FR SD-BD.00
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1. 2005 Becton Dickinson and Company SD BD 01 Page 8 of 10 Tableau 1 BD Sensi Disc produits en vente dans des tubes de verre Description REF Description ACIDE CLAVULANIQUE AMC 30 254749 254750 254755 254758 254734 254893 254715 254713 254762 254711 254760 254878 254722 254775 254732 254704 254725 254766 COLISTIN CL 10 PHOSPHAT FF 120 PHOSPHAT FF 502 254799 KANAMYCIN K 30 254802 METRONIDAZOLE MET 80 254807 MEZLOCILLIN MZ 30 SD BD 01 Page 9 of 10 REF Description CS TRIMETHOPRIM SXT Notes au bas du Tableau 1 Ces disques sont utilis s pour des m thodes d isolement et ou la diff rentiation des isolats bact riens Ils ne sont pas utilis s pour la d termination de la sensibilit des souches pour usage th rapeutique 254750 BACITRACIN B 10 and 254821 OLEANDOMYCIN OL 15 Ces disques sont utilis s pour l isolement de Haemophilus influenzae sur des milieux non selectifs Apr s inoculation de l chantillon sur la bo te d isolement p ex BD Chocolate Agar GC II Agar with IsoVitaleX ou BD Chocolate Agar Blood Agar No 2 Base placez un disque Bacitracin ou Oleandomycin dans la premi re zone inocul e par striation D apr s l incubation Haemophilus influenzae peut tre isol de la zone d inhibition parce qu il est r sistant contre la bacitracin et l ol andomycin La plupart de la flore normale est inhib e par ces deux antibiotiques 254881 NOVOBIOCIN NB2. A W W M M Kirby J C Sherris and M Turck 1966 Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method Am J Clin Pathol 45 493 496 2 Ryan K J F D Schoenknecht and W M M Kirby 1970 Disc sensitivity testing Hospital Practice 5 91 100 3 Federal Register 1972 Rules and regulations Antibiotic susceptibility discs Fed Regist 37 20525 20529 Erratum 38 2756 1973 4 Ericsson H M and J C Sherris 1971 Antibiotic sensitivity testing Report of an international collaborative study Acta Pathol Microbiol Scand Sec B Suppl 217 1 90 5 World Health Organization Expert Committee on Biological Standardization 1977 Technical report series 610 W H O Geneva 6 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2003 Approved standard M2 A8 Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests 8th ed NCCLS Wayne Pa 7 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards 2005 Performance standards for antimicrobial susceptibility testing Fifteenth Informational Supplement M100 S15 Wayne PA 8 Baker C N C Thornsberry and R W Hawkinson 1983 Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system J Clin Microbiol 17 450 457 9 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2003 Approved standard M7 A6 Metho
3. ido p nicillines chez les staphylocoques et les ent rocoques Un r sultat n gatif pour la B lactamase n limine pas la possibilit d une r sistance due a d autres m canismes Ne pas tester les esp ces des genres Enterobacteriaceae Pseudomonas ni les autres bacilles a robies a Gram n gatif car les r sultats peuvent ne pas pr dire leur sensibilit aux B lactamines les plus souvent utilis es en traitement Une mise en vidence exacte des B lactamases chez les staphylocoques peut n cessiter l induction de leur enzyme et l incubation jusqu 1 h d un test bas sur la nitroc fine L induction peut tre facilement accomplie en testant la croissance dans la zone marginale entourant le disque d oxacilline Proc der avec soin pour garantir l exactitude des r sultats ainsi des souches de contr le positives et n gatives connues doivent tre test es en m me temps que les isolats cliniques Les tests de sensibilit aux p nicillines et autres B lactamines approuv s par la Food and Drug Administration FDA am ricaine pour le traitement des streptocoques des groupes A et B n ont pas d utilit clinique et sont donc superflus en routine puisque comme pour la vancomycine aucune souche r sistante n a t identifi e Certaines souches de S agalactiae peuvent toutefois donner des r sultats interm diaires vis vis de la p nicilline Les tests de diffusion en g lose de disques contenant de l ampicilline
