Albumina Bovina 22% - WAMA Diagnóstica Produtos para
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1. 7 Deixar os reagentes adquirir a temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar os testes 8 Os reagentes devem ser tampados imediatamente ap s o uso 9 N o usar reagentes ap s a data de validade 10 Os procedimentos informados s o apenas para testes manuais Ao usar instrumentos autom ticos ou semiautom ticos deve ser seguido o procedimento que est contido no manual do operador fornecido pelo fabricante do instrumento 11 Descartar o material conforme regulamenta es locais 12 Utilizar a Boas Pr ticas de Laborat rios BPLs na conserva o manuseio e descarte dos materiais TERMO DE GARANTIA AWAMA Diagn stica garante a troca deste conjunto diagn stico desde que o mesmo esteja dentro do prazo de validade e que seja comprovado por sua assessoria t cnica que n o houve falhas na execu o manuseio e conserva o deste produto AWAMA e seus distribuidores n o se responsabilizar o por falhas no desempenho do kit sob essas condi es ENGLISH SUMMARY The Rh system was discovered by Wiener Landsteiner and Levine in 1940 when they were studying sensitization In saline solution NaCl 0 85 positive ions of sodium Na are attracted to the erythrocytes creating a double layer of positive charges which generates a strong interglobular repulsion The cloud of positive ions that involves each erythrocyte becomes less dense as it moves away from the erythrocyte The difference of electric potential created2. a data de vencimento impressa na etiqueta do frasco Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Cont m azida s dica lt 0 095 w v como conservante Fornecido em frascos conta gotas com volume de 50 ul por gota N O CONGELAR Somente para uso in vitro Obs O kit mant m o mesmo desempenho ap s a primeira utiliza o e est vel at a data de validade descrita no r tulo desde que mantido na temperatura indicada 2 8 C AMOSTRAS Usar amostra de sangue fresco Evitar amostras hemolizadas Se n o for poss vel realizar os testes ap s a coleta a amostra deve ser conservada refrigerada entre 2 8 C O armazenamento prolongado da amostra pode causar deteriora o do ant geno e resultar em classifica o incorreta MATERIAL NECESS RIO MAS N O FORNECIDO Tubos testes 10x 75mm ou 12x75 mm e Micropipeta de 50uI 100ule 1000pl e ponteiras Centr fuga Solu o salina fisiol gica 0 85 ou 0 9 Banho Maria Recipiente para descarte de material PROCEDIMENTO I PESQUISA DE ANTICORPOS IRREGULARES EM PROVA INDIRETA DA GLOBULINA ANTI HUMANA COOMBS INDIRETO Seu objetivo o de detectar anticorpos dos grupos sangu neos capazes de causar rea es hemol ticas realizada em 4 fases a 1 2 e 3 fases s o mais eficientes na detec o de IgM enquanto a 4 fase detecta IgG 1 FASE Meio Salino Temperatura Ambiente 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias compat veis com o s
3. BOVINA 22 4 Pipetar 100 ul do soro cujo anticorpo se pretende titular nos tubos 1 e 2 Usando uma ponteira descart vel homogeneizar a solu o do tubo 2 e transferir 100 ul do homogeneizado para o tubo 3 Repetir o procedimento at o tubo 10 sempre usando uma ponteira para cada dilui o 5 Pipetar 100 ul da suspens o de hem cias a 5 em ALBUMINA BOVINA 22 em cada tubo 6 Homogeneizar atrav s de leve agita o e incubar a 37 C por 15 minutos 7 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 8 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias de cada tubo e examinar a presen a ou n o de aglutina o Anotar os resultados 9 Nos tubos cuja aglutina o for fraca 1 ou ausente realizar o teste da Antiglobulina Humana vide 4 Fase da Prova de Compatibilidade No Tubo Alb mina Antiglobulina a 3 2 0 T TULO 11 1 2 1 4 1 8 1 16 1 512 INTERPRETA O DO TESTE O t tulo do anticorpo ser a maior dilui o que apresentar aglutina o no teste da Antiglobulina Humana Teste de Coombs Indireto No quadro acima o t tulo seria de 1 64 ESPECIFICIDADE DO TESTE O desempenho do Imuno HEMATO Albumina Bovina foi avaliada em 91 amostras colhidas com os anticoagulantes recomendados A avalia o demonstrou especificidade de 100 de cada reagente quando comparados com os resultados de um Kitutilizado no mercado Coeficiente de Varia o inter ensaio
4. between the double layer of positive ions Na next erythrocyte and the middle with ions of sodium and chlorine in equilibrium neutral is called Zeta Potential The force of repulsion between the erythrocytes in saline depends on the value of the Zeta potential The agglutinability of a system is greater the lower the value of the Zeta potential Pollack has enlisted the terms ofits expression according to the following equation where y electric charge of erythrocyte D dielectric constant u ionic strength of the medium This equation shows that the reductions in Zeta potential increase the agglutinability of system or even promote the agglutination of erythrocytes in suspension if the critical Zeta potential Zc is reached As the critical Zeta potential Zc of suspension of sensitized red blood cells by anti RhD antibodies of IgM class is greater in absolute value the suspension itself in NaCl 0 85 these antibodies are called binders In contrast the critical Zeta potential Zc in the presence of IgG anti RhD antibodies being lower than the suspension in 0 85 NaCl no agglutination of erythrocytes occurs and these antibodies are called non binders The human antiglobulin test or Coombs test represents the most important way of artificial agglutination in immunohematology By an immunological procedure this reaction allows us reveal the presence of non binding antibodies in the erythrocyte membrane The sensiti
