s rum physiologique indique que la suspension est de type R rugueux et ne convient pas un test d agglutination en tube Le titre est la dilution s rique dans le dernier tube pr sentant une agglutination Un titre galant ou approchant celui inscrit sur le flacon indique que l antig ne est du m me s rotype que l antis rum Lorsque les s rums sont utilis s comme t moins de l activit des suspensions color es la proc dure d crite dans la notice d instruction accompagnant les suspensions color es de salmonelles O et H doit tre suivie Le titre obtenu doit se trouver dans un intervalle de deux facteurs de dilution en s rie par rapport celui inscrit sur le flacon 9 CONTROLE QUALITE Il est recommand de tester le produit tout au long de son utilisation avec des cultures positives et n gatives connues Des exemples de cultures positives
13. monelles H ZD R f rence R f Esp ces de salmonelles Structure NCTC antig nique ZD02 R30959801 6947 Salmonella virginia 8 d ZD03 R30959901 5793 Salmonella worthington 1 13 23 z lWw ZD04 R30160101 5783 Salmonella zanzibar 3 10 k 1 5 ZDO5 R30160201 5756 Salmonella narashino 6 8 a enx ZD06 R30160301 7886 Salmonella mississippi 1 13 23 b 1 5 ZD07 R30160401 9929 Salmonella yolo 35 c ZD08 R30160501 6947 Salmonella virginia 8 d ZD09 R30160601 5727 Salmonella abortusequi 4 12 enx ZD10 R30160701 3072 Salmonella anatum 3 10 eh 1 6 ZD11 R30160801 5727 Salmonella abortusequi 4 12 enx ZD12 R30160901 6020 Salmonella telaviv 28 y enz ZD13 R30161001 9890 Salmonella milwaukee 43 fg ZD14 R30161101 9890 Salmonella milwaukee 43 fg ZD15 R30161201 9918 Salmonella godesberg 30 gm ZD16 R30161301 9676 Salmonella dublin 1 9 12 gp R f rence R f Esp ces de salmonelles Structure NCTC antig nique ZD17 R30161401 10480 Salmonella moscow 9 12 gq ZD18 R30161501 3158 Salmonella senftenberg 1 3 19 gst ZD19 R30161601 3048 Salmonella typhimurium 4 5 i 1 2 ZD20 R30161701 5783 Salmonella zanzibar 3 10 k 1 5 ZD21 R30161801 5793 Salmonella worthington 1 13 23 z lWw ZD22 R30161901 5787 Salmonella newbrunswick 3 15 1v 1 7 ZD23 R30162001 5793 Salmonella worthington 1 13 23 z lWw ZD24 R30162101 9606 Salmonella rowbarton 16 mt ZD25 R30162201 6016 Salmonella rubislaw 11 r enx ZD26 R30162301 5745 Salmonella bareilly 6 7 y 1 5 ZD2
14. ns une suspension utilis e comme t moin ajouter une goutte 40 ul de s rum physiologique 0 85 et homog n iser Dans l autre suspension ajouter une goutte 40 ul d antis rum non dilu et homog n iser Faire doucement osciller la lame pendant une minute et observer s il se produit une agglutination sur un fond sombre clair par une lumi re indirecte Traiter la lame utilis e selon les r gles de d sinfection et d limination appropri es Etape 1 Etape 2 Etape 3 Test d agglutination en tube Des suspensions vivantes peuvent tre utilis es en tant qu antig nes mais des pr cautions doivent tre prises pour viter toute contamination du laboratoire Un antig ne O inactiv peut tre pr par en chauffant une suspension de s rum physiologique 0 85 100 C pendant 10 minutes puis en la centrifugeant et en remettant le culot en suspension dans du s rum physiologique 0 85 L utilisation de ph nol ou de formol dans la pr paration de l antig ne O doit tre vit e car ces substances inhibent l agglutination O en pr sence d antig nes H L antig ne H peut tre pr par pour les tests d agglutination en tube en mettant des organismes en suspension dans du s rum physiologique additionn de formol 0 5 ou en ajoutant du formol des bouillons de culture Les colonies issues de milieux primaires d isolation peuvent ne pas convenir la d termination du s rotype H
15. on plus grande d au moins deux tubes d cart que celle des organismes porteurs d antig nes h t rologues avec des facteurs communs pour un exemple voir tableau 2 Tableau 2 Sch ma type des r actions d agglutination en tube de 3 antig nes H apparent s avec leurs antis rums correspondants Antig ne Antis rum G fg gm gp fg 1 800 1 800 lt 1 200 lt 1 200 gm 1 800 lt 1 200 1 800 lt 1 200 gp 1 800 lt 1 200 lt 1 200 1 800 3 PRINCIPE DE LA METHODE Les tests s rologiques s appuient sur le fait que les anticorps pr sents dans le s rum et produits en r ponse l exposition des antig nes bact riens agglutinent les bact ries portant des antig nes homologues 4 REACTIFS 4 1 COMPOSITION DU COFFRET Voir le paragraphe Conditionnement pour plus de d tails 4 2 Description Preparation pour Utilisation et conditions de Conservation Recommandees Voir galement le paragraphe Pr cautions et restrictions d emploi 8 C 2 C Conserv s entre 2 et 8 C les s rums maintiennent toute leur activit au moins jusqu la date inscrite sur le flacon AGGLUTINATING SERUM Les antis rums somatiques de salmonelles contiennent 0 5 de ph nol et les antis rums flagellaires de salmonelles 0 1 de l azoture de sodium comme conservateurs Les s rums sont produits par des lapins Chaque flacon dot d une t tine et d un compte gouttes contient 2 ml de liquide et e
16. out support technique contacter le distributeur local
17. st fourni pr t l emploi Lors de leur conservation il arrive que certains s rums se troublent l g rement Ceci n indique pas n cessairement leur d t rioration et ne provoque normalement pas d interf rences avec les r sultats les s rums peuvent cependant tre clarifi s par centrifugation ou par filtration sur membrane 0 45 um avant l emploi Les s rums fortement troubles sont n cessairement contamin s et doivent tre jet s 5 PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI Destin exclusivement au diagnostic in vitro R serv exclusivement un usage professionnel Pour des informations sur les composants potentiellement dangereux se r f rer aux fiches de s curit fournies par le fabricant et aux tiquettes du produit 5 1 Informations de Securite 5 1 1 Manipuler toutes les bact ries conform ment aux directives appropri es en vigueur 5 1 2 L quipement non jetable doit tre st rilis apr s emploi selon une proc dure appropri e au choix bien que la m thode la plus appropri e soit la st rilisation en autoclave pendant au moins 15 minutes 121 C Le mat riel usage unique doit tre st rilis en autoclave ou incin r Les claboussures de mat riaux potentiellement infectieux doivent tre limin es imm diatement l aide d un papier absorbant et les surfaces contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant antibact rien standard ou de l alcool 70 Le mat
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