Directions for use Gebrauchsinformation
Contents
1. Einwegspitzen aus Kunststoff 1 200 ul Zentrifugenr hrchen aus Kunststoff 10 12 ml Pasteurpipette oder quivalentes Saugr hrchen Wasserbad 37 C 0 5 C mit guten Zirkulationsverm gen Stoppuhr oder Timer Zentrifuge geeignet f r 1500 g oder Filtrierger t Photometer f r die Messung bei 620 5 nm Vortex Mixer Destilliertes Wasser Sodiumhydroxid NaOH L sung 0 5 M TESTPARAMETER Volumen der Probe 200 ul Volumen des Reaktionsprodukts 5 2 ml Zeit Temperatur der Inkubation 15 min 37 C Bei Proben mit hoher a Amylase Aktivit t ist die Inkubationszeit auf 5 Minuten zu reduzieren und der Aktivit tswert aus der Standard kurve mit 3 drei zu multiplizieren HALTBARKEIT UND LAGERUNG Die Testkomponenten sind trocken und bei konstanter Raumtem peratur aufzubewahren Nach dem ffnen m ssen die Beh ltnisse wieder sorgf ltig verschlossen und gemeinsam mit dem enthalte nen Trockenmittel gelagert werden Das Haltbarkeitsdatum ist am Au enetikett angegeben NB Verunreinigungen der Proben Tabletten und Testkomponen ten mit Speichel oder Schwei sind sorgf ltig zu vermeiden TESTVERFAHREN Befolgen Sie die Anweisungen genau Bei Nichtbefolgung der Instruktionen verliert die Standardkurve ihre G ltigkeit 1 Pipettieren Sie 200 ul der Probe in die 10 bis 12 ml Zentrifugen r hrchen 2 F gen Sie 4 0 ml destilliertes Wasser hinzu Parallel ist auf eine 4 2 ml Destillierwasser Blindprobe ebenfalls der gesamte Verfah2. dado casos de deterioro Es preciso evitar la recogida de orina de 24 horas MATERIAL SUMINISTRADO CONTENIDO DEL KIT Phadebas Amylase Test 50 un frasco de 50 comprimidos o Pha debas Amylase Test 500 cinco frascos de 100 comprimidos cada comprimido contiene 45 mg de almid n azul Folleto descriptivo Curva est ndar EQUIPO DE LABORATORIO Y MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO Cantidad Tama o Pipeta autom tica o dosificador 1 4 0 ml Pipeta autom tica o dosificador 1 1 0 ml Micropipetas con puntas de pl stico desechables 1 de cada 200 ul Tubos de centrifugador de pl stico 10 12 ml Pipetas Pasteur o equivalentes Ba o mar a a 37 C 0 5 C con una buena circulaci n Cron metro o reloj Centrifugador capaz de generar 1500 g o equipo de filtraci n Fot metro para medir a 620 nm 5 nm Mezclador por vibraci n Agua destilada Soluci n de hidr xido s dico NaOH 0 5 M PAR METROS DEL M TODO Volumen de muestra 200 ul Volumen de la mezcla reactiva final 5 2 ml Tiempo de incubaci n y temperatura 15 minutos a 37 C En el caso de muestras con actividades de a amilasa elevadas ser necesario reducir el tiempo de incubaci n a 5 minutos y multiplicar la lectura de actividad de la curva est ndar por 3 tres DURACI N Y ALMACENAMIENTO Conserve en un lugar seco a temperatura ambiente controlada Despu s de abrir conserve los frascos cerrados manteniendo el desecante La fecha de caducidad aparece
3. indicada en la etiqueta exterior Nota No se deben contaminar las muestras los comprimidos ni el equipo con saliva o sudor PROCEDIMIENTO Nota Es preciso tener en cuenta que deben seguirse estas instrucciones al pie de la letra ya que en caso contrario la curva est ndar no ser v lida 1 Pipetee 200 ul de muestra en tubos de centrifugador de 10 12 ml 2 A ada 4 0 ml de agua destilada Asimismo debe hacerse un blanco con agua destilada de 4 2 ml y efectuar con l todo el procedimiento 3 Preincube los tubos durante 5 minutos a 37 C en un ba o ma r a 4 A ada un comprimido a cada tubo con ayuda de unas pinzas Agite con el vibrador inmediatamente durante 10 segundos y col quelos de nuevo en el ba o mar a Para realizar an lisis en serie a ada los comprimidos a intervalos de 15 a 20 segundos exactamente 5 Incube los tubos en ba o mar a con buena circulaci n a 37 C 0 5 C durante 15 minutos exactamente 6 Detenga la reacci n exactamente a los 15 minutos tras la adici n del comprimido a adiendo 1 0 ml de hidr xido s dico 0 5 M Mezcle con vibrador inmediatamente 7 Centrifugue a 1500 g durante 5 minutos o filtre Pipetee el so brante azul filtrado a una cubeta 8 Mida la absorbancia del sobrante filtrado a 620 nm con respecto al agua destilada con una cubeta de 1 cm de paso de luz 9 Reste el valor de la absorbancia del blanco del de la muestra 10 Aseg rese de que la curva est ndar usad
4. 007 www phadebas com magle LIFE SCIENCES
5. Directions for use INTENDED USE Phadebas Amylase Test is a method for the quantitative assay of a amylase in fluids PRINCIPLE OF THE PROCEDURE The substrate is a water insoluble cross linked starch polymer car rying a blue dye The substrate is hydrolysed by a amylase to form water soluble blue fragments The absorbance of the blue solution is a function of the a amylase activity in the sample SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING e Avoid contamination with detergents which may alter amy lase activity by using well rinsed glassware or disposable plastic equipment e Special care must be taken to avoid contamination with saliva or sweat which contain large amounts of a amylase e Avoid anticoagulants which bind calcium ions Ca Citrate fluo ride and EDTA should not be used e When analysing very turbid samples measure the absorbance against a sample blank The procedure for the sample blank is the same as for normal samples except that the sample is added after the addition of NaOH e Amylase activity in serum samples is stable for one week at con trolled room temperature but good practice dictates that se rum samples be stored at 2 8 C For longer periods the sample must be stored at 20 C e Itis recommended that determination of a amylase from urine samples is performed on the same day as the specimen is void ed Although the majority of urine samples are stable at 2 8 C for one week deterioriation has been kn
6. IPIO DEL PROCEDIMIENTO El substrato es un pol mero de almid n insoluble en agua de es lab n cruzado que porta un colorante azul Se hidroliza mediante la a amilasa dando lugar a fragmentos azules solubles en agua La absorbancia de la soluci n azul es una funci n de la actividad de la a amilasa en la muestra TOMA DE MUESTRAS Y MANIPULACI N e Evite la contaminaci n con detergentes que pueden alterar la actividad de la a amilasa Para ello es preciso utilizar material de vidrio bien enjuagado o material de pl stico desechable Debe tenerse especial cuidado para evitar la contaminaci n con saliva o sudor que contienen grandes cantidades de a amilasa e Evite los anticoagulantes que ligan con ones de calcio Ca No debe utilizarse citrato fluoruros ni EDTA e Al analizar muestras muy turbias mida la absorbancia con res pecto a un blanco de muestra La t cnica para el blanco de muestra es la misma que para las muestras normales salvo que la muestra se a ade despu s de la adici n de NaOH e La actividad de la amilasa en las muestras de suero es estable durante una semana a temperatura ambiente controlada pero se recomienda refrigerar las muestras de suero a 2 8 C Para periodos m s largos la muestra debe ser congelada 20 C Se recomienda determinar la a amilasa en la orina el mismo dia en que se ha tomado la muestra Aunque la mayor a de muestras de orina son estables durante una semana a 2 8 C se han
7. Union of Biochemis try une unit U d activit amylase est d finie comme la quantit d enzyme catalysant l hydrolyse de 1 mol de liaison glucidique par minute 37 C La courbe talon incluse dans la trousse donne di rectement la correspondance de la D O en U I Pour convertir les U I en ykat l 1 umol s I diviser le r sultat par 60 Comme de nombreuses m thodes de determination de l activit de l alpha amylase utilisent differents substrats il n est pas possible de trouver une corr lation stricte entre les U I et les autres unit s Street close Somogyi Cependant une conversion approximative des U I en d autres uni t s est possible Pour convertir en unit s Somogyi 100 ml multiplier par 0 54 Pour convertir en unit s Street Close 100 ml multiplier par 0 164 GARANTIE Toute modification de ce protocole non recommand e par Magle AB peut affecter les r sultats auquel cas Magle AB d cline toute responsabilit exprim e implicite ou tablie par la loi y compris la responsabilit li e la commercialisation du produit et ses moda lit s d utilisation Magle AB et ses distributeurs agr s ne pourront dans une telle ventualit tre tenus pour responsables des dommages indirects ou cons cutifs en r sultant R vis en d cembre 2006 Instrucciones de uso FINALIDAD El Phadebas Amylase Test es un m todo adecuado para el an lisis cuantitativo de la amilasa en fluidos PRINC
8. a tiene el mismo n mero de lote que el que aparece impreso en la etiqueta del vial Lea la actividad de a amilasa en U I en la curva est ndar que da directamente la actividad de amilasa de las muestras INSTRUCCIONES PARA T CNICAS MODIFICADAS PARA DISTINTOS INTERVALOS Actividades moderadas de amilasa Se ha estudiado la composici n del comprimido y el procedimiento de prueba para cubrir el mayor intervalo posible de actividad de a amilasa Sin realizar ning n paso posterior es posible medir ac tividades de amilasa desde 35 U I hasta 1000 U I empleando un fot metro que mida absorbancias de hasta 2 0 Actividades altas de amilasa No mida absorbancias por encima de 2 0 Algunos fot metros no pueden medir con precisi n absorbancias de 1 0 1 5 Cuando la absorbancia supera la capacidad de medida del fot metro diluya el sobrante 10 veces con agua destilada Multiplique la absorbancia por 10 reste el valor del blanco y lea la actividad de amilasa en la curva est ndar Actividades muy elevadas de a amilasa Si es necesario medir actividades muy altas se pueden diluir las muestras 5 veces con agua destilada Para diluciones mayores se utilizar agua destilada con NaCl al 0 9 alb mina bovina BSA al 0 2 y CaCl 20 mM Lea la actividad en la curva est ndar y multipli que el valor por el factor de diluci n adecuado CALIBRACI N De acuerdo con las recomendaciones de la comisi n de unidades enzim ticas cl
9. ie Tablettenzusammensetzung und das Testverfahren wurden so konzipiert dass ein m glichst gro er Bereich unterschiedlicher a Amylase Aktivit ten erfasst werden kann Unter Verwendung eines Photometers welches die Messung von Absorptionswerten bis 2 0 erlaubt k nnen Amylase Aktivit ten im Bereich von 35 U I bis 1000 U I direkt und ohne weitere Verfahrensschritte bestimmt werden Hohe Amylase Aktivit t Absorptionsmessungen ber 2 0 d rfen nicht vorgenommen wer den Einige Photometer liefern bei Absorptionsswerten ber 1 0 bzw 1 5 ungenaue oder fehlerhafte Messergebnisse Wenn der er fassbare Messbereich des Photometers berschritten wird ist der berstand um das 10 fache mit destilliertem Wasser zu verd nnen In diesem Fall ist die Absorption mit 10 zu multiplizieren und der Blindwert davon abzuziehen Danach kann die Amylase Aktivit t aus der Standardkurve abgelesen werden Sehr hohe Amylase Aktivit t Bei der Messung sehr hoher Aktivit tsraten k nnen die Proben bis zum 5 fachen mit destilliertem Wasser verd nnt werden F r wei tere Verd nnungen ist destilliertes Wasser zu verwenden das 0 9 NaCl 0 2 Rinder Serum Albumin und 20 mM CaCl enth lt Da nach wird der Aktivit tswert aus der Standardkurve abgelesen und mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor multipliziert KALIBRIERTE MESSEINHEITEN Gem den von der Kommission f r Clinical Enzyme Units der International Union of Biochemistry fe
10. nicas de la International Union of Biochemistry una unidad U de actividad de amilasa se define como la cantidad de enzima que cataliza la hidr lisis de 1 umol de enlace glucosidico por minuto a 37 C Un microkatal ukat o umol s equivale a 1 60 de una U Mediante la curva est ndar que se incluye en el envase se pueden pasar a U I los valores de la absorbancia de las muestras de prueba Como los distintos m todos para la determinaci n de la actividad de a amilasa emplean distintos substratos no existe una correla ci n estricta con otras unidades y U I Sin embargo se pueden efec tuar conversiones aproximadas de U I a otras unidades Para realizar la conversi n a unidades Somigyi 100 ml multiplique por 0 54 Para realizar la conversi n a unidades Street Close 100 ml multiplique por 0 164 GARANT A Cualquier cambio o modificaci n en el procedimiento en contra de la recomendaci n de Magle AB puede afectar a los resultados en cuyo caso Magle AB declina cualquier responsabilidad y garant a ex presa impl cita o reglamentaria incluida la garant a implicita sobre la comerciabilidad e idoneidad para su uso En tal caso Magle AB y sus distribuidores autorizados no asumi r n responsabilidad alguna por los da os y perjuicios indirectos o derivados Revisado en diciembre de 2006 Phadebas Amylase Test Directions for use Gebrauchsinformation Mode d emploi Instrucciones de uso Magle AB Lund Sweden 2
11. o measure a amylase activities from 35 U I up to 1000 U I provided a photometer for measuring ab sorbances up to 2 0 is used High amylase activities Do not measure absorbance above 2 0 Some photometers cannot measure accurately above an absorbance of 1 0 1 5 When absorb ance exceeds the measuring capability of the photometer dilute the supernatant 10 fold using distilled water Multiply absorbance by 10 subtract the blank value and read the amylase activity from the standard curve Very high amylase activities If very high activities are to be measured samples can be diluted up to 5 fold using distilled water For further dilutions use distilled water containing 0 9 NaCl 0 2 bovine serum albumin BSA and 20 mM CaCl Read the activity from the standard curve and multiply by the appropriate dilution factor CALIBRATION In accordance with the recommendation drawn up by the com mission on Clinical Enzyme Units of the International Union of Bio chemistry one unit U of amylase activity is defined as the amount of enzyme catalyzing the hydrolysis of 1 umol glucosidic linkage per minute at 37 C One microkatal ukat or umoI s is equivalent to 1 60 of one U Using the standard curve enclosed in the package the absorbance values of test samples are converted to U I As various methods for the determination of a amylase activity use different substrates a strict correlation between other units and U I does not exist Howe
12. orgf ltigst vermieden werden Gerinnungshem mende Mittel die Calcium lonen Ca binden sind nicht geeignet Zitrat Fluorid und EDTA d rfen nicht ver wendet werden Bei der Analyse von sehr tr ben Proben erfolgt die Messung der Absorption gegen eine Blindprobe Mit Ausnahme der Proben einpipettierung erst nach der NaOH Zugabe unterscheidet sich die Handhabung von Blindproben nicht von jener normaler Pro ben Bei konstanter Raumtemperatur bleibt die Amylase Aktivit t in Serumproben ber einen Zeitraum von einer Woche stabil Dennoch ist eine k hle Lagerung der Proben bei Temperaturen von 2 bis 8 C zu empfehlen Lagerungszeiten ber eine Woche erfordern die Aufbewahrung der Proben bei 20 C Bestimmungen der a Amylase Werte von Urinproben sollten noch am Tag der Probenahme vorgenommen werden Obwohl Urinproben bei Temperaturen von 2 bis 8 C f r gew hnlich eine Woche stabil bleiben k nnen Aktivit tsabnahmen nicht ausge schlossen werden Urinprobenahmen ber einen Zeitraum von 24 Stunden sind zu vermeiden INHALT Phadebas Amylase Test 50 ein Fl schchen 50 Tabletten oder Phadebas Amylase Test 500 f nf Fl schchen 100 Tabletten jede Tablette enth lt 45 mg Blaust rke Gebrauchsinformation Standardkurve ERFORDERLICHE LABORAUSSTATTUNG UND ANYLYSEKOMPONENTEN NICHT INKLUDIERT Anzahl Gr e Automatik Pipette oder Dosierer 1 4 0 ml Automatik Pipette oder Dosierer 1 1 0 ml Mikropipetten mit
13. own to occur 24 hour urine collection should be avoided MATERIAL PROVIDED KIT CONTENTS Phadebas Amylase Test 50 one bottle of 50 tablets or Phadebas Amylase Test 500 five bottles of 100 tablets each tablet contains 45 mg blue starch Package insert Standard curve LABORATORY EQUIPMENT AND MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Number Size Automatic pipette or dispenser 1 4 0 ml Automatic pipette or dispenser 1 1 0 ml Micropipettes with disposable plastic tips 1 each 200 ul Plastic centrifuge tubes 10 12 ml Pasteur pipettes or equivalent Water bath at 37 C 0 5 C with good circulation Stop watch or timer Centrifuge capable of producing 1500 g or filtration equipment Photometer measuring at 620 5 nm Vortex mixer Distilled water Sodium hydroxide NaOH solution 0 5 M PARAMETERS OF THE METHOD Sample volume 200 ul Volume of final reaction mixture 5 2 ml Incubation time and temp 15 min 37 C For samples with high a amylase activities decrease incubation time to 5 minutes and multiply the activity reading from the stand ard curve by 3 three SHELF LIFE AND STORAGE Keep dry and store at controlled room temperature After unseal ing store bottles closed and retain dessicant The expiry date is stated on the outer label N B Do not contaminate samples tablets or equipment with saliva or sweat TEST PROCEDURE Note that these instructions must be followed in every detail or
14. r la courbe talon doit correspondre celui figurant sur l tiquette du flacon Lire directement l activit amylase des chantillons en U I sur la courbe talon UTILISATION SOUS DIFF RENTES CONDITIONS Activit s alpha amylase mod r es La composition du comprim est tudi e pour couvrir la plus large chelle de valeurs d activit alpha amylase possible Sans aucune modification il est possible de d terminer des activit s alpha amy lase allant de 35 U I 1000 U I condition de disposer d un photo m tre capable de lire une D O de 2 Activit s alpha amylase lev es Ne pas tenir compte d une D O sup rieure 2 0 Certains photo m tres sont d ailleurs limit s une D O de 1 0 1 5 Quand la D O d passe la capacit du photom tre diluer 10 fois le surnageant dans de l eau distill e Multiplier la D O par 10 soustraire la valeur du t moin et lire l amylas mie sur la courbe talon Activit s alpha amylase tr s lev es Dans le cas d activit s tr s lev es l chantillon dilu dans de l eau distill e jusqu 5 fois Au del pour des dilutions plus importantes utiliser une solution de NaCl 0 9 S rum albumine bovine 0 2 CaCl 20 mM dans de l eau distill e Lire l amylas mie sur la courbe talon et multiplier la valeur par le facteur de dilution appropri CALIBRATION En accord avec les recommandations de la commission des Unit s en Enzymologie Clinique de l International
15. rensdurchgang anzuwenden 3 Vorinkubieren Sie die R hrchen f r 5 Minuten im Wasserbad bei 37 C 4 Geben Sie mit einer Pinzette jeweils eine Tablette in jedes Test r hrchen und beginnen Sie sofort f r 10 Sekunden zu vortexen Tauchen Sie die Testr hrchen anschlie end in das Wasserbad F r Serienuntersuchungen erfolgt die Tablettenzugabe in exak ten Intervallen von 15 bis 20 Sekunden 5 Inkubieren Sie die Testr hrchen f r genau 15 Minuten im gut durchmischten Wasserbad bei 37 0 5 C 6 Beenden Sie die Reaktion exakt 15 Minuten nach der Tabletten zugabe durch die Beimengung von 1 0 ml 0 5 M Sodiumhydro xid Beginnen Sie umgehend mit dem Vortexen 7 Zentrifugieren Sie f r 5 Minuten bei 1500 g oder verwenden Sie das Filtrierger t Pipettieren sie anschlie end den blauen ber stand bzw das Filtrat in eine K vette 8 Messen Sie mit einer 1 cm K vette die Absorption des ber stands bzw des Filtrats bei 620 nm gegen das destillierte Was ser 9 Subtrahieren Sie den Absorptionswert der Blindprobe vom Ab sorptionswert der Probe 10 berpr fen Sie ob die Seriennummer der Standardkurve mit der auf dem Etikett angegebenen Nummer bereinstimmt Le sen Sie den in U I angegebenen a Amylase Aktivit tswert direkt aus der Standardkurve ab Der Wert entspricht exakt der a Amy lase Aktivit t in den Proben MODIFIZIERTE VERFAHREN F R UNTERSCHIEDLICHE AKTIVIT TSBEREICHE M ige Amylase Aktivit t D
16. s chantillons urinaires soient stables une se maine 2 8 C une d naturation peut survenir I faut viter les d terminations sur les urines de 24 heures CONTENU DE LA TROUSSE Phadebas Amylase Test 50 1 flacon de 50 comprim s Phadebas Amylase Test 500 5 flacons de 100 comprim s chaque comprim contient 45 mg d amidon bleu Mode d emploi Courbe standard QUIPEMENT ET MAT RIEL N CESSAIRE NON FOURNI Nombre Taille Pipette automatique ou distributeur A 4 0ml Pipette automatique ou distributeur 1 1 0 ml Micropipettes embout en plastique et Usage unique 1 200 ul ubes centrifuger 10 12 ml Pipettes Pasteur ou quivalent Bain marie 37 C 0 5 C circulation Chronom tre ou compte minutes Centrifugeuse capable d atteindre 1500 g ou quipement de filtra tion Photom tre r gl 620 5 nm Un agitateur vortex De l eau distill e De la soude NaOH solution 0 5 N 0 5 M PARAMETRES DE LA M THODE Volume de l chantillon 200 ul Volume r actionnel final 5 2 ml emps et temperature d incubation 15 min 4 37 C Si les chantillons pr sentent des activit s alpha amylase lev es abaisser le temps d incubation 5 minutes et multiplier la valeur lue sur la courbe standard par 3 trois CONSERVATION Conserver la trousse dans un endroit sec et temp rature ambian te et constante Apr s ouverture maintenir les flacons bouch s le dessiccateur tan
17. stge setzten Richtlinien entspricht eine Einheit U Amylase Aktivit t der Enzymmenge die die Hydrolyse von 1 umol glykosidischer Bindungen in 1 min bei 37 C katalysiert Ein Mikrokatal ukat oder umol s entspricht 1 60 von 1 U U 1 60 Jeder Testpackung ist eine Standardkurve beige legt mit deren Hilfe die Absorptionswerte der Proben direkt in U I umgerechnet werden Da die verschiedenen Methoden zur Bestimmung der Amylase Aktivit t unterschiedliche Substrate heranziehen ist eine exakte bereinstimmung zwischen anderen Einheiten und der Einheit U I nicht ge geben U l Angaben lassen sich jedoch anhand von Richt werten in anderen Ein heiten ausdr cken Somogyi Einheiten 100 ml 0 54 x U I Street Close Einheiten 100 ml 0 164 x U I GEW HRLEISTUNG Jede von Magle AB nicht empfohlene nderung oder Modifikation des Verfahrensablaufs kann die Ergebnisse beeinflussen In der artigen F llen schlie t Magle AB jegliche Gew hrleistung sowohl ausdr cklicher stillschweigender als auch anderer Natur aus ein schlie lich der Gew hrleistung f r Marktg ngigkeit und Eignung f r einen bestimmten Zweck Magle AB und seine Vertragspartner k nnen weder f r indirekte Sch den noch f r Folge sch den haftbar gemacht werden Stand Dezember 2006 Mode d emploi INDICATIONS D EMPLOI Le Phadebas Amylase Test est une methode de determination quantitative de l alpha amylase dans les fluides PRINCIPE DE LA M THODE Le subs
18. t place l int rieur La date de p remption figure sur l tiquette ext rieure N B Attention aux contaminations des chantillons des comprim s et du mat riel par la salive ou la sueur PROTOCOLE D UTILISATION Note Ces instructions sont imp ratives leur non respect in valide l utilisation de la courbe talon 1 Distribuer 200 ul de l chantillon dans des tubes centrifuger de 10 12 ml 2 Ajouter 4 0 ml d eau distill e dans tous les tubes Un t moin d eau distill e de 4 2 ml devra suivre le m me traitement que tous les autres tubes 3 Pr incuber les tubes 5 min 37 C au bain marie 4 Ajouter un comprim chaque tube au moyen de pinces Vor texer 10 secondes et replacer au bain marie Pour une s rie d essais ajouter le comprim des intervalles r guliers d exac tement 15 ou 20 secondes 5 Incuber 15 minutes pr cises dans un bain marie circulation 37 C 0 5 C 6 Arr ter la r action exactement 15 minutes apr s l addition du comprim par 1 ml de NaOH 0 5 N M langer imm diatement au vortex 7 Centrifuger 1500 g 5 minutes ou filtrer Pr lever le surnageant ou le filtrat et le placer dans une cuve optique 8 Mesurer la D O de l chantillon 620 nm contre de l eau distillee Utiliser une cuve de 1 cm de trajet optique 9 Soustraire la D O du t moin de celle de l chantillon 10 S assurer que la courbe talon correspond au lot utilis Le nu m ro du lot imprim su
