Home

Clostridium difficile Toxin A/B

1. Resultados ECT Overall A Resultados 132 25 Xpect i 21 637 TOTAL 153 662 Sensibilidad 86 3 IC 95 79 8 91 3 Especificidad 96 2 IC 95 94 5 97 5 Valor predictivo positivo 84 1 IC 95 77 4 89 4 Valor predictivo negativo 96 8 IC 95 95 2 98 0 correlaci n 94 4 95 IC 92 5 95 8 Nota IC intervalo de confianza Las discrepancias en los resultados se analizaron mediante cultivo toxig nico y enzimoinmunoensayo en micropocillo que detecta la toxina A y B Cuatro de las 25 muestras que eran citotoxina negativas y Xpect Clostridium difficile Toxin A B positivas en el ensayo inicial dieron positivas en el cultivo toxig nico y enzimoinmunoensayo Diez de las 21 47 6 muestras que fueron ECT positivas y Xpect Clostridium difficile Toxin A B negativas en el ensayo inicial fueron negativas en el cultivo toxigenico y enzimoinmunoensayo en micropocillo Comparaci n del comportamiento con dispositivos disponibles comercialmente El ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B tambi n se compar con dos productos disponibles comercialmente Cada uno de los cuatro centros de ensayo clinico evalu un ensayo en membrana cromatogr fica que detecta nicamente la toxina A Dispositivo de Referencia el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B y el ensayo de citotoxina ECT con cada muestra Asimismo un centro de ensayo clinico evalu un enzimoinmunoensayo en micropoc
2. 40 tests kit L GENDE DES SYMBOLES REF Num ro de r f rence IVD Dispositif m dical de diagnostic in vitro LAB Pour usage de laboratoire 3 Lire les instructions avant utilisation IFU mode d emploi Be Limites de temp rature stockage LOT Code de lot num ro utiliser avant le date de p remption EC REP Repr sentant autoris pour l UE CE Xpect est une marque commerciale de Remel Inc Pepto Bismol Imodium Kaopectate et Castoria sont des marques d pos es de Procter amp Gamble McNeil Consumer amp Specialty Pharmaceuticals Pharmacia amp Upjohn Company et The Mentholatum Company Inc respectivement ProClin est une marque d pos e de Rohm and Haas Company IFU 24650 r vis le 2007 08 27 Imprin aux tats Unis 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 tats Unis Renseignements 800 255 6730 Service technique 800 447 3641 Service commercial 800 447 3635 tats Unis T l phone international 1 913 888 0939 T l copie international 1 913 895 4128 Site Web www remel com E mail remel remel com ITALIAN dD remel Clostridium difficile x pect Toxin AB USO PREVISTO Il kit di test Xpect Clostridium difficile Toxin A B Remel un test rapido immunocromatografico in vitro per il rilevamento diretto qualitativo della tossina A e o B del Clostridium difficile in campioni fecali umani di pazienti in cui
3. Microbiol 38 1696 1697 3 Alfa M J A Kabani D Lyerly S Moncrief L M Neville A Al Barrak G K H Harding B Dyck K Olekson and J M Embil 2000 J Clin Microbiol 38 2706 2714 Barbut F V Lalande B Burghoffer H V Thien E Grimprel and J Petit 2002 J Clin Microbiol 40 2079 2083 5 Johnson S S P Sambol J S Brazier M Delm e V Avesani M M Merrigan and D N Gerding 2003 J Clin Microbiol 41 1543 1547 6 Kato H N Kato K Watanabe N Iwai H Nakamura T Yamamoto K Suzuki S Kim Y Chong and E B Wasito 1998 J Clin Microbiol 36 2178 2182 7 Johnson S S A Kent K J O Leary M M Merrigan S P Sambol L R Peterson and D N Gerding 2001 Ann Intern Med 135 434 438 Wilkins T D and D M Lyerly 2003 J Clin Microbiol 41 531 534 Fedorka D P 2002 Clin Microbiol Newsletter 24 76 79 0 Richmond J Y and R W McKinney 1999 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed U S Government Printing Office Washington D C 11 Lyerly D M H C Krivan and T D Wilkins Microbiol Rev 1 1 18 12 Mandell G L J E Bennett and R Dolin 2000 Mandell Douglas and Bennett s Principles and Practice of Infectious Diseases 5 ed Churchill Livingstone New York NY 209 1988 Clin CONDITIONNEMENT REF R24650 Xpect Toxine A B de Clostridium difficile 20 tests kit REF R24640 Xpect Toxine A B de Clostridium difficile
4. n de cerebro y coraz n Clostridium difficile Toxin A B RESUMEN Y EXPLICACI N La especie C difficile se describi por primera vez en 1935 pero reci n en 1977 se establecieron v nculos entre el microorganismo y la enfermedad C difficile es un bacilo grampositivo anaer bico productor de toxinas y formador de esporas La presentaci n cl nica de la infecci n por C difficile incluye de menor a mayor gravedad portadores asintom ticos colitis asociada a antibi ticos colitis pseudomembranosa y colitis fulminante La reducci n en la flora microbiana normal del colon normalmente causada por una terapia antibi tica permite la proliferaci n de C difficile Por lo general los s ntomas de la colitis asociada con antibi ticos comienzan de cuatro a diez d as despu s de iniciado el tratamiento antibi tico La mayor a de las cepas patog nicas de C difficile producen dos toxinas toxina A enterotoxina y toxina B citotoxina que son los principales factores de virulencia del microorganismo Aparentemente la actividad de estas toxinas es desencadenada por una sucesi n r pida de episodios La toxina A es levemente citop tica pero induce grandes cambios de l quidos e inflamaci n de las mucosas La toxina B es intensamente citop tica pero a n no se conoce bien su funci n en el proceso de la enfermedad Se sabe que existen otras variantes de cepas toxina A negativas y toxina B positivas totalmente patog nicas y capaces
5. negativo non esclude la presenza di tossine A e B del C difficile Ci si verifica quando il livello di tossina presente nel campione inferiore alla soglia di sensibilit del test Il livello di tossina non si dimostrato correlato alla presenza n alla gravit della malattia risultati di test dovranno essere interpretati da un medico alla luce anche di altri risultati di laboratorio e di referti clinici 3 Clostridium sordellii non un abitante comune dell intestino umano ma produce una tossina HT che ha propriet biologiche fisiochimiche ed immunochimiche simili alla tossina A del C difficile Questa similitudine pu causare reattivit crociata in qualunque test diagnostico che rilevi la tossina A del C difficile elo B 4 Un corretto prelievo ed un appropriato Rotavirus trattamento del campione sono essenziali per ottenere prestazioni ottimali con questo saggio Fare riferimento alla sezione Raccolta conservazione e trasporto dei campioni 5 Non si sono ancora valutate completamente le prestazioni di questo test per pazienti pediatrici 6 Un effetto del gancio della dose elevata non stato osservato durante lo studio della coltura del brodo di BHI in cui il C difficile stato valutato dopo essere cresciuto nella coltura pura per 72 hours VALORI ATTESI I casi di CDAD acquisiti in comunit vengono riconosciuti ma l incidenza bassa lt 1 caso ogni 10 000 prescrizioni di antibiotici Ci pu essere
6. rentes des Etats Unis Un total de 815 chantillons ont t test s avec le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile et compar s aux r sultats obtenus avec le test de cytotoxine CTA R sultats du test CTA ENSEMBLE R sultats du 132 25 test Xpect 21 637 TOTAL 153 662 Sensibilit 86 3 IC 95 79 8 91 3 Sp cificit 96 2 IC 95 94 5 97 5 Valeur pr dictive positive 84 1 IC 95 77 4 89 4 Valeur pr dictive n gative 96 8 IC 95 95 2 98 0 decorr 94 4 IC 95 92 5 95 8 Remarque IC Intervalle de confiance Les r sultats ne correspondant pas ont t plus amplement tudi s par des cultures toxig nes et des dosages immunoenzyma tiques en micropuits permettant de d tecter les toxines A et B Quatre des 25 chantillons n gatifs au test CTA et positifs au test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile lors des test initiaux se sont r v l s positifs avec la culture toxig ne et le dosage immunoenzymatique Sur 21 chantillons initialement positifs au test CTA et n gatifs au test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile 10 47 6 taient n gatifs avec la culture toxig ne et le dosage immunoenzymatique Performances compar es avec celles des autres dispositifs disponibles sur le march Le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile a galement t compar deux autres produits dispon
7. 8 mm diameter portion of stool to the dilution tube b For semi solid or liquid stool specimens use a transfer pipette to transfer 0 2 ml second graduated mark from the tip of specimen to the dilution tube 2 Mix thoroughly and allow large particulates to settle 3 Use a transfer pipette to dispense 0 1 ml first molded graduated mark from the tip of this preparation into another dilution tube Stool Specimens in Cary Blair 1 Specimens collected in modified Cary Blair transport media with indicator are used without further dilution 2 Mix specimen thoroughly prior to testing 3 Use a transfer pipette to dispense 0 1 ml first molded graduated mark from the tip of the specimen into a diluton tube BHI Broth Culture 1 Use a transfer pipette to dispense 0 1 ml first molded graduated mark from the tip of a 72 hour BHI broth culture with suspected C difficile into a dilution tube Test Procedure 1 Add 5 drops of Conjugate Reagent 1 to the dilution tube containing the diluted specimen 2 Add 5 drops of Conjugate Reagent 2 to the dilution tube containing the diluted specimen 3 Mix the contents of the tube thoroughly 4 Use a transfer pipette to dispense 0 2 ml second graduated mark from the tip of sample into the circular sample well of the test device 5 Read and record the test results visually after 20 minutes according to the INTERPRETATION section Strong positive results may be apparent sooner than 20 minut
8. B intensamente citopatica ma il suo ruolo nel processo del morbo non stato compreso chiaramente Sono noti ceppi di varianti negativi alla tossima A e positivi alla tossina B completamente patogenici e in grado di produrre l intero spettro della malattia La prevalenza di questi ceppi di varianti varia ampiamente a seconda dell istituzione e della posizione geografica Le malattie associate al C difficile CDAD si verificano principalmente in pazienti ricoverati Le persone con CDAD presentano spore nelle feci che possono sopravvivere anche cinque mesi nell ambiente Le caratteristiche cliniche e patologiche della CDAD non sono facilmente distinguibili da quelle di altre malattie gastrointestinali compresa la colite ulcerosa malattie infiammatorie croniche dell intestino e il morbo di Crohn L infezione da C difficile tossigeno un processo potenzialmente pericoloso per la vita tuttavia se trattato adeguatamente i tassi di mortalit dei pazienti sono bassi Ecco perch importante una diagnosi rapida che consenta ai medici di iniziare una terapia appropriata e di implementare azioni adeguate per controllare la diffusione nel nosocomio PRINCIPIO Il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B un saggio qualitativo immunocromatografico che rileva la tossina A e la tossina B del C difficile in campioni di feci o in colture di C difficile tossigeno Nell esecuzione del test un campione viene prima diluito con un di
9. K H Harding B Dyck K Olekson and J M Embil 2000 J Clin Microbiol 38 2706 27 14 4 Barbut F V Lalande B Burghoffer H V Thien E Grimprel and J Petit 2002 J Clin Microbiol 40 2079 2083 5 Johnson S S P Sambol J S Brazier M Delm e V Avesani M M Merrigan and D N Gerding 2003 J Clin Microbiol 41 1543 1547 6 Kato H N Kato K Watanabe N Iwai H Nakamura T Yamamoto K Suzuki S Kim Y Chong and E B Wasito 1998 J Clin Microbiol 36 2178 2182 7 Johnson S S A Kent K J O Leary M M Merrigan S P Sambol LR Peterson and D N Gerding 2001 Ann Intern Med 135 434 438 Wilkins T D and D M Lyerly 2003 J Clin Microbiol 41 531 534 Fedorka D P 2002 Clin Microbiol Newsletter 24 76 79 0 Richmond J Y and R W McKinney 1999 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed U S Government Printing Office Washington D C 11 Lyerly D M H C Krivan and T D Wilkins 1988 Clin Microbiol Rev 1 1 18 12 Mandell G L J E Bennett and R Dolin 2000 Mandell Douglas and Bennett s Principles and Practice of Infectious Diseases 5 ed Churchill Livingstone New York NY 59 00 CONFEZIONE REF R24650 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 20 Tests Kit REF R24640 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 40 Tests Kit LEGENDA DEI SIMBOLI REF coseno oO y Bb i Limitazioni per temperatura Temp di conserv
10. Raumtemperatur erw rmen lassen Vor jeder Verwendung vorsichtig sch tteln Die unbenutzten Reagenzien nach der Verwendung wieder in den K hlschrank stellen nam F r die Verwendung in der In Vitro Diagnostik 7 Es sind VorsichtmaBnahmen gegen die von biologischen Materialien ausgehenden Verfahren zu ergreifen indem Proben Container und Testger te nach Gebrauch ordnungsgem sterilisiert werden Weitere Informationen sind bei Bedarf der entsprechenden Dokumentation zu entnehmen 3 Die gegebenen Anweisungen sollten aufmerksam gelesen und genau befolgt warden 4 Reagenzien werden in der erforderlichen Arbeitskonzentration geliefert und sind direkt aus den Tropferflaschen abzugeben Nicht verd nnen 5 Die Reagenzien von Kits verschiedener Chargen d rfen nicht vertauscht werden 6 Die Reagenzien nicht nach dem aufgedruckten Verfallsdatum verwenden 7 Mikrobenkontaminierung von Reagenzien kann die Testgenauigkeit vermindern PROBENENTNAHME LAGERUNG UND TRANSPORT Die Proben sollten in sauberen luftdicht verschlossenen und auslaufsicheren Plastikbeh ltern gesammelt werden Die frischen unbehandelten Stuhlproben sollten bei 2 8 C gelagert und innerhalb von 72 Stunden nach der Entnahme getestet werden Wenn frische Proben nicht innerhalb von 72 Stunden getestet werden k nnen m ssen sie bei 20 C eingefroren und innerhalb von 2 Monaten getestet werden Mehrere Gefrier Auftau Zyklen vermeiden Frische Proben d
