0608 Mycobacterium tuberculosis
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1. Portugal Cantanhede Portugal Maio 2010 Sandra Balseiro Directora T cnica 12 Folha de Dados de Seguran a 1 3 Material Safety Data Sheet MSDS geneBOX R amp D Diagnostic Tests qPCR Kits Produtos qPCR da geneBOX Esta folha de dados de seguran a aplic vel a todos os produtos de qPCR da geneBOX 1 Produtos Qu micos e Identifica o da Companhia Data de realiza o Maio 2010 Grupo do produto Produtos de PCR em tempo real da geneBOX Manufactura o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231410946 fax 351 231 410947 e mail info genebox com 2 Composi o e Informa o sobre os reagentes Componente Qu mico Nome vulgar N de lote Mistura de primers Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Mistura de reac o Desoxiribonucle tidos Nucle tidos Tamp o Cloreto de Magn sio MgcI2 Carboxi x rodamina Rox DNA polimerase Controlo interno Acido Desoxiribonucleico Oligonucle tido Controlo positivo Acido Desoxiribonucleico DNA Controlo negativo H20 gua bidestilada est ril 3 Propriedades f sico qu micas Componente Aspecto Cor Odor Mistura de primers l quido incolor nenhum Mistura de reac o l quido incolor nenhum Controlo Interno l quido incolor nenhum Controlo Positivo l quido incolor nenhum Controlo Negativo l quido incolor nenhum 13 Folha de Dados de Segur2. C digo do Produto 0608 Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 Dispositivo para utiliza o in vitro Manual de I nstru es Vers ol 1 Maio de 2010 Mycobacterium tuberculosis bacilo da tubeculose agente patog nico transmitido via respirat ria por saliva de individuos contaminados proveniente da tosse espirro ou fala Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 um teste para diagn stico molecular da infec o com maior sensibilidade especificidade e rapidez do que o tradicional teste de tuberculina ou cultura do microorganismo Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 detecta a regi o senX3 regX3 do genoma de Mycobacterium tuberculosis Altera es e melhoramento do Produto Este produto pode ser melhorado de modo a aumentar o seu rendimento As altera es adi es ou modifica es de MYCT Mix Controlo interno Controlo positivo ou controlo negativo em rela o ao lote anterior est o detalhadas na tabela abaixo Tubo Modifica o Motivo N A Controlo de Qualidade O kit Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 foi testado com DNAs extra dos de culturas celulares das linhas ATCC 25177 de Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 e outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A Genebox garante a qualidade e a fiabilidade do seu kit Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 Especificidade O kit Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0
3. DNA provocam um decl nio consider vel na especificidade da PCR Recomenda se o uso de qualquer kit de extrac o de DNA que apresente marca o CE de modo a obter um DNA extra puro 2 DNA Polimerase O Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 foi intensivamente testado utilizando a DNA polimerase da Reagente 5 Reagente 5 Lisboa Portugal 3 MYCT mix Para uma boa performance detec o de Mycobacterium tuberculosis com o Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 obrigat ria a utiliza o da MYCT Mix fornecida com o Kit 4 Procedimentos de amplifica o Para uma correcta utiliza o do kit aconselha se a seguir o programa de PCR apresentado neste Manual de Instru es 5 Termociclador Este kit foi optimizado em Applied Biosystems 7500 Recomenda se utiliza o de um equipamento de qPCR que apresente as seguintes caracter sticas Excita o e emiss o pelo menos at 494 nm e 521 nm heating rate m nima de 1 6 C seg cooling rate m nima de 1 62C seg gama de temperaturas 4 1002C uniformidade de temperaturas 0 5 C heated lid superior a 1002C calibrado para fluoresc ncias ROX FAM e JOE e Software de an lise de resultados 6 Validade Como especificado na embalagem Se os problemas persistirem por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 geneBOX investiga o e desenvolvimento de teste diagn sticos garante que os primers presentes no kit Mycobacteri
