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BPG IT.book - GE Healthcare Life Sciences

1. Parte Descrizione Numero di codice Materiale A contatto con i liquidi Quantit n di processo confezione 1 Endpiece 8 1109 67 316L X 2 Support net endpiece 8 1104 35 PP X 3 Flange 8 1109 68 PP 316 X 4 U shaped seal 8 1104 40 EPDM X U shaped seal 8 1117 55 PFR X 5 et 54 um endpiece 8 1127 05 PP X et 23 um endpiece 8 1103 19 PP X et 10 um endpiece 8 1103 18 PA xX et 12 um endpiece 8 1148 46 PEEK X 6 Flange O ring 446 x 6 8 1105 33 EPDM X 2 Flange O ring 446 x 6 8 1117 67 FEP X 7 Allen screw M8 x 50 8 1109 40 316 5 8 Rod BPG 450 500 8 1106 18 316 Rod BPG 450 750 8 1103 09 316 Rod BPG 450 1000 8 1103 10 316 9 Sealing unit 8 1109 69 316L 0 Pin bolt 8 3001 07 316 3 1 Stop screw 9 4363 01 316 2 2 Glass tube BPG 450 500 8 1103 14 Borosilicate glass X Glass tube 450 750 8 1103 15 Borosilicate glass X Glass tube 450 1000 8 1103 16 Borosilicate glass X 3 Revolving stop cap 8 1107 43 POM 4 Revolving stop 8 1109 41 316L 5 Screw M8 x 50 8 1109 40 316 5 6 Spacer 8 1109 42 316L 7 Lid 8 1109 70 316 8 Bushing ring 8 1109 43 PP 2 9 Adaptor height adjuster 8 1109 44 POM 20 Handle 8 1109 45 316 21 Nut flange 8 1109 46 PEEK 23 Seal adjuster 8 1109 47 PEEK 24 Handle 8 1109 48 316 25 nob 8 1109 49 PP 26 Screw M10 x 65 8 1109 50 316 2 27 Washer 10 5 x 20 8 1109 51 316 0 28 Domed nut M10 and washer 18 1103 20 316 29 Adaptor screw 8 1109 54 31
2. gt lt Valvola Chiusa Fig 5 11 Metodo di impaccaggio della colonna punto 8 PUNTO 8 a Abbassare rapidamente l adattatore girando in senso orario la manopola del regolatore di altezza Il tampone fra il letto sedimentato e l adattatore passa fra l O ring dell adattatore e la parete della colonna Durante questa operazione il letto inizia ad innalzarsi Arrestare l abbassamento dell adattatore quando si trova a 0 5 1 cm sopra il letto Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 PUNTO 9 CY Valvola di sicurezza gt s EN Pompa MON La Y P Valvola Fig 5 12 Metodo di impaccaggio della colonna punto 9 PUNTO 9 a Sigillare l O ring dell adattatore girando in senso orario la manopola BPG 100 140 e 200 o la manopola del regolatore di tenuta BPG 300 e 450 b Aprire la valvola inferiore c Avviare la pompa d Regolare la velocit di flusso alla velocit del flusso di impaccaggio Controllare il manometro per verificare che la pressione non superi la pressione massima della fase stazionaria fare riferimento al manuale utente della realtiva fase stazionaria Il letto verr compresso di nuovo al livello del contrassegno sulla colonna eseguito al punto 7 e Ripetere i passi 7 e 8 fino a quando l adattatore raggiunge il contrassegno sulla colonna Nota Quando vi un massimo di 1 cm di liqui
3. DSS di tampone residuo Valvola chiusa Y Fig 5 2 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 2 PUNTO 2 a Proseguire a pompare tampone ed aria fino a quando nella colonna sono rimasti solo 2 3 cm di tampone b Usare una livella per verificare che la colonna sia orizzontale Se necessario regolare i piedini le ruote PUNTO Fig 5 3 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 3 PUNTO 3 a Miscelare il tampone di impaccaggio con la fase stazionaria in modo da ottenere uno slurry al 75 cio volume resina sedimentata volume totale dello slurry 0 75 Nota Questo volume di slurry ottimale per le fasi stazionarie BioProcess Media Per fasi stazionarie cromatografiche diverse rivolgersi al distributore per informazioni sul volume raccomandato della sospensione di resina Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 PUNTO 4 Fig 5 4 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 4 PUNTO 4 a Versare prestando attenzione lo slurry ben omogeneo nella colonna Controllare che non vi siano bollicine d aria intrappolate nello slurry Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 45 5 Funzionamento 5 1 Impaccaggio della colonna PUNTO 5 gt lt Valvola Chiusa Fig 5 5 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 5 PUNTO 5 Nota Questo p
4. Manometro lt Adattatore Colonna BPG Valvola di sicurezza ca lt Valvola di ingresso der POR della colonna gt lt Fig 3 8 Presentazione schematica della colonna delle valvole e della pompa per il test di tenuta Aumentare la pressione fino a raggiungere la massima pressione operativa Attendere circa 15 minuti fino a quando la pressione si stabilizzata Controllare la caduta della pressione sul Manometro La caduta di pressione non deve superare 0 1 bar in 5 minuti Un registratore collegato ad un misuratore di pressione permetter di ottenere dati pi precisi Con ci viene completato il test di tenuta Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 31 3 Installazione e test di tenuta 3 4 Test di tenuta 32 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC La colonna BPG 4 4 La colonna BPG In questo capitolo vengono presentate informazioni di riferimento sulle specifiche e caratteristiche delle colonne BPG 4 1 Specifiche e caratteristiche Tabella 4 1 Specifiche e caratteristiche principali delle colonne BPG Diametro Area della Altezza Altezza del letto Volume del letto 3 Pressione Peso Peso Dimen della col sezione del cm litro massima totale dell ada sioni onna trasver tubo bar kg ttatore globali mm sale cm kg cm cm LxLxA Min 1 2 3 Min 1 2 3 4 100 78 5 50 0 26 34 45 00 20 27 35 8 15 7 48x48x127 100 78 5 75 25 4 55 65 20 3 2 4 3 51 8 16 7 48x48
5. 2 1 Numeri di codice per tubi e supporti delle colonne La seguente Tabella 2 1 riporta i numeri di codice dei tubi cromatografici e dei supporti per i vari diametri di colonna controllare i numeri di codice della nuova attrezzatura per verificarne la corrispondenza Tabella 2 1 Numeri di codice per tubi cromatografici e supporti di colonna Diametro Altezza del tubo cromatografico Imm della colonna Supporto mm 500 750 950 100 18 1103 01 18 1103 02 18 1103 03 18 1031 10 140 18 1113 08 18 1113 09 18 1031 20 200 18 1103 11 18 1103 12 18 1103 13 18 1031 20 300 18 1103 21 18 1103 22 18 1103 23 450 18 1103 71 18 1103 72 18 1103 73 L altezza del tubo della colonna BPG 450 1000 mm Nota Per ottenere una configurazione completa per BPG 100 140 e 400 vanno ordinati sia il supporto che la colonna Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 15 2 Disimballaggio della colonna 2 2 Componenti forniti 2 2 Componenti forniti Controllare che siano presenti tutti i componenti elencati nella seguente Tabella 2 2 Tabella 2 2 Quantit di componenti forniti con colonne BPG Designazione Quantit BPG BPG BPG BPG BPG 100 140 200 300 450 Flangia cieca con guarnizione EPDM 2 2 2 2 2 Clamp da 23 mm 51 mm 2 2 2 2 2 Supporto 1 1 23 Net da um 2 2 2 2 2 Bulloni per il fissaggiodel 6 4 supporto alla colonna Istruzioni per l uso manutenzione 1 1 1 1 J 16 Colonne B
6. Se ci si verifica inserire fra la pompa e la colonna una trappola d aria e una valvola di sicurezza La valvola di sicurezza va posta fra la trappola dell aria e la colonna Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Colonna BPG 300 Fase stazionaria Sepharose 6 Fast Flow Altezza del letto 57 5 cm Volume del letto 40 6 litri Eluente Acqua bidistillata Campione 1 05 litri acetone all 1 NaCl all 1 Velocit di flusso 19 cm h Vo 18 8 Wh 0 9 HETP 0 024 cm a 0 90 b 0 85 b a 0 85 0 90 A 0 94 Funzionamento 5 5 2 1 Scelta del campione per il test delle colonne Il materiale pi adatto per effettuare il test delle colonne naturalmente il campione che deve essere con la colonna stessa ma ci non sempre fattibile ed economico Come alternativa si potr usare una soluzione di acetone o di NaCl per ottenere una buona indicazione della qualit di impaccaggio della colonna L eluato viene monitorato misurando la conducibilit o l assorbimento UV ed il profilo di eluzione che ne risulta viene usato per calcolare il valore di HETP Il vantaggio di usare una soluzione di NaCl che subito disponibile e pu essere usata con sicurezza per testare tutte le colonne Uno svantaggio rappresentato dal fatto che il NaCl potrebbe interagire con la matrice della fase stazionaria soprattutto con le matrici di scambiatori ionici dando quindi risultati non corretti L acetone tuttavia non interagi
7. 29 assemblaggio della colonna colonne 100 140 e 200 18 colonne 300 24 colonne 450 28 calcoli di asimmetria del picco 57 calcolo HETP 56 chemical resistance 35 colonna assemblaggio e smontaggio 17 componenti di base 9 disimballaggio 15 impaccaggio 41 installazione 17 moteriali 34 metodo consigliato per l impaccaggio della co lonna 49 numeri di codice dei tubi e dei supporti 15 perdita 17 principi di funzionamento 41 quantit di componenti forniti 16 scelta del campione del test 55 smaltimento 13 terra 30 test di tenuta 17 valutazione 54 connettori 30 curve della velocit di flusso 36 D determinazione della velocit di flusso di impaccaggio 43 disimballaggio della colonna 15 E estensione montaggio su colonne 300 27 montaggio su colonne 450 29 montaggio sulle colonne 100 140 e 200 21 estensione di impaccaggio Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC posizione dei componenti 22 F filo guida curve 36 I impostazioni della chiave tensiometrica colonne 100 140 e 200 20 colonne 300 25 colonne 450 29 Informazioni generali 9 installazione della colonna 17 M marchio CE 10 messa a terra della colonna 30 montaggio di un estensione colonne 100 140 e 200 21 colonne 300 27 colonne 450 29 N note 11 note di attenzione 11 note di avvertenza 11 numeri di codice tubi e supporti colonna 15 o operatori autorizzati 12 Q quantit di fase stazionaria 42 R raccoma
8. 41 Tubing 1 42 Washer PP 1 8 1142 79 NA NA 43 Washer PP 8 1142 80 8 1142 80 18 1142 80 Fare riferimento alla Tabella 3 3 nella BPG Maintenance Guide Paragonabile a 316L Tubo d i 4 mm BPG 100 6 mm BPG 140 e 200 Tabella A 2 Componenti delle colonne BPG 300 numeri delle voc i fanno riferimento alle Figure A 3 e A 4 Parte Descrizione Numero di codice Materiale A contatto con i liquidi Quantit n di processo confezione 1 Adaptor top plate 18 1012 48 316 1 2 Nut M12 8 1012 24 316 6 3 Cup spring washer 18 1012 25 316 6 4 Nut M10 8 1012 44 316 5 5 Flange 316 6 O ring 301 x 6 mm 8 1012 26 EPDM 2 7 O ring 301 x 6 mm 8 1012 27 FEP 1 8 Rod for T300 500 8 1012 31 316 1 Rod for T300 750 8 1012 32 316 1 Rod for T300 950 8 1012 33 316 1 9 Column tube T300 500 8 1012 28 Borosilicate glass 1 Column tube T300 750 8 1012 29 Borosilicate glass 1 Column tube T300 950 8 1012 30 Borosilicate glass 1 0 Net 23 um endpiece 8 1012 34 PP 2 1 Net 10 um endpiece 8 1012 35 PA 2 Net 12 um endpiece 8 1148 44 PEEK 2 Net 54 um endpiece 8 1127 03 PP 2 2 Support net endpiece 18 1012 36 PP 2 3 Distribution plate 8 1012 37 PP 2 4 Endpiece 8 1140 47 316L 5 Gasket 25 mm i d
9. Quantit di fase stazionaria per altezza di letto in cm Le quantit di fase stazionaria richieste per cm di altezza di letto delle colonne BPG sono riportate qui di seguito Fase stazionaria Tabella 5 1 Quantit di fase stazionaria richiesta per le colonne BPG Quantit di fase stazionaria per litro di Quantit di fase stazionaria per centimetro di letto impaccato colonna impaccata BPG 100 BPG 140 BPG 200 BPG 300 BPG 450 DEAE Sepharose Fast Flow 25 98m 92m 393m 882m 97 Sepharose Fast Flow 25 98m 92m 393m 882m 97 CM Sepharose Fast Flow 25 98 m 92 m 393 m 882 m 97 S Sepharose Fast Flow 25 98 m 92 m 393 m 882 m 97 Phenyl Sepharose Fast Flow 25 98 m 92 m 393 m 882 m 97 Sephadex G 25 C e M grades 250g 19 69 38 2 g 78 59 176g 394g Sephadex G 25 SF 280g 22 09 42 99 88 0g 198 g 443 g Sepharose 4 e 6 Fast Flow 20 94m 83 m 377 m 847 m 89 Sephacryl High Resolution 25 98m 92m 393m 882m 97 Superdex 75 e 200 prep grade 20 94m 83 m 377 m 847 m 89 Q e SP Sepharose High Performance 20 94m 83 m 377 m 847 m 89 Phenyl Sepharose High Performance 20 94m 83 m 377 m 847 m 89 5 1 2 Prorosit del net raccomandate importante selezionare il net dell adattatore e della parte inferiore pi idoneo net sono disponibili con porosit da 10 12 23 e 54 um Net dimensionati con porosit correttoa per la specifica applicazione possono comportare problemi di retropressione
