Reagena PUUMALA IgM EIA Mode d`emploi REF 114201 Version
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1. 250 ul microcupule et les s cher avec du papier mouchoir 14 Ajouter le substrat de TMB rose la plaque 100 ul cupule 15 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante et l abri de la lumi re 16 Ajouter la solution d arr t 100 ul microcupule et bien m langer jusqu ce que la couleur change compl tement 15 secondes 600 800 rpm soit avec un agitateur orbital soit avec le lecteur EIA 17 Mesurer les r sultats dans les 10 minutes avec le lecteur EIA 450 nm CALCUL DES R SULTATS Calculer les r sultats comme suit R chantillon Contr le positif x K R r sultat Echantillon 4 Absorbance m diane de l chantillon Contr le positif Absorbance m diane du contr le positif K valeur fonction du lot qui figure dans la fiche de donn es de contr le comprise dans le kit Utilisez cette valeur pour calculer les r sultats finaux Le r sultat final est obtenu comme suit N GATIF R lt 0 8 ZONE GRISE 0 8 lt R lt S 1 0 POSITIF R gt 1 0 INTERPR TATION DES R SULTATS Un r sultat n gatif signifie que l chantillon ne contient pas d anticorps IgM sp cifiques du virus Puumala Cela indique que le patient ne pr sente pas une infection aigu au virus Puumala Dans l ventualit o une infection aigu au virus Puumala serait toujours soup onn e il faudra r p ter l analyse avec un nouvel chantillon pr lev quelques jours apr s le premier Un chantillon2. Reagena PUUMALA IgM EIA Mode d emploi Fabricant Reagena International Oy Ltd L REAGENA Takojantie 18 70900 Toivala FINLANDE www reagena fi info reagena fi Reagena PUUMALA IgM EIA Reagena PUUMALA IgM EIA est une preuve immunoenzymatique de d tection d une infection aigu au virus Puumala dans le s rum humain Reagena PUUMALA IgM EIA est exclusivement destin l usage professionnel Le virus Puumala qui appartient la famille des hantavirus se trouve dans la plupart des pays europ ens Ce virus est un agent responsable de la n phropathie pid mique NE et se transmet aux humains par inhalation ou contact direct avec les excr ments du campagnol La NE n est que rarement fatale chez les individus en bonne sant mais elle peut entra ner une hospitalisation de longue dur e Le taux de mortalit de la NE est de 0 1 0 3 parmi les patients infect s Une infection cr er une immunit vie contre la NE PRINCIPE DU TEST Les anticorps IgM Puumala pr sents dans l chantillon sont captur s par les anticorps sp cifiques de la cha ne L sur la plaque de microtitration Les anticorps IgM du virus Puumala captur s sont d tect s par l enyzme PR peroxydase de raifort coupl e la prot ine recombinante de la nucl ocapside du virus Puumala Le d veloppement de la coloration est ensuite assur par le substrat TMB Le temps d incubation total est de 2 heures et demie et le kit permet d effectuer 40 analyses en doub
3. bilit et sp cificit L accord entre Reagena PUUMALA IgM EIA et l EIA interne du d partement de virologie de l Universit d Helsinki Finlande tait de 98 lorsque 100 chantillons s riques de patients positifs et n gatifs taient analys s Les chantillons taient confirm s comme tant soit positifs soit n gatifs en utilisant la m thode IFA Impr cision S rum positif Absorbance m diane de 0 320 5 4 CV n 10 S rum n gatif Absorbance m diane de 0 098 2 4 CV n 10 Inter preuve Absorbance m diane de 0 318 4 9 CV n 5 S rum n gatif Absorbance m diane de 0 101 3 2 CV n 5 2 2 INFORMATIONS CONCERNANT LES COMPOSANTS DU KIT Consignes PRE Composant code imtormation d utilisation COnservation amp stabiite Plaque de microtitration B tonnets 114201t recouverte d un rev tement diagnostiques d IgM anti humaines sp cifiques de la cha ne u Tampon pour Tampon tris Pr color dilution PONS rose 65 ml S rum lyophilis Test n gatif en PEU HIV HTLV h patite B etC S rum lyophilis Test n gatif en CERRUTI HIV HTLV h patite B etC Tampon tris lavage 114x01V6 2 x 50 mi concentr Prot ine de la nucl ocapside f du virus Puumala conjugu e conjugue ARE T1420 1V2 la peroxidase de raifort 1 5 ml 3 3 5 5 T tram thyl Substrat TMB 114x01v3 benzidine Pr color rose 12 ml 114x01v4 0 1 M d acide sulfurique 12 ml LITT RATURE Contr le
