JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 43 9
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1. Briser les coquilles aseptiquement et s parer les jaunes des blancs M langer les jaunes avec une solution saline physiologique 3 7 v v pendant 5 secondes environ dans un m langeur grande vitesse 3 3 5 Mode d emploi A 90 ml de milieu de base pr alablement fondu et maintenu 45 C 1 C ajouter aseptiquement les solutions suivantes amen es 45 C 16 Joumada El Oula 1425 4 juillet 2004 a 6 3 ml de la solution de glycine 3 3 2 b 1 ml de la solution de tellurite de potassium 3 3 3 c 5 ml d mulsion de jaune d uf 3 3 4 Bien m langer les pr parations a b et c dans le milieu fondu et r partir imm diatement en bo tes de P tri raison de 15 ml par bo te Ces bo tes coul es peuvent tre conserv es 48 heures 4 C Imm diatement avant l utilisation tendre sur la surface des bo tes 0 5 ml d une solution 20 p v de pyruvate de potassium st rilis e par filtration s cher les bo tes 50 C en position horizontale la surface de la g lose en dessus Inoculer les bo tes d s qu elles sont s ches Conserver la solution de pyruvate 3 5 C et la remplacer chaque mois 4 Mode op ratoire 4 1 Si la fabrication de la poudre de lait a t faite plus de 15 jours avant l analyse ou si elle est de date inconnue ajouter 1ml de lait reconstitu correspondant 0 1 g de poudre de lait dans un tube de bouillon d enrichissement de Giolitti et Canto2. d E DT A 4 12 3 Incuber 37 C 1 C et examiner les tubes en vue de la formation d un coagulum chaque heure pendant 4 h puis apr s 24 h 5 Conclure la pr sence de staphylocoques coagulase positive dans l chantillon de poudre de lait si trois colonies au moins obtenues selon 4 9 ou 4 11 coagulent le plasma de lapin k Arr t du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24mai 2004 rendant obligatoire une m thode de d nombrement des micro organismes caract ristiques par une technique de comptage des colonies 37 C dans le yaourt Le ministre du commerce Vu le d cret ex cutif n 90 39 du 30 janvier 1990 modifi et compl t relatif au contr le de la qualit et la r pression des fraudes Vu le d cret ex cutif n 02 453 du 17 Chaoual 1423 correspondant au 21 d cembre 2002 fixant les attributions du ministre du commerce Vu l arr t interminist riel du 16 Joumada Ethania 1419 correspondant au 7 octobre 1998 relatif aux sp cifications techniques des yaourts et aux modalit s de leur mise la consommation Vu l arr t du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet 1994 modifi et compl t relatif aux sp cifications microbiologiques de certaines denr es alimentaires JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 Arr te Article ler En application des dispositions de l article 19 du d cret ex cutif n 90 39 du 30 janvier 1990 modifi et comp
3. dans l eau en chauffant et en agitant pour obtenir une dissolution compl te Refroidir temp rature ambiante et ajuster le pH 7 4 0 1 R partir raison de 9 ml dans des tubes de 18 x 180 Autoclaver 20 mn 120 C 3 3 Milieu E T G P A de Baird Parker 3 3 1 Milieu de base Tryptone Extrait de b uf Extrait de levure Chlorure de lithium G lose selon le pouvoir g lifiant de la g lose utilis e Eau distill e 1000 ml Faire dissoudre les produits dans l eau en chauffant et en agitant pour obtenir une dissolution compl te Refroidir 50 60 C et ajuster le pH 6 8 0 1 R partir raison de 90 ml dans des flacons col vis bouch s bak lite Autoclaver 15 mn 120 C 3 3 2 Solution de glycine Glycine Eau distill e Apr s compl te dissolution autoclaver 15 mn 120 C 3 3 3 Solution de tellurite de potassium Tellurite de potassium Eau distill e Apr s compl te dissolution st riliser par filtration On devra s assurer au pr alable par des essais bact riologiques que le tellurite de potassium dont on dispose convient pour cet usage Il est recommand en toute circonstance de porter grande attention et il faut souligner l importance d un choix judicieux de ce produit en ce qui concerne son origine et les garanties qu il offre 3 3 4 Emulsion de jaune d uf Tremper des ufs frais une minute environ dans une dilution 1 1000 d une solution satur e de HgCT