4. an a 2 3 Material Safety Data Sheet MSDS 4 Informa o Toxicol gica Qu mico Toxicidade ROX Contacto cut neo Provoca irrita o cut nea Absor o cut nea Pode ser nocivo se absorvido atrav s da pele Contacto ocular Provoca irrita o nos olhos Inala o Pode ser nocivo se inalado O material irritante para o trato respirat rio superior Ingest o Pode ser nocivo se deglutido 5 Estabilidade e reactividade Condi es a evitar Calor e humidade Incompatibilidades Bases e agentes oxidantes fortes 6 Protec o pessoal Protec o das m os use luvas apropriadas resistentes a qu micos Protec o dos olhos recomenda se o uso de culos de protec o qu mica 7 Manipula o e armazenamento Manipula o evite o contacto directo com a subst ncia Armazenamento armazene temperatura aconselhada proteja do contacto com a luz Danifica o da embalagem protectora rejeitar o constituinte contido na embalagem 8 Perigos Os componentes da mistura de reac o podem ser perigosos se inalados ingeridos ou absorvidos pela pele Este material pode causar irrita o da pele dos olhos e do tracto respirat rio A ingest o de grandes quantidades desta mistura pode causar dores de est mago v mitos ou diarreia 9 Medidas de Primeiros Socorros No caso de contacto com os olhos deve lavar imediatamente os olhos com gua abundante por cerca de 15 minutos Deve consultar o seu m dico No c
5. anais FAM e J OE deve ser coleccionada no final de cada extens o An lise de resultados Mycobacterium tuberculosis Fluoresc ncia Fluoresc ncia M tuberculosis Validado a Positivo pe Controlo Validado positive Interpreta o de an lises n o v lidas Mycobacterium tuberculosis Fluoresc ncia Fluoresc ncia O aa Positivo reac o Pe a negativo reac o O R ae positivo inv lido reac o Tabela de Interpreta o de resultados Tabela l Interpreta o de an lises v lidas Interpreta o M tuberculosis Negativo Controlo Negativo Validado Validado Interpreta o Valida o positivo inv lido reac o positivo inv lido reac o Controlo negativo inv lido Controlo negativo inv lido Controlo negativo inv lido Guia de resolu o de problemas PROBLEMAS 1 Valores de Ct para a amostra muito elevados 2 Os controlos internos falharam em diversos po os 3 Falsos negativos e Controlo Interno normal 4 Falsos positivos e Controlo Interno normal 5 Resultados amb guos 6 Ru do de fluoresc ncia 7 Aus ncia total de fluoresc ncia Poss veis Causas a Concentra o do DNA baixa b Degrada o do DNA c Presen a de inibidores da Taq polimerase nas amostras de DNA d Excesso de DNA e Contamina o com outros produtos de PCR ou outras amostras de DNA durante a prepara o das reac es de PCR f Equipame
6. antia aplica se s para produtos que sejam manipulados e armazenados de acordo com as especifica es e recomenda es de utiliza o As reclama es devem ser enviadas por escrito directamente para a geneBOX e devem ser acompanhadas por uma c pia da guia de transporte ou factura do produto Este produto n o pode ser reformulado reembalado ou revendido em nenhuma forma sem o expresso consentimento da geneBOX investiga o e desenvolvimento de teste diagn sticos 11 Declara o de Conformidade Nome do Produto Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 Numero do Produto GB 06 08 Utiliza o Detec o de Mycobacterium tuberculosis Produ o geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 cantanhede portugal N s geneBOX investiga o e desenvolvimento de testes de diagn stico indubitavelmente declaramos que este produto ao qual se relaciona esta declara o de conformidade est em conformidade com os seguintes documentos normativos ISO 9001 2008 e ISO 13485 2004 Seguindo ainda as indica es da Directiva Europeia 98 79 CE sobre dispositivos m dicos de diagn stico in vitro conformidade de acordo com o Anexo IV transposto para as leis nacionais dos estados membros da Uni o Europeia Europeia A ficha e os documentos t cnicos deste produto s o mantidos na geneBOX biocant centro de inova o em biotecnologia 3060 197 Cantanhede
