Genscreen™ HIV-1 Ag Confirmatory Assay 25 tests 71121 - Bio-Rad
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1. GB Expiry date YYYY MM DD N FR Date de peremption AAAA MM JJ GB Batch code FR Code du lot ES C digo de lote ES Estable hasta AAAA MM DD Codice del lotto IT Da utilizzare prima del AAAA MM GG DE Chargen Bezeichnung DE Verwendbar bis JJJJ MM TT PT C digo do lote PT Data de expira o AAAA MM DD SE Batchnr SE Utg ngsdatum AAAA MM DD DK Batchkoden DK Anvendes for AAAA MM DD GR Kodixas Hpepopnna YYYY MM DD PL Numer serii PL _ Data wa no ci YYYY MM DD LT Serijos numeris LT Galioja iki YYYY MM DD HU Gy rt si sz m HU Szavatoss gi id EEEE HH NN EE kood Aegumist htaeg AAAA KK PP SK Gislo ar e SK Pou ite n do RRRR MM DD CZ 066 ar e CZ Datum exspirace RRRR MM DD NO Partikode NO Utlepsdato AAAA MM DD 80 Num r de lot RO Data expirarii AAAA LL ZZ BG BG Ha GB Storage temperature limitation GB Consult Instruction for use FR Limites de temp ratures de stockage FR Consulter le mode d emploi ES Temperatura limite ES Consulte las instrucciones de uso 17 Limiti di temperatura di conservazione Consultare le istruzioni per uso DE Lagertemperatur Siehe G2. d effet crochet avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay Du lysat viral d HIV 1 t dilu dans le diluant du contr le positif pour obtenir des concentrations de 2 pg ml 0 2 pg ml Tous les chantillons avec des concentrations lt 20 ng ml sont neutralis s Au del de cette valeur les chantillons doivent tre dilu s pour que la neutralisation soit efficace LIMITES DU TEST Les recommandations des notices d utilisation des tests Genscreen HIV 1 Ag Assay et du test de confirmation Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay doivent tre respect es lorsque des chantillons de s rum plasma ou culture cellulaire sont test s pour confirmer la pr sence de lantig ne VIH 1 est recommand aux utilisateurs de kit de lire la pr sente notice d utilisation avec attention avant la r alisation du test Les proc dures d utilisation du test doivent tout particuli rement tre respect es en ce qui concerne le pipetage des chantillons et des r actifs le lavage des microplaques et les temps des tapes d incubation e Des r sultats n gatifs peuvent tre obtenus pour des chantillons dont le taux en antig ne VIH est trop bas comparativement aux limites de d tection du test tout comme des r sultats n gatifs peuvent tre observ s si le marqueur recherch n est pas pr sent au stade de la maladie durant lequel l chantillon a t pr lev Si l addition d chantillon ou de r actif n a pas t fait
3. PL Numer katalogu LT in vitro diagnostikai LT Katalogo numeris HU Csak in vitro diagnosztikai alkalmaz sra HU Cikksz4m Invitro diagnostiliseks kasutamiseks EE Katalooginumber SK Na diagnostiku in vitro SK Katal gov slo CZ Pro diagnostiku in vitro CZ Katalogov slo NO Tilin vitro diagnostikk NO Katalognummer Pentru diagnostic in vitro RO Num r de catalog BG 3a BG GB Manufacturer GB Authorised Representative FR Fabricant FR Repr sentant agr ES Fabricante ES Representante autorizado IT Produttore IT Distributore autorizzato DE Hersteller DE Bevollmachtigter PT Fabricante PT Representante Autorizado SE Tillverkad av SE Auktoriserad representant DK Fremstillet af DK Autoriseret repr sentant GR GR Egovovodorqpevos PL Producent PL Upowa niony Przedstawiciel LT LT Jgaliotasis atstovas HU _ HU Meghatalmazott K pvisel EE Volitatud esindaja SK V robca SK Autorizovan z stupca CZ V robce CZ Zpinomocn ny z stupce NO Produsent NO Autorisert representant RO Produc tor RO Reprezentant autorizat BG BG