10. Togliere la sealing unit 30 e l O ring dell adattatore 33 34 Dopo aver tolto le viti 37 togliere il tubo esterno dell adattatore 36 il tubo interno dell adattatore 35 e la molla 38 dalla piastra dell adattatore 39 8 Il top plate assembly 24 26 29 e 32 pu essere smontato togliendo le viti 32 Con ci viene completata la procedura di smontaggio dell adattatore Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 25 3 26 Installazione e test di tenuta 3 1 Smontaggio e assemblaggio Assemblaggio dell adattatore Per assemblare l adattatore di una colonna BPG 300 fare riferimento alla Figura A 3 e procedere nel seguente modo 1 2 10 11 12 Posizionare l anello 25 nella piastra superiore 26 Usando le viti 32 fissare l adjuster nut 29 sul corpo del regolatore di altezza dell adattatore 24 attraverso la piastra superiore 26 in modo che il corpo del regolatore di altezza dell adattatore ruoti sugli anelli 25 Fare entrare la molla 38 il tubo interno dell adattatore 35 ed il tubo esterno dell adattatore 36 sulla piastra dell adattatore 39 Serrare il tubo esterno dell adattatore 36 sulla piastra dell adattatore 39 usando le viti 37 Fare entrare la sealing unit 30 sul tubo esterno dell adattatore 36 Ruotando in senso antiorario avvitare il top plate assembly 24 26 29 e 32 per ca 5 cm all interno del tubo esterno dell adattatore 36 Girare il seal adjuster 23 in
11. aree piatte dell asta per evitare che le aste si svitino Fig 3 4 Sequenza di rimozione e di serraggio dei dadi ATTENZIONE Quando la flangia viene rimossa il tubo della colonna non pi sostenuto Fare attenzione affinch il tubo della colonna non si rovesci perda l equilibrio 4 Togliere la flangia facendo attenzione 5 Usando una chiave regolabile svitare le aste di supporto 8 dall estremit 14 6 Sollevare il tubo di vetro 9 Riporre con cura il tubo di vetro su una superficie sicura Se l O ring rimasto attaccato al tubo di vetro o all estremit inferiore inumidire l O ring con etanolo al 20 e toglierlo 7 Conunachiaveasettore togliere i bulloni 21 e le rondelle 20 che fissano l estremit 14 al supporto 19 Separare l estremit dal supporto Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 23 3 24 Installazione e test di tenuta 3 1 Smontaggio e assemblaggio Assemblaggio Per assemblare una colonna BPG 300 fare riferimento alla Figura A 4 e procedere nel seguente modo Nota Inumidire il net con etanolo al 20 per eliminare l aria intrappolata 1 Facendo riferimento alla Figura 4 2 qui di seguito assicurare che i seguenti componenti siano posizionati correttamente sull estremit inferiore 14 Piastra di distribuzione 13 il lato profilato deve essere rivolto verso l estremit inferiore e il lato piatto deve essere rivolto verso il support net Support
12. la colonna pronta per lo stoccaggio Protocollo di stoccaggio a secco 1 Smontarelacolonna 2 Eseguire la normale manutenzione per esempio sostituire gli O ring ecc 3 Asciugare con cura tutte le parti della colonna 4 Montarela colonna Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Introduzione 1 5 Sigillare tutte le prese di ingresso e uscita come indicato nel protocollo di stoccaggio in soluzione acquosa 6 Avvolgere la colonna nella plastica protettiva per evitare l esposizione alla polvere e ad altri agenti contaminanti presenti nell aria 7 Conservare la colonna a temperatura ambiente controllata e in un luogo pulito e asciutto Nota Evitare lo stoccaggio in condizioni che potrebbero esporre la colonna a mutamenti drastici di temperatura 1 5 1 Pulizia dopo l uso con NaCl Se un processo prevede l uso di soluzioni di NaCl importante che la colonna sia sciacquata con cura per rimuovere ogni residuo di NaCl Si consiglia di sciacquare in un volume di acqua pari almeno a cinque volte quello della colonna L acqua a soluzione di risciacquo ideale per via delle propriet di solubilit di NaCl in acqua rispetto ad altre possibili soluzioni di risciacquo come le soluzioni di etanolo protocollo di risciacquo dovrebbe utilizzare un volume di acqua di almeno cinque volte superiore a quello della colonna per assicurare una rimozione ottimale dei residui di ioni cloro che nel tempo possono corrodere l acciaio inos
13. net 12 Net 10 11 O ring 6 7 Fig 3 5 Posizione dei componenti dell estremit inferiore per le colonne BPG 300 2 3 Fissare l estremit inferiore 14 al supporto 19 con bulloni 21 e rondelle 20 Prestando attenzione posizionare il tubo di vetro 9 sull O ring 6 7 nell estremit 14 Verificare che il tubo di vetro non sia in contatto con nessuna parte in acciaio inossidabile Allineare il tubo di vetro con il filter net del fondo 10 11 Avvitare le aste di supporto 8 sull estremit 14 Posizionare la flangia 5 in modo che le aste di supporto 8 entrino adeguata mente nei relativi fori Verificare che l O ring 6 7 sulla flangia sia allineato con il tubo di vetro Il tubo di vetro non deve essere in contatto con nessuna parte in acciaio inossidabile in caso contrario il tubo di vetro potrebbe rompersi Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 6 Allineare la superficie interna del tubo di vetro con la superficie interna della flangia AVVERTENZA Il tubo di vetro si romper se viene esercitata troppa forza nel serraggio dei quattro dadi sulle aste di supporto cio le aste che fissano la flangia e l estremit alla colonna di vetro Usare sempre la chiave tensiometrica quando si serrano questi dadi Fare riferimento alla Tabella 4 2 per le A N impostazioni tensiometriche Montare le rondelle 3 ed i dadi 2 sulle aste di supporto 8 e s
14. o perdite di fase stazionaria Le porosit consigliate dei net sono le seguenti Tabella 5 2 Porosit dei net consigliate per le colonne BPG Porosit dei net um Materiale Dimensione delle particelle um 10 PA 30 70 12 PEEK 30 70 23 PP3 FF media 54 PP3 BB media 1 Poliamide 2 Polieteretere chetone 3 Polipropilene 42 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 5 1 3 Determinazione della velocit di flusso di impaccaggio ottimale Per stabilire la velocit di flusso ottimale di impaccaggio per le colonne BPG procedere nel seguente modo PUNTO 1 27 Pompa Si Valvola Chiusa yY Fig 5 1 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 1 AVVERTENZA Tenere sempre i liquidi pericolosi in contenitori chiusi per evitare evaporazione e versamenti nell area di lavoro PUNTO 1 Inumidire con etanolo al 20 il net della colonna per eliminare l aria intrappolata Riempire la colonna con 10 15 cm di tampone di impaccaggio Svuotare i tubi per eliminare tutte le bollicine d aria Collegare un tubo al lato in aspirazione di una pompa panoa Avviare la pompa posizionare il tubo sul net della parte inferiore della colonna ed estrarre le eventuali bollicine d aria rimaste intrappolate nel net Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 43 5 Funzionamento 5 1 Impaccaggio della colonna 44 PUNTO 2
15. per volume 60 90 giorni 1 Acetato di etile 10 vedi nota 7 Acetone 25 vedi nota 7 Acetonitrile 5 vedi nota 2 Acetonitrile 50 vedi note 3 4 Acido acetico 10 OK Acido acetico 100 vedi note 3 4 Acido cloridrico 100 vedi nota 2 Acido nitrico 100 vedi nota 4 Acido trifluoroacetico 50 OK Alcol isopropilico 100 OK Cicloesano 100 vedi note 2 7 Cloruro di sodio 0 1M vedi note 6 7 Esano 100 vedi note 2 Etanolo 100 OK Glicerolo 0 1M vedi nota 7 Glicole etilenico 100 OK Idrossido di sodio 2M vedi nota 5 etanolo 2M OK n Propanolo 0 1 vedi note 7 8 Triton X 100 100 OK Tween Tri n butilfosfato 1 0 3 OK UREA 8M OK 1 Il test non comprende tubi in PVC La gomma EPDM subisce modifiche alle sue caratteristiche Per un impiego ripetuto e a lungo termine usare O ring e guarnizioni in FEP PFR PTFE 3 Passare a O ring e guarnizioni in FEP PFR PTFE 4 La resistenza del polipropilene buona 5 Pu essere utilizzato nelle normali condizioni di corsa cromatografica Non usare NaCl nelle soluzioni di stoccaggio Va notato che NaCl pu provocare corrosioni sull acciaio inossidabile in soluzioni acide pH sotto a 4 5 Nonoltrele4ore Non consigliato l uso con net in PA 8 FEP cambia le proprie caratteristiche Quindi usare gomma EPDM 4 3 1 Resistenza chimica al cloruro di sodio Le colonne BPG presentano di componenti di acciaio inossidabile a contatto con liquidi e devono dunque ricevere adeguata manutenzione
16. se esposte NaCl durante i processi cromatografici Se un processo prevede l uso di soluzioni di NaCl importante che la colonna sia sciacquata con cura per rimuovere ogni residuo di NaCl Si consiglia di sciacquare con un volume di acqua pari almeno a cinque volte quello della colonna L acqua la soluzione di risciacquo ideale per Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 35 4 La colonna BPG 4 4 Diagrammi pressione velocit di flusso 36 via delle propriet di solubilit di NaCl in acqua rispetto ad altre possibili soluzioni di risciacquo come le soluzioni di etanolo Il protocollo di risciacquo dovrebbe utilizzare un volume di acqua di almeno cinque volte superiore a quello della colonna per assicurare una rimozione ottimale dei residui di ioni cloro che nel tempo possono corrodere l acciaio inossidabile possibile mettere una soluzione tampone sopra l adattatore durante l imballag gio Quando l imballaggio terminato e l O ring sigillato importante che le soluzioni tampone contenenti ioni cloro vengano rimosse da tale spazio per evi tare la corrosione nel corso del tempo 4 4 Diagrammi pressione velocit di flusso In generale molto difficile produrre diagrammi pressione velocit di flusso in modo teorico pu accurati diagrammi pressione velocit di flusso si costruiscono in modo sperimentale La Figura 3 1 illustra la configurazione tipo utilizzata nei laboratori GE Healthcare per generare i di
17. senso orario sulla parte superiore dell adattatore fino a quando i fori nel tubo di regolazione interno 35 sono in linea con i fori del tubo esterno dell adattatore 36 Serrare con le dita le viti 31 nella met superiore della sealing unit 30 verificando che siano a livello e che siano allineate correttamente con i fori fino a quando sono ancora visibili 1 2 mm di filettatura della vite Infine serrare le viti con una chiave a settore Individuare la vite di fermo 28 ed il dado di fissaggio 27 sulla piastra superiore 26 Girare la vite di fermo fino a quando entra nella scanalatura del tubo esterno dell adattatore 36 impedendo cos il movimento laterale del tubo senza pregiudicarne il movimento verticale Bloccare la vite di fermo 28 in posizione con il dado di fissaggio 27 Montare l O ring dell adattatore 33 34 sulla piastra dell adattatore 39 Inumidire il net di filtro 41 42 con etanolo al 20 e togliere tutte le bollicine d aria intrappolate nel net di filtro Se il net di filtro troppo rigido riscaldarlo in acqua calda a 40 C Montare la piastra di distribuzione 13 il support net 40 e il filter net 41 42 sulla piastra dell adattatore 39 Con ci viene completata la procedura di assemblaggio dell adattatore della colonna BPG 300 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 Montaggio dell estensione estensione di impaccaggio L estens