5. of tube 2 and transfer 100 q of the homogenate to tube 3 Repeat the procedure until the tube 10 always using a pipette tip for each dilution 5 Dispense 100 pl of the suspension of 5 erythrocytes into 22 bovine albumin in each tube 6 Mix by gentle agitation and incubate at 37 C for 15 minutes 7 Centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 8 Gently resuspend the button of erythrocytes of each tube and examine for the presence of agglutination Record the results 9 Tubes whose agglutination is weak 1 or absent perform the Human Antiglobulin test see Phase 4 of compatibility Test l Yat 1 32 1 64 AM INTERPRETATION OF THE TEST The titer of the antibody will be the highest dilution that shows agglutination in the Human Antiglobulin Test Indirect Coombs In table above the title would be 1 64 TEST SPECIFICITY The performance of the Imuno HEMATO Albumina Bovina 22 was evaluated in 91 samples collected with the recommended anticoagulants The evaluation showed 100 specificity for each reagent when compared with the results of a Kit used on the market Coefficient of Variation inter intra assay test Application Limit a Intra Assay Precision 2 samples were selected from quality control 2 negative to perform the repeatability test 20 repetitions of the testwas done by the same operator on the same day According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Al
6. procedimentos mais utilizados a adi o de albumina bovina a 22 ao meio A adi o de albumina bovina a 22 aumenta a constante diel trica D do meio de suspens o e baixa o valor do potencial Zeta Z favorecendo a aglutina o das hem cias Favorece tamb m a fixa o inicial dos anticorpos membrana eritrocit ria pela dissipa o de ons positivos pr ximos membrana O Imuno HEMATO ALBUMINA BOVINA 22 da WAMA uma solu o para potencializar a sensibilidade do teste de gamaglobulina humana Coombs indireto na detec o de anticorpos anti Rh D incompletos podendo ser utilizado em testes de compatibilidade na identifica o e triagem de anticorpos O uso da albumina bovina tamb m permite a redu o do tempo de realiza o do teste PRINC PIO DO M TODO O procedimento do ensaio baseado no princ pio da aglutina o onde c lulas vermelhas possuindo o ant geno correspondente aglutinar o na presen a do anticorpo espec fico dirigido contra o ant geno O uso da albumina bovina a 22 amplificar a sensibilidade do teste APRESENTA O DO KIT 1057010 D 10ml 1 Albumina Bovina a 22 1 x 10 ml 2 Instru es para uso 1057050 D 50ml 1 Albumina Bovina a 22 5x10 ml 2 Instru es para uso 1057100 D 100ml 1 Albumina Bovina a 22 10 x 10 ml 2 Instru es para uso PREPARAC O E ESTABILIDADE DOS REATIVOS ALBUMINA BOVINA 22 1 pronto para uso Est vel entre 2 8 C at
7. MS 10310030160 Imuno Hemato Reagente para aumentar a reatividade dos anticorpos e reduzir o tempo de execu o dos testes de antiglobulina humana indireta Teste de Coombs Indireto Reagent to increase the reactivity of the antibodies and reduce the execution time ofthe indirect human antiglobulin test indirect Coombs Test Reactivo para aumentar la reactividad de los anticuerpos y reducir el tiempo de ejecuci n de la prueba de antiglobulina indirecta test de Coombs indirecto 1057010 D 10ml 1057050 D 50m 1057100 D 100m M WAMA Diagn stica Rua Aldo Germano Klein 100 CEAT CEP 13573 470 S o Carlos SP Brasil Fone 55 16 3377 9977 Fax 55 16 3377 9970 www wamadiagnostica com br SAC 0800 772 9977 wAma PORTUGU S IMPORT NCIA CL NICA O sistema Rh foi descoberto por Wiener Landsteiner e Levine em 1940 quando faziam estudos de sensibiliza o Em meio salino NaCl 0 85 ons positivos de s dio Na s o atra dos para junto das hem cias criando uma camada dupla de cargas positivas que gera uma forte repuls o interglobular A nuvem de ons positivos que envolve cada hem cia torna se menos densa medida que se distancia da hem cia A diferen a de potencial el trico criada entre a camada dupla de ons positivos Na pr xima da hem cia e o meio com ons de s dio e cloro em equil brio neutro chamada Potencial Zeta A for a de repuls o entre as hem cias em meio salino de
