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eppendorf - UCSD Department of Physics

1. ADNss ARN Oligo Rappeler la methode dsDNA Determination gt d un blanc dsDNA facteur m amp thode 1 A260 50 0 pg mL GEES D Traitement des donn es L appareil est livr d origine avec les m thodes preprogrammees Pour les m thodes des acides nucleiques le programme comporte les facteurs de conversion habituellement utilis s pour passer de l absorbance en concentration dans l exemple 50 Cependant les facteurs peuvent tre modifi s en tapant la touche voir chapitre programmation Le nombre de d cimales Au facteur programm d termine le nombre de d cimales du r sultat En cas d utilisation d unit s de concentration diff rentes de ug ml ug uL par ex le BioPhotometer effectue de lui m me la conversion du facteur en m moire pour fournir la bonne valeur Processus de lecture Les valeurs de blancs restent conserv es jusqu au changement de date En cas de d termination d un blanc existant dans une journ e le BioPhotometer propose de ce fait dans la derni re ligne lors de l appel d une m thode soit de repasser un nouveau blanc soit de proc der directement la lecture de l chantillon En cas d absence de valeur de blanc au fichier le syst me propose de passer d abord un blanc dsDNA 0 000 105 5 Mode d emploi D termination de l chantillon D termination de l chantillon suivant Dilution de l chantillon Touche convers
2. Observation 1 Observation 2 Observation 3 Observation 4 Aucun choix possible la proc dure de calcul par facteur est fig e au programme Aucun choix possible l unit absorbance est fig e au programme Aucun choix possible le nombre de standards 1 est fig au programme Il existe une possibilit de choix uniquement si la programmation au param tre Nombre de standards a t au moins 4 ou en d termination simple du standard au moins 5 117 6 Programmation 6 3 Explication des param tres Les param tres sont class s en deux cat gories les param tres de s lection et les param tres n cessitant la saisie de chiffres Concernant les param tres de s lection ceux ci d pendent de variantes m thodologiques voir tableau de ces param tres au chapitre pr c dent Param tre Saisie Observations Calcul S lection Permet la s lection parmi les proc dures de calcul du r sultat absorbance facteur standard et formule de Warburg Pour un calcul utilisant la formule de Warburg la valeur mesur e A260 au cadran et l impression est rep r e avec le signe Facteur Chiffres uniquement en cas de s lection de la proc dure de calcul 5 rangs facteur Saisie d un facteur le nombre de d cimales du facteur d termine le nombre de d cimales du r sultat Correction S lection uniquement pour les m thodes pour acides nucl iques et par E320 prot ines Pos
3. chant 002 5 52 g mL 20 200 uL Lire l chantillon suivant Sample 0 525 A595 130 11 Nomenclature Code commande 6131 000 012 6131 900 102 6131 810 006 6131 928 007 0013 608 148 0013 608 164 0013 608 172 0013 610 517 6547 001 018 0030 106 300 4308 078 006 Photom tre BioPhotometer Mode d emploi BioPhotometer Software Package Logiciel de transfert de donn es depuis le BioPhotometer vers un logiciel de calcul sous tableur tels que Excel sous Windows Filtre UV VIS secondaire le lot pour contr le du BioPhotometer Imprimante Thermo imprimante DPU 414 Bloc secteur 115 V pour imprimante DPU 414 Bloc secteur 230 V pour imprimante DPU 414 Cordon imprimante VGA 9 broches m le fem Papier pour thermo imprimante les 10 rouleaux UVette Cuve usage unique pour UV VIS de 220 1 600 nm UVette en conditionnement individuel sous blister les 80 Porte cuves pour 16 cuves 131 12 Exploitation des r sultats et conversions 12 1 Acides nucleiques ADNds ADNss ARN Oligo Conversion par facteur C A260xF C Concentration calcul e A260 Absorbance lue 260 nm F Facteur programmer au cas par cas selon la m thode par la touche pron Particularit de la m thode pour acides nucl iques le facteur programm se rapporte toujours a l unit de concentration ug mL Si on s lectionne l unit de concentration ug uL le facteur sera auto
4. E Et E e S E Hi STE Ge i f meet ee 7 CE 0015 033 509 00 rc ce C lt S nale E SE Go ei e Ee eg ee et c SS x Pate cer ee d 3 Tet ce e C et Ek ec ce rk C Eppendorf Netheler Hinz GmbH 22331 Hamburg Germany Phone 49 40 5 38 01 0 Fax 49 40 5 38 01 556 e mail eppendorf eppendorf com eppendorf home page http www eppendorf com Life Science Application Hotline Phone 49 180 3 66 67 89 e mail application hotline eppendorf com Eppendorf Scientific Inc One Cantiague Road PO Box 1019 Westbury New York 11590 0207 USA Phone 800 421 9988 Fax 516 876 8599 e mail eppendorf eppendorfsi com eppendorf Printed in Germany eppendort is a registered trademark Eppendorf Certificate BioPhotometer 6131 1 Wavelength accuracy Wellenl ngenrichtigkeit code filter Untergrenze Obergrenze Istwert 2 Photometric accuracy at Photometrische Richtigkeit bei 260nm code filter Untergrenze Obergrenze Istwert 3 Photometric precision at Photometrische Pr zision bei 260nm Filter Test Limiting value Actual value code filter Grenzwert Istwert 921 110 Sample Al S s 0 003 A 0 0007 A Measuring value against Blank AO Me werte gegen Blank A0 All limits applicable for use of the test filters in the BioPhotometer Alle Grenzen gelten f r den Gebrauch der Testfilter im BioPhotometer 4 Security chec
5. Hinz GmbH ou un service apr s vente contractuellement accr dit Le raccordement au secteur doit comporter une prise de terre Toute utilisation non conforme de l appareil est susceptible d entraver la protection interne Certains r actifs ou tampons de dilution sont susceptibles de produire des br lures ou d autres atteintes la sant Les chantillons acides nucl iques prot ines cultures bact riennes peuvent tre de nature infectieuse ou constituer des risques pour la sant Lors de la pr paration des chantillons au cours de la mesure ainsi que lors du nettoyage de l appareil ou des op rations de maintenance il convient de respecter les directives de s curit du laboratoire porter des v tements de protection des gants d sinfecter Toujours rester prudent en manipulant les chantillons Respecter les consignes et r gles de s curit concernant l limination des d chets des solutions ayant servi aux mesures au nettoyage ou la d sinfection des ustensiles 99 4 Installation Envergure de livraison BioPhotometer Cordon secteur pour BioPhotometer Mode d emploi complet mode d emploi succinct Capuchon pour compartiment porte cuve 4 1 BioPhotometer Raccordement de l appareil au secteur Espace n cessaire largeur 40 cm profondeur 50 cm Raccordement secteur prise secteur avec borne de terre Effectuer le raccordement au secteur L appareil effectue
6. M thodes alternantes entre Bradford et Bradford micro Touche du chiffre 1 Appel de la m thode Lowry et Lowry micro M thodes alternantes entre Lowry et Lowry micro Touche du chiffre 2 103 5 Mode d emploi Go eo O gt oa Parameter O oO Z E Ei Function CH 2 3 gt 5 Conversion Clear o Appel de la m thode BCA et BCA micro M thodes alternantes entre BCA et BCA micro Touche du chiffre 3 Appel de la m thode OD 600 mesure de la densit bact rienne Touche du chiffre 5 Appel du fichier de programmation quitter le fichier de programmation Appel des fichiers fonctions Quitter les fichiers fonctions Touche du point Modification du num ro d chantillon Touche du chiffre 0 Programmation de la dilution D placement du curseur vers la ligne suivante liste des param tres ou des fonctions Calcul des concentrations molaires et de la quantit totale d chantillon rendement D placement du curseur vers la ligne pr c dante liste des param tres ou des fonctions Annuler une saisie Validation d une saisie D termination d un talon D termination d un blanc D termination d un chantillon 104 5 Mode d emploi 5 2 D termination des acides nucl iques Descriptif valable pour les m thodes ADNds