4. Chapin K and G V Doern 1983 Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from species contaminated with upper respiratory tract microbial flora J Clin Microbiol 17 1163 1165 17 Wilkins T D and T Thiel 1973 Modified broth disk method for testing the antibiotic susceptibility of anaerobic bacteria Antimicrob Agents Chemother 3 350 356 18 Zabransky R J et al 1986 Predicting the susceptibility of anaerobes to cefoperazone cefotaxime and cefoxitin with the thioglycollate broth disk procedure J Clin Microbiol 24 181 185 SD BD 01 Page 7 of 10 CONDITIONNEMENT BD Sensi Discs Emball s en tubes de verre avec bouchons contenant un d ssiccatif 1 cartouche par tube unit de vente 10 tubes Consultez Tableau 1 pour disponibilit des produits et nombres de r ference INFORMATIONS COMPLEMENT AIRES Pour plus d informations contactez le repr sentant local de BD al BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D 69126 Heidelberg Germany Phone 49 62 21 30 50 Fax 49 62 21 30 52 16 Reception Germany europe bd com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Berg s 38800 Le Pont de Claix France Tel 33 476 68 3636 Fax 33 476 68 3292 http www bd com BD BD logo BBL Cefinase IsoVitaleX Sensi Disc and Trypticase are trademarks of Becton Dickinson and Company Prompt is a trademark of 3M ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
5. de la p nicilline et de la rifampine ne sont pas fiables pour Neisseria meningitidis Des tests de concentrations minimales inhibitrices CMI doivent tre utilis s pour ces microorganismes CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE Le test d crit ici s applique essentiellement aux bact ries a robies croissance rapide Les bact ries exigeantes outre H influenzae N gonorrhoeae S pneumoniae et les autres streptocoques doivent tre valu es par une m thode de dilution L valuation des ana robies requiert des proc dures sp ciales Pour Campylobacter Corynebacterium et Bacillus les r sultats avec le test de diffusion de disques en g lose ne sont pas suffisants pour recommander cette m thode Les classifications R sistant Interm diaire et Sensible varient seulement d un millim tre ce qui correspond une marge d erreur courante en laboratoire Certaines cultures peuvent donner une taille de zone de taille limite variant selon la journ e ou le laboratoire ce type de culture est relativement rare Pour la d tection de la r sistance chez les pneumocoques et les ent rocoques suivre scrupuleusement les proc dures recommand es par le NCCLS D autres agents antimicrobiens que ceux cit s dans les standards sont parfois utilis s Les tests de sensibilit ces agents doivent tre interpr t s en se basant sur la pr sence ou l absence d une zone d inhibition nette et consid r s u
6. par bo te de 150 mm et quatre disques par bo te de 90 mm Si les disques sont d pos s sur la g lose sans utiliser un distributeur auto applicateur appuyer sur les disques avec une aiguille ou une pince st rile pour assurer le contact avec la surface de la g lose 5 Dans les 15 min qui suivent placer les bo tes de P tri avec le c t g lose tourn vers le haut dans un incubateur 35 C Les esp ces d Haemophilus N gonorrhoeae S pneumoniae et les autres streptocoques doivent tre incub s dans une atmosph re enrichie avec 5 de CO 6 Examiner les bo tes de P tri apr s 16 18 h d incubation 20 a 24 h pour N gonorrhoeae S pneumoniae et les autres streptocoques Une incubation de 24 h compl tes est recommand e pour les esp ces de Staphylococcus afin de mettre en vidence les staphylocoques r sistants la m thicilline nafcilline oxacilline et pour les esp ces d Enterococcus afin de mettre en vidence les ent rocoques r sistants la vancomycine Les diam tres des zones d inhibition totale sont mesur s sur la base d une inspection visuelle Les mesures sont arrondies au millim tre le plus proche Pour plus d informations sur la mesure des zones d inhibition se reporter la r f rence Si l on observe uniquement la croissance de colonies isol es inoculum n est pas assez dense et le test doit tre r p t Les zones situ es autour des disques contenant diff rents agents antimicrobien