11. a membrana cromatografico che rileva solo la tossina A metodo approvato il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B e il saggio della citotossina CTA Oltre a ci un sito di prova clinico ha eseguito il test con un saggio immunoenzimatico con micropozzetti per il rilevamento sia della tossina A che della tossina B per ciascun campione risultati presentati qui di seguito sono stati calcolati facendo uso del CTA come riferimento La prestazinone di Dispositivi Ha Paragonato a CTA n 815 n 267 Xpect Xpect C difficile en C difficile EIA Toxin A B PP Toxin A B Sensibilit 86 3 62 7 91 0 80 6 Specificit 96 2 98 8 98 0 97 5 Prestazioni del brodo di coltura BHI E stato condotto uno studio interno facendo uso di ventuno ceppi noti di riferimento e di trentasei isolati da campioni di feci con sospetto di C difficile Le colture di brodo BHI sono state sottoposte a test con il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B dopo 72 ore di incubazione In queste condizioni la coltura di brodo BHI di C sordellii ATCC 9714 ha prodotto una reazione positiva Si avuta una concordanza del 94 7 54 57 rispetto ai valori previsti Sensibilit analitica La sensibilit analitica stata valutata facendo uso di tossina purificata A e B di C difficile Il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B rileva la tossina A a livelli gt 6 25 ng ml 0 12 ng test e la tossina B a l
12. de producir la enfermedad en su espectro completo La prevalencia de estas cepas var a ampliamente seg n la instituci n y la ubicaci n geogr fica La enfermedad asociada a C difficile CDAD es contra da principalmente por pacientes hospitalizados Las personas con CDAD liberan esporas en la materia fecal que pueden sobrevivir hasta cinco meses en el medio ambiente Las caracter sticas cl nicas y patol gicas de la CDAD no pueden distinguirse f cilmente de las de otras enfermedades gastrointestinales como la colitis ulcerativa enfermedad intestinal inflamatoria cr nica y enfermedad de Crohn La infecci n por C difficile toxig nica es una enfermedad potencialmente mortal No obstante si se la trata adecuadamente puede reducirse la tasa de mortalidad de pacientes Por esta raz n es importante un diagn stico r pido que permita a los m dicos iniciar una terapia adecuada y tomar las medidas necesarias para controlar su propagaci n nosocomial PRINCIPIO DEL ENSAYO El ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B es un ensayo inmunocromatogr fico cualitativo que detecta la toxina A y la toxina B de C difficile en muestras de materia fecal o cultivos de C difficile toxig nico Para realizar el ensayo primero se diluye una muestra con diluyente de muestra para solubilizar las toxinas A continuaci n se mezcla una parte de la muestra diluida con un volumen de Conjugado 1 que contiene anticuerpos contra la toxina A y l
13. dispositif et les tubes de dilution Pr paration des chantillons chantillons de selles fra ches non fix es 1 Ajouter du diluant d chantillon jusqu la ligne trac e sur le tube de dilution 0 5 ml a Pour les chantillons de selles solides utiliser un b tonnet applicateur en bois et effectuer des pr l vements sur diff rentes parties de l chantillon Transf rer une portion de 0 2 g de selles de 6 8 mm de diam tre dans le tube de dilution b Pour les chantillons de selles semi solides ou liquides utiliser une pipette de transfert pour transf rer 0 2 ml deuxi me graduation en partant de la pointe d chantillon dans le tube de dilution 2 Bien m langer et laisser les particules les plus importantes se d poser 3 Utiliser une pipette de transfert pour verser 0 1 ml premi re graduation en partant de la pointe de cette pr paration dans un autre tube de dilution chantillon de selles en milieu Cary Blair 1 Les chantillons recueillis dans des milieux de transport Cary Blair modifi s avec un indicateur sont utilis s sans dilution suppl mentaire 2 Bien m langer les chantillons avant le test 3 Utiliser une pipette de transfert pour verser 0 1 ml premi re graduation en partant de la pointe de l chantillon dans un tube de dilution Bouillon de culture cervelle coeur 1 Utiliser une pipette de transfert pour verser dans un tube de dilution 0 1 ml premi re graduation
14. dovuto al fatto che i test diagnostici per il rilevamento della CDAD non vengono eseguiti con frequenza sufficiente in pazienti dimessi La colite da C difficile si manifesta con maggiore frequenza in pazienti ricoverati in ospedale e rappresenta la quarta causa pi comune di infezione nosocomiale secondo quanto riportato dai Centers for Disease Control and Prevention statunitensi Il C difficile responsabile del 20 30 di diarrea associata ad antibiotici e di oltre il 90 dei casi di colite pseudomembranosa Il tasso di incidenza della CDAD nosocomiale pu variare al variare della popolazione dell ospedale ed influenzato dalla presenza di fattori predisponenti quali l eta avanzata del paziente il tipo e la durata della terapia antimicrobica la gravit della malattia o malattie sottostanti e durata della permanenza in ospedale Il C difficile presente nel 3 5 degli adulti sani e fino al 50 di bambini e adolescenti che portano in modo asintomatico sia i batteri che le sue tossine Quando Xpect Clostridium difficile Toxin A B stato valutato in uno studio di previsione condotto in quattro laboratori indipendenti negli Stati Uniti stato osservatio un tasso di diffusione totale del 16 15 CARATTERISTICHE DI ESECUZIONE Precisione clinica Le prestazioni di Xpect Clostridium difficile Toxin A B sono state valutate in quattro regioni geograficamente diverse degli Stati Uniti Un totale di ottocentoquindici campioni st
15. en partant de la pointe du bouillon cervelle coeur de 72 heures soupgonn de contenir le C difficile Proc dure du test 1 Ajouter 5 gouttes de r actif 1 conjugu dans le tube de dilution contenant l chantillon dilu 2 Ajouter 5 gouttes de r actif 2 conjugu dans le tube de dilution contenant l chantillon dilu 3 Bien m langer le contenu du tube 4 Utiliser une pipette de transfert pour verser 0 2 ml deuxi me graduation en partant de la pointe d chantillon dans le puits du dispositif de test 5 Lire et enregistrer les r sultats du test apr s 20 minutes conform ment la section INTERPR TATION Des r sultats clairement positifs peuvent tre visibles avant le d lai de 20 minutes Les r sultats ne sont pas valides au del de 20 minutes INTERPR TATION DU TEST R sultat positif Toxine A et ou B pr sente Un test positif est indiqu par deux lignes noires quelle que soit leur intensit une dans la zone TEST et l autre dans la zone de contr le CTRL Un test postif indique la pr sence des toxines A et ou B de C difficile sans dans l chantillon R sultat n gatif Toxine A et ou B non d tect e Un test n gatif est indiqu par une seule ligne noire dans la zone de contr le CTRL Un test n gatif inadique que les toxines A et ou B de C difficile sont absentes ou en dessours du seuil de d tection du test R sultat non valide Un r sultat est consid r comme no
16. nivel de toxinas en la muestra se encuentra por debajo del nivel de detecci n del ensayo No se ha comprobado que el nivel de toxina est relacionado con la presencia o gravedad de la enfermedad El m dico debe interpretar los resultados del ensayo junto con los resultados de otros an lisis de laboratorio y hallazgos cl nicos 3 Clostridium sordellii no habita com nmente en el intestino humano pero produce una toxina HT que tienen propiedades biol gicas fisioqu micas e inmunoqu micas similares a las de la toxina A de C difficile Esta similitud puede provocar reacciones cruzadas en los ensayos de diagn stico que detectan la toxina A de C difficile y o B 4 La obtenci n y procesamiento adecuados de las muestras son fundamentales para obtener el m ximo rendimiento del ensayo Vea la secci n Obtenci n almacenamiento y transporte de las muestras 5 No se han evaluado totalmente las caracter sticas de comportamiento de este ensayo en poblaciones pedi tricas 6 Un efecto del gancho de la alta dosis no fue observado durante el estudio de la cultura del caldo de BHI en el cual el C difficile fue evaluado despu s de crecer en la cultura pura para 72 hours VALORES ESPERADOS Se reconocen casos de CDAD adquiridos en la comunidad pero su incidencia es baja lt 1 caso por 10 000 recetas de antibi ticos Esto puede deberse a que en los centros de atenci n ambulatoria no se realizan ensayos diagn sticos con la frecuenci
17. parce que le taux de toxine dans l chantillon peut tre inf rieur au seuil de d tection du test Il n a pas t d montr que le niveau de toxine avait un lien avec la pr sence ou la s v rit de la maladie Les r sultats du test doivent tre interpr t s par un m decin en tenant compte des autres analyses de laboratoire et r sultats cliniques 3 Clostridium sordellii n est pas un habitant courant de l intestin humain mais il produit une toxine HT dont les propri t s biologiques physicochimiques et immunochimiques sont similaires celles de la toxine A de C difficile Cette similitude peut entra ner une r activit crois e dans tout test diagnostique qui d tecte la toxine A de C difficile et ou B 4 La qualit du pr l vement et du traitement des chantillons est essentielle pour un fonctionnement optimal du test Consulter la section Pr l vement conservation et transport des chantillons 5 Les caract ristiques de performances de ce test n ont pas t enti rement valu es chez des patients p diatriques 6 Onn a pas observ un effet de crochet de dose lev e pendant l tude de culture de bouillon de BHI dans laquelle du C difficile a t valu apr s croissance dans la culture pure pour 72 hours VALEURS ATTENDUES Les cas de maladies communautaires li es au C difficile sont reconnus mais l incidence est faible moins de 1 cas pour 10 000 prescriptions d antibiotique Cela peu
18. prima del test 3 Usare una pipetta di trasferimento per dispensare 0 1 ml prima tacca graduata incisa dalla punta del campione in una provetta di diluizione Brodo di coltura BHI 1 Usare una pipetta di trasferimento per dispensare 0 1 ml prima tacca graduata incisa dalla punta di un brodo di coltura BHI di 72 ore con sospetto di C difficile in una provetta di diluizione Procedimento 1 Aggiungere 5 gocce di reagente coniugato 1 alla provetta di diluizione contenente il campione diluito 2 Aggiungere 5 gocce di reagente coniugato 2 alla provetta di diluizione contenente il campione diluito 3 Miscelare accuratamente il contenuto della provetta 4 Usare una pipetta di trasferimento per dispensare 0 2 ml seconda tacca graduata dalla punta di campione nel pozzetto circolare per campione del dispositivo per test 5 Leggere visivamente e registrare i risultati del test dopo 20 minuti conformemente alla sezione INTERPRETAZIONE Risultati fortemente positivi possono essere evidenti gi prima di 20 minuti risultati non saranno pi validi oltre i 20 minuti INTERPRETAZIONE DEL TEST Risultato positivo tossina A e o B presente Un test positivo indicato da due linee di colore nero di qualunque intensit una nella zona di TEST e una in quella di controllo CTRL Un test positivo indica la presenza della tossina A e o della tossina B del C difficile nel campione 14 x pect C diff Toxin A B O rem
19. the activity of these toxins Toxin A is mildly cytopathic but induces large fluid shifts and mucosal inflammation Toxin B is intensely cytopathic but its role in the disease process is not clearly understood Variant strains which are Toxin A negative Toxin B positive are known to exist are fully pathogenic and capable of producing the full spectrum of disease The prevalence of these variant strains varies widely by institution and geographic location 7 C difficile associated disease CDAD primarily occurs in hospitalized patients Individuals with CDAD shed spores in the stool which can survive for as long as five months in the environment Clinical and pathological features of CDAD are not easily distinguished from those of other gastrointestinal diseases including ulcerative colitis chronic inflammatory bowel disease and Crohn s disease Infection with toxigenic C difficile is a potentially life threatening disease process however when properly treated patient mortality rates are low Thus rapid diagnosis allowing clinicians to initiate appropriate therapy and implement adequate measures to control nosocomial spread is important PRINCIPLE The Xpect Clostridium difficile Toxin A B test is a qualitative immunochromatographic assay that detects C difficile Toxin A and Toxin B in stool specimens or cultures of toxigenic C difficile In performing the test a specimen is first diluted with Specimen Diluent to help
20. 25 f r Xpect E 21 637 GESAMT 153 662 Empfindlichkeit 86 3 95 CI 79 8 91 3 Spezifit t 96 2 95 CI 94 5 97 5 Positiver Prognosewert 84 1 95 Cl 77 4 89 4 Negativer Prognosewert 96 8 95 CI 95 2 98 0 Correlation 94 4 95 CI 92 5 95 8 Hinweis Cl Konfidenzintervall Abweichende Ergebnisse wurden unter Verwendung einer toxigenen Kultur und eines Mikrowellen Enzymassays weiter untersucht die beide Toxin A und B nachweisen Vier von 25 Proben die bei den anf nglichen Tests Zytotoxin negativ und Xpect Clostridium difficile Toxin A B positiv waren waren mit der toxigenen Kultur und dem Enzym Immunoassay positiv Zehn der 21 Proben 47 6 die bei den anf nglichen Tests CTA positiv und Xpect Clostridium difficile Toxin A B negativ waren waren mit der toxigenen Kultur und dem Enzym Immunoassay negativ Leistung im Vergleich zu handels blichen Ger ten Der Xpect Clostridium difficile Toxin A B test wurde zudem mit zwei handels blichen Produkten verglichen An jedem der vier Standorte der klinischen Versuche wurde f r jede Probe ein chromatografischer Membran Assay der nur Toxin A Pr dikatger t ermittelt der Xpect Clostridium difficile Toxin A B test und ein Zytotoxin Assay CTA getestet Zudem wurde an einem Standort f r jede Probe ein Microwell Enzym Immunoassay f r den Nachweis von sowohl Toxin A als auch B getestet Die folgenden Ergebnisse wurden unter Ve
21. 8 Website www remel com Email remel remel com GERMAN Dd remel Clostridium difficile x pect Toxin A B ANWENDUNGSBEREICH Das Xpect Clostridium difficile Toxin A B testkit von Remel ist ein schneller in vitro immunchromatografischer Test f r den direkten qualitativen Nachweis des Clostridium difficile Toxin A und oder B in humanen Stuhlproben von Patienten von denen angenommen wird dass sie unter einer Clostridium difficile assoziierten Krankheit CDAD leiden Der Test dient als Hilfsmittel zur Diagnose von CDAD Der Test kann auch verwendet werden um die Toxigenit t von C difficile in BHI Brain Heart Infusion Bouillonkultur zu best tigen ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLARUNG Clostridium difficile wurde 1935 zum ersten Mal beschrieben die Zusammenh nge zwischen Organismus und Krankheit wurden erstmals 1977 aufgedeckt C difficile ist eine toxinproduzierende Sporen bildende anaerobe gram positive Bakterie Die klinische Darstellung einer C difficile Infektion umfasst in aufsteigender Reihenfolge an Schweregrad asymptomatische Carrier Antibiotika assoziierte Kolitis pseudomembrane Kolitis PMC und fulminante Kolitis Eine in der Regel durch eine Antibiotikabehandlung ausgel ste Reduzierung der normalen mikrobischen Flora erm glicht eine Wucherung von C difficile Die Symptome der Antibiotika assoziierten Kolitis setzen in der Regel vier bis zehn Tage nach Start der Antibiotikabehandlung ein Die meisten
