Maxwell® CSC RNA Blood Kit
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1. cette temp rature il est possible que les chantillons soient compl tement congel s Lorsque vous vous appr tez reprendre la purification des chantillons d congelez les tubes temp rature ambiante pendant 10 minutes avant de passer l tape suivante 8 Incubez temp rature ambiante pendant 10 minutes Au cours de cette tape pr parez les cartouches comme indiqu la Section 6 B 9 Transf rez le lysat au puits n 1 le plus grand puits de la cartouche Maxwell CSC RNA Blood Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 7 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 6 B Pr paration de la cartouche Maxwell CSC 1 Changez de gants avant de manipuler les cartouches Maxwell CSC RNA Blood les plongeurs CSC RSC et les tubes d lution Les cartouches sont plac es sur le portoir de la plateforme Maxwell CSC en dehors de l appareil et le portoir contenant les cartouches et chantillons est alors transf r l appareil pour proc der la purification Placez les cartouches utiliser sur le portoir de la plateforme Maxwell CSC Figure 2 Placez chaque cartouche sur le portoir de la plateforme en vous assurant que le puits n 1 le plus grand puits de la cartouche est le plus loign de tube d lution Appuyez verticalement sur la cartouche pour bien l engager dans le porto2. e au puits n 4 et un plongeur est ajout au puits n 8 Figure 2 Installation et configuration du portoir de la plateforme Maxwell CSC L eau sans nucl ases 50 ul est ajout e aux tubes d lution comme indiqu Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 9 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 7 Ex cution de l appareil La m thode Maxwell CSC RNA Blood peut tre t l charg e partir du site Internet de Promega www promega com resources tools maxwellesemethod Veuillez consulter le Manuel technique d installation des m thodes Maxwell CSC n TM401 pour de plus amples informations Si vous pensez que votre appareil pourrait tre contamin par des RNases nettoyez le avant la proc dure l aide d une solution de d tergent telle que Steris LpH Suivez les instructions de la section Nettoyage et entretien du Manuel d utilisation de l appareil Maxwell CSC n TM373 1 Mettez sous tension l appareil Maxwell CSC et la tablette L interface utilisateur de l appareil va d marrer automatiquement r aliser une v rification et mettre en position toutes les pi ces mobiles 2 S lectionnez Start D marrer partir de l cran d Accueil 3 Scannez le code barres de l tiquette du Kit Maxwell CSC RNA Blood ou saisissez le manuellement afin de s lectionner automatiq
3. au dessus de 10 C avant la purification Un stockage une temp rature incorrecte peut provoquer la lyse des leucocytes ou la d gradation de l ARN Une quantit insuffisante de surnageant a t retir e apr s la lyse diff rentielle Assurez vous que le surnageant est limin aussi compl tement que possible Le type d chantillon tait incorrect Ce kit a t con u pour tre utilis avec des chantillons de sang total humain Les autres types d chantillons par ex moelle osseuse plasma couche leucocytaire etc n ont pas t test s avec ce kit Niveaux lev s d ADN dans les luats Le taux de leucocytes de l chantillon de sang se situait au dessus de les luats sont contamin s par de l ADN la plage de 4 x 105 10 x 10 leucocytes ml pr vue pour ce produit ce qui peut interf rer avec les essais ult rieurs Un volume incorrect de sang total a t utilis L utilisation d un volume de sang total sup rieur 2 5 ml peut favoriser la contamination des luats par de l ADN La DNase I n a pas t ajout e la cartouche Si possible examiner le puits n 4 des cartouches utilis es Le puits n 4 doit tre de couleur verte et non jaune si la DNase I a t ajout e aux cartouches l tape 5 de la Section 6 B Lysat pr trait trop visqueux pour le pipetage Le taux de leucocytes de l chantillon de sang se situait au dessus de la plage de 4 x 10 10 x 10 leucocytes ml pr vue