7. s du tout tous les c ph mes tous les carbapenems et toutes les autres B lactamines comme l amoxicilline lacide clavulanique l ampicilline le sulbactam la ticarcilline l acide clavulanique la pip racilline le tazobactam et l imip n me sans consid rer les r sultats in vitro des tests avec ces agents Il faut les d signer ainsi parce que la plupart des infections confirm es caus es par les staphylocoques r sistants a la m thicilline sont peu sensibles au traitement par une B lactamine et qu il n existe pour le moment aucune donn e clinique convaincante d montrant l efficacit clinique de ces agents f Les isolats de staphylocoques qui portent le g ne mecA ou le produit PBP 2a du g ne mecA doivent tre rapport s comme r sistants l oxacilline Les crit res d interpr tation pour les staphylocoques coagulase n gative sont corr latifs de la pr sence ou de l absence du g ne codant la r sistance la m thicilline mecA pour S epidermidis Ces crit res d interpr tation peuvent faire rapporter tort une r sistance pour d autres staphylocoques coagulase n gative comme S ugdunensis ou S saprophyticus Pour des infections graves a staphylocoques a coagulase n gative autres que S epidermidis le test de mecA ou de la prot ine exprim e par mecA la prot ine se liant la p nicilline 2a PBP 2a galement connue comme PBP 2 peut tre appropri pour les souches dont les diam tres de zon
8. semaine Jeter tout disque laiss temp rature ambiante pendant toute une nuit ou en v rifier le niveau acceptable de performance avant de continuer l utiliser 5 Si les zones d inhibition form es par les disques avec les microorganismes de contr le conseill s ne sont pas conformes la proc dure doit tre v rifi e dans sa totalit cette erreur peut tre due au disque l ensemencement la pr paration ou la profondeur environ 4 mm du milieu ou encore d autres facteurs La date de p remption s applique uniquement aux disques contenus dans des cartouches intactes conserv es conform ment aux instructions Des disques provenant des tubes ouverts conserv s comme mentionn ci dessus sont utilisables tant que les disques montrent les zones d inhibition exactes avec des souches de contr le Des bo tes provenant d une pile ouverte de 10 bo tes sont utilisables pour une semaine lorsqu elles sont conserv es entre 8 et 12 C dans un endroit propre CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Pour assurer des performances optimales les disques antimicrobiens doivent tre test s au moins deux fois par semaine Des tests de contr le E coli ATCC 25922 S aureus ATCC 25923 P aeruginosa ATCC 27853 H influenzae ATCC 49247 H influenzae ATCC 49766 N gonorrhoeae ATCC 49226 S pneumoniae ATCC 49619 E coli ATCC 35218 souche productrice de B lactamase E faecalis ATCC 29212 doivent tre inclus pour t mo
9. 5 Ce disque est utilis pour la diff rentiation des staphylocoques esp ces novobiocin r sistantes ou sensibles Inoculez une bo te de g lose Mueller Hinton Il avec la souche culture pure et placez un disque de novobiocin sur la g lose inocul e et incubez pour 18 24 heures R sistant lt 16 mm sensitive gt 16 mm Staphylococcus saprophyticus S cohnii S xylosus et quelques autres esp ces sont r sistant et S aureus S epidermidis S schleiferi et quelques autres sont sensibles 254828 POLYMYXIN B PB 300 Ce disque est utilis pour la diff rentiation des staphylocoques esp ces polymyxin B r sistantes ou sensibles Inoculez une bo te de g lose Mueller Hinton Il avec la souche culture pure et placez un disque de Polymyxin B sur la g lose inocul e et incubez pour 18 24 heures R sistant lt 10 mm susceptible gt 10 mm S aureus S epidermidis S hyicus et S chromogenes sont r sistant Ce disque est aussi utilis pour des autres tests d identification 254802 METRONIDAZOL MET 80 Des disques contenant de la m tronidazole ont t s utilis s pour la d termination de la r sistance contre m tronidazole avec des souches ana robies strictes par la m thode lution bouillon disque Notez que cette m thode n est plus recommand e par le NCCLS En outre la m thode de diffusion de disques en g lose ne doit pas utilis e avec des souches ana robies strictes SD BD 01 Page 10 of 10