4. chantillons r actifs r p tables avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay est confirm e si diminution de densit optique pour l chantillon neutralis est sup rieure ou gale 50 du signal de chantillon non neutralis et si le signal de l chantillon non neutralis est sup rieur la valeur seuil du test 3 COMPOSITION DE LA TROUSSE Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay 4 5 ETIQUETAGE NATURE DES REACTIFS PRESENTATION R actif de Confirmation HIV 1 Ag HIV 1 Ag Confirmatory Sum humain contenant des anticorps anti 4 flacon Reagent Sulfate de Gentamicine 0 005 13ml Conservateur ProClin 300 0 5 Contr le N gatif S rum humain normal non r actif pour l Ag VIH 1 HBs les anticorps anti VIH 1 1 flacon Co Negative Control anti VHC et anti HTLV 12 ml Sulfate de Gentamicine 0 005 Conservateur ProClin 300 0 5 MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI Se r f rer a la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay r f rence 71120 CONSIGNES D HYGIENE ET DE SECURITE Tous les r actifs de la trousse sont destin s l usage du diagnostic in vitro e Le r actif de confirmation VIH 1 a t trouv n gatif pour les tests de d pistage de l antig ne de surface de l h patite AgHBs des anticorps dirig s contre le virus de l h patite Ac anti VHC et contre le virus HTLV Ac anti HTLV l Le r actif de confirmation VIH 1 a t
5. galement inactive par la chaleur Le mat riel d origine humaine utilis dans la pr paration du contrdle n gatif a t 16816 et trouv n gatif en anticorps anti VIH1 et VIH2 en antig ne HBs en anticorps anti VHC ainsi qu en anticorps anti HTLV1 HTLV2 Du fait qu aucune m thode ne peut garantir de fa on absolue l absence de virus VIH H patites ou C ou d autres agents infectieux consid rer ces r actifs ainsi que les chantillons de patients comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les pr cautions d usage La fiche de donn es de s curit est disponible sur demande Certains r actifs contiennent du ProClin 3007 ProClin 3007 0 5 Irritant R43 Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau S28 37 Apr s contact avec la peau se laver imm diatement et abondamment avec de l eau et du savon Porter des gants appropri s Xi Irritant Les chantillons les r actifs d origine humaine ainsi que le mat riel et les produits contamin s seront limin s apr s d contamination soit par trempage dans de l eau de javel a la concentration finale de 5 d hypochlorite de sodium 1 volume d eau de javel pour 10 volumes de liquide contamin ou d eau pendant 30 minutes soit par autoclavage a 121 C pendant 2 heures minimum L autoclave est la meilleure m thode pour inactiver les virus VIH et VHB ATTENTION NE PAS INTRODUIRE DANS L AUTOCLAVE DES SOLUTIONS CONTENANT DE L
6. produkt w medycznych do bada in vitro LT CE enklas Europos sajungos direktyva 98 79 d l in vitro diagnostikos medicinos prietais HU CE jelz s 98 79 CE Eur pai Ir nyelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszk z kr l CE m rgistus Euroopa direktiiv 98 79 CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta SK CE ozna enie zhode Eur pska direkt va 98 79 CE pre in vitro diagnostick zdravotn cke postupy CZ CE zna ka Evropsk direktiva 98 79 CE o diagnostick ch zdravotnick ch prost edc ch in vitro NO CE merking EU direktiv 98 79 CE om medisinsk utstyr til in vitro diagnostikk RO Marca CE Directiva europeana 98 79 CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro BG CE 98 79 CE GB For in vitro diagnostic use GB Catalogue number FR Pour diagnostic in vitro FR R f rence catalogue ES Para diagn stico in vitro ES N mero de cat logo IT Per uso diagnostico in vitro IT Numero di catalogo DE n vitro Diagnostikum DE Bestellnummer PT Para uso em diagn stico in vitro PT Numero de cat logo SE In vitro diagnostik SE Katalognummer DK Invitro diagnose DK Katalognummer GR T in vitro xpnon GR Anopos karakoyou PL Do stosowania in vitro
7. Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay 25 tests 71121 POUR LA CONFIRMATION PAR NEUTRALISATION DES ECHANTILLONS REACTIFS AVEC LE TEST Genscreen HIV 1 ANTIGEN ASSAY Contr le de qualit du fabriquant Tous les produits fabriqu s et commercialis s par la soci t Bio Rad sont plac s sous un syst me d assurance qualit de la r ception des mati res premi res jusqu la commercialisation des produits finis Chaque lot du produit fini fait l objet d un contr le de qualit et n est commercialis que s il est conforme aux crit res d acceptation La documentation relative la production et au contr le de chaque lot est conserv e par notre soci t 10 11 12 13 14 TABLE DES MATI RES INTERET CLINIQUE PRINCIPE DE LA