8. ONGELAR Para uso diagn stico in vitro Nota El kit mantiene el mismo rendimiento despu s de la primera utilizaci n y es estable hasta la fecha de caducidad descrita en la etiqueta siempre que se mantenga a la temperatura indicada 2 8 C ESPEC MENES Utilice muestra de sangre fresca Evite muestras hemolizadas Si no es posible realizar las pruebas despu s de la recolecci n la muestra debe mantenerse refrigerada a una temperatura de 2 8 C El almacenamiento a largo plazo de la muestra puede provocar el deterioro de los ant genos y resultado de clasificaci n incorrecta MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Tubos de ensayo 10x75mmo12x75 mm e Micropipeta de 50pal 100ul y 10004 y puntas de pipeta Centr fuga Soluci n salina fisiol gica 0 85 0 0 9 e Ba o de agua e Recipiente para descarte de material PROCEDIMIENTO I ESTUDIO DE ANTICUERPOS IRREGULARES EN ANTI GLOBULINA HUMANA INDIRECTA COOMBS INDIRECTO Su prop sito es detectar anticuerpos de grupos sangu neos capaces de provocar reacciones hemol ticas Se lleva a cabo en 4 fases la 1 22 y 3 etapas son m s eficientes en la detecci n de IgM mientras que la 4 fase detecta IgG 1 FASE Soluci n salina a temperatura ambiente 1 Preparar una suspensi n en 5 de eritrocitos lavados compatibles con el suero de paciente generalmente de tipo O Rh positivo que deben ser lavadas con soluci n salina fisiol gica lavar las c lulas 3 ve
9. Precisi n Intraensayo Se seleccionaron 2 muestras de control de calidad 2 negativos para realizar la prueba de repetibilidad 20 repeticiones del test fueran corridas por el mismo t cnico en mismo dia De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Albumina Bovina 22 repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras del ensayo en las mismas condiciones b Precisi n Interensayo Se seleccionarn 10 muestras de control de calidad 10 negativos para realizar la prueba de reproducibilidad 3 pruebas se han llevado a cabo con las mismas muestras en d as y t cnicos diferentes y con la misma suerte De acuerdo a las pruebas realizadas se verific que el kit Imuno Hemato Albumina Bovina 22 repiti satisfactoriamente los resultados con las muestras de ensayo incluso bajo diferentes condiciones LIMITACIONES DEUSO Resultados falso positivos y negativos pueden ocurrir debido a la contaminaci n de los materiales de ensayo concentraci n inadecuada de las suspensiones de c lulas insuficiente tiempo de incubaci n o temperatura o errores de procedimiento Los tiempos de centrifugaci n mencionadas son recomendaciones Un tiempo de centrifugaci n apropiado debe ser determinado por cada laboratorio y ser el que produce la reacci n m s fuerte del anticuerpo con el ant geno en las reacciones positivas y tambi n para permitir una f cil resuspensi n de botones de RBC Reacciones m s d bi
10. a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 13 Decantar o sobrenadante por invers o do tubo ressuspender o sedimento de hem cias e completar novamente com a solu o salina fisiol gica Repetir esse procedimento por 3 vezes 14 Ap s a ltima lavagem decantar completamente o sobrenadante invertendo o tubo e enxugando a borda com papel de filtro 15 Pipetar 100 ul 2 gotas do SORO DE COOMBS da WAMA 16 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 17 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o INTERPRETA O DO TESTE TESTE POSITIVO presen a de aglutina o e ou hem lise em uma ou mais fases do teste caracterizando presen a de anticorpos irregulares TESTE NEGATIVO aus ncia de aglutina o e ou hem lise em todas as fases do teste caracterizando aus ncia de anticorpos irregulares II TITULA O DE ANTICORPOS EM MEIO PROT ICO 1 Preparar uma suspens o a 5 de hem cias contendo o ant geno cujo anticorpo se pretende titular as quais dever o ser lavadas em solu o salina fisiol gica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 50 ul das hem cias lavadas 1 ml de ALBUMINA BOVINA 22 Outros volumes podem ser usados 2 Numerar tubos de ensaio 12 x 75 mm conforme o quadro abaixo 3 Pipetar em cada tubo a partir do 2 tubo 100 ul 2 gotas da ALBUMINA
11. a membrana de los eritrocitos por la disipaci n de iones positivos cerca la membrana La Imuno HEMATO ALB MINA BOVINA 22 de WAMA es una soluci n para mejorar la sensibilidad del test gammaglobulina humana Coombs indirecto en la detecci n de anticuerpos incompletos anti Rh D y se pueden utilizar en las pruebas de compatibilidad la identificaci n y detecci n de anticuerpos El uso de alb mina bovina tambi n permite la reducci n de el tiempo necesario para la realizaci n de la prueba PRINCIPIO DELM TODO El procedimiento del ensayo se basa en el principio de aglutinaci n donde las c lulas rojas de los individuos que poseen ant geno correspondiente en su superficie aglutinar n en presencia del anticuerpo especifico dirigido contra el ant geno Lo uso de alb mina s rica bovina 22 amplificar la sensibilidad de la prueba PRESENTACI N DEL KIT 1057010 D 10ml 1 22 Alb mina Bovina 1 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1057050 D 50ml 1 22 Alb mina Bovina 5 x 10 ml 2 Instrucciones de uso 1057100 D 100ml 1 22 Alb mina Bovina 10 x 10 ml 2 Instrucciones de uso PREPARACI N Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS 22 ALB MINA BOVINA 1 Listo para usar Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad impresa en el envase Almacenamiento inadecuado afecta a la eficacia del reactivo Contiene azida de sodio lt 0 095 p v como conservante Se suministra en frascos de goteo con un volumen de 50pl por gota NO C
