BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar)
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1. 0 50 Reception_Germany europe bd com PA 254458 02 BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Berg s 38800 Le Pont de Claix France Tel 33 476 68 3636 Fax 33 476 68 3292 http www bd com BD BD logo and Stacker are trademarks of Becton Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton Dickinson and Company PA 254458 02 20 52. AW MODE D EMPLOI RJ B D MILIEUX EN BOITES DE C PETRI PRETS A L EMPLOI PA 254458 02 Rev Juin 2003 BD Triple Sugar Iron Agar TSI Agar APPLICATION Lorsqu elle est utilis e comme milieu de mise en culture la BD Triple Sugar Iron Agar g lose trois sucres et sel de fer sert la diff renciation des Enterobacteriaceae en particulier la diff renciation des Salmonella par rapport aux autres bact ries ent riques PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE M thode microbiologique Hajna a mis au point la formulation de la TSI Agar en ajoutant du saccharose la formulation de la g lose deux sucres glucose et lactose la Kligler Iron Agar La Triple Sugar Iron Agar contient trois glucides glucose lactose et saccharose La fermentation de ces glucides provoque une production d acide qui est d tect e par l indicateur au rouge de ph nol Des changements de couleurs en r sultent et le milieu vire au jaune en cas de production d acide ou au rouge en cas d alcalinisation La formation d acide dans le culot est due la pr sence de deux sucres le lactose et le saccharose dont les concentrations sont beaucoup plus lev es que la concentration de glucose la formation d acide partir du glucose est inhib e par une oxydation rapide de la petite quantit d acide pr sente dans la partie inclin e du tube qui entra ne une r action faisant passer le milieu un pH neutre ou alcalin lorsque seul du glucose est fermen
3. ges visant mettre en vidence la pr sence ventuelle de Salmonella et de Shigella p ex au moyen de tests d agglutination sur lame avec les antis rums appropri s Des tests biochimiques ou s rologiques suppl mentaires sont n cessaires pour confirmer les r sultats obtenus sur ce milieu Les r actions obtenues sur BD Triple Sugar Iron Agar fournie en tant que milieu de mise en culture sont susceptibles de varier par rapport celles d crites pour une Triple Sugar Iron Agar fournie en tant que tubes La BD Triple Sugar Iron Agar n est pas un milieu d isolement primaire pour les Sa monella ou d autres pathog nes Evaluation des performances Au cours d une proc dure d valuation interne voir le tableau 1 trente souches d Enterobacteriaceae Enterococcus spp et de Staphylococcus aureus et notamment dix souches de Salmonella de s rotypes diff rents ont t test es sur BD Triple Sugar Iron Agar Les bo tes de P tri ont t incub es a l air ambiant pendant 20 h entre 35 et 37 C Parmi les dix souches de Salmonella neuf ont produit des colonies rouges centre noir et une colonie n a pas pr sent de centre noir Toutes les autres esp ces ont produit les r actions attendues Cela donne un pourcentage de sensibilit de 96 8 pour l ensemble des souches test es et de 91 pour les souches de Salmonella REFERENCES 1 Hajna A A 1945 Triple sugar iron agar medium for the identification of the intesti
4. nal group of bacteria J Bacteriol 49 516 517 2 Kligler I J 1918 Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of typhoid dysentery and allied bacilli J Exp Med 28 319 322 3 Bopp C A F W Brenner P I Fields J G Wells and N A Stockbrine 2003 Escherichia Shigella and Salmonella In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A PA 254458 02 3 Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 4 MacFaddin J F 1985 Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria Volume 1 Williams and Wilkins Baltimore London 5 Data on file BD Diagnostic Systems Europe Heidelberg Germany CONDITIONNEMENT BD Triple Sugar Iron Agar N r f 254458 Milieux en bo tes de P tri pr ts l emploi 20 unit s par carton Tableau 1 R sultats des performances Esp ces Nobre de souches Croissance sur BD Triple Sugar lron Agar Enterococcus faecalis 1 Enterococcus faecium 1 Petites colonies jaunes milieu de couleur jaune Escherichia coli positives au lactose 4 Colonies jaunes de taille moyenne a grande milieu de couleur jaune Escherichia coli n gatives au lactose 1 Colonies roses de taille moyenne a grande milieu de couleur rouge a rose Morganella morganii 1 Colonies roses de taille moyenne a grande milieu de couleur r