7. chant 001 Da Hr 204200 yL dsDNA chant 001 563 20 pg mL 20 200 uL 0 694 A230 1 408 A260 1 97 260 280 0 715 A280 2 03 260 230 0 002 A320 Lecture de l chantillon Si le r sultat de la lecture doit tre converti 4 Conversion quantit calcul chant total molarit calcul e paires bases 300 masse mol 198 kDa E dsDNA 563 20 pg mL 20 200 uL 79 ug 2843 pmol mL 398 pmol chant 001 dsDNA 249 70 pg mL 20 200 uL 0 689 A230 0 788 A260 1 85 260 280 0 623 A280 2 19 260 230 0 003 A320 chant 002 Lire l chantillon suivant 129 10 Mode d emploi succinct D roulement de la lecture Bradford BRADFORD domaine calibrase S lectionner la m thode Bradford OO gmt BRAD micro Pour s lectionner la microm thode Bradford domaine calibrase 1 0 20 0 ug mL Standard BRADFORD 0 000 an Lire le blanc ou m ED C Sampie d BRADFORD std 1 100 pg mL e 0 048 Lire le premier standard Standard O e suivant std 2 e e 200ug mL E BRADFORD std 6 e e 2000 pg mL 1 325 a Lire le dernier standard idard cv 2 8 calibrase m moris Si l chantillon est dilu Exemple 20 200 uL BRADFORD chant 001 BRADFORD chant 001 3 6 8 pg mL Lecture de l chantillon 20 200 yL 0 352 A595 BRADFORD
8. e pour les calculs ult rieurs R gression S lection uniquement avec un nombre minimum de standards de 4 ou pour une d termination simple de standards d au moins 5 S lection d une proc dure de calcul parmi une r gression lin aire et non lin aire Pour un nombre des standards sup rieur 1 et inf rieur 415 l exploitation s effectue toujours selon une r gression lin aire voir chapitre 12 exploitation des donn es Std 1 Std 10 Chiffres Programme de la valeur de concentration du standard 5 rangs Le nombre de d cimales de la concentration du 1 standard d termine le nombre de d cimales du r sultat 119 X O 6 4 Tableau des valeurs programm es d origine y Q ADNds ssADN ARN Oligo Prot ines Bradford Bradford Lowry Lowry BCA BCA OD 600 D micro micro micro 3 Calcul Absor Standard Standard Standard Standard Standard Standard 3 bance Y Facteur 50 0 37 0 40 0 30 0 Df D a a D D a a D DI 1 1 000 Sh Corr par A320 inactit inactif inactif inactif inactif Nombre 6 6 6 6 8 5 3 de standards el Determination 1x2 1x 1x 1x 1x 1x 1x standard R gression Nonlin aire Nonlin airej Non lin aire Non lin aire Non lin aire Non ngaira Unit s ug mL ug mL ug mL ug uL ug mL ug mL ug mL ug mL ug mL ug mL ug mL pond rales Unit s molaires pmol mL p
9. ro d chantillon suivant le num ro a t ramen sur 3 Les num ros d chantillons suivants seront incr ment s ensuite partir de ce nouveau num ro 114 6 Programmation 6 1 Principes de la programmation Chaque m thode est pr programm e d origine et comporte en m moire les param tres tels que la formule de calcul du r sultat ou les unit s de concentration Les m thodes programm es d origine peuvent tre modifi es par l acc s aux param tres par la touche ram Rappeler OLIGO la m thode facteur m thode 1 A260 30 0 ug mL ED o CEE Rappeler la liste OLIGO des param tres Parameter bfacteur corr par A320 Il existe diff rentes listes de param tres pouvant tre modifi es pour les m thodes voir tableau au chapitre suivant Les param tres pour la m thode Oligo s tendent sur trois pages d afficheur du syst me Exemple modification du facteur Les saisies de chiffres sont valid es en m moire par Len Saisir le facteur et le m moriser OLIGO facteur pcorr par A320 Apr s la validation en m moire du facteur le curseur a saut sur le bloc param trique suivant correction par A320 6 Programmation S lectionner le param tre souhait Valider en m moire le param tre Quitter le fichier Exemple modification des unit s Les param tres s lectionn s sont point s l aide du curseur puis sont valid s par
10. 000 A X XXX X XXX A X XXX X XXX A X XXX X XXX A X XXX X XXX A nn 0 000 X XXX X XXX A X XXX X XXX A X XXX X XXX A WE X XXX X XXX A 0 000 A X XXX X XXX A X XXX X XXX A X XXX X XXX A nr 0 000 A X XXX X XXX A X XXX X XXX A X XXX X XXX A 0 000 A X XXX X XXX A X XXX X XXX AJ X XXX X XXX A 914 XXX 921 XXX 922 XXX 923 XXX 916 XXX 917 XXX Please protect against dust heat and liquid Bitte vor Staub Hitze und Fl ssigkeiten sch tzen The limits are valid for max 2 years as of the date on the right Die Grenzwerte gelten f r max 2 Jahre ab Date Datum Signature Unterschrift Datum Tableau Reproduction du document se trouvant coll l int rieur du couvercle du coffret de filtres 6131 928 007 136 13 Contr le du photom tre Environnement du contr le du photom tre R aliser le contr le env 20 C N extraire le filtre de son coffret que pendant le temps strictement n cessaire la lecture et le pr server de tout dommage et de toute souillure Pr server les filtres de la poussi re de la chaleur des liquides et des vapeurs agressives installer le filtre dans le porte cuve avec l autocollant orient vers l utilisateur S lectionner la fonction test photom trique Cette fonction est install e sur les appareils comportant la version logicielle partir de V 1 20 Pour une utilisation des filtres de contr le
11. La s lection valid e en m moire est marqu e d un ast risque page 2 3 ug mL ng ul ug HL pmol L page 2 3 ug mL ngjul ngjuL pmol uL Apres validation de l unit de concentration ug L le curseur saut vers le bloc param trique suivant unit molaire Pour quitter le fichier des param tres on peut s lectionner des param tres la ligne fin param tre et valider par ou simplement taper la touche n importe quel moment OLIGO Parameter facteur m thode 1 A260 20 0 ug mL 116 6 Programmation 6 2 Tableau des param tres pour les seules m thodes calcul par facteur ADNds Oligo Prot ines Bradford OD 600 ADNss Brad micro ARN Lowry Low micro BCA BCA micro Calcul Observation 1 Observation 1 Absorbance Absorbance Observation 1 Standard Standard Facteur Facteur Formule de Warburg Correction inactif Inactif Inactif par A320 Actif Actif Actif Unit s ug mL ug mE mg mL mg mL Observation 2 ng uL nou ug mL ug mL pg uL Kg uL Hg Unit molaire pmol uL pmol uL umol L umol L pmol mL Facteur Chiffres Chiffres Chiffres Chiffres Chiffres pour les seules m thodes calcul par standard Nombre de Observation 3 Chiffres standards D termination 1x 1x des standards 2x 2x 3x 3x R gression Lin aire observation 4 Non lin aire Standard Chiffres Chiffres
12. cepteur spectral Cuves optiques Types de cuves Thermostatisation de cuve Cadran afficheur Grandeurs affich es 2 Proc dure de mesure D termination de la valeur du blanc de la cuve D termination de la concentration Mesure relative par rapport au mat riau de r f rence Domaine Blanc cuve Longueur d onde de lecture Temps de pr chauffage Tension d alimentation Ambiante admissible Humidit relative de l air une mesure individuelle Ecart standard photom trique court terme D faut de justesse de la longueur d onde Demi valeur spectrale Taux de lumi re parasite Date 25 09 1997 5 Limites d erreur et autres limites incertitude photom trique relative de la mesure d absorbance spectrale sur toutes les longueurs d onde pour Certificat de conformit du BioPhotometer 6131 Conforme l annexe 15 de la directive d talonnage Photom tre monofaisceau avec faisceau de r f rence et longueurs d onde fixes BioPhotometer 6131 Eppendorf Netheler Hinz GmbH Hambourg Mode d emploi Lampe gt diaphragme gt lentille gt diaphragme gt cuve gt diaphragme gt grille de renvoi gt diaphragmes gt photodiodes Lampe flash X non domaine spectral continu de 220 nm 2000 nm Grille polychromateur Photodiodes silicium domaine spectral de 200 1100 nm Quartz verre optique sp cial mati re plastique selon longueur d onde 10 mm macro volume mini 1000 pl 10 mm semi micro
13. sur des appareils avec des logiciels plus anciens s adresser Eppendorf S lectionner les filtres test Ai A2 As pour la lecture de justesse photom trique 230 260 280 320 562 et 595 nm A260 ou A280 pour la lecture de la justesse de longueur d onde 260 nm ou 280 nm A est pr vu pour une utilisation exclusivement r serv e au service apr s vente Eppendorf Suivre les instructions de l afficheur du photom tre pour les lectures du blanc et de l chantillon L appareil effectue 10 cycles de lecture et imprime par la suite la valeur moyenne des absorbances d ter min es aux diff rentes longueurs d onde Comparer les valeurs des absorbances la fourchette des valeurs tol r e pour cette longueur d onde En plus de l information concernant la justesse le protocole imprim comporte des informations sur la r p tabilit l appareil d termine chaque fois les carts standards et les coefficients de variation partir d une s rie de 10 lectures par filtre Si les absorbances lues avec les filtres de contr le ne correspondent pas aux fourchettes de tol rance il convient de contacter le service apr s vente Eppendorf Les filtres eux m mes doivent tre recalibr s en usine apr s deux ans 137 Descriptif m trologique Nature Type Fabriquant distributeur Instructions d emploi 1 Syst me de mesure Trajet du faisceau Emetteur source Syst me spectral R