22. 98 0 Correlation 94 4 95 Cl Note CI Confidence Interval 92 5 95 8 Discordant results were further investigated by toxigenic culture and microwell enzyme immunoassay that detects both Toxin A and B Four of 25 specimens that were cytotoxin negative and Xpect Clostridium difficile Toxin A B positive on initial testing were positive by toxigenic culture and enzyme immunoassay Ten of 21 47 6 specimens that were CTA positive and Xpect Clostridium difficile Toxin A B negative on initial testing were negative by toxigenic culture and microwell enzyme immunoassay Performance Compared to Commercially Available Devices The Xpect Clostridium difficile Toxin A B test was also compared to two commercially available products Each of the four clinical trial sites tested a chromatographic membrane assay that detects Toxin A only Predicate Device the Xpect Clostridium difficile Toxin A B test and cytotoxin assay CTA for each sample In addition one clinical trial site tested a microwell enzyme immunoassay for the detection of both Toxin A and B for each sample The results presented below are calculated using CTA as the reference Performance of Devices Compared to CTA n 815 n 267 Xpect Xpect C difficile pisa C difficile EIA Toxin A B Toxin A B Sensitivity 86 3 62 7 91 0 80 6 Specificity 96 2 98 8 98 0 97 5 BHI Broth Culture Performance An in house study was cond
23. CHANTILLONS Les chantillons doivent tre plac s dans des r cipients propres et herm tiques Les chantillons de selles frais non trait s doivent tre stock s entre 2 et 8 C et tre examin s dans les 72 heures S il est impossible de tester les chantillons frais dans les 72 heures ils doivent tre congel s dans un cong lateur sans d givrage au moins 20 C et analys s dans les 2 mois suivant le pr l vement viter les d cong lation et re cong lation r p t es Les chantillons frais dilu s avec le diluant fourni dans le kit peuvent tre conserv s jusqu a 24 heures avant d tre test s s ils sont r frig r s Les chantillons de selles recueillis dans un milieu de transport Cary Blair modifi avec un indicateur ou quivalent peuvent tre r frig r s 2 8 C ou conserv s temp rature ambiante 20 25 C et doivent tre test s dans les cinq jours suivant le pr l vement Les chantillons de selles qui ont t concentr s ou pr lev s dans du formol du SAF sodium ac tate formol ou du PVA alcool polyvinyle ne peuvent pas tre utilis s avec ce test R ACTIFS ET MAT RIELS FOURNIS 20 40 Test 1 Dispositifs de test 20 40 Chaque sachet contient un dispositif de test a usage unique avec un dessiccatif la membrane est enduite de r actifs de capture 2 R actif conjugu 1 3 0 ml x 1 3 0 ml x 2 Microparticules bleu noir enduites d anticorps de souris antit
24. ENGLISH Do gt _ remel e Clostridium difficile X pect Toxin A B INTENDED USE Remel Xpect Clostridium difficile Toxin A B test kit is a rapid in vitro immunochromatographic test for the direct qualitative detection of Clostridium difficile Toxin A and or B in human fecal specimens from patients suspected of having Clostridium difficile associated disease CDAD The test is intended for use as an aid in diagnosis of CDAD The test can also be used for confirmation of toxigenic C difficile from Brain Heart Infusion BHI broth culture SUMMARY AND EXPLANATION C difficile was first described in 1935 but it was not until 1977 that links were made between the organism and disease C difficile is a toxin producing spore forming anaerobic gram positive bacillus The clinical presentation of C difficile infection includes in increasing order of severity asymptomatic carriers antibiotic associated colitis pseudomembranous colitis PMC and fulminant colitis A reduction of the normal microbial flora in the colon usually caused by antibiotic therapy allows overgrowth of C difficile Symptoms of antibiotic associated colitis usually begin four to ten days after antibiotic treatment has begun Most pathogenic strains of C difficile produce two toxins Toxin A enterotoxin and Toxin B cytotoxin which are the main virulence factors for the organism There appears to be a cascade of events which result in the expression of
25. Ergebnisbereich wird als interne Negativkontrolle angesehen Wenn der Test ordnungsgem ausgef hrt wurde und die Reagenzien ordnungsgem funktionieren wird der Hintergrund farblos um ein deutliches Ergebnis zu erkennen zu geben Extern Die zum Lieferumfang des Kits geh rende Positiv und Negativkontrollen sollten mit jeder neuen Lieferung und jeder neuen Kit Chargennummer durchgef hrt werden Die positive Kontrolle wird verwendet um die Reaktivt t der Reagenzien im Raham des Assays zu verifizieren Sie dient nicht dazu die Genauigkeit des analytischen Assay Grenzwerts zu gew hreisten Jedes Labor sollte dabei den jeweiligen staatlichen und lokalen Bestimmungen folgen Hierzu 0 1 ml 5 Tropfen der Kontrolle in ein R hrchen geben und gem dem oben beschriebenen Testverfahren verarbeiten Kontrollen nicht mit Probenverd nner verd nnen Treten im Rahmen der Qualit tssicherung abweichende Ergebnisse auf sollten die Ergebnisse des Patienten nicht verwertet werden GERMAN EINSCHRANKUNGEN 1 Ein positiver Test bestimmt nicht definitiv das Vorliegen einer Krankheit Der Test weist das Vorhandensein von Toxin A und oder Toxin B in Stuhlproben nach Die Diagnose kann nicht allein anhand der Testresultate erstellt werden diese m ssen in Verbindung mit anderen klinischen Befunden bewertet werden 2 Wie bei allen in vitro Diagnosetests schlie t ein negatives Testergebnis die M glichkeit des Vorhandenseins von C difficile Toxi
26. OL Internal A procedural control is included in the test The appearance of a control line in the CTRL region verifies that an intact conjugate has been added to the device that the control line antibody is functionally active and that adequate capillary flow has occurred A clear background in the results area is considered an internal negative control If the test has been performed correctly and reagents are working properly the background will clear to give a discernible result External The Positive and Negative Quality Controls provided with the kit should be run with each shipment and new kit lot number received The Positive Control is used to verify reactivity of the reagents associated with the assay and is not intended to ensure precision at the analytical assay cut off Each laboratory should follow their state and local requirements To use add 0 1 ml 5 drops of the control to a dilution tube and process in accordance with Test Procedure outlined above do not dilute controls with specimen diluent If aberrant quality control results are noted patient results should not be reported LIMITATIONS 1 A positive test does not define the presence of disease The test detects the presence of Toxin A and or Toxin B in fecal specimens Results should be used in conjunction with other clinical findings to establish a diagnosis 2 As with all in vitro diagnostic tests a negative test result does not exclude the possibility of th
27. Suzuki S Kim Y Chong and E B Wasito 1998 J Clin Microbiol 36 2178 2182 7 Johnson S S A Kent K J O Leary M M Merrigan S P Sambol LR Peterson and D N Gerding 2001 Ann Intern Med 135 434 438 Wilkins T D and D M Lyerly 2003 J Clin Microbiol 41 531 534 Fedorka D P 2002 Clin Microbiol Newsletter 24 76 79 0 Richmond J Y and R W McKinney 1999 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th ed U S Government Printing Office Washington D C 11 Lyerly D M H C Krivan and T D Wilkins 1988 Clin Microbiol Rev 1 1 18 12 Mandell G L J E Bennett and R Dolin 2000 Mandell Douglas and Bennett s Principles and Practice of Infectious Diseases 5th ed Churchill Livingstone New York NY 300 PACKUNGSINHALT REF R24650 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 20 Tests Kit REF R24640 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 40 Tests Kit SYMBOLLEGENDE RC fem O VD mme Renon ataca CE Xpect ist eine Marke der Remel Inc Pepto Bismol Imodium Kaopectate und Castoria sind eingetragene Marken von Procter amp Gamble McNeil Consumer amp Specialty Pharmaceuticals Pharmacia amp Upjohn Company und The Mentholatum Company Inc ProClin ist eine Marke der Rohm and Haas Company IFU 24650 Revidierte Fassung vom 2007 08 27 Gedruckt in den USA 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA Allgemei
28. a Adenovirus type 2 Adenovirus type 40 Adenovirus type 41 Coxsackievirus B4 Cytomegalovirus Echovirus type 22 Enterovirus type 69 Rotavirus Se analizaron las siguientes sustancias con el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B y no se observaron interferencias con ninguna de ellas a los niveles indicados sangre mucosa grasa fecal Pepto Bismol 10 v v Imodium AD 10 v v Kaopectate 10 viv Castoria 10 v v vancomicina 12 5 mg ml metronidazol 12 5 mg ml y sulfato de bario 12 5 mg ml Reproducibilidad Se realizaron ensayos de reproducibilidad en tres centros incluido un centro propio durante cuatro dias diferentes con seis muestras ciegas Las muestras consistieron en muestras de mateuia fecal positivas y negativas concidas Las muestras produjeron el resultado esperado con el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B el 98 6 71 72 de las vecas BIBLIOGRAF A 1 Gerding D N S Johnson L R Peterson M E Mulligan and J Silva Jr 1995 Infect Control Hosp Epidemiol 16 459 477 2 Limaye AP D K Turgeon B T Cookson and T R Fritsche 2000 J Clin Microbiol 38 1696 1697 3 Alfa M J A Kabani D Lyerly S Moncrief L M Neville A Al Barrak G K H Harding B Dyck K Olekson and J M Embil 2000 J Clin Microbiol 38 2706 2714 4 Barbut F V Lalande B Burghoffer H V Thien E Grimprel and J Petit 2002 J Clin Microbiol 40 2079 2083 5 Johns
29. a suficiente para detectar la presencia de CDAD La colitis por C difficile es mucho m s frecuente en pacientes hospitalizados y es la cuarta causa m s com n de enfermedad nosocomial informada a los Centers for Disease Control and Prevention C difficile es responsable del 20 30 de los casos de diarrea asociada con antibi ticos y de m s del 90 de los casos de colitis pseudomembranosa La tasa de incidencia de CDAD nosocomial puede variar seg n la poblaci n hospitalaria y depende de la presencia de factores de predisposici n como la mayor edad del paciente el tipo y duraci n de la terapia antimicrobiana la gravedad de las enfermedades subyacentes y la duraci n de la estad a en el hospital C difficile se encuentra en el 3 5 de los adultos sanos y en hasta el 50 de los beb s y adultos j venes que son portadores asintom ticos de la bacteria y sus toxinas Se observ una tasa de prevalencia del 16 caundo se evalu el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B en un estudio prospectivo realizado en cuatro laboratorios independientes en los Estados Unidos 19 CARACTERISTICAS DE COMPORTAMIENTO Exactitud clinica Se evalu el comportamiento del ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B en cuatro regiones diferentes de los Estados Unidos En total se evaluaron 815 muestras con el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B y se compararon con los resultados obtenidos con el ensayo de citotoxina ECT
30. a toxina B unidos a micropart culas de color m s un volumen de Conjugado 2 que contiene anticuerpos biotinilados contra la toxina A y la toxina B Se transfiere una parte de esta mezcla a un dispositivo de ensayo con estreptavidina inmovilizada como l nea de ensayo y anticuerpo antiinmunogobulina de cabra como l nea de control Los 17 inmunocomplejos de toxina y anticuerpos conjugados forman una banda visible al circular por la l nea de ensayo El exceso de conjugados de part culas de color forma una banda visible en la l nea de control lo cual significa que el ensayo est funcionando correctamente ALMACENAMIENTO Guarde los dispositivos de ensayo en bolsitas de papel de aluminio selladas a 2 30 C a temperatura ambiente o refrigerados Guarde todos los frascos de reactivos del kit y los viales a 2 8 C No congelar ni sobrecalentar Dejar estabilizar los componentes a temperatura ambiente antes de su uso Mezcle los reactivos suavemente en el frasco antes de utilizarlos Los reactivos no utilizados se deben volver a guardar en el refrigerador despu s de su uso PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro 2 Se deben tomar las precauciones habituales contra los riesgos microbiol gicos esterilizando de forma adecuada las muestras recipientes y dispositivos de ensayo despu s de su uso Consulte las referencias correspondientes cuando sea necesario 3 Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones 4 Los react
31. al de Remel Inc Representante autorizado en Europa Pepto Bismol Imodium Kaopectate y Castoria son marcas registradas de Procter amp Gamble McNeil Consumer 8 Specialty Pharmaceuticals Pharmacia 8 Upjohn Company y The Mentholatum Company Inc respectivamente ProClin es una marca comercial de Rohm and Haas Company IFU 24650 revisado 2007 08 27 Impreso en los EE UU 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 EE UU Informaci n general 800 255 6730 Direcci n en Internet www remel com Servicio t cnico 800 447 3641 Tel tono local Internacional 913 888 0939 Pedidos 800 447 3635 Fax internacional 913 895 4128 Correo electr nico remel remel com