4. de de 450 nm Agitateur de plaque microcupules e Toute infection bact rienne ou fongique des tampons ou r actifs pourra entra ner des r sultats erron s Jeter tout r actif qui aurait l air trouble lorsque vous l inspectez la lumi re AVERTISSEMENT e Les contr les comprennent du s rum humain test et trouv n gatif en VIH HTLV h patite B et C Veuillez manipuler les contr les comme des substances potentiellement infectantes e Jetez les contr les chantillons et mat riels conform ment aux r glementations locales et f d rales vous concernant e La solution d arr t Reagena EIA contient lt 1 m V d acide sulfurique La concentration est si basse qu elle n affecte pas la classification du produit e Le substrat TMB Reagena EIA contient du 8 3 5 5 t tram thylbenzidine lt 0 05 w w La concentration est si basse qu elle n affecte pas la classification du produit PROCEDURE DE TEST Lire attentivement le mode d emploi avant de commencer les tests Contacter le fabricant ou votre fournisseur en cas de questions suppl mentaires concernant le produit Effectuer les tests entre 15 et 25 C Conserver le kit au r frig rateur entre 4 et 8 C pendant les p riodes d incubation 1 Ouvrir le kit et v rifier qu il contienne tous les composants figurant sur l tiquette du couvercle 2 Diluer les chantillons 1 201 avec le tampon de dilution c d 5 ul d chantillon 1000 ul de tampon de dilution 3 D
5. ic IgM antibodies J Clin Virol 2001 Dec 23 1 2 79 85 Hujakka H Koistinen V Eerikainen P Kuronen I Mononen l Parviainen M Lundkvist A Vaheri A Narvanen A Vapalahti O New immunochromatographic rapid test for diagnosis of acute Puumala virusinfection J Clin Microbiol 2001 Jun 39 6 2146 50 Kallio Kokko H Vapalahti O Lundkvist Vaheri A Evaluation of Puumala virus IgG and IgM enzyme immunoassays based on recombinant baculovirus expressed nucleocapsid protein for early nephropatiaepidemica diagnosis Clin Diagn Virol 1998 May 1 10 1 83 90 Rev 2011 05 15
6. iluer le tampon de concentr de lavage 1 10 avec de l eau d sionis e c d 50 ml de tampon de concentr de lavage 450 ml d eau Bien m langer 4 Dissoudre le contr le positif et le contr le n gatif avec 1 3 ml de tampon de dilution et bien m langer 5 Prendre le nombre requis de b tonnets diagnostiques EIA de leur emballage en aluminium et les placer sur le cadre EIA Si tous les b tonnets ne sont pas utilis s refermer imm diatement l emballage en aluminium et conserver les b tonnets restants entre 4 et 8 C 6 Laver les microcupules EIA une fois avec le tampon de lavage 250 ul microcupule Vider les microcupules et les humidifier avec du papier mouchoir 7 Transf rer en double les dilutions d chantillons de contr les positifs et n gatifs sur la plaque 100 ul microcupule 8 Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante dans un agitateur orbital 450 rpm 9 Diluer le conjugu HRP 1 10 avec le tampon de dilution pour un b tonnet diagnostique 100 pl de conjugu HRP 900 ul de tampon de dilution et bien m langer 10 Laver quatre fois les cupules avec le tampon de lavage 250 ul microcupule et les s cher avec du papier mouchoir 11 Transf rer le conjugu de RP dilu avec la pipette sur la plaque 100 ul microcupule 12 Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante dans un agitateur orbital 450 rpm 13 Laver cinq fois les microcupules avec le tampon de lavage