4. la DNase I reconstitu e cela facilitera visuellement le pipetage et la pr paration des cartouches Chaque purification n cessite 10 ul de solution pr par e de DNase I Stocker la DNase I reconstitu e entre 30 et 10 C Ne pas recongeler d congeler la DNase I reconstitu e plus de dix fois Attention Ouvrez le flacon contenant la DNase I avec pr caution car les bords peuvent tre tranchants 6 Purification d ARN partir d chantillons de sang total frais recueillis dans des tubes contenant de l EDTA Maintenez un environnement d pourvu de RNases au cours du traitement des chantillons Utilisez uniquement des c nes de pipettes sans RNase et r sistants aux a rosols Changez fr quemment de gants pour diminuer les risques de contamination par RNases Reportez vous la section 10 tablissement d un environnement sans ribonucl ases pour plus de d tails Mat riel fournir par Putilisateur chantillons de sang total non congel recueillis dans des tubes avec EDTA le sang peut tre stock entre 2 et 10 C pendant un maximum de 3 jours avant la purification o microcentrifugeuse pipettes s rologiques de 10 ml st riles pipettes et c nes sans RNase st riles et r sistants aux a rosols o tubes de 15 ml st riles centrifugeuse avec rotor godets mobiles 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608
5. me doivent tre interpr t s conjointement d autres donn es cliniques ou de laboratoire 4 Limites d utilisation du produit Le Kit Maxwell CSC RNA Blood est uniquement destin tre utilis avec des chantillons de sang total humain recueillis dans des tubes de pr l vement avec EDTA IT n est pas con u pour les chantillons d autres types comme les chantillons de moelle osseuse ou de couche leucocytaire les chantillons de sang pr lev s dans d autres types de tubes ou les chantillons de sang stock s en dehors des conditions recommand es Le Kit Maxwell CSC RNA Blood n est pas con u pour tre utilis avec des chantillons non humains ou pour la purification de l ADN Les performances du Kit Maxwell CSC Blood RNA ont t valu es pour isoler l ARN partir d chantillons de 2 5 ml de sang total humain recueillis dans des tubes de pr l vement avec EDTA Ce kit ne doit pas tre utilis avec des chantillons d un volume sup rieur ou inf rieur 2 5 ml Il n est pas con u pour tre utilis avec des chantillons de sang total recueillis dans d autres tubes que les tubes de pr l vement avec EDTA Il n est pas con u pour tre utilis avec des chantillons de sang contenant moins de 4 x 10 ou plus de 10 x 10 leucocytes ml L utilisateur est tenu de valider la performance des acides nucl iques purifi s dans les applications de diagnostic ult rieures Des contr les appropri s doivent tre in
6. protocole de d contamination par UV pour viter d endommager les acides nucl iques purifi s 12 Retirez les cartouches et les plongeurs du portoir de la plateforme Maxwell CSC et liminez le tout en tant que d chets dangereux selon les proc dures de votre tablissement Les cartouches plongeurs et tubes d lution sont usage unique Ne r utilisez pas les cartouches Maxwell CSC les plongeurs CSC RSC ou les tubes d lution Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 11 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 8 Apr s la purification D terminez si le rendement des chantillons d ARN et leur puret r pondent aux exigences des essais diagnostiques ult rieurs avant de les utiliser 9 D pannage Pour toute question qui ne serait pas trait e ci dessous veuillez consulter une succursale ou un distributeur Promega local Les coordonn es de ceux ci sont disponibles au site www promega com Adresse lectronique techserv promega com Sympt mes Causes possibles et commentaires Concentration en ARN de l luat plus faible Le taux de leucocytes de l chantillon de sang se situait en que pr vu un chantillon ordinaire devrait dehors de la plage de 4 x 105 10 x 10 leucocytes ml pr vue produire gt 50 ng ul d ARN purifi pour ce produit Ce kit a t optimis pour la purification C