TROUSSE Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay COMPOSITION DE LA TROUSSE Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI CONSIGNES D HYGIENE ET DE SECURITE PRECAUTIONS ECHANTILLONS RECONSTITUTION DES REACTIFS VALIDITE CONSERVATION MODE OPERATOIRE CALCUL ET INTERPRETATION DES RESULTATS VERIFICATION SPECTROPHOTOMETRIQUE DE LA DISTRIBUTION DES ECHANTILLONS ET DES REACTIFS PERFORMANCES LIMITES DU TEST REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES INTERET CLINIQUE Les chantillons r actifs rep tables avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay doivent tre neutralis s afin de confirmer la pr sence d antig ne p24 du 1 La neutralisation de l antig ne viral pa
8. HYPOCHLORITE DE SODIUM e r f rer la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay r f rence 71120 pour les autres consignes d hygi ne et de s curit PRECAUTIONS La qualit des r sultats d pend du respect des bonnes pratiques de laboratoires suivantes Ne pas utiliser de r actifs apr s la date d expiration Ne pas modifier le mode op ratoire Avant utilisation attendre 30 minutes pour que les r actifs s quilibrent la temp rature du laboratoire 18 30 Se r f rer a la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay r f rence 71120 pour les autres pr cautions ECHANTILLONS Pr lever un chantillon de sang selon les pratiques en usage Les chantillons pouvant tre utilis s sont du s rum du plasma ou des chantillons de culture cellulaire Les anticoagulants EDTA h parine citrate de sodium ont t valu s et sont consid r s comme utilisables Se r f rer la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay r f rence 71120 pour d autres instructions 6 RECONSTITUTION DES REACTIFS VALIDITE CONSERVATION Les r actifs de la trousse Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay sont pr ts l emploi La trousse doit tre conserv e 2 8 C Porter tous les r actifs temp rature ambiante 18 30 C avant utilisation Chaque l ment de la trousse Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay conserv 2 8 C peut tre utilis apr s une permi re ou
9. MA 255 1887 1891 1986 Sarngadharan MG Markham PD The role of human T Lymphotropic retroviruses in leukemia and AIDS in Wormser GP ed AIDS and Other Manifestations of HIV Infection New Jersey Noyes Publications 1987 pp 218 220 Bond WW Favero MS Petersen Nu et al Inactivation of Hepatitis B virus by intermediate to high level disinfectant chemicals J Clin Micro 18 535 538 1983 11 a GB CE marking European directive 98 79 CE on in vitro diagnostic medical devices FR Marquage CE Directive europ enne 98 79 CE relative aux dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro ES Marcado CE Directiva europea 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro Marchiatura CE Direttiva europea 98 79 CE relativa ai dispositivi medico diagnostici in vitro DE CE Konformitatskennzeichnung Europ ische Richtlinie 98 79 EG ber n vitro Diagnostika PT Marca o CE Directiva europeia 98 79 CE relativa aos dispositivos m dicos de diagn stico in vitro SE CE m rkning Europeiskt direktiv 98 79 EG om medicintekniska produkter f r in vitro diagnostik DK CE meerkningen Europa direktiv 98 79 EF om medicinsk udstyr til in vitro diagnostik GR CE o myux 98 79 CE mept in vitro Suaryrworruxes PL CE oznaczenie Dyrektywa unijna 98 79 CE dotycz ca
10. ant Si l on dispose d un laveur automatique respecter le m me cycle op ratoire Distribuer rapidement 100 yl de la solution de travail conjugu 1 dans toutes les cupules Le conjugu doit tre agit avant emploi N B La distribution de la solution de travail du conjugu 1 qui est color en jaune peut tre v rifi e visuellement ce stade de la manipulation Si cela est possible recouvrir la microplaque d un film neuf Incuber 30 5 minutes 37 1 C ou 40 1 C dans un incubateur statique chaleur s che Retirer le film adh sif Aspirer le contenu de toutes les cupules dans un conteneur pour d chets contamin s contenant de l hypochlorite de sodium et laver au moins 5 fois comme pr c demment Si l on dispose d un laveur automatique respecter le m me cycle op ratoire Distribuer rapidement 100 de la solution de travail conjugu 2 dans toutes les cupules Le conjugu doit tre agit avant emploi N B La distribution de la solution de travail du conjugu 2 qui est color en vert peut tre v rifi e visuellement ce stade de la manipulation Si cela est possible recouvrir la microplaque d un film neuf Incuber 30 5 minutes 37 1 C ou 40 1 C dans un incubateur statique chaleur s che Retirer le film adh sif vider toutes les cupules par aspiration et laver au moins 5 fois comme pr c demment Le volume r siduel doit tre inf rieur 10 pl si n cessaire s cher les barrette