32. aminati entro 5 gironi dalla raccolta I campioni fecali che sono stati concentrati o raccolti in formalina SAF PVA non sono adatti per l uso con questo test REAGENTI E MATERIALI FORNITI 20 40 Test 1 Dispositivi per test 20 40 Ogni bustina protettiva contiene un dispositivo per test monouso con dessiccante la membrana dotata di strisce con reagenti per cattura 2 Reagente coniugato 1 3 0mlx1 3 0mlx2 Micro particelle blu nere rivestite con anti tossina A di topo e anti tossina B di coniglio 3 Reagente coniugato 2 3 0 ml x 1 3 0 ml x 2 Anti tossina A biotinilata di capra e anti tossina B di coniglio 4 Diluente per campioni 12 0 ml x 1 12 0 ml x 2 Soluzione tampone con lo 0 03 di ProClin 300 5 Controllo positivo 2 0 ml x 1 2 0 ml x 2 Sovranatante da coltura contenente la tossina A e B del C difficile con conservanti 6 Controllo negativo tampone con conservante 7 Pipette di trasferimento monouso 40 80 Pipette graduate ad intervalli di 0 1 ml 8 Provette per diluizione 40 80 Provette per la preparazione dei campioni con volume marcato da 0 5 ml 9 Tamponcini applicatori in legno 20 40 Istruzioni per l uso 1 IFU 2 0 ml x 1 2 0 mix 2 Soluzione ITALIAN MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO 1 Contenitori per la raccolta dei campioni fecali e 2 timer Materiali opzionali non forniti 1 Terreni di trasporto per campioni 2 brodo BHI e 3 rack per pr
33. ato sottoposto al test Xpect Clostridium difficile Toxin A B e i risultati sono stati confrontati con quelli del saggio della citotossina CTA Risultati CTA Overall z Risultati 132 25 Xpect z 21 637 TOTALE 153 662 Sensibilit 86 3 95 CI 79 8 91 3 Specificit 96 2 95 CI 94 5 97 5 Valore predittivo positivo 84 1 95 CI 77 4 89 4 Valore predittivo negativo 96 8 95 CI 95 2 98 0 Correlazione 94 4 95 CI 92 5 95 8 Nota CI Confidence Interval intervallo di confidenza risultati discordanti sono stati analizzati ulteriormente tramite coltura tossigena e con saggio immunoenzimatico con micropozzetti che rileva sia la tossina A che la tossina B Quattro su 25 campioni che erano negativi alla citotossina e positivi a Xpect Clostridium difficile Toxin A B al test iniziale sono risultati positivi alla coltura tossigenica e al saggio immunoenzimatico Dieci campioni su 21 47 6 che erano positivi al CTA e negativi a Xpect Clostridium difficile Toxin AB al test iniziale sono risultati negativi alla coltura tossigena e al saggio immunoenzimatico con micropozzetti Confronto delle prestazioni in relazione a dispositivi disponibili in commercio Il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B stato confrontato anche con due prodotti disponibili in commercio Per ogni campione ciascuno dei quattro siti di prova clinici ha eseguito il test con un saggio
34. azione Codice lotto Numero Lotto D Da utilizzare entro data di scadenza EC REP Rappresentante autorizzato per l Europa CE Xpect un marchio di fabbrica di Remel Inc LOT Pepto Bismol Imodium Kaopectate e Castoria sono marchi registrati rispettivamente di Procter amp Gamble McNeil Consumer amp Specialty Pharmaceuticals Pharmacia amp Upjohn Company e The Mentholatum Company Inc ProClin un marchio di fabbrica di Rohm and Haas Company IFU 24650 Revisione 2007 08 27 Stampato negli U S A 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA Informazioni generali 800 255 6730 Sito web www remel com Assistenza tecnica 800 447 3641 Tel locali internazionali 913 888 0939 Ufficio vendite 800 447 3635 Fax internazionale 913 895 4128 E Mail remel remel com SPANISH dD remel x pect USO PREVISTO El kit de ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B de Remel es un ensayo inmunocromatogr fico rapido in vitro para la detecci n cualitativa directa de toxina A y o B de Clostridium difficile en muestras de materia fecal humanas de pacientes sospechados de tener enfermedad asociada a C difficile y CDAD como se la conoce por sus siglas en ingl s El ensayo est dise ado para facilitar el diagn stico de enfermedad asociada a C difficile Tambi n puede utilizarse para confirmar la presencia de C difficile toxig nico a partir de cultivo en caldo de infusi
35. comial disease reported to the Centers for Disease Control and Prevention C difficile is responsible for 20 30 of antibiotic associated diarrhea and more than 90 of pseudomembranous colitis The incidence rate of nosocomial CDAD may vary with hospital populations and is influenced by the presence of predisposing factors such as increased patient age type and duration of antimicrobial therapy severity of underlying illness es and length of hospital stay C difficile is found in 3 5 of healthy adults and up to 50 of infants and young adults that asymptomatically carry both the bacteria and its toxins 12 An overall prevalence rate of 16 was observed when the Xpect Clostridium difficile Toxin A B was evaluated in a prospective study conducted at four independent laboratories in the United States PERFORMANCE CHARACTERISTICS Clinical Accuracy The performance of Xpect Clostridium difficile Toxin A B was evaluated at four geographically diverse regions of the United States A total of eight hundred fifteen specimens were tested with the Xpect Clostridium difficile Toxin A B test and compared to results obtained from the cytotoxin assay CTA CTA Results Overall n Xpect 132 25 Results 21 637 TOTAL 153 662 Sensitivity 86 3 95 CI 79 8 91 3 Specificity 96 2 95 CI 94 5 97 5 Positive Predictive Value 84 1 95 CI 77 4 89 4 Negative Predictive Value 96 8 95 CI 95 2
36. ct d tecte la toxine A a des niveaux gt 6 25 ng ml 0 12 ng test et la toxine B des niveaux gt 40 0 ng ml 0 76 ng test FRENCH R activit crois e Cinquante cinq micro organismes ont t valu s avec le kit Xpect Aucune r activit crois e n a t observ e Des isolats de levures et de bact ries ont t test s des concentrations de 10 unit s formant colonie par ml Des isolats viraux ont t test s des concentrations allant de 10 10 DICTso dose infectieuse en culture tissulaire par millilitre Les organismes suivants ont t test s avec le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile Aeromonas hydrophila Bacillus cereus Bacillus subtilis Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus subsp fetus Campylobacter jejuni subsp jejuni Campylobacter lari Candida albicans Clostridium botulinum toxin 20 ug ml Clostridium beijerinickii Clostridium difficile non toxigenic Clostridium haemolyticum Clostridium histolyticum Clostridium innocuum Clostridium novyi Clostridium perfringens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sporogenes Clostridium subterminale Clostridium tetani Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Klebsiella pneumoniae Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas asaccharolytica Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Salmonella Typhimurium Serratia liquefaciens Shige
37. e presence of C difficile Toxin A or Toxin B This may occur when the toxin level in the sample is below the detection level of the test The level of toxin has not been shown to correlate with either the presence or severity of disease Test results should be interpreted by a physician in light of other laboratory results and clinical findings 3 Clostridium sordellii is not a common inhabitant of the human intestine but does produce a toxin HT that has biological physiochemical and immunochemical properties similar to C difficile Toxin A This similarity may cause cross reactivity in any diagnostic test that detects C difficile Toxin A and or B ENGLISH 4 Proper specimen collection and processing are essential to achieve optimal performance of the test See Specimen Collection Storage and Transport section 5 The performance characteristics of this test have not been fully evaluated in pediatric populations 6 A high dose Hook Effect was not observed during the BHI broth culture study in which C difficile was evaluated after growing in pure culture for 72 hours EXPECTED VALUES Community acquired CDAD cases are recognized but the incidence is low lt 1 case per 10 000 antibiotic prescriptions This may be because diagnostic testing is not performed often enough in outpatient settings to detect CDAD C difficile colitis occurs at a much higher frequency in patients who are hospitalized and is the fourth most common noso
38. e realizar el ensayo independientemente de su consistencia 3 Cuando est listo para realizar el ensayo retire el dispositivo de ensayo de la bolsita de papel de aluminio y col quelo sobre una superficie plana 4 Coloque al dispositivo y a los tubos de diluci n una etiqueta con el nombre o n mero de control del paciente Preparaci n de la muestra Muestras de materia fecal frescas sin conservante 1 A ada diluyente de muestra hasta la marca del tubo de diluci n 0 5 ml a Para las muestras de materia fecal s lidas utilice una varilla aplicadora de madera y diferentes partes de la muestra Transfiera una parte de 0 2 g 6 8 mm de di metro de materia fecal al tubo de diluci n b Para muestras de materia fecal semis lidas o l quidas utilice una pipeta de transferencia para transferir 0 2 ml segunda marca desde la punta de muestra al tubo de diluci n 2 Mezcle bien y deje que las part culas grandes se asienten 3 Con una pipeta de transferencia coloque 0 1 ml primera marca en relieve desde la punta de esta preparaci n en otro tubo de diluci n Muestras de materia fecal en Cary Blair 1 Las muestras recogidas en medio de transporte de Cary Blair modificado con indicador se utilizan sin m s diluciones 2 Mezcle bien la muestra antes de realizar el ensayo 3 Con una pipeta de transferencia coloque 0 1 ml primera marca en relieve desde la punta de la muestra en un tubo de diluci n Cultivo
39. eagents between kits of different lots Do not use reagents beyond the printed expiration dates 7 Microbial contamination of reagents may decrease the accuracy of the assay gt SPECIMEN COLLECTION STORAGE AND TRANSPORT Specimens should be collected in clean airtight leak proof containers Fresh untreated stool specimens should be stored at 2 8 C and tested within 72 hours of collection If fresh specimens cannot be tested within 72 hours they should be frozen at 20 C or below in a non defrosting freezer and tested within 2 months of collection Avoid multiple freeze thaw cycles Fresh specimens diluted in the Sample Diluent provided in the kit can be stored refrigerated for up to 24 hours prior to testing Stool specimens collected in modified Cary Blair Transport Medium with indicator or equivalent may be stored refrigerated 2 8 C or stored at room temperature 20 25 C and should be tested within 5 days of collection Stool specimens that have been concentrated or collected in Formalin SAF or PVA are not suitable for use with this test REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED 20 40 Tests 1 Test Devices 20 40 Each foil pouch contains one single use test device with desiccant membrane is striped with capture reagents 2 Conjugate Reagent 1 3 0 ml x 1 3 0 mix 2 Blue black microparticles coated with mouse anti toxin A and rabbit anti Toxin B 3 Conjugate Reagent 2 3 0 ml x 1 3 0 ml x 2 Bio
40. el Risultato negativo tossina A e o B non rilevata Un test negativo indicato da una sola linea di colore nero nella zona di controllo CTRL Un test negativo indica che la tossina A e o della tossina B del C difficile sono assenti o inferiori al limite di rivelazione del test Risultato non valido Un risultato non valido si verifica quando la linea di TEST e parziale o incompleta oppure quando la linea di controllo CTRL assente o incompleta allo scadere dei 20 minuti La linea di La linea di controllo o di Controllo test parzialmente o assente incompleta Se si verifica un risultato non valido a causa della restrizione del flusso del campione attraverso la membrana sottoporre di nuovo a test il campione come segue Preparazione del campione per un secondo test Diluire ulteriormente il campione come segue 1 Combinarein una provetta per diluizione pulita a 5 gocce di diluente per campioni e b 0 1 ml prima tacca graduata incisa dalla punta di campione dal preparato iniziale del campione nel diluente per campioni senza aggiungere reagenti 2 Miscelare il preparato aspirando con la pipetta di trasferimento 3 Usare 0 1 ml di questo preparato di campione diluito e ripetere il procedimento CONTROLLO QUALIT Interno Nel test compreso un controllo della procedura El aspecto de una linea de control en la posici n CTRL permite determinar si se ha a adido un Conjugado intacto al dis posit
41. en C difficile colitis tritt wesentlich h ufiger bei hospitalisierten Patienten auf es ist die vierth ufigste nosokomiale Krankheit die den Centers for Disease Control and Prevention gemeldet wird C difficile ist f r 20 30 der Antibiotika assoziierten Diarrhoen verantwortlich und fur Uber 90 der F lle mit pseudomembran ser Kolitis Die Inzidenz der nosokomialen CDAD kann f r verschiedene Krankenhauspopulationen variieren und wird vom Vorhandensein pr disponierender Faktoren beeinflusst so z B einem h heren Alter des Patienten der Art und Dauer der antimikrobiellen Behandlung der Schwere der zu Grunde liegenden Erkrankung en und der Dauer des Krankenhausaufenthaltes C difficile ist bei 3 5 von gesunden Erwachsenen und bei bis zu 50 von S uglingen und Jugendlichen vorhanden die asymptomatische Tr ger sowohl der Bakterien als auch seiner Toxine sind Bei der Auswertung von Xpect Clostridium difficile Toxin A B in einer in vier unabh ngigen Labors in den USA durchgef hrten prospektiven Studie lag die Gesamtpr valenz bei 16 LEISTUNGSDATEN Klinische Genauigkeit Die Leistung von Xpect Clostridium difficile Toxin A B wurde an vier Standorten in verschiedenen Regionen der USA getestet Es wurden insgesamt 815 Proben mit dem Xpect Clostridium difficile Toxin A B Test getestet und mit den Ergebnissen aus dem Zytotoxin Assay CTA verglichen CTA Ergebnisse Gesamt Ergebnisse 132
42. en caldo de infusi n de cerebro y coraz n 1 Con una pipeta de transferencia coloque 0 1 ml primera marca en relieve desde la punta de un cultivo en caldo de infusi n de cerebro y coraz n de 72 horas con C difficile sospechado en un tubo de diluci n Procedimiento de ensayo 1 A ada 5 gotas de reactivo conjugado 1 al tubo de diluci n que contiene la muestra diluida 2 A ada 5 gotas de reactivo conjugado 2 al tubo de diluci n que contiene la muestra diluida 3 Mezcle bien el contenido del tubo 4 Con una pipeta de transferencia coloque 0 2 ml segunda marca desde la punta de muestra en el pocillo de muestra circular del dispositivo de ensayo 5 Lea y anote los resultados del ensayo despu s de 20 minutos como se indica en la secci n INTEPRETACI N DE LOS RESULTADOS Los resultados positivos fuertes pueden aparecer antes de los 20 minutos Los resultados no son v lidos despu s de 20 minutos INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS Resultado positivo toxina A y o B presente Un resultado positivo est indicado por dos l neas de color negro de cualquier intensidad una en la zona de ensayo TEST y una en la zona de control CTRL Un resultado positivo indica la presencia de toxina A y o toxina B de C difficile en la muestra 18 Resultado negativo toxina A y o B no detectada Un resultado negativo est indicado por una sola l nea de color negro en la zona de control CTRL Un resultado negativo indica q