12. bumina Bovina 22 repeated satisfactorily the results with the samples to be tested under the same conditions b Inter Assay Precision 10 semples were selected from quality control 10 negatives to perform the test of reproducibility 3 tests were performed with the same samples in different days and technicians and with same lot According to the tests carried out it was verified that the kit Imuno Hemato Albumina Bovina 22 repeated satisfactorily the results with the samples to be tested even under different conditions LIMITATIONS OF USE False positive and negative results can occur due to contamination of the test materials inadequate concentration of suspensions of cells inadequate incubation time ortemperature or errors of procedure The centrifugation times mentioned are recommendations A appropriate centrifugation time must be determined by each laboratory and will be the one that produces the strongest reaction of the antibody with the antigen in positive reactions and will also to allow for easy resuspension of RBC buttons Weaker reactions will occur more frequently with stored blood than with fresh blood Improper Storage affects the effectiveness of the reagent The described procedures are for use with the Coombs sera of WAMA As a principle Coombs sera from other manufacturers may be used butthe Laboratory must follow the procedures of these manufacturers Also the laboratory must follow approved validatio
13. ces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50 hal de eritrocitos lavados 1 ml de soluci n salina en un 12 x 75 mm tubo de ensayo Otros vol menes pueden ser utilizados Existe RBC comerciales para realizar la prueba 2 En un tubo de ensayo etiquetado de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm pipetear 50 ul de suspensi n de eritrocitos a 5 3 Pipetear en el mismo tubo 100 ul del suero a ser probado 4 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 5 Re suspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n y o hem lisis 2 fase Ambiente Proteico a temperatura ambiente 6 Pipetear en el mismo tubo anteriormente mencionado 100 pl 2 gotas de alb mina bovina al 22 1 7 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 8 Resuspende s suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n y o hem lisis 3 fase Ambiente Proteico a 37 C 9 Incubar los tubos a 37 C por 15 30 minutos 10 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 11 Resuspende r suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n y o hem lisis 4 fase Antiglobulina Humana Coombs indirecto 12 Complete el tubo con soluci n salina fisiol gica y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 13 Decantar el sobrenadante invirtiendo el tubo resuspenda el sedi
14. ci n muestra que reducciones de potencial zeta aumenta la aglutinabilidad del sistema o incluso promover la aglutinaci n de eritrocitos en suspensi n si se alcanza el potencial zeta Zc A medida que el potencial zeta cr tico Zc de la suspensi n de gl bulos rojos sensibilizados por anticuerpos anti RhD de clase IgM es mayor en valor absoluto la propia suspensi n en 0 85 NaCl estos anticuerpos se denominan aglutinantes En contraste el potencial Zeta cr tica Zc en presencia de anticuerpos IgG anti RhD siendo m s baja que la suspensi n en 0 85 de NaCl no se produce aglutinaci n de los eritrocitos y los anticuerpos se denominan no carpetas La prueba de antiglobulina humana o prueba de Coombs representa la forma m s importante de aglutinaci n en inmunohematolog a Por un procedimiento inmunol gico esta reacci n nos permite revelar la presencia de anticuerpos non binding en la membrana del eritrocito La sensibilidad de la prueba de Coombs indirecta puede ser aumentado por los procedimientos que modifican el primer paso de la reacci n es decir de la fijaci n de anticuerpos durante la incubaci n Uno de los procedimientos m s utilizados es la adici n de alb mina de suero bovino al 22 La adici n de alb mina bovina 22 aumenta la constante diel ctrica D de lo medio de suspensi n y reduce el potencial zeta Z favoreciendo la aglutinaci n de eritrocitos Tambi n favorece la fijaci n inicial de anticuerpos
15. da s dica es t xico por ingesti n 7 Dejar que los reactivos adquieran la temperatura ambiente 20 25 C antes de iniciar los tests 8 Los reactivos deben taparse inmediatamente despu s de su uso 9 No utilice el reactivo despu s de la fecha de caducidad 10 Los procedimientos son s lo para prueba manual Al usar instrumentos autom ticos o semiautom ticos procedimiento que figura en el manual del operador proporcionado porel fabricante del instrumento debe ser seguido 11 Desechar el material siguiendo regulaciones locales 12 Utilice las Buenas Pr cticas de Laboratorio BPL en el almacenamiento la manipulaci n y eliminaci n de los materiales T RMINO DE GARANT A WAMA Diagn stica garantiza el cambio del kit de diagn stico siempre que est dentro de la fecha de caducidad y que ha sido probado por su apoyo t cnico que no hubo errores t cnicos en la ejecuci n la manipulaci n y el almacenamiento de este producto WAMA y sus distribuidores no se responsabiliza por fallas en el rendimiento de los kits enestas condiciones BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAF A 1 Nance S Garraty G A new potentior of red blood cell antigen antibody reactions Am J Clin Pathol 87 5 633 5 1987 2 Roy T C F Nicholson G S Ala F A Blood grouping reagents Preparationand application methods WHO Regional Publications Eastern Mediterranean series 5 pp 87 1993 3 Novaretti M C Z Morganti L Andre