11. antillon neutralis 0 041 Exemple de seuil 0 045 0 050 0 095 1 020 0 040 0 980 100 5 r duction r duction de CPX antig ne VIH 1 020 0 045 0 975 0 858 0 041 0 817 r duction abs des chantillons 100 100 5 r duction 0 858 0 045 0 813 REMARQUE Dans certains cas des chantillons ayant un titre lev d antig ne VIH ne pr senteront pas une r duction du signal de 50 apr s adjonction du r actif de confirmation antig ne VIH 1 C est pourquoi les chantillons hautement r actifs absorbance gt 2 000 doivent tre dilu s par exemple au 1 4 ou au 1 8 dans du contr le n gatif antig ne VIH puis de nouveau test s avec le test de confirmation Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay Si le pourcentage de r duction n est toujours pas au moins de gt 50 pour l chantillon dilu et si cet chantillon est toujours tr s r actif rediluer la premi re dilution au 1 16 ou plus dans du contr le n gatif antig ne VIH 1 et la tester de nouveau avec le test de confirmation Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay 11 V RIFICATION SPECTROPHOTOM TRIQUE DU D P T DES CHANTILLONS ET DES R ACTIFS Se r f rer la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay r f rence 71120 12 PERFORMANCES 13 10 Specificit Un total de 2063 chantillons frais de s rums 941 et plasmas 1122 issus d une population de donneurs de sang o
12. aragraphe calcul de la moyenne des absorbances de la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay pour calculer les valeurs d absorbance moyennes 3 Calcul du pourcentage de r duction Le pourcentage de r duction de tous les contr les et de tous les chantillons est d termin e en appliquant l quation suivante abs chantillon non neutralis abs chantillon neutralis r duction 100 x abs chantillon non neutralis Xabs contr le n gatif Exemple Echantillon Absorbance moyenne Contr le N gatif antig ne VIH non neutralis 0 045 Contr le Positif antig ne VIH non neutralis 1 020 Contr le Positif antig ne VIH neutralis 0 040 de r duction du contr le positif HIV Ag Xabs XCP 1008 0 080 0960 _ 100 5 r duction 1 020 0 045 0 975 4 Validation de l essai Les valeurs d absorbance de chaque contr le n gatif et contr le de milieu de culture cellulaire le cas ch ant sont sup rieures a 0 000 UA et inf rieures ou gales a 0 100 UA La valeur d un contr le n gatif peut tre limin e Si deux contr les n gatifs ne respectent pas ces crit res le dosage doit tre de nouveau effectu La valeur d absorbance moyenne des contr les positifs XCP doit tre sup rieure ou gale 0 500 UA et les valeurs d absorbance individuelles doivent tre situ es dans un domaine de reproductibilit de 0 65 1 35 fois la XCP Toutes les valeurs de
13. e conform ment aux instructions il est possible d obtenir un r sultat faussement n gatif faut envisager d effectuer un nouveau dosage en cas de suspicion clinique d infection ou d erreur au cours de la proc dure Une valeur d absorbance inf rieure 0 000 UA pour un chantillon signale une erreur au cours de la proc dure ou un probl me de mat riel l chantillon concern doit alors tre de nouveau test e Se r f rer la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay pour d autres limites d utilisation 14 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 Casey JM Kim Y Andersen PR et al Human T cell lymphotropic virus type Ill immunologic characterization and primary structure analysis of the major internal protein p24 J Virology 55 417 423 1985 Ritter J Escaich S Trepo et al HIV antigen detection in antibody negative sera Abstract 1627 IV International Conference on AIDS 1988 Veronese FD Sarngadharan MG Rahman R et al Monoclonal antibodies specific for p24 the major core protein of human T cell Leukemia virus type Ill Natl Acad Sci USA 82 5199 5202 1985 Schaeffler B Flesher A Shriver K Tam MR Monoclonal antibody detection of p25 HIV antigen in the serum and CSF of patients within the AIDS spectrum Abstract 7759 IV International Conference on AIDS 1988 Resnick L Veren K Salahuddin SZ et al Stability and inactivation of HTLV III LAV under clinical laboratory environments JA