14. volume mini 400 ul 10 mm vidange volume mini 300 pl 10 mm ultra micro volume mini 70 pl Absente Eclair type graphique LCD 33 x 66 mm Absorbance concentrations massique et molaire Lecture individuelle de chaque cuve en fonction de la longueur d onde Selon la loi de Beer Lambert Bourguer Contr le par talons secondaires calibr s 8 Domaine spectral de la mesure d absorbance 0 000 4 3 000 A Les limites d erreur cit es peuvent tre d pass es en dehors des gammes de mesure ainsi qu en cas d utilisation autre que les utilisations nominales 4 Conditions d utilisation nominales Selon le type de cuve utilis X non 230 260 280 320 562 595 nm Aucun 100 240 V 10 50 60 Hz 4 5 15 35 C 15 70 15 A 1 lt 0 5 A 1 1 nm de 230 280 nm 2 nm de 320 595 nm lt 5 nm de 230 320 nm lt 7 nm de 562 et 595 nm lt 0 03 260 nm avec GG 375 3 Schott Eppendorf Netheler Hinz GmbH Service Qualit et normes 138 RGO e CENT H CE CS ee ci eve ec le 2er SR er M amp C e Ek Ss ce a E E e Ge ce e ce es de EE ce ee D es as t GH ce W ce ce ES E A ce Ce ec e ce ce e Ge e ce Ce Te a eg e er t en ee E e Co e wie ce GE SE EE dert ct a E C e E Wi CI ma C amp a EG Konformit tserkl rung er E amp m 3 c e EC Conformity Declaration ee et Le EE Eppendorf Netheler Hinz G
15. 320 Voir chapitre 12 1 12 3 Prot ines par ajout de r actif M thodes Bradford Bradford micro BCA BCA micro Lowry Lowry micro S lection de l expression du r sultat Absorbance Calcul de la concentration par un facteur Calcul de la concentration par standards S lection des modes de calcul partir de standards Calibrage un point Calibrage multi points droite d talonnage Calibrage multi points courbe d talonnage Calcul des concentrations par un facteur et calcul de la concentration par un standard calibrage un point Voir chapitre 12 2 longueur d onde 595 nm Bradford Lowry ou 562 nm BCA Calcul de la concentration par standards calibrage multi points droite d talonnage La droite d talonnage sera tablie partir d une s rie de standards de 2 10 valeurs avec d termination simple double ou triple concentration en fonction de l absorbance L quation de la droite sera calcul e par une r gression lin aire C ao ajA aq Pente de la droite d talonnage facteur amp Point d intersection de la droite d talonnage avec l axe des concentrations concentration d un chantillon l absorbance 0 decalage Apr s calcul du calibrage un CV coefficient de variation sera form pour valuer la dispersion des lectures exception calibrage deux points avec d termination simple des deux standards Si le CV est sup rieur 10 il sera affich Dans c
16. BioPhotometer Bedienungsanleitung Operating Manual Mode d emploi eppendorf Sommaire 1 Pr sentation de Tapnpare nananana nae 95 2 Sp cifications techniques 97 3 Consignes de s curit et mise en garde contre certains risques 99 4 installallon en sd De E ne ee LE Hate tata 100 4 1 BioPhotomet r AE us EE E NNN ee VAN Ae KEN ee a eh a 100 4 2 Imprimantes sise det do ARR E ED ee le es A SE aa 101 4 3 Cuves Optiques E E dun se ans AER dd 102 5 Mo de d emploi 2 r EE e SEENEN en ne dures bu 103 5 1 GIE TE ASP a a IE EEA NEE OEN 103 5 2 D termination des acides nucl iques 105 5 3 D termination photom trique directe des prot ines 107 5 4 D termination de prot ines apr s ajout de r actif Bradford BCA Lowry 109 5 5 D termination des OD oo 112 5 6 D termination d chantillons dilu s 113 5 7 Modification du num ro d chantillon zan k 114 6 Programmation NEEN 115 6 1 Principes de la programmation 2222 oeeeeeennnernnneneeneeeenen nennen 115 6 2 Tableau des param tres et kan mad tue a dd d ANEN nd ee 117 6 3 Explication des param tre
17. DPU 414 ki s rie service fin fonction Pour quitter le fichier des fonctions on peut soit s lectionner la ligne fonction fin soit taper ee ou encore taper la touche partir de n importe quelle ligne Le syst me retourne ensuite dans la m thode pr alablement programm e OLIGO facteur m thode 1 A260 20 0 ug mL ED CD 122 8 Messages d erreur rep rage des r sultats et textes auxiliaires Rep rage des r sultats Rep re Observations 1 586 A260 4 Le rep re c t de A260 sur l afficheur et sur le protocole d imprimante uniquement sur m thode prot ines direct signifie que le r sultat a t obtenu par la formule de VVarburg 0 015 A320 4 Le rep re c t de A320 sur l afficheur et sur le protocole d imprimante uniquement sur m thode prot ines direct et m thode pour acide nucl iques signifie que les absorbances 260 280 et 230 nm sont corrig es par l absorbance 320 nm voir chapitre 6 Programmation Messages d erreurs accompagnant les r sultats Message d erreur Observation cause Rem de L absorbance mesur e est sup rieure Diluer l chantillon A 3 0 V rifier la cuve hauteur du faisceau optique Nettoyer le puits porte cuve voir chap 9 Placer la cuve dans le bon sens face optique dans le faisceau optique Utiliser une cuve transparente la longueur d onde util
18. I IEC 61010 1 2 IEC 664 Env 20 W en fonctionnement 10 W en veille lt 0 3A Env 10ms 90V Env 200 ms 220 V T 1 A1250 V 5 mm x 20 mm 2 fusibles 15 35 C avec justesse et r p tabilit d finie 25 70 C hors service entreposage 15 70 humidit relative Non tropicalis Eviter l incidence solaire directe RS 232 C s rielle L imprimante connect e doit tre conforme aux directives EN 60950 et UL 1950 Conforme VDE CE IEC 1010 1 Largeur 20cm emball 29 cm Profondeur 32cm emball t 43 cm Hauteur 10cm emball 20 cm 3 kg emball 4 8 kg 98 3 Consignes de s curit et mise en garde contre certains risques Consignes caract re technique Ne pas ouvrir l appareil Consignes concernant l utilisation de mat riaux biologiques et de produits chimiques Ne pas laisser entrer de liquide l int rieur de l appareil Avant toute intervention sur l appareil ou changement de fusible retirer le cordon d alimentation les tensions lectriques l int rieur de l appareil sont susceptibles de produire des chocs l taux L appareil ne doit pas tre utilis dans des locaux risque explosif Ne pas utiliser un appareil pr sentant un dommage en particulier lorsque le cordon d alimentation lectrique est endommag Toute r paration ou intervention technique est strictement r serv e au service apr s vente de la Soci t Eppendorf Netheler
19. Niveau de remplissage mini Faisceau lumineux Epaisseur max de la base Volume mini 70 UL 400 uL 1000 uL 127 10 Mode d emploi succinct Programmation Les m thodes install es d origine en m moire m thode peuvent tre modifi es Exemple Programmation de l unit ug mL et m thode de conversion par standard 500 ug mL pour la m thode prot ines PROTEIN absorbance S lectionner prot ines PROTEIN page 1 3 calcul std pa facteur D buter la programmation gt extinction Warburg PROTEIN page 1 3 2 P Pcalcul std Selectionner calibrage Bij facteur avec standards STD extinction Warburg PROTEIN Pcorr par A320 et valider l affichage saute sur le bloc de P A 3 R Pb lecture std s lection suivant apr s la validation PROTEIN unit gt pg mL S lectionner l unit pg mL ou gt std PROTEIN unit et valider PROTEIN gt cuve Saisir la valeur des concen trations standards et valider l affichage saute sur le bloc de s lection suivant apr s la validation Terminer la programmation fin param tre 128 10 Mode d emploi succinct D roulement de la lecture ADNds dsDNA facteur m thode 1 A260 50 0 ug mL S lectionner la m thode ADNds Lire le blanc Si l chantillon est dilu Exemple 20 200 UL dsDNA