16. dling and disposal of materials WARRANTY WAMA Diagn stica guarantees the exchange of the diagnostic kit provided it is within the expiration date and is proven by its technical support that there were no technical mistakes in the execution handling and storage of this product WAMA and its distributors are not liable for failures on the performance of the kits under these conditions ESPANOL IMPORTANCIACL NICA El sistema Rh fue descubierto por Wiener Landsteiner y Levine en 1940 cuando estudiaban sensibilizaci n En soluci n salina 0 85 NaCl iones positivos de sodio Na son atra dos por los eritrocitos creando una doble capa de cargas positivas lo que genera una fuerte repulsi n interglobular La nube de ones positivos que envolve cada eritrocito se vuelve menos denso cuando se aleja del eritrocito La diferencia de potencial el ctrico entre la doble capa de ones positivos Na junto a eritrocitos y el medio con los iones de sodio y cloro en equilibrio punto muerto se denomina Potencial Zeta La fuerza de repulsi n entre los eritrocitos en la salina depende del valor del potencial zeta La capacidad de aglutinaci n de un sistema es mayor cuanto menor sea el valor del potencial zeta Pollack ha contratado los t rminos de su expresi n de acuerdo con la siguiente ecuaci n Y Z D Vy Donde Y carga el trica de eritrocitos D constante diel ctrica u fuerza i nica del medio Esta ecua
17. ero do cat logo Catalog Number N mero del cat logo Limite de temperatura Temperature Limite de temperatura au ENS Fabricado por Manufactured by Fabricado por Edi o Rev 03 2013 Proteger do calor Keep away from sunlight Proteger del calor El
18. intra ensaio Limite de Aplica o a Precis o Intra Ensaio Foram selecionadas 2 amostras do controle de qualidade 2 negativas para realizar o teste de repetibilidade Foram feitas 20 repeti es do teste com mesmo operador no mesmo dia De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Imuno Hemato Albumina Bovina 22 repetiu de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas nas mesmas condi es b Precis o Inter Ensaio Foram selecionadas 10 amostras do controle de qualidade 10 negativas para realizar o teste de reprodutibilidade foram realizados 03 testes com as mesmas amostras em dias e operadores diferentes e com mesmo lote De acordo com os testes realizados foi verificado que o kit Imuno Hemato Albumina Bovina 22 reproduz de maneira satisfat ria os resultados com as amostras testadas mesmo em diferentes condi es LIMITA ES DE USO Resultados falso positivos e negativos podem ocorrer por contamina o dos materiais do ensaio concentra o inadequada das suspens es de c lulas tempo de incuba o ou temperatura inadequados ou por erros de procedimento Os tempos de centrifuga o mencionados s o meras sugest es Um tempo de centrifuga o adequado deve ser determinado por cada laborat rio e ser aquele que produz a mais forte rea o do anticorpo com o ant geno nas rea es positivas mas tamb m que permita a ressuspens o f cil do bot o de hem cias Rea es ma
19. is fracas podem ser observadas com sangue armazenado do que com sangue fresco Armazenamento inadequado prejudica a efic cia do reagente Os procedimentos descritos s o para uso com o soro de Coombs da WAMA A princ pio soro de Coombs de outros fabricantes pode ser usado mas o Laborat rio deve seguir os procedimentos desses fabricantes Tamb m o Laborat rio deve seguir procedimentos de valida o aprovados para demonstrar a compatibilidade desses produtos PRECAU ES E ADVERT NCIAS 1 Os reagentes devem ser conservados entre 2 8 C 2 A data de validade corresponde ao ltimo dia do m s assinalado nos r tulos dos frascos e da caixa do kit 3 Deve ser evitado expor os reagentes a temperaturas elevadas bem como diretamente ao sol 4 N o congelar nenhum reagente pois isto causar deteriora o irrevers vel 5 O Imuno HEMATO ALBUMINA BOVINA 22 da WAMA embora seja derivado de fonte animal n o se pode afirmar que esteja isento de agentes infecciosos Portanto recomenda se tratar todos os reagentes como materiais potencialmente infecciosos bem como ter o mesmo cuidado no descarte destes materiais 6 Como se emprega azida s dica como conservante dos reagentes o descarte dos reativos deve ser acompanhado de grandes volumes de gua para evitar ac mulo de res duos de azida nos encanamentos pois esta pode reagir com chumbo ou cobre formando sais altamente explosivos Al m disso a azida t xica quando ingerida