14. ebrauchsanweisung PT Limites de temperatura de armazenamento Consulte folheto informativo SE Temperaturbegr nsning Se bruksanvisningen DK Temperaturbegr nsning Se instruktion for brug GR Bepokpaotas amrobmkeuons Supovdewderte ns onyies PL Temperatura przechowywania Sprawdi instrukcj LT Saugojimo temperat riniai apribojimai leSkokite informacijos vartojimo instrukcijoje HU T rol si h m rs kleti hat rok Olvassa el a haszn lati utas t st EE Piirangud s ilitustemperatuurile Kasutamisel vaata instruktsiooni SK Skladovacia teplota od do Katal gov slo C2 Teplotni rozmezi od do Viz n vod k pou it NO Oppbevaringstemperatur Se bruksanvisninger RO Limitele de temperatur la stocare Consultati prospectul de utilizare BG BG 88 Bio Rad 3 bd Raymond Poincar 9139 92430 Marnes la Coquette France T l 33 1 47 95 60 00 01 2009 Fax 33 1 47 41 97 33 Code 883570
15. es apr s la distribution de la solution d arr t et dans les 30 minutes qui suivent l arr t de la r action lire la densit optique 450 620 700 nm l aide d un lecteur de plaques 18 S assurer avant la transcription des r sultats de la concordance entre la lecture et le plan de distribution et d identification des plaques et des chantillons 10 CALCUL ET INTERPR TATION DES R SULTATS La pr sence de l antig ne VIH 1 dans un chantillon est confirm e par la comparaison de la valeur d absorbance abs des chantillons neutralis s avec la valeur d absorbance abs des chantillons non neutralis s Cette comparaison est exprim e en pourcentage de r duction 1 Validation des contr les positif et n gatif V rifier que les valeurs individuelles des contr les n gatifs et positifs se situent dans les normes d finies dans le paragraphe validation de l essai de la notice du test Genscreen HIV 1 Ag Assay Une des valeurs du contr le n gatif peut tre limin e si elle se situe en dehors des normes de validation pr cis es dans la notice du produit Genscreen HIV 1 Ag Assay Tous les contr les positifs doivent tre pris en compte 2 Calcul de la moyenne des absorbances Xabs D terminer l absorbance moyenne des contr les n gatifs et positifs neutralis s et non neutralis s en divisant la somme de leurs valeurs d absorbance par le nombre de contr les acceptables Suivre les crit res du p
16. neutralis s et deux non neutralis s et trois chantillons de contr le n gatif doivent tre test s sur chaque microplaque utilis e compl tement ou partiellement S assurer que le diluant d chantillon est bien m lang l chantillon ou au contr le Lorsque les solutions contenues dans chaque puits sont bien m lang es elles ont une couleur uniforme N B Il est possible de v rifier visuellement la distribution des chantillons ce stade de la manipulation en effet apr s addition des chantillons le diluant qui est initialement vert vire au bleu cf chapitre 11 pour la v rification automatique VERIFICATION SPECTROPHOTOMETRIQUE DU DEPOT DES ECHANTILLONS Lorsque cela est possible couvrir d un film autocollant en appuyant bien sur toute la surface pour assurer l tanch it Incuber la plaque pendant 60 5 minutes 37 1 C ou 40 1 C avec un incubateur statique chaleur s che Retirer le film adh sif Aspirer le contenu de toutes les cupules dans un conteneur pour d chets contamin s contenant de l hypochlorite de sodium et ajouter imm diatement dans chacune d elles un minimum de 0 370 ml de solution de lavage Respecter un temps de trempage temps d attente de 20 60 secondes Aspirer de nouveau R p ter le lavage 4 fois un minimum de 5 lavages Le volume r siduel doit tre inf rieur 10 ul si n cessaire s cher la plaque par retournement sur une feuille de papier absorb
