Home

CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT

1. 10 minutes avant le test Tester les chantillons imm diatement apr s avoir suivi cette proc dure MAT RIEL REQUIS MAIS NON FOURNI 1 Agitateur clinique capacit de 100 110 trs min 2 Pipettes gradu es ou micropipetteur pour la suspension dilution des chantillons 3 Tubes essais 12x75mm 4 Minuteur 5 Stylo marqueur 6 Bain d eau bouillante 7 Flasque volum trique ou cylindre gradu 8 Eau d min ralis e 9 Flacon avec bouchon vis 1x de diluant d chantillon pr t l emploi 10 M langeur Vortex lampe centrifuge incandescence haute densit en option PR PARATION ET STOCKAGE DU R ACTIF Diluant d chantillon Le diluant d chantillon est fourni une concentration 10x Pr parer une dilution concentration n cessaire 1x dans une bouteille s par e en associant le contenu entier de 10 flacons de diluant d chantillons avec 90 ml d eau d min ralis e M langer le diluant d chantillons concentr et tiqueter avec la date d expiration sur le diluant d chantillons 10x Utiliser si n cessaire ou stocker 2 8 C Prot ase Pr parer la solution de prot ase en ajoutant 3 ml de diluant d chantillons pr t l emploi au flacon contenant le cachet d enzyme Attendre 30 minutes pour une restitution compl te en agitant le flacon au moins deux fois pendant ce temps tiqueter le flacon avec la date de reconstitution La solution de prot ase peut tre stock e 2 8
2. 3000 rpm per 10 minuti a temperatura ambiente Utilizzando una pipetta di dispensazione o un microinfusore decantare attentamente la sostanza sulla superficie del precipitato 50 ul per evitare di aspirare il pellet Analisi qualitativa Nota il reagente e i controlli lattice positivo alto positivo basso e negativo sono forniti in modo ottimale in bottiglie dotate di contagocce Per la somministrazione tenere la bottiglia in posizione verticale e spremere lasciando cadere una goccia nel cerchio del test di una carta di reazione 1 Mettere nuovamente in sospensione il reagente lattice capovolgendo rapidamente la bottiglia numerose volte Versare una goccia del reagente lattice in un cerchio separato del test per analizzare ciascun campione e controllo 2 Versare una goccia di ciascun controllo ben miscelato in un cerchio del test separato e contenente il reagente lattice Utilizzare la parte finale a spatola di un altra pipetta in dotazione per miscelare con forza ciascun controllo e ciascun reagente lattice Gettare le pipette al termine di suddetta fase ITALIAN 3 Utilizzando le pipette in dotazione versare una goccia di ciascun campione pretrattato circa 50 ul in un cerchio del test contenente il reagente lattice Con l estremit finale a spatola della pipetta miscelare con forza il campione e il reagente lattice coprendo l intera area del cerchio Gettare le pipette al termine di suddetta fase 4 Posizionare la cart
3. Antigenen in Serum und Liquor von Patienten mit Kryptokokkose bekannt Bei weiteren Tests berichteten Forscher von falsch positiven Reaktionen im Serum von Patienten mit Rheumafaktor 1983 setzten Stockman und Roberts eine enzymatische Methode ein die Protease zur Vermeidung von St rfaktoren z B dem Rheumafaktor in Serum einschloss Solche Faktoren umfassen dar ber hinaus Immunkomplexe von denen nachgewiesen wurde dass sie das CPS Antigen maskieren und seine Erkennung durch sensibilisierte Latexpartikel verhindern Seit damals gilt die Latexagglutination als eine spezifische und sensitive Methode zum schnellen Nachweis des CPS Antigens in Serum und Liquor TESTPRINZIP Das Cryptococcus Antigen Testkit umfasst die Verwendung von mit monoklonalen Maus IgM Antik rpern sensibilisierten Latexpartikeln Das CPS Antigen im Patientenserum oder Liquor reagiert mit dem sensibilisierten Latexpartikeln und erzeugt hierbei eine sichtbare Agglutination Die Verwendung von monoklonalen IgM Antik rpern und die Behandlung von Serum mit Protease verringert das Potenzial falsch positiver Reaktionen und macht somit die Durchf hrung eines Latextests als Begleitkontrolle zur Verifizierung der Spezifit t der Ergebnisse berfl ssig IM LIEFERUMFANG ENTHALTENE REAGENZIEN UND MATERIALIEN 1 Testlatex Mit monoklonalen IgM anti CPS Antik rpern sensibilisierte Latexpartikel in einem Puffer und in 0 01 Thimerosol 1 x 2 5 ml konserviert 2 N
4. C durant un mois compter de la date de reconstitution Il est galement possible d aliquoter la solution dans des tubes bouch s et tiquet s de mani re appropri e et de la stocker une temp rature lt 20 C jusqu la date d expiration du kit PROC DURE Pr paration des chantillons Liquide c phalo rachidien 1 Chauffer dans un bain d eau bouillante 100 C durant 5 minutes 2 Laisser l chantillon refroidir temp rature ambiante 3 Agiter le contenu du tube avant de tester S rum 1 Verser 100 200 ul de s rum dans un tube et ajouter le m me volume de solution de prot ase Boucher et sceller le tube M langer avec un agitateur vortex 2 Placer le tube dans un bain d eau bouillante 100 C durant 10 minutes 3 Laisser l chantillon refroidir jusqu temp rature ambiante et m langer d licatement avant de tester Remarque Si une floculation est observ e avant et ou apr s le traitement la prot ase centrifuger l chantillon 3000 trs min durant 10 minutes a temp rature ambiante En utilisant une pipette de distribution ou un micropipetteur d canter soigneusement le surnageant 50 ul afin d viter d aspirer le culot Test qualitatif Remarque Le latex de test et les contr les fortement positifs faiblement positifs et n gatifs sont fournis pr ts l emploi dans des flacons compte gouttes Pour verser tenir le flacon en position verticale et presser pour d pose
5. a 3 000 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente Con una pipeta o una micropipeta decante con cuidado el sobrenadante 50 ul para evitar la aspiraci n del sedimento Prueba cualitativa Nota el l tex de prueba y los controles positivo alto positivo bajo y negativo se suministran a la concentraci n de trabajo en frascos cuentagotas Dispense sosteniendo el frasco en posici n vertical y apriete para suministrar una gota en un c rculo de prueba de una tarjeta de reacci n 1 Vuelva a suspender el l tex de prueba invirtiendo r pidamente el frasco varias veces Dispense una gota del l tex de prueba en un c rculo de prueba diferente para cada muestra y control que deba ser analizado 2 Dispense una gota de cada control bien mezclado en un c rculo de ensayo diferente que contenga l tex de prueba Utilice el extremo plano de una pipeta diferente suministrada para mezclar cuidadosamente cada control y l tex de prueba Deseche la pipeta despu s de este paso 3 Utilice las pipetas suministradas dispense una gota de cada muestra pretratada aproximadamente 50 ul en un c rculo de prueba que contenga l tex de prueba Con el extremo plano de la pipeta mezcle cuidadosamente la muestra y el l tex de prueba y exti ndalos sobre todo el rea del c rculo Deseche la pipeta despu s de este paso SPANISH 4 Coloque la tarjeta de reacci n en un rotador cl nico y h galo girar a 100 110 rpm durante 5 minutos 5 Inmediat
6. and National Institutes of Health Washington D C 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M L Landry and M A Pfaller 2007 Manual of Clinical Microbiology 9 ed ASM Press Washington D C 10 Kovacs J A A A Kovacs M Polis W C Wright V J Gill C U Tuazon E P Gelmann H C Lane R Longfield G Overturf A M Macher A S Fauci J E Parrillo J E Bennett and H Masur 1985 Ann Int Med 103 533 538 11 Eng R H E Bishburg S M Smith and R Kapila 1986 Am J Med 81 19 23 12 Chuck S L and M A Sande 1989 N Engl J Med 321 794 798 13 Dimech W J 1991 Aust J Med Lab Sci 12 13 21 14 Boom W H D J Piper K L Ruoff and M J Ferraro 1985 J Clin Microbiol 22 856 857 15 Melcher G P K D Reed M G Rinaldi J W Lee P A Pizzo and T J Walsh 1991 J Clin Microbiol 29 192 196 16 Howell D D Orkiszewski and P Gilligan 1993 Abstract C 160 Abstracts of the 93 Gen Mtg of the ASM ASM Washington D C 17 Kiska D L D R Orkiszewski D Howell and P H Gilligan 1994 J Clin Microbiol 32 2309 2311 PACKUNGSGR SSE REF R30851501 Cryptococcus Antigen Test Kit 50 Tests Kit ous oo Symbollegende Katalog Nummer Medizinprodukt zur In vitro Diagnostik F r den Laboreinsatz LOT Ci Gebrauchsanweisung beachten Temperaturbereich Lagerungstemperatur LOT Chargenbezeichnung Chargennummer Verwendbar bis Verfall
7. antigen in serum and CSF PRINCIPLE Cryptococcus Antigen Test Kit incorporates the use of latex particles sensitized with murine mouse IgM monoclonal antibodies CPS antigen in patient serum or CSF interacts with sensitized latex particles producing visible agglutination The use of IgM monoclonal antibodies and treatment of serum with protease reduce the potential for false positive reactions eliminating the need to perform a companion control latex test to verify the specificity of results REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED 1 Test Latex Latex particles sensitized with IgM anti CPS monoclonal antibody in a buffer and preserved in 0 01 thimerosol 1 x 2 5 ml 2 Negative Control CPS antigen negative human serum in a_ buffer preserved in 0 1 sodium azide 1 x 0 8 ml 3 High Positive Control CPS antigen preserved in 0 1 sodium azide 1 x 0 8 ml 4 Low Positive Control CPS antigen preserved in 0 1 sodium azide 1 x 0 8 ml 5 Protease 1 enzyme tablet in a vial reconstitutes to 3 ml 6 Specimen Diluent 10 x NaCl Glycine solution preserved in 1 0 sodium azide 1 x 10 ml dilute to 1 x 7 Reaction Cards 12 cards x 6 circles each 8 Dispensing Pipettes 50 9 Instructions for Use IFU PRECAUTIONS This product is for n Vitro diagnostic use and should be used by properly trained individuals Precautions should be taken against the dangers of microbiological hazards by properly sterilizing specimens containers an
8. del Criptococco 5 68 2 Altro test del lattice 0 525 Nota due campioni sono risultati negativi al test antigenico del Criptococco e positivi titolo di 1 2 all altro test del lattice Entrambi i campioni sono risultati negativi tramite coltura Sono stati condotti studi di riproducibilit con il Kit per test antigenico del Criptococco e un altro test del lattice in commercio La maggior parte 96 dei titoli ottenuti con entrambi i test si differenziavano per 1 diluizione di provetta BIBLIOGRAFIA 1 Patterson T F and V T Andriole 1989 Eur J Clin Microbiol Infect Dis 8 457 465 2 Bloomfield N M A Gordon and D F Elmendorff Jr 1963 Proc Soc Exp Biol Med 114 64 67 Kaufman L and S Blumer 1977 Proc Int Conf Mycoses Pan Am Health Org 356 176 182 Asznowicz R H Newton John and J Kaldor 1979 Med J Aust 1 347 349 Stockman L and G D Roberts 1983 J Clin Microbiol 17 945 947 Gray L D and G D Roberts 1988 J Clin Microbiol 26 2450 2451 Hamilton J R A Nobel D W Denning and D A Stevens 1991 J Clin Microbiol 29 333 339 Chosewood L C and D E Wilson 2007 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 5 ed U S Dept of H H S CDC and National Institutes of Health Washington D C 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M L Landry and M A Pfaller 2007 Manual of Clinical Microbiology 9 ed ASM Pre