7. 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com Promega 6 A Pr traitement des chantillons de sang total 1 M langez soigneusement le sang total non congel dans le tube de pr l vement avec EDTA et transf rez 2 5 ml un tube st rile de 15 ml 2 Ajoutez 7 5 ml de Solution A et m langez en inversant le tube 5 10 fois Au cours de cette tape de lyse diff rentielle les globules rouges sont lys s et les leucocytes restent intacts 3 Incubez les lysats temp rature ambiante pendant 10 minutes Pendant cette incubation inversez les chantillons deux fois pour les m langer comme d crit l tape 2 4 Centrifugez les tubes 3 000 x g pendant 10 minutes dans un rotor godets mobiles 5 Retirez le surnageant en le versant ou en le pipetant hors du tube Centrifugez bri vement les chantillons pour recueillir le liquide r siduel au fond des tubes l aide d une pipette liminez autant de surnageant que possible sans d loger le culot de leucocytes qui devrait tre visible 6 Ajoutez 200 ul de 1 thioglyc rol Solution B refroidi et m langez au vortex pour resuspendre le culot 7 Ajoutez 200 ul de tampon de lyse et 25 ul de prot inase K au culot en suspension M langez au vortex pendant 15 20 secondes Remarque si vous devez interrompre le pr traitement les chantillons peuvent tes stock s apr s l tape 7 entre 30 et 10 C pendant 5 jours maximum
8. ARN partir d chantillons de sang contenant entre 4 x 10 et 10 x 10 leucocytes ml Un volume incorrect de sang total a t utilis L utilisation d un volume de sang total sup rieur ou inf rieur 2 5 ml peut r duire le rendement L chantillon de sang tait trop vieux Les meilleurs rendements sont obtenus avec des chantillons de sang frais Les chantillons stock s entre 2 et 10 C pendant plus de 3 jours peuvent pr senter un rendement r duit L chantillon a t stock en dessous de 2 C ou au dessus de 10 C avant la purification Un stockage une temp rature incorrecte peut provoquer la lyse des leucocytes ou la d gradation de l ARN Des RNases peuvent avoir t introduites lors du traitement ou de la quantification des chantillons Reportez vous la section 10 pour des informations concernant l tablissement d un environnement sans ribonucl ases Une quantit insuffisante de surnageant a t retir e apr s la lyse diff rentielle Assurez vous que le surnageant est limin aussi compl tement que possible Le culot de leucocytes s est d tach au cours de l limination du surnageant Evitez de toucher le culot de leucocytes en retirant le surnageant Le type d chantillon tait incorrect Ce kit a t con u pour tre utilis avec des chantillons de sang total humain Les autres types d chantillons par ex moelle osseuse plasma couche leucocytaire etc n on
9. MANUEL TECHNIQUE Maxwell CSC RNA Blood Kit Mode d emploi du produit AS1410 Ce produit est destin tre vendu uniquement aux tats Unis et au Canada Attention manier les cartouches avec pr caution les bords de la bande adh sive peuvent tre tranchants Revised 1 15 TM434 Toute la documentation technique est disponible l adresse www promega com protocols Veuillez consulter ce site Internet pour v rifier que vous utilisez la version la plus jour de ce manuel technique Si vous avez des questions sur l utilisation de ce syst me veuillez contacter le service technique de Promega l adresse techserv promega com E DES CDUOR E EEEO E E E OOO EEEN E EEEE 1 2 Composants du produit et conditions de stockage essessessesseseosessessessesseseoseosesecsecsecsecseoscsecseoseoseoseoseo 2 2 AOC OO prodi de ad De D di ae ee 5 4 Limites utilisation du produit seesessessessecsessesecseosecsecoseoseseoseoseosesscsscsecseoscoscosesecsecseosesecsecseoseoseoseos 5 5 Avant de commencer Pr paration des solutions eesessessessececseosesseoseosesseseoseoscosessesecseosesecseosecseoseoseos 6 6 Purification d ARN partir d chantillons de sang total frais recueillis dans des tubes contenant ED E a ad ee a ad tt 6 6 A Pr traitement des chantillons de sang total rss rene 7 6 B Pr paration de la cartouche Maxwell CSC essessessessesseseosessessesecsecsecscoseseesecsec
