RAPID`Listeria spp/Gélose - Bio-Rad
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1. DOMAINE D APPLICATION Milieu chromog nique s lectif pour la recher che et le d nombrement des Listeria spp dans les produits destin s l alimentation humaine et les pr l vements de l environnement PRINCIPE Le milieu RAPID Listeria spp permet de mettre en vidence les Listeria spp gr ce la d tection de l activit B D glucosidase par un substrat chromog nique Les colonies de Listeria sont bleues bleue vertes La s lectivit du milieu est obtenue par l action combin e du Chlorure de Lithium et du m lange antibiotique NF VALIDATION par AFNOR CERTIFICATION selon le protocole EN ISO 16140 La m thode RAPID Lspp est certifi e NF VALIDATION comme m thode alternative la norme de r f rence NF EN ISO 11290 1 selon le protocole ISO 16140 pour la recherche des Listeria spp pour tous produits d alimentation humaine et pour les chantillons d environnement La date de fin de validit de l attestation est 15 12 2014 BAS C NF VALIDATION EN ISO 16140 BRD 07 12 12 06 METHODES ALTERNATIVES D ANALYSES POUR L AGROALIMENTAIRE Certifi par AFNOR Certification www afnor validation com VALIDATION AOAC RI RAPID Listeria spp est valid AOAC Research Institute selon le protocole Performance Methods Tested Certificate n 080701 REFERENCES NORMATIVES D partement US de la Sant et des Services Humains Administration de l Alimentation et de la Sant Centre pour la s2. curit alimentaire et la nutrition appliqu e Bact riologique Analytique Manuel en ligne Janvier 2003 Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience bio rad fr V2 30 05 11 NF EN ISO 11290 1 A1 F vrier 2005 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche et le d nombrement de Listeria monocytogenes Partie 1 M thode de recherche IC V08 028 1 NF EN ISO 11290 2 A1 F vrier 2005 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche et le d nombrement de Listeria monocytogenes Partie 2 M thode de d nombrement IC VO8 028 2 PRESENTATION D shydrat e 500g e Suppl ment 1 g lose de base e Suppl ment 2 g lose de base code 356 4744 10 flacons qsp 500 ml de code 356 4745 10 flacons qsp 500 ml de code 356 4746 Pt uS Pr coul 90 mm x 20 bo tes code 356 3950 CONSERVATION VALIDITE LOT e Pr coul et suppl ments 2 8 l obscurit e D shydrat 15 25 flacon soigneusement ferm dans un endroit sec et frais La date de p remption et le num ro de lot sont indiqu s sur le conditionnement FORMULE THEORIQUE Peptones 20 g Extrait de levure 1g Pyruvate de sodium 2g Citrate de fer ammoniacal 0 5g Maltose 1g Chlorure de sodium 4g Chlorure de Lithium 10 5 g Silice 20 g Activateurs de croissance 2g M lange chromog nique 75 mg
3. M lange antibiotique 40 mg Agar 12g Eau distill e 1000 ml pH final 25C 7 7 5 1 4 AUTRE S PRODUIT S NECESSAIRE S NON FOURNI S e Diluant Tryptone Sel 9 ml x 25T ex code 355 5754 500 g ex code 356 4544 5 poches de 2 3 ex code 355 5791 e Bouillon FRASER 1 2 Pr t l emploi complet 6 flacons de 225 ml ex code 355 5797 5 poches de 2 31 ex code 355 5788 D shydrat base 500 g ex code 356 4604 Suppl ment s lectif lyophilis Coffret de 10 flacons ex code 356 4616 e G lose PALCAM 20 bo tes de 90 mm ex code 356 3674 D shydrat 500 g ex code 356 4754 Suppl ment ex code 356 4752 e G lose RAPID L Mono 20 boites de 90 mm Kit flacon suppl ment code 356 3694 code 355 5294 Voir Fiche s Technique s correspondante s MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI liste non exhaustive e Balance e Sacs de pes e st riles e Broyeur e Agitateur homog n isateur e Bo tes de P tri st riles CO 90 ou 140 mm e Pipettes st riles 0 1 ml 1 ml e Ecouvillons st riles e Pipettes Pasteur st riles e Bains marie avec une pr cision de 1 e Etuve ou enceinte thermostat e avec une pr cision de 1 e Tout mat riel courant d un laboratoire PREPARATION DU MILIEU DESHYDRATE MODE D EMPLOI Toujours agiter avant chaque utilisation Dissoudre 71 5 g de poudre dans 950 ml d eau distill e St riliser lautoclave 121 pendant 15
4. MOTS CLES RAPID Listeria spp Listeria Listeria monocytogenes D tection D nombrement Produits alimentaires Environnement Fraser Glucosidase Chromog nique Milieu 3 4 V2 30 05 11 BIBLIOGRAPHIE e OTTAVIANI F OTTAVIANI M AGOSTI M 1997b Differential agar medium for Listeria monocytogenes Quimper Froid Symposium Proceedings p6 ADRIA Quimper France 16 18 June 1997 4 4 Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 I z1 0 RAD wwyw foodscience bio rad fr