20. Pour acides nucl iques Ratio 260 280 Ratio 260 230 Concentration molaire Rendement total 12 programmes pour m thodes pr programm es accessibles la modification Pour toutes les proc dures de calibrage Pour 100 r sultats avec absorbance valeur des ratios num ro d chantillon dilution d chantillon Date et heure calendrier jusqu en 2090 97 2 Sp cifications techniques El ments d utilisation Nature des cuves Porte cuve Hauteur de cuve Hauteur du faisceau optique dans la cuve Dimension du faisceau optique dans la cuve Clavier Cadran afficheur Assistance menu Sortie des r sultats ADNds ADNss ARN Oligo Prot ines Nature des cuves mesure en cuve Quartz ou plastique UVette Eppendorf OD 600 Bradford Lowry BCA cuve verre ou plastique 12 5 mm x 12 5 mm non thermostat Min 36 mm 8 5 mm Largeur 1 mm Hauteur 1 5 mm 19 touches cloqu es Ecran graphique clair 33 mm x 60 mm Allemand anglais Cadran afficheur et imprimante absorbance concentration ratio Sp cifications g n rales de l appareil Alimentation Cat gorie surtension Degr de pollution Puissance absorb e restitu e Courant absorb Microcoupure de tension admissible Fusibles Ambiante admissible Connexion imprimante Conformit aux normes Dimensions Poids Toutes modifications r serv es 100 240 V 10 50 60 Hz 5
21. Proc dure d exploitation par calibrage multipoints calibrage lin aire ou non lin aire Valeur de concentration des standards Le nombre de d cimales programm es avec le facteur ou la concentration de d part du premier standard conditionne le nombre de d cimales du r sultat final Lors de la programmation du facteur il convient de l aligner sur l unit de concentration choisie 109 5 Mode d emploi D roulement de la lecture Les valeurs des blancs restent conserv es en m moire jusqu au changement de date voir chapitre d termination des acides nucleiques Les valeurs des standards restent conservees en m amp moire de fa on illimit e Elles sont cras es par de nouvelles valeurs lors de la d termination d une nouvelle s rie de standards Les r sultats d une s rie de d terminations d chantillons sont toujours calcul s sur la base de la s rie standard la plus r cente Mise en m moire Dans l exemple ci apr s la programmation de la m thode Bradford utilise une proc dure d exploitation par une s rie standard multipoints avec 5 valeurs en d termination double et calcul par une r gression non lin aire D termination BRADFORD du blanc 0 000 a D termination BRADFORD std 1 1 des standards XXXX ug mL Standard 1 19 8 lecture X XXX a Suivant std 1 2 XXXX ug mL Sur les deux premi res lignes on lit les valeurs du standard qu on vient de passer Sur les deux de
22. Rem de anomalie v rifier param tre Le param tre de la m thode a t V rifier le param tre au besoin m thode programm de fa on incorrecte le reprogrammer programmer standards par calibrage multipoints V rifier la programmation et effectuer ordre croissant Les valeurs des concentrations des la saisie en ordre croissant standards n ont pas t programm es en ordre croissant Autres messages d erreur Message d erreur Observation cause Rem de saisie invalide lors de la saisie des num ros courants Refaire la saisie en respectant les des chantillons par la touche m limites La saisie comporte un chiffre hors limites compatibles de 1 999 Textes d aide Texte d aide Observation cause Rem de programmer standards appara t l afficheur apr s appel de la Programmer les valeurs de m thode concentration de la s rie de La m thode comporte bien des standards standards touche cl mais aucune s rie de concentration EE Programmer une autre m thode standard n a t saisie sans standard programmer facteur appara t l afficheur apr s appel de la Programmer la valeur du facteur m thode touche rune La m thode comporte bien un facteur PRE Programmer une autre m thode mais aucune valeur n a t saisie sans facteur 125 9 Nettoyage et maintenance Photom tre Retirer le cordon secteur avant de proc
23. areil est directement op rationnel apr s mise sous tension M thodes 7 8 9 dsDNA ssDNA RNA 4 5 6 Protein OD 600 Oligo 1 2 3 Bradford Lowry BCA EH ADNds ADNss ARN Oligo SUNA DNA RNA Lecture directe des acides nucl iques 260 nm S Quotients A260 A280 et A260 A230 Correction de la lecture de l absorbance par l absorbance A320 2 Lecture en cuve quartz ou en UVette Eppendorf E OD 600 Es Lecture directe de la suspension bacterienne 600 nm par turbidim trie Lecture avec cuve en verre ou en plastique 2 Proteines Lecture directe des proteines a 280 nm Lecture directe de l absorbance ou conversion par facteur standard ou formule de Warburg Correction de la lecture de l absorbance par l absorbance A320 Lecture en cuve quartz ou en UVette Eppendorf i 5 3 Bradford Lowry BCA ES Bradford micro Lowry micro BCA micro Lecture directe des prot ines avec les r actifs de Bradford Lowry BCA Lecture directe de l absorbance ou conversion par facteur ou calibrage standard calibrage un point r gression lin aire ou non lin aire Nombres et valeurs des l ments calibrants programmables M thodes pour prot ines disponibles galement en micro m thodes taper deux fois la touche Lecture avec cuve en verre ou en plastique Cuves UVette Ultra micro semi micro macro vidange Base 12 5 mm x 12 5 mm Hauteur totale mini
24. de lui m me l adaptation la tension du secteur sous r serve de respecter la fourchette indiqu e sur la plaquette d identification et figurant au tableau des sp cifications techniques Conditions ambiantes admissibles voir sp cifications techniques Retirer le film protecteur du cadran afficheur eprondert tteineler Hiox God g 2239 Kamberg P i Typ 615 oon Ne 60031 100 240V 50 6052 Dan ZV i fus e NE V o i AICE pada tn Germany L RS 232 G 3 4 1 Commutateur secteur 4 Interface s rielle pour imprimante 2 Porte fusible RS 232 C 3 Douille de raccordement au secteur 100 4 Installation 4 2 Imprimante Imprimante DPU 414 Param trage de l imprimante L interface s rielle RS 232 C du BioPhotometer permet de raccorder la thermo imprimante Eppendort DPU 414 Imprimante et cordon pour imprimante voir chapitre 11 Nomenclature Enficher le cordon de l imprimante dans la douille de connexion du BioPhotometer voir figure et serrer les vis de s curit Enficher le cordon d imprimante dan l imprimante et serrer les vis de s curit Effectuer le raccordement au secteur 115 V ou 230 V BioPhotometer S lectionner la fonction imprimante DPU 414 dans la liste des fonctions et valider Imprimante DPU 414 V rifier le param trage de l imprimante et effectuer au besoin les modifications pour assurer la compatibilit a
25. der aux op rations de maintenance ou changement de fusible Les tensions pr sentes l int rieur de l appareil peuvent causer des chocs lectriques dangereux Essuyer tout l appareil l aide d un chiffon humide et d un d tergent doux Pour d sinfecter essuyer avec un chiffon l g rement impr gn d un m lange eau thanol 70 En aucun cas des liquides ne devront p n trer l int rieur de l appareil Puits porte cuve Nettoyer le puits porte cuve l aide d un coton tige l g rement humide jamais grande eau comme avec une pissette Lorsque l appareil est hors service poser l obturateur livr avec l appareil sur le porte cuve pour viter les d p ts de poussi re Toute pr sence de poussi re ou de r sidus de r actifs sur le parcours optique peut tre source d erreur de lecture Changement de fusible Retirer le cordon secteur Au dessus du raccordement secteur se trouve le porte fusible voir fig au chapitre 4 1 La position du support est s curis e par un petit verrou se trouvant au bas du support Pousser le levier de verrouillage vers le haut et extraire le support Remplacer les fusibles voir sp cifications au chapitre 2 Sp cifications techniques R ins rer le support dans sa logette et le pousser jusqu l encliquetage du verrou Raccorder nouveau au secteur 126 10 Mode d emploi succinct Pr paration L app