18. 12 mm 8 0200 00 EPDM 5 6 Gasket 25 mm i d 10 mm 8 1012 40 PTFE 5 7 Connector 25 mm 10 mm PP 2 8 4 port 2 way manual valve 8 1012 56 316L PTFE 1 9 Stand complete 18 1012 38 316L 20 Washer 18 1012 61 316 6 21 Bolt M12 x 25 8 1012 65 316 6 22 Wheel 8 1001 09 1 23 Seal adjuster 8 1012 41 PEEK 1 24 Adaptor height adjuster 18 1128 31 316 1 25 Bushing ring 8 1012 42 POM 2 26 Adaptor top plate 18 1129 06 316L 27 Nut M10 8 1012 44 316 5 28 Stop screw complete 8 1012 43 316 POM 1 29 Adjuster nut insert 18 1012 45 PEEK 1 30 Sealing unit 18 1147 49 316L 31 Adaptor head screw M8 8 1012 46 316 3 32 Allen screw M8 x 60 8 1012 47 316 5 39 O ring 274 x 8 mm 8 1012 51 EPDM 2 34 O ring 274 x 8 mm 8 1012 52 FEP 1 35 Inner adaptor tube 18 1147 83 316 36 Outer adaptor tube 8 1142 93 316L 1 37 Screw M8 x 16 8 1145 10 316L PTFE 5 38 Spring 8 1012 50 316 PTFE 1 39 Adaptor plate 8 1112 82 S31803 1 40 Support net adaptor 18 1012 53 PP 2 41 Net 23 um adaptor 8 1012 54 PP 2 42 Net 10 um adaptor 8 1012 55 PA 2 Net 12 um adaptor 8 1148 43 PEEK 2 Net 54 um adaptor 8 1127 02 PP 2 43 Tubing PVC 44 Clamp 25 mm 8 1001 31 304 1 45 Wheel support 8 1033 33 POM 316 1 Vedi Tabella 3 4 nel BPG Maintenace Guide Tubo d i 10 mm Paragonabile a 316L Tabella A 3 Componenti delle colonne BPG 450 I numeri delle voci fanno riferimento alla figura A 5
19. 4 Ve Wh in cui Ve Volume di eluzione ml Wh Ampiezza del picco a met altezza ml Ve espresso come il volume passato attraverso la colonna dalla met dell applicazione del campione al massimo del picco Wh espressa come ampiezza a met altezza del picco dalla base verso l alto Dall esempio in Figura 5 13 il valore HETP pu essere calcolato dal cromatogramma nel seguente modo Tabella 5 3 Calcolo del valore HETP Ve ml W ml N N m cm HETP Acetone 18800 900 2417 4203 0 024 Colonne impaccate correttamente avranno valori HETP bassi Tuttavia possibile confrontare solo colonne che siano state impaccate con lo stesso tipo di fase stazionaria e che siano state testate nelle stesse identiche condizioni Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 Come regola generale un buon valore HETP approssimativamente da 2 a 4 volte il valore del diametro medio delle particelle della fase stazionaria che si sta utilizzando a condizione che il campione non interagisca con la fase stazionaria In pratica la correlazione fra il valore HETP e la prestazione della colonna pu essere valutata solo dalle specifiche interne del cliente Una volta che questa stabilita si potr definire uno standard in base al quale valutare l accettabilit dell impaccaggio di una colonna Per esempio l utilizzatore della colonna potrebbe riconoscere che una colonna impaccata con Sephadex G 25 Media
20. 6L 30 Adjustment tube 8 1109 55 316 31 nlet tube i d 12 mm 8 1109 53 316L X 32 O ring 12 3 x 2 4 8 1103 70 EPDM X 2 O ring 12 3 x 2 4 8 1117 65 FEP X 33 Screw M4 x 16 8 1109 56 316 2 34 Spring 8 1107 44 316 PTFE 35 Screw M5 x 10 8 1109 57 316 2 36 Snap plug 8 1107 45 PP X 2 38 Adaptor plate 8 1109 71 S31803 X 39 Screw M8 x 25 8 1145 12 316L PTFE 3 40 O ring 419 x 10 8 1017 47 EPDM X O ring 419 x 10 8 1117 66 FEP X 41 Distributor plate 8 1106 04 PP X 2 Paragonabile a 316L continua nella prossima pagina Componenti delle colonne BPG 450 continua Parte Descrizione Numero di codice Materiale A contatto con i liquidi Quantit n di processo confezione 42 Adaptor support net 8 1104 34 PP 43 Net 54 um adaptor 8 1127 04 PP Net 23 um adaptor 8 1001 62 PP Net 10 um adaptor 8 1017 46 PA Net 12 um adaptor 8 1148 45 PEEK 44 Screw M10 x 80 8 1109 59 316 2 45 Screw M10 x 16 8 1109 60 316 2 46 Bracket 8 1109 61 316 47 Screw M5 x 16 8 1109 62 316 2 48 Bottom inlet tube 8 1109 63 316L 50 Allen screw M10 x 40 8 1109 65 316 2 51 Leg 8 1109 66 316 52 Wheel support 8 1107 46 POM 316 53 Wheel 8 1177 75 Eye bolt 8 1109 64 54 Adaptor stopper 8 1115 18 316 Indice A assemblaggio colonne 100 140 e 200 17 colonne 300 22 colonne 450 27 assemblaggio dell adattatore colonne 100 140 e 200 20 colonne 300 26 colonne 450
21. 70 AC AVVERTENZA Fare molta attenzione quando si sposta la colonna per evitare che possa rovesciarsi ATTENZIONE Verificare che tutta l acqua usata nella colonna sia priva di particelle poich queste possono bloccare e danneggiare i net Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Sommario Precauzioni di SICUFEZZA rrrrrrerrreerereceeezeonene 5 I introduzione duri 9 1 1 Informazioni generali 9 1 2 Etichettatura della colonna uiiiii 10 1 3 SICUDEZZO epn A ie N 11 1 3 1 Informazioni generali nani aan 11 1 3 2 AVVENENZa LL 1 3 3 Note di Attenzione ss 11 13 4 Noten irallal 11 1 3 5 Resistenza ChIMICA nniiiiiiiii 11 1 3 6 Utilizzo in atmosfera potenzialmente esplosiva 11 L4 Operatori GUtOrzzati elia 12 1 5 Stoccaggio di colonne BPG impaccate con fasi stazionarie 12 1 5 1 Pulizia dopo l uso CON NaCl iiiii 13 16 RICICIA gIO e SMALTIMENTO nenni 13 1 6 1 Materiali e Sostanze ili aio 13 1 6 2 Colonne BR ila Aulla li 14 1 7 SCOpo di QUESto MAnuUAl sssasissisiiisisiiiiiiseeiiiiii 14 2 Disimballaggio della colonna s sssssssssssessessessessseseessessess 15 2 1 Code numbers for column tubes and stands 15 22 Supplied Components venier annta 16 3 Installazione e test di tenuta s nessesossossssessessssessesesesse
22. Appendice illustrano i componenti delle colonne e identificano i materiali di costruzione sia delle parti a contatto con i liquidi che non 4 3 Resistenza chimica La Tabella 3 3 costituisce una guida per la resistanza ai solventi dei materiali usati sulle colonne BPG Le informazioni sono state redatte sulla base di informazioni pubblicate da varie fonti non da test singoli condotti sui componenti della colonna L operatore dovr pertanto usare questo elenco solo come una guida al livello di resistenza chimica fornito da ogni materiale Va notato che gli effetti di una sostanza chimica saranno pi gravi a temperature e pressioni pi elevate e che non sono stati presi in considerazione gli effetti combinati In generale sulle colonne BPG va evitato l uso delle seguenti sostanze chimiche e Ossidantiestremi come i perossidi e Compostialogenati e Solventi clorati come ad esempio il cloruro di metilene e Esteri comegliacetati e Idrocarburi aromatici come toluene e Elevate concentrazioni di acidi forti e Cloroformio e THF e Toluene e Cloruro di metilene Nota Evitare sale in combinazione con un pH inferiore a 4 Lavare sempre la colonna con almeno due volumi di colonna di soluzione a pH neutro fra l impiego di un sale e di tamponi a basso pH Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC La colonna BPG 4 Tabella 4 3 Tabella della resistenza chimica dei materiali nelle Sostanza Concentrazione
23. EEK 8 1109 27 8 1109 27 18 1109 27 18 Domed nut 316 4 8 1143 25 8 1113 27 18 1113 27 9 Adjuster nut body 316 1 0003 0 18 1113 26 18 1113 26 20 Bushing ring POM 2 8 0264 0 8 0267 0 18 0267 0 21 Top plate 316 8 1143 24 8 1113 24 22 Adjuster nut insert PEEK 18 0251 20 8 0252 20 18 0252 20 23 Allen screw M8 x 45 316 5 9 6375 0 9 6375 01 19 6375 0 24 Allen screw M4 x 14 316 5 9 6356 0 9 6356 0 19 6356 0 25 Stopper 316 8 1113 25 18 1113 25 26 Adaptor head screw 316 3 8 8457 0 18 8457 01 18 8457 0 27 Sealing unit 316L 8 1147 47 8 1113 31 8 1147 48 28 Adaptor O ring EPDM 2 8 8475 0 8 1113 10 8 0275 0 29 Adaptor O ring FEP 8 0019 40 8 1113 11 8 0019 50 30 Inner adaptor tube 316 8 1113 23 8 1113 23 18 1113 23 31 Outer adaptor tube 316 8 1134 83 8 1134 83 18 1134 83 32 Screw M6 x 12 316L PTFE 3 8 1145 08 8 1145 08 18 1145 08 33 Spring 316 PTFE 8 8491 01 8 8491 01 18 8491 01 34 Adaptor plate S31803 18 1112 80 8 1113 30 18 1112 81 35 Support net adaptor PP 2 18 1103 04 8 1112 99 18 0252 56 36 Net 54 um adaptor PP 2 8 1126 96 8 1126 98 18 1127 00 Net 23 um adaptor PP 2 8 1103 08 8 1113 01 18 9253 01 Net 10 um adaptor PA 2 8 1103 05 8 1113 03 18 0252 76 Net 12 um adaptor PEEK 2 8 1148 37 8 1148 39 18 1148 41 SY Gasket 25 mm EPDM 2 8 0019 27 8 0019 27 18 0019 27 38 Feet stand 316 1 8 1126 93 18 1126 93 18 1126 93 39 Wheel 3 8 1001 09 8 1001 09 18 1001 09 40 4 port 2 way valve 316L PTFE 1 8 5757 01 18 5757 01 8 5757 01
24. GE Healthcare Colonne BPG Istruzioni per l uso Informazioni importanti per l utilizzatore Per un corretto e sicuro impiego delle colonne BPG gli utilizzatori devono leggere con attenzione e completa mente il presente manuale AVVERTENZA Il segnale AVVERTENZA mette in evidenza le istruzioni da seguire per evitare danni alla persona E importante non procedere all uso finch tutte le condizioni riportate non sono state comprese e applicate ATTENZIONE Il segnale ATTENZIONE mette in evidenza le istruzioni da seguire per evitare danni al prodotto o ad altre apparec chiature importante non procedere all uso finch tutte le condizioni riportate non sono state comprese e appli cate Nota Il segnale NOTA usato per indicare informazioni impor tanti per un uso del prodotto ottimale e senza inconveni enti Certificazione CE Questo prodotto conforme a tutti i requisiti delle Direttive CE applicabili Su richiesta possibile ricevere una copia della dichiarazione di conformit corrispondente Il simbolo CE e la corrispondente dichiarazione di conformit sono validi per lo strumento quando viene usato da solo oppure collegato ad altri strumenti Amersham Biosciences marcati CE oppure collegato ad altri prodotti raccomandati o descritti in questo manuale e viene usato nelle stesse condizioni in cui stato consegnato da GE Healthcare con l eccezione delle modifiche desc
25. PG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 3 Installazione e test di tenuta Tutte le colonne BPG dispongono di raccordi sanitari a morsetto come connettori ATTENZIONE Si possono usare solo manicotti e morsetti approvati per la massima pressione della colonna e resistenti alle sostanze chimiche previste ATTENZIONE Installare la colonna lontano da aree di passaggio per evitare che venga spostata o urtata accidentalmente Fare attenzione a non calpestare o inciampare su tubi flessibili posti sul pavimento 3 1 Smontaggio e assemblaggio Smontare e assemblare le colonne e gli adattatori attenendosi alle istruzioni riportate nelle sezioni seguenti Per l identificazione delle parti fare riferimento alle Tabelle A1 A3 e alle figure A1 AS tabelle e figure si trovano nella parte finale di questo manuale numeri riportati tra parentesi delle sezioni seguenti fanno riferimento a numeri che identificano i componenti come indicato nelle figure e nelle tabelle che si trovano in fondo al presente manuale AVVERTENZA Dopo l assemblaggio della colonna verificare che la colonna sia A N ben serrata e che non vi siano perdite 3 1 1 BPG 100 140 e 200 Assemblaggio Per smontare le colonne BPG 100 140 e 200 fare riferimento alla Tabella A 1 e alle Figure A 1 e A 2 sul retro di questo manuale e procedere nel seguente modo Togliere i dadi 18 e le rondelle 14 che fissano l adattato
