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ORTHO® HBc ELISA Test System

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1. REMARQUE La lecture des plaques doit se faire dans les 60 minutes suivant l addition de l acide sulfurique 4N Les plaques doivent tre conserv es l abri de la lumi re avant la lecture M thodes de contr le de qualit 15 16 1 3 Criteres d acceptation du blanc substrat La plaque est validee par rapport au blanc substrat si la densit optique obtenue pour le blanc substrat puits 1A est sup rieure ou gale a 0 020 et inf rieure ou gale 0 050 Criteres d acceptation des contr les n gatifs a La densit optique de chaque contr le n gatif doit tre inf rieure ou gale a 0 350 et sup rieure ou gale a 0 005 Les valeurs situ es entre 0 000 et 0 005 compris sont acceptables mais doivent tre arrondies a 0 000 pour les calculs Si l une des valeurs des trois contr les n gatifs se situe hors de ces limites recalculer la moyenne des contr les n gatifs CN partir de la valeur des deux contr les n gatifs restants La plaque est invalide et le test est recommencer si au moins deux des trois contr les donnent des valeurs en dehors des limites b D terminer la moyenne des contr les n gatifs CN Exemple Contr le n gatif Densit optique 1 0 200 2 0 180 3 0 160 Densit optique totale 0 540 CN Densit optique totale _ 9 180 3 Criteres d acceptation des contr les positifs Le contr le positif est utilis pour v rifier la capacit des composants de la trousse a d tecter
2. Total Absorbance _ 6180 3 Positive Control Acceptance Criteria The positive control is used to verify that the test kit components are capable of detecting a reactive specimen provided the test procedure has been strictly adhered to A plate is considered valid with respect to the positive control if both positive control values are greater than or equal to 0 800 within the linear range of the microwell reader and do not differ by more than 0 500 Any other values for the positive control are considered invalid NOTE Results beyond the upper limit of the linear range of the microwell reader may appear as OVER or pp gt Calculation of the Cutoff Value Cutoff Value NCx 0 400 Example Negative Control Absorbance 1 0 200 2 0 180 3 0 160 Total Absorbance 0 540 NCx Total Absorbance _ 6180 3 Cutoff Value 0 180 0 400 0 580 INTERPRETATION OF RESULTS 1 Specimens with absorbance values less than 0 005 should be retested in a single microwell The specimen should be considered nonreactive if the retest absorbance value is less than the Cutoff Value even ifthe retest absorbance value remains less than 0 005 2 Specimens with absorbance values less than the Cutoff Value and greater than or equal to 0 005 are considered nonreactive Further testing is not required 3 Specimens with absorbance values greater than or equal to the Cutoff Value are considered initially reactive and should be retested in duplicate b
3. chantillon de patient ou de donneur contenant de l azide L azide de sodium g ne l activit de la peroxydase de raifort Le s rum ou le plasma doivent tre conserv s entre 2 et 8 C pendant 7 jours maximum Au del les chantillons doivent tre congel s 20 C ou plus froid pour limiter toute contamination La conservation des chantillons au cong lateur 13 autodegivrant n est pas recommand e Aucun effet n a t observ sur la r activit du test ORTHO HBc ELISA Test System quand 12 chantillons faiblement r actifs et 12 chantillons n gatifs taient soumis cinq cycles de cong lation d cong lation Il est pr f rable d utiliser des chantillons limpides non h molys s Les pr cipit s dans les chantillons doivent tre limin s par centrifugation Tous les chantillons doivent tre manipul s comme s ils taient capables de transmettre des agents infectieux Pour l exp dition ils doivent tre emball s selon les r glementations nationales en vigueur concernant le transport des agents tiologiques Des tudes ont montr que les chantillons doivent tre exp di s temp rature ambiante 37 C maximum ou r frig r s entre 2 et 8 C jusqu 6 jours maximum et conserv s des leur arriv e entre 2 et 8 C Pour le transport de longue dur e plus de 6 jours les chantillons doivent tre conserv s congel s 20 C ou plus froid MODE OPERATOIRE Mat riel fourni Test ORTHO HBc ELISA
4. dico Manipule las pastillas de OPD con pinzas de pl stico o Tefl n Las pinzas met licas pueden reaccionar con las pastillas e interferir con los resultados del an lisis Evitar que el OPD entre en contacto con ojos piel o vestimenta puesto que puede causar irritaci n o una reacci n cut nea al rgica En la eventualidad de que OPD entre en contacto con la piel lavar con agua abundante Es t xico por inhalaci n ingesti n y contacto con la piel En caso de malestar general acudir al m dico A continuaci n se indican los requisitos aplicables sobre riesgos y seguridad 12 N R 20 21 25 36 40 43 50 53 68 Nocivo por inhalaci n y en contacto con la piel T xico por ingesti n Irrita los ojos Posibles efectos cancer genos Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel Muy t xico para los organismos acu ticos puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acu tico Posible riesgo de efectos irreversibles S 26 28 36 37 45 60 61 En caso de contacto con los ojos l velos inmediatamente con abundante agua y acuda al m dico En caso de contacto con la piel l vese inmediatamente con abundante agua Utilize indumentaria y guantes de protecci n adecuados En caso de accidente o malestar acuda inmediatamente al m dico si es posible muestre la etiqueta Este producto y su recipiente deben ser eliminados como residuos peligrosos Evite su vertido al medio ambiente Consulte las instrucciones esp
5. 0 01 thimerosal 4 vials Positive Control Human 1 0 mL each Source Human serum or plasma containing anti HBc and nonreactive for HBsAg and antibody to human immunodeficiency virus type 1 HIV 1 and type 2 HIV 2 Preservative 0 02 thimerosal 5 vials Negative Control Human 1 0 mL each Source Human serum nonreactive for anti HBc HBsAg and antibody to human immunodeficiency virus type 1 HIV 1 and type 2 HIV 2 Preservative 0 02 thimerosal 84 Plate sealers disposable CAUTION HANDLE AS IF CAPABLE OF TRANSMITTING INFECTIOUS AGENTS Store at 2 to 8 C FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ORTHO HBc ELISA Test System meets the requirements of the FDA Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen Reference Panel PRECAUTIONS 1 10 11 12 13 14 15 16 17 CAUTION Some components of this kit contain human blood derivatives No known test method can offer complete assurance that products derived from human blood will not transmit infectious agents Therefore all blood derivatives should be considered potentially infectious It is recommended that these reagents and human specimens be handled using established good laboratory working practices amp Wear disposable gloves while handling kit reagents and specimens Thoroughly wash hands afterward All specimens should be handled as potentially infectious agents Dispose of all specimens and materials used to perform the test as if they contain infectious ag
6. 5 Verifique que todos los equipos para la dispensaci n manual est n ajustados para agregar los vol menes que se indican en el procedimiento de acuerdo con las instrucciones del fabricante del equipo Agregue los controles y las muestras a los pocillos como se indica a continuaci n a 200 uL de Diluyente de Muestra a todos los pocillos excepto el 1A b 10 uL de controles o muestras a los pocillos correspondientes c Si ha colocado manualmente los controles y las muestras llene los pocillos y luego coloque la microplaca en un agitador para que se mezcle entre 5 y 10 segundos Use el agitador a velocidad baja o moderada y procure no salpicar el contenido de los pocillos de prueba 6 Para t cnica manual cubra la placa con un adhesivo Cuando use un procesador de microplaca automatizado para la incubaci n siga las recomendaciones del fabricante en cuanto al sellado de la microplaca Incube a 37 C 1 C durante 60 minutos 5 minutos 7 Nivele las tiras en su soporte si fuera necesario Use un dispositivo de aspiraci n y lavado para aspirar y luego lavar todos los pocillos cinco veces con el tamp n de lavado 1X ATENCI N Para asegurar un rendimiento ptimo del ensayo es muy importante ce irse estrictamente al procedimiento de lavado Siga los pasos especificados para asegurar un lavado a fondo a Aspire las soluciones de muestra de los micropozos y luego ll nelos completamente con el tamp n de lavado No deje que los mi
7. Test System Coffret de 480 tests code produit 933245 Coffret de 2400 tests code produit 933275 Voir la section sur les REACTIFS pour la liste compl te des composants Mat riel requis mais non fourni 1 Micropipette r glable multicanaux de 50 et 200 ul avec une pr cision de 5 minimum ou tout appareil de distribution quivalent 2 Micropipette fixe ou r glable canal unique de 10 ul avec une pr cision de 10 minimum ou tout appareil de dilution quivalent C nes jetables de 5 250 yl ou quivalents Pipette s rologique de taille ad quate ou r cipient cylindrique gradu R servoir pour micropipette multicanaux ou r cipient quivalent pour r actif an Pw Dispositif de lavage aspiration multicanaux capable de distribuer et d aspirer de 300 a 800 ul par puits Voir le manuel d utilisation pour de plus amples informations techniques 7 Lecteur de microplaques double longueur d ondes 490 ou 492 nm avec filtre de r f rence 620 ou 630 nm Si le lecteur ne contient pas de filtre de r f rence les surfaces inf rieures des micropuits qui sont opaques ray es ou irr guli res peuvent entra ner des r sultats lev s erron s La lin arit du lecteur doit tre d au moins 0 2 5 unit s de densit optique Voir les caract ristiques de l instrument fournies par le fabricant Incubateur 37 C 1 C sec ou humide 9 Eau distill e ou d sionis e eau pour r actif de laboratoire cliniq
8. congelaci n y descongelaci n Es preferible usar muestras transparentes y no hemolizadas Elimine los precipitados mediante la centrifugaci n de las muestras Manipule todas las muestras como si fueran a transmitir agentes infecciosos Si es necesario enviar las muestras a otro lugar env selas de acuerdo con los reglamentos federales concernientes al transporte de agentes etiol gicos Diversos estudios han demostrado que las muestras se pueden transportar a temperatura ambiente hasta 37 C o refrigeradas 2 a 8 C hasta por un m ximo de 7 d as y luego almacenarse entre 2 y 8 C Si el env o involucra un transporte muy largo m s de 7 d as mantenga las muestras congeladas a 20 C o menos PROCEDIMIENTO Materiales suministrados ORTHO HBc ELISA Test System Kit de 480 tests Codigo de producto 933245 Kit de 2400 tests Codigo de producto 933275 Vea la lista completa en la secci n REACTIVOS Material necesario no suministrado 1 Micropipeta multicanal capaz de dispensar 50 uL y 200 uL con una exactitud de al menos 5 o alg n sistema equivalente para dispensar los reactivos 2 Micropipeta monocanal fija o ajustable capaz de dispensar 10 uL con una exactitud de al menos 10 o alg n aparato equivalente para diluir las muestras Puntas de pipeta de 5 uL a 250 uL desechables o su equivalente Pipeta serol gica o probeta graduada de tama o apropiado Recipiente para micropipeta de canales m ltiples o reci
9. de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste Apr s contact avec la peau se laver imm diatement et abondamment avec de l eau Porter un v tement de protection et des gants appropri s En cas d accident ou de malaise consulter imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette Eliminer le produit et son r cipient comme un d chet dangereux Eviter le rejet dans l environnement Consulter les instructions sp ciales la fiche de donn es de s curit Les comprim s d OPD sont hygroscopiques et sensibles la lumi re Maintenir le flacon soigneusement ferm en dehors de toute utilisation et le laisser atteindre la temp rature ambiante 15 30 C avant de l ouvrir Le dessiccateur doit tre maintenu en permanence dans le flacon Ne pas utiliser de comprim s cass s ou pr sentant une teinte jaune Utiliser de l eau distill e ou d sionis e pour la pr paration du tampon de lavage ll est possible d utiliser de l eau pour r actif de laboratoire clinique de type ou 11 18 Conserver l eau dans un r cipient non m tallique Ne pas m langer de r actifs provenant de coffrets comportant des num ros de lots diff rents N importe quel lot de tampon de lavage concentr 20 X peut tre utilis sous r serve d utilisation avant la date de p remption indiqu e pour ce produit Laisser imp rativement revenir tous les r actifs et composants la temp rature ambiante