26. e cas le calibrage ne sera mis en m moire qu apr s validation Avec plus de deux standards la valeur du cv sera toujours affich e m me si sa valeur est lt 10 Les i aram tres calcul s a et a de la droite d talonnage pourront tre imprim s l aide de la touche Calcul de la concentration par une s rie standard calibrage multi points courbe d talonnage Une courbe d talonnage concentration en fonction de l absorbance sera tablie partir d une s rie de 5 10 standards en d termination simple de 4 10 standards en d termination double ou triple La r gression non lin aire sera calcul e partir d un polyn me du 3 degr C a 34A aA tag a Coefficient les coefficients sont d termin s partir de la m thode des moindres carr s Valeur du CV voir ci dessus r gression lin aire Les diff rents param tres calcul s pour la courbe d talonnage m moris e peuvent tre imprim s l aide de la touche 134 12 Exploitation des r sultats et conversions ProDilution des chantillons et p o des cuves Voir chapitre 12 1 12 4 OD 600 Les valeurs sont exprim es comme tant les absorbances lues la longueur d onde de 595 nm Dilution des chantillons et p o des cuves Voir chapitre 12 1 135 13 Contr le du photom tre Eppendorf propose un jeu de filtres filtre UV VIS secondaire code commande 6131 928 007 pour cont
27. es Le puits porte cuve est compatible avec toutes les cuves rectangulaires usuelles dont la hauteur de la fen tre de mesure est de 8 5 mm par rapport au fond et dont la hauteur totale est au minimum de 36 mm voir sch ma du mode d emploi succinct Les dimensions du faisceau dans la cuve sont de 1 0 mm de large et de 1 5 mm de haut Les cuves de verre et en plastique sont utilisables pour la lecture dans la mesure o leur transparence aux longueurs d ondes envisag es est compatible Eppendorf propose sa cuve plastique UVette qui est transparente aux UV jusqu 220 nm et convient par cons quent aux d terminations des acides nucl iques 102 5 Mode d emploi 5 1 Clavier N Q 7 e zZ gt co a o je zZ gt 2 zZ gt oo Q E 4 Protein Bradford D e z lt r eppendorf BioPhotometer i m Ecg Standard 7 8 dsDNA Li ssDNA 4 i Protein 1 E Conversion E Appel de la m thode pour ADN double brin Touche du chiffre 7 Appel de la m thode pour ADN simple brin Touche du chiffre 8 Appel de la m thode pour ARN Touche du chiffre 9 Appel de la m thode pour Oligonucleotides Touche du chiffre 6 Appel de la m thode pour Prot ines m thode photom trique directe Touche du chiffre 4 Appel de la m thode Bradford et Bradford micro
28. eux lignes est suffisante A l aide de la valeur programm e et de la concentration le syst me d termine la concentration molaire Pour passer sur les fen tres de programmation non souhait es taper Dem 106 5 Mode d emploi Rappeler la m thode Protein Affichage apr s programmation de 140 ul d chantillon et 300 paires de bases dsDNA chant 001 70 0 ug mL 353 5 pmol mL 9 8 ug 49 5 pmol L unit de concentration molaire ici pmol mL est pr pro gramm e mais elle peut tre modifi e par la touche 5 3 D termination photom trique directe des prot ines PROTEIN absorbanche Exploitation En programmation d origine la m thode prot ines est en mode Absorbance c est dire que le syst me fournit les r sultats en absorbance pour acc der d autres m thodes de conversion passer par la touche et programmer d autres formules de calcul voir chapitre 6 Programmation facteur standard calibrage en point final formule de Warburg Le nombre de d cimales programm es avec le facteur ou la concentration de d part conditionne le nombre de d cimales du r sultat final Lors de la programmation du facteur il convient de l aligner sur l unit de concentration choisie 107 5 Mode d emploi D termination du blanc D termination de l chantillon D termination de l chantillon suivant Dilution de l chantill
29. hotom trique Bradford M thode de Bradford Bradford micro M thode de Bradford dans le domaine des faibles concentrations Lowry M thode de Lowry Lowry micro M thode de Lowry dans le domaine des faibles concentrations BCA M thode BCA BCA micro M thode BCA micro Densit des suspensions bact riennes OD 600 Mesure de la turbidit Chaque m thode comporte un programme install d origine en usine Ce programme inclut un ensemble de param tres tel que l expression des unit s de concentration ainsi que la m thode d exploitation des donn es de mesure Cependant les programmes peuvent tre modifi s II suffit de taper la touche pour acc der aux modifications Lors de la premi re utilisation d une m thode il convient de rappeler son programme pour examiner les param tres et le cas ch ant de les modifier pour les adapter aux applications propres Pour les m thodes comportant une s rie talon il conviendra d adapter la concentration des talons Pour effectuer une d termination il suffit de taper la touche correspondant la m thode envisag e Les m thodes Bradford Lowry et BCA comportent une particularit chacune de ces m thodes est programm e pour deux gammes de concentration et d exploitation Pour passer d une m thode l autre il suffit de solliciter alternativement la m me touche pour basculer de l une l autre BCA et BCA micro Pour d marrer la lecture appuyer sur l une des trois touches ovales se
30. ion Conversion dsDNA chant 001 70 0 ug mL 0 694 A230 1 408 A260 0 715 A280 0 002 A320 1 97 260 280 2 03 260 230 Affichage du r sultat L appareil affiche le r sultat exprim en concentration et en absorbance 260 nm pour les acides nucl iques De plus il donne des indications concernant la puret de l acide nucl ique en indiquant l absorbance trois longueurs d onde suppl mentaires 230 280 et 320 nm ainsi que les quotients A260 A280 und A260 A230 L absorbance 320nm des chantillons devrait tre proche de 0 pour des chantillons purs Pour passer la d termination de l chantillon suivant appuyer nouveau sur la touche La dilution de l chantillon dans la cuve optique peut tre saisie par la touche avant la lecture Le syst me en tient alors compte pour le calcul du r sultat voir chapitre d termination d chantillons dilu s Le dernier r sultat d termin en concentration peut tre exprim soit et ou quantit d acide nucl ique unit s de masse ou unit molaire quantit calcul chant total yuL molarit calcul e paires bases masse mol kDa Programmation chantillon total La valeur programm e sera calcul e par rapport la concen tration mesur e Le r sultat est alors exprim en quantit d acide nucl ique pr sent dans l chantillon Programmation paires de bases ou masse molaire Une seule saisie sur les d
31. is e cuve quartz ou UVette Eppen dorf pour les lectures sur acides nucl iques III R sultat calcul non repr sentable V rifier les param tres valeur trop lev e facteur trop lev la place d une valeur pour un ratio R p ter la lecture Le ratio n a pas pu tre d termin l une au besoin avec un chantillon dilu des valeurs du ratio ayant une valeur d absorbance A 0 ou A gt 3 0 123 8 Message d erreur rep rage des r sultats et textes auxiliaires Messages d erreur dans le d roulement de la lecture Message d erreur Observation cause Rem de lire d abord blanc La m thode s lectionn e ne comporte Effectuer un blanc pas encore de blanc lire d abord standard La m thode s lectionn e ne comporte Lire les standards ncore d libr valid pas the e calibrage va Programmer un autre mode de calcul facteur fixe ou absorbance en direct en dehors calibrage uniquement sur exploitation en R p ter la lecture le cas ch ant r gression non lin aire avec un chantillon dilu Le r sultat de l chantillon est situ en dehors du domaine calibr err module lecture 1 Diff rentes anomalies dans le module Faire appel au service apr s vente err module lecture 2 mesure err module lecture 3 Message d erreur dans le processus de calibrage Message d erreur Observation cause Rem de m thode std abse
32. k Sicherheits berpr fung IEC 1010 1 6 5 1 2 Bonding impedance Schutzleiterimpedanz 6 3 2 2 Leakage current Ableitstrom lt 0 0035 al ox D4 High voltage test Hochspannungstest 2 1350 V Instrument Ger te No tested by gepr ft durch 02139 6131 912 160 02