10. Nocif Irritant Avertissement Important i P Risque de pincement R actifs inclus suffisants pour n tests Num ro de lot Num ro de catalogue K Ne pas r utiliser 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com Promega 3 Indication du produit Le Kit Maxwell CSC RNA Blood est con u pour tre utilis en conjonction avec l appareil Maxwell CSC et la m thode de purification Maxwell CSC RNA Blood comme dispositif m dical de diagnostic in vitro DIV pour isoler l ARN automatiquement partir d chantillons de 2 5 ml de sang total humain recueillis dans des tubes de pr l vement avec EDTA contenant entre 4 x 10 et 10 x 10 leucocytes ml L ARN purifi est adapt aux essais de diagnostic in vitro fond s sur l amplification Le Kit Maxwell CSC RNA Blood est con u pour tre utilis avec 2 5 ml de sang total humain Le Kit Maxwell CSC DNA Blood doit tre utilis entre 15 et 30 C Toute utilisation en dehors de cette plage de temp rature peut entra ner des r sultats suboptimaux Le Kit Maxwell CSC RNA Blood n est pas destin tre utilis comme test sp cifique de diagnostic Le Kit Maxwell CSC RNA Blood est destin un usage professionnel uniquement Les r sultats de diagnostic obtenus l aide de l ARN purifi avec ce syst
11. ant une phase solide mobile permettant d optimiser la capture des chantillons le lavage et la purification de l ARN Le Maxwell CSC est un appareil de manipulation des particules magn tiques Ce syst me permet l ARN de se lier efficacement aux particules paramagn tiques dans le premier puits d une cartouche pr remplie et fait progresser l chantillon d un puits l autre de la cartouche Cette approche de capture magn tique vite certains probl mes courants propres d autres syst mes de manipulation de liquides fr quemment utilis s tels que l obstruction des c nes de pipettes ou le transfert incomplet des r actifs qui peuvent entra ner une purification suboptimale 2 Composants du produit et conditions de stockage PRODUIT CONDITIONNEMENT R F Kit Maxwell CSC RNA Blood 48 pr parations AS1410 Pour le diagnostic in vitro Destin un usage professionnel uniquement Chaque syst me contient assez de r actifs pour 48 purifications automatis es partir d chantillons de sang Les cartouches Maxwell CSC sont usage unique Comprend e 48 Cartouches Maxwell CSC RNA Blood e 4x100ml Solution A e 30ml Solution B e 20ml Tampon de lyse e 2flacons DNase I lyophilis e e 900 ul 1 Thioglyc rol e 100 ul Colorant bleu 2xlml Solution de Prot inase K PK 25ml Eau sans nucl ases e 50 Plongeurs CSC RSC o 50 Tubes lution 0 5 ml Conditions de stockage d s r ception du kit retirer le 1 thi
12. clus dans les applications de diagnostic ult rieures qui utilisent l ARN purifi l aide du Kit Maxwell CSC RNA Blood Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 5 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 5 Avant de commencer Pr paration des solutions 1 Thioglyc rol Solution B Pr parez un m lange de 1 thioglyc rol Solution B selon l une des m thodes suivantes Ajoutez 600 ul de 1 thioglyc rol la Solution B et m langez avec soin Le 1 thioglyc rol est visqueux et il est important de le pipeter avec pr caution pour pr lever le volume ad quat Avant utilisation faites refroidir le m lange 1 thioglyc rol Solution B sur de la glace ou une temp rature comprise entre 2 et 10 C Vous pouvez galement pr parer un volume plus r duit en ajoutant 20 ul de 1 thioglyc rol par ml de Solution B Pr parez et refroidissez 200 ul de m lange 1 thioglyc rol Solution B par chantillon Remarque stocker le m lange 1 thioglyc rol Solution B pr par entre 2 et 10 C dans cette plage de temp rature il est stable jusqu 30 jours DNase I Ajoutez 275 ul d eau sans nucl ases au flacon de DNase I lyophilis e Inversez le flacon pour resuspendre la DNase I pr sente en dessous du capuchon puis m langez en tournant doucement ne pas m langer au vortex Ajoutez 25 ul de Colorant bleu