26. a Figura A 1 e procedere nel seguente modo 1 Togliere il filter net 36 piegandolo prestando particolare attenzione Togliere il support net 35 Fare attenzione a non graffiare l adattatore in quanto ci potrebbe causare delle perdite 2 Togliere lo stopper 25 dalla piastra superiore 21 togliendo i bulloni 24 3 Rilasciare la sealing unit 27 ed il tubo interno dell adattatore 30 svitando i bulloni 26 posti sull anello superiore della sealing unit 4 Rimuovere la manopola di regolazione 17 prestando attenzione Ci consente di liberare la tensione sulla molla 33 situata sotto al tubo interno dell adattatore 30 5 Rimuovere il top plate assembly 19 23 e separarlo dall adattatore esterno 31 girandolo in senso orario 6 Togliere la sealing unit 27 e l O ring dell adattatore 28 29 7 Dopo aver tolto le viti 32 togliere il tubo esterno dell adattatore 31 il tubo interno dell adattatore 30 e la molla 33 8 Il top plate assembly 19 23 pu essere smontato togliendo le viti 23 Con ci viene completata la procedura di smontaggio dell adattatore Assemblaggio dell adattatore Per assemblare l adattatore sulle colonne BPG 100 140 e 200 fare riferimento alla Figura A 1 e alla Tabella 4 1 per le impostazioni della chiave tensiometrica e procedere nel seguente modo 1 Posizionare l anello 20 nell apposito alloggiamento della piastra superiore 21 2 Usando le viti 23 fissare l ins
27. a colonna 50 PUNTO 1 Confermare che stata definita la velocit di flusso ottimale relativa alla combinazione di attrezzatura colonna tipo e quantit di fase stazionaria fare riferimento alla sezione 5 1 3 PUNTO 2 Controllare che sia disponibile sufficiente tampone d impaccaggio Un tampone d impaccaggio tipico costitutito da NaCl 0 1 M Tuttavia controllare sempre le istruzioni della fase stazionaria per i tamponi d impaccaggio PUNTO 3 Inumidire i net con etanolo al 20 per eliminare eventuale aria intrappolata nei net PUNTO 4 Regolare la velocit di flusso della pompa alla velocit di flusso d impaccaggio senza collegare la colonna alla pompa Registrare la velocit della pompa per avviare l impaccaggio alla velocit di flusso corretta PUNTO 5 Se la fase stazionaria gi nella colonna sollevare l adattatore con cura miscelare la fase stazionaria e ripetere i punti 5 e 6 della sezione 5 1 3 Se la fase stazionaria non nella colonna ripetere i punti 1 6 della sezione 5 1 3 PUNTO 6 x Valvola di sicurezza Pompa i d Manometro gt lt Valvola Fig 5 9 Metodo di impaccaggio della colonna punto 6 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 PUNTO 6 Avviare la pompa Togliere le bollicine d aria nel tubo dalla pompa pompando ad una bassa velocit di flusso c Pompando ad una bassa velocit di fl
28. agrammi pressione velocit di flusso O m gt Al cilindro Manometro graduato o flussimetro Valvola di sicurezza peo Oa Pompa Contenitore del tampone Nota 1 La massima lunghezza ammissibile del tubo che collega il manometro all ingresso di 1 5 m 2 Il diametro del tubo 10 mm Fig 4 1 Tipica impostazione per determinare i diagrammi pressione velocit di flusso Nota La colonna contiene solo tampone Il flusso in uscita deve essere allo stesso livello del manometro Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC La colonna BPG 4 4 4 1 Diagrammi pressione velocit di flusso per colonne vuote Le Figura 3 2 e 3 3 illustrano i diagrammi pressione velocit di flusso delle colonne BPG vuote ottenute usando il metodo fornito nella sezione Determinazione della velocit di flusso di impaccaggio ottimale Pagina 43 di questo manuale e la configurazione mostrata sopra 3500 BPG 100 3000 2500 BPG 140 2000 1500 Velocit di flusso cm h 1000 BPG 200 500 O 02 04 06 08 1 12 14 16 18 2 22 24 26 28 3 Pressione in bar Fig 4 2 Esempi di diagrammi pressione velocit di flusso di colonne BPG 100 140 e 200 vuote Velocit di flusso cm h 1009 BPG 300 800 BPG 450 600 400 200 0 0 05 0 1 0 15 0 2 0 25 0 3 0 35 0 4 0 45 0 5 Pressione in bar Fig 4 3 Diagrammi pressione velocit di flusso di colonne BPG 300 e 450 vu
29. assicurare un uso ottimale del prodotto 1 3 5 Resistenza chimica Le specifiche con i valori di resistenza chimica sono presentate nel Capitolo 3 di queste istruzioni per l Uso 1 3 6 Utilizzo in atmosfera potenzialmente esplosiva Le colonne BPG non contengono nessun circuito elettrico Tuttavia attenersi sempre alle seguenti precauzioni d uso e Per evitare scariche da elettricit statica mettere la colonna a terra Usare un filo di messa a terra connesso alla rete di messa a terra dell impianto disponibile come accessorio un kit per la messa a terra Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 11 1 Introduzione 14 Operatori autorizzati 12 e Durantele procedure di funzionamento e di manutenzione usare solo strumenti destinati all uso in atmosfere potenzialmente deflagranti e Usare sempre indumenti idonei durante le attivit lavorative in atmosfere potenzialmente deflagranti Marchio EX Il codice EX sull etichetta di identificazione consente di definire il livello di protezione antiesplosione dello strumento La categoria EX dello strumento deve essere conforme al livello di protezione del locale in cui viene utilizzato Ex II3G La strumentazione appartenente a questa categoria progettata in modo da poter funzionare conformemente ai parametri operativi stabiliti dal produttore e di ga rantire un livello di protezione normale La strumentazione appartenente a questa categoria destinata all uso in aree in
30. ato dell adattatore Inumidire l O ring con acqua o soluzione di etanolo al 20 NON mettere grasso sull O ring 2 Abbassare l adattatore di alcuni millimetri per allontanare l O ring dalla parete di vetro Quindi rialzarlo fino a dove possibile 3 Togliere bulloni 26 e rondelle 27 Allentare il coperchio 17 e sollevare l adattatore Nota L adattatore delle colonne BPG 450 pesante Per motivi di sicurezza si raccomanda di sollevare l adattatore con un argano da soffitto attaccato ai bulloni ad occhiello posti sul coperchio della colonna 1 Allentareibulloni 44 per separare il tubo della colonna 12 incluse le flange 3 dall estrenit 1 Sollevare con cura il tubo della colonna Se l O ring rimasto attaccato al tubo di vetro o all estremit inumidire l O ring con etanolo al 20 e toglierlo Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 27 3 Installazione e test di tenuta 3 1 Smontaggio e assemblaggio 28 2 Per sostituire gli O ring della flangia superiore e inferiore allentare le viti 7 e sollevare con cura la flangia superiore Togliere il tubo di vetro e sostituire l O ring del fondo Rimettere al suo posto il tubo di vetro ed inserire il nuovo O ring superiore Infine posizionare la flangia superiore Fare attenzione ad allineare con cura il tubo di vetro con le flangie Con ci viene completata la procedura di smontaggio dell adattatore Assemblaggio della colonna Per assemblare una colo
31. consentire l introduzione di materiali contaminanti inoltre un vantaggio se lo stesso metodo potr essere usato per monitorare le prestazioni della colonna durante il suo ciclo di vita in modo che sia facile determinare il momento in cui reimpaccare o sostituire la fase stazionaria metodi che utilizzano composti colorati come ad esempio Blue Dextran vanno evitati poich non soddisfano i criteri di cui sopra e non possono essere usati con le fasi stazionarie per cromatografia a scambio ionico o di affinit L esperienza ha dimostrato che il migliore metodo per esprimere l efficienza di una colonna in termini di altezza equivalente ad un piatto teorico HETP e di fattore di asimmetria del picco A Questi valori possono essere facilmente determinati applicando alla colonna un campione di soluzione di NaCl o di acetone importante che la colonna sia adeguatamente equilibrata prima che l impaccaggio sia valutato 2 volumi di colonna preferibile ripetere per 3 volte il test in modo da verificare la stabilit dei risultati Se un risultato insufficiente migliora durante l esecuzione di questo test il motivo potrebbe essere una scarsa equilibrazione della colonna Per controllare che il letto sia stabile operare la colonna al 70 della pressione di impaccaggio per 20 ore e testarla di nuovo preferibilmente con tre sedute di test Da notare che i picchi di pressione producono un impaccaggio di scarsa qualit cracking
32. cui molto improbabile la generazione di atmosfere deflagranti a causa di gas vapori o aerosol o se ci si verificasse ci avverrebbe solo raramente ed esclusivamente per brevi periodi di tempo 14 Operatori autorizzati La colonna BPG uno strumento che pu essere comparato ad un contenitore a pressione a volume variabile Gli operatori devono avere esperienza di lavoro con i contenitori a pressione e con pure con attrezzature atte a generare sostanze sotto pressione per il controllo dell impaccaggio mediante compressione assiale Per poter utilizzare correttamente e con sicurezza la colonna l operatore dovr aver letto compreso ed aver familiarizzato completamente con le Istruzioni per l uso in generale e con le istruzioni di sicurezza in particolare Una messa in funzione non corretta della colonna pu comportare danni alla propriet e lesioni personali 1 5 Stoccaggio di colonne BPG impaccate con fasi stazi onarie Le colonne BPG impaccate con fasi stazionarie vanno conservate nella soluzione batteriostatica consigliata per la sostanza Prima di applicare la soluzione batteriostatica importante che la colonna sia pulita per esempio con 0 5M NaOH o altra soluzione CIP consigliata per la sostanza inoltre importante sciacquare la colonna per eliminare tutti gli ioni cloro utilizzando acqua pura dopo la CIP con un volume pari almeno a cinque volte quello della colonna Applicare la soluzione batteriostatica dopodich
33. cura il tubo di vetro su una superficie sicura Se l O ring rimasto attaccato al tubo di vetro o all estremit inumidire l O ring con etanolo al 20 e toglierlo 7 Con una chiave togliere i bulloni 13 e le rondelle 14 che fissano l estremit 12 al supporto 15 Separare l estremit dal supporto Assemblaggio Per assemblare le colonne BPG 100 140 e 200 fare riferimento alla Tabella A 1 e alla Figura A 2 sul retro di questo manuale Procedere nel seguente modo Nota Inumidire il net con etanolo al 20 per eliminare l aria intrappolata Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 1 Facendo riferimento alla Figura 4 2 qui di seguito assicurare che le seguenti voci siano posizionate correttamente sull estremit inferiore 12 e Support net 5 e Filter net 4 e anello guida in PTFE 3 e O ring 6 7 _ 6 7 Fig 3 2 Posizione dei componenti sull estremit inferiore sulle colonne BPG 100 140 e 200 Fissare l estremit inferiore 12 al supporto 15 con bulloni 13 e rondelle 14 3 Con cura posizionare il tubo di vetro 1 sull O ring 6 7 sull estremit inferiore 12 Assicurare che il tubo di vetro non sia in contatto con nessuna parte in acciaio inossidabile Allineare il tubo con il filter net 4 Avvitare le aste di supporto 2 sull estremit 12 5 Posizionare la flangia 10 in modo che le aste di supporto 2 entrino adeguatamente nei relativi
34. do rimasto non aprire l O ring dell adattatore Usare invece la manopola del regolatore di altezza per avvitare l adattatore in modo che si abbassi dell ultimo centimetro rimasto Ora abbassare l adattatore per un massimo di 5 mm nel letto Scollegare il tubo sulla parte superiore della colonna in modo che il tampone in eccesso venga eliminato attraverso la parte superiore dell adattatore Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 53 5 Funzionamento 5 2 Valutazione della colonna 54 Con ci si conclude la procedura d impaccaggio della colonna Lavare qualsiasi traccia di tampone o di sospensione di resina rimasti sulla parte superiore dell adattatore Lo spazio fra la testa dell adattatore e la parte superiore della colonna deve essere asciutto e pulito o riempito con soluzione di etanolo al 20 per impedire crescita batterica Nota Prima di usare la colonna verificare sempre le prestazioni della colonna impaccata Fare riferimento alle istruzioni per questa procedura nella seguente sezione 5 2 5 2 Valutazione della colonna L efficienza di una colonna dipende da come stata impaccata Una colonna con un impaccaggio di qualit insufficiente d origine ad un flusso disomogeneo con conseguente ampliamento del picco e riduzione della risoluzione quindi importante avere un metodo in base al quale la colonna possa essere testata prima che sia messa in funzione Il metodo dovr essere semplice quantitativo e non dovr