9. del Kit de prueba para el ant geno del criptococo y los resultados han sido aceptables Deben realizarse pruebas de control de calidad adecuadas a los procedimientos correspondientes establecidos en el laboratorio Si se observan resultados an malos en el control de calidad no deben comunicarse los resultados de los pacientes Procedimiento de control de calidad Los controles positivo alto positivo bajo y negativo deben analizarse cada uno con cada serie anal tica con muestras de pacientes tal como se describe en el apartado Prueba cualitativa Los controles positivo alto y positivo bajo deben aglutinar el l tex de prueba de modo diferencial e El control positivo alto debe producir una fuerte aglutinaci n e El control positivo bajo debe producir una aglutinaci n m s d bil pero claramente visible e El control negativo no debe producir ninguna aglutinaci n aunque son aceptables rastros de granularidad LIMITACIONES 1 Se han observado falsos positivos con fluido de sin resis condensaci n de agar en la superficies de las placas de cultivo y con muestras que conten an Trichosporon beigelii 2 Se produce prozona cuando las concentraciones de ant genos CPS son muy elevadas lo que origina un aparente resultado negativo El ant geno CPS se une al anticuerpo murino y cubre la mayor parte de los puntos de uni n lo que impide la aglutinaci n del l tex Si se observa que la sintomatolog a del paciente es compatible
10. en el suero Dichos factores tambi n incluyen complejos inmunes que se han mostrado capaces de enmascarar el ant geno CPS e impedir su reconocimiento mediante part culas de l tex sensibilizadas Desde entonces la aglutinaci n de l tex se ha considerado un m todo espec fico y sensible para la r pida detecci n de ant geno CPS en suero y en LCR PRINCIPIO DE LA PRUEBA El kit de prueba para el ant geno del criptococo incorpora el uso de part culas de l tex sensibilizadas con anticuerpos monoclonales tipo IgM murinos de rat n El ant geno CPS en el suero o el LCR del paciente interacciona con las part culas de l tex sensibilizadas y produce una aglutinaci n visible El uso de anticuerpos monoclonales de tipo IgM y el tratamiento del suero con proteasa reduce las posibilidades de obtener falsos positivos y elimina la necesidad de realizar una prueba con l tex de control complementaria para verificar la especificidad de los resultados REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS 1 L tex de prueba part culas de latex sensibilizadas con anticuerpo monoclonal anti CPS IgM en un tamp n conservadas en timerosol al 0 01 1x2 5 ml Control negativo suero humano normal en un tamp n conservado en azida s dica al 0 1 1 x 0 8 ml Control positivo alto de ant geno CPS C neoformans conservado en azida s dica al 0 1 1 x 0 8 ml Control positivo bajo de ant geno CPS C neoformans conservado en azida s dica al 0 1 1 x
11. internazionali 913 888 0939 Fax internazionale 913 895 4128 SPANISH remel CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT USO PREVISTO El Kit de prueba para el ant geno del criptococo de Remel es una prueba sencilla cualitativa o semicuantitativa de cinco minutos para la detecci n de ant genos polisac ridos asociados con la infecci n por Cryptococcus neoformans Se puede utilizar suero o l quido cefalorraqu deo LCR como muestra RESUMEN Y EXPLICACI N La criptococosis es una infecci n sist mica causada por la levadura C neoformans Los reservorios naturales para el C neoformans son la suciedad y las heces aviares La inhalaci n de levaduras puede comportar infecciones pulmonares y enfermedades posiblemente diseminadas Con frecuencia los pacientes presentan una grave debilitaci n especialmente aquellos que padecen un sindrome inmunosupresor Puesto que el C neoformans tiene una afinidad poco habitual por el tejido del sistema nervioso central es fundamental una detecci n r pida y temprana En el a o 1963 Bloomfield inform sobre la detecci n de ant genos polisac ridos del criptococo CPS en el suero y el LCR de pacientes con criptococosis En pruebas posteriores los investigadores informaron de falsos positivos en el suero de pacientes con factor reumatoide En 1983 Stockman y Roberts introdujeron un m todo enzim tico que incorporaba proteasa para eliminar factores de interferencia p ej factor reumatoide
12. non si raggiunga il punto finale 5 Analizzare ciascuna diluizione campione seguendo il protocollo descritto nella sezione Analisi qualitativa INTERPRETAZIONE Analisi qualitativa Risultato positivo Qualsiasi fenomeno di agglutinazione o formazione di grumi e schiarite del Test Latex immediatamente dopo i 5 minuti di rotazione Nessun fenomeno di agglutinazione formazione di grumi o schiarite del reagente lattice immediatamente dopo i 5 minuti di rotazione Nota la sospensione del reagente lattice deve apparire lattescente e si devono osservare leggere tracce di granulosit Test semiquantitativo Il titolo il reciproco dell ultima diluizione che produce un risultato positivo agglutinazione Risultato negativo RISULTATI ATTESI Un risultato positivo indica la presenza dell antigene CPS nel campione del paziente Un risultato negativo indica l assenza dell antigene CPS nel campione pazienti affetti da AIDS possono trattenere l antigene CPS per lunghi periodi di tempo effetto che potrebbe non essere causato dall attiva moltiplicazione del lievito Ai fini della prognosi della malattia potrebbe essere utile analizzare ulteriori campioni Titoli dell antigene del siero da 1 2 a 1 32 678 sono stati trovati in pazienti con un infezione HIV attiva La magnitudine dei suddetti titoli non sembra correlata alla severit dell infezione ma potrebbe risultare utile nella diagnosi dell infezione neurologica criptococcale t
13. turbias o que contienen material floculante suero o LCR deben centrifugarse antes de la prueba Si la centrifugaci n no mejora la calidad de la muestra o si el volumen es inadecuado para la prueba recoja una segunda muestra Guarde las muestras en tubos sellados y etiquetados a una temperatura de 2 8 C hasta una semana o a lt 20 C para periodos de tiempo m s largos Las muestras que han sido guardadas deben mezclarse bien y centrifugarse a 3000 rpm durante 10 minutos antes de la prueba Analice las muestras inmediatamente despu s de procesarlas MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Rotador cl nico capaz de alcanzar 100 110 rpm 2 pipetas graduadas o una micropipeta para la diluci n en serie de muestras 3 tubos de ensayo de 12 x 75 mm 4 cron metro 5 rotulador 6 ba o mar a en ebullici n 7 matraz aforado o cilindro graduado 8 agua desmineralizada 9 frasco con tapa de rosca para diluyente de muestra preparado a la concentraci n de trabajo 1x 10 mezclador tipo v rtex centr fuga l mpara incandescente de alta intensidad opcional PREPARACI N Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO Diluyente de muestra El diluyente de muestra se suministra a una concentraci n de 10x Prepare una diluci n a la concentraci n de trabajo 1x en un frasco diferente combinando el contenido entero del frasco de diluyente de muestra 10x con 90 ml de agua desmineralizada Mezcle el diluyente de muestra a la concentraci
14. 0 8 ml Proteasa 1 tableta enzim tica en un vial se reconstituye hasta 3 ml Diluyente de muestra soluci n 10x de NaCl Glicina conservada en azida s dica al 1 0 1 x 10 ml diluye hasta 1x Tarjetas de reacci n 12 tarjetas x 6 c rculos cada una Pipetas de dispensaci n 50 Instrucciones de uso IFU oa N gt an son PRECAUCIONES Este producto es de uso diagn stico in vitro y debe ser utilizado por personal con la formaci n adecuada Deben tomarse precauciones frente a los riesgos microbiol gicos esterilizando correctamente muestras recipientes y materiales de an lisis despu s de su uso Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones Precauciones de seguridad 1 Material potencialmente biopeligroso el suero humano utilizado para elaborar el control negativo se ha mostrado no reactivo ante la presencia del ant geno de superficie de la hepatitis B HBsAg y de los anticuerpos para el VIH utilizando m todos de prueba autorizados por la FDA Food and Drug Administration de los EE UU Puesto que ninguna prueba puede garantizar la ausencia de cualquier agente infeccioso todas las muestras humanas deben considerarse potencialmente infecciosas y manipularse como tal 2 El diluyente de muestra contiene azida s dica al 1 0 que resulta t xica si se ingiere y nociva por inhalaci n o contacto cut neo tambien puede ser t xica para el medio acu tico y provocar efectos a largo plazo Al verter reacti
15. 03 533 538 11 Eng R H E Bishburg S M Smith and R Kapila 1986 Am J Med 81 19 23 12 Chuck S L and M A Sande 1989 N Engl J Med 321 794 798 13 Dimech W J 1991 Aust J Med Lab Sci 12 13 21 14 Boom W H D J Piper K L Ruoff and M J Ferraro 1985 J Clin Microbiol 22 856 857 15 Melcher G P K D Reed M G Rinaldi J W Lee P A Pizzo and T J Walsh 1991 J Clin Microbiol 29 192 196 16 Howell D D Orkiszewski and P Gilligan 1993 Abstract C 160 Abstracts of the 93 Gen Mtg of the ASM ASM Washington D C 17 Kiska D L D R Orkiszewski D Howell and P H Gilligan 1994 J Clin Microbiol 32 2309 2311 ga nom CONDITIONNEMENT REF R30851501 Cryptococcus Antigen Test Kit 50 tests kit Legende des Symboles REF Numero de r f rence catalogue IVD Dispositif medical de diagnostic in vitro LAB Pour utilisation en laboratoire CE Consulter le mode d emploi IFU 1g Limites de temp rature stockage LOT Code du lot num ro de lot E utiliser avant le date de p remption EC REP Repr sentant autoris pour l UE CE IFU 30851501 r vis e le 2009 12 02 Imprim e aux Etats Unis 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 tats Unis Renseignements 800 255 6730 Site Web www remel com E mail remel remel com T l phone international 1 913 888 0939 T l copie international 1 913 89
16. 5 were tested with Cryptococcus Antigen Test Kit and another commercially available latex test The results indicated the sensitivity and specificity of Cryptococcus Antigen Test Kit is 100 and the reactions were judged easier to interpret Cryptococcus Antigen Test Kit 68 2 Other Latex Test 0 525 Note Two specimens were negative with Cryptococcus Antigen Test Kit and positive titer of 1 2 with the other latex test both specimens were negative by culture Reproducibility studies were conducted using Cryptococcus Antigen Test Kit and another commercially available latex test The majority 96 of titers obtained with both tests were within 1 tube dilution of each other BIBLIOGRAPHY 1 Patterson T F and V T Andriole 1989 Eur J Clin Microbiol Infect Dis 8 457 465 2 Bloomfield N M A Gordon and D F Elmendorff Jr 1963 Proc Soc Exp Biol Med 114 64 67 Kaufman L and S Blumer 1977 Proc Int Conf Mycoses Pan Am Health Org 356 176 182 Asznowicz R H Newton John and J Kaldor 1979 Med J Aust 1 347 349 Stockman L and G D Roberts 1983 J Clin Microbiol 17 945 947 Gray L D and G D Roberts 1988 J Clin Microbiol 26 2450 2451 Hamilton J R A Nobel D W Denning and D A Stevens 1991 J Clin Microbiol 29 333 339 Chosewood L C and D E Wilson 2007 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 5 ed U S Dept of H H