13. ir V rifiez que les deux extr mit s de la cartouche sont engag es fond dans le portoir de la plateforme Retirez soigneusement la bande adh sive de protection de mani re la retirer int gralement du haut de la O cartouche Assurez vous que toutes les bandes adh sives et tous les r sidus de colle soient bien retir s de la cartouche Attention maniez les cartouches avec pr caution les bords de la bande adh sive peuvent tre tranchants 2 Placez un plongeur CSC RSC dans le puits n 8 de chaque cartouche Remarque utilisez uniquement les plongeurs fournis dans le Kit Maxwell CSC RNA Blood Les plongeurs des kits Maxwell 16 LEV et SEV ne sont pas compatibles avec l appareil Maxwell CSC 3 Pour chaque cartouche placez un tube d lution vide l emplacement pr vu cet effet dans le portoir de la plateforme Maxwell CSC Remarque utilisez uniquement les tubes d lution fournis dans le Kit Maxwell CSC RNA Blood Les autres tubes d lution peuvent ne pas tre compatibles avec l appareil Maxwell CSC et peuvent influencer le processus de purification de l ARN 4 Ajoutez 50 ul d eau sans nucl ases au fond de chaque tube d lution Les tubes d lution doivent rester ouverts lors de la purification de l ARN Remarque utilisez uniquement l eau sans nucl ases fournie dans le Kit Maxwell CSC RNA Blood L utilisation d un autre tampon d lution peut influencer la purification de l ARN ou son uti
14. is pour les solutions tamponn es au Tris Remarque il est essentiel de continuer prot ger vos chantillons d ARN contre les RNases dans toutes les proc dures ult rieures Portez des gants propres et utilisez des solutions et tubes centrifugation sans RNases 11 R f rences 1 Clinical Laboratory Standards Institute 2007 Handling transport and storage of specimens for molecular methods Ce document peut tre consult en ligne au site www clsi org 2 Murray P R et al 2007 Manual of Clinical Microbiology 9th Edition ASM Press 14 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com Promega 12 Produits associ s Appareil et accessoires Produit Conditionnement R f Appareil Maxwell CSC 1 pi ce AS4000 Portoir de la plateforme Maxwell RSC CSC 1 pi ce SP6019 Pour le diagnostic in vitro Ce produit est uniquement disponible dans certains pays Kits de r actifs Maxwell CSC Consultez le site www promega com pour une liste de tous les kits de purification Maxwell CSC disponibles 13 Summary of Changes The following change was made to the 1 15 revision of this document 1 Updated component name from Plongeurs CSC to Plongeurs CSC RSC Brevet am ricain n 6 027 945 6 368 800 Brevet am ricain n 7 329 488 et autres brevets 2014 2015 Promega Cor
15. jectera ces derniers dans le puits n 8 de la cartouche Les chantillons seront perdus Il est inutile de tenter de repurifier des chantillons apr s l annulation du traitement de l appareil 9 l issue du cycle l cran de la tablette affichera un message indiquant que la m thode est finie Fin du cycle 10 la fin de la m thode suivez les instructions l cran pour ouvrir la porte V rifiez que les plongeurs sont plac s dans le puits n 8 de la cartouche la fin du cycle Retirez le portoir de la plateforme de l appareil et r cup rez les chantillons lu s du portoir Si les plongeurs n ont pas t ject s de la barre de fixation des plongeurs a Apr s une annulation du cycle suivez les instructions l cran pour effectuer la m thode de nettoyage Clean Up b Apr s un cycle termin normalement s lectionnez cette m me m thode Clean Up partir de l cran Settings Param tres 11 Imm diatement apr s le cycle pour viter l vaporation des luats refermez les tubes d lution contenant l ARN et retirez les de l appareil Retirez le portoir de l appareil Maxwell CSC Remarque tenez le portoir sur les c t s en le retirant de l appareil Les chantillons d ARN peuvent tre stock s entre 30 et 10 C pour une nuit ou une temp rature inf rieure 60 C pour stockage long terme Assurez vous que les chantillons ont t retir s de l appareil avant d ex cuter le