33. l de la concentration par calibrage un point Calcul de la concentration par la formule de Warburg Calcul de la concentration par un facteur Voir chapitre 12 1 longueur d onde de lecture 280 nm Lors de la programmation du facteur par la touche ru il convient de tenir compter de l unit de concentration Calcul de la concentration par un standard calibrage un point F C A F Facteur calcul C Concentration donn e du standard programmation au cas par cas par la touche selon la m thode As Absorbance lue pour la standard Si la lecture multiple du standard a t programm e 2x 3x le calcul du r sultat se fera partir des absorbances lues par r gression lin aire avec int gration de la valeur z ro Apr s calcul de la r gression un CV coefficient de variation en sera form pour valuer la dispersion des lectures Si le CV est sup rieur 10 il sera affich Dans ce cas le calibrage ne sera mis en m moire qu apr s validation voir chap 12 3 Le calcul de la concentration de l chantillon s effectuera l aide du facteur calcul C A280 x F Calcul de la concentration par la formule de Warburg C 1 55 x A280 0 76 x A260 pour l unit de concentration mg mL C 1 55 x A280 0 76 x A260 x 1000 pour l unit de concentration ug mL 133 12 Exploitation des r sultats et conversions Dilution de l chantillon parcours optique de la cuve et correction A
34. le poss de en m moire et l afficheur indique l heure et la date de la saisie en m moire Dans ce cas on peut effectuer la d termination du blanc et proc der au recalibrage ou passer directement la d termination de l chantillon en utilisant les donn es en m moire pour le calcul du r sultat M thodes micro Les m thodes Bradford Lowry et BCA comportent une particularit elles peuvent tre programm es en deux domaines de concentration diff rents Pour acc der l une ou l autre des deux m thodes il suffit de solliciter la m me touche successivement pour basculer de l une l autre Exploitation des donn es Les m thodes Bradford Lowry et BCA ainsi que les m thodes micro associ es sont programm es d origine sur un mode d exploitation des r sultats qui passe par une courbe de calibrage stock e par le biais d une r gression non lin aire La touche raramete permet cependant de programmer d autres m thodes d exploitation en variante voir chapitre 6 Programmation M thode par facteur calcul de la concentration par l interm diaire d un facteur Absorbance les r sultats sont fournis bruts sans transformation par un calcul La proc dure d exploitation pr programm e d origine par un standard accepte la modification des param tres suivants voir chapitre 6 Programmation Nombre de standards de 1 10 Nombre de lectures r p titives par standard 1 3
35. ll 96 2 Sp cifications techniques Photom tre Syst me optique Lampe source Diffraction spectrale Longueurs d ondes de lecture S lecteur de longueur d ondes Bande passante Justesse spectrale Gamme photom trique Justesse photom trique D faut de justesse photom trique Lumi re parasite M thode de lecture M thode de mesure Traitement des donn es en fonction de la m thode Capacit m moire M moire m thode M moire de calibrage M moire pour r sultats Photom tre d absorption monofaisceau avec faisceau de r f rence et longueurs d ondes fixes Lampe flash x non R seau holographique concave Xe 230 260 280 320 562 595 nm Fonction de la m thode pilot e par le programme 5 nm de 230 320 nm 7 nm de 562 595 nm 1 nm de 230 280 nm 2 nm de 320 595 nm Cuve quartz 0 000 3 000 A UVette Eppendorf 2 5 230 nm 2 6 A 260 nm 2 8 Aa 280 nm 2 9 A 320 nm lt 0 002 A OA lt 0 005 1 A 1 1A lt 0 05 Point final contre blanc Absorbance Concentration par facteur Concentration par la formule de Warburg Concentration par un calibrage utilisant entre 1 et 10 standards Calibrage un point un talon R gression lin aire de 2 10 standards R gression non lin aire polyn me du 3 degr 4 ou 5 10 standards voir chap 12 exploitation des donn es d termination 1x 2x 3x
36. lon le cas L appareil ne n cessite pas de pr chauffage il est pr t instantan ment Pour conna tre laquelle des trois touches de mesure est disponible se reporter la partie inf rieure du cadran afficheur voir descriptif de la proc dure de mesure chapitre 5 mode d emploi Pour que le r sultat soit automatique chaque m thode comporte dans sa programmation une proc dure d exploitation facteur calibrage formule de Warburg ou encore une sortie directe en absorbance L appareil fournit directement le r sultat mais affiche galement la valeur des absorbances et pour les acides nucl iques les rapports d absorbances usuelles Les dilutions des chantillons peuvent galement tre prises en consid ration touche En tapant la touche l appareil convertit les concentrations massiques en concentrations molaires Par a lleurs cette touche permet de calculer le rendement total dans le tube d chantillon Les r sultats peuvent tre lus sur le cadran afficheur ou peuvent tre imprim s sur une imprimante le cas ch ant Pour exploiter les valeurs des lectures avec les formules de calcul d un logiciel tableur install sur votre ordinateur PC utiliser le programme de transfert de donn es Eppendorf qui est disponible sur commande voir chapitre 11 Nomenclature Les chantillons et les r sultats des calibrages sont stock s en m moire les donn es en m moire peuvent tre consult es par sollicitation de la touche
37. matiquement r valu en interne FP F 1000 H Facteur interne converti est utilis pour le calcul de la concentration Dilution de l chantillon Cail corr C X Vp Vai Vp Ca corr R sultat calcul avec un facteur de dilution Vp Volume de l chantillon de la solution lue saisie par la touche Va Volume du diluant dans la solution de lecture saisie par la touche as Parcours optique de la cuve Application utilisation de cuves de p o 1 2 ou 5 mm Le parcours optique de la cuve est programm sp cifiquement chaque m thode par la touche re Acuve corr X 2 pour un p o de 5 mm Acuve corr X 5 pour un p o de 2 mm Acuve corr X 10 pour un p o de 1 mm Acuve corr Absorbance rapport e un parcours optique d une cuve de 10 mm Correction A320 Application correction partielle pour l interf rence de la turbidit d une solution lue sur une lecture La proc dure de conversion avec ou sans correction pour le trouble E320 est programm e sp cifiquement selon la m thode par la touche ra Ay corr Ax A320 Ay corr Absorbance corrig e math matiquement par les absorbances aux longueurs d onde 230 260 et 280 nm Ax Absorbance lue aux longueurs d onde 230 260 et 280 nm A320 Absorbance lue aux longueurs d onde 320 nm L absorbance corrig e est ensuite utilis e pour le calcul final du r sultat Touche Conversion calcul des concentrations massiques Applicati
38. mbH e Barkhausenweg 1 22339 Hamburg e Germany SA ce eg Le C C Ze get H e H C Das bezeichnete Ger t entspricht den einschl gigen grundlegenden Anforderungen der E ce c E t aufgef hrten EG Richtlinien und Normen Bei einer nicht mit uns abgestimmten nderung des A Ce e ce Ger tes verliert diese Erkl rung ihre G ltigkeit GL o C gd da ce The device named below fulfills the relevant fundamental requirements of E C ce e ce the EC directives and standards listed In the case of unauthorized modifications to the device A C a E da LC this declaration becomes invalid L ce D d E d n C 6 o de Ger tebezeichnung Device name Se CS SS L ke C I g K Ge ce BioPhotometer 6131 E ce P ce e ce c es G dat ere er 3 ee E N ce e GE C Ger tetyp Device type lt ce ce KS Sg cE ce ce ce A e ie Photometer LE qet 3 d p ce SE c E 5 E ae ce z Kik A TE a Einschl gige EG Richtlinien Normen Relevant EC directives standards ee tE Q _89 336 EWG EN 50082 1 EN 55011 EN 61000 3 2 EN 61000 3 3 ee ys e a S CISPR 11 1EC 1000 4 2 3 4 IEC 1000 3 2 IEC 1000 3 3 ce va S Lo 78 23IEWG EN 61010 1 u le et A ce 5 S gt Se ce C ee 7 amp IEC 1040 1 DOTE enge ce c c el Ka I S ce Ee et et re eu 29 09 1998 d Si ce S ce Gi SC ce Sp e g A ce Gesch ftsf hrung Managing Director Ce ce ce eC E SC e