17. 5 4128 ITALIAN remel CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT USO PREVISTO Il Kit Remel per il test antigenico del Criptococco un test semplice qualitativo o semiquantitativo della durata di 5 minuti per la rilevazione di antigeni polisaccaridi associati a un infezione derivante da Criptococcus neoformans Come campioni possono essere usati siero o liquido cerebrospinale CSF SOMMARIO E SPIEGAZIONE La Criptococcosi un infezione sistemica causata dal lievito C neoformans Riserve naturali di C neoformans sono la terra e le feci aviarie L inalazione delle cellule di lievito pu causare un infezione polmonare e possibili malattie diffuse pazienti spesso presentano una debilitazione devastante specialmente quei soggetti affetti da sindrome immunosoppressiva Poich il C neoformans possiede un inusuale attrazione per il tessuto del sistema nervoso centrale un individuazione rapida e precoce di fondamentale importanza Nel 1963 Bloomfield ha riscontrato la rilevazione di antigeni polisaccaridi criptococcali CPS nel siero e nel CFS di pazienti affetti da criptococcosi In analisi successive i ricercatori hanno riscontrato reazioni false positive nel siero di pazienti affetti da fattore reumatoide Nel 1983 Stockman e Roberts hanno introdotto un metodo enzimatico incorporando la proteasi per eliminare i fattori di interferenza ad esempio il fattore reumatoide nel siero Suddetti fattori comprendono anche gli immunocompless
18. By Expiration Date EC REP European Authorized Representative CE IFU 30851501 Revised December 2 2009 Printed in U S A 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA General Information 800 255 6730 Website www remel com Email remel remel com Local International Phone 913 888 0939 International Fax 913 895 4128 GERMAN remel CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT VERWENDUNGSZWECK Remel Cryptococcus Antigen Testkit ist ein einfacher qualitativer oder semi quantitativer 5 Minuten Test zum Nachweis von Polysaccharid Antigenen die mit Cryptococcus neoformans Infektionen assoziiert sind Serum oder Liquor cerebrospinalis CSF k nnen als Proben verwendet werden ZUSAMMENFASSENDE ERKL RUNG Bei Kryptokokkose handelt es sich um eine systemische Infektion die durch den Hefepilz C neoformans hervorgerufen wird C neoformans kommt in der Natur im Boden und in den F kalien von V geln vor Das Einatmen von Hefezellen kann zu einer Infektion der Lungen und m glicherweise zu einer disseminierten Erkrankung f hren Die Patienten zeigen h ufig eine sehr starke Abwehrschw che insbesondere diejenigen die ein immuno suppressives Syndrom aufweisen Da C neoformans eine au ergew hnliche Affinit t zum Gewebe des zentralen Nervensystems aufweist ist eine schnelle und fr hzeitige Erkennung von wesentlicher Bedeutung Im Jahre 1963 gab Bloomfield den Nachweis von kryptokokkalen Polysaccharid CPS
19. ENGLISH remel CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT INTENDED USE Remel Cryptococcus Antigen Test Kit is a simple qualitative or semi quantitative 5 minute test for detection of polysaccharide antigens associated with Cryptococcus neoformans infection Serum or cerebrospinal fluid CSF may be used as specimens SUMMARY AND EXPLANATION Cryptococcosis is a systemic infection caused by the yeast C neoformans The natural reservoirs for C neoformans are soil and avian feces Inhalation of yeast cells may lead to a lung infection and possibly disseminated disease Patients often present with devastating debilitation especially those with an immunosuppressive syndrome Because C neoformans has an unusual affinity for central nervous system tissue rapid and early detection is essential In 1963 Bloomfield reported detection of cryptococcal polysaccharide CPS antigens in serum and CSF of patients with cryptococcosis In further testing investigators reported false positive reactions in the serum of patients with rheumatoid factor In 1983 Stockman and Roberts introduced an enzymatic method incorporating protease to eliminate interference factors e g rheumatoid factor in serum Such factors also include immune complexes which have been shown to mask CPS antigen and prevent its recognition by sensitized latex particles Since then latex agglutination has been found to be a specific and sensitive method for rapid detection of CPS
20. Humanproben als potenziell infekti s betrachtet und entsprechend behandelt werden 2 Die Probenverd nnung enth lt 1 0 Natriumazid das beim Verschlucken giftig ist und beim Einatmen oder bei Hautkontakt gesundheitssch digend sein kann es kann Gew sser vergiften und langfristige sch dliche Auswirkungen haben Nach der Entsorgung der Reagenzien in einen Ausguss zur Vermeidung einer Azidansammlung mit gro en Mengen Wasser sp len 3 F r genaue Angaben zur chemischen Zusammensetzung der Reagenzien siehe Datenblatt f r Materialsicherheit 4 Den Testlatex oder die Kontrollen nicht verd nnen 5 Die Reagenzien von Kits verschiedener Chargen d rfen nicht ausgetauscht werden 6 Proben sollten nicht wiederholt aufgetaut werden Die Verwendung selbstabtauender Gefrierschr nke f r die Aufbewahrung von Proben wird nicht empfohlen LAGERUNG Das Produkt sollte in seinem Originalbeh lter im Dunkeln bei 2 8 C bis zum Gebrauch aufbewahrt werden Die Komponenten vor der Verwendung auf Raumtemperatur bringen Nicht einfrieren oder berhitzen BEEINTR CHTIGUNG DER PRODUKTQUALIT T Dieses Produkt sollte bei 1 einer Farb nderung der Reagenzien 2 beim berschreiten des Verfallsdatums und 3 beim Auftreten anderer Anzeichen eines Qualit tsverlusts nicht verwendet werden Der Testlatex sollte milchig erscheinen Sofern die Agglutination im Latex eingetreten ist und nicht durch ein schnelles mehrmaliges Umdrehen der Flasche vertei
21. M Polis W C Wright V J Gill C U Tuazon E P Gelmann H C Lane R Longfield G Overturf A M Macher A S Fauci J E Parrillo J E Bennett and H Masur 1985 Ann Int Med 103 533 538 11 Eng R H E Bishburg S M Smith and R Kapila 1986 Am J Med 81 19 23 12 Chuck S L and M A Sande 1989 N Engl J Med 321 794 798 13 Dimech W J 1991 Aust J Med Lab Sci 12 13 21 14 Boom W H D J Piper K L Ruoff and M J Ferraro 1985 J Clin Microbiol 22 856 857 15 Melcher G P K D Reed M G Rinaldi J W Lee P A Pizzo and T J Walsh 1991 J Clin Microbiol 29 192 196 16 Howell D D Orkiszewski and P Gilligan 1993 Abstract C 160 Abstracts of the 93 Gen Mtg of the ASM ASM Washington D C 17 Kiska D L D R Orkiszewski D Howell and P H Gilligan 1994 J Clin Microbiol 32 2309 2311 ours PRESENTACION REF R30851501 Cryptococcus Antigen Test Kit de 50 pruebas Simbolos LE Limite de temperatura de almacenamiento LOT C digo de lote n mero de lote E Fecha de caducidad Representante autorizado en Europa CE IFU 30851501 revisado el 2009 12 02 Impreso en los EE UU 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 EE UU Informaci n general 800 255 6730 Direcci n en Internet www remel com Correo electr nico remel remel com Tel fono local Internacional 913 888 0939 Fax internacional 913 895 4128
22. PERFORMANCE 60 chantillons de s rum r put s non r actifs et s lectionn s par randomisation se sont av r s n gatifs non r actifs lorsqu ils ont t test s avec le kit de test antig nique Cryptococcus Parmi ces s rums se trouvaient les chantillons de r f rence RF des Centres de Contr le et de Pr vention de la Maladie 1000 IU ml lesquels comptaient de nombreux s rums positifs au tissu conjonctif et au facteur rhumato de ainsi qu aux anticorps de la rub ole et autres anticorps non sp cifiques Ces r sultats ont prouv que le kit de test antig nique Cryptococcus offre une sensibilit optimale sans utiliser un contr le au latex pour v rifier la sp cificit Une tude ind pendante a t men e dans un laboratoire clinique associ un grand h pital Les chantillons de s rum et de liquide c phalo rachidien 595 ont t test s avec le kit de test antig nique Cryptococcus et un autre test au latex disponible dans le commerce Les r sultats ont indiqu que la sensibilit et la sp cificit du kit de test antig nique Cryptococcus est de 100 et que les r actions ont t jug es plus simples interpr ter Kit de test antig nique Cryptococcus 68 2 Autre test au latex 0 525 Remarque Deux chantillons sont n gatifs avec le kit de test antig nique Cryptococcus et positifs titre de 1 2 avec l autre test au latex Les deux chantillons tai
23. Positive Control must produce strong agglutination e The Low Positive Control must produce weaker but clearly visible agglutination e The Negative Control must not produce any agglutination although trace granularity is acceptable LIMITATIONS 1 False positive reactions have been reported with syneresis fluid agar surface condensation from culture plates and with specimens containing Trichosporon beigelii 2 Prozone occurs when concentrations of CPS antigens are very high causing what appears to be a negative result CPS antigen binds the murine antibody and covers most of the binding sites preventing agglutination of the latex If patient symptomology is reported to be consistent with cryptococcosis dilute the CSF or protease treated serum specimen 1 10 and repeat testing PERFORMANCE CHARACTERISTICS Sixty randomly selected known nonreactive serum specimens were negative nonreactive when tested with Cryptococcus Antigen Test Kit Among these sera were the Centers for Disease Control and Prevention RF reference 1000 1U ml samples which included many connective tissue and rheumatoid factor positive sera along with rubella and other nonspecific antibodies These results demonstrate Cryptococcus Antigen Test Kit provides optimum sensitivity without the use of control latex to verify specificity An independent study was conducted at a clinical laboratory associated with a large hospital Serum and CSF specimens 59
24. REPARATION AND STORAGE Specimen Diluent The Specimen Diluent is provided at 10x concentration Prepare a working strength dilution 1x concentration in a separate bottle by combining the entire contents of the 10x Specimen Diluent bottle with 90 ml of demineralized water Mix the working strength Specimen Diluent and label with the expiration date on the 10x Specimen Diluent Use as needed or store at 2 8 C Protease Prepare the protease solution by adding 3 ml of working strength Specimen Diluent to the vial containing the enzyme tablet Allow 30 minutes for complete reconstitution swirling the vial at least twice during this time Label the vial with the date of reconstitution Protease solution can be stored at 2 8 C for one month from the date of reconstitution Alternatively aliquot the solution into appropriate capped and labeled tubes and store at lt 20 C until the expiration date of the kit PROCEDURE Specimen Preparation CSF 1 Heat in a boiling water bath 100 C for 5 minutes 2 Allow the specimen to cool to room temperature 3 Vortex the contents of the tube before testing Serum 1 Dispense 100 to 200 ul of serum in a tube and add an equal volume of protease solution Cap and seal the tube Mix by vortexing 2 Place the tube in a boiling water bath 100 C for 10 minutes 3 Allow the specimen to cool to room temperature and gently mix before testing Note If flocculation is observed before and or aft