4. 16 Joumada El Oula 1425 4 juillet 2004 Arr t du 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24 mai 2004 rendant obligatoire une m thode de recherche des staphylocoques coagulase positive pour le lait en poudre Le ministre du commerce Vu le d cret ex cutif n 90 39 du 30 janvier 1990 modifi et compl t relatif au contr le de la qualit et la r pression des fraudes Vu le d cret ex cutif n 02 453 du 17 Chaoual 1423 correspondant au 21 d cembre 2002 fixant les attributions du ministre du commerce Vu l arr t interminist riel du 18 ao t 1993 relatif aux sp cifications et la pr sentation de certains laits de consommation Vu l arr t du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet 1994 modifi et compl t relatif aux sp cifications microbiologiques de certaines denr es alimentaires Arr te Article ler En application des dispositions de l article 19 du d cret ex cutif n 90 39 du 30 janvier 1990 modifi et compl t susvis le pr sent arr t a pour objet de rendre obligatoire une m thode de recherche des staphylocoques coagulase positive pour le lait en poudre Art 2 Pour la recherche des staphylocoques coagulase positive pour le lait en poudre les laboratoires du contr le de la qualit et de la r pression des fraudes et les laboratoires agr s cet effet doivent employer la m thode d analyse microbiologique d crite en annexe Cette m thode
5. doit tre galement utilis e par le laboratoire lorsqu une expertise est ordonn e Art 3 Le pr sent arr t sera publi au Journal officiel de la R publique alg rienne d mocratique et populaire Fait Alger le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24 mai 2004 Noureddine BOUKROUH ANNEXE RECHERCHE DES STAPHY LOCOQUES A COAGULASE POSITIVE DANS LE LAIT EN POUDRE 1 Principe On inocule le lait reconstitu correspondant 0 1g de poudre dans des bouillons d enrichissement dans celui de Giolitti et Cantoni ou s il s agit de poudres fabriqu es depuis moins de 15 jours dans le bouillon sal lactos au rouge de ph nol Apr s incubation on repique les tubes sur milieu E T G P A de Baird Parker 3 3 Les colonies de staphylocoques qui se d veloppent sur le milieu de Baird Parker sont soumises l preuve de la coagulase JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 2 Reconstitution du lait en poudre et pr paration des dilutions La reconstitution du lait en poudre et la pr paration des dilutions se font selon les conditions appropri es 3 Formules des milieux et directives pour leur pr paration 3 1 Milieu de Giolitti et Cantoni 3 1 1 Milieu de base Tryptone Extrait de viande Extrait de levure Chlorure de lithium Mannitol Chlorure de sodium Glycine Pyruvate de sodium Eau distill e Faire dissoudre les produits dans l eau en chauffant et en agitant p
6. l t susvis le pr sent arr t a pour objet de rendre obligatoire une m thode de d nombrement des micro organismes caract ristiques par la technique de comptage des colonies 37 C dans le yaourt Art 2 Pour le d nombrement des micro organismes caract ristiques par la technique de comptage des colonies 37 C dans le yaourt les laboratoires du contr le de la qualit et de la r pression des fraudes et les laboratoires agr s cet effet doivent employer la m thode d analyse microbiologique d crite en annexe Cette m thode doit tre galement utilis e par le laboratoire lorsqu une expertise est ordonn e Art 3 Le pr sent arr t sera publi au Journal officiel de la R publique alg rienne d mocratique et populaire Fait Alger le 4 Rabie Ethani 1425 correspondant au 24 mai 2004 Noureddine BOUKROUH ANNEXE M thode de d nombrement des micro organismes caract ristiques par une technique de comptage des colonies 37 C dans le yaourt Objet et domaine d application La m thode est applicable aux yaourts dans lesquels deux micro organismes caract ristiques sont pr sents et vivants 1 D finition 1 1 Lactobacillus bulgaricus micro organisme thermophile formant des colonies lenticulaires souvent en forme d toile de 1 3 mm de diam tre sur milieu MRS acidifi selon DeMan Rogosa et Sharpe Aspect microscopique b tonnets g n ralement courts mai