43. es Results are invalid beyond 20 minutes INTERPRETATION OF THE TEST Positive Result Toxin A and or B present A positive test is indicated by two black colored lines of any intensity one in the TEST region and one in the control CTRL region A positive test indicates the presence of C difficile Toxin A and or Toxin B in the sample Negative Result Toxin A and or B not detected A negative test is indicated by only one black colored line in the control CTRL region A negative test indicates that C difficile Toxin A and or Toxin B are absent or below the detection limit of the test Invalid Result An invalid result occurs when the TEST line is partial or incomplete or the control CTRL line is absent or incomplete at 20 minutes x pect __ C diff Toxin A B Control line is absent Control or Test line is partial or incomplete If invalid results occur due to restricted flow of the sample along the membrane the specimen should be re tested as follows Re test Specimen Preparation Further dilute the specimen as follows 1 Combine in a clean dilution tube a 4 drops of Specimen Diluent and b 0 1 ml first molded graduated mark from the tip of specimen from the initial specimen preparation in Specimen Diluent without reagents added 2 Mix the preparation by aspirating with the transfer pipette 3 Use 0 1 ml of this diluted specimen preparation and repeat the Test Procedure QUALITY CONTR
44. ewebekultur infekti se Dosis pro ml Konzentration getestet Die folgenden Organismen wurden im Xpect Clostridium difficile Toxin A B test getestet Aeromonas hydrophila Bacillus cereus Bacillus subtilis Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus subsp fetus Campylobacter jejuni subsp jejuni Campylobacter lari Klebsiella pneumoniae Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas asaccharolytica Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Salmonella Typhimurium Serratia liquefaciens Candida albicans Shigella boydii Clostridium botulinum toxin 20 ug ml Shigella dysenteriae Clostridium beijerinickii Shigella flexneri Clostridium difficile non toxigenic Clostridium haemolyticum Clostridium histolyticum Clostridium innocuum Clostridium novyi Clostridium perfringens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sporogenes Clostridium subterminale Clostridium tetani Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Escherichia coli Shigella sonnei Staphylococcus aureus Cowan Staphylococcus epidermidis Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Giardia intestinalis Entamoeba histolytica Adenovirus type 2 Adenovirus type 40 Adenovirus type 41 Coxsackievirus B4 Cytomegalovirus Echovirus type 22 Enterovirus type 69 Rotavirus GERMAN St rende Substanzen Die folgenden Substanzen wurden mit dem Xpect Cl
45. ffice Washington D C Lyerly D M H C Krivan and T D Wilkins 1988 Clin Microbiol Rev 1 1 18 Mandell G L J E Bennett and R Dolin 2000 Mandell Douglas and Bennett s Principles and Practice of Infectious Diseases 5 ed Churchill Livingstone New York NY PACKAGING REF R24650 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 20 Tests Kit REF R24640 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 40 Tests Kit Symbol Legend REF Catalog Number IVD In Vitro Diagnostic Medical Device LAB For Laboratory Use CE Consult Instructions for Use IFU X Temperature Limitation Storage Temp LOT Batch Code Lot Number Use By Expiration Date EC REP CE Xpect is a registered trademark of Remel Inc ATCC is a registered trademark of American Type Culture Collection Pepto Bismol Imodium Kaopectate and Castoria are registered trademarks of Procter amp Gamble McNeil Consumer amp Specialty Pharmaceuticals Pharmacia amp Upjohn Company and The Mentholatum Company Inc respectively ProClin is a trademark of the Rohm and Haas Company European Authorized Representative IFU 24650 Revised August 27 2007 Printed in U S A 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA General Information 800 255 6730 Technical Service 800 447 3641 Order Entry 800 447 3635 Local International Phone 913 888 0939 International Fax 913 895 412
46. h eine schwarze Linie im Kontrollbereich CTRL gekennzeichnet Ein negativer Test weist darauf hin dass C difficile Toxin A und oder B in der Probe nicht vorhanden ist oder unter der Nachweisgrenze des Tests Liegt Ung ltiges Ergebnis Ein ungtltiges Ergebnis liegt vor wenn die TEST Linie nur teilweise oder unvollstandig angezeigt wird oder die Kontrolllinie CTRL nach 20 Minuten fehlt oder unvollstandig ist Kontrolllinie oder Testlinie Kontrolllinie fehlt ist unvollst ndig Falls aufgrund eines eingeschr nkten Ablaufens der Probe entlang der Membran ung ltige Ergebnisse vorliegen sollte die Probe wie folgt erneut getestet werden Neutest der Probenvorbereitung Die Probe wie folgt weiter verd nnen 1 In einem sauberen R hrchen folgende Komponenten kombinieren a 5 Tropfen Probenverd nner undb b 0 1 ml erste Markierung ab Spitze der Probe aus der anf nglichen Probenvorbereitung in Probenverd nner ohne weitere Reagenzien 2 Pr parat durch Aspiration mit der Pipette mischen 3 Testverfahren mit 0 1 ml dieser verd nnten Probenvorbereitung wiederholen QUALIT TSKONTROLLE Intern Der Test enth lt eine integrierte Verfahrenskontrolle Das Erscheinen einer Kontrolllinie an der Kontroll position best tigt dass ein intaktes Konjugat ins Ger t gegeben wurde dass der Kontrolllinien AntiK rper funkitionell aktiv ist und dass ein adaquater kapillar fluss ein getreten ist Ein farbloser Hintergrund im
47. hen 20 40 10 Gebrauchsanweisung 1 IFU GERMAN BEN TIGTE MATERIALIEN NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN 1 Stuhlproben Sammelbeh lter und 2 Labortimer Optionale nicht mitgelieferte Materialien 1 Probentransportmedien 2 BHI Bouillon und 3 Testr hrchen Halter VERFAHREN 1 Die Kit Komponenten und Stuhlproben vor der Verwendung auf Raumtemperatur erwarmen lassen 2 Stuhlproben unabh ngig von der Konsistenz vor dem Test sorgfaltig mischen 3 Das Testgerat vor dem Test aus dem Plastikbeutel nehmen und auf eine flache Oberflache legen 4 Das Ger t und die Probenr hrchen mit einer Patienten oder Kontroll ID versehen Vorbereitung der Proben Frische unkonservierte Stuhlproben 1 Probenverdtinner bis zur markierten Linie zum Probenr hrchen hinzuf gen 0 5 ml a Fur feste Stuhlproben ein h lzernes Abstrichst bchen verwenden und Proben aus unterschiedlichen Bereichen entnehmen 0 2 g 6 8 mm Durchmesser der Probe in das R hrchen geben b F r halb feste oder fl ssige Stuhlproben eine Pipette verwenden um 0 2 ml zweite Markierung von der Spitze der Probe in das R hrchen zu bertragen Sorgf ltig mischen und gro e Partikel setzen lassen 2 Mit Hilfe einer Pipette 0 1 ml erste Markierung von der Spitze dieser Mischung in ein weiteres R hrchen geben Stuhlproben in Cary Blair Beh lter 1 In modifizierten Cary Blair Transportmedien mit Indikator gesammelte Proben werden unverd nn
48. ibles Chacun des quatre sites cliniques a utilis un test sur membrane chromatographique pouvant d tecter la toxine A uniquement Predicate le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile et le test CTA pour chaque chantillon De plus un site de tests cliniques a essay un dosage immunoenzymatique en micropuits pour d tecter les toxines A et B pour chaque chantillon Les r sultats pr sent s ci dessous sont calcul s en utilisant le test CTA comme r f rence L ex cution d Appariels A Compar a CTA n 815 n 267 Kit Xpect Regge Kit Xpect Toxine A B de on Toxine A B de EIA C difficile C difficile Sensibilit 86 3 62 7 91 0 80 6 Sp cificit 96 2 98 8 98 0 97 5 Performances du bouillon de culture cervelle coeur Une tude interne a t men e en utilisant 21 souches de r f rence connues et 36 isolats d chantillons de selles soup onn s de contenir C difficile Les bouillons de culture cervelle coeur ont t test s avec le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile apr s 72 heures d incubation Dans ces conditions le bouillon de culture cervelle c ur de C sordellii ATCC 9714 a entrain une r action positive Il a t trouv un niveau de concordance de 94 7 54 57 avec les valeurs attendues Sensibilit analytique La sensibilit analytique a t valu e en utilisant une toxine A et une toxine B de C difficile purifi es Le kit Xpe
49. ie in dem im Kit enthaltenen Probenverd nner verd nnt wurden k nnen vor dem Testen gek hlt bis zu 24 Stunden aufbewahrt werden Stuhlproben die in modifizierten Cary Blair Transportmedien mit Indikator oder vergleichbaren Medien gesammelt wurden k nnen gek hlt 2 8 C oder bei Zimmertemperatur 20 25 C gelagert und m ssen innerhalb von 5 Tagen nach Entnahme getestet werden Stuhlproben die in Formalin SAF oder PVA konzentriert oder gesammelt wurden sind f r diesen Test nicht geeignet REAGENZIEN UND IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE MATERIALIEN 1 Testger te 20 40 Jeder Plastikbeutel enth lt ein Einmal Testger t mit Trockenmittel die Membranstreifen sind mit den entsprechenden Reagenzien versehen 2 Konjugatreagenz 1 3 0 mlx1 3 0 mlx 2 Blauschwarze mit Maus Anti Toxin A und Kaninchen Anti Toxin B beschichtete Mikropartikel 3 Konjugatreagenz 2 3 0mlx1 3 0mlx2 Biotinylierte Ziege Anti Toxin A und Kaninchen Anti Toxin B 4 Probenverd nner 12 0 mlx1 12 0 mlx2 Gepufferte L sung mit 0 03 ProClin 300 5 Positivkontrolle 2 0 ml x 1 2 0 ml x 2 Kultur Supernatant enth lt C difficile Toxin A und B mit Konservierungsstoffen 6 Negativkontrolle 2 0 mix 1 2 0 mix 2 Pufferl sung mit Konservierungsstoff 7 Einwegpipetten 40 80 Pipetten mit Markierungen in 0 1 ml Stufen 8 Probenr hrchen 40 80 R hrchen f r die Probenentnahme mit 0 5 ml Markierung 9 H lzerne Abstrichstabc
50. illo para la detecci n de toxina A y B con cada muestra Los resultados presentados a continuaci n se calcularon utilizando el ECT como referencia El desmpe o de Dispositivos Compar a CTA n 815 n 267 Xpect Dispositivo Xpect C difficile de C difficile EIE Toxine A B Referencia Toxine A B Sensibilidad 86 3 62 7 91 0 80 6 Especificidad 96 2 98 8 98 0 97 5 Comportamiento en cultivo en caldo de infusi n de cerebro y coraz n Se realiz un estudio interno utilizando 21 cepas de referencia conocidas y 36 aislados de C difficile de muestras de materia fecal sospechadas Se evaluaron los cultivos en caldo de infusi n de cerebro y coraz n con el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B despu s de 72 horas de incubaci n Bajo estas condiciones el cultivo en caldo de infusi n de cerebro y coraz n de C sordellii ATCC 9714 produjo un reacci n positiva Se observ una coincidencia del 94 7 54 57 con los valores esperados Sensibilidad anal tica Se evalu la sensibilidad anal tica utilizando toxina A y toxina B de C difficile purificada El ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B detecta la toxina A a los niveles de gt 6 25 ng ml 0 12 ng ensayo y la toxina B a niveles de gt 40 ng ml 0 76 ng ensayo SPANISH Reactividad cruzada Se analizaron 54 microorganismos con el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B No se observaron reacciones cr
51. ivelli gt 40 0 ng ml 0 76 ng test ITALIAN Reattivit crociata Con il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B si sono valutati cinquantaquattro microrganismi Non stata osservata alcuna reattivit crociata Gli isolati batterici e dei lieviti sono stati analizzati a una concentrazione di 10 unit formanti colonie per ml Gli isolati virali sono stati analizzati a concentrazioni di 10 10 TCIDso dose infetta per coltura di tessuti per ml seguenti orgaismi sono stati analizzati nel test Xpect Clostridium difficile Toxin A B Aeromonas hydrophila Bacillus cereus Bacillus subtilis Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus subsp fetus Campylobacter jejuni subsp jejuni Campylobacter lari Candida albicans Clostridium botulinum toxin 20 ug ml Clostridium beijerinickii Clostridium difficile non toxigenic Clostridium haemolyticum Clostridium histolyticum Clostridium innocuum Clostridium novyi Clostridium perfringens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sporogenes Clostridium subterminale Clostridium tetani Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Escherichia coli Sostanze interferenti Klebsiella pneumoniae Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas asaccharolytica Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Salmonella Typhimurium Serratia liquefaciens Shigella boydii Shigella dysen
52. ivo si el anticuerpo de la linea de control est funcional mente activo y si ha ten do lugar el flujo capilar a decuado Uno sfondo chiaro nella zona dei risultati ITALIAN viene considerato un controllo negativo interno Se il test stato eseguito correttamente e se i reagenti funzionano adeguatamente lo sfondo si schiarir per fornire un risultato discernibile Esterno Utilizzare i controlli di qualit positivi e negativi forniti con il kit con ogni spedizione e nuovo numero di lotto di kit ricevuto Il controllo positive viene utilizzato per verificare la reattivit dei reagenti associati al saggio e non previsto per garantire la precisione nel punto di interruzione del saggio analitico Ogni laboratorio deve seguire i requisiti statali e locali vigenti Per l uso aggiungere 0 1 ml 5 gocce del controllo a un tubo di diluizione e trattare conformemente alla procedura di test descritta in precedenza non diluire i controlli con diluente per campioni Se i test di controllo qualit forniscono risultati aberranti i risultati ottenuti con i campioni in esame non devono essere refertati LIMITAZIONI 1 Un test con risultato positivo non implica la presenza della malattia Il test rileva la presenza della tossina A e o della tossina B nei campioni fecali risultati vanno utilizzati unitamente ad altre metodiche cliniche al fine di stabilire la diagnosi 2 Come per tutti i tipi di test diagnostici in vitro un risultato