25. S CDC and National Institutes of Health Washington D C 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M L Landry and M A Pfaller 2007 Manual of Clinical Microbiology 9 ed ASM Press Washington D C 10 Kovacs J A A A Kovacs M Polis W C Wright V J Gill C U Tuazon E P Gelmann H C Lane R Longfield G Overturf A M Macher A S Fauci J E Parrillo J E Bennett and H Masur 1985 Ann Int Med 103 533 538 11 Eng R H E Bishburg S M Smith and R Kapila 1986 Am J Med 81 19 23 12 Chuck S L and M A Sande 1989 N Engl J Med 321 794 798 13 Dimech W J 1991 Aust J Med Lab Sci 12 13 21 14 Boom W H D J Piper K L Ruoff and M J Ferraro 1985 J Clin Microbiol 22 856 857 15 Melcher G P K D Reed M G Rinaldi J W Lee P A Pizzo and T J Walsh 1991 J Clin Microbiol 29 192 196 16 Howell D D Orkiszewski and P Gilligan 1993 Abstract C 160 Abstracts of the 93 Gen Mtg of the ASM ASM Washington D C 17 Kiska D L D R Orkiszewski D Howell and P H Gilligan 1994 J Clin Microbiol 32 2309 2311 ga nom PACKAGING REF R30851501 Cryptococcus Antigen Test Kit 50 Tests Kit Symbol Legend REF Catalog Number mm In Vitro Diagnostic Medical Device IVD LAB LOT For Laboratory Use Chi Consult Instructions for Use IFU Temperature Limitation Storage Temp LOT Batch Code Lot Number Use
26. Test semi quantitatif Le titre est la r ciprocit de la derni re dilution qui produit un r sultat positif agglutination VALEURS ATTENDUES Un r sultat positif indique la pr sence d antigene polysaccharidique cryptococcique dans l chantillon du patient Un r sultat n gatif indique l absence de niveaux d antig ne polysaccharidique cryptococcique d tectables dans l chantillon Les patients atteints du SIDA peuvent fixer l antigene polysaccharidique cryptococcique sur de plus longues dur es ce qui peut n avoir aucun rapport avec la multiplication active de la levure Le test des chantillons obtenus peut tre utile pour d terminer le pronostic de la maladie Des titres d antig ne au s rum allant de 1 2 1 32 678 ont t signal s chez des patients souffrant d une infection VIH active La magnitude de tels titres ne semble pas tre en corr lation avec la s v rit de l infection mais peut s av rer utile pour diagnostiquer une infection cryptococcique neurologique Des titres gt 1 10 000 chez des patients atteints du SIDA ont t associ s une mortalit de 100 CONTR LE DE QUALIT Tous les num ros de lots des kits de test antig nique Cryptococcus ont t test s et reconnus acceptables Le test de contr le de la qualit doit satisfaire aux crit res tablis pour les proc dures de contr le de qualit du laboratoire En cas de r sultats de contr le de qualit aberrants ne pas rendre les
27. a di reazione su di un agitatore rotante clinico e far girare a 100 110 rpm per 5 minuti 5 Subito dopo la rotazione di 5 minuti inclinare il vetrino per ottenere una combinazione del flusso ed esaminare con attenzione l agglutinazione in ciascun cerchio Mettere a confronto la reazione di ciascun campione analizzato con il controllo negativo Nota possibile utilizzare una lampada incandescente ad alta intensit per facilitare la lettura dei risultati Analisi semiquantitativa di campioni positivi 1 Aggiungere 0 1 mL di diluente per campioni ottimale a ciascuna delle 8 provette numerate da 1 a 8 2 Aggiungere 0 1mL di CSF trattata con calore o di siero trattato con proteasi gi a 1 2 alla provetta 1 Utilizzando una pipetta pulita miscelare il contenuto della provetta 1 e trasferirne 0 1 mL nella provetta 2 Gettare la provetta non mischiare il contenuto della provetta 2 con quello della pipetta 3 Con una pipetta pulita miscelare con forza il contenuto della provetta 2 e trasferirne 0 1 mL nella provetta 3 Gettare la pipetta non mischiare il contenuto della provetta 3 con quello della pipetta 4 Mediante la produzione di seriali procedere alla duplicazione delle diluizioni del campione dalla provetta 8 Le diluizioni di siero preparate sono rispettivamente da 1 4 a 1 512 per le provette da 1 a 8 Per il CSF le diluizioni di siero sono da 1 2 a 1 256 possibile diluire ulteriormente il contenuto della provetta 8 qualora
28. amente despu s de la rotaci n de 5 minutos incline el portaobjetos para obtener un patr n de flujo y examine minuciosamente cada c rculo en b squeda de aglutinaciones Compare la reacci n de cada muestra de prueba con el control negativo Nota una l mpara incandescente de alta intensidad puede facilitar la interpretaci n de los resultados Prueba semicuantitativa de muestras positivas 1 A ada 0 1 ml de diluyente de muestra a la concentraci n de trabajo en cada uno de los 8 tubos que han sido etiquetados del 1 al 8 2 A ada 0 1 ml del LCR tratado con calor o del suero tratado con proteasa ya a 1 2 en el tubo 1 Con una pipeta limpia mezcle los contenidos del tubo 1 y transfiera 0 1 ml al tubo 2 Deseche la pipeta no mezcle los contenidos del tubo 2 con la pipeta 3 Con una pipeta limpia mezcle cuidadosamente los contenidos del tubo 2 y transfiera 0 1 ml al tubo 3 Deseche la pipeta no mezcle los contenidos del tubo 3 con la pipeta 4 Siga efectuando diluciones dobles de la muestra en serie hasta el tubo 8 Las diluciones en suero preparadas son de 1 4 hasta 1 512 para los tubos 1 8 respectivamente Para el LCR las diluciones de suero son de 1 2 a 1 256 El tubo 8 puede diluirse todav a m s si no se ha alcanzado un criterio de valoraci n 5 Analice cada diluci n de muestra siguiendo el protocolo descrito en en el apartado Prueba cualitativa INTERPRETACI N Prueba cualitativa Resultado positivo Cualquier aglut
29. bbe sembrare un risultato negativo L antigene CPS si lega con l anticorpo murino e copre la maggior parte dei siti di legame impedendo l agglutinazione del lattice Qualora la sintomatologia del paziente sia coerente con la criptococcosi diluire il siero campione CSF o trattato con proteasi 1 10 e ripetere il test PRESTAZIONI Sei campioni di siero notoriamente non reattivi e scelti a caso sono risultati negativi non reattivi al test antigenico del Criptococco Questi sieri comprendevano i campioni 1000 IU ml di riferimento dell FR dei Centres for Disease Control and Prevention Centri per il controllo e la prevenzione delle Malattie e includevano molti campioni del tessuto connettivo e positivi al fattore reumatoide insieme agli anticorpi contro la Rubella e altri anticorpi non specifici Questi risultati hanno dimostrato come il Kit per test antigenico del Criptococco fornisca un ottimo livello di sensibilit senza l utilizzo del controllo lattice per verificare la specificit Presso un laboratorio clinico di un importante ospedale stato condotto uno studio indipendente Campioni di siero e CSF 595 sono stati analizzati con il Kit per test antigenico del Criptococco e un altro test del lattice in commercio risultati hanno dimostrato che la sensibilit e la specificit del Kit per test antigenico del Criptococco sono del 100 e le reazioni sono state ritenute di pi facile interpretazione Kit per test antigenico
30. bei Synerese Fl ssigkeit Agar Oberfl chenkondensation von Kulturpl ttchen und bei Proben mit Trichosporon beigelii nachgewiesen 2 Ein Prozone tritt auf wenn die Konzentrationen der CPS Antigene sehr hoch sind und anscheinend zu einem negativen Ergebnis f hren Das CPS Antigen bindet den murinen Antik rper bedeckt die meisten Bindungspositionen und verhindert so eine Agglutination des Latex Sofern die Symptomologie des Patienten als mit Kryptokokkose bereinstimmend berichtet wird die Liquorprobe oder die Protease behandelte Serumprobe im Verh ltnis 1 10 verd nnen und den Test wiederholen LEISTUNGSMERKMALE Sechzig zuf llig ausgew hlte bekannt nicht reaktive Serumproben waren negativ nicht reaktiv als sie mit dem Cryptococcus Antigen Testkit getestet wurden Zwischen diesen Sera befanden sich RF Referenzproben der Centers for Disease Control and Prevention 1000 IU ml die viele Bindegewebe und Rheumafaktor positive Sera zusammen mit Rubella und anderen nichtspezifischen Antik rpern umfassten Diese Ergebnisse belegen dass das Cryptococcus Antigen Testkit h chste Sensitivit t ohne die Verwendung eines Kontrolllatex zur Verifizierung der Spezifit t bietet Eine unabh ngige Studie wurde in einem an ein gro es Krankenhaus angeschlossenen Kliniklabor durchgef hrt Serum und Liquor Proben 595 wurden mit dem Cryptococcus Antigen Testkit und einem anderen im Handel erh ltlichen Latextest getestet Die Ergebni
31. benverd nnung 10 Vortex Mischer Zentrifuge Hochintensit ts Gl hlampe optional REAGENZPR PARATION UND LAGERUNG Probenverd nnung Die Probenverd nnung wird in einer 10 fachen Konzentration geliefert Eine Arbeitskonzentrationsl sung 1 fache Verd nnung in einer separaten Flasche durch Verbindung des gesamten Inhalts der Flasche mit der 10 fachen Probenverd nnung mit 90ml demineralisiertem Wasser vorbereiten Die Probenverd nnung in Arbeitskonzentration mischen und mit dem Verfallsdatum auf der 10 fachen Probenverd nnung versehen Nach Bedarf verwenden oder bei 2 8 C lagern Protease Die Protease L sung unter Hinzugabe von 3 ml Probenverd nnung in Arbeits konzentration in das Fl schchen mit der Enzym Tablette vorbereiten 30 Minuten bis zur vollst ndigen Rekonstitution abwarten w hrend dieser Zeit das Fl schchen mindestens zweimal schwenken Das Fl schchen mit dem Datum der Rekonstitution versehen Die Protease L sung kann vom Tag der Rekonstitution an einen Monat bei 2 8 C gelagert werden Alternativ k nnen auch Teilmengen der L sung in entsprechend verschlossene und etikettierte R hrchen gegeben und bei lt 20 C bis zum Verfallsdatum des Kits gelagert werden VERFAHREN Vorbereitung der Probe Liquor 1 In einem Wasserbad mit kochendem Wasser 100 C 5 Minuten lang erw rmen 2 Die Proben auf Raumtemperatur abk hlen lassen 3 Den Inhalt des R hrchens vor dem Test mit einem Vortex Mischer misc
32. con criptococosis diluya la muestra de LCR o de suero tratado con proteasa 1 10 y repita la prueba CARACTER STICAS DE RENDIMIENTO Sesenta muestras de suero seleccionadas aleatoriamente y que se sab an no reactivas dieron negativo no reactivo al analizarse con el Kit de prueba para el ant geno del criptococo Entre estos sueros se encontraban las muestras de referencia 1000 Ul ml de los Centros para el Control y la Prevenci n de Enfermedades Centers for Disease Control and Prevention de los EE UU que inclu an muchos sueros positivos de tejido conjuntivo y factor reumatoide junto con anticuerpos contra la rub ola y otros anticuerpos no espec ficos Estos resultados demuestran que el Kit de prueba para el ant geno del criptococo ofrece una sensibilidad ptima sin el uso de un l tex de control para verificar la especificidad Se llev a cabo un estudio independiente en un laboratorio cl nico asociado con un importante hospital Se analizaron 595 muestras de suero y LCR con el Kit de prueba para el ant geno del criptococo y otro sistema de prueba de l tex disponible en el mercado Los resultados indicaron que la sensibilidad y especificidad del Kit de prueba para el ant geno del criptococo es del 100 y sus reacciones se consideraron m s f ciles de interpretar Kit de prueba para el ant geno del criptococo Otra prueba 68 2 de l tex 0 525 Nota dos muestras dieron resul