7. le CONTENU DU KIT 1 cadre EIA 3x4 b tonnets diagnostiques 8 barrettes de microtitration Contr le positif Conjugu HRP Tampon de concentr de lavage x 2 Substrat TMB Tampon pour dilution Solution d arr t Contr le n gatif Mode d emploi MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON INCLUS DANS LE KIT Pipettes de pr cision et embouts de pipette 5 100 ul Pipette ou dispositif de lavage de la plaque 250 ul microcupule Tubes d chantillonnage 1 5 ml Une fiole de 0 5 ou 1 L CONSERVATION Conserver le kit entre 4 et 8 C Le kit reste stable jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Voir le tableau page 2 pour les informations concernant la conservation et la stabilit du kit CHANTILLONS Il est conseill d utiliser des chantillons frais plut t que congel s Les chantillons congel s peuvent entra ner des faux positifs lorsque les r sultats sont agr g s Si l chantillon est agr g ou de mauvaise qualit veuillez centrifuger les chantillons pendant 5 minutes 3000 x g avant de les utiliser LIMITATIONS ET INTERF RENCES e Ne pas m langer de composants issus de lots diff rents e Ne pas utiliser de b tonnets diagnostiques si l emballage en aluminium qui les contient est endommag e Ne pas m langer les chantillons tester puisque diff rentes matrices pourraient entra ner une mauvaise reproductibilit Ruban d tanch it EIA Lecteur de microplaque EIA longueur d on
8. positif Contr le n gatif Tampon de Solution d arr t Lavez les b tonnets avec le tampon de lavage juste avant utilisation Pr t l emploi Dissoudre le contr le dans 1 3 mi de tampon de dilution avant utilisation Dissoudre le contr le dans 1 3 mi de tampon de dilution avant utilisation Diluer 1 10 avec de l eau d sionis e juste avant utilisation Diluer 1 10 avec le tampon de dilution juste avant utilisation Pr t l emploi Pr t l emploi Non ouvert dans l emballage en aluminium entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Dissous 20 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Dissous 20 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette A l abri de la lumi re et entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette A l abri de la lumi re et entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Hujakka H Koistinen V Eerikainen P Kuronen I Laatikainen A Kauppinen J Vaheri A Vapalahti O Narvanen A Comparison of a new immunochromatographic rapid test with a commercial EIA for the detection of Puumala virus specif
9. qui s av re positif indique que le patient pr sente une infection aigu par le virus Puumala Un facteur de r sistance ou d autres infections virales n entra nent pas un r sultat positif de cette preuve 99 des patients pr sentant une infection aigu au virus Puumala pr sentent des anticorps IgM du virus Puumala peu de temps apr s la survenue des premiers sympt mes typiques Une immunit ancienne au virus Puumala n entra ne pas un r sultat positif Un r sultat situ dans la zone grise signifie que le patient pourrait pr senter une infection aigu et n cessite que de nouveaux tests soient effectu s Dans ce cas suivre les consignes de votre organisation Il faudra g n ralement faire un nouveau pr l vement apr s quelques jours et retester celui ci Si le r sultat se trouve toujours dans la zone grise ou s av re n gatif le patient ne pr sente pas d infection aigu au virus de Puumala CONTR LE DE QUALIT V rifier que l absorbance m diane du contr le n gatif et positif r ponde aux crit res figurant sur la fiche de donn es de contr le Veuillez noter que les valeurs des contr les positifs et n gatifs peuvent varier de lot lot La variation d absorbance de chaque paire d chantillon et de contr le doit tre inf rieure 10 Si le contr le positif est utilis dans diff rentes positions sur la plaque la variation d absorbance doit tre inf rieure 20 CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE Sensi
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