16. lisation ult rieure 5 Ajoutez 10 ul de DNase I reconstitu e au puits jaune n 4 de chaque cartouche La couleur verte sert d indicateur visuel confirmant l ajout de la solution de DNase I au puits n 4 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com 6 B Pr paration de la cartouche Maxwell CSC suite Remarques concernant la pr paration des cartouches Maxwell CSC RNA Blood 1 Sivoustraitez moins de 16 chantillons centrez les cartouches sur le portoir de la plateforme 2 Les claboussures d chantillons ou de r actifs pr sentes sur toute surface du portoir de la plateforme Maxwell CSC doivent tre nettoy es comme indiqu dans le Manuel d utilisation de l appareil Maxwell CSC n TM373 N utilisez d eau de Javel sur aucune partie de l appareil Contenu des puits Solution de liaison Particules magn tiques Solution de lavage Tampon de DNase I Solution de liaison Solution de lavage Solution de lavage Vide OO I O1 BR D Ajout aux puits par l utilisateur 1 Lysat d chantillon pr trait 4 10 ul de DNase I pr par e 8 Plongeur CSC RSC 11339TA Figure 1 Cartouche Maxwell CSC Cette figure illustre le contenu d une cartouche L chantillon de lysat de sang total est ajout au puits n 1 la DNase I 10 ul est ajout
17. oglyc rol et le stocker entre 2 et 10 C Stocker les autres composants du kit temp rature ambiante entre 15 et 30 C Le 1 thioglyc rol peut tre conserv temp rature ambiante entre 15 et 30 C dans ces conditions il sera stable jusqu 9 mois Stocker la DNase I d shydrat e entre 30 et 10 C Ne pas d congeler recongeler plus de 10 fois 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com Promega 2 Composants du produit et conditions de stockage suite Informations relatives la s curit les cartouches de r actifs contiennent de l thanol une substance inflammable Le 1 thioglyc rol est toxique Le thiocyanate de guanidine et le chlorhydrate de guanidine composants de la Solution B et du tampon de lyse sont nocifs et irritants Le tampon de lyse peut galement nuire au d veloppement du f tus Utilisez des gants et suivez des proc dures standard de s curit lorsque vous travaillez avec ces substances Les composants du kit Maxwell CSC RNA Blood sont con us pour tre utilis s avec des substances potentiellement infectieuses Les utilisateurs doivent tre munis de protection individuelle appropri e par ex gants blouse de laboratoire et lunettes tanches pour la manipulation de ces substances infectieuses Il convient de suivre les di
18. poration Tous droits r serv s Maxwell est une marque d pos e de Promega Corporation LpH est une marque d pos e de Steris Corporation Les produits peuvent tre prot g s par des brevets en instance ou d pos s ou peuvent pr senter certaines restrictions Veuillez visiter notre site Internet pour de plus amples informations Tous les prix et toutes les caract ristiques sont sujets modification sans avis pr alable Les d clarations relatives aux produits sont sujettes modification Veuillez contacter le service technique de Promega ou consulter le catalogue en ligne de Promega pour obtenir les informations les plus r centes sur les produits Promega Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 15 wWww promega com TM434 Revised 1 15
19. pour ce produit Un volume incorrect de sang total a t utilis L utilisation d un volume de sang total sup rieur 2 5 ml peut se traduire par des lysats visqueux et difficiles pipeter Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 13 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 10 tablissement d un environnement sans ribonucl ases Les ribonucl ases sont extr mement difficiles inactiver Prenez garde de ne pas introduire de RNases dans vos chantillons d ARN pendant et apr s leur purification Ceci est particuli rement important si le mat riel de d part est difficile obtenir ou s il ne peut pas tre remplac Les conseils ci dessous peuvent aider viter la contamination accidentelle de vos chantillons par les RNases 1 Deux des sources les plus courantes de contamination par RNases sont les mains de l utilisateur et les bact ries ou moisissures pouvant tre pr sentes dans les poussi res de l air Pour viter la contamination provenant de ces sources utilisez une technique st rile lors de la manipulation des r actifs fournis dans ce syst me Portez des gants tout moment Changez de gants chaque fois qu un contact avec des RNases peut s tre produit 2 Autant que possible utilisez des r cipients ou fournitures en plastique st riles et jetables pour la manipulation de l ARN Ces fo