33. cquare con grandi quantit di acqua per evitare l accumulo di azide 3 Consultare la Scheda di Sicurezza del prodotto per informazioni dettagliate sui reagenti chimici Non diluire i reagenti o i controlli lattice Non scambiare alcun reagente di un kit con altri di un lotto differente I campioni non devono essere congelati e scongelati pi di una volta Si sconsiglia l uso di un congelatore autosbrinante per la conservazione dei campioni ons CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Il prodotto deve essere conservato nel suo contenitore originale a una temperatura di 2 8 C fino al momento dell utilizzo Portare i componenti a temperatura ambiente prima dell uso Non congelare n surriscaldare DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO Questo prodotto non deve essere usato se 1 i reagenti hanno cambiato aspetto 2 ha superato la data di scadenza oppure 3 presenta segni di deterioramento Il reagente lattice deve apparire lattescente Qualora l agglutinazione nel lattice sia evidente e non venga dispersa mediante inversione rapida della bottiglia operata varie volte non utilizzare il reagente controlli positivi e negativi devono essere soluzioni trasparenti PRELIEVO CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI Prelevare e trattare i campioni attenendosi alle linee guida raccomandate Rimuovere il siero dal sangue intero completamente coagulato e trasferire in una provetta pulita ed etichettata campioni che siano fortemente emolizzati torbid
34. d test materials after use Directions should be read and followed carefully Safety Precautions 1 Potential Biohazardous Material The human serum used to manufacture the Negative Control has been shown to be nonreactive for the presence of hepatitis B surface antigen HBsAg and antibodies to HIV and HCV using FDA licensed test methods Because no test can ensure the absence of every infectious agent all human specimens should be considered potentially infectious and handled accordingly 2 The Specimen Diluent contains 1 0 sodium azide which is toxic if swallowed and harmful by inhalation or skin contact may be toxic to the aquatic environment and cause long term effects Upon disposal of reagents into a sink flush with large amounts of water to prevent azide buildup 3 Refer to the Material Safety Data Sheet for detailed information on reagent chemicals 4 Do not dilute the Test Latex or Controls 5 Do not interchange reagents between kits of different lots 6 Specimens should not be frozen and thawed more than once The use of a self defrosting freezer for storage of specimens is not recommended STORAGE Store product in its original container at 2 8 C until used Allow components to equilibrate to room temperature before use Do not freeze or overheat PRODUCT DETERIORATION This product should not be used if 1 the appearance of the reagents has changed 2 the expiration date has passed or 3 there are other sig
35. der Pipette mischen 4 Fortfahren indem serielle Verdoppelungsl sungen der Probe durch R hrchen 8 hergestellt werden Die pr parierten Serumverd nnungen sind 1 4 bis 1 512 jeweils f r R hrchen 1 bis 8 Die Serumverd nnungen f r Liquor sind 1 2 bis 1 256 R hrchen 8 kann weiter verd nnt werden wenn der Endpunkt nicht erreicht ist 5 Jede Probenverd nnung entsprechend dem unter Qualitativer Test beschriebenen Protokoll testen INTERPRETATION Qualitativer Test Positives Ergebnis Jede Agglutination Verklumpung oder Ausf llung des Testlatex umgehend nach der 5 min tigen Rotation Negatives Ergebnis Keine Agglutination oder Verklumpung und Ausf llung des Testlatex umgehend nach der 5 min tigen Rotation Hinweis Die Testlatexsuspension sollte milchig erscheinen und schwache Spuren von K rnung sollten erkennbar sein Semi quantitativer Test Der Titer ist reziprok zur letzten Verd nnung die ein positives Ergebnis Agglutination erzeugt ERWARTETE WERTE Ein positives Ergebnis weist auf das Vorhandensein des CPS Antigens in der Patientenprobe hin Ein negatives Ergebnis weist auf die Abwesenheit von nachweisbaren Konzentrationen des CPS Antigens in der Probe hin AIDS Patienten k nnen ber l ngere Zeitr ume hinweg ein CPS Antigen aufweisen was nicht auf eine aktive Vermehrung der Hefezellen zur ckzuf hren ist Tests von Folgeproben k nnen zur Bestimmung der Krankheitsprognose n tzlich sein Serumanti
36. e s rum et le liquide c phalo rachidien des patients souffrant de cryptococcose Dans un test r alis ult rieurement les chercheurs ont signal des r actions faussement positives dans le s rum des patients pr sentant un facteur rhumatoide En 1983 Stockman et Roberts ont pr sent une nouvelle m thode enzymatique incorporant une prot ase pour liminer les facteurs d interf rence par ex un facteur rhumatoide dans le s rum De tels facteurs incluent galement des complexes immuns lesquels se sont av r masquer l antigene polysaccharidique cryptococcique et pr venir sa reconnaissance par des particules de latex sensibilis es Depuis lors il a t d couvert que l agglutination de latex est une m thode sp cifique et sensible permettant la d tection rapide de l antigene polysaccharidique cryptococcique dans le s rum et le liquide c phalo rachidien PRINCIPE Le kit de test antig nique Cryptococcus int gre l utilisation de particules de latex sensibilis es avec des anticorps monoclonaux murins souris IgM L antigene polysaccharidique cryptococcique dans le s rum ou le liquide c phalo rachidien d un patient pour produire une agglutination visible L utilisation d anticorps monoclonaux IgM et le traitement du s rum avec de la prot ase r duisent le potentiel de r actions faussement positives liminant ainsi la n cessit d effectuer un test concomitant de contr le au latex afin de v rifier la sp cific
37. egative Kontrolle Normales Humanserum in einem Puffer in 0 1 Natriumazid 1 x 0 8 ml konserviert 3 Stark positive Kontrolle C neoformans CPS Antigen in 0 1 Natriumazid 1 x 0 8 ml konserviert 4 Schwach positive Kontrolle C neoformans CPS Antigen in 0 1 Natriumazid 1 x 0 8 ml konserviert 5 Protease 1 Enzym Tablette in einem Fl schchen rekonstituiert zu 3 ml 6 Probenverd nnung 10x NaCI Glyzinl sung in 1 0 Natriumazid 1 x 10 mi verd nnt auf 1x konserviert 7 Reaktionskarten 12 Karten x jeweils 6 Kreise 8 Dosierpipetten 50 9 Gebrauchsanweisung IFU VORSICHTSMASSNAHMEN Dieses Produkt ist f r die Verwendung in der In vitro Diagnostik bestimmt und sollte nur von entsprechend geschulten Personen verwendet werden Es sind Vorsichtsma nahmen gegen die von mikrobiologischem Material ausgehenden Gefahren zu ergreifen indem Proben Beh lter und Testmaterial nach Gebrauch ordnungsgem sterilisiert werden Die Gebrauchsanweisung muss sorgf ltig gelesen und genau befolgt werden Sicherheitsma nahmen 1 Potentiell biogef hrliches Material Es wurde nachgewiesen dass das Humanserum das zur Herstellung der Negativkontrolle verwendet wird f r die Anwesenheit des Hepatitis B Oberfl chenantigens HBsAg und von Antik rpern f r HIV und HCV mithilfe von FDA lizenzierten Testmethoden nicht reaktiv ist Da kein Test die Abwesenheit jeglicher infekti sen Substanz zuverl ssig nachweisen kann sollten s mtliche
38. ent n gatifs par culture Des tudes de reproductivit ont t men es l aide du kit de test antig nique Cryptococcus et d un autre test au latex disponible dans le commerce La majorit 96 des titres obtenus avec les deux tests taient 1 tube de dilution chacun de l autre BIBLIOGRAPHIE 1 Patterson T F and V T Andriole 1989 Eur J Clin Microbiol Infect Dis 8 457 465 2 Bloomfield N M A Gordon and D F Elmendorff Jr 1963 Proc Soc Exp Biol Med 114 64 67 Kaufman L and S Blumer 1977 Proc Int Conf Mycoses Pan Am Health Org 356 176 182 Asznowicz R H Newton John and J Kaldor 1979 Med J Aust 1 347 349 Stockman L and G D Roberts 1983 J Clin Microbiol 17 945 947 Gray L D and G D Roberts 1988 J Clin Microbiol 26 2450 2451 Hamilton J R A Nobel D W Denning and D A Stevens 1991 J Clin Microbiol 29 333 339 Chosewood L C and D E Wilson 2007 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 5 ed U S Dept of H H S CDC and National Institutes of Health Washington D C 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M L Landry and M A Pfaller 2007 Manual of Clinical Microbiology 9 ed ASM Press Washington D C 10 Kovacs J A A A Kovacs M Polis W C Wright V J Gill C U Tuazon E P Gelmann H C Lane R Longfield G Overturf A M Macher A S Fauci J E Parrillo J E Bennett and H Masur 1985 Ann Int Med 1
39. er campioni ottimale e apporre l etichetta con la data di scadenza sul diluente per campioni 10x Utilizzare secondo le necessit e conservare a 2 8 C Proteasi Preparare la soluzione di proteasi aggiungendo 3 mL di diluente per campioni ottimale alla fiala contenente la tavoletta di enzimi Attendere 30 minuti per la completa ricostituzione agitando la fiala almeno due volte durante suddetto lasso di tempo Etichettare la fiala con la data di ricostituzione La soluzione di proteasi pu essere conservata a 2 8 C per un mese dalla data di ricostituzione In alternativa aliquotare la soluzione nelle rispettive provette chiuse ed etichettate e conservare a lt 20 C fino alla data di scadenza del kit PROCEDIMENTO Preparazione dei campioni CSF 1 Riscaldare a bagnomaria bollente 100 per 5 minuti 2 Attendere che il campione raggiunga la temperatura ambiente 3 Miscelare con il Vortex il contenuto della provetta prima di procedere con l analisi Siero 1 Versare da 100 a 200 pl di siero in una provetta e aggiungere un volume equivalente di soluzione proteasi Chiudere e sigillare la provetta Miscelare con il Vortex 2 Riscaldare a bagnomaria bollente 100 C per 10 minuti 3 Attendere che il campione raggiunga la temperatura ambiente e miscelare delicatamente prima di procedere con le analisi Nota qualora si osservasse la presenza di flocculazione prima e o dopo il trattamento con proteasi centrifugare il campione a
40. er protease treatment centrifuge the specimen at 3000 rpm for 10 minutes at room temperature Using a dispensing pipette or a micropipettor carefully decant the supernatant 50 ul to avoid aspirating the pellet Qualitative Testing Note The Test Latex and Controls High Positive Low Positive and Negative are supplied at working strength in dropper bottles To dispense hold the bottle in a vertical position and squeeze delivering one drop into a test circle of a reaction card 1 Resuspend the Test Latex by rapidly inverting the bottle several times Dispense one drop of the Test Latex into a separate test circle for each specimen and Control to be tested 2 Dispense one drop of each well mixed Control into a separate test circle containing Test Latex Use the paddle end of a separate pipette provided to thoroughly mix each Control and Test Latex Discard each pipette after this step 3 Using the provided pipettes dispense one drop of each pretreated specimen approximately 50 ul into a test circle containing Test Latex With the paddle end of the pipette thoroughly mix the specimen and Test Latex spreading over the entire area of the circle Discard the pipette after this step 4 Place the reaction card on a clinical rotator and rotate at 100 to 110 rpm for 5 minutes 5 Immediately following the 5 minute rotation tilt the slide to obtain a flow pattern and carefully examine each circle for agglutination Compare the reac
