BD? Dermatophyte Agar
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1. 11 rue Aristide Berg s 38800 Le Pont de Claix France Tel 33 476 68 3636 Fax 33 476 68 3292 http www bd com BD and BD logo are trademarks of Becton Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton Dickinson and Company BA 257147 00 42. CKAGE ET DUREE DE CONSERVATION D s r ception conserver les fioles dans l obscurit entre 2 et 8 C jusqu au moment de leur utilisation Ne pas les congeler ni les surchauffer Les fioles peuvent tre ensemenc es jusqu la date de p remption indiqu e voir l tiquette du r cipient ou de l emballage et incub es pendant les dur es recommand es Les fioles provenant de bo tes d j entam es peuvent tre utilis es jusqu la date de p remption dans la mesure o elles sont conserv es dans l obscurit Les fioles ouvertes doivent tre utilis es imm diatement CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Ensemencer des chantillons repr sentatifs avec les souches suivantes pour plus d informations voir le document MODE D EMPLOI GENERAL Incuber les flacons en atmosph re a robie entre 25 et 30 C pendant le d lai indiqu sous le tableau Croissance Souches 7 Trichophyton mentagrophytes Petites colonies blanches d aspect pelucheux zones rouges ATCC 9533 dans le milieu situ en p riph rie des colonies Trichophyton equinum Petites colonies blanches d aspect pelucheux zones rouges ATCC 22443 dans le milieu situ en p riph rie des colonies Candida albicans Colonies de couleur blanche cr me et de taille petite ATCC 10231 moyenne milieu jaune ou comportant des zones rouges en p riph rie des colonies Aspergillus niger ATCC 16404 Inhibition partielle compl te Sacch
3. NULL MODE D EMPLOI RJ BD MILIEUX EN FLACONS C PRETS A L EMPLOI BA 257147 00 Rev June 2003 BD Dermatophyte Test Medium Agar APPLICATION La BD Dermatophyte Test Medium Agar g lose de test dermatophyte est un milieu s lectif utilis pour l isolement de champignons pathog nes partir d infections superficielles de la peau des cheveux et des ongles Le milieu est fourni sous forme de g loses inclin es dans des fioles bouchon vis PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE M thode microbiologique En 1969 Taplin et al ont d velopp ce milieu en vue de l isolement de dermatophytes partir de l sions cutan es comme la dermatomycose de cheveux d ongles et de peau Ce milieu est recommand pour l isolement des dermatophytes Il est particuli rement efficace pour isoler les genres Microsporum Trichophyton et Epidermophyton Dans la BD Dermatophyte Test Medium Agar les peptones fournissent l azote n cessaire et sont la source des l ments alcalins produits par les dermatophytes Lorsque les peptones sont m tabolis es en produits alcalins l indicateur au rouge de ph nol passe du jaune au rouge Du glucose est ajout en tant qu l ment nutritif pour permettre une acidification par les champignons capables d utiliser principalement le glucose La plupart des champignons autres que les dermatophytes notamment les levures et les champignons filamenteux s ils sont capables de se d velopper dans le milieu
4. aromyces cerevisiae Inhibition compl te NCPF 1211 Escherichia coli ATCC 25922 Inhibition compl te Pseudomonas aeruginosa ATCC Inhibition compl te 10145 Staphylococcus aureus Inhibition compl te ATCC 25923 Sans ensemencement Jaune transparent l g rement opaque Incubation 5 7 jours 4 5 jours 42 48h METHODE Mat riaux fournis BD Dermatophyte Test Medium Agar g loses inclin es fournies dans des fioles bouchon vis Produits contr l s microbiologiquement Mat riaux non fournis Milieux de culture auxiliaires r actifs et mat riel de laboratoire requis Types d chantillons La BD Dermatophyte Test Medium Agar est un milieu diff rentiel s lectif servant l isolement de dermatophytes partir d chantillons cliniques comme les ongles les cheveux et les pr l vements cutan s voir aussi la rubrique Mode op ratoire du test Les couvillons issus de zones infect es ne sont pas des chantillons appropri s pour le pr l vement de dermatophytes Consulter les publications cit es en r f rence pour obtenir des informations d taill es Ne pas utiliser ce milieu pour des chantillons autres que ceux d crits ci dessous Pr l vement des chantillons et Mode op ratoire du test Toujours utiliser des instruments st riles pour le pr l vement d chantillon Porter des gants de protection afin de se pr munir contre les infections Peau Avant de ret