39. mol mL pmol mL pmol uL Standard rr op 1 00 100 1 00 25 0 50 Standard 2 250 2 5 250 2 5 125 2 Standard 3 500 5 500 5 250 5 Standard 4 E 750 10 750 10 500 10 Standard 5 1000 15 1000 15 750 20 Standard 6 1500 25 1500 25 1000 Ki Standard 7 1500 i Standard 8 E 2000 Cuve 10 mm 10 mm 10mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10 mm 10mm 10mm Observations 1 Calcul par facteur n cessite une programmation de la valeur par l utilisateur 2 Avec calcul standard 3 Avec calcul standard ou facteur 4 Calcul par standard n cessite une programmation de la valeur par l utilisateur L 7 Fonctions Liste des fonctions Fonction Saisie Observations Affichage des r sultats Rapport de calibrage Date Heure Absorbance en m moire Lecture de r p tabilit Test photom trique Sprache Deutsch Language English Language U S English langue fran aise Imprimante DPU 414 Imprimante s rie Service Rappel par Rappel par Saisie de chiffres Saisie de chiffres S lection par S lection par S lection par S lection S lection Permet de visualiser les 100 derniers r sultats le dernier r sultat d termin est affich en premier E S lection des r sultats Impression des r sultats affich s Retour la liste des fonctions QE Impression du rapport de calibrage S lection de la m thode Impression du rapport de calibrage Retou
40. necteur pour imprimante sont situ s l arri re de l appareil voir chapitre 4 Installation Le BioPhotometer Eppendorf est destin la d termination rapide simple et confortable des principales m thodes pratiqu es en laboratoire de biochimie mol culaire et de recherche Le puits porte cuve est compatible avec les cuves rectangulaires en verre ou en mati re de synth se selon leur transparence optique aux diff rentes longueurs d ondes La cuve UVette Eppendorf est la premi re cuve en mati re de synth se qui permet la d termination des acides nucl iques Il convient de tenir compte de la hauteur de la fen tre du faisceau optique qui est de 8 5 mm Pour obtenir des r sultats justes et reproductibles les faces optiques des cuves doivent toujours tre tr s propres et la solution soumise mesure exempte de particules en suspension L appareil est livr avec un capuchon de protection pour le porte cuve pour viter les d p ts de poussi re en p riode d immobilisation 95 1 Pr sentation de l appareil M thodes Programme des m thodes D termination Exploitation des donn es Sortie de r sultats L appareil est livr d origine avec 12 m thodes pr programm es qu il suffit d appeler par simple sollicitation d une touche sp cifique Acides nucl iques dsDNA ADN double brin SsDNA ADN simple brin RNA ARN Oligo Oligonucl otides Prot ines Prot ines par d termination p
41. nte La touche a t sollicit e mais la Effectuer une nouvelle lecture m thode appel e est programm e sans sans passer par standard standard dans son mode d exploitation Programmer un mode d exploitation standard valeurs lues non plausibles en calibrage en point final Refaire une lecture du standard L absorbance lue est de 0 A le cas ch ant pr parer un nouveau standard valeurs lues non monotones en calibrage multipoints V rifier la s rie de standards et La s rie lue n est pas r guli re ni en repr senter les valeurs dans l ordre croissance ni en d croissance correct de concentration croissante courbe calibrage non en r gression non lin aire V rifier les standards et les monotone La courbe calcul e n est pas r guli re repr senter dans un ordre de concentration croissante 124 8 Message d erreur rep rage des r sultats et textes auxiliaires Message d erreur Observation cause Rem de CV sup rieur 10 en fin de la s rie standard V rifier les r sultats du calibrage La dispersion autour de la droite de Ee REI q calibrage ou de la courbe est trop Memorisation du calibrage e Fe Annuler le calibrage refaire un nouveau calibrage ou rappeler un calibrage en m moire importante voir chapitre 12 Exploitation Messages d erreur dans le d roulement de la programmation Message d erreur Observation cause
42. oc der la d termination Le syst me int grera cette donn e pour le calcul de son r sultat voir chapitre d termination d chantillons dilu s 111 5 Mode d emploi 5 5 D termination des OD 600 Rappeler la m thode OD 600 D termination du blanc D termination de l chantillon D termination de l chantillon suivant Dilution de l chantillon D roulement de la lecture Les valeurs des blancs restent conserv es en m moire jusqu au changement de date voir chapitre d termination des acides nucleiques E sample OD600 chant 001 0 430 a Pour passer la d termination de l chantillon suivant taper nouveau la touche La dilution de l chantillon dans la cuve optique peut tre programm e par l interm diaire de la touche es avant de proc der la d termination Le syst me int grera cette donn e pour le calcul de son r sultat voir chapitre d termination d chantillons dilu s La d termination de l OD 600 est une mesure de dispersion de lumi re le r sultat d une telle lecture d pend fortement de la g om trie du faisceau optique Or celle ci d pend directement du photom tre utilis 112 5 Mode d emploi 5 6 D termination d chantillons dilu s Les dilutions d chantillons sont programm es par la touche avant la lecture Le syst me int gre cette donn e pour le calcul et la communication du r s
43. on D roulement de la lecture L exemple ci apr s illustre le d roulement d une lecture en mode d exploitation Absorbance Pour un d roulement d une lecture avec exploitation par un standard voir le chapitre d termination de prot ines apr s ajout de r actif La valeur des blancs reste conserv e en m moire jusqu au changement de date voir chapitre d termination des acides nucl iques PROTEIN 0 000 PROTEIN echant 001 0 430 a 0 245 A260 0 430 A280 0 002 A320 Affichage du r sultat En plus du r sultat exprim en concentration et en absor bance 280 nm le syst me indique l absorbance A260 et A320 comme point de rep re pour la puret de l chantillon mesur L absorbance d chantillons purs devrait tre proche de 0 320 nm Pour passer la d termination de l chantillon suivant taper nouveau la touche t programm e par l interm diaire de la touche avant de proc der la d termination Le syst me int grera cette donn e pour le calcul de son r sultat voir chapitre d termination d chantillons dilu s La dilution de l chantillon dans la cuve optique S tre 108 5 Mode d emploi 5 4 D termination de prot ines apr s ajout de r actif Bradford BCA Lowry Rappeler BRADFORD la m thode Bradford domaine calibrase XXX XXX ug mL ou Ca Si le syst me a d j effectu pr c demment un calibrage valid il
44. on d termination de la quantit totale d acide nucl ique dans le volume total d chantillon M C X Vp tot M Masse totale d acide nucl ique dans le tube d chantillon C Concentration calcul e Vp tot Volume de l chantillon dans le tube saisie par la touche 132 12 Exploitation des r sultats et conversions Touche Conversion calcul de la concentration molaire Application calcul des concentrations molaires partir des concentrations massiques et de la masse molaire relative La masse molaire relative sera saisie directement ou sera calcul e par le syst me partir du nombre de bases ou paires de bases par mol cule Cmo C N Cmo Concentration molaire calcul e N masse molaire relative en kDa saisie par la touche Si le nombre de base ou de paires de base est programme la place de la masse molaire relative N sera calcul partir du nombre de bases paires ADNds N bp x 2 x 330 x 10 ADNss ARN Oligo N bx 330 x 10 N Masse molaire relative calcul e exprim e en kDa bp Nombre de paires de bases programm es par mol cule ADNds b Nombre de bases programm es par mol cule ADNss ARN Oligo L unit de concentration molaire est programm e au cas par cas pour chaque m thode par la touche punon 12 2 Prot ines directes par photom trie S lection de l expression des r sultats Absorbance Calcul de la concentration par un facteur Calcu
45. r la liste de fonctions Mise en m moire Mise en m moire SE RES Impression des derni res absorbances mesur es 100 lectures max Pour les valeurs de la m thode mesur e en dernier calcul et impression de la valeur moyenne de l cart standard et du cv Lecture et calcul de r p tabilit sur une s rie de 10 lectures successives sur un chantillon Pour l exploitation des donn es la machine utilisera les programmes de la derni re m thode appel e Contr le de la justesse photom trique ainsi que de la justesse de la longueur d onde voir chapitre13 Contr le du photom tre Permet la s lection de la langue de son choix english et U S english ne se distinguent que par le format de la date DPU 414 connexion de la thermoimprimante Eppendort DPU 414 voir chapitre 4 2 Imprimante S rielle Connexion d une imprimante autre voir chapitre 4 2 Imprimante Fonction uniquement accessible pour le technicien de service apr s vente 121 7 Fonctions Rappel de la liste des fonctions S lectionner la fonction souhait e Entrer la fonction en m moire Quitter le fichier des fonctions Exemple modifier la version linguistique FUNKTION SEITE 1 4 PERGEBNISSE ANZEIGEN KALIBRATIONS REPORT DATUM 27 06 1998 UHRZEIT 20 44 FUNKTION SEITE 3 4 SPRACHE DEUTSCH LANGUAGE ENGLISH LANGUAGE U S ENGL plangue fran aise fonction page 4 4 bimprimante