41. ette nach diesem Schritt entsorgen 3 Die mitgelieferten Pipetten zur Dosierung eines Tropfens jeder vorbehandelten Probe ca 50 ul in einen Testkreis mit Testlatex verwenden Mithilfe des Paddelendes der Pipette die Probe mit dem Testlatex sorgf ltig mischen indem sie ber den gesamten Bereich des Kreises verteilt wird Die Pipette nach diesem Schritt entsorgen 4 Die Reaktionskarte auf den klinischen Rotor setzen und bei 100 bis 110 U min 5 Minuten lang rotieren 5 Nach der 5 min tigen Rotation das Pl ttchen umgehend kippen um ein Flie muster zu erhalten und jeden Kreis sorgf ltig auf Agglutination untersuchen Die Reaktion jeder Testprobe mit der Negativkontrolle vergleichen Hinweis Eine Hochintensit ts Gl hlampe kann bei der Interpretation der Ergebnisse unterst tzend eingesetzt werden Semi quantitative Testverfahren positiver Proben 1 0 1 ml Probenverd nnung in Arbeitskonzentration jeder der 8 R hrchen hinzugeben die mit 1 bis 8 etikettiert wurden 2 0 1 ml w rmebehandelten Liquor oder Protease behandeltes Serum bereits in der Verd nnung 1 2 in R hrchen 1 geben Mithilfe einer sauberen Pipette den Inhalt von R hrchen 1 mischen und 0 1 ml in R hrchen 2 geben Die Pipette entsorgen den Inhalt von R hrchen 2 nicht mit der Pipette mischen 3 Mit einer sauberen Pipette den Inhalt von R hrchen 2 sorgf ltig mischen und 0 1 ml in R hrchen 3 geben Die Pipette entsorgen den Inhalt von R hrchen 3 nicht mit
42. fs 1 Ajouter 0 1 ml de diluant d chantillons pr t l emploi chacun des 8 tubes qui ont t tiquet s de 1 8 2 Ajouter 0 1 ml de liquide c phalo rachidien chauff ou de s rum trait la prot ase d j 1 2 au tube 1 l aide d une pipette propre m langer le contenu du tube 1 et en transf rer 0 1 ml dans le tube 2 Jeter la pipette ne pas m langer le contenu du tube 2 avec la pipette 3 Avec une pipette propre m langer vigoureusement le contenu du tube 2 et en transf rer 0 1 ml dans le tube 3 Jeter la pipette ne pas m langer le contenu du tube 3 avec la pipette 4 Poursuivre en cr ant des dilutions de duplication de l chantillon jusqu au tube 8 Les dilutions de s rum pr par es sont 1 4 1 512 pour les tubes 1 8 respectivement Pour le liquide c phalo rachidien les dilutions de s rum sont 1 2 1 256 Le tube 8 peut tre dilu davantage si aucun crit re d valuation n a t atteint 5 Tester chaque chantillon selon le protocole d crit sous Test qualitatif INTERPR TATION Test qualitatif R sultat positif Toute agglutination et clarification du latex de test juste apr s l tape de rotation de 5 minutes R sultat n gatif Toute agglutination ou clarification du latex de test juste apr s l tape de rotation de 5 minutes Remarque La suspension de latex de test doit devenir laiteuse et de l g res traces de granularit peuvent tre d tectables
43. gen Titer die in einem Bereich von 1 2 bis 1 32 678 liegen wurden bei Patienten mit einer aktiven HIV Infektion nachgewiesen Die Gr e solcher Titer scheint nicht in Korrelation zur Schwere der Infektion zu stehen aber kann bei der Diagnose einer neurologischen Kryptokokkeninfektion n tzlich sein Titer von gt 1 10 000 bei AIDS Patienten wurden mit einer Mortalit t von 100 in Verbindung gebracht QUALIT TSKONTROLLE S mtliche Chargennummern des Cryptococcus Antigen Testkit wurden getestet und f r tauglich befunden Die im Rahmen der Qualit tssicherung durchgef hrten Tests m ssen die Anforderungen anerkannter Qualit tssicherungsverfahren f r Labore erf llen Treten im Rahmen der Qualit tskontrolle abweichende Ergebnisse auf d rfen die Patientenergebnisse nicht verwendet werden Qualit tskontrollverfahren Die stark positiven schwach positiven und negativen Kontrollen sollten jeweils mit jedem Durchlauf von Patientenproben wie unter Qualitativer Test beschrieben getestet werden Die stark positiven und schwach positiven Kontrollen m ssen das Testlatex unterschiedlich agglutinieren e Die stark positive Kontrolle muss eine starke Agglutination erzeugen e Die schwach positive Kontrolle muss eine schw chere aber deutlich sichtbare Agglutination erzeugen e Die negative Kontrolle darf keine Agglutination erzeugen obwohl eine Spur K rnung akzeptabel ist EINSCHR NKUNGEN 1 Falsch positive Reaktionen wurden
44. hen Serum 1 100 bis 200 ul Serum in ein R hrchen pipettieren und die gleiche Menge Protease L sung hinzugeben Das R hrchen verschlie en und versiegeln Mit einem Vortex Mischer mischen 2 Das R hrchen in einem Wasserbad mit kochendem Wasser 100 C 10 Minuten lang erw rmen 3 Die Probe auf Raumtemperatur abk hlen lassen und vor dem Test sorgf ltig mischen Hinweis Sofern eine Flockung vor und oder nach der Protease Behandlung beobachtet wird die Probe bei 3000 U min 10 Minuten lang bei Raumtemperatur zentrifugieren Mithilfe einer Dosierpipette oder eines Mikropipettors den berstand 50 ul vorsichtig abgie en um das Ansaugen des Pellets zu vermeiden Qualitativer Test Hinweis Der Testlatex und die Kontrollen stark positiv schwach positiv und negativ werden in Arbeitskonzentration in Tropfflaschen geliefert Zur Dosierung die Flaschen in einer senkrechten Position halten und dr cken und so einen Tropfen auf einen Testkreis einer Reaktionskarte aufbringen 1 Den Testlatex durch mehrfaches schnelles Umdrehen der Flasche wieder suspendieren Einen Tropfen des Testlatex auf einen separaten Testkreis f r jede zu testende Probe und Kontrolle pipettieren 2 Einen Tropfen jeder gut gemischten Kontrolle in einen separaten Testkreis mit Testlatex pipettieren Das Paddelende jeder einzelnen Pipette im GERMAN Lieferumfang enthalten zum sorgf ltigen Mischen jeder Kontrolle mit jedem Textlatex verwenden Jede Pip
45. i i quali come stato dimostrato celano l antigene CPS e ne impediscono l identificazione da parte di particelle di lattice sensibilizzate Da allora stato scoperto che l agglutinazione del lattice un metodo specifico e sensibile per una veloce individuazione dell antigene CPS nel siero e nel CFS PRINCIPIO Il Kit per test antigenico del Criptococco prevede l utilizzo di particelle di lattice sensibilizzate con anticorpi monoclonali murini di topo IgM L antigene CPS nel siero o nel CSF del paziente reagisce con le particelle di lattice sensibilizzate producendo un evidente fenomeno di agglutinazione L utilizzo di anticorpi monoclonali IgM e il trattamento del siero con proteasi riducono il potenziale di reazioni false positive eliminando la necessit di effettuare un test parallelo di controllo lattice per verificare la specificit dei risultati REAGENTI E MATERIALI FORNITI 1 Reagente lattice Particelle di lattice sensibilizzate con anticorpo monoclonale IgM anti CPS in soluzione tampone e conservate in una soluzione di timerosolo 0 01 1 x 2 5 mL 2 Controllo negativo Siero umano normale in soluzione tampone conservato in 0 1 di Sodio azide 1 x 0 8 mL 3 Controllo positivo alto di antigene C neoformans CPS conservato in 0 1 di Sodio azide 1 x 0 8 mL 4 Controllo positivo basso di antigene C neoformans CPS conservato in 0 1 di Sodio azide 1 x 0 8 mL 5 Proteasi 1 tavoletta di enzimi in fiala ricosti
46. i o che contengano flocculanti siero o CSF devono essere centrifugati prima di essere sottoposti ad analisi Qualora la centrifugazione non dovesse migliorare la qualit dei campioni o il volume non fosse adeguato per le analisi prelevare un secondo campione Conservare i campioni in provette sigillate ed etichettate a una temperatura di 2 8 C per una settimana al massimo o a lt 20 C per periodi pi lunghi campioni conservati devono essere ben miscelati e centrifugati a 3000 rpm per 10 minuti prima di essere sottoposti ad analisi Analizzare i campioni immediatamente dopo averli processati MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO 1 Agitatore rotante clinico con velocit a 100 110 rpm 2 pipette graduate o microinfusore per le diluzioni seriali dei campioni 3 provette per test 12x75 mm 4 cronometro 5 penna per le annotazioni 6 bagnomaria bollente 7 matraccio o cilindro graduato 8 acqua demineralizzata 9 bottiglia con coperchio a vite per il diluente per campioni 1x preparato in modo ottimale 10 mixer Vortex centrifuga lampada incandescente ad alta intensit optional PREPARAZIONE E CONSERVAZIONE DEL REAGENTE Diluente per campioni Il diluente per campioni fornito a una concentrazione 10x Preparare una diluizione ottimale concentrazione 1x in una bottiglia separata unendo tutto il contenuto della bottiglia di diluente per campioni 10x con 90 mL di acqua demineralizzata Miscelare il diluente p
47. inaci n o aglomeraci n y transparencia del l tex de prueba inmediatamente despu s de los 5 minutos de rotaci n Resultado negativo Ninguna aglutinaci n ni aglomeraci n ni transparencia del l tex de prueba inmediatamente despu s de los 5 minutos de rotaci n Nota la suspensi n del l tex de prueba debe tener un aspecto blanquecino y podr an detectarse rastros tenues de granularidad Prueba semicuantitativa La titulaci n es la rec proca de la ltima diluci n que produce un resultado positivo aglutinaci n VALORES ESPERADOS Un resultado positivo indica la presencia de ant geno CPS en la muestra de un paciente Un resultado negativo indica la ausencia de niveles detectables de ant geno CPS en la muestra Los pacientes con SIDA pueden conservar ant geno CPS durante largos periodos lo que puede no deberse a la multiplicaci n activa de la levadura El an lisis de las muestras posteriores puede ser de utilidad para determinar el pron stico de la enfermedad En pacientes con infecci n por VIH activa se han observado titulaciones de ant genos del suero que oscilan entre 1 2 y 1 32 678 La magnitud de tales titulaciones no parece estar correlacionada con la gravedad de la infecci n pero puede ser til para el diagn stico de infecciones neurol gicas criptococales Las titulaciones de gt 1 10 000 en pacientes con SIDA se han asociado con un 100 de mortalidad CONTROL DE CALIDAD Se han probado todos los lotes
48. it des r sultats R ACTIFS ET MAT RIEL FOURNIS 1 Latex de test Particules de latex sensibilis es avec un anticorps monoclonal IgM anti polysaccharide cryptococcique dans un tampon et conserv es dans du thim rosol 0 01 1 x 2 5 ml 2 Contr le n gatif S rum humain normal dans un tampon conserv dans de l azide de sodium 0 1 1 x 0 8 ml 3 Contr le fortement positif d antig ne polysaccharidique cryptococcique C neoformans conserv dans de l azide de sodium 0 1 1 x 0 8 ml 4 Contr le faiblement positif d antig ne polysaccharidique cryptococcique C neoformans conserv dans de l azide de sodium 0 1 1 x 0 8 ml 5 Prot ase 1 cachet d enzyme dans un flacon se reconstitue 3 ml 6 Diluant d chantillon 10 x solution NaCl Glycine conserv e dans de l azide de sodium 1 0 1 x 10 ml diluer 1x 7 Fiches de r action 12 fiches x 6 cercles chacune 8 Pipettes de distribution 50 9 Mode d emploi IFU PR CAUTIONS Ce produit exclusivement destin un usage diagnostique in vitro ne doit tre utilis que par des personnes d ment form es Toutes les pr cautions contre les risques microbiologiques doivent tre prises en st rilisant correctement les chantillons les r cipients et les mat riaux de test apr s usage Il faut lire attentivement les instructions et les respecter scrupuleusement Pr cautions de s curit 1 Mat riel potentiellement nocif pour l