35. dopo un certo numero di corse Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 57 5 Funzionamento 5 2 Valutazione della colonna 58 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Abbreviazioni 6 6 Abbreviazioni Le abbreviazioni usate in questo manuale sono definite come segue As Fattore di asimmetria del picco CIP Cleaning in place EPDM Etilene propilene FEP Fluroetenpropene FF Fast Flow HETP Height equivalent to a theoretical plate altezza equivalente ad un piatto teorico HR High resolution alta risoluzione ID nternal diameter diametro interno IEX on exchange chromatography cromatografia a scambio ionico L Altezza del letto N umero di piatti teorici PA Poliamide PEEK Polietereterchetone POM Plastica acetale PP Polipropilene PTFE Politetrafluoroetene PVC Polivinilcloruro THF Tetraidrofurano UV Ultravioletto Ve Volume di eluzione Wh Ampiezza del picco a met altezza del picco PFR Gomma perfluorica FPM Gomma fluorcarbone Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 59 6 Abbreviazioni 60 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Tabella A 1 Componenti delle colonne BPG 100 140 e 200 numeri delle voci fanno riferimento alle Figure A 1 e A 2 Parte Descriz
36. e e Materiali di compostaggio tutti i materiali sostanze che possono essere successivamente trasformati in terreno e Materiali in deposito una piccola quantit di materiali e sostanze non idonee al riclicaggio vanno messe in deposito Le informazioni sulle localit per il deposito vengono fornite dalle autorit locali 1 6 2 Colonne BPG Prima dello smaltimento dell attrezzatura della colonna ricordarsi di e Svuotare pulire e sterilizzare la colonna e Per metalli non infiammabili come acciaio inossidabile rivolgersi ad una ditta per il recupero dei materiali ferrosi 1 7 Scopo di questo manuale Questo manuale inteso come una introduzione generale ed una guida al funzionamento della colonna In particolare il manuale tratter dei seguenti argomenti e Introduzione Capitolo 1 e Disimballaggio della colonna Capitolo 2 e La colonna BPG Capitolo 3 e Installazione e test di tenuta Capitolo 4 e Funzionamento Capitolo 5 e Abbreviazioni Capitolo 6 Il manuale accluso Guida alla manutenzione delle colonne BPG tratta dei seguenti argomenti e Manutenzione e assistenza Capitolo 1 e Guida all individuazione dei guasti Capitolo 2 e Informazioni per l ordine Capitolo 3 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 2 Disimballaggio della colonna Disimballaggio della colonna 2 Disimballare con cura lo strumento e controllare se vi sono segni di danni eventualmente causati dal trasporto
37. e con valori di HETP oltre 0 05 cm non capace di garantire la separazione necessaria Conseguentemente l utilizzatore della colonna imposter questo valore su quello massimo ammesso cio al minimo livello di qualit accettabile 5 2 3 Calcolo del fattore di asimmetria del picco La forma del picco deve essere il pi possibile simmetrica In genere questo vale per la fase stazionaria di gel filtrazione ma per certi scambi ionici e fasi stazionarie di affinit la forma potrebbe risultare asimmetrica a causa dell interazione con la fase stazionaria Un cambio nella forma del picco in genere la prima indicazione di deteriora mento della colonna Il fattore di asimmetria del picco deve essere il pi possibile vicino a 1 Il fattore di asimmetria del picco A calcolato dal grafico in Figura 5 13 nel seguente modo A b a in cui a distanza fra l apice del picco fino al 10 dell altezza del picco sul lato ascendente del picco stesso b distanza fra l apice del picco fino al 10 dell altezza del picco sul lato discendente del picco stesso Nota La misura dei valori HETP e A il metodo migliore per valutare la condizione della colonna impaccata Una colonna impaccata pu avere un buon aspetto ma nonostante ci potrebbe essere necessario un reimpaccaggio per garantire una prestazione ottimale Per assicurare una prestazione ottimale della colonna controllare sempre la colonna dopo l impaccaggio e in modo regolare
38. elocit di flusso D D S o S E 3 3 E a ks E v v c c Q o f 7 g E a a 70 100 Pressione Fig 5 8 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 8 PUNTO 8 a Costruire un diagramma della pressione rispetto alla velocit di flusso come illustrato sopra La velocit di fusso d impaccaggio ottimale circa il 70 della velocit di flusso massima Per alcune fasi stazionarie molto rigide non vi sar plateau in questi casi usare la velocit di flusso alla pressione massima per la colonna 5 14 Velocit di flusso raccomandate per le fasi stazionarie GE Healthcare Le velocit di flusso d impaccaggio raccomandate si trovano sulle istruzioni allegate alla confezione della fase stazionaria Tuttavia per un impaccaggio ottimale si raccomanda di eseguire la determinazione del diagramma pressione velocit di flusso per ogni lotto di fase stazionaria colonna o configurazione di sistema come descritto in 5 1 3 5 1 5 Metodo di impaccaggio della colonna Questo metodo d impaccaggio pu essere usato con i BioProcess Media ed basato su una velocit di flusso costante applicata alla colonna Per la preparazione della procedura d impaccaggio attenersi alla seguente procedura AVVERTENZA Usare sempre una valvola di sicurezza collegata direttamente a valle della pompa Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 49 5 Funzionamento 5 1 Impaccaggio dell
39. ento 5 5 Funzionamento AVVERTENZA Manipolare la colonna con cura perch le specifiche di pressione sono valide solo se il tubo di vetro non danneggiato ed privo di scalfiture Non immettere mai aria o gas nella colonna Nota Prima di procedere all impaccaggio della colonna per la prima volta lavare la colonna ed i tubi con soluzione CIP ad es con NaOH per assicurare che tutte le superfici siano pulite Fare riferimento alla sezione 1 3 della Guida di Manutenzione della colonna BPG Per ottenere prestazioni ottimali dalle colonne BPG raccomandiamo di utilizzare il protocollo di impaccaggio descritto nel paragrafo sottostante Prima di utilizzare la colonna si raccomanda di leggere l intero capitolo 5 1 Impaccaggio della colonna Vi sono vari metodi di impaccaggio da utilizzare in funzione della colonna e del tipo di fase stazionaria da impaccare Per le colonne BPG si raccomanda il metodo di impaccaggio descritto nella sottosezione 5 1 5 La velocit di flusso ottimale di impaccaggio dipende dalla temperatura dal tipo di fase stazionaria lotto e quantit Di conseguenza per ogni singola combinazione la velocit di flusso ottimale deve essere determinata empiricamente tracciando una diagramma pressione velocit di flusso metodi consigliati sono descritti in dettaglio nelle sezioni 5 1 3 e 5 1 5 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 41 5 Funzionamento 5 1 Impaccaggio della colonna 5 1 1
40. errarle con le dita Impostare la chiave tensiometrica in base ai valori della seguente Tabella 4 2 e stringere i dadi 2 nella seugenza illustrata in Figura 4 4 Stringere i dadi gradualmente per evitare una pressione non omogenea sul tubo di vetro Si consigliano 3 4 giri per dado Tabella 3 2 Impostazioni della chiave tensiometrica delle colonne BPG 300 Parte Fare riferimento alla Figura A 4 Impostazioni della per la posizione chiave tensiometrica Dadi dell asta 2 6 Nm Dadi del morsetto della piastra superiore 4 6 5 Nm La colonna ora pronta per l uso e si potr inserire l adattatore Smontaggio dell adattatore Per smontare l adattatore di una colonna BPG 300 fare riferimento alla Figura A 3 e procedere nel seguente modo 1 Individuare la piccola apertura sulla base dell anello del net di filtro Togliere il net di filtro 41 42 inserendo una spatola o una lama in acciaio inox nell apertura Togliere il support net 40 2 Togliere la vite di fermo 28 ed il dado di fissaggio 27 dalla piastra superiore 26 3 Rilasciare la sealing unit 30 ed il tubo interno dell adattatore 35 svitando i bulloni 31 sull anello superiore della sealing unit 4 Togliere delicatamente il seal adjuster 23 liberando cos la tensione sulla molla 38 situata sotto al tubo interno dell adattatore 35 5 Togliere iltop plate assembly 24 26 29 e 32 e separarlo dall adattatore esterno 36 girandolo in senso orario
41. erto dell adjuster nut 22 sul corpo dell adjuster nut 19 attraverso la piastra superiore 21 in modo che il corpo dell adjuster nut giri sull anello 20 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 3 Fare entrare la molla 33 il tubo interno dell adattatore 30 ed il tubo esterno dell adattatore 31 sulla piastra dell adattatore 34 4 Serrare il tubo esterno dell adattatore 31 sulla piastra dell adattatore 34 usando le viti 32 Fare entrare la sealing unit 27 sul tubo dell adattatore 31 In senso antiorario avvitare il top plate assembly 19 23 per 5 cm sul tubo esterno dell adattatore 31 7 Girare la manopola di regolazione 17 in senso orario sulla parte superiore dell adattatore fino a quando i fori nel tubo di regolazione interno 30 sono a livello con i fori del tubo esterno dell adattatore 31 8 Serrareconle dita le viti 26 nella met superiore della sealing unit 27 verificando che siano a livello e che siano allineate correttamente con i fori fino a quando sono ancora visibili 1 2 mm di filettatura della vite Infine serrare le viti con una chiave a settore 9 Montare lo stopper 25 sulla piastra 21 con le viti 24 10 Montare l O ring 28 29 sulla piastra dell adattatore 34 11 Inumidire il filter net 36 con etanolo al 20 Montare il support net 35 e il filter net 36 sulla piastra dell adattatore 34 Potrebbe essere di aiuto riscaldare il
42. filter net in acqua per facilitarne il montaggio sull adattatore Con ci viene completata la procedura di assemblaggio dell adattatore Montaggio dell estensione estensione di impaccaggio L estensione gi montata alla consegna Lo smontaggio assemblaggio dell estensione viene eseguito allo stesso modo della colonna con l eccezione delle indicazioni per il supporto Per montare un estensione sulle colonne BPG 100 140 e 200 procedere nel seguente modo 1 Togliere l adattatore dalla colonna e posizionare l estensione sulla flangia superiore 10 in modo che le aste della colonna entrino nei foris presenti sulla flangia Figura 4 3 qui sotto sull estensione Verificare che l O ring sia posizionato correttamente sulla flangia Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 21 3 Installazione e test di tenuta 3 1 Smontaggio e assemblaggio j N Fig 3 3 Posizione dei componenti del estensione di impaccaggio a V 2 Usare le rondelle e i dadi a cupola del coperchio della colonna adattatore per fissare l estensione alla colonna La colonna con l estensione ora pronta per la prima delle due fasi previste per la procedura di impaccaggio bulloni e le rondelle fornite con l estensione vengono usati per fissare l adattatore sull estensione stessa Nota Non impaccare la colonna con altezze di letto superiori alla lunghezza della colonna ovvero l adattatore deve fare tenuta contro la parete del
