INSTRUCCIONES DE USO
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1. Se han referido valores reducidos en personas vegetarianas y vegetalistas as como en poblaciones con un consumo reducido de vitamina B12 Sobre todo se han referido niveles bajos en suero de HoloTC pero no de B12 total en pacientes con enfermedad de Alzheimer en comparaci n con los niveles del grupo de referencia de personas sanas Los niveles de HoloTC reflejan el estado de la vitamina B12 con independencia de la absorci n reciente de la vitamina 3 PRINCIPIOS DEL ANALISIS Los pocillos de microtitulaci n est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal altamente espec fico para la B12 activa holotranscobalamina Durante la primera incubaci n la holotranscobalamina en suero se une espec ficamente a la superficie recubierta con el anticuerpo En la segunda incubaci n el conjugado se une a cualquier holotranscobalamina capturada Entonces se lavan los pocillos para eliminar los componentes no unidos La holotranscobalamina unida se detecta mediante incubaci n con el sustrato Se a ade la soluci n de parada para detener la reacci n lo que produce un producto final de color La concentraci n de holotranscobalamina en pmol L est directamente relacionada con el color generado y se puede estimar por interpolaci n en una curva dosis respuesta obtenida con calibradores 4 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Solo para uso en diagn stico in vitro Precauciones de seguridad 1 Seguir estrictamente las ins2. almacenarse tapadas durante un m ximo de 24 horas a 2 8 C antes del an lisis 10 M TODO ANAL TICO 10 1 Preparaci n Preparaci n para el an lisis Dejar que todos los componentes del kit incluidas las tiras de microtitulaci n se calienten hasta 18 25 C durante 30 60 minutos antes de su uso Mezclar los reactivos invirti ndolos suavemente Al almacenar el tamp n de lavado entre 2 y 8 C precipitar podr an verse los cristales Antes de diluirlo en agua dejar que el tamp n de lavado se caliente se puede introducir en una estufa a 37 C si es necesario para acelerar el proceso hasta que no haya NING N precipitado apreciable a simple vista Diluir el siguiente reactivo y mezclarlo completamente Reactivo Volumen A adir Concentrado de tamp n de lavado x 8 1 vial 175 mL de agua destilada desionizada Calcular el n mero de tiras de microtitulaci n que necesita para el ensayo y conservar las dem s en el soporte para tiras de microtitulaci n Devolver las tiras sobrantes al envase de papel de aluminio resellable con el desecante y conservarlas a entre 2 8 C hasta que sea necesario Asegurarse de que todas las tiras quedan bien fijadas dentro del soporte para tiras de microtitulaci n Los usuarios pueden numerar cada tira en el extremo superior para ayudar a la identificaci n Conservar el soporte para tiras de microtitulaci n para utilizarlo en el futuro Preparar cada muestra antes del an
3. 11 A adir 100 uL de soluci n de parada a cada pocillo en el mismo orden y velocidad que el sustrato Golpear suavemente los pocillos para mezclar 12 Leer las tiras a 405 nm Leer en un intervalo de 120 minutos desde la adici n de la soluci n de parada 11 RESULTADOS 11 1 C lculo e interpretaci n Representar el valor medio de la absorbancia de cada calibrador en el eje de abscisas frente a la concentraci n correspondiente en pmol L en el eje de ordenadas LAS CONCENTRACIONES DEL CALIBRADOR SE MUESTRAN EN LAS ETIQUETAS DE LOS VIALES LOS VALORES DE CONCENTRACI N SE ASIGNAN A CADA LOTE DE CALIBRADORES Y PUEDEN VARIAR DE UN LOTE A OTRO La concentraci n pmol L de cada muestra puede calcularse localizando el punto de la curva correspondiente al valor medio de la absorbancia de la muestra y la lectura de la concentraci n correspondiente en pmol L en el eje de las ordenadas Este procedimiento puede realizarse manualmente utilizando un papel de gr ficos o con un lector de placas con software que incorpore procedimientos de ajuste de curvas Si utiliza un lector de placas con software interno deber utilizar un algoritmo de ajuste de la curva de regresi n lineal 10 A continuaci n Figura 1 se muestra un trazado t pico como referencia no se debe utilizar para interpretar los resultados Las muestras con concentraciones superiores a 128 pmol L se encuentran fuera del rango del ensayo y deber n registrarse como gt 128 pmol L