49. itoli gt 1 10 000 nei pazienti affetti da AIDS sono stati associati al 100 di mortalit CONTROLLO QUALIT Tutti i numeri di lotto del Kit per test antigenico del Criptococco sono stati testati ottenendo risultati ritenuti soddisfacenti Eseguire i test di controllo qualit in conformit con le procedure di controllo qualit definite dal laboratorio Se i test di controllo qualit forniscono risultati aberranti i risultati ottenuti con i campioni in esame non devono essere refertati Procedure di Controllo Qualit I controlli positivi alti positivi bassi e negativi devono essere effettuati con qualsiasi test sui campioni dei pazienti come descritto nella sezione Analisi qualitativa controlli positivi alti e positivi bassi devono agglutinarsi al reagente lattice in maniera diversa e controlli positivi alti devono produrre un evidente fenomeno di agglutinazione e controlli positivi bassi devono produrre un fenomeno di agglutinazione pi debole ma chiaramente visibile e controlli negativi non devono produrre alcun fenomeno di agglutinazione sebbene siano accettabili tracce di granulosit LIMITAZIONI 1 Sono state riscontrate reazioni false positive con il liquido di sineresi condensazione sulla superficie agar dalle piastre di coltura e con i campioni contenenti Trichosporon beigelii 2 L effetto prozona si verifica quando le concentrazioni degli antigeni CPS sono molto elevate causando quello che potre
50. lisation Attendre que les composants soient a temp rature ambiante avant de les utiliser Ne pas congeler ni surchauffer D T RIORATION DU PRODUIT Ce produit ne doit pas tre utilis si 1 l apparence des r actifs a chang 2 la date de p remption est d pass e ou 3 d autres signes de d t rioration sont pr sents Le latex de test doit devenir laiteux Si une agglutination appara t dans le latex et qu elle ne se disperse pas en secouant rapidement le flacon plusieurs fois ne pas utiliser le r actif Les contr les positifs et n gatifs doivent tre des solutions claires RECUEIL CONSERVATION ET TRANSPORT DES PR L VEMENTS Les chantillons doivent tre pr lev s et manipul s conform ment aux recommandations en usage dans la profession Retirer le s rum totalement coagul et le transf rer dans un tube propre et tiquet Les chantillons fortement h molys s troubles ou contenant une substance floculante s rum ou liquide c phalo rachidien doivent tre centrifug s avant d tre test s Si la centrifugation n am liore pas la qualit de l chantillon ou que le volume est inad quat pour tre test collecter un second chantillon Stocker les chantillons dans des tubes tiquet s 2 8 C jusqu une semaine ou une temp rature lt 20 C pour des p riodes plus longues Les chantillons ayant t stock s doivent tre vigoureusement m lang s et centrifug s 3000 trs min durant
51. lt werden kann das Reagenz nicht verwenden Die positiven und negativen Kontrollen sollten klare L sungen sein PROBENENTNAHME LAGERUNG UND TRANSPORT Die Probenentnahme und handhabung sollte unter Ber cksichtigung der empfohlenen Richtlinien durchgef hrt werden Das Serum aus vollst ndig geronnenem Vollblut in ein sauberes etikettiertes Fl schchen geben Proben die grob h molysiert oder tr b sind oder Flockungsmaterial Serum oder Liquor enthalten sollten vor dem Test zentrifugiert werden Sofern die Zentrifugierung die Qualit t der Probe nicht verbessert oder die Menge f r den Test nicht ausreicht eine zweite Probe entnehmen Die Proben in einem verschlossenen etikettierten R hrchen bei 2 8 C bis zu einer Woche oder bei lt 20 C f r einen l ngeren Zeitraum lagern Proben die gelagert wurden sollten vor dem Test sorgf ltig gemischt werden und bei 3000 U min 10 Minuten lang zentrifugiert werden Die Proben unmittelbar nach der Bearbeitung testen BEN TIGTE MATERIALIEN NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN 1 Klinischer Rotor mit einer Leistung von 100 bis 110 U min 2 Pipetten mit Markierung oder ein Mikropipettor zur seriellen Verd nnung von Proben 3 Testr hrchen 12 x 75 mm 4 Labortimer 5 Markierstift 6 Wasserbad mit kochendem Wasser 7 Messkolben oder zylinder mit Markierung 8 demineralisiertes Wasser 9 Flasche mit Schraubverschluss f r eine Arbeitskonzentration von 1x pr parierter Pro
52. mi Quantitative Test The titer is the reciprocal of the last dilution which produces a positive result agglutination EXPECTED VALUES A positive result indicates the presence of CPS antigen in the patient specimen A negative result indicates the absence of detectable levels of CPS antigen in the specimen AIDS patients may retain CPS antigen for long periods of time which may not be due to active multiplication of the yeast Testing of subsequent specimens may be useful in determining disease prognosis Serum antigen titers ranging from 1 2 to 1 32 678 have been reported in patients with active HIV infection The magnitude of such titers does not appear to correlate with the severity of infection but may be useful in diagnosing neurological cryptococcal infection Titers gt 1 10 000 in AIDS patients have been associated with 100 mortality QUALITY CONTROL All lot numbers of Cryptococcus Antigen Test Kit have been tested and found to be acceptable Quality control testing should be performed in accordance with established laboratory quality control procedures If aberrant quality control results are noted patient results should not be reported Quality Control Procedure The High Positive Low Positive and Negative Controls should each be tested with every test run of patient specimens as described under Qualitative Testing The High Positive and Low Positive Controls must agglutinate the Test Latex differentially e The High
53. n de trabajo y etiqu telo con la fecha de caducidad en el diluyente de muestra 10x Utilicelo cuando sea necesario o gu rdelo a 2 8 C Proteasa Prepare la soluci n de proteasa a adiendo al vial que contiene la tableta enzim tica 3 ml de diluyente de muestra a la concentraci n de trabajo Espere 30 minutos para obtener una reconstituci n completa y haga girar el vial al menos dos veces durante este tiempo Etiquete el vial con la fecha de reconstituci n La soluci n de proteasa puede almacenarse a 2 8 C durante un mes a partir de la fecha de reconstituci n Como alternativa divida la soluci n a partes iguales en tubos adecuadamente tapados y etiquetados y almac nelos a lt 20 C hasta la fecha de caducidad del kit PROCEDIMIENTO Preparaci n de las muestras LCR 1 Caliente en un ba o de agua hirviendo 100 C durante 5 minutos 2 Deje que la muestra se enfr e hasta llegar a la temperatura ambiente 3 Agite en el v rtex el contenido del tubo antes de la prueba Suero 1 Introduzca de 100 a 200 ul de suero en un tubo y a ada el mismo volumen de soluci n de proteasa Tapone el tubo y s llelo Mezcle agitando en el v rtex 2 Coloque el tubo en un ba o maria en ebullici n 100 C durante 10 minutos 3 Deje que la muestra se enfr e hasta llegar a la temperatura ambiente y ag tela suavemente antes de la prueba Nota si detecta floculaci n antes o despu s del tratamiento de proteasa centrifugue la muestra
54. ns of deterioration The Test Latex should appear milky If agglutination in the latex is apparent and is not dispersed by rapidly inverting the bottle several times do not use the reagent The Positive and Negative Controls should be clear solutions SPECIMEN COLLECTION STORAGE AND TRANSPORT Specimens should be collected and handled following recommended guidelines Remove serum from fully clotted whole blood and transfer to a clean labeled tube Specimens that are grossly hemolyzed cloudy or contain flocculant material serum or CSF should be centrifuged before testing If centrifugation does not improve the quality of the specimen or the volume is inadequate for testing collect a second sample Store specimens in sealed labeled tubes at 2 8 C for up to one week or at lt 20 C for longer periods of time Specimens that have been stored should be mixed thoroughly and centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes before testing Test specimens immediately after processing MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 1 Clinical rotator capable of 100 to 110 rpm 2 Graduated pipettes or a micropipettor for serial dilution of specimens 3 Test tubes 12 x 75 mm 4 Timer 5 Marking pen 6 Boiling water bath 7 Volumetric flask or graduated cylinder 8 Demineralized water 9 Bottle with screw cap for working strength 1x prepared Specimen Diluent 10 Vortex mixer centrifuge high intensity incandescent lamp optional REAGENT P
55. organisme Il a t d montr en utilisant des m thodes de test homologu es par la FDA que le s rum humain utilis pour provoquer le contr le n gatif est non r actif la pr sence d antig nes de surface du virus de l h patite B AgHBs et d anticorps anti VIH et anti VHC virus de l h patite C Aucun test ne peut garantir l absence de tout agent infectieux c est pourquoi tous les chantillons humains doivent tre consid r s potentiellement infectieux et manipul s en cons quence 2 Le diluant d chantillon contient de l azide de sodium 1 0 substance toxique si elle est ing r e et nocive par inhalation ou contact avec la peau peut tre toxique pour l environnement aquatique et provoquer des effets long terme En cas d limination des r actifs dans un vier rincer abondamment l eau afin d viter toute accumulation d azide 3 Se reporter aux fiches de donn es de s curit pour obtenir des informations d taill es sur les r actifs chimiques Ne pas diluer le latex de test ou les contr les Les r actifs provenant de kits de diff rents lots ne sont pas interchangeables Les chantillons ne doivent tre congel s et d congel s qu une seule fois Il est recommand de ne pas utiliser un cong lateur d givrage automatique pour le stockage des chantillons DoR STOCKAGE Stocker le produit dans son flacon d origine une temp rature comprise entre 2 et 8 C jusqu son uti
56. r sultats des patients Proc dure de contr le de la qualit Les contr les fortement positifs faiblement positifs et n gatifs doivent tous tre test s avec chaque phase d chantillons du patient comme d crit au chapitre Test qualitatif Les r sultats de contr le fortement positifs et faiblement positifs doivent provoquer une agglutination diff rentielle du latex de test e Le contr le fortement positif doit provoquer une forte agglutination e Le contr le faiblement positif doit provoquer une agglutination plus faible mais clairement visible e Le contr le n gatif ne doit pas produire d agglutination bien qu une granularit de la trace soit acceptable LIMITES 1 Des r actions faussement positives ont t signal es avec une syn r se condensation de surface g los e provenant de plaques de culture et avec des chantillons contenant des Trichosporon beigelii 2 Une prozone survient lorsque les concentrations d antigenes poly saccharidiques cryptococciques sont tr s lev es entra nant ce qui semble tre un r sultat n gatif L antigene polysaccharidique cryptococcique fixe Panticorps murin et couvre la plupart des sites de liaison emp chant toute agglutination du latex Si la symptomatologie du patient est signal e comme coh rente avec la cryptococcose diluer l chantillon de liquide c phalo rachidien ou de s rum trait la prot ase 1 10 et r p ter le test CARACT RISTIQUES DE