17. nt t test s avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay Tous les chantillons taient n gatifs selon les r sultats fournis pr c demment par des tests de d pistage Ac anti VIH1 et de d tection de l Ag HIV Cette tude de sp cificit a t r alis e aux 2 temp ratures d incubation indiqu es du protocole op ratoire Les 2 chantillons trouv s faux positifs r p tables n ont pas t neutralis s par le test de confirmation Sensibilit Une tude de sensibilit a t men e sur 78 chantillons panel SFTS 96 positifs et patients s ropositifs diff rents stades de l infection par le VIH1 trouv s r actifs r p tables avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay 76 chantillons r actifs r p tables avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay sont tous confirm s avec le test Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay Deux chantillons de patients non r actifs avec un autre test EIA ne sont pas confirm s par le test de neutralisation 55 surnageants de culture cellulaire repr sentant les diff rents groupes et sous types de l Ag VIH 1 A B C D E F G H J N et O ont t neutralis s 17 panels de s roconversion ont t test s Tous les chantillons trouv s positifs avec le test test Genscreen HIV 1 Ag Assay ont t confirm s par le test Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay Etude de l effet crochet Des concentrations lev es en antig ne HIV 1 ont t test es pour v rifier
18. our le contr le positif antig ne VIH 1 tiqueter deux tubes essai en plastique avec la lettre A contr le neutralis et deux tubes essai en plastique avec la lettre B contr le non neutralis Pipeter 150 ul de contr le positif antig ne VIH 1 C1 dans chaque tube c Pour le contr le n gatif antig ne VIH 1 tiqueter trois tubes essai en plastique avec la lettre B neutralis Pipeter 150 ul de contr le n gatif antig ne VIH 1 C0 dans chaque tube d Ajouter 25 pl de r actif de confirmation antig ne VIH 1 RA chaque tube tiquet A neutralise e Ajouter 25 pl de contr le n gatif antig ne VIH 1 chaque tube tiquet B non neutralis f M langer chaque tube en vortexant doucement ou en les tapotant Eviter la formation de mousse en quantit excessive g Incuber les tubes pendant 15 a 30 minutes a temp rature ambiante 18 30 C pour que la r action de neutralisation ait lieu 5 D poser directement sans pr lavage de la plaque successivement suggestion de la distribution de la plaque 5 1 50 pl de diluant d chantillon dans chaque cupule 5 2 150 ul de contr le n gatif en A1 B1 C1 150 pl de contr le positif C1 neutralis s en D1 51 150 pl de contr le positif C1 non neutralis s en F1 G1 150 pl d chantillon trait en H1 etc 10 11 12 13 14 15 Quatre chantillons de contr le positifs deux
19. r un anticorps anti VIH est une m thode de confirmation reconnue 1 4 La pr sence de l antig ne p24 dans l chantillon est mise en vidence par une perte de r activit de l antig ne VIH 1 en comparaison avec un chantillon non neutralis issu du m me sp cimen Le test Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay est destin la confirmation de la pr sence de l antigene p24 du VIH 1 dans des chantillons de s rum de plasma ou de surnageant de culture cellulaire trouv s r actifs r p tables selon le test Genscreen HIV 1 Ag Assay PRINCIPE DE LA TROUSSE Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay L chantillon r actif r p table selon le test Genscreen HIV 1 Ag Assay est incub avec le r actif de confirmation anticorps anti VIH humain Si l chantillon contient de l antig ne VIH 1 l antig ne sera alors neutralis par les anticorps anti VIH 1 pr sent dans le r actif de confirmation L chantillon concern est alors test une nouvelle fois avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay L antig ne VIH 1 neutralis ne peut pas se fixer aux cupules sensibilis es par les anticorps anti VIH 1 avec pour cons quence une r duction de la densit optique Afin de comparer les signaux obtenus un contr le non neutralis de l chantillon trait avec un contr le n gatif antig ne VIH 1 humain en substitution au r actif de confirmation est test en parall le avec l chantillon neutralis La positivit des