10. de estos l mites vuelva a calcular la media del control negativo CNX con los dos valores de control aceptables Si dos o m s de los tres valores de control est n fuera de estos l mites la placa no es v lida y debe repetirse la prueba 23 b Determine la media de los controles negativos CNx Ejemplo Control negativo Absorbancia 1 0 200 2 0 180 3 0 160 Absorbancia total 0 540 CNx Absorbancia total _ 0 180 3 3 Criterios de aceptaci n del control positivo El control positivo se emplea para verificar que los componentes del kit son capaces de detectar una muestra reactiva siempre que se cumpla estrictamente con el procedimiento del ensayo Una placa se considera v lida con respecto al control positivo si las lecturas de ambos controles positivos cumple los siguientes criterios a son iguales o mayores que 0 800 b est n dentro de los l mites de lectura lineal del lector de microplacas c no difieren entre s m s de 0 500 Si el control positivo tiene alg n otro valor no es v lido NOTA Los resultados que excedan el l mite superior del rango de linealidad del lector de microplacas podr an interpretarse como OVER exceso o o gt 4 C lculo del valor de corte cut off Valor de corte CNx 0 400 Ejemplo Control negativo Absorbancia 1 0 200 2 0 180 3 0 160 Absorbancia total 0 540 CNx Absorbancia total _ 0 180 3 Valor de corte cut off 0 180 0 400 0 580 INTERPRE
11. de lavado 1X es estable durante 30 d as si se almacena a temperatura ambiente Para un almacenamiento m s prolongado hasta 60 d as mant ngalo entre 2 y 8 C Anote en el recipiente la fecha de preparaci n del tamp n de lavado 1X y su fecha de caducidad Deseche el tamp n de lavado 1X si hay senales visibles de contaminaci n NOTA Este reactivo se puede preparar con tamp n de lavado concentrado 20X de cualquier n mero de lote siempre que no haya pasado su fecha de caducidad Preparaci n de la soluci n de substrato Use recipientes limpios de vidrio o de pl stico Antes del final de la segunda incubaci n coloque una cantidad suficiente de tamp n substrato en un recipiente y p ngalo en la oscuridad A ada el n mero adecuado de pastillas de OPD en el tamp n substrato y disu lvalas completamente antes de su utilizaci n Cada microplaca requiere al menos 20 mL de soluci n de substrato Es posible que se necesite m s soluci n de substrato dependiendo del dispensador de reactivo que se utilice Consulte las instrucciones del fabricante del instrumento si necesita reactivo adicional A continuaci n figuran las pautas de uso general N de N de N de pastillas Tamp n pocillos placas de OPD substrato mL 48 0 5 1 12 96 1 2 24 144 1 5 3 36 192 2 4 48 240 2 5 5 60 288 3 6 72 Tras la adici n de las pastillas de OPD la soluci n de substrato es estable durante 60 minutos si se mantiene a temperatura ambiente y en
12. est sup rieure ou gale la valeur seuil sont consid r s comme initialement positifs et doivent tre retest s en double exemplaire avant l interpr tation finale 4 Apr s avoir retest en double exemplaire un chantillon initialement positif cet chantillon est consid r comme positif de facon r p t e pour les anticorps anti HBc si l une des valeurs ou les deux est sont positive s c est dire sup rieure s ou gale s la valeur seuil 5 Apres avoir retest en double exemplaire un chantillon initialement positif pour les anticorps anti HBc cet chantillon est consid r comme n gatif si les deux valeurs trouv es sont n gatives c est dire inf rieures la valeur seuil LIMITES DE LA METHODE Le test ORTHO HBc ELISA Test System ne d tecte que les anticorps anti HBc dans le s rum ou le plasma humain La pr sence d anticorps anti HBc ne constitue pas un diagnostic d infection par l h patite B mais peut sugg rer une infection r cente et ou pass e par le virus de l h patite B Un r sultat de test n gatif n exclut pas la possibilit d une exposition au virus de l h patite B ll se peut que les concentrations d anticorps anti HBc ne puissent pas tre d tect es au d but de l infection Le contr le positif utilis pour ce test n est pas destin valuer la sensibilit de la m thode Il sert v rifier que les composants du coffret sont capables de d tecter un chantillon positif si le prot
13. filter is used areas in the bottom of the microwells that are opaque scratched or irregular may cause elevated readings 25 Specimen Diluent may contain crystals after being stored at refrigerated temperature To dissolve the crystals remove the bottle of Specimen Diluent from the refrigerator and occasionally invert it as the Specimen Diluent comes to room temperature If the solution still contains crystals once at room temperature do not use 26 ProClin 300 is included as a preservative in the Conjugate Reagent Following are the Risk and Safety Requirements R 36 38 43 Irritating to eyes and skin May cause sensitization by skin contact S 23 24 25 Do not breathe vapor spray Avoid contact with skin and eyes PREPARATION OF REAGENTS 1 Preparation of Wash Buffer 1X Mix 50 mL of 20X Wash Buffer Concentrate with 950 mL of distilled or deionized water Wash Buffer 1X is stable for 30 days when stored at room temperature For longer storage up to 60 days keep at 2 to 8 C Record the date the Wash Buffer 1X is prepared and the expiration date on the container Discard Wash Buffer 1X if visibly contaminated NOTE Any lot number of 20X Wash Buffer Concentrate may be used to prepare this reagent provided it is not used beyond its labeled expiration date 2 Preparation of Substrate Solution Clean glass or plastic vessels must be used Prior to the end of the second incubation transfer a sufficient amount of Substrat
14. la oscuridad En el momento de utilizarla debe ser incolora o de color amarillo muy p lido Anote en el recipiente la hora de preparaci n del tamp n substrato y la hora de caducidad de la soluci n Si la soluci n tiene un color notoriamente amarillo desechela y prepare una nueva soluci n de substrato OBTENCI N Y PREPARACI N DE LAS MUESTRAS No es necesaria ninguna preparaci n especial del paciente antes de la obtenci n de la muestra de sangre La sangre debe ex traerse mediante t cnicas m dicas aprobadas No use plasma obtenido con una relaci n muestra anticoagulante inadecuada Se puede usar suero o plasma de muestras obtenidas con EDTA heparina o anticoagulantes basados en cit rato No use muestras tratadas con calor No use azida s dica como conservante de las muestras ni analice muestras de pacientes o donantes que contengan azida porque inhibe la actividad de la peroxidasa de r bano El suero o el plasma se pueden almacenar entre 2 y 8 C hasta por un m ximo de 7 d as Si necesita un almacenamiento m s prolongado 21 conserve las muestras congeladas a 20 C o menos para reducir la posibilidad de contaminaci n No se recomienda conservar las muestras en congeladores con ciclo de descongelaci n autom tico No hubo ning n efecto sobre la reactividad con el Sistema de prueba ELISA ORTHO para HBc cuando se analizaron 12 muestras d bilmente reactivas y 12 muestras no reactivas despu s de cinco ciclos de
15. microplacas recubiertas con ant geno core del virus de la hepatitis B HBcAg recombinante 8 tiras de 12 micropozos en cada soporte 5 frascos de conjugado de anticuerpo monoclonal murino 125 mL cada uno mezcla de anti IgG humana y anti IgM humana conjugados con peroxidasa de r bano y que contiene estabilizadores de proteinas Conservante ProClin 300 al 1 5 envases de diluyente de muestra 150 mL cada uno soluci n salina tamponada con fosfato con estabilizantes proteicos Conservante timerosal al 0 02 3 viales de pastillas de OPD 30 pastillas cada uno contiene o fenilendiamina 2HCl 5 frascos de tamp n substrato 190 mL cada uno tamp n citrato fosfato con per xido de hidr geno al 0 02 Conservante timerosal al 0 01 4 viales de control positivo humano 1 0 mL cada uno Origen Suero o plasma humano con anti HBc pero no reactivo para el HBsAg ni para el anticuerpo del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 HIV 1 y tipo 2 HIV 2 Conservante timerosal al 0 02 5 viales de control negativo humano 1 0 mL cada uno Origen Suero humano no reactivo para el anti HBc ni para HBsAg ni para el anticuerpo del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 HIV 1 y tipo 2 HIV 2 Conservante timerosal al 0 02 84 etiquetas adhesivas desechables para microplacas ATENCI N MANIPULAR COMO SI FUERA POTENCIALMENTE INFECCIOSO Almacenar entre 2 y 8 C PARA USO DIAGN STICO IN VITRO El Sistema de ensayo
16. minutos Todos los valores de absorbancia para cada intervalo de tiempo deben ser iguales a 0 050 o menos 12 Tiras de pocillos negras C digo de producto 651 20 003 1 Ortho Clinical Diagnostics Inc o pocillos sin revestimiento 13 Tamp n de lavado concentrado 20X C digo de producto 933730 6 x 150 mL C digo de producto 933780 4 x 450 mL C digo de producto 933790 12 x 450 mL de Ortho Clinical Diagnostics Inc tamp n fosfato con cloruro s dico y detergente Conservante 2 cloroacetamida al 2 14 Agitador de microplaca de velocidad variable entre 100 y 400 rpm Para utilizar cuando la dispensaci n de muestras no se realice con un pipeteador diluidor Procedimiento del ensayo 1 Antes de comenzar el ensayo deje que los componentes del kit alcancen temperatura ambiente 15 a 30 C Invierta los reactivos suavemente varias veces y procure no formar espuma Revise la temperatura del incubador y mant ngala a 37 C 1 C 2 Determine el n mero total de micropozos que necesita para el ensayo Adem s de las muestras debe usar un blanco de substrato tres controles negativos y dos controles positivos en cada placa o placa parcial Si no se necesita la microplaca entera puede dividirse para conseguir el n mero apropiado de pocillos Las tiras de pocillos no usadas deben almacenarse entre 2 y 8 C en la bolsa de papel aluminio suministrada herm ticamente sellada y con desecante y deben usarse dentro de los 14 d as
17. possible This material and its container must be disposed of as hazardous waste Avoid release to the environment Refer to special instructions Safety data sheets OPD tablets are light and moisture sensitive Keep vial tightly closed when not in use Bring vial to room temperature 15 to 30 C before opening the vial The desiccant pouch must be retained in the vial at all times Do not use tablets which are yellow or broken Distilled or deionized water must be used for Wash Buffer preparation Clinical laboratory reagent water Type or Type Il is acceptable Store the water in nonmetallic containers Do not mix reagents from kits with different lot numbers Any lot number of 20X Wash Buffer Concentrate may be used provided it is not beyond its labeled expiration date All reagents and components must be at room temperature prior to use and kit components returned to 2 to 8 C after use The microwell strips are sealed in protective pouches with a humidity indicator desiccant The desiccant normally blue purple in color will turn pink if moisture is present in the pouch If the desiccant is pink the microwell strips should not be used Do not use reagents beyond their labeled expiration date Cross contamination between reagents will invalidate the test results Labeled dedicated reservoirs for the appropriate reagents are recommended Ensure that specimen is added to the microwell Failure to add specimen may produce an erron
18. specified length of time If anti HBc is present in the specimen antigen antibody complexes will form on the microwell surface If anti HBc is not present complexes will not form and the unbound serum or plasma proteins will be removed in the washing step In the second stage antibody conjugate is added to the test well The antibody conjugate is a mixture of murine monoclonal antibodies specific for human IgG and IgM The conjugate will bind specifically to the antibody portion of the antigen antibody complexes If antigen antibody complexes are not present the unbound conjugate will be removed by washing In the third stage an enzyme detection system composed of o phenylenediamine OPD and hydrogen peroxide is added to the test well If bound conjugate is present the OPD will be oxidized resulting in a colored end product Sulfuric acid is then added to stop the reaction The color intensity depends on the amount of bound conjugate and therefore is a function of the concentration of anti HBc present in the specimen The color intensity is measured with a microwell reader REAGENTS 480 Test Kit Components Product Code 933245 5 Hepatitis B Virus Core Antigen HBcAg Recombinant Coated Microwell Plates 8 strips of 12 wells each in holder bottle Antibody Conjugate Murine Monoclonal 125 mL mixture of anti human IgG and anti human IgM conjugated to horseradish peroxidase with protein stabilizers Preservative 1 ProClin 300 bottle Sp