20. les ser n m s frecuentes con sangre almacenada que con sangre fresca Almacenamiento inadecuado afecta a la eficacia del reactivo Los procedimientos descritos son para su uso con los sueros de Coombs de WAMA Como principio suero Coombs de otros fabricantes puede ser utilizado pero el laboratorio deben seguir los procedimientos de estos fabricantes Tambi n el laboratorio debe seguir los procedimientos de validaci n aprobados para demostrar la compatibilidad de estos productos PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS 1 Los reactivos deben conservarse entre 2 8 C 2 La fecha de caducidad se refiere al ltimo d a del mes indicado en las etiquetas del frasco y de la caja del kit 3 Evite la exposici n de los reactivos a altas temperaturas y la luz solar directa 4 No congele el reactivo ya que esto puede causar da os irreversibles 5 La Imuno HEMATO ALBUMINA BOVINA 22 de WAMA aunque derivados de origen animal no puede dar por sentado que se libre de agentes infecciosos Por lo tanto se recomienda tratar todos los reactivos como materiales potencialmente infecciosos as como tener cuidado al deshacerse de estos materiales 6 Porque hay azida de sodio como conservante en los reactivos la eliminaci n de los reactivos deben ser seguidos por los grandes vol menes de agua con el fin de evitar acumulaci n de azida de los tubos ya que este puede reaccionar con plomo o cobre formando sales altamente explosivos Por otra parte la azi
21. mento de eritrocitos y complete de nuevo con soluci n salina fisiol gica Repita este procedimiento 3 veces 14 Despu s del ltimo lavado decantar el sobrenadante completamente invirtiendo el tubo y secando la borda con papel de filtro 15 Pipetear 100 ul 2 gotas de SORO DE COOMBS de WAMA 16 Mezclar por agitaci n suave y se centrifugue a 1 000 RPM 100 a 125 g durante 1 minuto 17 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n INTERPRETACI N DELAPRUEBA PRUEBA POSITIVA presencia de aglutinaci n y o hem lisis en una o m s fases de la prueba caracterizando presencia de anticuerpos irregulares PRUEBA NEGATIVA ausencia de aglutinaci n y o hem lisis en todas las fases de la prueba caracterizando ausencia de anticuerpos irregulares ILTITULACI N DEANTICUERPOS EN MEDIO PROTEICO 1 Preparar una suspensi n en eritrocitos 5 que contiene antigeno cuyo anticuerpo se destina a titular que debe ser lavados en soluci n salina fisiol gica lavan las c lulas 3 veces en soluci n salina 0 85 o 0 9 pipetear 50 ul de eritrocitos lavados 1 ml de ALBUMINA BOVINE 22 en un tubo de ensayo 12 x 75 mm Otros vol menes pueden ser utilizados 2 Numere tubos de ensayo 12 x 75 mm de acuerdo con la tabla de abajo 3 Pipetear en cada tubo a partir del 2 tubo 100 ul 2 gotas de alb mina bovina 22 4 Pipetear 100 pl de suero cuyo anticuerpo est destinada para titular en lo
22. n procedures to demonstrate the compatibility ofthese products PRECAUTIONS AND WARNINGS 1 The reagents should be kept between 2 8 C 2 The expiry date refers to the last day of the month indicated on the labels of the vial and ofthe kit box 3 Avoid exposing the reagents to high temperatures and direct sunlight 4 Donotfreeze the reagent as this may cause irreversible damage 5 The Imuno HEMATO ALBUMINA BOVINA 22 from WAMA though derived from animal source cannot assume to be free of infectious agents Therefore it is recommended to treat all reagents as potentially infectious as well as having the care in disposing of these materials 6 Because there is sodium azide as a preservative in the reagents the disposal of reagents must be followed by large volumes of water to prevent azide buildup in pipes because this can react with lead or copper forming highly explosive salts Furthermore the azide is toxic when ingested 7 Allowthe reagents to reach the room temperature 20 25 C before starting the test 8 The reagents must be capped immediately after use 9 Do notuse the reagent after the expiration date 10 The procedures are only for manual testing When using automatic or semi automatic instruments procedure contained in the operator s manual provided by the instrument manufacturer mustbe followed 11 Discard the material following local regulations 12 Use the Good Laboratory Practices GLPs in storage han
23. nverting the tube resuspend the erythrocyte pellet and complete again with physiological saline solution Repeat this procedure 3 times 14 After the last wash decant the supernatant completely inverting the tube and drying the edge with filter paper 15 Pipette 100 ul 2 drops of SORO DE COOMBS from WAMA 16 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 17 Gently resuspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination TESTINTERPRETATION POSITIVE TEST presence of agglutination and or hemolysis in one or more phases of thetest characterizing presence ofirregular antibodies NEGATIVE TEST absence of agglutination and or hemolysis in all phases of the test characterizing absence of irregular antibodies 11 TITRATION OF ANTIBODIES IN PROTEIC MEDIUM 1 Prepare a suspension in 5 erythrocytes containing antigen whose antibody is intended to titrate which should be washed in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50 ul of washed erythrocytes 1 mL of 22 BOVINE ALBUMIN into a 12x75 mm testtube Other volumes can be used 2 Number 12 x 75 mmtesttubes according to the table below 3 Pipet into each tube starting from the 2nd tube 100 pl 2 drops of 22 bovine albumin 4 Pipette 100 ul of serum whose antibody is intended to titrate into tubes 1 and 2 Using a disposable pipette tip homogenize the solution