20. rectives de l tablissement concernant la manipulation et l limination de toute substance infectieuse utilis e en conjonction avec ce syst me Remarque l eau de Javel r agit avec le chlorure d ammonium et le thiocyanate de guanidine et produit des vapeurs toxiques Le thiocyanate de guanidine est pr sent dans la Solution B et le chlorure d ammonium dans la Solution A N utilisez pas d eau de Javel pour la d contamination des d chets de ce kit Attention manipulez avec soin les cartouches et le flacon contenant la DNase I lyophilis e car les bords peuvent tre tranchants Informations suppl mentaires les composants du kit Maxwell CSC RNA Blood ont t valid s et des contr les de qualit ont t men s pour s assurer qu ils fonctionnent ensemble Il n est pas recommand de m langer des composants de plusieurs lots de kits Utiliser uniquement les composants fournis dans le kit Pour plus d informations relatives la s curit consultez la fiche technique sant s curit disponible sur le site www promega com Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 3 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 2 Composants du produit et conditions de stockage suite TN Dispositif m dical de i no Fabricant diagnostic in vitro PROMEGA 280 Wood Holp Ad Madison WI USA Stocker 15 30 C
21. seoseoecsecsecseoseoseoseo 8 7 Execution de appareil aa an ne ae ti none 10 G Apres DUR METEO REZ 12 9 DD A AR eue 12 10 tablissement d un environnement sans ribonucl ases serres rss esse sseessnessnness 14 Tis RETENE S ends nanas cran stone sens ses aae anna EEEE E 14 LA Prodis ASSOCIES eee E sa encens ne ee tete ne esse na crade eee 15 13 Summary of Chang OS a a te ee a a cul 15 1 Description Le Kit Maxwell CSC RNA Blood est utilis en conjonction avec l appareil Maxwell CSC pour permettre la purification automatis e efficace et ais e d ARN partir d chantillons de sang total humain frais non congel recueillis dans des tubes contenant de l EDTA L appareil Maxwell CSC est fourni avec des m thodes pr programm es de purification Il est con u pour tre utilis avec des cartouches de r actifs pr dispens s et des r actifs suppl mentaires fournis dans le kit pour une simplicit et une facilit d emploi maximales Cet appareil peut traiter jusqu 16 chantillons en 60 minutes environ LARN purifi peut tre utilis directement dans diverses applications ult rieures telles que la RT PCR Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 wWww promega com TM434 Revised 1 15 Promega 1 Description suite Le Kit Maxwell CSC RNA Blood purifie l ARN l aide de particules paramagn tiques offr
22. t pas t test s avec ce kit Le type de tube de pr l vement de sang tait incorrect Ce kit a t con u pour tre utilis avec des chantillons de sang total humain recueillis dans des tubes avec EDTA Les autres types de tubes n ont pas t test s avec ce kit et ne sont pas n cessairement compatibles avec la m thode du kit 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com Promega 9 D pannage suite S t mes Causes possibles et commentaires Faible qualit de l ARN Le taux de leucocytes de l chantillon de sang se situait au dessus le rapport A A des luats doit tre sup rieur de la plage de 4 x 106 10 x 10 leucocytes mIl pr vue pour 1 8 et leur rapport A A entre 1 8 et 2 4 ce produit Ce kit a t optimis pour la purification CARN partir d chantillons de sang contenant entre 4 x 10 et 10 x 10 leucocytes ml Un volume incorrect de sang total a t utilis L utilisation d un volume de sang total sup rieur ou inf rieur 2 5 ml peut r duire le rendement L chantillon de sang tait trop vieux Les meilleurs rendements sont obtenus avec des chantillons de sang frais Les chantillons stock s entre 2 et 10 C pendant plus de 3 jours peuvent tre de moins bonne qualit L chantillon a t stock en dessous de 2 C ou