19. utiliser 26 Le conjugu contient du ProClin 300 conservateur Ci dessous figurent les recommandations sur les risques et la s curit 12 R 36 38 43 Irritant pour les yeux et la peau Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau S 23 24 25 Ne pas respirer les vapeurs a rosols Eviter le contact avec la peau et les yeux PREPARATION DES REACTIFS 1 Pr paration du tampon de lavage 1X M langer 50 ml de tampon de lavage concentr 950 ml d eau distill e ou d sionis e Le tampon de lavage 1X est stable pendant 30 jours temp rature ambiante Pour une conservation plus longue jusqu 60 jours le conserver entre 2 et 8 C Noter la date de pr paration du tampon de lavage 1X et sa date de p remption sur le r cipient Jeter le tampon de lavage 1X si une contamination est observ e REMARQUE N importe quel lot de tampon de lavage concentr 20 X peut tre utilis pour pr parer ce r actif sous r serve d utilisation avant la date de p remption indiqu e 2 Pr paration de la solution de substrat Utiliser des r cipients en verre ou en plastique parfaitement propres Avant la fin de la seconde incubation transf rer une quantit suffisante de tampon substrat dans un r cipient et maintenir le contenu l abri de la lumi re Dissoudre compl tement le nombre appropri de comprim s d OPD dans le tampon substrat avant utilisation Il faut au moins 20 ml de solution de substrat par plaq
20. 2 U S LICENSE 1236 x Ortho Clinical Diagnostics nc a foluuenafohwson company Raritan New Jersey 08869 OCD 1991 32 Recombinant Antigens Provided by CHIRON Chiron Corporation Emeryville CA 94608 Printed in U S A Hepatitis B Virus Core Antigen Recombinant ORTHO HBc ELISA Test System Enzyme Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen anti HBc in Human Serum or Plasma REF 933245 933215 Englisli sico Page 3 Francais cian anal Page 11 Espa ol a Pagina 19 IVD ORTHO i Mo Hepatitis B Virus Core Antigen recombinant ORTHO HBc ELISA Test System Enzyme Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen anti HBc in Human Serum or Plasma NAME AND INTENDED USE ORTHO HBc ELISA Test System is a qualitative enzyme linked immunosorbent assay for the detection of total antibody to hepatitis B virus core antigen anti HBc in human serum or plasma indicated for the screening of blood and blood products intended for transfusion and as an aid in the diagnosis of ongoing or previous hepatitis B virus infection SUMMARY AND EXPLANATION A variety of serologic markers appear following infection with hepatitis B virus HBV The first marker to appear is usually hepatitis B surface antigen HBsAg Antibodies to hepatitis B core antigen anti HBc appear next and remain detectable following the c
21. 964 13 10 98 7 1 3 1 0 TOTAL 3010 2969 41 33 98 6 1 4 1 1 Reactivite chez des patients souffrant d hepatite Des chantillons provenant de patients souffrant d une infection aigu par le virus de l h patite B HBV A d une infection chronique par le virus de l h patite B HBV C d une infection par le virus de l h patite A HAV d une infection par le virus 16 de l h patite non A non B HCV et d insuffisance h patique due l alcoolisme FOIE ont t test s Les r sultats sont indiqu s au tableau 2 Tableau 2 D tection des anticorps anti HBc chez des patients souffrant d h patite NOMBRE POSITIFS D ECHANTILLONS INITIALEMENT INITIALEMENT DE FACON GROUPE TESTES NEGATIFS POSITIFS REPETEE HBV A 25 0 25 25 100 100 HBV C 28 0 28 28 100 100 HAV 10 8 2 2 80 20 20 HCV 10 8 2 1 80 20 10 FOIE 25 12 13 10 48 52 40 Les deux chantillons HAV qui taient positifs pour les anticorps anti HBc taient galement positifs pour les anticorps anti HBs La r activit pour les anticorps anti HBc des chantillons des groupes HCV et FOIE est probablement due a d autres facteurs de risque RESUME DES REVISIONS Section R vision Premiere de couverture Format de couverture standardis y compris l utilisation de symboles de diagnostic in vitro REACTIFS Changement du conservateur de conjugu thim rosal a 0 02 par du ProClin 300 a 1 PRECAU
22. ACTIVOS Conservante de conjugado cambiado de timerosal al 0 02 a ProClin 300 al 1 PRECAUCIONES Informaci n de seguridad actualizada para OPD y a adida para ProClin 300 ALEM N Eliminada la secci n en lengua alemana GLOSARIO A adida una nueva tabla de s mbolos de glosario P gina de Logotipo de Chiron actualizado identificaci n de OCD Distribuido por Pa ses eliminados de la secci n Distribuido por BIBLIOGRAF A A adida una entrada bibliogr fica la n 12 25 26 BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAPHIE BIBLIOGRAFIA 1 2 3 10 11 12 13 14 15 16 T Hoofnagle JH Gerety RJ Barker LF Antibody to hepatitis B virus core in man Lancet 1973 2 869 73 Hoofnagle JH Gerety RJ Ni LY Barker LF Antibody to hepatitis B core antigen a sensitive indicator of hepatitis B virus replication N Engl J Med 1974 290 1336 40 Krugman S Overby LR Mushahwar IK Ling C M Frosner GG Deinhardt F Viral hepatitis type B studies on natural history and prevention reexamined N Engl J Med 1979 300 101 6 Hoofnagle JH Seef LB Bales ZB Zimmerman HJ Veterans Administration Hepatitis Cooperative Study Group Type B hepatitis after transfusion with blood containing antibody to hepatitis B core antigen N Engl J Med 1978 298 1379 83 Gerety RJ Hepatitis B core antigen and antibody HBcAg anti HBc In Gerety RJ ed Hepatitis B New York Academic Press 1985 27 43 Engvall E Perlman
23. ELISA ORTHO para HBc cumple con los requisitos del Panel de Referencia de la FDA Oficina de Drogas y Alimentos de EE UU para anticuerpos frente al antigeno core del virus de la hepatitis B PRECAUCIONES 1 10 11 ATENCI N Algunos componentes de este kit contienen derivados de sangre humana No hay ning n m todo de an lisis conocido que pueda ofrecer la garant a absoluta de que los productos fabricados a partir de la sangre humana no transmitian infecciones Por lo tanto hay que considerar que todos los productos fabricados a partir de la sangre son potencialmente infecciosos Se recomienda la manipulaci n de estos reactivos y muestras humanas de acuerdo con pautas establecidas de buenas pr cticas de trabajo de laboratorio 9 Utilice guantes desechables cuando manipule muestras y reactivos del kit Despu s qu tese los guantes y l vese las manos muy bien Manipule todas las muestras como si fueran agentes potencialmente infecciosos Deseche todos los materiales usados para el an lisis y todas las muestras como si fueran agentes infecciosos La eliminaci n de todos los materiales y las muestras debe hacerse de acuerdo con los reglamentos locales estatales y federales para la eliminaci n de desechos 10 11 El cido sulf rico 4N H SO es un cido fuerte Si se derrama limpie la zona inmediatamente con agua Si el cido entra en contacto con la piel o los ojos l velos con cantidades abundantes de agua y consulte a un m
24. En esta poblaci n de baja prevalencia la tasa de reactividad positiva del Sistema de prueba ELISA ORTHO para Hbc fue del 1 1 Tabla 1 Detecci n de anti HBc en suero y plasma de donantes de sangre supuestamente sanos N MUESTRAS INICIALMENTE INICIALMENTE REPETIDAMENTE LUGAR ANALIZADAS NO REACTIVAS REACTIVAS REACTIVAS 1 1033 1016 17 16 98 4 1 6 1 5 2 1000 989 11 7 98 9 1 1 0 7 3 977 964 13 10 98 7 1 3 1 0 TOTAL 3010 2969 41 33 98 6 1 4 1 1 Reactividad en pacientes con hepatitis Se analizaron muestras de pacientes con infecci n aguda por hepatitis B HBV A infecci n cr nica por hepatitis B HBV C infecci n por hepatitis A HAV hepatitis no A no B HCV y hepatopatia alcohdlica HIGADO Los resultados aparecen en la Tabla 2 Tabla 2 Detecci n de anti HBc en pacientes con hepatitis N MUESTRAS INICIALMENTE INICIALMENTE REPETIDAMENTE GRUPO ANALIZADAS NO REACTIVAS REACTIVAS REACTIVAS HBV A 25 0 25 25 100 100 HBV C 28 0 28 28 100 100 HAV 10 8 2 2 80 20 20 HCV 10 8 2 1 80 20 10 HIGADO 25 12 13 10 48 52 40 Las dos muestras HAV que fueron reactivas para anti HBc tambi n lo fueron para anti HBs La reactividad anti HBc en las muestras de pacientes con HCV o enfermedad hep tica probablemente se debi a otros factores de riesgo RESUMEN DE REVISIONES Secci n Revisi n Portada Formato de portada estandarizado con uso de s mbolos IVD RE
25. TACI N DE LOS RESULTADOS 1 Las muestras que tengan una absorbancia menor que 0 005 deben repetirse en un solo pocillo La muestra se considera no reactiva si la absorbancia en el nuevo ensayo es menor que el valor de corte cut off aunque la absorbancia siga menor que 0 005 2 Las muestras que tengan una absorbancia menor que el valor de corte cut off e igual o mayor que 0 005 se consideran no reactivas y no es necesario volver a analizarlas 3 Las muestras con absorbancias iguales o mayores que el valor de corte cut off se consideran inicialmente reactivas y debe repetirse su an lisis por duplicado antes de hacer una interpretaci n final 4 Sial repetir el ensayo de una muestra que inicialmente haya dado reacci n positiva y los resultados por duplicado son positivos para una de las determinaciones o para ambas es decir valor igual o mayor que el valor de corte se considera que la muestra es repetidamente reactiva para el anti HBc 5 Si al volcer a analizar una muestra que inicialmente haya dado reacci n positiva los resultados por duplicado son ambos negativos es decir valores menores que el valor de corte la muestra se considera no reactiva para el anti HBc LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO ORTHO Hbc ELISA Test System est limitado a la detecci n de anti HBc en suero o plasma humanos La presencia de anti HBc no constituye un diagn stico de infecci n por hepatitis B pero s podr a indicar una infecci n reciente
26. TIONS D EMPLOI Mise jour de l OPD et ajout des instructions de s curit du ProClin 300 ALLEMAND Retrait de la section en langue allemande LEGENDE Ajout d un nouveau tableau de symboles de l gende Page d identification d OCD Mise a jour du logo de Chiron Distribue par Retrait des pays Distribu par BIBLIOGRAPHIE Ajout de l entr e n 12 dans la bibliographie 17 18 Antigeno core del virus la hepatitis B recombinante ORTHO HBc ELISA Test System GE Inmunoensayo enzim tico para la detecci n de anticuerpos frente al antigeno core del virus de la hepatitis B anti HBc en suero o plasma humanos NOMBRE Y USO PREVISTO El Sistema ORTHO ELISA HBc es un ensayo cualitativo de detecci n de anticuerpos totales frente al ant geno core del virus de la hepatitis B anti HBc en suero o plasma humanos Est indicado para la selecci n de sangre y productos derivados destinados a transfusiones sangu neas y para el diagn stico de infecci n actual o pasada por el virus de la hepatitis B RESUMEN Y EXPLICACI N Despu s de una infecci n por el virus de la hepatitis B HBV aparecen diversos marcadores serol gicos El primero que aparece suele ser el ant geno de superficie del virus de la hepatitis B HBsAg A continuaci n aparecen los anticuerpos frente al ant geno del core del virus de la hepatitis B anti HBc que contin a siendo detectable tras la desaparici n del HBsAg y hasta la convalecencia Los anti
27. a entre reactivos anula la validez de los resultados del ensayo por lo que se recomienda usar recipientes etiquetados y exclusivos para cada reactivo Aseg rese de dispensar la muestra en el pocillo ya que si no a ade la muestra el resultado indicar que no hubo reacci n y podr a ser err neo Cuando use una micropipeta de canal nico para dispensar las muestras a mano use una punta de pipeta nueva para cada muestra analizada Cuando use una micropipeta multicanal use puntas nuevas para la dispensaci n de cada reactivo Es esencial cumplir estrictamente el procedimiento de lavado para asegurar un rendimiento ptimo del an lisis vea el paso 7 del Procedimiento del ensayo No permita que se sequen los pocillos una vez que ha comenzado el an lisis No toque la superficie externa del fondo de los pocillos Las huellas dactilares o rayas podr an interferir con la lectura de los pocillos Asegure que los pocillos est n nivelados dentro de su soporte durante el ensayo Si fuera necesario limpie el fondo de las tiras de pocillos cuidadosamente con un pa o absorbente suave y sin pelusa para eliminar la humedad polvo o residuos antes de la lectura Si los valores de los controles negativos o positivos est n fuera de los l mites esperados consulte la secci n Procedimientos de control de calidad podr a ser debido a un problema en el procedimiento seguido o al deterioro de los reactivos No permita que los vapores de hipoc