5. gar REFERENCES 1 Taplin D et al 1969 Isolation and recognition of dermatophytes on a new medium DTM Arch Dermatol 99 203 2 MacFaddin J D 1985 Media for isolation cultivation identification maintenance of medical bacteria vol 1 p 275 284 Williams amp Wilkins Baltimore MD 3 Sutton D A 2003 Specimen collection transport and processing mycology In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 4 Summerbell R C 2003 Trichophyton Microsporum Epidermophyton and agents of superficial mycoses In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken edi Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 5 Larone D H 1995 Medically important fungi a guide to identification 3rd edition ASM Press Washington CONDITIONNEMENT BD Dermatophyte Test Medium Agar milieu en flacons pr t l emploi N r f 257147 20 unit s par carton G loses inclin es 15 mL en fioles de 30 mL bouchon vis INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus d informations contacter le repr sentant local de BD BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D 69126 Heidelberg Germany Phone 49 62 21 30 50 Fax 49 62 21 30 52 16 Reception Germany europe bd com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA
6. hantillon Apr s ensemencement incuber pendant 3 7 jours entre 25 et 30 C Si aucune croissance n est d tect e poursuivre l incubation pendant encore une semaine ou plus si n cessaire Noter que certains dermatophytes n cessitent une p riode d incubation sup rieure 3 semaines R sultats Examiner les fioles apr s 3 6 jours pour v rifier si l indicateur a chang de couleur du jaune au rouge ou au rose et pour contr ler l apparition de colonies dermatophytes typiques Un changement de couleur vers le rouge peut galement se produire en pr sence de Candida spp Toute interpr tation des couleurs de r action effectu e apr s 2 semaines d incubation ne pourra tre qu incertaine Les r sultats des milieux bas s sur g lose Sabouraud mentionn s ci dessus doivent tre pris en consid ration pour compl ter le diagnostic en particulier si aucune croissance n a t obtenue sur la BD Dermatophyte Test Medium Agar En raison du grand nombre de dermatophytes existants aucun d tail ne peut tre fourni ici quant leur morphologie Consulter les publications cit es en r f rence CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE La BD Dermatophyte Test Medium Agar convient l isolement des dermatophytes p ex Trichophyton Epidermophyton et Microsporum et doit uniquement tre utilis e pour la mise en vidence de champignons partir d infections superficielles peau cheveux et ongles I ne s agi
7. irer les squames nettoyer le site infect avec de l alcool thylique ou isopropylique dilu 70 Gratter l aide d un scalpel afin de retirer les squames des l sions s ches ou d coll es en partant des limites de la zone enflamm e et en progressant en direction de la peau saine Les scalpels jetables peuvent facilement endommager la peau utiliser si possible uniquement le dos de la lame Gratter soigneusement les zones tendues et pr lever autant de mati re que possible En cas de l sions v siculaires ou d inflammation aigu retirer BA 257147 00 2 d licatement la peau des cloques avec des ciseaux et des pinces L chantillon pr lev doit tre cultiv avec le contenu de la cloque et dans la mesure du possible avec des squames issues de la zone avoisinante En pr sence d infiltrats ou de processus granulomateux pr lever la mati re en profondeur et dans les plis de la peau l aide d une curette ou d une lancette vacciner D poser les mat riaux pr lev s sur un morceau de papier filtre et les ins rer dans la fiole contenant la BD Dermatophyte Test Medium Agar Cheveux Extraire les racines des cheveux ternes et sans clat l aide de pinces Les cheveux infect s sont cassants et se d tachent plus facilement que des cheveux sains Si une lampe de Wood est utilis e pr lever des cheveux qui apparaissent fluorescents sous cette lumi re m me s ils semblent sains la lumi re du jour En cas d obser