10. AW MODE D EMPLOI RIJ B D BD SENSI DISCS SD BD 01 Rev May 2005 BD Sensi Disc disques pour l valuation de la sensibilit aux antibiotiques APPLICATION Les disques Sensi Disc sont utilis s pour une valuation semi quantitative in vitro de la sensibilit aux antibiotiques des agents pathog nes bact riens courants croissance rapide ainsi que de certaines esp ces exigeantes par un test de diffusion de disques en g lose Les microorganismes concern s incluent les Enterobacteriaceae les genres Staphylococcus Pseudomonas Acinetobacter Enterococcus Vibrio cholerae et avec des proc dures modifi es Haemophilus influenzae Neisseria gonorrhoeae Streptococcus pneumoniae et d autres streptocoques Les disques Sensi Disc contenant de la bacitracin oleandomycin novobiocin et polymyxin B ne sont pas utilis s pour la d termination de la sensibilit des souches pour la th rapie mais sont utilis s pour l isolement et ou la diff rentiation des isolats bact riens Des disques contenant de la m tronidazole ont t s utilis s pour la d termination de la r sistance contre m tronidazole avec des souches ana robies strictes avec la m thode lution bouillon disque Consultez les notes au bas du Tableau 1 PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE Les m thodes de diffusion en g lose utilisant des disques en papier filtre s ch s contenant des concentrations d termin es en agents antimicrobiens ont t mis
11. ds for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically 6th ed NCCLS Wayne Pa 10 York M K L Gibbs F Chehab and G F Brooks 1996 Comparison of PCR detection of mecA with standard susceptibility testing methods to determine methicillin resistance in coagulase negative staphylococci J Clin Microbiol 34 249 253 11 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2001 Approved standard M11 A5 Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria 5th ed NCCLS Wayne Pa 12 Jorgensen J H and J D Turnidge 2003 Susceptibility test methods dilution and disk diffusion methods n Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 13 Bannerman T L 2003 Staphylococcus Micrococcus and other catalase positive cocci that grow aerobically n Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8 ed American Society for Microbiology Washington D C 14 Kilian M 2003 Haemophilus In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 15 Mannheim W et al Pasteurellaceae In Mikrobiologische Diagnostik ed F Burkhardt Thieme Verlag Stuttgart 1992 16
12. e se situent dans la gamme interm diaire ou r sistant Les isolats qui ne portent pas le g ne mecA ou ne produisent pas PBP 2a doivent tre rapport s comme sensibles l oxacilline On a rapport que les tests de diffusion des disques en g lose ne constituaient pas une m thode fiable de d termination de la sensibilit la m thicilline oxacilline des staphylocoques coagulase n gative par example S saprophyticus Il n est pas recommand d effectuer des SD BD 01 Page 5 of 10 tests de routine de S saprophyticus sur des isolats urinaires parce que les infections sont sensibles aux concentrations urinaires d agents antimicrobiens couramment utilis s pour traiter les infections urinaires aigu s non compliqu es p ex nitrofurantoine trim thoprime sulfam thoxazole ou une fluoroquinolone Un test rapide de la B lactamase p ex en utilisant des disques Cefinase peut fournir des r sultats cliniquement importants avant que les r sultats du test de diffusion de disques ne soient obtenus pour les esp ces d Haemophilus N gonorrhoeae et Moraxella catarrhalis c est le seul test fiable pour la d tection des ent rocoques producteurs de B lactamase Un r sultat positif pour les B lactamases pr dit une r sistance la p nicilline l ampicilline et l amoxicilline chez les esp ces d Haemophilus N gonorrhoeae et M catarrhalis et une r sistance a la p nicilline y compris les acylamino carboxy et ur