43. fori Verificare che l O ring 6 7 sulla flangia sia allineato con il tubo di vetro Il tubo di vetro non deve essere in contatto con nessuna parte in acciaio inossidabile in caso contrario il tubo di vetro potrebbe rompersi 6 Allineare la superficie interna del tubo di vetro con la superficie interna della flangia Montare le rondelle 9 ed i dadi 8 sulle aste di supporto 2 e serrarle a mano 8 Impostare la chiave tensiometrica sulle specifiche come dalla seguente Tabella 4 1 e serrare i dadi 8 e le rondelle 9 che fissano le aste di supporto 2 sulla flangia 10 Attenersi alla sequenza illustrata in Figura 4 1 cio stringere i dadi con sequenza diametralmente opposta Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 19 3 20 Installazione e test di tenuta 3 1 Smontaggio e assemblaggio A AVVERTENZA Il tubo di vetro si romper se viene esercitata troppa forza nel serraggio dei quattro dadi sulle aste di supporto cio le aste che fissano la flangia e l estremit inferiore alla colonna di vetro Usare sempre la chiave tensiometrica quando si serrano questi dadi Tabella 3 1 Impostazioni della chiave tensiometrica delle colonne BPG 100 140 e 200 Colonna BPG 100 140 200 Momento Nm 4 5 5 9 Lacolonnaora pronta per l uso e si potr inserire l adattatore Smontaggio dell adattatore Per smontare l adattatore sulle colonne BPG 100 140 e 200 fare riferimento alla Tabella A 1 e all
44. i protocolli di assemblaggio e di impaccaggio delle colonne con i BioProcess Media Una sezione speciale della Guida alla manutenzione delle colonne BPG Capitolo 1 viene dedicata ai protocolli di manutenzione applicabili alle specifiche esigenze di processo Le tre parti principali di cui costituita la colonna adattatore componenti della colonna e supporto sono mostrati nei disegni esplosi alla fine di questo manuale I componenti di base della colonna sono e Tubo di vetro e Flangia e O ring e Filter net e Support net e Estremit inferiore e Aste Le aste mantengono unita la flangia e l estremit inferiore al tubo di vetro che viene sigillato con gli O ring Gli O ring isolano in modo efficace il tubo di vetro da un contatto diretto con i componenti in acciaio inossidabile La piastra superiore dell adattatore ed il dado regolatore sono serrati o imbullonati sulla flangia della Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 9 1 Introduzione 1 2 Etichettatura della colonna 10 colonna Il dado regolatore pu ruotare su un anello a boccola posto sulla piastra superiore modificando l altezza della piastra dell adattatore sul tubo della colonna L O ring dell adattatore forma una tenuta fra l adattatore e la colonna di vetro quando viene compresso dal dispositivo di tenuta che controllato dalla manopola di regolazione della tenuta Il supporto serrato all estremit inferiore della colonna ed dotato di ruo
45. ione gi montata alla consegna Lo smontaggio assemblaggio dell estensione viene eseguito allo stesso modo della colonna con l eccezione delle indicazioni per il supporto Per assemblare un estensione di una colonna BPG 300 fare riferimento alla Figura A 4 e procedere nel seguente modo 1 Togliere l adattatore dalla colonna e posizionare l estensione sulla flangia superiore 5 Verificare che l O ring sia posizionato correttamente sulla flangia 2 Usare il morsetto della piastra superiore per serrare l estensione sulla colonna La colonna con l estensione ora pronta per la prima delle due fasi previste per la procedura di impaccaggio Il morsetto fornito con l estensione viene usato per fissare l adattatore sull estensione stessa Nota Non impaccare la colonna su altezze di letto superiori alla lunghezza della colonna ovvero l adattatore deve fare a tenuta contro la parete della colonna e NON contro la parete del tubo di estensione Una volta rimossa l estensione per l impaccaggio sono necessari almeno 10 cm di altezza del tubo cromatografico per installare l adattatore 3 1 3 BPG 450 Assemblaggio Per smontare le colonne BPG 450 fare riferimento alla Tabella A 3 e alla Figura A 5 sul retro di questo manuale e procedere nel seguente modo 1 Allentare la sealing unit dell adattatore girando la maniglia 24 AVVERTENZA Se la guarnizione dell O ring dell adattatore secco potrebbe danneggiarsi in caso di movimento forz
46. ione Materiale A contatto Quantit BPG 100 BPG 140 BPG 200 n coniliquidi confezione Numerodi Numerodi Numero di di processo codice codice codice 1 Column tube 500 Borosilicate glass 1 8 0251 0 8 1112 95 18 1152 01 Column tube 750 Borosilicate glass 1 8 0251 02 18 1152 02 Column tube 950 Borosilicate glass 1 8 0251 03 8 1112 96 18 1152 03 2 Rod for tube 500 316 1 8 1105 80 8 1105 83 18 1105 83 Rod for tube 750 316 1 8 1105 81 18 1105 84 Rod for tube 950 316 1 8 1105 82 8 1105 85 18 1105 85 3 Guide ring PTFE 1 8 0251 22 8 1112 97 18 0252 22 4 et 54 pm end piece PP z 2 8 1126 97 18 1126 99 18 1127 0 Net 23 um end piece PP 2 8 9252 0 8 1113 00 18 9254 01 Net 10 um end piece PA 2 8 0251 77 18 1113 02 18 0252 77 et 12 um end piece PEEK 2 8 1148 38 8 1148 40 18 1148 42 5 Support net end piece PP 2 8 0251 55 8 1112 98 18 0252 55 6 Flange O ring EPDM 2 8 8494 0 8 1113 06 18 8489 0 7 Flange O ring FEP 1 8 0019 4 18 1113 07 8 0019 5 8 ut M6 316 5 9 1582 0 ut M8 316 5 9 0763 01 19 0763 0 9 Cup spring washer 316 4 8 8482 0 8 8482 01 18 8482 01 10 Flange 316 18 1134 21 8 1113 21 18 1134 22 11 Column centering dowel PTFE 8 8 1003 00 18 1003 00 2 End piece 316L X 8 1144 18 8 1113 20 18 1112 62 3 Bolt M8 x 12 316 4 8 1113 28 18 1113 28 4 Washer 316 4 18 1143 26 8 1113 29 18 1113 29 15 Stand complete 316L 8 1031 10 8 1031 20 18 1031 20 6 Clamp 25 mm 304 8 1001 3 8 1001 31 8 1001 31 7 Adjusting knob P
47. la colonna e NON contro la parete del tubo di estensione Una volta rimossa l estensione per l impaccaggio sono necessari almeno 10 cm di altezza del tubo cromatografico per installare l adattatore 3 1 2 BPG 300 Assemblaggio Per smontare le colonne BPG 300 fare riferimento alla Tabella A 2 e alle Figure A 3 e A 4 sul retro di questo manuale e procedere nel seguente modo 1 Allentare uno dei dadi 4 sul morsetto della piastra superiore 1 che fissa l insieme dell adattatore sulla flangia 5 e togliere il morsetto AVVERTENZA Se la guarnizione dell O ring dell adattatore secca potrebbe venir danneggiata da un movimento forzato dell adattatore Inumidire l O ring con acqua o soluzione di etanolo al 20 NON oleare l O ring 22 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 2 Svitare il seal adjuster 23 di un numero di giri sufficiente ad allentare la tenuta dell O ring dell adattatore 33 34 Togliere l adattatore senza far toccare il vetro con l acciaio inossidabile 3 Usando una chiave e nella sequenza mostrata in Figura 4 4 togliere i dadi 2 e le rondelle 3 che fissano le aste di supporto 8 sulla flangia 5 ATTENZIONE Non allentare completamente il dado in solo un movimento Allentare i dadi gradualmente nella sequenza come da Figura 4 4 Tre quattro giri per dado sono sufficienti per allentare e togliere i dadi in modo corretto Usare una chiave regolabile sulle
48. letto si pu ottenere lasciando l estensione per l impaccaggio durante la fase finale dell impaccaggio L adattatore deve essere sigillato all inteno del tubo della colonna almeno 5 cm per evitare tensioni eccessive sul tubo di vetro 4 Usare un manometro per monitorare la pressione per gli ordini vedi Cap 3 nella Guida di manutenzione della colonna BPG La temperatura operativa per le colonne BPG 4 40 C Tabella 4 2 Dimensioni degli ingressi e delle uscite sulle colonne BPG Dimensione della colonna 100 140 200 300 450 Dimensioni 1 0 mm 4 6 6 10 12 4 2 Materiali della colonna I materiali usati nella preparazione delle colonne BPG sono stati attentamente selezionati per la loro compatibilit con i solventi pi comunemente usati nelle procedure di separazione cromatografica di molecole biologiche nella Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 33 4 La colonna BPG 4 3 Resistenza chimica 34 conservazione e nel lavaggio della colonna Tutti i materiali polimerici nel flusso di processo soddisfano i requisiti di USP classe VI descritti in USP lt 88 gt Biological Reactivity Tests In Vivo I componenti della colonna possono contenere parti che vengono a contatto con i liquidi di processo parti umide e parti asciutte Tutti i materiali di costruzione sono di elevato grado di qualit tale da soddisfare i requisiti richiesti da un ambiente di produzione industriale Le Tabelle A 1 A 2 e A 3 in
49. messa adeguatamente a terra Nota Ci deve essere fatto se l attrezzatura verr utilizzata in atmosfere potenzialmente deflagranti A questo scopo disponibile come accessorio un adeguato kit per la messa a terra e il supporto della colonna dotato di un terminale per la connessione alla messa a terra come viene mostrato qui di seguito Terminale cavo per la messa a terra sulle colonne BPG 100 140 200 e 450 Fig 3 7 Terminale di connessione per la messa a terra sul supporto della colonna Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 Per mettere a terra la colonna collegare una estremit del cavo per la messa a terra su un terminale della rete per la messa a terra del laboratorio e l altra estremit al terminale di messa a terra della colonna che si trova sul supporto della colonna Il terminale di messa a terra della colonna ha una filettatura da M6 3 4 Testdi tenuta Prima di abbassare l adattatore assicurarsi che l O ring non sia secco Utilizzare per esempio una soluzione di etanolo al 20 Esecuzione del test di tenuta lungo l adattatore 1 Riempire la colonna con acqua o soluzione sanitizzante e posizionare l adattatore alla medesima altezza a cui dovr essere durante la separazione cromatografica Sigillare l adattatore con il seal adjuster Rimuovere l aria dalla colonna Chiudere la valvola di uscita della colonna Valvola di uscita della colonna REW
50. migliori pratiche operative ma in nessun modo possono avere la precedenza sulle responsabilit individuali e la regolamentazione locale Nella fase di progetta zione e di realizzazione delle varie parti dell apparecchiatura sono stati fatti grandi sforzi affinch le parti fossero conformi a tutte le normative di sicurezza applicabili per questo tipo di apparecchiatura Durante il funzionamento e durante altre attivit con contenitori sotto pressione il singolo operatore ha comunque la responsabilit di prendere in considerazione e la propria sicurezza e quella degli altri e la sicurezza dell apparecchiatura attraverso un uso corretto in base alle descrizioni e istruzioni presentate in queste Istruzioni per l Uso 1 3 2 Avvertenza AVVERTENZA simbolo di Avvertenza mette in risalto istruzioni che devono essere assolutamente seguite per evitare lesioni personali Non procedere fino a quando non sono state comprese chiaramente le istruzioni e non sono state A N rispettate tutte le condizioni richieste 1 3 3 Note di Attenzione ATTENZIONE I segno di Attenzione mette in risalto istruzioni o condizioni che devono essere seguite per evitare danni al prodotto o ad altre attrezzature Non procedere fino a quando non sono state comprese chiaramente le istruzioni e non sono state rispettate tutte le condizioni richieste 1 3 4 Note Nota La NOTA viene usata per indicare informazioni importanti onde evitare guasti e per