28. amp 7 La d tection des anticorps totaux anti HBc pr sente un int r t puisqu ils sont associ s aux infections par le HBV PRINCIPE DU TEST Le test se d roule en trois tapes et a pour support r actionnel des micropuits recouverts d antigene recombinant du nucl oide de l h patite B rHBcAg L antig ne recombinant utilis pour ce test est pr par sous brevet am ricain par Chiron Corporation suite un accord commun avec Ortho Clinical Diagnostics Inc L antigene recombinant est produit dans Escherichia coli Dans un premier temps un chantillon est plac directement dans le puits contenant un diluant puis est mis incuber pendant un certain temps Si des anticorps anti HBc sont pr sents dans le pr l vement des complexes antigenes anticorps vont se former la surface du puits Dans le cas contraire aucun complexe ne se fixera et les prot ines libres du plasma ou du s rum seront limin es au cours de l tape de lavage Durant la deuxi me tape un conjugu anticorps est ajout au puits Ce conjugu anticorps est un m lange d anticorps monoclonaux murins sp cifiques aux IgG et IgM humaines Le conjugu se fixera sp cifiquement la portion anticorps des complexes antigenes anticorps Si ces complexes antigenes anticorps sont absents le conjugu libre sera vacu au cours du lavage La troisieme tape consiste ajouter dans le puits un systeme de d tection enzymatique compos de o phenylenediamine OPD e
29. avant utilisation et les composants du coffret entre 2 et 8 C apr s utilisation 12 12 Les barrettes de micropuits sont envelopp es dans un emballage scell contenant un dessiccateur indiquant le taux d humidit G n ralement de couleur bleu violet il tourne au rose au contact de l humidit Dans ce cas ne pas utiliser les barrettes 13 Ne pas utiliser de r actifs ayant d pass la date de p remption indiqu e sur leur tiquette 14 Toute contamination crois e des r actifs invalidera les r sultats des tests Il est donc recommand de r server un r cipient particulier tiquet en permanence 15 S assurer que l chantillon a bien t ajout dans le micropuits L absence d addition de l chantillon peut entrainer un r sultat n gatif erron 16 Lors de toute manipulation manuelle avec une pipette canal unique utiliser un c ne neuf pour chaque pr l vement tester Dans le cas de la pipette multicanaux changer de c ne pour chaque r actif introduit 17 Observer strictement la m thode de lavage prescrite de facon obtenir les meilleurs r sultats possibles voir tape 7 du Procedure 18 Ne pas laisser les micropuits se dess cher une fois le test commenc 19 Ne pas toucher avec les doigts la face inf rieure externe des micropuits des empreintes ou des rayures pourraient entrainer des erreurs lors de la lecture 20 S assurer que les barrettes sont bien positionn es dans le support pen
30. cropozos rebosen Deje pasar unos 20 segundos entre la adici n del tamp n de lavado y la aspiraci n siguiente b Complete la secuencia de aspiraci n y llenado cuatro veces m s c Aspire los pocillos por completo Invierta la placa sobre un papel de filtro limpio y golp ela para eliminar el exceso de tamp n de lavado si fuera necesario A ada 200 uL de conjugado de anticuerpo a todos los pocillos excepto el 1A 9 Para procesar las placas a mano cubra el soporte de las tiras de micropozos con un nuevo adhesivo de placa Cuando use un procesador de microplacas automatizado para la incubaci n siga las recomendaciones del fabricante con respecto al sellado de la placa Incube a 37 C 1 C durante 60 minutos 5 minutos 10 Prepare una cantidad suficiente de soluci n de substrato antes del paso 12 con tiempo suficiente para permitir la disoluci n completa de las pastillas de OPD Consulte la secci n PREPARACI N DE REACTIVOS No utilice m s de una soluci n de substrato para cada microplaca 11 Despu s de la segunda incubaci n lave los pocillos como se describe en el paso 7 12 Dispense 200 uL de soluci n de substrato a todos los pocillos incluyendo el 1A 13 Incube a temperatura ambiente y en la oscuridad durante 30 minutos 1 minuto 14 A ada 50 uL de cido sulf rico 4N H SO a todos los pocillos incluido el 1A con suficiente fuerza como para asegurar una mezcla adecuada Si fuera necesario golpee la placa suav
31. cuerpos frente al ant geno de superficie de la hepatitis B anti HBs generalmente aparecen unas semanas despu s de que se haya eliminado el HBsAg La determinaci n de anti HBc en suero y plasma puede servir de ayuda para controlar la evoluci n de la infecci n por HBV El anti HBc aparece en pr cticamente todos los individuos infectados con HBV y es un marcador serol gico fiable de infecci n reciente o pasada 2 Durante la fase aguda de la infecci n por HBV poco despu s de la aparici n del HBsAg aparece el anti HBc que se mantiene a n despu s de la eliminaci n del HBsAg En los casos en que se haya eliminado el HBsAg pero se haya retrasado la aparici n de anti HBs es posible que el anti HBc sea el nico marcador serol gico de una infecci n reciente por HBV 4 Adem s e el anti HBc se encuentra en pr cticamente todos los pacientes con hepatitis B cr nica 5 Los procedimientos del inmunoensayo enzim tico ELISA permiten la detecci n rutinaria de anticuerpos frente a ant genos espec ficos 97 La detecci n de anti HBc total tiene valor debido a la asociaci n entre dichos anticuerpos y las infecciones por HBV PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO El procedimiento del ensayo consta de tres etapas que se llevan a cabo en un micropocillo recubierto con ant geno del core virus de la hepatitis B obtenido por t cnicas recombinantes rHBcAg El ant geno recombinante usado en este ensayo es fabricado por Chiron Corporation seg n la correspo
32. d in the procedure following the equipment manufacturer s instructions Add controls and specimens to the microwells as follows a 200 uL of Specimen Diluent to all wells except 1A b 10 uL of the controls or specimens to the appropriate wells c If the controls and specimens have been manually delivered after filling the microwells place the microwell strip holder on a microwell plate shaker to mix for 5 to 10 seconds The shaker should be used at a slow to moderate speed taking care to avoid splashing of the contents of the test wells For manual processing of microwell plates cover the microwell strip holder with a plate sealer When using an automated microplate processor for incubation follow the instrument manufacturer s recommendations with regard to microwell plate sealing Incubate at 37 C 1 C for 60 minutes 5 minutes Level the strips in the microwell holder if necessary With an aspirator washer device aspirate and wash all wells five times with Wash Buffer 1X 10 11 12 13 14 15 CAUTION Strict adherence to the specified wash procedure is crucial to ensure optimum assay performance Follow the steps specified in order to ensure thorough washing a Aspirate the sample solutions from microwells and then completely fill wells with Wash Buffer Do not allow the wells to overflow Allow approximately 20 seconds between the addition of Wash Buffer and subsequent aspiration b Complete the aspirate fil
33. dant le test Avant la lecture essuyer avec soin le dessous des barrettes avec un tissu absorbant doux et non pelucheux pour supprimer toute trace d humidit de poussiere ou de salet 21 Les r sultats des contr les positifs ou n gatifs non compris dans l intervalle de valeurs fix es voir la section sur le M thodes de contr le de qualit peuvent indiquer un probl me technique ou une d t rioration des produits 22 Au cours du test ne pas laisser les barrettes entrer en contact avec les vapeurs d hypochlorite de sodium s chappant de l eau de Javel ou de toute autre source ce qui risquerait d emp cher la coloration de se produire 23 Tous les syst mes de distribution doivent tre manipul s avec soin calibr s r guli rement et entretenus suivant les instructions du fabricant 24 Le lecteur de micropuits doit contenir un filtre de r f rence 620 ou 630 nm Si le lecteur ne contient pas de filtre de r f rence les surfaces inf rieures des micropuits qui sont opaques ray es ou irr guli res peuvent entrainer des r sultats lev s erron s 25 Des cristaux peuvent tre pr sents dans le diluant chantillon apr s conservation au r frig rateur Pour dissoudre ces cristaux sortir le flacon de diluant chantillon du r frig rateur et durant la remise temp rature ambiante le retourner de temps en temps Si la solution contient encore des cristaux alors qu elle est parvenue temp rature ambiante ne pas l
34. despu s de abrir la bolsa Anote en la bolsa la fecha en que se abri y la fecha de caducidad de los pocillos no usados Es posible realizar el ensayo en una microplaca que no est completa siempre que se cumplan las siguientes condiciones Se combinen tiras de pocillos procedentes de diferentes microplacas pero que correspondan al mismo lote no hayan pasado la fecha de caducidad de la bolsa y procedan de placas que previamente hayan demostrado una respuesta apropiada a los controles del kit Cuando ensamble una microplaca con tiras de pocillos de una placa reci n abierta y aun sin probar coloque una de estas tiras al principio de la placa y a ada todos los controles del kit ATENCI N Manipule las tiras de pocillos con cuidado No toque la superficie externa del fondo de los pocillos 3 Ensamble las tiras en su soporte Las tiras deben estar niveladas dentro del soporte Si la placa est incompleta agregue tiras de pocillos negros o sin revestimiento 22 4 Prepare un registro mapa de la placa que identifique la posici n de los controles y las muestras en los pocillos Organice los pocillos de control de la prueba de manera que el micropozo 1A sea el blanco de substrato y acontinuaci n coloque todos los controles en una configuraci n horizontal o vertical La configuraci n elegida depende del software Pocillo 1A Blanco de substrato Control negativo Control negativo Control negativo Control positivo Control positivo
35. e Buffer to a container and protect the contents from light Completely dissolve the appropriate number of OPD tablets in Substrate Buffer prior to use Each microwell plate requires at least 20 mL of Substrate Solution More Substrate Solution may be needed depending upon the reagent dispenser used See the instrument manufacturer s instructions for additional reagent required Below are guidelines for general use Number of Number of Number of Substrate Wells Plates OPD Tablets Buffer mL 48 0 5 1 12 96 1 2 24 144 15 3 36 192 2 4 48 240 2 5 5 60 288 3 6 72 The Substrate Solution is stable for 60 minutes after the addition of OPD tablets when held at room temperature in the dark and should be colorless to very pale yellow when used Record the time when the OPD tablets are added to the Substrate Buffer and when it will expire on the container If it is noticeably yellow in color discard and prepare more Substrate Solution as required SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION No special preparation of the patient is required prior to blood collection Blood should be collected by approved medical techniques Plasma collected with an improper ratio of specimen to anticoagulant should not be used Serum or plasma collected in EDTA heparin or citrate based anticoagulants may be used and should be tested as soon as possible following collection Do not use heat treated specimens Do not use azide to preserve specimens Do not test patient or donor sa
36. e microwells then add 50 uL of the 4N H SO to be tested to each microwell Read the microwells at a wavelength of 490 nm or 492 nm with a reference filter of 620 nm or 630 nm at 0 time and 60 minutes All absorbance values at each time interval must be less than or equal to 0 050 Black microwell strips Product Code 651 20 003 1 Ortho Clinical Diagnostics Inc or equivalent uncoated microwells 20X Wash Buffer Concentrate Product Code 933730 6 x 150 mL Product Code 933780 4 x 450 mL Product Code 933790 12 x 450 mL Ortho Clinical Diagnostics Inc phosphate buffer with sodium chloride and detergent Preservative 296 2 chloroacetamide Variable speed microwell plate shaker capable of 100 to 400 rpm for use when not using a pipetter dilutor for sample delivery Test Procedure 1 Prior to the beginning of the procedure bring kit components to room temperature 15 to 30 C Invert liquid reagents gently several times but avoid foaming Check the incubator temperature maintain at 37 C 1 C Determine the total number of wells needed for the assay In addition to specimens one substrate blank three negative controls and two positive controls will be included on each plate or partial plate If the entire strip is not needed an appropriate number of wells can be broken off Unused wells should be stored at 2 to 8 C in the supplied foil pouch tightly sealed with desiccant and used within 14 days of opening the foil pouch Record