53. ivos se suministran a la concentraci n de trabajo necesaria y deben aplicarse directamente desde los frascos cuentagotas No diluir 5 No intercambie los reactivos entre kits con diferentes n meros de lote 6 No utilice los reactivos despu s de la fecha de caducidad impresa en el envase 7 La contaminaci n microbiana de los reactivos puede reducir la exactitud del ensayo OBTENCI N ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras de materia fecal deben recogerse en recipientes limpios con cierre herm tico Las muestras frescas sin tratar deben guardarse a 2 8 C y utilizarse antes de las 72 horas Si las muestras frescas no se pueden analizar dentro de las 72 horas deben congelarse a 20 C o a una temperatura inferior en un congelador sin dispositivo antiescarcha y analizarse dentro de los 2 meses Evite congelar y descongelar varias veces Las muestras frescas diluidas en el diluyente de muestra suministrado en el kit pueden conservarse refrigeradas hasta 24 horas antes del ensayo Las muestras de materia fecal recogidas en medio de transporte de Cary Blair con indicador o equivalente pueden guardarse refrigeradas 2 8 C o a temperatura ambiente 20 25 C y deben utilizarse dentro de los 5 meses a partir de su obtenci n Las muestras de materia fecal concentradas o recogidas en formol SAF PVA no son adecuadas para este ensayo REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS 20 40 ensayos 1 Dispositivos de ensa
54. lla boydii Shigella dysenteriae Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Cowan Staphylococcus epidermidis Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Giardia intestinalis Entamoeba histolytica Adenovirus type 2 Adenovirus type 40 Adenovirus type 41 Coxsackievirus B4 Cytomegalovirus Echovirus type 22 Enterococcus faecium Escherichia coli Enterovirus type 69 Rotavirus Substances interf rentes Les substances suivantes ont t test es avec le kit Xpect et aucune interf rence n a t observ e lors du test pour les substances test es aux niveaux indiqu s sang mucus graisse f cale Pepto Bismol 10 viv Imodium AD 10 v v Kaopectate 10 v v Castoria 10 v v vancomycine 12 5 mg ml m tronidazole 12 5 mg ml et sulfate de baryum 12 5 mg ml Reproductibilit Des tests de reproductibilit ont t effectu s sur trois sites dont un site interne sur quatre jours avec six chantillons en aveugle Les chantillons taient constitu s d chantillons f caux positifs et n gatifs Dans 98 6 des cas 71 72 les chantillons ont donn les r sultats attendus avec le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile BIBLIOGRAPHIE 1 Gerding D N S Johnson L R Peterson M E Mulligan and J Silva Jr 1995 Infect Control Hosp Epidemiol 16 459 477 2 Limaye A P D K Turgeon B T Cookson and T R Fritsche 2000 J Clin
55. lostridium innocuum Clostridium novyi Clostridium perfringens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sporogenes Clostridium subterminale Clostridium tetani Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Escherichia coli Interfering Substances Clostridium difficile Klebsiella pneumoniae Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas asaccharolytica Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Salmonella Typhimurium Serratia liquefaciens Shigella boydii Shigella dysenteriae Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Cowan Staphylococcus epidermidis Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Giardia intestinalis Entamoeba histolytica Adenovirus type 2 Adenovirus type 40 Adenovirus type 41 Coxsackievirus B4 Cytomegalovirus Echovirus type 22 Enterovirus type 69 Rotavirus The following substances were tested with the Xpect Clostridium difficile Toxin A B test and no interference was observed in the assay for any substance tested at the indicated levels blood mucous fecal fat Pepto Bismol 10 v v Imodium AD 10 v v Kaopectate 10 viv Castoria 10 v v vancomycin 12 5 mg ml metronidazole 12 5 mg ml and barium sulfate 12 5 mg ml Reproducibility Reproducibility testing was conducted at three sites including one in house site on four separate days with six blinded sa
56. luente per campioni allo scopo di solubilizzare le tossine Una parte del campione diluito viene quindi miscelata a un volume di coniugato 1 contenente anticorpi alla tossina A e alla tossina B abbinati a microparticelle colorate nonch un volume di coniugato 2 contenente anticorpi biotinilati alla tossina A e alla tossina B Un volume di questa miscela viene quindi trasferito a un dispositivo di test avente la streptavidina immobilizzata come linea di test e un anticorpo anti immunoglobulina di capra come linea di controllo Gli immunocomplessi di tossina e di anticorpi coniugati formano una striscia visibile mentre fluiscono sulla linea di test coniugati di particelle colorati in eccesso formano una striscia visibile alla linea di controllo al fine di documentare che il test sta funzionando adeguatamente 13 CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Conservare i dispositivi per test in confezioni metallizzate sigillate a 2 30 C temperatura ambiente o refrigerati Conservare tutti i flaconi e le fiale dei kit di reagenti a 2 8 C Non surgelare n surriscaldare Portare i componenti a temperatura ambiente prima dell uso Quindi miscelare delicatamente i reagenti in flacone Dopo l uso rimettere in frigorifero i reagenti non utilizzati PRECAUZIONI 1 Per uso diagnostico In Vitro 2 Si raccomanda di prendere le normali precauzioni contro eventuali rischi biologici sterilizzando opportunamente dopo l uso campioni contenitori e dispositivi pe
57. mmatoire chronique intestinale et la maladie de Crohn L infection C difficile toxigene peut mettre en jeu le pronostic vital mais lorsqu elle est correctement trait e le taux de mortalit des patients est faible Par cons quent il est important pour les m decins de pouvoir d marrer le traitement correspondant et de prendre des mesures appropri es pour maitriser la contamination nosocomiale grace a un diagnostic rapide PRINCIPE Le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile est un test immunochromatographique qualitatif qui d tecte les toxines A et B du bacille C difficile dans les chantillons de selles ou les cultures de C difficile toxig ne Lors du test l chantillon est d abord dilu avec du diluant d chantillons afin de faciliter la solubilisation des toxines Une partie de l chantillon dilu est alors m lang une dose de conjugu 1 contenant des anticorps dirig s contre la toxine A et contre la toxine B associ des microp articules color es plus une dose de Conjugu 2 contenant des anticorps biotinyl s dirig s contre les toxines A et B Une dose de ce m lange est transf r e dans un dispositif de test utilisant de la streptavidine immobilis e comme ligne de test et un anticorps de ch vre anti immunoglobuline comme ligne de contr le Les complexes immuns de toxines et d anticorps conjugu s forment une bande visible lorsqu ils passent sur la ligne de test Les conjugu s de particules c
58. mples The samples consisted of known positive and negative stool specimens The samples produced the expected results with the Xpect Clostridium difficile Toxin A B test 98 6 71 72 of the time ENGLISH BIBLIOGRAPHY 1 2 3 2300 11 12 Gerding D N S Johnson L R Peterson M E Mulligan and J Silva Jr 1995 Infect Control Hosp Epidemiol 16 459 477 Limaye A P D K Turgeon B T Cookson and T R Fritsche 2000 J Clin Microbiol 38 1696 1697 Alfa M J A Kabani D Lyerly S Moncrief L M Neville A Al Barrak G K H Harding B Dyck K Olekson and J M Embil 2000 J Clin Microbiol 38 2706 2714 Barbut F V Lalande B Burghoffer H V Thien E Grimprel and J Petit 2002 J Clin Microbiol 40 2079 2083 Johnson S S P Sambol J S Brazier M Delm e V Avesani M M Merrigan and D N Gerding 2003 J Clin Microbiol 41 1543 1547 Kato H N Kato K Watanabe N Iwai H Nakamura T Yamamoto K Suzuki S Kim Y Chong and E B Wasito 1998 J Clin Microbiol 36 2178 2182 Johnson S S A Kent K J O Leary M M Merrigan S P Sambol L R Peterson and D N Gerding 2001 Ann Intern Med 135 434 438 Wilkins T D and D M Lyerly 2003 J Clin Microbiol 41 531 534 Fedorka D P 2002 Clin Microbiol Newsletter 24 76 79 Richmond J Y and R W McKinney 1999 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed U S Government Printing O
59. n A oder Toxin B nicht aus Dieser Fall kann eintreten wenn der Toxinwert in der Probe unterhalb der Nachweisgrenze des Tests liegt Die Toxinkonzentration korreliert weder mit dem Vorhandensein noch mit dem Schweregrad der Krankheit Die Testergebnisse sollten im Kontext anderer Laborbefunde und der Ergebnisse anderer diagnostischer Verfahren interpretiert werden 3 Clostridium sordellii liegt regul r nicht im menschlichen Darm vor produziert aber ein Toxin HT das hnliche biologische physiochemische und immunchemische Eigenschaften aufweist wie C difficile Toxin A Diese Ahnlichkeit kann bei Diagnosetests f r den Nachweis von C difficile Toxin A zu einer Kreuzreaktivit t f hren und oder B 4 Die ordnungsgem e Probenentnahme und verarbeitung sind entscheidend f r eine optimale Durchf hrung des Tests Siehe Abschnitt Probenentnahme Lagerung und Transport 5 Die Leistungsmerkmale dieses Tests wurden fur p diatrische Patientenpopulationen noch nicht vollst ndig ausgewertet 6 Ein High Dose Hook Effekt wurde nicht w hrend der BHI Bouillonkultur beobachtet in der C difficile ausgewertet wurde nachdem man in der reinen Kultur f r 72 hours gewachsen war ERWARTETE WERTE Ambulant erworbene CDAD F lle sind bekannt aber die H ufigkeit ist gering lt 1 Fall pro 10 000 Antibiotika Rezepte Dies kann daran liegen dass die Diagnosetests zum Nachweis von CDAD f r ambulante Patienten nicht h ufig genug ausgef hrt werd
60. n valide lorsque la ligne TEST est partielle ou incompl te ou bien lorsque la ligne de contr le CTRL est inexistante ou incompl te apr s 20 minutes x pect C diff Toxin A B x pect C diff Toxin A B x pect C diff Toxin A B CTRL TEST remel La ligne de La ligne de Contr le Contr le est ou de Test est partielle inexistante ou incompl te Si des r sultats invalides sont obtenus en raison d un mauvais coulement de l chantillon le long de la membrane cet chantillon doit tre test de nouveau comme indiqu ci apr s Pr paration des chantillons pour un nouveau test Diluer un peu plus l chantillon tel qu indiqu ci dessous 1 Dans un tube de dilution propre m langer a 5 gouttes de diluant d chantillon et b 0 1 ml premi re graduation en partant de la pointe d chantillon provenant de l chantillon initial dilu avec le diluant d chantillon sans r actif ajout 2 M langer la pr paration en aspirant avec la pipette de transfert 3 Utiliser 0 1 ml de cette pr paration d chantillon dilu et recommencer la proc dure de test FRENCH CONTR LE QUALIT Interne Un contr le de la proc dure est inclus dans le test L apparition d une ligne de contr le l emplacement CTRL permet de v rifier quele conjugu ajount dans le dispositif est intact que l anticorps de la ligne de contr le est actif et que la migration capillaire est a d quate Un fond clair dans la z
61. ne Ausk nfte 800 255 6730 Technische Unterst tzung 800 447 3641 Bestellungen 800 447 3635 Telefon lokal international 913 888 0939 Fax international 913 895 4128 Website www remel com E Mail remel remel com FRENCH DT remel Clostridium difficile x pect Tin AB APPLICATION Le test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile de Remel est un test immunochromatographique in vitro rapide pour la d tection qualitative directe de la toxine A et ou B du Clostridium difficile dans les chantillons f caux de patients chez lesquels on suspecte une maladie li e au C difficile Le test est congu pour faciliter le diagnostic des maladies li es au C difficile Le test peut galement tre utilis pour confirmer la pr sence de C difficile toxigene dans un bouillon cervelle coeur RESUME ET EXPLICATION L agent Clostridium difficile a t identifi pour la premi re fois en 1935 mais les liens entre l organisme et la maladie n ont t tablis qu en 1977 Le C difficile est un bacille ana robie Gram positif formant des spores et produisant des toxines La pr sentation clinique de l infection au C difficile comporte par ordre croissant de s v rit les porteurs asymptomatiques les colites associ es aux antibiotiques les colites pseudomembraneuses et les colites fulminantes Une baisse de la flore microbienne normale du c lon g n ralement caus e par une antibioth rapie permet une surcr
62. oissance de l agent C difficile Les sympt mes des colites associ es aux antibiotiques se d clarent g n ralement entre quatre et dix jours apr s le d but de l antibioth rapie La plupart des souches pathog nes de C difficile produisent deux toxines la toxine A ent rotoxine et la toxine B cytotoxine qui sont les principaux facteurs de virulence dans l organisme Il semble que l expression de l activit de ces toxines soit due un encha nement d v nements La toxine A est l g rement cytopathog ne mais elle induit d importants mouvements de fluides et une inflammation des muqueuses La toxine B est fortement cytopathog ne mais son r le dans le processus de la maladie n est pas clairement tabli On a identifi diff rentes souches n gatives la toxine A et positives la toxine B totalement pathog nes et capables d entrainer l apparition de l ensemble des maladies cit es La pr valence de ces variantes diff re selon les tablissements et les zones g ographiques La maladie C difficile se d veloppe en priorit chez les patients hospitalis s Les patients atteints d une maladie C difficile rejettent des spores r siduelles dans les selles spores qui peuvent survivre jusqu a cing mois dans la nature Les signes cliniques et pathologiques des maladies a C difficile ne sont pas faciles a distinguer de ceux des autres maladies gastro intestinales comme la colite ulc reuse la maladie infla