51. ndate dimensioni di net 42 velocit di flusso d impaccaggio 49 resistenza chimica 11 34 S scelta del campione del test per colonne 55 sicurezza 11 atmosfere esplosive 11 marchio EX 12 smaltimento della colonna 13 smontaggio dell adattatore colonne 100 140 e 200 20 colonne 300 25 65 colonne 450 29 stoccaggio 12 T test di tenuta 31 test di tenuta della colonna 17 66 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC U Fig A 1 Identificazione delle parti delle colonne BPG 100 140 e 200 Fig A 2 Identificazione delle parti delle colonne BPG 100 140 e 200 continua Fig A 3 Identificazione delle parti della colonna BPG 300 Fig A 4 Identificazione delle parti della colonna BPG 300 continua Fig A 5 Identificazione delle parti della colonna BPG 450 Per informazioni su come contattare gli uffici della vostra zona visitate www gelifesciences com contact www gelifesciences com GE Healthcare Bio Sciences AB Bjorkgatan 30 751 84 Uppsala Svezia imagination at work GE imagination at work e GE monogram sono marchi registrati di General Electric Company BPG Sepharose Sephacryl Sephadex Superdex e Drop Design sono marchi registrati di General Electric Company utti i marchi di fabbrica di terzi sono di propriet dei rispettivi abbrica
52. nna BPG 450 fare riferimento alla Figura A 5 a alla Tabella A 3 e procedere nel seguente modo 1 Facendo riferimento alla Figura 4 6 qui di seguito assicurare che i seguenti componenti siano posizionati correttamente sull estremit inferiore e Piastra di distribuzione 41 e Snap plug 36 e Support net 2 e Net di filtro 5 e Guarnizione a U 4 montata sul net di filtro Nota Inumidire il filtro con etanolo al 20 per eliminare l aria intrappolata Fig 3 6 Posizione dei componenti dell estremit inferiore per le colonne BPG 450 2 Con cura posizionare il tubo della colonna 12 sulla guarnizione ad U 4 Controllare che la flangia 3 sia centrata sulla guarnizione ad U 3 Fissare il tubo sull estremit inferiore con i bulloni 44 Serrare i bulloni in sequenza trasversale con la chiave tensiometrica impostata su 8 Nm Ogni bullone va serrato tre volte Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Installazione e test di tenuta 3 AVVERTENZA Il tubo della colonna si rompe se viene esercitata troppa pressione serrando i bulloni che fissano la flangia 3 e le aste 8 al tubo della colonna Usare sempre la chiave tensiometrica impostata su 4 Nm quando si serrano questi bulloni Consultare la seguente Tabella 4 3 per le impostazioni A N della chiave tensiometrica sulla colonna BPG 450 Tabella 3 3 Impostazioni della chiave tensiometrica delle colonne BPG 450 Componente Fare riferimento alla Imp
53. nti 2007 General Electric Company Tutti i diritti riservati Prima pubblicazione febbraio 2003 utti i beni e servizi venduti sono soggetti ai termini e alle condizioni di vendita dell azienda di GE Healthcare che li fornisce Su richiesta possibile ricevere una copia di tali termini e condizioni Contattare il rappresentante di vendita locale di GE HEalthcare per informazioni aggiornate GE Gealthcare Europe GmbH unzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Germania GE HEalthcare UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA UK GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 USA GE Healthcare Bio Sciences KK Snaken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Giappone User Manual 18 1170 70 AC 03 2007 E Elanders sterv la 2007
54. ostazioni della Figura A 5 per la posizione chiave tensiometrica Bulloni del coperchio e dell estremit inferiore 26 e 27 8 Nm Tubo di vetro con flangie 3 e aste 8 4 Nm Smontaggio dell adattatore per sostituire l O ring 32 Per sostituire l O ring sulle colonne BPG 450 fare riferimento alla Tabella A 3 e alla Figura A 5 e procedere nel seguente modo vedi inoltre le impostazioni della chiave tensiometrica in Tabella 4 3 1 Togliere i bulloni 39 dall adattatore 2 Togliere il coperchio 17 e la vite dell adattatore 29 Fare attenzione a non piegare il tubo di ingresso 31 3 Togliere la molla 34 4 Togliere le viti 33 che fissano il tubo d ingresso 5 Togliere il vecchio O ring 32 e gettarlo Con ci viene completata la procedura di smontaggio dell adattatore Assemblaggio dell adattatore 1 Posizionare il nuovo O ring 32 lubrificato con etanolo al 20 fra il tubo d ingresso 31 e l adattatore 38 Serrare le viti 33 2 Inserire la molla 34 sul tubo d ingresso 3 Abbassare con cura la vite dell adattatore 29 ed il coperchio 17 sul tubo d ingresso 4 Avvitare i bulloni 39 nell adattatore e serrarli L adattatore ora montato Montaggio dell estensione estensione di impaccaggio dispositivo per l impaccaggio per il BPG 450 un estensione in acciaio inossidabile Per montare l estensione su una colonna BPG 450 procedere nel seguente modo Colonne BPG Instruzioni pe
55. ote Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 37 4 La colonna BPG 44 Diagrammi pressione velocit di flusso 4 4 2 Diagrammi pressione velocit di flusso per colonne impaccate Le Figura 3 4 3 6 illustrano i diagrammi pressione velocit di flusso delle colonne BPG impaccate ottenute usando il metodo fornito nella sezione Metodo di impaccaggio della colonna Pagina 49 di questo manuale e l impostazione mostrata in Figura 3 1 Velocit di flusso cm h 70 60 50 40 30 20 10 BPG 100 BPG 200 BPG 300 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 Pressione in bar Fig 4 4 Diagramma pressione velocit di flusso per preparazioni Superdex 200 prep grade in colonne BPG Altezza del letto 60 cm Velocit di flusso cm h 300 250 200 150 100 50 0 0 0 5 10 1 5 2 0 2 5 3 0 3 5 4 0 Pressione in bar Fig 4 5 Diagramma pressione velocit di flusso per Q Sepharose High Performance su colonne BPG 300 500 Altezza letto 10 cm 38 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC La colonna BPG 4 Flusso cm h 400 300 200 100 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 Pressione in bar Fig 4 6 Diagramma pressione velocit di flusso per una colonna BPG 450 impaccata con Q Sepharose Fast Flow ad un altezza del letto di 15 cm Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 39 4 La colonna BPG 4 4 Diagrammi pressione velocit di flusso 40 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionam
56. r l uso 18 1170 70 AC 29 3 Installazione e test di tenuta 3 2 Connessioni Terminale cavo per la messa a terra sulle colonne BPG 300 30 1 Togliere l adattatore dalla colonna e posizionare l estensione in acciaio inossidabile sulla flangia superiore Verificare che l O ring sia posizionato correttamente sulla flangia 2 Usare i bulloni in dotazione con l estensione per fissare il tubo stesso alla colonna La colonna estesa ora pronta per la prima delle due fasi prevista dalla procedura di impaccaggio Nota Togliere l estensione dopo la fase iniziale di sedimentazione Inserire l adattatopre e continuare con la procedura d impaccaggio Una volta rimossa l estensione per l impaccaggio sono necessari almeno 15 cm di altezza del tubo cromatografico per installare l adattatore 3 2 Connessioni Per collegare le colonne BPG con tubi e sistemi di vario tipo sono disponibili diversi connettori fare riferimento al Capitolo 3 nella Guida alla Manutenzione delle Colonne BPG Le connessioni sanitarie di tipo tri clamp delle BPG consentono di eseguire in modo efficace il cleaning in place Altri connettori sono in polipropilene che presenta una elevata resistenza chimica Il diametro esterno delle connessioni sanitarie per tutte le BPG di 25 mm Un morsetto da 51 mm viene usato con i kit del manometro e la valvola di sicurezza 3 3 Messa a terra della colonna Per evitare scariche di elettricit statica la colonna pu essere
57. re alla flangia 10 AVVERTENZA Se l O ring di tenuta dell adattatore secco potrebbe danneggiarsi in caso di un movimento forzato dell adattatore Inumidire l O ring con acqua o A N soluzione di etanolo al 20 NON mettere grasso l O ring 2 Svitare la manopola di regolazione 17 in modo da allentare l O ring di tenuta dell adattatore 28 29 e rimuovere l adattatore 3 Usando una chiave a tubo e nella sequenza mostrata in Figura 4 1 togliere tutti i dadi 8 e le rondelle 9 che fissano le aste di supporto 2 sulla flangia 10 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 17 3 Installazione e test di tenuta 3 1 Smontaggio e assemblaggio A 18 AVVERTENZA Non allentare completamente il dado in solo un movimento Allentare i dadi gradualmente nella sequenza come da Figura 4 1 Tre quattro giri per dado sono sufficienti per allentare e togliere i dadi in modo corretto Usare una chiave a falce sulle aree piatte dell asta per evitare che le aste si svitino Fig 3 1 Sequenza di rimozione e di serraggio dei dadi AVVERTENZA Quando la flangia viene rimossa il tubo della colonna non pi sostenuto Fare attenzione affinch il tubo della colonna non si rovesci 4 Togliere la flangia 10 prestando particolare attenzione Usando una chiave regolabile svitare le aste di supporto 2 dall estremit inferiore della colonna 12 6 Sollevare il tubo di vetro 1 Riporre con
58. ritte in questo manuale Precauzioni di sicurezza FPP PR PLEI IMPORTANTE Tutte le volte che si usa una colonna tenere sempre a portata di mano il manuale di Istruzioni per l uso IMPORTANTE L utente finale deve verificare che tutte le procedure di installazione manutenzione funzionamento e ispezione siano eseguite da personale qualificato adeguatamente addestrato ed in grado di comprendere le istruzioni operative AVVERTENZA Per assicurare la protezione personale durante il funzionamento utilizzare sempre gli indumenti protettivi adeguati all applicazione in corso AVVERTENZA Fare molta attenzione quando si opera vicino alla colonna AVVERTENZA All interno della colonna non ci dovr MAI essere aria o gas sotto pressione AVVERTENZA La pressione operativa della colonna non dovr mai superare la pressione prevista nelle specifiche altrimenti vi il rischio di lesioni personali e danni alla colonna Installare un idoneo dispositivo di sicurezza AVVERTENZA L intervallo di temperatura operativa della colonna non deve andare oltre l intervallo di temperatura operativa previsto nelle specifiche AVVERTENZA Non usare sostanze chimiche diverse da quelle accertate come non dannose per le parti della colonna a contatto con gli eluenti AVVERTENZA Durante il funzionamento o lo stoccaggio attivare sempre i freni delle ruote Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170
59. s 17 3 1 Smontaggio e assemblaggio nni 17 3 1 1 BPG100 140 0 200 le ln 17 3 1 2 BPG 300 3 1 3 BPG 450 3 2 CONNESSIONI rrini ELL Liri 30 3 3 Messa a terra della Colonna iii 30 34 Testditenuti resem enma ERE A 31 4 Lac lonna BPG cere 4 1 Specifichee caratteristiche iiiiii 4 2 Materiali della COIONNA iiiiii 43 Resistenza chi Mica iaia 4 3 1 Resistenza chimica al cloruro di sodio 44 Diagrammi pressione velocit di flusso 4 4 1 Diagrammi pressione velocit di flusso per colonne vuote 37 4 4 2 Diagrammi pressione velocit di flusso per colonne IMPICCATO i nia a Eo EAS EAE aiar lalla 38 5 FUNZIONAMENTO rene rece ance eeneeeizeenzcnese 41 5 1 Impaccaggio della Colonna L niiin 41 5 1 1 Quantit di fase stazionaria per altezza di letto in CM 42 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 7 5 1 2 PrOrosit del net FACCOMANAALE iiinn 42 51 3 Determinazione della velocit di flusso di impaccaggio Ottimale aaa ia aci 43 5 1 4 Velocit di flusso raccomandate per le fasi stazionarie GE Hedltheare increase 5 1 5 Metodo di impaccaggio della colonna a 5 2 Valutazione della COIONNA i 5 2 1 Scelta del campione per il test delle colonne 55 5 2 2 Calcolo HET P rrenean 5 2 3 Calcolo del fattore di asimmetria del picco 6 Abbreviazioni ssessssessessssessesessessseosessescssesee