23. tte v rifiez que les chantillons ont t ajout s au puits n 1 des cartouches comme indiqu la Section 6 B que les cartouches sont charg es dans l appareil que les tubes d lution contenant 50 ul d eau sans nucl ases sont pr sents et ouverts et que les plongeurs ont t plac s dans le puits n 8 6 Transf rez le portoir de la plateforme Maxwell CSC contenant les cartouches pr par es dans l appareil V rifiez que le portoir est plac dans l appareil Maxwell CSC de fa on ce que les tubes d lution se trouvent du c t de la porte Le portoir ne peut tre ins r dans l appareil que dans cette orientation Si vous avez du mal ins rer le portoir sur la plateforme v rifiez que celui ci est dans la bonne orientation Assurez vous de placer le portoir horizontalement sur la plateforme Remarque tenez le portoir de la plateforme Maxwell CSC sur les c t s pour viter d en d loger les cartouches Avertissement risque de pincement 7 V rifiez que toutes les tapes de pr traitement requises ont t effectu es puis appuyez sur Start D marrer pour fermer la porte de l appareil et commencer la purification 8 L appareil Maxwell CSC commencera imm diatement le cycle de purification L cran affichera les tapes effectu es ainsi que le temps approximatif restant dans le cycle Remarque si le cycle est annul avant la fin l appareil lib rera les particules des plongeurs et
24. uement la m thode ex cuter Figure 3 Remarque le code barres de la m thode du Kit Maxwell CSC RNA Blood est requis pour pouvoir purifier l ARN sur l appareil Maxwell CSC L tiquette du kit contient deux code barres Celui de la m thode est illustr dans la Figure 3 ci dessous Si le code barres ne peut pas tre scann contactez le service technique de Promega 4 S lectionnez la position des cartouches traiter consultez le Manuel d utilisation de l appareil Maxwell CSC no TM373 et scannez ou saisissez manuellement les donn es de suivi des chantillons Le cas ch ant d s lectionnez les positions non utilis es Une fois que toutes les informations des chantillons ont t saisies s lectionnez Proceed Continuer gt asenna D E Maxwell CSC RNA Blood Kit Leon mampi are ICT ai r ip 000 Casger RER Asidi TET 0000 y eean ie nre Drum Figure 3 tiquette du kit indiquant l emplacement du code barres scanner pour charger la m thode L emplacement du code barres de la m thode au haut de l tiquette du kit est encadr en rouge et indiqu avec une fl che Scannez ce code barres pour d marrer une purification 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison WI 53711 5399 tats Unis Num ro vert aux U 800 356 9526 608 274 4330 Fax 608 277 2516 TM434 Revised 1 15 wWww promega com Promega 7 Ex cution de l appareil suite 5 Sur la table
25. urnitures ne sont g n ralement pas contamin es par les RNases et aucun traitement d inactivation de ces enzymes n est n cessaire 3 Traitez les r cipients ou fournitures en verre ou en plastique non st riles et les cuves d lectrophor se avant de les utiliser pour s assurer qu elles ne contiennent pas de RNases Incubez les r cipients ou fournitures en verre dans des fours 200 C pendant toute la nuit Rincez les r cipients ou fournitures en plastique avec une solution de NaOH 0 1 N et d EDTA 1 mM puis l eau sans RNases Les produits destin s l limination des RNases peuvent galement tre utilis s selon les instructions du fabricant Remarque les cuves d lectrophor se peuvent tre contamin es par des ribonucl ases la RNase A en particulier suite l analyse d chantillons d ADN Dans la mesure du possible r servez exclusivement l analyse de l ARN une nouvelle cuve d lectrophor se ou une cuve d contamin e 4 Traitez les solutions non fournies dans le syst me en ajoutant du di thyl dicarbonate DEPC 0 1 v v sous une hotte de laboratoire Incubez temp rature ambiante sous agitation pendant toute la nuit sous la hotte St rilisez en autoclave pendant 30 minutes pour liminer les traces de DEPC Attention le DEPC est un canc rog ne pr sum et ne doit tre utilis que sous une hotte de laboratoire Le DEPC r agit rapidement avec les amines et de ce fait ne peut pas tre util
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