24. oli M A Bellis T Dorlhiac Llacer P E Chamone D A F Controle de qualidade de reagentes de gl bulos vermelhos para detec o e identifica o de anticorpos irregulares experi ncia da Funda o Pr Sangue Hemocentro de S o Paulo Boletim de hematologia 251 1997 4 Brecher M E Technical Manual 14 ed Bethesda MD American Association of Blood Banks 2002 5 Westhoff C M The Rh blood group system in review A new face for the next decade Transfusion 44 1663 1673 2004 6 Standards for blood banks and transfusion services 23 ed Bethesda MD American Association of Blood Banks 2005 7 Moulds M K Review monoclonal reagents and detection of unusual or rare phenotypes or antibodies Immunohematology 22 2 52 63 2006 8 Van Kim C Colin Y and Cartron J Rh proteins key structural and functional components of the red cell membrane Blood Reviews 20 93 110 2006 SIMBOLOGIA SIMBOLS SIMBOLOGIA O conte do suficiente para n testes Quantity sufficient for n tests O contenido es suficiente para n testes Data limite de utiliza o Expiry Date Fecha de la caducidad Produto diagn stico in vitro In vitro diagnostic Produto diagn stico in vitro Consultar instru es para uso Refer to user s instructions Consultar las instrucciones para el uso Representante Europeu ECJREP European Representative Representante Europeu N mero do lote Lot Number N mero del lote N m
25. oro do paciente geralmente do grupo O Rh positivo as quais dever o ser lavadas em solu o salina isot nica lavar as hem cias 3 vezes em salina a 0 85 ou 0 9 e em um tubo de ensaio 12 x 75 mm pipetar 50 ul das hem cias lavadas 1 ml de salina Outros volumes podem ser usados H hem cias comerciais para a realiza o do teste 2 Em um tubo de ensaio 10 x 75 mm ou 12 x 75 mm marcado pipetar 50 ul da suspens o de hem cias a 5 3 Pipetar no mesmo tubo 100 ul do soro a ser testado 4 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g por 1 minuto 5 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o e ou hem lise 2 FASE Meio Prot ico Temperatura Ambiente 6 Pipetar no mesmo tubo acima 100 ul 2 gotas de Albumina Bovina a 22 1 7 Homogeneizar atrav s de leve agita o e centrifugar a 1 000 RPM 100 a 125 g por 1 minuto 8 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o e ou hem lise 3 FASE Meio Prot ico Temperatura de 37 C 9 Incubar o tubo a 37 C por 15 30 minutos 10 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 por 1 minuto 11 Ressuspender delicadamente o bot o de hem cias e examinar a presen a ou n o de aglutina o e ou hem lise 4 FASE Antiglobulina Humana Coombs Indireto 12 Completar o tubo com solu o salina fisiol gica e centrifugar
26. pende do valor do potencial Zeta A aglutinabilidade de um sistema maior quanto mais baixo for o valor do potencial Zeta Pollack relacionou os termos da sua express o de acordo com a seguinte equa o Y AE onde y carga el trica da hem cia D constante diel trica u for a i nica do meio Esta equa o mostra que as redu es do potencial Zeta aumentam a aglutinabilidade do sistema ou at mesmo promovem a aglutina o das hem cias em suspens o se o potencial Zeta cr tico Zc atingido Como o potencial Zeta cr tico Zc da suspens o de hem cias sensibilizadas por anticorpos anti RhD de classe IgM superior em valor absoluto ao da pr pria suspens o em NaCl 0 85 estes anticorpos s o ditos aglutinantes Ao contr rio o potencial Zeta cr tico Zc na presen a de anticorpos anti RhD de classe IgG sendo inferior ao da suspens o em NaCl 0 85 n o ocorre aglutina o das hem cias e estes anticorpos s o ditos n o aglutinantes O teste da antiglobulina humana ou teste de Coombs representa a forma mais importante de aglutina o artificial em imunohematologia Por um procedimento imunol gico essa rea o nos permite revelar a presen a de anticorpos n o aglutinantes na membrana eritrocit ria Asensibilidade do Teste de Coombs Indireto pode ser aumentada por procedimentos que modificam a primeira etapa da rea o ou seja da fixa o dos anticorpos durante a incuba o Um dos