7. aso de contacto com a pele deve lavar imediatamente a zona afectada com gua corrente e sab o Lave a roupa contaminada antes da sua utiliza o No caso de ingest o lave a boca com gua abundante Deve contactar o seu m dico se necess rio No caso de inala o mudar a v tima para um local arejado Se encontrar inanimado aplique respira o artificial Se apresentar dificuldades respirat rias aplique oxig nio Deve consultar o seu m dico 10 Medidas a tomar em caso de inc ndio Meios de extin o gua di xido de carbono p qu mico seco ou espuma apropriada Meios de extin o n o aconselhados n o existem restri es conhecidas Perigos espec ficos de exposi o em caso de inc ndio podem emitir fumos t xicos de di xido e mon xido de carbono nitrog nio f sforo cloreto de hidrog nio e g s hidrog nio Equipamento especial de combate ao inc ndio quando s o libertadas grandes quantidades de subst ncia trabalhe apenas com protec o adequada para olhos e pele 14 Folha de Dados de Seguran a 3 3 Material Safety Data Sheet MSDS 11 Medidas a tomar no caso de derrame acidental Precau es pessoais evite o contacto directo com a subst ncia Limpeza limpe normalmente a rea afectada n o s o necess rios cuidados adicionais Protec o da pele use uma bata de laborat rio 12 Informa o ecol gica N o existem dados dispon veis 13 Informa o sobre a elimina o Elimin
8. e o material de acordo com toda a regulamenta o aplic vel Grupo IV res duos hospitalares espec ficos 14 Informa o sobre o 6 No transporte dos Kits devem estar a seguradas as temperaturas n o devendo ultrapassar os 162C A dura o do transporte n o deve ser superior a 3 dias de modo a garantir que todos os componentes do Kit cheguem em perfeitas condi es aos seus destinat rios 15 Contactos teis N mero Nacional de Emerg ncia 112 Centro de Informa o Anti Venenos 808 250 143 16 Outras informa es As informa es a cima dispon veis s o baseados no n vel de conhecimento actual devendo ser utilizado apenas como guia A geneBOX R amp D Diagnostic Tests n o se responsabiliza por qualquer dano causado pela manipula o inapropriada ou pelo contacto com os referidos produtos Para mais esclarecimentos por favor contactem com o apoio t cnico para o 351 231 410 946 15 Refer ncias 1 Espy M Uhl J Sloan L Buckwalter S Jones M Vetter E Yao J Wengenack N Rosenblatt J Cockerill F Smith F Real Time PCR in Clinical Microbiology Applications for Routine Laboratory Testing Clin Microbiol Rev 2006 19 1 165 256 2 Broccolo F Scarpellini P Locatelli G Zingale A Brambilla A Cichero P Sechi LA Lazzarin A Lusso P Malnati MS Rapid Diagnosis of Mycobacterial Infections and Quantitation of Mycobacterium tuberculosis Load by Two Real Time Calibrated PCR Assays ournal of Clinical Microbiolo
9. espec fico para a detec o da regi o senX3 regX3 do DNA gen mico de amostras biol gicas A sua especificidade foi comprovada com DNAs extra dos de culturas celulares de ATCC 25177 de Mycobacterium tuberculosis e outras esp cies de bact rias obtendo amostras positivas e negativas A especificidade do kit Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 conferida por MYCT mix que apresenta 100 de homologia com todas as sequ ncias de Mycobacterium tuberculosis registadas em bases de dados Sensibilidade A sensibilidade do kit Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 foi testada e a Genebox garante a detec o de n veis m nimos da regi o senX3 regX3 do genoma de Mycobacterium tuberculosis at 10 ng de DNA Componentes do Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 Kit e Mistura de reac o MYCT 1 tubo MYCT mix 2 ml conservar de 15 a 302C e Controlo Interno CI 1 tubo CI 500 uL conservar de 15 a 30 2C e Controlo Positivo CP ltubo CP 25u4l conservar de 15 a 30 2C e Controlo negativo CN ltubo CN 25 u l conservar de 15 a 302C e Manual de instru es 1 Manual de Instru es Componentes da qPCR Master Mix Primers e sonda Concentra o final de cada 1 2 0 9 e 0 2 mM Nucle tidos Concentra o final de cada dNTP 0 5 mM Tamp o da PCR concentra es finais s o 4 mM MgCl e 0 4 u ul hot start Taq DNA polimerase pH 8 3 Rox concentra o final de 15 nM Protoco
10. gy 2003 41 10 4565 4572 B D DESENVOLVIMENTO E PRODU O DE TESTES DIAGN STICOS geneBOX R amp D Diagnostic Tests biocant centro de inova o em biotecnologia n cleo 4 lote 3 3060 197 Cantanhede Portugal tel 351 231 410 946 fax 351 231 410 947 e mail info genebox com