37. eciales y las fichas de datos de seguridad Las pastillas de OPD son sensibles a la luz y a la humedad Mantenga el vial herm ticamente cerrado cuando no lo est usando Deje que el vial alcance la temperatura ambiente 15 a 30 C antes de abrirlo La bolsa con desecante debe estar dentro del vial en todo momento No use las pastillas que est n amarillas o rotas Use agua destilada o desionizada para preparar la soluci n de tamp n de lavado El agua tipo o tipo II para reactivos de laboratorio cl nico es aceptable 13 Almacene el agua en recipientes no met licos No mezcle los reactivos de kits que tengan distinto n mero de lote Se puede usar cualquier lote de tamp n de lavado concentrado 20X siempre que no haya pasado la fecha de caducidad indicada en la etiqueta Todos los reactivos y componentes deben estar a temperatura ambiente antes utilizarlos y los componentes del kit deben almacenarse entre 2 y 8 C despu s de su uso 20 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 Las tiras de pocillos est n en bolsas de protecci n selladas que contienen un desecante indicador de humedad El desecante normalmente tiene un color azul morado pero se vuelve rosado si hay humedad en la bolsa por tanto si el desecante tiene color rosado no utilice las tiras de pocillos No use los reactivos despu s de la fecha de caducidad que aparece en la etiqueta La contaminaci n cruzad
38. ecimen Diluent 150 mL phosphate buffered saline with protein stabilizers Preservative 0 02 thimerosal vial OPD Tablets 30 tablets contains o phenylenediamine 2HCI bottle Substrate Buffer 190 mL citrate phosphate buffer with 0 02 hydrogen peroxide Preservative 0 01 thimerosal ao vial Positive Control Human 1 0 mL Source Human serum or plasma containing anti HBc and nonreactive for HBsAg and antibody to human immunodeficiency virus type 1 HIV 1 and type 2 HIV 2 Preservative 0 02 thimerosal 2 vials Negative Control Human 1 0 mL each Source Human serum nonreactive for anti HBc HBsAg and antibody to human immunodeficiency virus type 1 HIV 1 and type 2 HIV 2 Preservative 0 02 thimerosal 21 Plate sealers disposable ORTHO 3 2400 Test Kit Components Product Code 933275 25 Hepatitis B Virus Core Antigen HBcAg Recombinant Coated Microwell Plates 8 strips of 12 wells each in holder 5 bottles Antibody Conjugate Murine Monoclonal 125 mL each mixture of anti human IgG and anti human IgM conjugated to horseradish peroxidase with protein stabilizers Preservative 1 ProClin 300 5 bottles Specimen Diluent 150 mL each phosphate buffered saline with protein stabilizers Preservative 0 02 thimerosal 3 vials OPD Tablets 30 tablets each contains o phenylenediamine 2HCl 5 bottles Substrate Buffer 190 mL each citrate phosphate buffer with 0 02 hydrogen peroxide Preservative
39. efore final interpretation 4 Upon retesting an initially reactive specimen the specimen is considered repeatedly reactive for anti HBc if one or both duplicate determination s is are reactive i e equal to or greater than the Cutoff Value 5 After retesting an initially reactive specimen the specimen is considered nonreactive for anti HBc if both duplicate determinations are nonreactive i e less than the Cutoff Value LIMITATIONS OF THE PROCEDURE ORTHO HBc ELISA Test System is limited to the detection of anti HBc in human serum or plasma The presence of anti HBc does not constitute a diagnosis of hepatitis B infection but may be indicative of recent and or past infection by hepatitis B virus A nonreactive test result does not exclude the possibility of exposure to hepatitis B virus Levels of anti HBc may be undetectable in early infection The positive control in the test kit is not to be used to quantitate assay sensitivity The positive control is used to verify that the test kit components are capable of detecting a reactive specimen provided the test procedure has been strictly adhered to When positive control values are beyond the linear range of the microwell reader the positive control cannot be used to assess assay precision EXPECTED RESULTS The frequency of anti HBc in a population varies widely depending upon the geographic locale and the population under study In one study of volunteer blood donors nonreactive for HBsA
40. emente o use un agitador de microplacas para mezclar el contenido pero procure no salpicar el contenido de los micropozos Cuando use un procesador de microplacas automatizado siga las instrucciones del fabricante del instrumento con respecto a la mezcla 15 Si fuera necesario limpie el fondo de las tiras cuidadosamente con un pa o absorbente suave y sin pelusa para eliminar la humedad antes de la lectura Nivele las tiras dentro del soporte Lea la microplaca a una longitud de onda de 490 nm o 492 nm Para los lectores de doble longitudes de onda fije la longitud de onda de referencia en 620 nm o 630 nm Uilice el micropocillo 1A como blanco para el lector de acuerdo con las instrucciones del fabricante del instrumento NOTA Lea las placas de tiras de micropozos antes de 60 minutos despu s de agregar el cido sulf rico 4N Guarde las placas en las oscuridad hasta el momento de su lectura Procedimientos de control de calidad 18 1 Criterio de aceptaci n del blanco de substrato Una placa se considera v lida con respecto al blanco si el valor de absorbancia del blanco de substrato micropozo 1A est comprendido entre 0 020 y 0 050 2 Criterio de aceptaci n del control negativo a Cada control negativo debe tener un valor comprendido entre 0 005 y 0 350 Los n meros entre 0 000 y 0 005 inclusive son v lidos y deben redondearse a 0 000 para hacer los c lculos Si una de las lecturas de los tres controles negativos est fuera
41. ents Disposal of all specimens and materials should comply with all local state and federal waste disposal requirements 10 11 4N sulfuric acid H5SO is a strong acid Wipe up spills immediately Flush the area of the spill with water If the acid contacts the skin or eyes flush with copious amounts of water and seek medical attention Handle OPD tablets with plastic or Teflon coated forceps Metal forceps may react with the tablets and interfere with the test results Avoid contact of OPD with eyes skin or clothing as OPD may cause irritation or an allergic skin reaction If OPD should come into contact with the skin wash thoroughly with water OPD is toxic for inhalation ingestion and skin contact In case of malaise call a physician Following are the Risk and Safety Requirements 2 N R 20 21 25 36 40 43 50 53 68 Harmful by inhalation and in contact with skin Toxic if swallowed Irritating to eyes Limited evidence of a carcinogenic effect May cause sensitization by skin contact Very toxic to aquatic organisms may cause long term adverse effects in the aquatic environment Possible risks of irreversible effects S 26 28 36 37 45 60 61 In case of contact with eyes rinse immediately with plenty of water and seek medical advice After contact with skin wash immediately with plenty of water Wear suitable protective clothing and gloves In case of accident or if you feel unwell seek medical advice immediately show the label where
42. eous nonreactive result When using a single channel micropipette for manual sample addition use a new pipette tip for each specimen to be assayed When using a multichannel micropipette new tips are to be used for each reagent to be added Strict adherence to the specified wash procedure is crucial to ensure optimum assay performance See Step 7 of Test Procedure 18 Do not allow microwells to become dry once the assay has begun 19 Do not touch the bottom exterior surface of the microwells Fingerprints or scratches may interfere with reading the microwells 20 Ensure that the microwell strips are level in the microwell strip holder during the test procedure If necessary wipe the bottom of the microwell strips carefully with a soft lint free absorbent tissue to remove any moisture dust or debris before reading 21 Negative or positive control values which are not within the expected range refer to Quality Control Procedures section may indicate a technique problem or product deterioration 22 Do not allow sodium hypochlorite fumes from chlorine bleach or other sources to contact the microwell strips during the assay as the color reaction may be inhibited 23 All pipetting equipment should be used with care calibrated regularly and maintained following the equipment manufacturer s instructions 24 The microwell reader should contain a reference filter with a setting at 620 or 630 nm If an instrument without a reference
43. g 1 was positive for anti HBc SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS Reactivity in Presumably Healthy Blood Donors Three independent clinical study sites tested a total of 3010 specimens from presumably healthy blood donors The results of reactivity with ORTHO HBc ELISA Test System are shown in Table 1 A total of 3010 specimens were tested 2969 of which were nonreactive The repeatedly reactive rate of ORTHO HBc ELISA Test System in this low prevalence population is 1 1 Table 1 Detection of Anti HBc in Serum and Plasma from Presumably Healthy Blood Donors NUMBER INITIALLY INITIALLY REPEATEDLY SITE TESTED NONREACTIVE REACTIVE REACTIVE 1 1033 1016 17 16 98 4 1 6 1 5 2 1000 989 11 7 98 9 1 1 0 7 3 977 964 13 10 98 7 1 3 1 0 TOTAL 3010 2969 41 33 98 6 1 4 1 1 Reactivity in Patients with Hepatitis Specimens from patients with acute hepatitis B infection A HBV chronic hepatitis B infection C HBV hepatitis A infection HAV non A non B hepatitis HCV and alcoholic liver disease LIVER were tested Results appear in Table 2 Table 2 Detection of Anti HBc in Patients with Hepatitis NUMBER INITIALLY INITIALLY REPEATEDLY GROUP TESTED NONREACTIVE REACTIVE REACTIVE A HBV 25 0 25 25 100 100 C HBV 28 0 28 28 100 100 HAV 10 8 2 2 80 20 20 HCV 10 8 2 1 80 20 10 LIVER 25 12 13 10 48 52 40 The two HAV specimens which were anti HBc reactive
44. gicos Do not use if damaged Ne pas utiliser si endommag No usar si est da ado E3 Irritant Irritant Irritante Harmful Nocif Nocivo JO Toxic Toxique T xico KEY TO SYMBOLS LEGENDE DES SYMBOLES CLAVE DE LOS SIMBOLOS Continued Suite Continuaci n Dangerous for the Environment Dangereux pour l environnement Peligroso para el medio ambiente Fragile Handle with Care Attention fragile Fr gil manipular con cuidado Keep Dry Tenir au sec Mantener seco tt This end up Haut Este lado hac a arriba CONTROL Positive Control Contr le positif Control positivo CONTROL Negative Control Contr le n gatif Control negativo CALIBRATOR Positive Calibrator Calibrateur positif Calibrador positivo CALIBRATOR Negative Calibrator Calibrateur n gatif Calibrador negativo Confirmatory Control Confirmatory Control Contr le de confirmation Control de confirmaci n Recombinant Antigens Provided by Recombinant Antigens Provided by Antigenes recombinants fournis par Antigenos recombinantes suministrados por 30 Antibody to Hepatitis B Surface Antigen Antibody to Hepatitis B Surface Antigen Anticorps dirig contre l antig ne de surface du virus de l h patite B Anticuerpo frente al ant geno de superficie de la hepatitis B Antibody to Hepati
45. ieurs indicateurs s rologiques apparaissent apr s infection par le virus de l h patite B HBV Le premier est g n ralement l antigene de surface de l h patite B HBsAg Les anticorps dirig s contre l antig ne du nucl oide de hepatite B anti HBc apparaissent ensuite et restent d tectables m me apr s la disparition du HBsAg et pendant a convalescence Les anticorps dirig s contre l antigene de surface de l h patite B anti HBs apparaissent g n ralement quelques semaines apr s la disparition du HBsAg La d tection des anticorps anti HBc dans le s rum et le plasma peut tre utilis e pour aider surveiller l volution d une infection par le HBV Les anticorps anti HBc apparaissent chez pratiquement tous les patients infect s par le HBV et constituent un indicateur s rologique exact d une infection r cente ou pass e Durant la phase aigu de infection par le HBV les anticorps anti HBc apparaissent peu de temps apr s l apparition du HBsAg et restent pr sents apr s sa disparition Dans les cas o le HBsAg a disparu et l apparition des anticorps anti HBs est retard e les anticorps anti HBc peuvent constituer le seul indicateur s rologique d une infection r cente par le HBV Des anticorps anti HBc apparaissent chez presque tous les patients souffrant d h patite B chronique Les tests immuno enzymatiques ELISA permettent de d tecter de facon automatique les anticorps dirig s contre des antigenes sp cifiques