13. elle par le National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS et fait l objet de mises jour p riodiques Il est recommand de se reporter aux documents les plus r cents du NCCLS pour consulter les recommandations actuelles REACTIFS Les disques Sensi Disc de 6 mm sont fabriqu s partir de papier absorbant de haute qualit impr gn d antibiotiques ou d autres agents chimioth rapeutiques en quantit s d termin es de mani re pr cise Les disques sont clairement identifi s des deux c t s par des lettres et des chiffres d signant l agent et sa concentration Voir le tableau 1 pour les concentrations des composants actifs La teneur en agent des disques est mesur e par les m thodes d finies par la SD BD 01 Page 1 of 10 FDA ou par des m thodes similaires ou comparables celles publi es dans le Federal Register am ricain Les agents Sensi Disc sont fournis en cartouches de 50 disques chacune Un X sur le dernier disque de chaque cartouche indique que celui ci contient le m dicament cod Les cartouches doivent tre utilis es dans les distributeurs Sensi Disc I existe plusieurs mod les de distributeurs un distributeur de disque unique un distributeur de 8 disques pour les bo tes de P tri 90 mm des distributeurs auto applicateurs de 6 et 8 disques pour les bo tes 90 mm un distributeur auto applicateur de 12 disques pour les bo tes 150 mm PRECAUTIONS usage professionnel unique
14. es au point au cours des ann es 40 Afin d liminer ou de minimiser la variabilit inh rente ce type de test Bauer et al ont mis au point une proc dure standardis e dans laquelle la g lose Mueller Hinton tait le milieu choisi pour le test Des disques contenant toute une gamme d agents antimicrobiens sont d pos s sur la surface de la g lose Mueller Hinton ou de la g lose du test d identification d Haemophilus pour H influenzae de la g lose GC Il enrichie d lsoVitaleX pour N gonorrhoeae ou de la g lose Mueller Hinton avec 5 de sang de mouton pour S pneumoniae les streptocoques B h molytiques et du groupe viridans dans des bo tes de P tri ensemenc es avec des cultures pures d isolats cliniques Apr s incubation les bo tes de P tri sont examin es et les zones d inhibition entourant les disques sont mesur es et compar es aux gammes de taille de zone tablies pour les diff rents agents antimicrobiens afin de d terminer l agent ou les agents les plus ad quats pour le traitement antimicrobien Divers organismes de r glementation et de r daction des normes ont publi des proc dures standardis es de r f rence en se basant sur la m thode Bauer Kirby Les normes de la Food and Drug Administration FDA am ricaine et de l Organisation mondiale de la sant OMS figurent parmi les proc dures standardis es les plus anciennes et les plus suivies La proc dure a t adopt e comme norme consensu
15. igner d une performance satisfaisante de l ensemble de la proc dure En outre la souche E faecalis ATCC 29212 ou 33186 est recommand e pour d terminer si des lots neufs de g lose Mueller Hinton ont des teneurs suffisamment faibles en thymine et thymidine Consultez la section METHODE pour pr paration ensemencement SD BD 01 Page 2 of 10 incubation et l interpr tation des testes Consultez le document M2 A8 M100 S15 du NCCLS ou des standards nationaux pour les zones d inhibition des souches de contr le f METHODE Mat riel fourni Disques Sensi Disc pour antibiogrammes comme indiqu sur l tiquette Mat riel requis mais non fourni Milieux de culture auxiliaires