60. sce con la matrice e viene rilevato con assorbimento UV a 280 In alternativa si pu aumentare la concentrazione del tampone di 10 volte e usarlo come soluzione per il test La seguente Figura 5 13 A mostra un tracciato UV di acetone in una tipica applicazione di una colonna BPG e fornisce i valori calcolati di HETP e di A A Ve Assorbimento UV 50 10 Volume Fig 5 13 Cromatogramma del test con calcoli HETP e A lt Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 55 5 Funzionamento 5 2 Valutazione della colonna 56 5 2 2 Calcolo HETP Quando si usa un tampone con una forte capacit tamponante il volume del campione dovrebbe essere circa 1 del volume totale di fase stazionaria e la concentrazione di NaCI dell 1 0 v v In alternativa si pu usare acetone all 1 0 La velocit di flusso lineare dovrebbe essere di 30 cm h per fasi stazionarie da 34 um e 50 um e di 20 cm h per fasi stazionarie da 90 um Per evitare la diluizione del campione applicarlo il pi vicino possibile all ingresso della colonna Se nel sistema viene inclusa una trappola d aria durante l applicazione del campione questa andr bypassata per evitare la diluizione Calcolare il valore HETP dalla curva della conducibilit o UV nel seguente modo HETP nei suoi termini pi semplici espresso da HETP L N in cul L Altezza del letto cm N Numero di piatti teorici N definito dalla seguente equazione N 5 5
61. sessesesseseesesesee 59 S E P EE E E E E E 65 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Introduzione 1 1 Introduzione 11 Informazioni generali Le colonne BPG sono concepite per applicazioni industriali che richiedono alti standard di igiene Le colonne sono disponibili per volumi di fase stazionaria per cromatografia fino a 131 litri e consentono l utilizzo di elevate velocit di flusso Quando le colonne BPG vengono usate assieme ai BioProcess Media come ad esempio Sepharose Fast Flow e Sephacryl High Resolution si possono soddisfare anche i requisiti normativi pi severi materiali con cui sono prodotte le colonne BPG sono stati attentamente selezionati per poter resistere a sostanze disinfettanti e detergenti come l idrossido di sodio e l etanolo Le specifiche di pressione e la bassa resistenza al flusso rendono queste colonne adatte all uso con i BioProcess media in cromatografia a scambio ionico di interazione idrofobica di affinit e in gel filtrazione Si pu inoltre eseguire efficacemente il desalting con Sephadex G 25 Coarse Medium Fine e SuperFine Il sistema di distribuzione del flusso stato sviluppato per essere compatibile con le elevate prestazioni delle fasi stazionarie della GE Healthcare Tutte le colonne BPG vengono fornite complete di adattatore Per applicazioni che richiedano altezze di letto elevate sono disponibili le estensioni dell impaccaggio In questo manuale vengono inoltre descritti
62. sidabile possibile mettere una soluzione tampone sopra l adattatore durante imballaggio Quando l imballaggio terminato e l O ring sigillato importante che le soluzioni tampone contenenti ioni cloro vengano rimosse da tale spazio per evitare la corrosione nel corso del tempo Cfr 4 3 per maggiori informazioni sulla resistenza chimica al cloruro di sodio 16 Riciclaggio e smaltimento Quando la colonna raggiunge la fine del suo ciclo di vita va trattata in conformati alla legislazione e normativa vigenti in materia di riciclaggio e smaltimento di attrezzature industriali Questo aspetto responsabilit dell utente finale o equivalente In caso di domande su problematiche ambientali o sulla legislazione vigente sul riciclaggio e smaltimento di attrezzature industriali di questo tipo rivolgersi alle autorit locali 1 6 1 Materiali e sostanze In genere i materiali da smaltire vengono suddivisi nelle seguenti categorie e Infiammabili e Legno e Composti ad esempio rivestimento in plastica o in laminato e Carta e Non infiammabili Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 13 1 Introduzione 1 7 Scopo di questo manuale 14 e Metalli Nota metalli che sono pericolosi o che contengono sostanze pericolose ad esempio piombo cadmio mercurio ecc devono essere separati e smaltiti in modo controllato e materiali plastici vengono separati fra pastiche dure indurite e morbide termoplastich
63. te con freni a pedale Nota Le colonne BPG 100 hanno piedini regolabili Le ruote possono essere ordinate come opzione Le colonne BPG non devono essere usate per nessun altro scopo come ad esempio e Contenitori per la conservazione di sostanze chimiche ecc e Contenitori generici a pressione e Recipienti di fermentazione e Conservazione di gas 12 Etichettatura della colonna Il marchio CE sull etichetta di identificazione mostra che la colonna conforme ai requisiti della Direttiva Europea sui dispositivi di pressione PED 97 23 EC e o alla direttiva sulle apparecchiature operanti in atmosfere potenzialmente deflagranti ATEX100 94 9 EC Le colonne il cui prodotto del volume e della pressione ammessi sia troppo limitato non devono essere contrassegnate con marchio CE in base alla direttiva PED L apparecchiatura venduta al di fuori della Comunit Europea pu non essere marcata CE BPG 100 950 Serial no Mox column volume V 8 L Code no 18 1103 03 Design pressure PS 8bor g Year of manufacturing 200 Maximum filling mass 12 kg Tare mass 7 kg PED fluid group cat 1 NA Operating temp TS 4 40 C Ce E Fig 1 1 Un esempio di piastrina dei dati di funzionamento della colonna BPG Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Introduzione 1 1 3 Sicurezza 1 3 1 Informazioni generali Le informazioni fornite in queste Istruzioni per l uso sono suggerite sulla base delle
64. unto va completato molto rapidamente in modo che la fase stazionaria non sedimenti completamente a Inserire l adattatore b Usare i quattro bulloni BPG 100 140 e 200 o il morsetto dell adattatore superiore della piastra BPG 300 e 450 per fissare l adattatore sulla colonna c Per posizionare l adattatore 1 5 mm al di sotto della superficie superiore del liquido usare la Manopola del regolatore di altezza 46 Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 PUNTO 6 gt lt Valvola Chiusa Fig 5 6 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 6 PUNTO 6 a Sigillare l O ring dell adattatore girando la manopola del regolatore di tenuta BPG 100 140 e 200 o la manopola BPG 300 e 450 posta sulla parte superiore dell adattatore in senso orario b Con l O ring sigillato abbassare l adattatore riempiendolo con tampone in modo da espellere ogni residuo d aria presente all interno del tubo dell adattatore Il tubo dell adattatore pieno quando il tampone crea un menisco e non compaiono ulteriori bollicine d aria Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 47 5 Funzionamento 5 1 Impaccaggio della colonna 48 PU NTO 7 Valvola di sicurezza n eg Manometro A DI Valvola Fig 5 7 Determinazione della velocit di flusso ottimale punto 7 PUNTO 7 AVVERTENZA Usare sempre una valvola di sicurez
65. usso collegare un manometro fra la pompa e la colonna e quindi collegare il tubo alla parte superiore della colonna d Aprire la valvola inferiore e Regolare la velocit di flusso alla velocit predefinita f Misurare la velocit di flusso a intervalli regolari e regolarla se necessario La contropressione generata dal letto di resina aumenter e la velocit del flusso si ridurr via via che la fase stazionaria si impacca g Verificare che la pressione visualizzata sul manometro non superi la pressione massima della fase stazionaria controllare il manuale utente della relativa fase stazionaria o della colonna PU NTO 7 Valvola di sicurezza AA Q Y Manometro Contrassegnare gt la parte superiore del letto DI Valvola Fig 5 10 Metodo di impaccaggio della colonna punto 7 PUNTO 7 a Quando il letto stabile marcare sul tubo della colonna il livello della parte superiore del letto b Spegnere la pompa c Chiudere la valvola inferiore d Allentare la tenuta dell O ring dell adattatore girando in senso antiorario la manopola del regolatore BPG 100 140 e 200 o la manopola del regolatore di tenuta BPG 300 e 450 sulla parte superiore dell adattatore Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC 51 52 5 Funzionamento 5 1 Impaccaggio della colonna PUNTO 8 Valvola di sicurezza CY hs Manometro
66. x152 100 78 5 95 45 54 72 78 3 5 4 2 5 7 6 1 8 17 7 48x48x172 140 154 50 0 26 34 45 00 4 0 5 2 69 6 25 1 59x59x127 140 154 75 25 4 55 65 39 6 3 85 100 6 26 1 59x59x152 140 154 95 45 54 72 78 69 83 111 120 6 27 1 59x59x172 200 314 50 0 26 34 45 0 0 82 107 141 6 34 3 59x59x127 200 314 75 25 4 55 65 78 129 173 204 6 36 3 59x59x152 200 314 95 45 54 72 78 141 170 226 245 6 39 3 59x59x172 296 688 50 0 26 34 45 00 179 234 310 4 68 29 69x69x133 296 688 75 25 4 55 65 172 282 378 447 4 73 29 69x69x158 296 688 95 45 54 72 78 310 37 2 495 537 4 78 29 69x69x178 446 1562 50 11 22 30 45 172 344 469 703 2 5 200 00 80x80x140 446 1562 75 36 38 51 62 562 594 797 968 25 215 00 80x80x165 446 1562 100 61 64 72 78 953 1000 1125 1218 2 5 230 00 80x80x190 I volumi e le altezze del letto si basano su una concentrazione della sospensione di resina del 75 ed una compressione di impaccaggio del 15 La compres sione data dalla differenza in volume fra un letto sedimentato ed un letto sotto pressione La compressione data dalla differenza di volume fra un letto sedimentato e un letto sotto pressione 1 Questi valori si possono ottenere senza un estensione per l impaccaggio Queste altezze e volumi del letto si possono ottenere usando una estensione per l impaccaggio durante la sedimentazione del letto La quantit totale del 75 di sospensione di resina deve poter essere contenuta nella colonna estensione con l adattatore montato 3 L altezza e volume del
67. za collegata direttamente a valle della pompa a Avviare la pompa e togliere l aria nel tubo dalla pompa pompando ad una bassa velocit di flusso b Pompando ad una bassa velocit di flusso collegare un manometro fra la pompa e la colonna e quindi collegare il tubo alla parte superiore della colonna Aprire la valvola inferiore Costruire un diagramma pressione velocit di flusso iniziando con una velocit di flusso bassa La fase stazionaria inizier a depositarsi lasciando uno chiaro spazio fra il letto e l adattatore NON regolare l adattatore e Aumentare lentamente la pressione a piccoli intervalli registrare la velocit di flusso quando la pressione si stabilizzata Il tempo necessario per stabilizzare la pressione dipende dal tipo di fase stazionaria e pu variare da alcuni minuti ad alcune ore f Continuare ad aumentare la pressione fino a quando viene raggiunto un plateau di velocit di flusso un aumento di pressione non causa un corrispondente aumento della velocit di flusso Per alcune fasi stazionarie di gel rigido non verr raggiunto il plateau In questi casi usare la velocit di flusso alla pressione massima della colonna g Quando la pressione massima stata raggiunta la determinazione si considera conclusa Colonne BPG Instruzioni per l uso 18 1170 70 AC Funzionamento 5 PUNTO 8 Diagramma della velocit di flusso pressione Velocit di flusso d impaccaggio V

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