5. ouge a rose Proteus mirabilis 2 Colonies roses de taille moyenne a grande pr sentant des zones d essaimage milieu de couleur rouge rose Proteus penneri 1 Proteus vulgaris 1 Colonies jaunes de taille moyenne grande pr sentant des zones d essaimage milieu de couleur jaune Providencia alcalifaciens 1 Providencia rettgeri 1 Providencia stuartii 1 Colonies roses de taille moyenne grande milieu de couleur rouge rose Salmonella Abony 1 Salmonella Augustenborg 1 Salmonella Bovismorbificans 1 Salmonella Enteritidis 1 Salmonella Gallinarum 1 Salmonella Hadar 1 Salmonella Saintpaul 1 Salmonella Senftenberg Colonies roses centre noir de taille moyenne grande milieu de couleur rouge rose 1 Salmonella Typhimurium 1 Salmonella Typhimurium 1 Colonies roses de taille moyenne grande milieu de couleur rouge rose Shigella boydii 1 Shigella flexneri 1 Shigella sonnei 1 Colonies roses de taille moyenne a grande milieu de couleur rouge a rose Staphylococcus aureus 2 Colonies jaunes de taille petite moyenne milieu de couleur jaune INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus d informations contacter le repr sentant local de BD nal BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D 69126 Heidelberg Germany Fax 49 62 21 30 52 16 Phone 49 62 21 3
6. souches positives au Colonies roses a centre noir milieu de couleur rouge H2S Shigella et Salmonella n gatives Colonies roses milieu de couleur rouge au H2S Enterococcus Petites colonies jaunes le milieu autour des colonies est rouge Pour obtenir une identification compl te de la croissance issue de ce milieu les souches isol es doivent faire l objet d une diff renciation suppl mentaire r alis e au moyen de tests biochimiques et ou s rologiques CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE La BD Triple Sugar Iron Agar est un milieu non s lectif utilis pour la diff renciation de colonies pr sum es de Salmonella partir des autres Enterobacteriaceae obtenues partir de milieux d isolement ou comme milieu de repiquage partir d un bouillon d enrichissement de Salmonella Dans ce milieu la plupart des souches de Salmonella produisent des colonies roses centre noir tandis que les colonies d autres microorganismes sont soit rouges soit jaunes et ne pr sentent pas de centre noir Cependant certaines souches de Salmonella ne pr sentent pas de centre noir et risquent donc de ne pas tre d cel es si des tests de diff renciation suppl mentaires ne sont pas r alis s De plus le milieu ne permet pas de diff rencier Shigella de certaines autres Enterobacteriaceae Par cons quent toutes les colonies roses qui ne pr sentent pas de centre noir doivent faire l objet de d pista
7. t L ajout de saccharose permet d exclure certains coliformes et micoorganismes Proteus susceptibles d attaquer le saccharose mais pas le lactose pendant une dur e d incubation de 24 48 h En cas de pH neutre ou alcalin l acide sulfhydrique produit partir de thiosulfate de sodium r agit avec le sel d ammonium ferreux et entra ne la formation de sulfure de fer noir Le chlorure de sodium maintient l quilibre osmotique du milieu A l origine la formule de la g lose TSI est pr vue pour une application en tant que milieu en tubes avec un culot et une surface inclin e Cette technique permet la diff renciation du glucose du lactose et ou des fermentants du saccharose et permet aussi de d celer la production ventuelle d acide sulfhydrique Lorsqu elle est utilis e en tant que milieu de mise en culture les r actions observ es la surface de la g lose en bo te de P tri se limitent la formation de produits alcalins produits partir des peptones contenues dans le milieu si ni le glucose ni le lactose et ou ni le saccharose sont ferment s ou de produits acides issus du lactose et ou du saccharose qui sont les principaux sucres pr sents dans le milieu En outre la production d acide sulfhydrique survient si aucun des sucres n est ferment en produits acides car la formation d acide sulfhydrique n cessite un environnement au pH neutre ou alcalin La plupart des souches de Proteus connues pour leur capacit prod