63. olor es en exc s forment une bande visible dans la ligne de contr le indiquant que le test fonctionne correctement CONSERVATION Conserver les dispositifs de test dans des poches herm tiquement ferm es entre 2 et 30 C temp rature ambiante ou au r frig rateur Conserver tous les flacons et bouteilles de r actif du kit entre 2 et 8 C Ne pas congeler ou surchauffer Attendre que les composants soient temp rature ambiante avant de les utiliser Avant utilisation m langer doucement les bouteilles de r actif Remettre les r actifs non utilis s dans le r frig rateur apr s utilisation PR CAUTIONS 1 Pour utilisation diagnostique in vitro 2 Toutes les pr cautions contre les risques microbiologiques doivent tre prises et il est indispensable de bien st riliser les pr l vements les r cipients et les dispositifs de test apr s usage Consulter la documentation appropri e lorsque cela est n cessaire 3 Toutes les instructions doivent tre lues attentivement et scrupuleusement respect es 4 Les r actifs sont pr ts a l emploi et peuvent tre transf r s directement depuis les flacons compte gouttes Ne pas diluer les r actifs 5 Les r actifs provenant de kits de diff rents lots ne sont pas interchangeables 6 Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption 7 La contamination microbienne des r actifs peut diminuer la pr cision du test PR L VEMENT CONSERVATION ET TRANSPORT DES
64. on S S P Sambol J S Brazier M Delm e V Avesani M M Merrigan and D N Gerding 2003 J Clin Microbiol 41 1543 1547 6 Kato H N Kato K Watanabe N Iwai H Nakamura T Yamamoto K Suzuki S Kim Y Chong and E B Wasito 1998 J Clin Microbiol 36 2178 2182 7 Johnson S S A Kent K J O Leary M M Merrigan S P Sambol LR Peterson and D N Gerding 2001 Ann Intern Med 135 434 438 Wilkins T D and D M Lyerly 2003 J Clin Microbiol 41 531 534 Fedorka D P 2002 Clin Microbiol Newsletter 24 76 79 0 Richmond J Y and R W McKinney 1999 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed U S Government Printing Office Washington D C 11 Lyerly D M H C Krivan and T D Wilkins 1988 Clin Microbiol Rev 1 1 18 12 Mandell G L J E Bennett and R Dolin 2000 Mandell Douglas and Bennett s Principles and Practice of Infectious Diseases 5 ed Churchill Livingstone New York NY 60 00 PRESENTACION REF R24650 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 20 Tests Kit REF R24640 Xpect Clostridium difficile Toxin A B 40 Tests Kit S MBOLOS REF Numero de cat logo Dispositivo m dico para diagn stico in vitro Para el uso del laboratorio Consulte las instrucciones de uso L mite de temperatura Temp de almacenamiento C digo de lote N mero de lote Fecha de caducidad EC REP CE Xpect es una marca comerci
65. one de r sultats est consid r comme un contr le interne n gatif Si le test a t effectu correctement et si les r actifs fonctionnent correctement le fond se d gagera pour donner un r sultat discernable Externe Les contr les qualit positif et n gatif fournis avec le kit doivent tre test s chaque r ception d un kit portant un nouveau num ro de lot Le contr le positif est utilis pour v rifier la r activit des r actifs associ s au test et n est pas destin garantir la pr cision lors de la cl ture du dosage analytique Il incombe chaque laboratoire de s assurer du respect des r glementations nationales et locales en vigueur Pour utiliser les contr les ajouter 0 1 ml 5 gouttes de contr le dans un tube de dilution et proc der conform ment la proc dure de test expliqu e plus haut ne pas diluer les contr les avec du diluant d chantillon En cas de r sultats de contr le qualit aberrants ne pas tenir compte des r sultats du patient LIMITES 1 Un test positif n indique pas n cessairement la pr sence d une maladie associ e Le test d tecte la pr sence de toxine A et ou de toxine B dans les chantillons f caux Pour tablir le diagnostic il faut utiliser le r sultat du test en conjonction avec les autres r sultats cliniques 2 Comme dans tous les tests diagnostiques in vitro un r sultat de test n gatif n exclut pas l ventuelle pr sence de toxine A ou B de C difficile
66. ostridium difficile Toxin A B test getestet und im Assay wurden f r keine der an den angegebenen Leveln getesteten Substanzen St rungen beobachtet Blut Schleimhaut Stuhlfett Pepto Bismol 10 v v Imodium AD 10 v v Kaopectate 10 v v Castoria 10 v v Vancomycin 12 5 mg ml Metronidazol 12 5 mg ml und Barium Sulfat 12 5 mg ml Wiederholbarkeit Wiederholbarkeistests wurden an drei Standorten darunter ein interner Standort an vier unterschiedlichen Tagen mit sechs Blindporben ausgef hrt Bei den Proben handelte es sich um bekannte positive und negative Stuhlproben Die Proben produzierten mit dem Xpect Clostridium difficile Toxin A B Test das erwartete Ergebnis zu 98 6 71 72 on ee Gerding D N S Johnson L R Peterson M E Mulligan and J Silva Jr 1995 Infect Control Hosp Epidemiol 16 459 477 2 Limaye AP D K Turgeon B T Cookson and T R Fritsche 2000 J Clin Microbiol 38 1696 1697 3 Alfa M J A Kabani D Lyerly S Moncrief L M Neville A Al Barrak G K H Harding B Dyck K Olekson and J M Embil 2000 J Clin Microbiol 38 2706 27 14 4 Barbut F V Lalande B Burghoffer H V Thien E Grimprel and J Petit 2002 J Clin Microbiol 40 2079 2083 5 Johnson S S P Sambol J S Brazier M Delm e V Avesani M M Merrigan and D N Gerding 2003 J Clin Microbiol 41 1543 1547 6 Kato H N Kato K Watanabe N Iwai H Nakamura T Yamamoto K
67. ovette di test PROCEDIMENTO 1 Portare i componenti del kit e i campioni fecali a temperatura ambiente prima dell uso 2 Miscelare accuratamente i campioni fecali prima del test indipendentemente dalla consistenza 3 Quando si pronti ad eseguire il test estrarre il dispositivo per test dalla confezione e posizionarlo su una superficie piatta 4 Etichettare il dispositivo e le provette di diluizione con l identificazione del paziente o del controllo Preparazione del campione Campioni fecali freschi non conservati 1 Aggiungere il diluente per campioni fino alla linea marcata sulla provetta di diluizione 0 5 ml a Per campioni fecali solidi usare un tamponcino applicatore in legno e campionare da aree separate del campione Trasferire una porzione da 0 2 g 6 8 mm di diametro di feci alla provetta di diluizione b Per campioni fecali semi solidi o liquidi usare una pipetta di trasferimento per trasferire 0 2 ml seconda tacca graduata dalla punta di campione alla provetta di diluizione 2 Miscelare accuratamente e lasciar depositare i particolati grandi 3 Usare una pipetta di trasferimento per dispensare 0 1 ml prima tacca graduata incisa dalla punta di questo preparato in un altra provetta di diluizione Campioni fecali in Cary Blair 1 campioni raccolti in terreno di trasporto Cary Blair modificato con indicatore vengono usati senza ulteriore diluizione 2 Miscelare accuratamente i campioni
68. oxine A et d anticorps de lapin antitoxine B 3 R actif conjugu 2 3 0 mix 1 3 0 mix 2 Anticorps de ch vre biotinyl s antitoxine A et anticorps de lapin antitoxine B 4 Diluant d chantillon 12 0 mix 1 12 0 ml x 2 Solution tamponn e avec 0 03 de ProClin 300 5 Contr le positif 2 0 mix 1 2 0 mlx 2 Surnageant de culture contenant les toxines A et B de C difficile avec conservateur 6 Contr le n gatif 2 0 ml x 1 2 0 ml x 2 Solution tamponn e avec conservateur 7 Pipettes de transfert jetables 40 80 Les pipettes sont gradu es tous les 0 1 m 8 Tubes de dilution 40 80 Tubes pour d chantillons avec un volume marqu de 0 5 ml 9 B tonnets applicateurs en bois 20 40 10 Mode d emploi 1 IFU pr paration FRENCH MAT RIELS REQUIS MAIS NON FOURNIS 1 Pot s pour pr l vement des chantillons de selles et 2 Minuteur Accessoires facultatifs non fournis 1 Milieux de transport d chantillons 2 Bouillon cervelle coeur et 3 Support de tubes a essai PROCEDURE 1 Laisser les composants du kit et les chantillons de selles atteindre la temp rature ambiante avant utilisation 2 Bien m langer les chantillons f caux avant le test quelle que soit la consistance 3 Lorsque tout est pr t pour le test sortir le dispositif de test de la poche m tallis et le placer sur une surface plane 4 Apposer une tiquette identifiant le patient ou le contr le sur le
69. pathogenen St mme von C difficile produzieren zwei Toxine Toxin A Enterotoxin und Toxin B Zytotoxin bei denen es sich um die prim ren Virulenzfaktoren f r den Organismus handelt Diese scheinen eine Ereigniskaskade zu sein die in der Expression der Aktivit t dieser Toxine resultiert Toxin A ist mild zytopathisch f hrt aber zu gro en Fl ssigkeitsverschiebungen und zu Schleimhautentz ndungen Toxin B ist ein potentes Zytotoxin aber seine Rolle im Krankheitsprozess ist derzeit noch nicht vollst ndig gekl rt Variante St mme die bekannterma en Toxin A negativ und Toxin B positiv sind sind vollst ndig pathogen und in der Lage das volle Spektrum der Krankheit hervorzurufen Die Pr valenz dieser varianten Isoformen variiert je nach Einrichtung und geografischem Standort Die C difficile assoziierte Krankheit CDAD tritt prim r bei hospitalisierten Patienten auf Personen mit CDAD geben Sporen im Stuhl ab die bis zu f nf Monate in der Umgebung berleben k nnen Die klinische und pathologischen Merkmale von CDAD sind von denen anderer gastrointestinaler Krankheiten z B Colitis ulcerosa chronische Entz ndung des Dickdarms und Crohn s Krankheit nicht einfach zu unterscheiden Eine Infektion mit toxigenem C difficile ist ein potenziell lebensbedrohlicher Krankheitsprozess bei entsprechender Behandlung sind die Sterblichkeitsraten jedoch niedrig Damit der Arzt die geeignete Therapie initiieren und die f r die Kont
70. r test Consultare la bibliografia appropriata se necessario 3 Leggere con attenzione le istruzioni contenute in questo documento e seguirle scrupolosamente 4 reagenti sono forniti gi diluiti in modo ottimale e devono essere dispensati direttamente dai flaconi contagocce Non diluire i reagenti 5 Non scambiare alcun reagente di un kit con altri di un lotto differente 6 Non utilizzare reagenti scaduti 7 La contaminazione batterica dei reagenti pu ridurre la precisione del saggio RACCOLTA CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI campioni devono essere prelevati utilizzando contenitori di plastica puliti ermeticamente sigillati e a prova di perdite campioni fecali freschi e non trattati devono essere conservati a 2 8 C ed esaminati entro 72 ore dalla raccolta Nel caso in cui non sia possibile esaminare i campioni freschi nel giro di 72 ore essi possono venire congelati a una temperatura di 20 C o inferiore in un freezer non a sbrinamento automatico ed esaminati entro 2 mesi dalla raccolta Evitare numerosi cicli di congelamento e scongelamento campioni freschi diluiti nel diluente per campioni fornito nel kit possono essere conservati refrigerati fino ad un massimo di 24 ore prima dell analisi I campioni fecali raccolti nel terreno di trasporto Cary Blair modificato con indicatore o equivalente possono essere refrigerati 2 8 C o conservati a temperatura ambiente 20 25 C e devono essere es
71. re adeguato Si no aparece ninguna banda en el fondo en el area de resultados se considera que el control interno es negativo Si el ensayo se realiz correctamente y los reactivos est n funcionando normalmente el fondo desaparecer para proporcionar un resultado discernible SPANISH Externo los controles de calidad positivo y negativo suministrados con el kit deben realizarse en cada lote nuevo recibido El control positivo se utiliza para comprobar la reactividad de los reactividad de los reactivos asociados con el ensayo y no garantiza la precisi n al valor de corte del ensayo anal tico Cada laboratorio debe cumplir con los requisitos locales y de su estado Para utilizar estos controles a ada 0 1 ml 5 gotas del control a un tubo de diluci n y proc selo de acuerdo con el procedimiento de ensayo que se describe m s arriba no diluya los controles con diluyente de muestra Si se observan resultados an malos en el control de calidad no deben comunicarse los resultados obtenidos LIMITACIONES 1 Un resultado positivo no determina la presencia de la enfermedad El ensayo detecta la presencia de toxina A y o B en muestras fecales Los resultados deben utilizarse junto con otros hallazgos cl nicos para establecer un diagn stico 2 Al igual que en todos los ensayos de diagn stico in vitro un resultado negativo no excluye la posibilidad de que haya presente toxina A o toxina B de C difficile y puede tener lugar cuando el
72. rolle der nosokomialen Verbreitung erforderlichen Ma nahmen treffen kann ist eine schnelle Diagnose enorm wichtig TESTPRINZIP Der Xpect Clostridium difficile Toxin A B test ist ein qualitativer immunochromatografischer Assay zum Nachweis von C difficile Toxin A und Toxin B in Stuhlproben oder Kulturen von toxigenem C difficile F r den Test wird eine Probe zun chst mit Probenverd nner verd nnt um die Aufl sung der Toxine zu unterst tzen Anschlie end wird ein Teil der verd nnten Probe mit einer bestimmten Menge Konjugat 1 gemischt das an farbige Mikropartikel gebundene Antik rper f r Toxin A und Toxin B enth lt sowie ein Teil mit einer bestimmten Menge Konjugat 2 das biotinylierte Antik rper f r Toxin A und Toxin B enth lt Anschlie end wird ein Teil dieser Mischung in ein Testger t gegeben wobei immobilisiertes Streptavidin als Testlinie und Ziege Anti Immunoglobulin Antik rper als Kontrolllinie verwendet werden Die Immunkomplexe des Toxins und die konjugierten Antik rper bilden ein sichtbares Band w hrend sie ber die Testlinie flie en bersch ssige Farbpartikelkonjugate bilden an der Kontrolllinie ein sichtbares Band und dokumentieren so dass der Test ordnungsgem funktioniert LAGERUNG Testmaterialien in versiegelten Verpackungen bei 2 30 C lagern Raumtemperatur oder gek hlt Alle Kit Reagenzienflaschen bei 2 8 C lagern Nicht einfrieren oder berhitzen Die Komponenten vor der Verwendung auf
73. rwendung von CTA als Referenz ermittelt Leistund der Vorrichtungen Hatzu CTA Verglichen n 815 n 267 Xpect Xpect C difficile Pr dikatger t C difficile EIA Toxin A B Toxin A B Empfindlichkeit 86 3 62 7 91 0 80 6 Spezifit t 96 2 98 8 98 0 97 5 Leistung mit BHI Bouillonkultur In einer Inhouse Studie wurden 21 bekannte Referenzst mme und 36 Stuhlproben mit Verdacht auf C difficile Isolaten untersucht Die BHI Bouillonkulturen wurden im Anschluss an eine 72 st ndige Inkubation mit dem Xpect Clostridium difficile Toxin A B test getestet Unter diesen Bedingungen produzierte die BHI Bouillonkultur von C sordellii ATCC 9714 eine positive Reaktion Das Ergebnis war eine Ubereinstimmung von 94 7 54 57 mit den erwarteten Werten Analytische Empfindlichkeit Die analytische Empfindlichkeit wurde unter Verwendung von purifiziertem C difficile Toxin A und Toxin B ausgewertet Der Xpect Clostridium difficile Toxin A B test erkennt Toxin A bei Konzentrationen von gt 6 25 ng ml 0 12 ng test und Toxin B bei Konzentrationen von gt 40 0 ng ml 0 76 ng Test Kreuzreaktivit t Es wurden 54 Mikroorganismen mit dem Xpect Clostridium difficile Toxin A B test ausgewertet Es wurde keine Kreuzreaktivit t beobachtet Bakterien und Hefeisolate wurden bei 10 koloniebildenden Einheiten pro ml Konzentration getestet Virale Isolate wurden bei Konzentrationen von 10 bis 10 TCIDso G