46. l sequence four additional times Completely aspirate wells Invert the plate and firmly tap on a clean paper towel to remove excess Wash Buffer if necessary Add 200 uL of Antibody Conjugate to all wells except 1A For manual processing of microwell plates cover the microwell strip holder with a new plate sealer When using an automated microplate processor for incubation follow the instrument manufacturer s recommendations with regard to microwell plate sealing Incubate at 37 C 1 C for 60 minutes 5 minutes Prepare sufficient Substrate Solution prior to use in Step 12 to allow time for the OPD tablets to dissolve completely Refer to PREPARATION OF REAGENTS Do not use more than a single preparation of Substrate Solution on a plate After the second incubation wash the wells as described in Step 7 Add 200 uL of Substrate Solution to all wells including 1A Incubate at room temperature in the dark for 30 minutes 1 minute Add 50 pL of 4N sulfuric acid H SO to all wells including 1A To ensure proper mixing acid should be added forcibly in a steady stream If necessary gently tap the plate or use a microwell plate shaker to mix the contents Care should be taken to avoid splashing of the contents of the microwells When using an automated microplate processor follow the instrument manufacturer s instructions with regard to mixing If necessary wipe moisture from the bottom of the microwell strips carefully with a soft li
47. learance of HBsAg and into convalescence Antibodies to hepatitis B surface antigen anti HBs generally appear a few weeks after the clearance of HBsAg The determination of anti HBc in serum and plasma may be used as an aid to monitor the progress of HBV infection Anti HBc appears in virtually all individuals infected with HBV and is an accurate serological marker of recent and past infection During the acute phase of HBV infection anti HBc appears shortly after the appearance of HBsAg and persists following HBsAg clearance 3 In those cases where HBsAg has cleared and the appearance of anti HBs is delayed anti HBc may be the only serological marker of recent HBV infection Anti HBc is found in virtually all patients with chronic hepatitis B Enzyme linked immunosorbent assay ELISA procedures provide a means for routinely detecting antibodies to specific antigens 97 The detection of total anti HBc has value considering the association of such antibodies with HBV infections PRINCIPLE OF THE PROCEDURE The assay procedure is a three stage test carried out in a microwell coated with recombinant derived hepatitis B core antigen rHBcAg The recombinant antigen used in this assay is prepared under U S License by Chiron Corporation under a shared manufacturing arrangement The recombinant antigen is produced in Escherichia coli In the first stage a test specimen is placed directly in the test well containing specimen diluent and incubated for a
48. lorito s dico procedentes del blanqueador de cloro o de alguna otra fuente entren en contacto con las tiras de pocillos durante el ensayo porque se podr a inhibir la reacci n colorim trica Todo el equipo para pipetear debe usarse con cuidado calibrarse peri dicamente y hacer su mantenimiento de acuerdo con las instrucciones del fabricante del equipo El lector de microplacas debe tener un filtro de referencia con un ajuste a 620 630 nm Si usa un instrumento sin filtro de referencia las zonas del fondo de los micropozos que est n opacas o rayadas podr an dar lugar a lecturas elevadas Es posible que aparezcan cristales en el Diluyente de Muestra tras un per odo de almacenamiento en nevera Para disolver estos cristales retire el diluyento de muestra de la nevera y deje que alcance la temperatura ambiente inviertiendo el envase periodicamente Si tras este proceso se mantienen los cristales en el diluyente no lo utilice El conjugado de reactivo incluye ProClin 300 como conservante A continuaci n se indican los requisitos aplicables sobre riesgos y seguridad R 36 38 43 Irrita los ojos y la piel Posibilidad de sensibilizaci n en contacto con la piel S 23 24 25 No respirar los vapores aerosoles Ev tese el contacto con los ojos y la piel PREPARACI N DE REACTIVOS 1 Preparaci n del tamp n de lavado 1X Mezcle 50 mL de tamp n de lavado concentrado 20X con 950 mL de agua destilada o desionizada El tamp n
49. maintenir 37 C 1 C 2 Evaluer le nombre de puits n cessaire pour la s rie de tests En plus des chantillons compter pour chaque plaque entiere ou partielle un blanc substrat trois contr les n gatifs et deux contr les positifs Si la barrette entiere n est pas utilis e la casser pour obtenir le nombre exact de micropuits n cessaires Les puits inutilis s doivent tre conserv s dans le sachet en papier d aluminium fourni soigneusement scell avec un dessiccateur une temp rature comprise entre 2 et 8 C et utilis s dans les 14 jours suivant l ouverture du sachet Noter sur le sachet sa date d ouverture et la date de p remption des puits inutilis s R aliser le test sur une plaque partielle est possible dans la mesure o les conditions suivantes sont respect es Les barrettes de micropuits de diff rentes plaques peuvent tre utilis es afin de reconstituer une plaque partielle ou complete si les barrettes sont d un m me lot si les dates de p remption sont respect es et si elles proviennent d un kit d j contr l Les contr les doivent tre pr sents sur chaque barrette de micropuits provenant d un kit r cemment entam et non contr l Ces contr les sont plac s en d but de chaque plaque ATTENTION Manipuler les barrettes de micropuits avec soin Ne pas toucher la face inf rieure externe des puits 3 Si n cessaire disposer les barrettes de micropuits dans le support Les barrettes doivent t
50. mide con un lector de microplacas REACTIVOS Componentes del kit de 480 tests C digo de producto 933245 5 microplacas recubiertas con ant geno core del virus de la hepatitis B HBcAg recombinante 8 tiras de 12 micropozos en cada soporte frasco de conjugado de anticuerpo monoclonal murino 125 mL mezcla de anti IgG humana y anti IgM humana conjugados con peroxidasa de r bano y que contiene estabilizadores de proteinas Conservante ProClin 300 al 1 frasco de diluyente de muestra 150 mL soluci n salina tamponada con fosfato y con estabilizadores de proteinas Conservante timerosal al 0 02 vial de pastillas de OPD 30 pastillas contiene o fenilendiaminas2HCl frasco de Tamp n Substrato 190 mL tamp n citrato fosfato con per xido de hidr geno al 0 02 Conservante timerosal al 0 01 vial de control positivo humano 1 0 mL Origen Suero o plasma humano con anti HBc pero no reactivo ni para el HBsAg ni para el anticuerpo del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 HIV 1 y tipo 2 HIV 2 Conservante timerosal al 0 02 ORTHO 19 2 viales de control negativo humano 1 0 mL cada uno Origen Suero humano no reactivo para el anti HBc ni para HBsAg ni para el anticuerpo del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 HIV 1 y tipo 2 HIV 2 Conservante timerosal al 0 02 21 etiquetas adhesivas desechables para microplacas Componentes del kit de 2400 tests C digo de producto 933275 25
51. minutes Pr parer une quantit suffisante de solution de substrat avant son utilisation indiqu e l tape 12 afin d obtenir une dissolution complete des comprim s d OPD Voir la section PREPARATION DES REACTIFS N utiliser qu une seule pr paration de solution de substrat sur une m me plaque Apr s la seconde incubation laver les puits comme lors de l tape 7 D poser 200 yl de solution de substrat dans tous les puits y compris dans le puits 1A Incuber temp rature ambiante l abri de la lumi re pendant 30 minutes 1 minute D poser 50 ul d acide sulfurique 4N H SO dans tous les puits y compris le puits 1A L acide doit tre ajout en un jet constant et fort pour assurer un bon m lange ou si n cessaire les plaques peuvent tre tapot es ou agit es sur un agitateur de microplaques Eviter de projeter le contenu des micropuits En cas d utilisation d un processeur de plaques automatique suivre les instructions du fabricant pour assurer le m lange de l acide sulfurique Si n cessaire essuyer avec soin le dessous des barrettes de micropuits avec un chiffon absorbant doux et non pelucheux avant la lecture Si n cessaire mettre les barrettes niveau dans le support Lire la microplaque une longueur d ondes de 490 nm ou 492 nm Pour les lectures en double longueur d ondes r gler la longueur d ondes de r f rence sur 620 nm ou 630 nm Faire le blanc sur le puits 1A selon les instructions donn es par le fabricant
52. mples containing azide Sodium azide inhibits horseradish peroxidase activity Serum or plasma may be stored at 2 to 8 C for up to seven days If longer storage is necessary the specimens should be frozen 20 C or lower to limit possible contamination Storage of specimens in self defrosting freezers is not recommended No effect was observed on reactivity in ORTHO HBc ELISA Test System when 12 weakly reactive and 12 nonreactive specimens were subjected to five freeze thaw cycles Clear nonhemolyzed specimens are preferred Precipitates in specimens should be removed by centrifugation All specimens should be handled as if capable of transmitting infectious agents If specimens are to be shipped they must be packed in compliance with federal regulations covering the transportation of etiologic agents 1 Studies have demonstrated that specimens may be shipped at ambient temperature up to 37 C or refrigerated 2 to 8 C for up to six days and upon arrival should be stored at 2 to 8 C For shipments requiring extensive transit times greater than six days specimens should be kept frozen 20 C or lower PROCEDURE Materials Provided ORTHO HBc ELISA Test System 480 Test Kit Product Code 933245 2400 Test Kit Product Code 933275 See REAGENTS for complete listing Materials Required But Not Provided 1 DHe p 10 11 12 13 14 Adjustable multichannel micropipette capable of delivering 50 uL and 200 uL with at leas
53. munod ficience acquise humaine de type 1 HIV 1 et de type 2 HIV 2 Conservateur thim rosal 0 02 96 5 flacons de contr le n gatif humain 1 0 ml chaque Source s rum humain d pourvu d anticorps anti HBc de HBsAg et d anticorps dirig s contre le virus de l immunod ficience acquise humaine de type 1 HIV 1 et de type 2 HIV 2 Conservateur thim rosal 0 02 96 84 films adh sifs jetables ATTENTION MANIPULER CES REACTIFS SELON LES PRECAUTIONS APPROPRIEES RELATIVES A UN MATERIEL POTENTIELLEMENT INFECTIEUX Conserver entre 2 et 8 C POUR DIAGNOSTIC IN VITRO Le test ORTHO HBc ELISA Test System r pond aux criteres du Comit de r f rence de la FDA sur les anticorps dirig s contre l antigene du nucl oide du virus de l h patite B PRECAUTIONS D EMPLOI 1 10 11 ATTENTION Ce coffret contient des d riv s de sang humain Aucune m thode de diagnostic ne pouvant garantir compl tement contre les risques de contamination due de tels produits il convient de les consid rer comme potentiellement infectieux Toujours manipuler ces r actifs et pr l vements humains conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire 8 9 Porter des gants a usage unique pour toute manipulation des r actifs et pr levements et se laver soigneusement les mains ensuite Tous les chantillons doivent tre manipul s comme des agents potentiellement infectieux Evacuer tous les chantillons et mat riaux utilis s po
54. n P Enzyme linked immunosorbent assay ELISA quantitative assay of immunoglobulin G Immunochem 1971 8 871 4 Voller A Bidwell D Bartlett A Microplate enzyme immunoassays for the immunodiagnosis of virus infections In Rose NR Friedman H eds Manual of clinical immunology 1st ed Washington DC American Society for Microbiology 1976 506 12 Centers for Disease Control Update Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in health care settings MMWR 1988 37 24 377 87 National Committee for Clinical Laboratory Standards Proposed guideline Protection of laboratory workers from infectious disease transmitted by blood and tissue Villanova PA National Committee for Clinical Laboratory Standards 1987 7 9 NCCLS document M29 P Sehulster LM Hollinger FB Dreesman GR Melnick JL Immunological and biophysical alteration of hepatitis B virus antigens by sodium hypochlorite disinfection Appl Environ Microbial 1981 42 762 7 Bond WW Favero MS Peterson NJ Ebert JW Inactivation of hepatitis B virus by intermediate to high level disinfectant chemicals J Clin Microbiol 1983 18 535 8 Commission Directive 2001 60 EC of 7 August 2001 adapting to technical progress Directive 1999 45 EC of the European Parliament and of the Council concerning the approximation of the laws regulations and administrative provisions of the Member States