8. t pas tre utilis pour l isolement primaire de pathog nes partir d chantillons cliniques Il est utilis pour la diff renciation de cultures pures issues de milieux d isolement et peut aussi tre utilis en tant que milieu de repiquage partir de bouillon d enrichissement de Sa monella voir aussi CARACTERISTIQUES DES PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE Mode op ratoire du test Ensemencer la BD Triple Sugar Iron Agar avec une colonie suspecte pr lev e dans une bo te de P tri d isolement primaire ou avec une pleine anse de milieu pr lev e partir de bouillon d enrichissement de Salmonella p ex un Selenite broth bouillon de s l nite Incuber en atmosph re a robie entre 35 et 37 C pendant 18 a 24 h Ne pas incuber en atmosph re enrichie au dioxyde de carbone et ne pas d passer 24 h d incubation car cela risquerait de produire des r sultats erron s R sultats G n ralement les r actions constat es sur les bo tes de P tri de BD Triple Sugar Iron Agar sont telles qu indiqu es ci dessous PA 254458 02 2 Microorganismes Croissance Escherichia coli Colonies jaunes milieu de couleur jaune Klebsiella Enterobacter Colonies jaunes l aspect muqueux milieu de couleur jaune Proteus Colonies dans les tons de rouge a marron essaimage milieu rouge les souches positives pour le saccharose sont susceptibles de produire des colonies jaunes aur ol es de jaune Salmonella
9. tion indiqu e voir l tiquette de l emballage et incub es pendant les dur es recommand es Des bo tes provenant d une pile ouverte de 10 bo tes sont utilisables pour une semaine lorsqu elles sont conserv es entre 2 et 8 C dans un endroit propre CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Ensemencer des chantillons repr sentatifs avec les souches suivantes pour plus de d tails voir le document MODE D EMPLOI GENERAL Incuber les bo tes de P tri en conditions a robie entre 35 et 37 C pendant 18 24 h Inclure un milieu non s lectif tel qu une Columbia Agar with 5 Sheep Blood pour servir de r f rence de croissance Croissance Escherichia coli ATCC 25922 Croissance bonne importante colonies jaunes milieu jaune autour des colonies Salmonella Typhimurium Croissance bonne importante colonies de couleur rose ATCC 14028 centre noir milieu de couleur rouge Salmonella Abony DSM 4224 Croissance bonne importante colonies de couleur rose centre noir milieu de couleur rouge Shigella flexneri ATCC 12022 Croissance bonne importante colonies de couleur rose milieu de couleur rouge METHODE Mat riaux fournis BD Triple Sugar Iron Agar bo tes de P tri Stacker de 90 mm Produits contr l s microbiologiquement Mat riaux non fournis Milieux de culture auxiliaires r actifs et mat riel de laboratoire requis Types d chantillons Il s agit d un milieu diff rentiel qui ne doi
10. uire de l acide sulfhydrique dans un milieu pH neutre ou alcalin acidifient le milieu car elles fermentent le saccharose et ne pr sentent pas de coloration noire dans ce milieu tandis que les souches de Salmonella qui ne fermentent ni le saccharose ni le lactose produisent des colonies noires REACTIFS BD Triple Sugar Iron Agar Formule par litre d eau purifi e Digestion pancr atique de cas ine 10 0g Glucose 1 0 Digestion peptique de tissu animal 10 0 Sulfate d ammonium ferreux 0 2 Chlorure de sodium 5 0 Thiosulfate de sodium 0 2 Lactose 10 0 Rouge de ph nol 0 025 Saccharose 10 0 G lose 13 0 pH 7 3 0 2 Ajust e et ou compl ment e en fonction des crit res de performances impos s PA 254458 02 1 PRECAUTIONS A usage professionnel uniquement Ne pas utiliser de bo te de P tri pr sentant des signes de contamination microbienne d coloration dessiccation ou fissure ou d autres signes de d t rioration Consulter le document MODE D EMPLOI GENERAL pour plus d informations concernant les proc dures de manipulation aseptique les risques biologiques et l limination des produits usag s STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION D s r ception conserver les bo tes de P tri dans l obscurit entre 2 et 8 C dans leur emballage d origine jusqu au moment de leur utilisation Ne pas les congeler ni les surchauffer Les bo tes peuvent tre ensemenc es jusqu la date de p remp
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