7. ni 3 1 4 Bien m langer l inoculum avec le milieu en vitant toute introduction d air On coule ensuite au dessus du milieu un bouchon de g lose 2 3 1 3 fondue et on laisse solidifier 4 2 S il s agit de poudres fabriqu es depuis moins de 15 jours ajouter 1 ml de lait reconstitu dans un tube de bouillon sal lactose au rouge de ph nol on peut utiliser galement le milieu de Giolitti et Cantoni comme en 4 1 4 3 Incuber pendant 24 h 37 C l un et ou l autre des milieux d enrichissement ensemenc s c est dire 4 1 et ou 4 2 4 3 1 Repiquer selon 4 6 et 4 7 les tubes de bouillon d enrichissement de Giolitti et Cantoni pr sentant un noircissement ou un pr cipit noir tre 4 3 2 Repiquer selon 4 7 les tubes de bouillon sal lactos au rouge de ph nol ayant vir au jaune 4 4 Incuber les autres tubes 24 h suppl mentaires et les repiquer selon 4 6 et 4 7 4 5 Le proc d pour repiquer les tubes de bouillon d enrichissement apr s leur incubation est donn en 4 6 et 4 1 4 6 Dans le cas du milieu de Giolitti et Cantoni enl vement du bouchon de g lose selon la technique suivante Avec une spatule d couper le bouchon de g lose selon deux diam tres perpendiculaires et si n cessaire passer ensuite la spatule autour du bouchon Placer le tube sur l agitateur de fa on faire tomber les morceaux de bouchon au fond du tube et en m me temps mettre les bact ries en sus
8. our obtenir une dissolution compl te Refroidir 50 60 C et ajuster le pH 6 9 0 1 R partir raison de 19 ml dans des tubes de 20 x 200 Autoclaver 20 mn 115 C Avant utilisation chasser l air par chauffage 100 C pendant 20 mn Refroidir 3 1 2 Solution de tellurite de potassium Tellurite de potassium Eau distill e Dissoudre le tellurite de potassium dans l eau St riliser par filtration On devra s assurer au pr alable par des essais bact riologiques que le tellurite de potassium dont on dispose convient pour cet usage Il est recommand en toute circonstance de porter grande attention et il faut souligner l importance d un choix judicieux de ce produit en ce qui concerne son origine et les garanties qu il offre 3 1 3 On pr pare en outre une g lose 2 dans l eau distill e que l on st rilise l aucolave 20 mn 120 C et qui sert former un bouchon ana robie au dessus du milieu liquide voir 4 1 3 1 4 Mode d emploi Juste avant l utilisation chauffer les tubes de milieu de base 3 1 1 pendant 20 mn 100 C pour chasser l air Refroidir 45 C et ajouter 0 1 ml de la solution de tellurite de potassium 3 1 2 3 2 Bouillon sal lactos au rouge de ph nol Extrait de viande de b uf Prot ose peptone Chlorure de sodium JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N 43 Lactose Rouge de ph nol Eau distill e Faire dissoudre les produits
9. pension 4 7 Avec une anse de platine pr lever environ 0 001 ml de culture d velopp e dans le bouillon d enrichissement taler la surface d une bo te renfermant le milieu E T G P A de fa on obtenir des colonies s par es 16 Joumada El Oula 1425 4 juillet 2004 4 8 Incuber les bo tes retourn es 24 h 37 C 1 C 4 9 Soumettre au moins 3 colonies typiques l preuve de la coagulase 4 12 Les colonies typiques de staphylococcus aureus sont noires brillantes avec une mince bordure blanche et entour es d une zone claire s tendant dans le milieu opaque 4 10 Si au bout de 24 h aucun d veloppement ne s est produit ou si l on observe seulement des colonies atypiques incuber 24 h suppl mentaires 37 C 1 C 4 11 Si des colonies se sont d velopp es d apr s 4 10 en soumettre trois au moins l preuve de la catalase Pour cela prendre avec un fil de platine une partie de chacune de ces colonies et la m langer sur une lame une goutte d eau oxyg n e 3 0 10 volumes Si l on observe une production de gaz soumettre la colonie correspondante l preuve de la coagulase selon 4 12 4 12 Epreuve de la coagulase 4 12 1 Inoculer chaque colonie dans un petit tube contenant 0 3 ml de bouillon c ur cervelle st rille Incuber 20 24 h 37 C 1 C 4 12 2 Ajouter dans un petit tube 0 1 ml de cette culture 0 3 ml de plasma de lapin additionn de 0 1
10. s quelquefois de forme allong e Ils sont non sporul s grampositifs non mobiles catalase n gative 1 2 Streptococcus thermophilus micro organisme thermophile formant des colonies lenticulaires de 1 2 mm de diam tre sur M 17 Aspect microscopique cellule sph rique ou ovo de Cocci 0 7 0 9um de diam tre par paire ou en cha nes longues Elles sont gram positives catalase n gatives 2 Principe 2 1 Ensemencement des dilutions d cimales de P chantillon dans milieu MRS acidifi suivi d une incubation en ana robiose pendant 72 h 37 C pour le d nombrement de L bulgaricus
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