74. si sospetta la presenza di malattie associate al C difficile C difficile associated disease CDAD Il test indicato per l uso come ausilio nella diagnosi di CDAD Il test pu inoltre essere usato per la conferma di C difficile tossigeno da un brodo di coltura Brain Heart Infusion BHI DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Il Clostridium difficile stato descritto per la prima volta nel 1935 ma solo nel 1977 sono stati fatti collegamenti fra l organismo e la malattia Il C difficile un bacillo anaerobico gram positivo che produce tossina e forma spore La presentazione clinica dell infezione da C difficile comprende in ordine crescente di gravit carrier asintomatici colite associata agli antibiotici colite pseudomembranosa PMC e colite fulminante Una riduzione della normale flora microbica nel colon normalmente causata da terapia antibiotica consente una sovracrescita del C difficile sintomi della colite associata agli antibiotici iniziano di solito da quattro a dieci giorni dopo l inizio del trattamento antibiotico La maggior parte dei ceppi patogeni di C difficile producono due tossine la tossina A enterotossina e la tossina B citotossina che sono i fattori di maggiore virulenza per l organismo Sembra esservi una cascata di eventi che generano l espressione dell attivit di queste tossine La tossina A scarsamente citopatica ma induce grandi spostamenti di fluidi e un infiammazione delle mucose La tossina
75. solubilize the toxins A portion of the diluted sample is then mixed with a volume of Conjugate 1 containing antibodies to Toxin A and Toxin B coupled to colored microparticles plus a volume of Conjugate 2 containing biotinylated antibodies to Toxin A and Toxin B A volume of this mixture is transferred to a test device having immobilized streptavidin as a test line and goat anti immunoglobulin antibody as a control line Immunocomplexes of toxin and conjugated antibodies form a visible band as they flow across the test line Excess colored particle conjugates form a visible band at the control line to document that the test is functioning properly STORAGE Store test devices in sealed foil pouches at 2 30 C room temperature or refrigerated Store all kit reagent bottles and vials at 2 8 C Do not freeze or overheat Allow components to equilibrate to room temperature before use Mix bottled reagents gently prior to use Return the unused reagents to the refrigerator after use PRECAUTIONS 1 For In Vitro Diagnostic Use 2 Standard precautions should be taken against the dangers of biological hazards by properly sterilizing specimens containers and test devices after use Consult appropriate references when necessary 3 Directions should be read and followed carefully 4 Reagents are provided at the necessary working strength and are to be dispensed directly from the dropper bottles Do not dilute reagents 5 Do not interchange r
76. t tre d au fait que les tests de diagnostic ne sont pas effectu s assez souvent en consultation ambulatoire pour d tecter les maladies a C difficile Les colites a C difficile sont beaucoup plus fr quentes chez les patients hospitalis s elles repr sentent la quatrieme maladie nosocomiale la plus r pandue d apr s les Centers for Disease Control and Prevention La bact rie C difficile est responsable de 20 30 des diarrh es associ es aux antibiotiques et de plus de 90 des colites pseudo membraneuses Le taux d incidence des maladies nosocomiales C difficile peut varier selon les populations hospitali res et d pend des pr dispositions existantes telles que l augmentation de l ge des patients le type et la dur e de la th rapie antimicrobienne la s v rit de la ou des maladie s sous jacente s et la dur e de l hospitalisation C difficile est pr sent chez 3 5 des adultes en bonne sant et jusqu 50 des enfants en bas ge et des jeunes adultes porteurs de la bact rie et de ses toxines de fa on asymptomatique 7 Un taux global de pr valence de 16 a t observ lors de l valuation du test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile dans une tude prospective men e par quatre laboratories ind pendants aux Etats Unis 11 CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES Exactitude clinique Les performances du test Xpect Toxine A B de Clostridium difficile ont t valu es dans quatre r gions diff
77. t angewendet 2 Probe vor dem Test gr ndlich sch tteln 3 Mit Hilfe einer Pipette 0 1 ml erste Markierung von der Spitze dieser Probe in ein weiteres R hrchen geben BHI Bouillonkultur 1 Mit Hilfe einer Pipette 0 1 ml erste Markierung von der Spitze einer 72 Stunden BHI Bouillonkultur mit Verdacht auf C difficile in ein weiteres R hrchen geben Testdurchf hrung 1 5 Tropfen von Konjugatreagenz 1 in das R hrchen mit der verd nnten Probe geben 2 5 Tropfen von Konjugatreagenz 2 in das R hrchen mit der verd nnten Probe geben 3 Den Inhalt des Testr hrchens sorgf ltig mischen 4 Mit Hilfe einer Pipette 0 2 ml zweite Markierung unterhalb der Pipettenspitze der Probe in die runde Probenmulde des Testger ts geben 5 Die Testergebnisse gem den Anweisungen im Abschnitt zur AUSWERTUNG nach 20 Minuten ablesen und aufzeichnen Ausgepr gt positive Ergebnisse k nnen vor Ablauf von 20 Minuten angezeigt werden Ergebnisse nach Ablauf der 20 Minuten sind ung ltig AUSWERTUNG DES TESTS Positives Ergebnis Toxin A und oder B vorhanden Ein positiver Test ist durch zwei schwarze Linien beliebiger Intensit t gekennzeichnet eine im TEST Bereich und eine im Kontrollbereich CTRL Ein positiver Test weist auf Vorhandensein von C difficile Toxin A und oder B in der Probe hin x pect diff Toxin A B O remel Negatives Ergebnis Toxin A und oder B nicht festgestellt Ein negativer Test ist durc
78. teriae Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Cowan Staphylococcus epidermidis Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Giardia intestinalis Entamoeba histolytica Adenovirus type 2 Adenovirus type 40 Adenovirus type 41 Coxsackievirus B4 Cytomegalovirus Echovirus type 22 Enterovirus type 69 Rotavirus Le seguenti sostanze sono state analizzate con il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B e nel saggio non stata osservata alcuna interferenza per le sostanze analizzate ai livelli indicati sangue mucose grasso fecale Pepto Bismol 10 v v Imodium AD 10 v v Kaopectate 10 v v Castoria 10 v v vancomicina 12 5 mg ml metronidazole 12 5 mg ml e solfato di bario 12 5 mg ml Riproducibilita In tre siti compreso un sito interno sono state condotte analisi di riproducibilita in quattro giorni separati con sei campioni ciechi campioni erano costituiti da campion fecali a positivita e negativita note campioni hanno prodotto il risultato atteso con il test Xpect Clostridium difficile Toxin A B per il 98 6 71 72 del periodo BIBLIOGRAFIA 1 Gerding D N S Johnson L R Peterson M E Mulligan and J Silva Jr 1995 Infect Control Hosp Epidemiol 16 459 477 2 Limaye AP D K Turgeon B T Cookson and T R Fritsche 2000 J Clin Microbiol 38 1696 1697 3 Alfa M J A Kabani D Lyerly S Moncrief L M Neville A Al Barrak G
79. tinylated goat anti Toxin A and rabbit anti Toxin B 4 Specimen Diluent 12 0 ml x 1 12 0 ml x 2 solution with 0 03 ProClin 300 5 Positive Control 2 0 ml x 1 2 0 ml x 2 Culture supernatant containing C difficile Toxin A and B with preservative 6 Negative Control 2 0 ml x 1 2 0 ml x 2 Buffered solution with preservative 7 Disposable Transfer Pipettes 40 80 Pipettes with marked graduations at 0 1 ml increments 8 Dilution Tubes 40 80 Tubes for specimen preparation with marked 0 5 ml volume 9 Wooden Applicator Sticks 20 40 10 Instructions for Use 1 IFU Buffered MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 1 Stool specimen collection container s and 2 Timer Optional materials not provided 1 Specimen transport media 2 BHI Broth and 3 Test tube rack PROCEDURE 1 Allow kit components and stool specimens to come to room temperature before use 2 Mix stool specimens thoroughly prior to testing regardless of consistency 3 Remove the test device from the foil pouch when ready to perform the test and place it on a flat surface 4 Label the device and dilution tubes with patient or control identification ENGLISH Sample Preparation Fresh unpreserved Stool Specimens 1 Add Specimen Diluent up to the line marked on the dilution tube 0 5 ml a For solid stool specimens use a wooden applicator stick and sample from separate areas of the specimen Transfer a 0 2 g 6
80. ucted using twenty one known reference strains and thirty six suspect C difficile isolates from stool specimens BHI broth cultures were tested with Xpect Clostridium difficile Toxin A B following 72 hours incubation Under these conditions the BHI broth culture of Clostridium sordellii ATCC 9714 produced a positive reaction There was 94 7 54 57 agreement with expected values Analytical Sensitivity The analytical sensitivity was evaluated using purified C difficile Toxin A and Toxin B The Xpect Clostridium difficile Toxin A B test detects Toxin A at levels of gt 6 25 ng ml 0 12 ng test and Toxin B at levels of gt 40 0 ng ml 0 76 ng test Cross Reactivity Fifty four microorganisms were evaluated with Xpect Clostridium difficile Toxin A B No cross reactivity was observed Bacteria and yeast isolates were tested at 10 colony forming units per ml concentration Viral isolates were tested at concentrations of 10 to 10 TCIDso tissue culture infectious dose per ml concentration The following organisms were tested in the Xpect Toxin A B test Aeromonas hydrophila Bacillus cereus Bacillus subtilis Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus subsp fetus Campylobacter jejuni subsp jejuni Campylobacter lari Candida albicans Clostridium botulinum toxin 20 ug ml Clostridium beijerinickii Clostridium difficile non toxigenic Clostridium haemolyticum Clostridium histolyticum C
81. ue no hay presente toxina A y o toxina B de C difficile o que se encuentran presentes por debajo del nivel de detecci n del ensayo x pect C diff Toxin A B Resultado no valido El resultado no es v lido cuando la linea de ensayo TEST es parcial o est incompleta o cuando no aparece una l nea de control CTRL o aparece de forma incompleta a los 20 minutos x pect C diff Toxin A B La linea de La linea de control o control est ensayo es parcial o est ausente incomplete Si los resultados no validos se deben al flujo restringido de la muestra por la membrana la muestra debe volver a analizarse de la siguiente manera Rean lisis de la muestra Vuelva a diluir la muestra de la siguiente manera 1 Combine en un tubo de diluci n limpio a 5 gotas de diluyente de muestra y b 0 1 ml primera marca en relieve desde la punta de muestra de la preparaci n de muestra inicial en el diluyente de muestra sin a adir reactivos 2 Mezcle la preparaci n aspirando con la pipeta de transferencia 3 Utilice 0 1 ml de esta preparaci n de muestra diluida y repita el procedimiento de ensayo CONTROL DE CALIDAD Interno el ensayo incluye un control de procedimiento La comparsa di una linea di controllo nella posizione CTRL conferma che un coni ugato intatto stato aggiunto al dispositivo che l anticorpo della linea di controllo attivo a livello funzionale e che ha avuto luogun flusso capilla
82. uzadas Se analizaron las bacterias y aislados de levadura a una concentraci n de 10 unidades de formaci n de colonias por ml Se analizaron aislados virales a concentraciones de 10 a 10 TCIDso dosis infecciosa de cultivo tisular por ml Se analizaron los siguientes microorganismos con el ensayo Xpect Clostridium difficile Toxin A B Aeromonas hydrophila Bacillus cereus Bacillus subtilis Bacteroides fragilis Campylobacter coli Campylobacter fetus subsp fetus Campylobacter jejuni subsp jejuni Campylobacter lari Candida albicans Clostridium botulinum toxin 20 ug ml Clostridium beijerinickii Clostridium difficile non toxigenic Clostridium haemolyticum Clostridium histolyticum Clostridium innocuum Clostridium novyi Clostridium perfringens Clostridium septicum Clostridium sordellii Clostridium sporogenes Clostridium subterminale Clostridium tetani Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Escherichia coli Sustancias interferentes Klebsiella pneumoniae Peptostreptococcus anaerobius Porphyromonas asaccharolytica Proteus mirabilis Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Salmonella Typhimurium Serratia liquefaciens Shigella boydii Shigella dysenteriae Shigella flexneri Shigella sonnei Staphylococcus aureus Cowan Staphylococcus epidermidis Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica Giardia intestinalis Entamoeba histolytic
83. yo 20 40 cada bolsita de papel de aluminio contiene un dispositivo de ensayo para un solo uso con desecante la membrana es rayada con reactivos de captura 2 Reactivo conjugado 1 3 0 ml x 1 3 0 ml x 2 micropart culas de color azul negro recubiertas con antitoxina A de rat n y antitoxina B de conejo 3 Reactivo conjugado 2 3 0 ml x 1 3 0 ml x 2 antitoxina A de cabra biotilinada y antitoxina B de conejo 4 Diluyente de muestra 12 0 ml x 1 12 0 ml x 2 soluci n tamponada con ProClin 300 al 0 03 5 Control positivo 2 0 ml x 1 2 0 ml x 2 sobrenadante de cultivo con toxina A y B de C difficile con conservante 6 Control negativo 2 0 ml x 1 22 0 ml x 2 soluci n tamponada con conservante 7 Pipetas de transferencia desechables 40 80 pipetas con marcas graduadas cada 0 1 ml 8 Tubos de diluci n 40 80 tubos para la preparaci n de muestras con marca de volumen de 0 5 ml 9 Varillas aplicadoras de madera 20 40 Instrucciones de uso 1 IFU SPANISH MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Recipiente s para recoger las muestras fecales y 2 minutero Material opcional no suministrado 1 Medio de transporte de muestras 2 cultivo en caldo de infusi n de cerebro y coraz n y 3 gradilla de tubos de ensayo PROCEDIMIENTO 1 Deje que los componentes del kit se estabilicen a temperatura ambiente antes de su uso 2 Mezcle bien las muestras de materia fecal antes d

Clostridium difficile Toxin A/B

Contents

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents