Comité du Lait ASBL [ NOTE TECHNIQUE ] NOT
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1. NOTE TECHNIQUE Recherche de substances inhibitrices Test pour l autorisation de reprise de livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances inhibitrices 1 Objet et domaine d application Cette note d crit les mesures prises par la Commission Nationale Interprofessionnelle Laiti re CNIL pour la reprise des livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances inhibitrices au Comit du lait Elle d crit les deux modes op ratoires reconnus par les OI et devant tre utilis s par les acheteurs Les deux tests sont les suivants e Le test rapide Beta s t a r 25 sensible aux beta lactames et durant une dizaine de minutes e Letest Delvo test T sensible un large spectre de substances inhibitrices et durant 3 heures Cette note technique pr cise galement dans quelles circonstances l un ou l autre test doit tre utilis 2 D finitions N ant 3 R f rences e Beta s ta r 25 Mode d emploi disponible dans chaque kit e PRO INH 00001 Proc dure pour l autorisation de reprise des livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances inhibitrices 4 Modification par rapport la version pr c dente 5 3 Utilisation du Delvo test T en remplacement du Copan CMT 5 Contenu 5 1 Introduction 1 2 ou 3 r sultat positif dans les 12 mois Lors de la d tection d un r sultat positif en substances inhibitrices du lait d une exploitation celui ci ne2. du pourpre au jaune de l indicateur de pH pr sent dans le milieu En pr sence de substances inhibitrices l acidification est frein e et la coloration ne varie pas ou peu 5 3 2 R actifs e Le kit contient 25 ou 100 tubes Delvotest T ampoules o Chaque tube contient une g lose nutritive d un indicateur de pH et de trim thoprime ensemenc avec des spores d un micro organisme test o Chaque kit a un num ro de lot o Pr cautions Eviter les fortes variations de temp rature m Ne pas congeler d naturation de la g lose a Eviter les temp ratures lt 4 C Lors de la r ception d une livraison contr ler que le t moin de temp ratures hautes de chaque bo te n a pas vir du gris au noir o Conservation Dur e jusqu la date de p remption Temp rature 5 16 C 5 3 3 Mat riel e Chaque kit contient les pipettes n cessaires au pr l vement de 100 ul de lait e Un incubateur r gl 64 1 C DSM Incubator fourni par le fabricant 5 3 4 Mode op ratoire Suivre les instructions contenues dans la notice r dig e par le fabricant Faire chauffer l incubateur et attendre sa stabilisation Pr lever un chantillon dans le tank bien homog ne si n cessaire lancer manuellement l agitateur A l aide de la micro pipette pr lever 100 ul de lait et les d poser dans le tube Incuber durant 3h00 5 minutes le tube 64 1 C incubateur DSM 5 3 5 Interpr tation e Apr s incubation int
3. minutes avant utilisation e Pr lever un chantillon dans le tank bien homog ne si n cessaire lancer manuellement l agitateur e Sortir un flacon du coffret et s assurer que tout le lyophilisat se trouve au fond du flacon Remarque pour faire descendre le Iyophilisat au fond du flacon frapper d licatement le flacon sur une surface solide e _ Pr lever 0 2ml de lait et les d poser dans le flacon o Enlever la capsule et le bouchon du flacon o Placer un embout neuf sur la seringue o Pousser le piston au fond de la seringue o Immerger l embout sur un centim tre dans l chantillon de lait Rel cher la pression sur le piston Sous l effet du ressort le piston remonte librement Les 0 2 ml de lait pr lev s remplissent compl tement l embout o Distribuer les 0 2 ml de l chantillon de lait dans le flacon contenant le r cepteur en repoussant le piston au fond de la seringue o S assurer que l embout ne contient plus de lait o Remettre le bouchon o Agiter doucement en renversant le flacon afin de dissoudre tout le lyophilisat e Mettre le flacon dans l incubateur stabilis la temp rature de 47 5 1 C Incuber pendant 3 minutes e Au bout de 3 minutes d incubation o Les mains propres et s ches o Ouvrir le flacon blanc o Sortir une tigette et l identifier avec le num ro du producteur et la date d chantillonnage o Prendre une tigette et la d poser dans le flacon Veiller ce que les fl ches de la ti
4. modifi es et sa r ponse devient incorrecte e Volume de lait le volume de lait n cessaire pour effectuer un test Beta s t a r 25 est de 0 2 ml La seringue ressort fournie dans la boite Beta s t a r 25 est r gl e pour d livrer 0 2 ml e Pr cautions Page3 5 NOTE TECHNIQUE Recherche de substances inhibitrices Test pour l autorisation de reprise de livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances inhibitrices o Lors de la mise en oeuvre du test Beta s t a r 25 il convient d avoir les mains propres et s ches pour viter toute contamination des r actifs o Avant son ouverture le flacon blanc devra tre rest au moins dix minutes la temp rature normale e Environnement le r sultat d un test de recherche de r sidus d antibiotiques pouvant tre modifi par la pr sence accidentelle de mol cules actives dans l environnement il est recommand d viter la mise en oeuvre du Beta s t a r par toute personne subissant un traitement a base de B lactames 5 3 Le Delvotest T ampoules 5 3 1 Principe de l analyse Le principe de l analyse est bas sur la diffusion d un chantillon de lait dans un milieu Agar ensemenc avec une souche bact rienne GeoBacillus Apr s incubation pendant une dur e d termin e typiquement 3h00 s il y absence de substances inhibitrices dans l chantillon la souche bact rienne se d veloppe acidifie le milieu et provoque le virage
5. peut plus tre collect par l acheteur avant qu il n ait t contr l et afin de montrer qu il est d sormais exempt de toute trace de substances inhibitrices Le Comit du Lait ASBL informe l acheteur d un r sultat positif en substances inhibitrices e la p nalisation r sulte de la d tection de substances inhibitrices de la famille des b ta lactames L acheteur testera le lait de l exploitation avec le test Beta s t a r 25 5 2 e la p nalisation r sulte de la d tection de substances inhibitrices non b ta lactames L acheteur testera le lait de l exploitation avec le test Delvo test T 5 3 4 r sultat positif dans les 12 mois L chantillon est analys au Comit du lait avec le Beta s t a r 25 selon la proc dure reprise ci dessous Si le r sultat est n gatif l chantillon est analys avec le Delvo test T et confirm avec les autres tests rapides INT MOP 00018 et INT MOP 00019 5 2 Le peta s ta r 25 5 2 1 Principe de l analyse Le Beta s t a r est une m thode de type R cepteur Assay pour la recherche rapide dans le lait de r sidus actifs d antibiotiques de la famille des B lactames p nicillines c phalosporines Page 1 5 NOTE TECHNIQUE Recherche de substances inhibitrices Test pour l autorisation de reprise de livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances inhibitrices Le test est bas sur l emploi d un r cepte
6. erpr ter imm diatement 5 minutes maximum la coloration l aide de la carte fournie par le fabricant et en conclure la pr sence ou absence de substances inhibitrices dans l chantillon e Enregistrer le r sultat de l analyse sur le document pr vu dans la proc dure PRO LEG 00002 mod le FEU INH 00021 et le laisser l exploitation Page 4 5 Recherche de substances inhibitrices Test pour l autorisation de reprise de livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances NOTE TECHNIQUE inbhibitrices Remarques et pr cautions Toujours changer de pipette entre deux chantillons Le Delvotest T est un test capable de d tecter un large spectre de substances inhibitrices Quelques remarques importantes o Ilest tr s important de ne pas d passer la dur e d incubation prescrite par le fabricant car celle ci a une r percussion directe sur la sensibilit du test o Si le lait contient des substances de type d sinfectant anti parasitaire ou que le pH est lev dans le cas de mammites par exemple il peut y avoir d tection de positifs o La pr sence d un agent conservateur dans le lait peu entra ner un r sultat positifs Page 5 5
7. gette soient orient es vers le bas dans le flacon e Poursuivre l incubation a 47 5 1 C 2 minutes apr s l introduction de la tigette dans le flacon retirer la tigette Page 2 5 NOTE TECHNIQUE Recherche de substances inhibitrices Test pour l autorisation de reprise de livraisons de lait apr s un r sultat d favorable en substances inhibitrices 5 2 5 Interpr tation e Interpr ter imm diatement et visuellement le r sultat comme suit o Aucune bande rouge n appara t le test est non valide recommencer l analyse Cela peut se produire si les r actifs ne sont pas conformes ou si le lait est non conforme Le test sera recommencer sur un lait blanc exempt se substances inhibitrices par exemple un lait de consommation Si le r sultat est de nouveau non valide sur le blanc les r actifs sont mettre en cause Le test devra tre refait au si ge de l acheteur ou au Comit du Lait Si l chantillon blanc donne un r sultat valable le probl me se situe au niveau du lait On pr l vera un autre chantillon et on recommencera l analyse Si le r sultat est toujours non valide l analyse devra tre refaite au si ge de l acheteur ou au Comit du Lait o La1 bande a une intensit e sup rieure celle de la bande r f rence gt l chantillon ne contient pas ou peu de r sidus de substances inhibitrices de la famille beta lactames gt le r sultat est n gatif cat
8. gorie sur le sch ma e gale ou inf rieure celle de la bande r f rence gt l chantillon contient des substances inhibitrices de la famille beta lactames le r sultat est POSITIF cat gorie ou sur le sch ma e tr s faible ou est absente gt l chantillon contient des substances inhibitrices de la famille beta lactames gt le r sultat est POSITIF cat gorie sur le sch ma NON vape N GATIF POSITIF POSITIF POSITIF e Enregistrer le r sultat de l analyse sur le document pr vu dans la proc dure PRO LEG 00002 mod le FEU INH 00021 et le laisser exploitation e La tigette est conserv e par acheteur 5 2 6 Remarques et pr cautions e Toujours changer l embout de la pipette entre deux chantillons e Spectre de d tection tous les antibiotiques de la famille des B lactames peuvent tre d tect s par le Beta s ta r La plupart des sp cialit s v t rinaires autoris es pour le traitement par voie intra mammaire renferment des antibiotiques de cette famille tels que la p nicilline G la cloxacilline l amoxicilline la c phapirine le c phalonium Source beta s t a r 25 Mode d emploi e Temp rature d incubation o La temp rature d incubation id ale est 47 5 C 1 0 C o Au dessous de 46 C les r actions sont ralenties o Au dessus de 49 C les r actifs peuvent subir une d gradation o Dans les deux cas les performances du test sont
9. ur sp cifique li a des particules d or Au cours de la premi re tape d incubation les antibiotiques B lactames s ils sont pr sents dans l chantillon de lait se lient au r cepteur Pendant la deuxi me tape d incubation le lait migre sur un support immunochromatographique qui pr sente deux bandes de capture e La premi re bande retient tous les r cepteurs qui n ont pas li d antibiotiques e La seconde bande sert de r f rence 5 2 2 R actifs Le Beta s t a r 25 permet la r alisation de 25 analyses Le coffret contient e 25 flacons contenant le r cepteur sous forme lyophilis e e 1 flacon blanc contenant 25 tigettes e seringue munie d un ressort et 25 embouts jetables e notice d information e Conservation du kit o Dur e jusqu la date de p remption o Temp rature 2 8 C o Les r actifs sont stables jusqu a la date de p remption inscrite sur l emballage du coffret Cependant les r actifs peuvent tre maintenus hors du r frig rateur pendant la dur e des analyses 5 2 3 Mat riel e Le kit contient les pipettes n cessaires la r alisation du test e Incubateur r gl sur 47 5 1 C utiliser de pr f rence le mod le du fournisseur r f rence 619751 5 2 4 Mode op ratoire e Suivre les instructions contenues dans la notice r dig e par le fabricant e Faire chauffer l incubateur et attendre sa stabilisation e Retirer les r actifs flacons et bo te de tigettes du r frig rateur 15
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