46. r ler la justesse photom trique et celle des longueurs d onde Cet ensemble de filtres est compos de trois filtres de contr le de la justesse photom trique Sample A1 Sample A2 Sample A3 et de deux filtres pour le contr le de la justesse spectrale des longueurs d onde Sample 260 nm Sample 280 nm L absorbance de ces filtres est lue contre un filtre de blanc Blank A0 Pour le contr le les filtres repr sentant le blanc et l chantillon de contr le sont introduits dans le porte cuve comme s il s agissait de cuves Pour l orientation le filtre sera tourn de telle sorte que l autocollant d identification soit positionn vers l avant c t utilisateur Les absorbances lues pour le filtre repr sentant l chantillon de contr le sont ensuite compar es avec la fourchette des valeurs de tol rance Les tol rances pour chaque filtre sont donn es dans un tableau de valeurs livr avec chaque filtre et coll l int rieur du couvercle du coffret des filtres voir tableau X XXX X XXX A eppendorf BioPhotometer Secondary UV VIS Filter Order No Best Nr 6131 928 007 Limits measured against Blank Ao at approx 20 C Grenzwerte gemessen gegen Blank Ao bei ca 20 C Photometric accuracy Wavelength accuracy Photometrische Richtigkeit Wellenl ngenrichtigkeit Fiter Blank Sample Sample Sample Sample Sample Type An Ai A2 A3 260 nm 280 nm 0 000 A X XXX X XXX A X XXX X XXX A X XXX X XXX A Eu 260nm 0
47. rni res lignes on lit les valeurs du standard suivant avec la valeur de sa concentration BRADFORD std 1 2 re XXXX pg mL Standard 1125 lecture X XXX a suivant std 2 1 XXXX ug mL 110 5 Mode d emploi D termination de l chantillon D termination de l chantillon suivant Dilution de l chantillon Affichage du syst me apr s passage de la s rie de standards BRADFORD std 5 2 XXXX pg mL X XXX a cv 2 8 calibrase m moris Le cv coefficient de variation donne une indication de la dispersion des valeurs de standards autour de la courbe de r gression Si le cv est inf rieur 10 la courbe est m moris e automatiquement Si le cv est sup rieur 10 le syst me demande sa validation par la question m moriser ENT CLR Cette proc dure permet d accepter le calibrage ou de le refuser auquel cas il est effac Les s ries de d termination des chantillons sont toujours exploit es sur la base des calibrages valid s les plus r cents BRADFORD chant 001 X X XX ugmL X XXX A595 Affichage du r sultat En plus du r sultat exprim en concentration le syst me indique l absorbance la longueur d onde de lecture 595 nm en m thode Bradford Pour passer la d termination de l chantillon suivant taper nouveau la touche La dilution de l chantillon dans la cuve optique peut tre program m e par l interm diaire de la touche avant de pr
48. s 118 6 4 Tableau des valeurs programm es d origine 120 7 FONCIONS eisie ger danser are re prete ne rame lee 121 8 Messages d erreur rep rage des r sultats et textes auxiliaires 123 9 Nettoyage et maintenance 126 10 Mode d emploi succinct 127 11 Nomenclature qs sr enis EE de uns Det ae ae Ela ve 131 12 Exploitation des r sultats et conversions nn 132 12 1 Acides nucl iques ADNds ADNss ARN Oligo 132 12 2 Prot ines directes par photom trie 133 12 3 Prot ines par ajout de r actif 134 12 4 OD GOO eee e Ni dh ae RME A A Ae He ne Ho it EN M E NE 135 13 Contr le du photom tre 136 Certificat de conformit du BioPhotometer 6131 138 93 94 1 Pr sentation de l appareil Cuves 3 4 5 1 Cadran afficheur 5 Touche dilution 2 9 touches de m thodologie 6 Touche conversion 3 Touche fonction param tres du syst me 7 Touches de lecture 4 Touches param tres touches de programmation 8 Puits porte cuve Le commutateur secteur la prise d alimentation et le con
49. sibilit de s lectionner entre Corr par A320 inactif et Corr par A320 actif Corr par A320 actif signifie que pour des absorbances mesur es 260 280 et 230 nm celle mesur e 320 nm sera d duite Cette proc dure peut s utiliser pour des corrections de turbidit Une correction active pour A320 sera signal e l aide du signe 4 face aux r sultats de l afficheur et du protocole d imprimante Unit s S lection S lection des unit s de concentrations en fonction des m thodes Unit molaire S lection S lection des unit s selon la m thode uniquement pour les m thodes des acides nucleiques Cette fonction est n cessaire pour convertir les concentrations pond rales en concentrations molaires touche Cuve optique Selection Selection du parcours optique des cuves 10 5 2 et 1 mm Le r sultat est toujours rapport un po 10 mm voir chapitre 12 Exploitation des r sultats et conversions 118 6 Programmation Les param tres suivants ne sont propos s que dans le cadre de la programmation du mode de calcul standard Param tre Saisie Observations Nombre Chiffres Nombres de standards de concentration diff rente de standards 1 10 D termination S lection S lection parmi 1x 2x 3x repr sentant le nombre de fois que du standard la lecture du standard est r p t e La valeur moyenne de l ensemble des d terminations des standards est utilis
50. ultat Les valeurs de blanc ont d j t lues dans l exemple suivant Programmer la dilution D termination de l chantillon dilu Effacer la donn e relative la dilution dsDNA chant 001 chant diluant t u chant 001 20 180uL dsDNA chant 001 700 0 ug mL 204 180HL 0 694 A230 1 408 A260 1 97 2601280 0 715 A280 2 03 2601230 0 002 A320 Le syst me a int gr la dilution pour l laboration de son r sultat Le facteur de dilution reste en machine et il est utilis pour le calcul du r sultat d autres chantillons jusqu ce qu il soit cras par une nouvelle valeur Pour effacer le facteur de dilution solliciter la touche puis effacer les valeurs figurant sous Sample et Diluent avec la touche ow ou craser les valeurs en tapant z ro 113 5 Mode d emploi 5 7 Modification du num ro d chantillon Le num ro courant d chantillon est indiqu sur le cadran afficheur en haut droite Ce num ro courant est incr ment s par ment pour chaque m thode et se remet sur 1 au changement de date Il est possible d intervenir sur ce num ro courant et de le modifier pour repasser le m me chantillon par exemple dsDNA chant 005 70 0 pg mL 2 180pL 0 694 A230 1 408 A260 1 97 260 280 0 715 A280 2 03 260 230 0 002 A320 ek chant 005 u numero d chantillon Sample No 3 chant 003 Enter Pour la d termination du num
51. vec le BioPhotometer conform ment aux instructions de la fiche de l imprimante Instructions de param trage de l imprimante pour la connexion avec le BioPhoto meter Dip SW 1 1 OFF Input Serial 2 ON Printing Speed High 3 ON Auto Loading ON 4 ON Auto LF ON 5 ON Setting Command Enable 6 OFF Printing 7 ON Density 8 ON 100 Dip SW 2 Les param trages du groupe Dip SW 2 ne sont pas importants pour l utilisateur car le BioPhotometer les modifie automatiquement en fonction de la langue choisie par l utilisateur Dip SW 3 1 ON Data Length 8 bits 2 ON Parity Settings No 3 ON Parity Conditions Odd 4 OFF Busy Control XON XOFF 5 OFF Baud 6 ON Rate 7 ON Select 8 ON 9600 bps 101 4 Installation Autres imprimantes La connexion s rie du BioPhotometer admet d autres imprimantes s rielles en dehors du mod le DPU 414 La connexion d imprimantes parall les n cessite un c ble d adaptation BioPhotometer S lectionner la fonction imprimante serielle dans la liste des fonctions et valider Imprimante Conditions n cessaires pour l imprimante serielle Busy Control XON XOFF Baud Rate ON 9600 bps Data Bit Length 8 bits Parity Permission Without Parity Conditions Odd Les imprimantes parall les peuvent tre connect es avec un c ble adaptateur r pondant aux conditions ci dessus 4 3 Cuves optiqu

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