55. nce acquise humaine de type 1 HIV 1 et de type 2 HIV 2 Conservateur thim rosal 0 02 96 ORTHO n 2 flacons de contr le n gatif humain 1 0 ml chaque Source s rum humain d pourvu d anticorps anti HBc de HBsAg et d anticorps dirig s contre le virus de l immunod ficience acquise humaine de type 1 HIV 1 et de type 2 HIV 2 Conservateur thim rosal 0 02 21 films adh sifs jetables Coffret de 2400 tests code produit 933275 25 plaques de micropuits rev tus d antigene du nucl oide du virus de l h patite B HBcAg recombinant support de 8 barrettes de 12 puits chacune 5 flacons de conjugu anticorps monoclonaux murins 125 ml chaque m lange d anticorps anti IgG humaines et d anticorps anti IgM humaines conjugu s a la peroxydase de raifort avec stabilisateurs de prot ines Conservateur ProClin 300 a 1 5 flacons de diluant pour chantillon 150 ml chaque tampon phosphate salin avec stabilisateurs de prot ines Conservateur thim rosal 0 02 3 flacons de comprim s d OPD 30 comprim s chaque contenant de l o ph nyl nediamine 2HCIl 5 flacons de tampon substrat 190 ml chaque tampon citrate phosphate contenant du peroxyde d hydrog ne 0 02 Conservateur thim rosal 0 01 96 4 flacons de contr le positif humain 1 0 ml chaque Source s rum ou plasma humain contenant des anticorps anti HBc et d pourvu de HBsAg et d anticorps dirig s contre le virus de l im
56. ndiente licencia americana y mediante un acuerdo de fabricaci n compartida El ant geno recombinante es producido en Escherichia coli En la primera etapa se coloca la muestra a ensayar directamente en un micropocillo que contiene diluyente de muestra y se incuba durante un per odo de tiempo determinado Si hay anti HBc presentes en la muestra se formar n complejos antigeno anticuerpo en la superficie del micropocillo Si no hay anti HBc en la muestra no se formanr n estos complejos y las prote nas no ligadas del suero o del plasma se eliminar n en la fase de lavado En la segunda etapa se a ade el conjugado de anticuerpo al pocillo El conjugado de anticuerpo est constituido por una mezcla de anticuerpos monoclonales murinos espec ficos para IgG e IgM humanas por lo que se se une espec ficamente a la porci n de anticuerpo de los complejos ant geno anticuerpo Si no se han formado complejos ant geno anticuerpo el conjugado no ligado se elimina durante el lavado En la tercera etapa se a ade al pocillo un sistema de detecci n enzim tica compuesto de o fenilendiamina OPD y per xido de hidr geno H 0 Si el conjugado ligado est presente se oxida el OPD y se produce un compuesto coloreado Luego se agrega cido sulf rico para detener la reacci n La intensidad del color depende de la cantidad de conjugado ligado por lo tanto es funci n de la concentraci n del anti HBc presente en la muestra La intensidad del color se
57. nt free absorbent tissue before reading If necessary level the strips in the microwell holder Read the microwell strip plate at a wavelength of 490 nm or 492 nm For dual wavelength readers set the reference wavelength at 620 nm or 630 nm Blank the reader on well 1A according to the instrument manufacturer s instructions NOTE Microwell strip plates must be read within 60 minutes following the addition of 4N sulfuric acid Plates must be stored in the dark until read Quality Control Procedures 5 16 1 Substrate Blank Acceptance Criteria A plate is considered valid with respect to the substrate blank if the absorbance value of the substrate blank well well 1A is greater than or equal to 0 020 and less than or equal to 0 050 Negative Control Acceptance Criteria a Individual negative control values must be less than or equal to 0 350 and greater than or equal to 0 005 Numbers which are between 0 000 and 0 005 inclusive are valid and should be rounded to 0 000 for calculations If one of the three negative control values is outside either of these limits recalculate the negative control mean NCx based on the other two acceptable control values The plate is invalid and the test must be repeated if two or more of the three control values are outside either of the limits b Determine the mean of the negative control values NCx Example Negative Control Absorbance 1 0 200 2 0 180 3 0 160 Total Absorbance 0 540 NCx
58. ntes de o Fecha de caducidad a o mes d a Lot Number Num ro de lot N mero de lote sn Serial Number Numero de serie N mero de serie REF Catalog Number or Product Code Reference catalogue ou code produit Referencia de cat logo o C digo del producto gt Attention See Instructions for Use Attention consulter le feuillet technique Atenci n Consultar las instrucciones de uso E Manufacturer Fabricant Fabricante Authorized Representative in the European Community Mandataire dans l Union europ enne Representante autorizado en la Uni n F S 3 o m n Contains Sufficient for n Tests Suffisant pour lt lt n gt gt dosages Contiene suficiente para n ensayos 29 In vitro Diagnostic Medical Device Pour diagnostic in vitro Producto sanitario para diagn stico in vitro gt Upper Limit of Temperature Conserver une temp rature gale ou inf rieure Limite superior de temperatura Lower Limit of Temperature Conserver une temp rature gale ou sup rieure Limite inferior de temperatura gt Temperature Limitation Conserver une temperature comprise entre Limitaci n de temperatura E n Consult Instructions for Use n Version Consultez le feuillet technique lt lt n gt gt Version Atenci n ver las instrucciones de uso n versi n va Biological Risks Risques biologiques Riesgos biol
59. o anterior producida por el virus de la hepatitis B Un resultado no reactivo en el an lisis no excluye la posibilidad de exposici n al virus de la hepatitis B ya que al inicio de la infecci n las concentraciones de anti HBc podr an estar por debajo del l mite de detecci n El control positivo en el kit de prueba no debe usarse para la determinaci n cuantitativa de la sensibilidad del ensayo El control positivo se usa para verificar que los componentes del kit son capaces de detectar una muestra reactiva siempre que se haya cumplido estrictamente con el procedimiento del test Si los valores del control positivo est n fuera del rango de linealidad del lector de microplacas no se puede usar el control positivo para evaluar la precisi n del an lisis RESULTADOS ESPERADOS La frecuencia de anti HBc en una poblaci n var a mucho seg n la regi n geogr fica y la poblaci n estudiada En un estudio de donantes voluntarios de sangre que dieron resultados negativos para HBsAg se encontr que el 1 di reacci n positiva para anti HBc 24 CARACTER STICAS ESPEC FICAS DEL RENDIMIENTO Reactividad en donantes de sangre supuestamente sanos Tres estudios cl nicos independienes se analizaron un total de 3010 muestras de donantes de sangre presumiblemente sanos Los resultados de la reactividad con ORTHO Hbc ELISA Test System se muestran en la Tabla 1 Se analiz un total de 3010 muestras de las cuales 2969 fueron no reactivas
60. ocole a t strictement respect Lorsque les r sultats du contr le positif se situent en dehors de la plage de lin arit du lecteur de microplaques le contr le positif ne peut pas tre utilis pour valuer la pr cision de la m thode RESULTATS ATTENDUS La fr quence des anticorps anti HBc dans une population donn e d pend en grande partie des conditions g ographiques locales et de la population tudi e Au cours d une tude sur des donneurs volontaires ayant obtenu des r sultats n gatifs pour HBsAg 1 des chantillons ont pr sent des r sultats positifs pour les anticorps anti HBc 2 PERFORMANCES SPECIFIQUES 17 R activit chez des donneurs de sang suppos s en bonne sant Trois laboratoires cliniques ind pendants ont test un total de 3010 chantillons provenant de donneurs suppos s en bonne sant Les r sultats de la r activit du test ORTHO HBc ELISA Test System sont indiqu s au tableau 1 Parmi les 3010 chantillons test s 2969 taient n gatifs Le taux de r activit r p t e du test ORTHO HBc ELISA Test System tait de 1 1 pour cette population faible fr quence Tableau 1 D tection des anticorps anti HBc dans le s rum ou le plasma de donneurs de sang suppos s en bonne sant NOMBRE POSITIFS D ECHANTILLONS INITIALEMENT INITIALEMENT DE FACON LABORATOIRE TESTES NEGATIFS POSITIFS REPETEE 1 1033 1016 17 16 98 4 1 6 1 5 2 1000 989 11 7 98 9 1 1 0 7 3 977
61. piente equivalente para reactivos DAPR Lavador de microplacas capaz de dispensar y aspirar de 300 uL a 800 uL por pocillo Para conseguir m s informaci n t cnica consulte el manual del operador del equipo 7 Lector de microplacas de dos longitudes de onda capaz de leer a 490 nm o 492 nm con un filtro de referencia de 620 nm o 630 nm Si se utiliza un instrumento sin filtro de referencia las zonas del fondo de los pocillos que est n opacas o rayadas podr an dar lugar a lecturas elevadas La linealidad de un lector de microplacas debe cubrir al menos de 0 a 2 5 unidades de absorbancia Consulte las especificaciones del fabricante del instrumento Incubador de 37 C 1 C seco o humidificado 9 Es aceptable usar agua destilada o desionizada o agua tipo o tipo Il para reactivos de laboratorio cl nico Vea la secci n PRECAUCIONES 10 Hipoclorito s dico al 5 25 lej a comercial 11 Acido sulf rico 4N H SO disponible en Espa a a trav s de Ortho Clinical Diagnostics Inc C digo de producto 40011 o equivalente Para determinar si el cido sulf rico de otro fabricante es apropiado prepare la soluci n de substrato como se describe en la secci n PREPARACI N DE REACTIVOS Agregue 200 uL de soluci n de substrato a tres pocillos y luego agregue a cada uno 50 uL del H SO 4N de prueba Lea los pocillos a una longitud de onda de 490 nm o 492 nm con un filtro de referencia de 620 nm o 630 nm a 0 minutos y a 60
62. re niveau dans le support Si la plaque est incompl te la compl ter avec des puits noirs ou vierges 4 Enregistrer sous la forme d un plan de plaque la position des contr les et des chantillons dans les micropuits Disposer les contr les de mani re avoir le blanc substrat dans le puits 1A A partir du puits 1A disposer de facon horizontale ou verticale les contr les selon la configuration suivante La configuration d pend de la programmation informatique 14 5 10 11 12 13 14 15 Puits 1A Blanc substrat Contr le negatif Contr le negatif Contr le negatif Contr le positif Contr le positif Verifier que les systemes de distribution manuels utilises delivrent les volumes specifies mentionnes dans le protocole selon les instructions du fabricant Ajouter les contr les et les chantillons dans les micropuits de la maniere suivante a 200 yl de diluant d chantillon dans tous les puits sauf 1A b 10 ul de contr le ou d chantillon dans les puits appropri s c Si les contr les et les chantillons ont t distribu s manuellement apr s avoir rempli les micropuits placer le support de barrettes de micropuits sur un agitateur de microplaques pendant 5 10 secondes L agitateur doit tre utilis une vitesse lente ou mod r e en vitant de projeter le contenu des puits Pour le traitement manuel des plaques recouvrir le support de micropuits d un film protecteur En cas d utili
63. relating to the classification packaging and labelling of dangerous preparations National Committee for Clinical Laboratory Standard Approved guideline Preparation and testing of reagent water in the clinical laboratory 2nd ed Villanova PA National Committee for Clinical Laboratory Standards 1991 11 13 NCCLS document C3 A2 ISBN 1 562328 127 X Interstate Shipment of Etiologic Agents 42 CFR Part 72 National Committee for Clinical Laboratory Standards Proposed guideline Specifications for immunological testing for infectious diseases Villanova PA National Committee for Clinical Laboratory Standards 1991 11 9 NCCLS document I LA 18 P National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved guideline Internal quality control testing principles and definition Villanova PA National Committee for Clinical Laboratory Standards 1990 NCCLS document C24 A Data on file with Ortho Clinical Diagnostics Inc Raritan New Jersey 27 28 KEY TO SYMBOLS LEGENDE DES SYMBOLES CLAVE DE LOS SIMBOLOS The following symbols may have been used in the labeling of this product Les symboles suivants ont pu tre utilis s sur l tiquette de ce produit Los siguientes s mbolos pueden haber sido empleados en el etiquetado de este producto Do Not Reuse Ne pas r utiliser No reutilizar SS Use by or Expiration Date Year Month Day A utiliser avant la date de p remption ann e mois jour Usar a