r actifs souches de contr le de qualit et mat riel de laboratoire n cessaires pour r aliser des antibiogrammes par la m thode de diffusion de disques en g lose selon la proc dure standardis e Pr parer un standard de turbidit McFarland 0 5 en ajoutant 0 5 mL de BaCl 0 048 M 1 175 poids vol BaCI 2H 0 99 5 mL de H2SO 1 vol vol 0 18 M 0 36 N V rifier l aide d un spectrophotom tre de 1 cm de raie spectrale et de la cuvette correspondante l absorption a 625 nm doit tre comprise entre 0 08 et 0 10 Types d chantillons Normalement ce test ne doit pas tre appliqu directement des chantillons Appliquez des souches pures Voir la section METHODE Mode op ratoire du test pour la pr paration de inoculum Dan
16. ment Suivre le mode d emploi en particulier la section PROCEDURE les performances des disques d pendent non seulement de l activit des disques mais galement de l utilisation de cultures de contr le et d chantillons ad quats de bo tes de P tri fonctionnelles pr test es d une temp rature de stockage ad quate et d autres facteurs Toujours utiliser des techniques aseptiques et prendre les pr cautions en vigueur contre les dangers microbiologiques Consulter le document MODE D EMPLOI GENERAL pour conna tre les proc dures de manipulation aseptique les risques biologiques ainsi que les m thodes d limination des produits utilis s STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION 1 D s r ception conserver les disques entre 20 et 8 C Si le r frig rateur du laboratoire est fr quemment ouvert et que la temp rature pr conis e n est pas assur e n y placer que la quantit de disques suffisante pour une semaine Certains disques p ex B lactamines doivent tre conserv s de pr f rence au cong lateur 20 C 2 Laisser les cartouches se r chauffer jusqu atteindre la temp rature ambiante avant de les ouvrir Remettre les disques inutilis s au r frig rateur une fois la pose des disques termin e 3 Utiliser les disques les moins r cents en premier 4 Jeter les disques dont la date de p remption est d pass e Jeter galement les cartouches dont on a fr quemment pr lev les disques durant la
17. niquement comme qualitatifs en attendant que les zones d interpr tation soient tablies Tous les diam tres des zones doivent tre relev s Le test de confirmation de ESBL n est valide que lorsque les quatre disques c fotaxime c fotaxime acide clavulanique ceftazidime ceftazidime acide clavulanique sont utilis s simultan ment Le NCCLS ne recommande pas l utilisation individuelle de ces disques La m thode de l ensemencement l interpr tation et les tailles limites de zone mentionn es dans SD BD 01 Page 6 of 10 les documents du NCCLS peuvent diff rer des normes nationales f Sensi Disc Vancomycin 254858 ATTENTION La capacit du produit d celer des Staphylococcus aureus r sistants la vancomycine VRSA n est pas connue Des proc dures de test additionnelles telles que recommand es par le CDC Centers for Disease Control and Prevention doivent tre utilis es lors de l ex cution de tests de sensibilit sur des isolats de S aureus en particulier de S aureus resistants a la m thicilline MRSA Ces tests comprennent les m thodes de CIM non automatis es par ex microdilution en bouillon ou dilution en g lose et le test de d pistage sur g lose pour la vancomycine g lose coeur cervelle avec 6 pg ml de vancomycine Ces tests demandent 24 heures compl tes d incubation pour la d tection de VRSA Pour plus ample information pri re de se reporter au site Internet du CDC REFERENCES 1 Bauer