8. t pas d un milieu d isolement universel pour les champignons Pour l isolement de champignons provenant d autres sites anatomiques il convient plut t d utiliser l un des milieux bas s sur g lose Sabouraud cit s sous Pr l vement des chantillons et Mode op ratoire du test Certains champignons pathog nes notamment certaines souches de Microsporum peuvent tre inhib s par le cycloheximide Les moisissures et levures inhib es sur ce milieu g n rent parfois des infections cutan es Par cons quent il est recommand d ensemencer galement tous les chantillons sur l un des milieux moins s lectifs cit s dans Pr l vement des BA 257147 00 3 chantillons et Mode op ratoire du test Les tests de confirmation appropri s doivent tre effectu s afin d effectuer l identification finale des pathog nes isol s sur ces milieux La BD Dermatophyte Test Medium Agar et les milieux bas s sur g lose Sabouraud mentionn s ci dessus ne conviennent pas l isolement de bact ries car ces milieux sont galement susceptibles de g n rer des infections de la peau Par cons quent si un risque d infection bact rienne ne peut pas tre exclu l chantillon doit tre ensemenc sur des milieux d talement non s lectifs adapt s tel qu une BD Columbia Agar with 5 Sheep Blood Il se peut que certains champignons saprophytes produisent des r actions faussement positives apr s 2 semaines d incubation sur BD Dermatophyte Test Medium A
9. utilisent le glucose Il en r sulte la formation d acide Aucun changement de couleur de l indicateur de pH le rouge de ph nol ne se produit Le cycloheximide est un inhibiteur pour les moisissures et les levures non pathog nes La gentamicine et la t tracycline sont des inhibiteurs antibact riens Quelques microorganismes notamment les saprophytes les levures et les bact ries sont capables de se d velopper dans le milieu et de faire passer l indicateur du rouge au jaune Ils sont facilement reconnaissables de par la morphologie caract ristique de leurs colonies REACTIFS BD Dermatophyte Test Medium Agar Formule par litre d eau purifi e Digestion papa que de semoule de 10 0 g soja Glucose 10 0 Rouge de ph nol 0 2 Cycloheximide 0 5 Gentamicine 0 1 Hydrochlorure de t tracycline 0 1 G lose 20 0 pH 5 5 0 2 Ajust e et ou compl ment e en fonction des crit res de performances impos s PRECAUTIONS A usage professionnel uniquement Ne pas utiliser de fioles pr sentant des signes de contamination microbienne d coloration dessiccation ou fissure ou d autres signes de d t rioration Porter des gants de protection pendant la pr paration et le pr l vement des chantillons Consulter le document MODE D EMPLOI GENERAL pour plus d informations sur les proc dures de manipulation aseptique les risques biologiques et l limination des produits usag s BA 257147 00 1 STO
10. vation de ce qui est commun ment d sign sous le terme points noirs extraire le cheveu infect hors du bulbe l aide du bord d un scalpel Ne pas utiliser de cheveux coup s comme chantillon Distribuer les cheveux sur la surface du milieu Appliquer doucement les cheveux sur la g lose l aide de pinces Ongles En cas d infection sous ungu ale retirer d licatement toutes les parties de l ongle dont la surface est particuli rement d form e l aide de ciseaux d une lime ongle ou d un scalpel Des fragments d ongle doivent alors tre pr lev s partir du lit ungu al En cas d infection superficielle des fragments d ongle ou de fines poussi res de particules sont pr lev s par raclage de la surface de l ongle L utilisation d une fraise ongles est recommand e D poser les mat riaux pr lev s sur un morceau de papier propre avant de les ins rer l int rieur de la fiole Ce milieu est utilis pour l isolement de dermatophytes tels que Microsporum Trichophyton et Epidermophyton Certains champignons pathog nes sensibles aux composants s lectifs du milieu sont inhib s dans ce milieu C est pourquoi il est recommand d inclure une bo te de BD Sabouraud Glucose Agar BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol ou BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin de mani re d celer la pr sence de tous les pathog nes fongiques pr sents dans l c
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