20. s contr les positifs doivent tre prises en compte Le pourcentage de r duction de chaque contr le positif neutralis antig ne VIH doit tre au minimum de 50 5 Interpr tation des r sultats Un chantillon est consid r comme positif pour l antig ne VIH 1 si les crit res suivants sont remplis L chantillon est r actif r p table avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay La valeur d absorbance de l chantillon non neutralis est sup rieure ou gale la valeur seuil calcul e 6 pourcentage de r duction abs de l chantillon est au moins de 50 REMARQUE Si la valeur d absorbance d un chantillon de patient est sup rieure la limite sup rieure de lin arit du lecteur utiliser le seuil sup rieur comme valeur d absorbance pour les calculs suivants 1 Calculer la valeur seuil en ajoutant un facteur constant 0 050 la moyenne des contr les n gatifs 2 D terminer le pourcentage de r duction de chaque abs d chantillon en utilisant l quation donn e dans le paragraphe calcul du pourcentage de r duction Un exemple de valeurs obtenues lors d un test et leur interpr tation est pr sent ci dessous Echantillon Valeurs d absorbance Moyenne Contr le N gatif 0 041 0 045 Non neutralis 0 050 0 045 Contr le Positif 1 032 1 020 Non neutralis 1 008 Contr le Positif neutralis 0 037 0 040 0 043 Echantillon non neutralis 0 858 Ech
21. s par retournement sur une feuille de papier absorbant Distribuer rapidement dans toutes les cupules 100 ul de la solution de r v lation de l activit enzymatique R8 R9 pr alablement pr par e Laisser la r action se d velopper l obscurit pendant 30 5 minutes temp rature ambiante 18 30 C Lors de cette incubation ne pas utiliser de film adh sif N B La distribution de la solution de r v lation qui est color e en rose peut tre contr l e visuellement ce stade de manipulation Il y a une diff rence de coloration significative entre cupule vide et une cupule contenant la solution de r v lation ros e se reporter au paragraphe 11 pour la v rification automatique VERIFICATION SPECTROPHOTOMETRIQUE DU D P T DES ECHANTILLONS ET DES REACTIFS 16 Ajouter 100 pl de la solution d arr t R10 en adoptant la m me s quence et le m me rythme de distribution que pour la solution de r v lation Homog n iser le m lange r actionnel N B La distribution de la solution d arr t qui est incolore peut tre contr l e visuellement ce stade de la manipulation La coloration du substrat ros e pour les chantillons n gatifs ou bleu pour les chantillons positifs dispara t des cupules qui deviennent incolores pour les chantillons n gatifs ou jaunes pour les chantillons positifs apr s addition de la solution d arr t 17 Essuyer soigneusement le dessous des plaques Au moins 4 minut
22. verture jusqu la date de p remption indiqu e sur le coffret MODE OP RATOIRE La dur e indicative de ce test est d environ 4 heures Chaque cycle de la proc dure d utilisation du test doit tre effectu int gralement et sans interruption une fois commenc ATTENTION les chantillons r actifs r p tables avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay selon la proc dure 37 C doivent tre confirm s avec le Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay selon la proc dure 37 C De m me les chantillons r actifs r p tables avec le test Genscreen HIV 1 Ag Assay selon la proc dure 40 C devront tre confirm s avec le test Genscreen HIV 1 Ag Confirmatory Assay selon la proc dure 40 C Suivre strictement le protocole propos Utiliser les s rums de contr le n gatif et positif chaque mise en oeuvre du test pour valider la qualit du test Appliquer les bonnes pratiques de laboratoire 1 Etablir soigneusement le plan de distribution et d identification des chantillons 2 Pr parer la solution de lavage dilu e 3 Sortir le cadre support et les barrettes R1 de l emballage protecteur 4 Proc dure de neutralisation a Pour chaque chantillon tiqueter un tube essai en plastique avec la lettre A chantillon neutralis et un tube essai en plastique avec la lettre B chantillon contr le non neutralis Pipeter 150 pl d chantillon r actif r p table dans chaque tube b P
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