19. the standard curve applied is not valid 1 Pipette 200 ul of sample into 10 12 ml centrifuge tubes 2 Add 4 0 ml of distilled water A distilled water blank of 4 2 ml should also undergo the entire procedure 3 Pre incubate the tubes for 5 minutes at 37 C in water bath 4 Add one tablet to each tube use forceps immediately vortex for 10 seconds and replace in water bath For serial assays add tablets at exactly 15 or 20 seconds intervals 5 Incubate by standing the tubes in a well stirred water bath at 37 0 5 C for exactly 15 minutes 6 Stop the reaction exactly 15 minutes after tablet addition by adding 1 0 ml of 0 5 M sodium hydroxide Vortex immediately 7 Centrifuge at 1500 g for 5 minutes or filter Pipette the blue supernatant filtrate into a cuvette 8 Measure the absorbance of the supernatant filtrate at 620 nm against distilled water using a cuvette with 1 cm light path 9 Subtract the absorbance value of the blank from that of the sample 10 Make sure that the standard curve with the same Batch No as that printed on the vial label is used Read the a amylase activity in U I from the standard curve This gives directly the a amylase activity in the samples INSTRUCTIONS FOR MODIFIED PROCEDURES FOR DIFFERENT RANGES Moderate amylase activities The tablet composition and the test procedure have been designed to cover the widest possible range of a amylase activity Without any further steps it is possible t
20. trat est un polym re d amidon r ticul insoluble dans l eau avec un colorant bleu Le substrat est hydrolys par l alpha amylase et cr e des fragments bleus solubles dans l eau L absorbance de la solution est proportionnelle l activit de l alpha amylase dans l chantillon PR L VEMENT ET MANIPULATION DES CHANTILLONS e viter la contamination par les d tergents susceptibles d alt rer l activit de l alpha amylase en utilisant du mat riel en verre rinc abondamment ou du mat riel plastique usage unique e viter particuli rement les contaminations par la salive ou la sueur celles ci contenant des quantit s tr s importantes d al pha amylase e viter les anticoagulants complexant les ions calcium Ca Ne pas utiliser de citrates de fluorures ou d EDTA e Lorsque la turbidit des chantillons est tr s importante la D O est mesur e contre un chantillon blanc Celui ci est pr par comme un chantillon normal sauf que l on ajoute l chantillon seulement apr s l addition de soude e l activit amylase est stable une semaine dans les chantillons s riques conserv s temp rature ambiante mais par principe on conserve le s rum 2 8 C Pour une conservation sur de plus ongues p riodes l chantillon sera congel 20 C e I est recommand de d terminer le taux d alpha amylase dans des chantillons d urine le jour m me o ils sont collect s Bien que la majorit de
21. ver approximate conversions from U I to other units may be made For conversion to Somogyi units 100 ml multiply by 0 54 For con version to Street Close units 100 ml multiply by 0 164 WARRANTY Any change or modification in the procedure not recommended by Magle AB may affect the results in which event Magle AB disclaims all warranties expressed implied or statutory including the implied warranty of merchantability and fitness for use Magle AB and its authorized distributors in such event shall not be liable for damages indirect or consequential Revised December 2006 Gebrauchsinformation ANWENDUNGSBEREICH Der Phadebas Amylase Test ist eine einfache Methode zur quanti tativen Bestimmung der Amylase Aktivit t in Fl ssigkeiten TESTPRINZIP Das Substrat ist ein blau gef rbtes durch Quervernetzung wasse runl sliches St rkepolymer Das St rkepolymer wird unter Einwir kung von a Amylase zu blauen wasserl slichen Fragmenten hy drolysiert Die Absorption der Farbl sung ist dabei direkt von der Aktivit t der a Amylase in der Probe abh ngig PROBENAHME UND PROBENHANDHABUNG e Reinigungsmittelr ckst nde k nnen die Amylase Aktivit t stark beeinflussen Testr hrchen aus Glas m ssen daher sorgf ltig gesp lt oder durch Einwegr hrchen aus Kunststoff ersetzt wer den e Speichel oder Schwei enthalten hohe Amylase Konzentrati onen Verunreinigungen durch derartige K rperfl ssigkeiten m ssen deshalb s
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