64. sation d un processeur de plaques automatique pour l incubation suivre les instructions du fabricant en ce qui concerne la couverture de la plaque Incuber 37 C 1 C pendant 60 minutes 5 minutes Si n cessaire mettre les barrettes niveau dans le support A l aide d un dispositif d aspiration lavage aspirer et laver tous les puits cinq fois l aide du tampon de lavage 1X ATTENTION Suivre strictement la proc dure de lavage d crite ci dessous pour assurer un niveau de performance maximum du test Proc der selon les indications ci dessous afin d obtenir un lavage parfait a Aspirer le contenu des microplaques et remplir avec le tampon de lavage Eviter tout d bordement Attendre environ 20 secondes entre l addition du tampon de lavage et l aspiration suivante b R p ter la s quence aspiration remplissage quatre fois c Aspirer compl tement le contenu de chaque puits Si n cessaire retourner la plaque et tapoter fermement sur une serviette en papier propre afin d liminer toute trace de tampon de lavage D poser 200 yl de conjugu anticorps dans tous les puits l exception du puits 1A En cas de traitement manuel des plaques de micropuits recouvrir le support de barrettes de micropuits d un film protecteur neuf En cas d utilisation d un processeur automatique pour l incubation suivre les instructions du fabricant en ce qui concerne la couverture de la plaque Incuber 37 C 1 C pendant 60 minutes 5
65. t 5 accuracy or equivalent reagent dispenser Fixed or adjustable single channel micropipette capable of delivering 10 uL with at least 10 accuracy or equivalent sample dilutor 5 uL to 250 uL disposable pipette tips or equivalent Appropriately sized serological pipette or graduated cylinder Multichannel micropipette reservoir or equivalent reagent container Multichannel aspirator washer device capable of dispensing and aspirating 300 uL to 800 uL per well Consult the device s operator s manual for additional technical information Dual wavelength microwell reader capable of reading at 490 nm or 492 nm with a reference filter of 620 nm or 630 nm If an instrument without a reference filter is used areas in the bottom of the microwells that are opaque scratched or irregular may cause elevated readings Linearity of the microwell reader must range from at least 0 to 2 5 absorbance units Consult the instrument manufacturer s specifications 37 C 1 C incubator dry or humidified Distilled or deionized water clinical laboratory reagent water Type or Type Il is acceptable see PRECAUTIONS section 5 2596 sodium hypochlorite chlorine bleach 4N sulfuric acid H SO available in the United States from Ortho Clinical Diagnostics Inc Product Code 933040 or equivalent To determine the suitability of another source of acid prepare Substrate Solution as described under PREPARATION OF REAGENTS Add 200 pL of Substrate Solution to thre
66. t de peroxyde d hydrogene En cas de pr sence du conjugu fix l OPD est oxyd e entrainant l apparition d une coloration De l acide sulfurique est alors ajout pour arr ter la r action L intensit de la coloration est proportionnelle la quantit de conjugu li et donc la concentration d anticorps anti HBc pr sents dans le pr l vement L intensit de la coloration est mesur e par un lecteur de microplaques MATERIEL FOURNI Coffret de 480 tests code produit 933245 5 plaques de micropuits rev tus d antigene du nucl oide du virus de l h patite B HBcAg recombinant support de 8 barrettes de 12 puits chacune 1 flacon de conjugu anticorps monoclonaux murins 125 ml m lange d anticorps anti IgG humaines et d anticorps anti IgM humaines conjugu s la peroxydase de raifort avec stabilisateurs de prot ines Conservateur ProClin 300 1 1 flacon de diluant pour chantillon 150 ml tampon phosphate salin avec stabilisateurs de prot ines Conservateur thim rosal 0 02 1 flacon de comprim s d OPD 30 comprim s contenant de l o ph nyl nediamine 2HCI 1 flacon de tampon substrat 190 ml tampon citrate phosphate contenant du peroxyde d hydrog ne 0 02 Conservateur thim rosal 0 01 96 1 flacon de contr le positif humain 1 0 ml Source s rum ou plasma humain contenant des anticorps anti HBc et d pourvu de HBsAg et d anticorps dirig s contre le virus de l immunod ficie
67. the date the pouch is opened and the expiration date of the unused wells on the pouch Performing the test on less than a full plate is permitted as long as the following conditions are met Microwell strips from different plates can be mixed to assemble full or partial plates as long as they are from the same lot within the open pouch expiration date and have come from plates that have previously demonstrated proper response to kit controls When assembling a plate which contains strips from a newly opened previously untested plate one of these strips should be placed at the beginning of the plate and receive the full complement of kit controls CAUTION Handle microwell strips with care Do not touch the bottom exterior surface of the wells Assemble the microwell strips into the microwell strip holder if necessary Microwell strips must be level in the microwell strip holder For incomplete plates add black or uncoated microwell strips Prepare a record plate map identifying the placement of the controls and specimens in the microwells Arrange the assay control wells so that well 1A is the substrate blank From well 1A arrange all controls in a horizontal or vertical configuration as follows Configuration is dependent upon software Well 1A Substrate Blank Negative Control Negative Control Negative Control Positive Control Positive Control Verify that any manual dispensing equipment is set to deliver the specified volumes as state
68. tis B Surface Antigen Peroxidase Conjugate Concentrate Antibody to Hepatitis B Surface Antigen Peroxidase Conjugate Concentrate Anticorps dirig contre l antig ne de surface du virus de l h patite B conjugu concentr la peroxydase Anticuerpo frente al ant geno de superficie de la hepatitis B concentrado de conjugado a peroxidasa ale Der Gr ne Punkt the Green Dot Manufacturer follows certain packaging material waste disposal management regulations Der Gr ne Punkt Point Vert Le fabricant suit certaines regles de mise au rebut pour les d chets des mat riaux d emballage Punto Verde der gr ne Punkt El fabricante sigue la regulaci n sobre gesti n de residuos de los embalajes 31
69. ue de micropuits Une quantit suppl mentaire sera peut tre n cessaire selon le systeme de distribution utilis Voir les instructions du fabricant ce propos Ci dessous les directives d utilisation g n rale Nombre Nombre Nombre de comprim s Tampon de puits de plaques d OPD substrat ml 48 0 5 1 12 96 1 2 24 144 1 5 3 36 192 2 4 48 240 2 5 5 60 288 3 6 72 La solution de substrat est stable pendant 60 minutes apres l addition des comprim s d OPD quand elle est conserv e temp rature ambiante et l abri de la lumi re La solution doit tre incolore ou jaune tr s p le au moment de l utilisation Noter l heure de l addition des comprim s d OPD au tampon substrat et l heure limite d utilisation Si la solution est nettement jaune ne pas l utiliser et recommencer la pr paration RECUEIL ET PREPARATION DES ECHANTILLONS Aucune pr paration particuliere du patient n est n cessaire avant le recueil de l chantillon sanguin Le pr l vement sanguin doit se faire selon les techniques m dicales reconnues Les plasmas recueillis avec une quantit inad quate d anticoagulant ne doivent pas tre utilis s Les s rums ou les plasmas recueillis avec de l EDTA de l h parine ou du citrate comme anticoagulant peuvent tre utilis s et doivent tre test s le plus rapidement possible Ne pas utiliser d chantillons inactiv s la chaleur Ne pas utiliser d azide pour la conservation des chantillons Ne pas tester d
70. ue de type ou Il galement acceptable voir la section sur les PRECAUTIONS D EMPLOI 10 Hypochlorite de sodium a 5 25 eau de Javel 11 Acide sulfurique 4N H SO Pour d terminer si un autre acide peut tre utilis pr parer la solution de substrat selon les indications fournies la section PREPARATION DES REACTIFS Ajouter 200 ul de solution de substrat dans trois micropuits puis 50 ul de H SO 4N dans les trois micropuits Lire la longueur d ondes de 490 nm ou 492 nm avec un filtre de r f rence de 620 nm ou 630 nm au temps 0 et au temps 60 minutes Chaque densit optique obtenue doit tre inf rieure ou gale 0 050 12 Barrettes de micropuits noirs ou puits vierges quivalents 13 Tampon de lavage concentr 20X code produit 933730 6 x 150 ml code produit 933780 4 x 450 ml code produit 933790 12 x 450 ml Ortho Clinical Diagnostics Inc tampon phosphate contenant du chlorure de sodium et un d tergent Conservateur 2 chloroac tamide a 2 14 Agitateur de microplaques a vitesse variable 100 a 400 t mn quand la distribution des chantillons n a pas t r alis e avec un pipeteur dilueur Procedure 1 Avant le d but du test laisser revenir tous les r actifs du coffret a temp rature ambiante 15 a 30 C Homog n iser doucement le contenu des flacons en les retournant a plusieurs reprises tout en vitant de les faire mousser V rifier la temp rature de l incubateur et la
71. un chantillon positif selon la proc dure pr conis e par le fabricant 15 Une plaque est validee par rapport aux r sultats positifs si les densit s optiques des deux contr les positifs sont sup rieures ou gales 0 800 dans la limite de lin arit du lecteur et si la diff rence de densit optique entre les deux contr les positifs n est pas sup rieure 0 500 Tout autre r sultat pour le contr le positif doit tre consid r comme erron REMARQUE Les r sultats d passant la limite sup rieure de l intervalle de lin arit du lecteur de microplaques apparaissent sous la forme suivante OVER ou ou gt 4 Calcul de la valeur seuil Valeur seuil CN 0 400 Exemple Contr le n gatif Densit optique 1 0 200 2 0 180 3 0 160 Densit optique totale 0 540 CN Densit optique totale _ 0 180 3 Valeur seuil 0 180 0 400 0 580 INTERPRETATION DES RESULTATS 1 Les chantillons dont la densit optique est inferieure a 0 005 doivent tre retest s dans un seul micropuit L chantillon est consid r comme n gatif si la nouvelle densit optique est inf rieure la valeur seuil m me si cette valeur reste inf rieure 0 005 2 Les chantillons dont la densit optique est inf rieure la valeur seuil et sup rieure ou gale 0 005 sont consid r s comme n gatifs Il n est pas n cessaire de proc der a d autres tests 3 Les chantillons dont la densit optique
72. ur la r alisation du test comme s ils contenaient des agents infectieux Leur vacuation doit se faire en respectant toutes les r glementations locales r gionales et nationales en vigueur concernant l vacuation des d chets 10 11 Lacide sulfurique 4N H5SO est un acide puissant Essuyez imm diatement toute quantit renvers e et rincer la zone l eau En cas de contact avec la peau ou les yeux rincer grande eau et consulter un m decin Ne manipuler les comprim s d OPD qu avec des pinces en plastique ou recouvertes de T flon Les pinces m talliques peuvent r agir avec l OPD et fausser les r sultats L OPD risquant de causer des irritations ou des allergies cutan es viter tout contact avec les yeux la peau ou les v tements En cas de contact avec la peau laver soigneusement l eau L OPD est toxique en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau En cas de malaise appeler un m decin Ci dessous figurent les recommandations sur les risques et la s curit 12 N R 20 21 25 36 40 43 50 53 68 Nocif par inhalation et par contact avec la peau Toxique en cas d ingestion Irritant pour les yeux Effet canc rog ne suspect preuves insuffisantes Peut entra ner une sensibilisation par contact avec la peau Tr s toxique pour les organismes aquatiques peut entrainer des effets n fastes long terme pour l environnement aquatique Possibilit d effets irr versibles S 26 28 36 37 45 60 61 En cas
73. were also anti HBs reactive The anti HBc reactivity for HCV and liver disease specimens is probably the result of other risk factors SUMMARY OF REVISIONS Section Front Cover REAGENTS PRECAUTIONS GERMAN GLOSSARY OCD Identification Page Distributed By BIBLIOGRAPHY Revision Standardized cover format including use of IVD symbols Changed conjugate preservative from 0 02 Thimerosal to 1 ProClin 300 Updated OPD and added ProClin 300 safety statements Removed German language section Added new glossary symbol chart Updated Chiron logo Removed Distributed By countries Added bibliographic entry 12 10 Antigene du necl oide core du virus de l h patite B recombinant ORTHO HBc ELISA Test System Test immuno enzymatique pour la d tection des anticorps dirig s contre l antig ne du nucl oide du virus de l h patite B anti HBc dans le s rum ou le plasma humain Ce r actif a est enregistr l Agence du M dicament sous le num ro H83180 INTRODUCTION Le test ORTHO HBc ELISA Test System est un test qualitatif bas sur le principe des tests immuno enzymatiques destin d tecter les anticorps totaux dirig s contre l antigene du nucl oide du virus de l h patite B anti HBc dans e s rum ou le plasma humain pour tester le sang et les produits sanguins destin s aux transfusions ou pour aider au diagnostic de l h patite virale B pr sente ou pass e INTERET DU DIAGNOSTIC Plus

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