11. lo de amplifica o por PCR Reagentes e Amostra de DNA 100 200 ng ul e Mistura de reac o MYCT mix e Controlo interno CI e Controlo positivo CP e Controlo negativo CN e gua bi destilada est ril n o fornecida Este componente apresenta alto potencial contaminante dado conter DNA de Mycobacterium tuberculosis recomenda se o m ximo cuidado no seu manuseamento Extrac o de DNA Para a detec o de Mycobacterium tuberculosis por PCR em tempo real necess rio DNA extra puro Recomenda se que o isolamento de DNA seja efectuado utilizando kits de extrac o com marca o CE que garantam um r cio DO 260 280 maior do que 1 6 e uma concentra o entre 100ng 200 ng ul Amplifica o por PCR 1 Agite brevemente todos os tubos do kit e os tubos de DNA 2 Para cada detec o pipete de acordo com a tabela Tubo MYCT mix Tubo Controlo Interno CI 2 5 ul DNA de amostra Volume final 25 yul 3 Para o controlo positivo proceder como em 2 substituindo o DNA de amostra por 2 5 ul de Tubo Controlo Positivo CP 4 Para o controlo negativo proceder como em 2 substituindo o Controlo Interno por 2 5 ul de gua bidestilada est ril e o DNA de amostra por 2 5 ul de Tubo controlo negativo CN NOTA Cada detec o deve ser realizada com pelo menos duas reac es em duplicado Por cada utiliza o do kit deve correr pelo menos uma reac o CP Programa PCR A detec o de fluoresc ncia nos c
12. nto descalibrado g Contamina o dos reagentes do kit SUGEST ES 1 Verifique a qualidade e concentra o do DNA 2 Re purifique o DNA e dilua o em gua desionisada destilada 3 Ajuste a concentra o do DNA para a desejada 4 Repita a detec o reac o com o DNA com maior qualidade 5 Separe a zona de extrac o de DNA da zona de prepara o das reac es 6 Vista uma bata diferente para cada sala 7 Esterilize bem a zona de trabalho 8 Mude v rias vezes de luvas especialmente na transi o da zona de manuseamento de amostras cl nicas para a zona de prepara o da reac o 9 Verifique a compatibilidade das placas de PCR em tempo real e respectivos selantes com o equipamento de PCR em tempo real utilizado 10 Verifique a correcta utiliza o do equipamento de PCR em tempo real e respectivo software de an lise 11 Verifique a calibra o do equipamento par metros t rmicos e de fluoresc ncia e calibra o de pipetas Guia T cnico 1 Pureza e Concentra o do DNA Para obter bons resultados com o Mycobacterium tuberculosis Qual qPCR Box 1 0 a pureza da amostra de DNA cr tica Ter uma amostra pura significa obter uma raz o 260nm 280nm de DO superior a 1 6 e uma por o de DNA superior a 9 4 kb A elevada degrada o do DNA ou uma raz o 260nm 280nm inferior a 1 5 requer uma nova extrac o de DNA Cada amostra de DNA deve ter aproximadamente 100 a 200 ng ul Concentra es elevadas de
13. um tuberculosis Qual qPCR Box apresentam as especificidades dadas tabelas de interpreta o de resultados do produto 1 MYCT mix Cl CP e CN Armazenamento a 20 C MYCT mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 12 meses a partir da data de produ o ver validade do lote na embalagem Armazenamento a 4 C de MYCT mix Cl CP e CN permanecem est veis durante 15 dias a partir da data de recep o temperatura ambiente MYCT mix CI CP e CN permanecem est veis durante 3 dias a partir da data de recep o MYCT mix Cl CP e CN nunca devem ser deixados ou armazenados com a tampa aberta 2 DNA O DNA extra do por salting out ou por qualquer outro m todo deve ser armazenado a 4 C ou 202C Ao optar pela congela o das amostras devem ser evitadas ciclos repetidos de congela o descongela o de modo a impedir a degrada o da amostra As amostras de DNA armazenadas em dH 0 permanecem est veis durante pelo menos 4 semanas a 4 C ou 2 anos a 20 C As amostras de DNA armazenadas em tamp o TE permanecem est veis durante pelo menos 2 anos a 42C ou 5 anos a 202C 10 Aviso de garantia geneBOX investiga o e desenvolvimento de teste diagn sticos responsabiliza se perante os seus clientes pelos defeitos no material e componentes dos seus produtos aplicados em condi es normais Os produtos da empresa que apresentam esta garantia devem ser substitu dos sem encargos para o cliente Esta gar
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