18. ques de 1 ug d oxacilline doivent tre utilis s pour tester la r sistance la m thicilline oxacilline Toute zone entourant les disques d oxacilline doit tre examin e soigneusement par transparence la lumi re la recherche de petites colonies ou d un mince film de croissance dans la zone d inhibition apr s 24 h compl tes d incubation La plupart des staphylocoques r sistants la m thicilline sont aussi en g n ral r sistants a plusieurs classes d agents antimicrobiens notamment les aminoglycosides les macrolides la clindamycine les ph nicols les quinolones les sulfonamides et la t tracycline L observation d une polyr sistance est une indication d une possible r sistance la m thicilline Cependant des souches de S aureus r sistantes la m thiciline ne montrant aucune r sistance d autres classes d agents antimicrobiens ont t isol es chez des populations de patients hospitalis s ou ambulatoires Si le r sultat du test de diffusion de disques en g lose est douteux pour des esp ces de Staphylococcus qui pourraient tre r sistantes la m thicilline r aliser des tests de v rification suppl mentaires tels que d crits dans le document M7 du NCCLS S aureus r sistant la m thicilline oxacilline MRSA et les staphylocoques coagulase n gative r sistants la m thicilline oxacilline MRS devraient tre d sign s r sistants toutes les p nicillines ou ne pas tre rapport
19. s la mesure du possible les cultures doivent tre pr par es partir d chantillons pr lev s avant le d but de tout traitement antibiotique Mode op ratoire du test 1 Pr paration de l inoculum avec les cultures de contr le et les cultures de l chantillon a analyser a Faire une coloration de Gram Utiliser seulement des cultures pures b S lectionner de trois cinq colonies semblables et les transf rer avec un ensemenceur fil droit ou anse dans 4 5 mL de bouillon ad quat comme du bouillon de Trypticase soja ou de Mueller Hinton pour les microorganismes exigeants c M thode de pr paration d une suspension directe Pr parez une suspension base de bouillon ou de s rum physiologique des colonies pr lev es sur une g lose en bo te de P tri apr s une nuit d incubation utiliser un milieu non s lectif comme une g lose au sang ou une g lose au chocolat pour H influenzae et N gonorrhoeae d Diluez si n cessaire pour obtenir une turbidit quivalente un standard de turbidit McFarland 0 5 Comme diluant utiliser du bouillon ou du s rum physiologique st rile On peut galement standardiser l inoculum par photom trie pour faciliter cette op ration avec les microorganismes croissance rapide il est possible utiliser le syst me d ensemencement Prompt syst me de pr paration volum trique de l inoculum Les cultures en bouillon incub es pendant la nuit ne doivent pas
20. s ne doivent pas tre utilis s des fins de comparaison de l activit de ces agents R sultats Les crit res d interpr tation recommand s sont bas s sur les sch mas posologiques et les voies d administration habituelles aux Etats Unis Eventuellement consultez des standards locales Comparer les diam tres des zones observ s ceux donn s dans le standard NCCLS M2 A9 M100 S15 ou dans des standards nationaux Pour un microorganisme donn trois classifications sont possibles R sistant Interm diaire et Sensible Pour certaines combinaisons d antimicrobiens et de microorganismes l absence de souches r sistantes emp che de d finir des classes autres que sensible Pour les souches donnant des r sultats sugg rant une classe non sensible v rifier les r sultats des tests d identification du microorganisme et de sensibilit aux antibiotiques Si c est n cessaire une m thode de dilution s av rera en g n ral la m thode de test la mieux appropri e ce qui peut n cessiter d envoyer le microorganisme un laboratoire de r f rence La sensibilit des Pseudomonas aeruginosa isol s partir d chantillons pr lev s sur des patients souffrant de mucoviscidose peut tre valu e avec fiabilit par la m thode des disques mais cette m thode peut exiger une dur e d incubation allant jusqu 24 h avant de pouvoir rapporter un isolat comme sensible Les ent rocoques peuvent tre r sistan