57. r une goutte dans un cercle de test d une fiche de r action 1 Remettre le latex de test en suspension en retournant rapidement la bouteille plusieurs fois D poser une goutte de latex de test dans un cercle de test s par pour chaque chantillon et contr le tester 2 D poser une goutte de chaque contr le bien m lang dans un cercle de test s par contenant du latex de test Utiliser l extr mit en spatule d une pipette s par e fournie pour m langer vigoureusement chaque contr le et test au latex Jeter chaque pipette apr s cette tape FRENCH 3 En utilisant les pipettes fournies d poser une goutte de chaque chantillon pr trait environ 50 ul dans un cercle de test contenant du latex de test Avec l extr mit en spatule de la pipette m langer vigoureusement l chantillon et le latex de test en talant sur l ensemble de la surface du cercle Jeter la pipette apr s cette tape 4 Placer la fiche de r action sur un agitateur clinique et faire tourner 100 110 trs min durant 5 minutes 5 Imm diatement apr s la rotation de 5 minutes incliner la lame pour obtenir un diagramme de d bit et examiner attentivement la pr sence d agglutination sur chaque cercle Comparer la r action de chaque chantillon de test au contr le n gatif Remarque Une lampe incandescence haute densit peut tre utilis e pour aider interpr ter des r sultats Test semi quantitatif d chantillons positi
58. sdatum EC REP Autorisierte Vertretung f r EU L nder CE IFU 30851501 berarbeitete Fassung vom 2009 12 02 Printed in USA 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA Allgemeine Ausk nfte 800 255 6730 Website www remel com E Mail remel remel com Telefon lokal international 913 888 0939 Fax international 913 895 4128 FRENCH remel CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT UTILISATION PR VUE Le kit de test antig nique Cryptococcus de Remel est un simple test de 5 minutes qualitatif ou semi quantitatif destin d tecter des antig nes polysaccharidiques associ es une infection par Cryptococcus neoformans Du s rum ou du liquide c phalo rachidien LCR peuvent tre utilis s comme chantillons R SUM ET EXPLICATION La cryptococcose est une infection syst mique caus e par la levure C neoformans Les r servoirs naturels du C neoformans sont le sol et les d jections aviaires L inhalation des cellules de levure peut mener une infection pulmonaire et une diss mination potentielle de la maladie Les patients pr sentent fr quemment une d ficience d vastatrice et particuli rement ceux pr sentant un syndrome immunosuppressif Le C neoformans ayant une affinit inhabituelle pour les tissus du syst me nerveux central une d tection rapide et pr coce est d terminante En 1963 Bloomfield a signal la d tection d antigenes polysaccharidiques cryptococciques CPS dans l
59. ss Washington D C 10 Kovacs J A A A Kovacs M Polis W C Wright V J Gill C U Tuazon E P Gelmann H C Lane R Longfield G Overturf A M Macher A S Fauci J E Parrillo J E Bennett and H Masur 1985 Ann Int Med 103 533 538 11 Eng R H E Bishburg S M Smith and R Kapila 1986 Am J Med 81 19 23 12 Chuck S L and M A Sande 1989 N Engl J Med 321 794 798 13 Dimech W J 1991 Aust J Med Lab Sci 12 13 21 14 Boom W H D J Piper K L Ruoff and M J Ferraro 1985 J Clin Microbiol 22 856 857 15 Melcher G P K D Reed M G Rinaldi J W Lee P A Pizzo and T J Walsh 1991 J Clin Microbiol 29 192 196 16 Howell D D Orkiszewski and P Gilligan 1993 Abstract C 160 Abstracts of the 93 Gen Mtg of the ASM ASM Washington D C 17 Kiska D L D R Orkiszewski D Howell and P H Gilligan 1994 J Clin Microbiol 32 2309 2311 g None oo CONFEZIONE REF R30851501 Cryptococcus Antigen Test Kit Kit per 50 test Legenda dei Simboli Numero catalogo IVD Dispositivo per uso diagnostico in vitro LAB Per uso in laboratorio LOT dE Cor opa MEE Rappresentante autorizzato per l Europa EC REP CE IFU 30851501 Data ultima revisione 2009 12 02 Stampato negli U S A 12076 Santa Fe Drive Lenexa KS 66215 USA Informazioni generali 800 255 6730 Sito web www remel com E Mail remel remel com Tel locali
60. sse zeigten dass die Sensitivit t und Spezifit t des Cryptococcus Antigen Testkits 100 ist und die Reaktionen wurden als einfacher zu beurteilen eingestuft Cryptococcus Antigen Testkit En 68 2 Anderer Latextest 0 525 Hinweis Zwei Proben reagierten mit dem Cryptococcus Antigen Testkit negativ und mit dem anderen Latextest Titer von 1 2 positiv Beide Proben reagierten durch eine Kultur negativ Wiederholbarkeitsstudien wurden mithilfe des Cryptococcus Antigen Testkits und einem anderen im Handel erh ltlichen Latextest durchgef hrt Die Mehrzahl 96 der Titer die mit beiden Tests erhalten wurden lagen im Bereich von 1 R hrchenverd nnung voneinander LITERATURANGABEN 1 Patterson T F and V T Andriole 1989 Eur J Clin Microbiol Infect Dis 8 457 465 2 Bloomfield N M A Gordon and D F Elmendorff Jr 1963 Proc Soc Exp Biol Med 114 64 67 Kaufman L and S Blumer 1977 Proc Int Conf Mycoses Pan Am Health Org 356 176 182 Asznowicz R H Newton John and J Kaldor 1979 Med J Aust 1 347 349 Stockman L and G D Roberts 1983 J Clin Microbiol 17 945 947 Gray L D and G D Roberts 1988 J Clin Microbiol 26 2450 2451 Hamilton J R A Nobel D W Denning and D A Stevens 1991 J Clin Microbiol 29 333 339 Chosewood L C and D E Wilson 2007 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 5 ed U S Dept of H H S CDC
61. tado negativo con el Kit de prueba para el ant geno del criptococo y resultado positivo titulaci n de 1 2 con la otra prueba de l tex Ambas muestras dieron resultado negativo mediante el cultivo Se llevaron a cabo estudios de reproducibilidad utilizando el Kit de prueba para el ant geno del criptococo y otra prueba de l tex disponible en el mercado La mayor a 96 de las titulaciones obtenidas con ambas pruebas no variaban m s de una diluci n de tubo entre las dos BIBLIOGRAF A 1 Patterson T F and V T Andriole 1989 Eur J Clin Microbiol Infect Dis 8 457 465 2 Bloomfield N M A Gordon and D F Elmendorff Jr 1963 Proc Soc Exp Biol Med 114 64 67 Kaufman L and S Blumer 1977 Proc Int Conf Mycoses Pan Am Health Org 356 176 182 Asznowicz R H Newton John and J Kaldor 1979 Med J Aust 1 347 349 Stockman L and G D Roberts 1983 J Clin Microbiol 17 945 947 Gray L D and G D Roberts 1988 J Clin Microbiol 26 2450 2451 Hamilton J R A Nobel D W Denning and D A Stevens 1991 J Clin Microbiol 29 333 339 Chosewood L C and D E Wilson 2007 Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 5 ed U S Dept of H H S CDC and National Institutes of Health Washington D C 9 Murray P R E J Baron J H Jorgensen M L Landry and M A Pfaller 2007 Manual of Clinical Microbiology 9 ed ASM Press Washington D C 10 Kovacs J A A A Kovacs
62. tion of each test sample to the Negative Control Note A high intensity incandescent lamp may be used to aid in interpretation of results Semi Quantitative Testing of Positive Specimens 1 Add 0 1 ml of working strength Specimen Diluent to each of 8 tubes which have been labeled 1 to 8 2 Add 0 1 ml of heat treated CSF or protease treated serum already at 1 2 to tube 1 Using a clean pipette mix the contents of tube 1 and transfer 0 1 ml to tube 2 Discard the pipette do not mix the contents of tube 2 with the pipette ENGLISH 3 With a clean pipette thoroughly mix the contents of tube 2 and transfer 0 1 ml to tube 3 Discard the pipette do not mix the contents of tube 3 with the pipette 4 Proceed producing serial doubling dilutions of the specimen through tube 8 The prepared serum dilutions are 1 4 to 1 512 for tubes 1 to 8 respectively For CSF the serum dilutions are 1 2 to 1 256 Tube 8 can be diluted further if an endpoint is not reached 5 Test each specimen dilution following the protocol described under Qualitative Testing INTERPRETATION Qualitative Test Positive Result Any agglutination or clumping and clearing of the Test Latex immediately after the 5 minute rotation step Negative Result No agglutination clumping or clearing of the Test Latex immediately after the 5 minute rotation step Note The Test Latex suspension should appear milky and faint traces of granularity may be detectable Se
63. tuisce 3 mL 6 Diluente per campioni 10x soluzione NaCl glicina conservata in 1 0 di Sodio azide 1 x 10 mL diluire a 1x 7 Carte di reazione 12 carte x 6 cerchi ciascuna 8 50 pipette di dispensazione 9 Istruzioni per l uso IFU PRECAUZIONI Il prodotto indicato esclusivamente per uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato solo da personale competente ed esperto Si raccomanda di attenersi alle precauzioni contro eventuali rischi microbiologici sterilizzando opportunamente dopo l uso campioni contenitori e materiali per test Leggere con attenzione le istruzioni contenute in questo documento e attenervisi scrupolosamente Precauzioni di sicurezza 1 Il prodotto pu essere biologicamente pericoloso si dimostrato che il siero umano utilizzato per la preparazione del controllo negativo non reagisce in presenza dell antigene di superficie dell epatite B HBsAg e degli anticorpi anti HIV e anti HCV utilizzando i metodi di analisi autorizzati dall FDA Poich nessun test pu assicurare l assenza di tutti gli agenti infettivi tutti i campioni umani devono essere considerati potenzialmente infettivi e maneggiati con le dovute accortezze 2 Il diluente per campioni contiene 1 0 di Sodio azide che tossico qualora ingerito e dannoso se inalato o a contatto con la pelle potrebbe essere tossico per l ambiente acquatico e causare problemi con effetti a lungo termine Quando si versano i reagenti nel lavandino scia
64. vos en un fregadero l velo con grandes cantidades de agua para impedir la acumulaci n de azida 3 Para una informaci n m s detallada sobre productos qu micos consulte la Hoja de datos de seguridad de los materiales No diluya el l tex de prueba ni los controles No intercambie los reactivos entre kits de diferentes lotes Las muestras no deben congelarse y descongelarse m s de una vez No se recomienda el uso de un congelador con funci n antiescarcha para el almacenamiento de las muestras pars ALMACENAMIENTO Guarde este producto en su envase original a una temperatura de 2 8 C hasta el momento de su uso Deje estabilizar los componentes a temperatura ambiente antes de su uso No lo congele ni lo sobrecaliente DETERIORO DEL PRODUCTO Este producto no se debe usar si 1 la apariencia de los reactivos ha cambiado 2 se ha sobrepasado la fecha de caducidad o 3 hay otros signos de deterioro El l tex de prueba debe tener un aspecto blanquecino Si se observa aglutinaci n en el l tex y sta no se dispersa al invertir el frasco r pidamente varias veces no utilice el reactivo Los controles positivo y negativo deben ser soluciones transparentes RECOGIDA ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Las muestras se deben recoger y manipular de acuerdo con las recomendaciones siguientes Extraiga el suero de sangre total completamente coagulada y transfi ralo a un tubo limpio y etiquetado Las muestras mal hemolizadas

CRYPTOCOCCUS ANTIGEN TEST KIT

Contents

Download Pdf Manuals

Related Search

Related Contents