27. s tubos 1 y 2 Utilizando una punta de pipeta desechable homogeneizar la soluci n del tubo 2 y transferir 100 ul del homogeneizado al tubo 3 Repetir el procedimiento hasta el tubo 10 siempre utilizando una punta de pipeta para cada diluci n 5 Pipete 100 pl de la suspeci n de eritrocitos al 5 en 22 alb mina bovina en cada tubo 6 Homogeneizar por agitaci n suave e incubar a 37 C por 15 minutos 7 Centrifugar a 1 000 RPM 100 a 1259 durante 1 minuto 8 Resuspender suavemente el bot n de eritrocitos y examinar la presencia de aglutinaci n Registre los resultados 9 Tubos cuya aglutinaci n es d bil 1 o ausente realizar la prueba de antiglobulina humana ver Fase 4 del Test de compatibilidad No Tubo 1 4 5 6 7 8 9 10 nfa ofofo po amigona IE e e eo o o Cira Ju ra ra is iso sz a iras 125 si INTERPRETACI N DEL TEST El t tulo de anticuerpos ser la mayor diluci n que muestra aglutinaci n en la prueba de antiglobulina humana Coombs indirecto En la tabla anterior el t tulo ser a 1 64 to us T TULO ESPECIFICIDAD DELAPRUEBA El rendimiento de Imuno HEMATO Albumina Bovina 22 fue evaluada en 91 muestras obtenidas con los anticoagulantes recomiendados La evaluaci n demuestra una especificidad del 100 de cada uno de los reactivos en comparaci n con los resultados de un Kiten el mercado Coeficiente de variaci n prueba inter intra ensayo L mite de Aplicaci n a
28. se REAGENT PREPARATION AND STABILITY 22 BOVINE ALBUMIN 1 ready to use Stable at 2 8 C until expiration date printed on the bottle Improper Storage affects the effectiveness ofthe reagent Contains sodium azide lt 0 095 p v as preservative Supplied in dropper bottles with a volume of 165 uL per drop DO NOT FREEZE For in vitro diagnostic use only Note The kit has the same performance after first use and is stable until the expiration date described on the label if itis kept in the indicated temperature 2 8 C SPECIMENS Use fresh blood sample Avoid hemolyzed samples If it is not possible to perform the tests after collection the sample must be kept refrigerated at 2 8 C The long term storage of the sample may cause deterioration of the antigen and result in incorrect classification MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED e Test Tubes 10x75 mmor 12x75 mm e Micropipette of 50 ul 100u and 1000 pl and tips Centrifuge e Physiological saline Solution 0 85 or 0 9 Water Bath Container for material disposal PROCEDURE SURVEY OF IRREGULAR ANTIBODIES IN INDIRECT ANTI HUMAN GLOBULIN INDIRECT COOMBS lts purpose is to detect antibodies of blood groups capable of causing hemolytic reactions Itis carried out in 4 phases the 1st 2nd and 3rd stages are more efficient in the detection of IgM while the 4th phase detects IgG 1ST PHASE Saline solution at Room Temperature 1 Prepare a suspen
29. sion in 5 of washed erythrocytes compatible with the patient serum usually from type O positive Rh which should be washed in physiological saline solution wash the cells 3 times in 0 85 or 0 9 saline solution pipette 50 ul of washed erythrocytes 1 ml of saline into a 12 x 75 mm test tube Other volumes can be used There is commercial RBCs to perform the test 2 In a labeled 10 x 75 mm or 12 x 75 mm test tube pipette 50 ul of 5 erythrocytes suspension 3 Pipette in the same tube 100 ul of the serum to be tested 4 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 5 Gently re suspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination and or hemolysis 2ND PHASE Protein Environment at Room Temperature 6 Pipette in the same tube referred to above 100 pul 2 drops of Bovine Albumin at 22 1 7 Mix by gentle agitation and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 8 Ence of agglutination and or hemolysis 3RD PHASE Protein Environment at 37 C 9 Incubate the tube at 37 C for 15 30 minutes 10 Centrifuge at 1 000 RPM 100 to 125 g for 1 minute 11 Gently re suspend the button of erythrocytes and examine for the presence of agglutination and or hemolysis 4TH PHASE Human Antiglobulin Indirect Coombs 12 Complete the tube with physiological saline solution and centrifuge at 1 000 RPM 100 to 1259 for 1 minute 13 Decant the supernatant by i
30. vity of the Indirect Coombs Test can be increased by procedures that modify the first step of the reaction i e the setting of antibodies during incubation One of the most used procedures is the addition of bovine serum albumin at 22 The addition of 22 bovine albumin increases the dielectric constant D of suspension medium and lowers the Zeta potential value Z favoring the agglutination of erythrocytes Also favors the initial fixation of antibodies to erythrocyte membrane by the dissipation of positive ions near the membrane The Imuno HEMATO ALBUMINA BOVINA 22 from WAMA is a solution to enhance the sensitivity of the human gamma globulin test indirect Coombs in the detection of incomplete anti Rh D antibodies and can be used in tests of compatibility the identification and screening of antibodies The use of bovine albumin also allows the time reduction for the completion of the test PRINCIPLE OF THE METHOD The procedure of the testis based on the principle of agglutination where red blood cells possessing the corresponding antigen will agglutinate in the presence of specific antibody directed against the antigen The use of 22 bovine serum albumin will amplify the sensitivity ofthe test KITPRESENTATION 1057010 D 10ml 1 22 Bovine Albumin 1x 10 mL 2 Instructions for use 1057050 D 50ml 1 22 Bovine Albumin 5x 10 mL 2 Instructions for use 1057100 D 100ml 1 22 Bovine Albumin 10x10 mL 2 Instructions for u
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