21. senteront une zone d inhibition plus r duite que celle de la population normale sensible mais plus tendue que les valeurs seuils standard de certaines c phalosporines spectre tendu ou de l aztr onam la mise en vidence de la production d ESBL par de telles souches peut tre r alis e au moyen de seuils de d pistage appropri s avant de rapporter les r sultats pour les p nicillines les c phalosporines a spectre largi ou l aztr onam Selon les valeurs seuils standard d autres souches peuvent appara tre interm diaires ou r sistantes un ou plusieurs de ces agents Pour toutes les souches ESBL le diam tre de la zone d inhibition autour des disques contenant certaines c phalosporines spectre largi ou l aztr onam devrait augmenter en pr sence d acide clavulanique comme le montre le test de confirmation ph notypique Les souches productrices d ESBL devraient donner des r sultats de test interpr t s comme r sistants pour toutes les p nicillines c phalosporines et l aztr onam La d cision d effectuer des tests de d pistage sur tous les isolats d urine doit tre prise au niveau de l tablissement en consid rant la pr valence le traitement et la pr vention de l infection Pour la d tection des staphylocoques r sistants la m thicilline les disques d oxacilline sont plus susceptibles de d celer la r sistance que les disques de m thicilline ou de nafcilline Par cons quent des dis
22. tre utilis es comme source d inoculum 2 Ensemencement a Dans les 15 min qui suivent la pr paration tremper un couvillon st rile dans l inoculum correctement dilu et le faire tourner plusieurs fois en le pressant fermement contre la paroi interne du haut du tube pour en extraire l exc s de bouillon b Inoculer trois fois toute la surface d une g lose Mueller Hinton ou d une autre g lose ad quate en bo te de P tri en tournant chaque fois la bo te de 60 de fa on assurer un ensemencement uniforme c Le couvercle de la bo te peut tre laiss ouvert pendant 3 5 min sans d passer 15 min pour que toute humidit pr sente en surface soit r sorb e avant la pose des disques impr gn s d agents antibiotiques 3 S lectionner les disques appropri s comme recommand dans la r f rence 7 tableaux 1 et 1A de MI00 SI3 M2 4 D poser les disques avec un distributeur BBL en respectant les pr cautions d asepsie habituelles Placer les disques de telle sorte que leurs centres soient distants d au moins 24 SD BD 01 Page 3 of 10 mm Il est pr f rable de d poser les disques de p nicilline et de c phalosporine une distance d au moins 10 mm du bord de la bo te de Petri et de telle sorte que leurs centres soient distants d au moins 30 mm Eviter de disposer ces disques l un c t de l autre Avec les esp ces H influenzae N gonorrhoeae et S pneumoniae ne pas utiliser plus de neuf disques
23. ts la p nicilline et l ampicilline du fait de la production de prot ines de faible affinit se liant la p nicilline PLP ou de la production de B lactamase La proc dure par diffusion de disques en g lose peut d tecter avec pr cision les isolats qui ont des PLP alt r es mais ne pourra pas d tecter avec fiabilit les souches qui produisent une B lactamase La meilleure m thode pour d tecter ces derni res souches consiste utiliser un test direct des B lactamases par exemple des disques Cefinase nitroc fine ou des disques c phalosporines chromog nes Pour les esp ces d Enterococcus les c phalosporines les aminoglycosides sauf pour des tests de d pistage de la r sistance de haut niveau la clindamycine et le trim thoprime sulfam thoxazole peuvent s av rer actifs in vitro mais sont sans effet clinique et par cons quent les isolats ne doivent pas tre rapport s comme sensibles Les B lactamases spectre largi ESBL sont des enzymes produits par les bacilles a Gram n gatif qui proviennent de la mutation des g nes contr lant les B lactamases communes m diation plasmidique Des souches d esp ces de Klebsiella et d E coli productrices d ESBL SD BD 01 Page 4 of 10 peuvent s av rer cliniquement r sistantes au traitement par les p nicillines les c phalosporines ou l aztr onam malgr leur sensibilit apparente in vitro certains de ces agents Certaines de ces souches pr
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