5. bio rad fr suffisants pour s assurer de la validit du r sultat rendu e Expression des r sultats Calculs Se reporter aux normes ISO 11290 1 et 2 ISO 7218 PRECAUTIONS D EMPLOI Les pr cautions d usage relatives la mani pulation de produits potentiellement conta min s dans un laboratoire de microbiologie doivent tre observ es Avant d utiliser les bo tes de RAPID Listeria spp laisser s cher selon la norme ISO 7218 25 50 jusqu disparition des gouttelettes la surface du milieu Toutefois viter un s chage prolong qui pourrait alt rer les performances du milieu Respecter les Bonnes Laboratoire EN ISO 7218 Pratiques de CONTROLE QUALITE Tous les produits fabriqu s et commercialis s par la soci t Bio Rad sont plac s sous un syst me d assurance qualit de la r ception des mati res premi res jusqu la commer cialisation des produits finis Chaque lot du produit fini fait l objet d un contr le de qualit et il n est commercialis que s il est conforme aux crit res d acceptation La documentation relative la production et au contr le de chaque lot est conserv e QUALITE ET PERFORMANCES DU TEST Aspect des colonies apr s 24 heures d incubation MICRO P 37 C ORGANISMES CROISSANCE COULEUR Listeria monocytogenes ATCC 35152 Listeria innocua Bleue ATCC 33090 Escherichia coli Enterococcus faecalis ATCC 19433 NA Non applicable
6. minutes Refroidir 47 50 C Pour 1 litre de milieu ajouter aseptiquement 2 flacons de suppl ment 1 code 356 4745 reconstitu s chacun avec 25 ml d eau st rile Bien homog n iser Pour 1 litre de milieu ajouter 2 flacons de 5 ml de suppl ment 2 code 356 4746 Bien homog n iser pH 7 7 5 R partir en boites de P tri st riles Conserver le flacon soigneusement ferm dans un endroit sec et frais Taux de reconstitution 71 5 g L 500 g de poudre permettent de r aliser 7 litres de milieu V2 30 05 11 PROTOCOLE e Recherche des Listeria spp dans ng ou nml d echantillon e Pr paration de l chantillon Enrichissement s lectif Ensemencer n g ou nml de l chantillon dans 9 x n ml de bouillon FRASER 1 2 Incuber 30 1 pendant 24 heures 22h Note dans le cadre de la marque NF VALIDATION les prises d essai sup rieures 25g n ont pas t test es Apr s incubation le bouillon d enrichissement s lectif FRASER 1 2 peut tre conserv au froid 3C 2C pendant 72h avant ensemencement de RAPID Listeria spp e Isolement et Incubation Pr lever 0 1 ml de bouillon Fraser 1 2 en fin d incubation avec une pipette st rile et les d poser en goutte sur le bord ext rieur de la moiti de la g lose RAPID Listeria spp sch ma 1 Avec un couvillon st rile taler par va et vient sur la moiti de la bo te sch ma 2 Avec une pipette Pasteur st rile en par
7. s dans les m thodes normalis es par le CEN ou l ISO en incluant l tape de purification ou par l utilisation de sondes nucl iques ayant fait l objet d une validation comme par exemple la PCR iQ Check Listeria spp code 357 8113 partir des colonies isol es avec ou sans l tape de purification 2 Repiquage par spot dau moins une colonie isol e partir de RAPID Listeria spp sur g lose RAPID L mono compl t par un test de Gram et de catalase Il est possible de confirmer jusqu 15 colonies sur une boite de g lose RAPID L mono Ou Repiquage par spot d au moins une colonie isol e partir de RAPID Listeria spp sur g lose PALCAM l est possible de confirmer jusqu 15 colonies sur une boite de g lose PALCAM 3 L utilisation de toute autre m thode certifi e NF VALIDATION de principe diff rent du RAPID Listeria spp Le protocole valid de la seconde m thode devra tre respect dans son ensemble c est dire que toutes les tapes ant rieures l tape interm diaire de laquelle on repart pour la confirmation doivent tre communes aux deux m thodes En cas de r sultats discordants positifs par la m thode RAPID Listeria spp non confirm par l une des options d crites ci dessus le laboratoire devra mettre en uvre les moyens Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience
8. tant de la fin de l talement isoler en stries relativement serr es l talement sur toute la boite sch ma n 3 Incuber les bo tes l envers 37 1 pendant 24h 2h Sch ma 1 D p t 0 1 ml Sch ma 2 Ecouvillon Sch ma n3 D part Pipette st rile Arriv e e Lecture R aliser une lecture apr s l incubation Les Listeria spp pr sentent des colonies caract ristiques sur RAPID Listeria spp de couleur bleues bleues vertes 2 4 Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 e Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience bio rad fr V2 30 05 11 Note La lecture jusqu 48 heures d incubation de la g lose RAPID Listeria spp est possible Apr s incubation les g loses RAPID Listeria spp peuvent tre conserv es au froid 3C 2C pendant 48h avant lecture et confirmation ventuelle Note 1 Dans le cas d absence de colonies caract ristiques sur RAPID Listeria spp on peut conclure l absence de Listeria spp et donc l absence de Listeria monocytogenes Note 2 En cas de pr sence de colonies caract ristiques sur RAPID Listeria spp la confirmation et l identification des esp ces peut tre r alis e e Confirmation des colonies caract ristiques Dans le cadre de la marque NF VALIDATION la confirmation doit tre effectu e selon une des mani res suivantes 1 Par l utilisation des tests classiques d crit
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