4. O DE SUS ESPECIFICACIONES CONTRARIOS A LAS INSTRUCCIONES PROPORCIONADAS EN EL MANUAL DE INSTRUCCIONES CUALQUIER GARANT A SE CONSIDERAR NULA El periodo de esta garant a se indica en el manual de instrucciones de los Productos y entrar en vigor a partir de la fecha de expedici n del Producto en cuesti n por parte de Biohit Este kit de Diagn stico de Biohit se ha elaborado en conformidad con los protocolos de gesti n de calidad ISO 9001 ISO 13485 En caso de conflicto con respecto a su interpretaci n se aplicar el texto en ingl s 14 INFORMACI N DE PEDIDOS BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Cat No 602 290 15 FECHA DE PUBLICACI N BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Version 01 October 2014 16 16 REFERENCIAS 1 10 11 12 Nexo E Hvas A M Bleie et al Holo transcobalamin is an early marker of changes in cobalamin homeostasis A randomized placebo controlled study Clin Chem 2002 48 10 1768 71 Valente E Scott JM Ueland PM et al Diagnostic accuracy of holotranscobalamin methylmalonic acid serum cobalamin and other indicators of tissue vitamin B12 status in the elderly Clin Chem 2011 57 6 856 863 Nexo E Hoffmann Lucke E Holotranscobalamin a marker of vitamin B12 status analytical aspects and clinical utility Am J Clin Nutr 201 1 94 1 359S 365S Obeid R Jouma M Hermann W Cobalamin status holotranscobalamin methylmalonic acid and folate as determinants of homocysteine conc
5. n similar de hombres n 65 y de mujeres n 70 con el ElA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin La concentraci n media global de la B12 activa holotranscobalamina para esta poblaci n fue de 72 pmol L intervalo de 15 a 147 pmol L Bas ndose en los datos de esta poblaci n de referencia el intervalo de referencia el 95 de los resultados centrados es Intervalo de referencia 21 123 pmol L Este intervalo de referencia se sugiere nicamente como gu a y cada laboratorio debe determinar un intervalo de referencia adecuado a la poblaci n a la que atiende teniendo en consideraci n sus factores geogr ficos personales alimenticios medioambientales o la pr ctica cl nica 12 DATOS SOBRE EL RENDIMIENTO Datos representativos los datos pueden variar en cada laboratorio 12 1 Linealidad de la diluci n Bas ndose en un estudio realizado con la gu a del documento de CLSI EP6 A el ensayo BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin demostr su linealidad entre 5 3 y 156 0 pmol L con redondeo a un decimal en todo el intervalo de medici n del ensayo los resultados obtenidos en cada laboratorio pueden diferir de estos datos 12 2 Exactitud Se llev a cabo un estudio de correlaci n con muestras s ricas de adultos aparentemente sanos Todas las muestras fueron analizadas mediante el EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin y otra prueba de la holotranscobalamina disponible en el mercado de acuerdo
6. no se deber n extrapolar los resultados Las r plicas de muestras individuales que se desv en menos del 20 pueden considerarse una indicaci n de la aceptabilidad del ensayo Curva de calibraci n t pica E S Ln m iS Z is o 80 100 120 140 160 Concentraci n del calibrador pmol l Figura 1 Curva de calibraci n t pica del ensayo BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin Unidad de medida La unidad de medida del ensayo BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin es pmol L Intervalo de medici n rango de notificaci n El rango de notificaci n del ensayo es de 10 pmol L a 128 pmol L 11 2 Control de calidad Comprobar que se lleva a cabo un mantenimiento y una calibraci n del lector de placa apropiados de acuerdo con las instrucciones del fabricante y que se utiliza la longitud de onda 405 nm y el algoritmo de ajuste de la curva regresi n lineal correctos Los usuarios deben garantizar que est n totalmente familiarizados con las instrucciones para la realizaci n del an lisis especialmente la secci n de advertencias y precauciones y las notas sobre manipulaci n y procedimientos Antes de notificar los resultados de la prueba del paciente los usuarios deber n demostrar que pueden obtener unas especificaciones de rendimiento sobre precisi n e intervalo notificable de los resultados de la prueba comparables con las establecidas por el fabricante Los controles ba
7. 1 31 5 4 5 6 4 2 32 2 4 0 9 2 4 1 49 3 3 9 7 4 2 52 6 4 1 6 7 1 50 8 5 6 10 0 4 el Ms 2 51 7 4 7 5 9 3 1 52 6 4 6 4 8 2 55 0 5 5 6 1 4 1 68 4 4 0 7 6 2 73 2 3 7 7 5 1 74 8 4 3 8 2 SM 2 75 9 4 6 6 4 3 1 75 1 4 4 7 9 2 76 3 4 9 6 2 4 1 115 9 4 2 5 9 2 121 1 3 6 7 0 1 123 2 4 3 10 2 yen 80 2 2 124 0 4 2 6 4 3 1 127 0 4 8 10 1 2 129 5 3 2 5 6 4 1 23 7 9 4 10 9 2 23 8 5 1 11 5 Control 80 2 1 20 0 6 0 7 5 bajo 2 18 6 5 8 8 5 3 1 20 3 8 3 9 7 2 20 1 8 3 10 0 4 1 61 2 6 3 6 4 2 58 8 4 5 8 9 Control 80 2 1 50 3 6 3 8 1 alto 2 50 2 5 9 8 4 3 1 52 2 7 7 9 2 2 50 8 5 8 8 5 12 4 Limite de blanco En un estudio representativo las determinaciones del limite de blanco se realizaron usando dos muestras de holotranscobalamina de nivel bajo y dos lotes de reactivos 120 r plicas por lote de reactivo El limite de blanco del EIA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin result ser de 4 9 pmol L con redondeo a un decimal 14 12 5 L mite de detecci n En un estudio representativo las determinaciones del l mite de detecci n se realizaron usando cinco muestras de holotranscobalamina de nivel bajo y dos lotes de reactivos 120 r plicas por lote de reactivo El l mite de detecci n del ElA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin result ser de 8 1 pmol L con redondeo a un decimal 12 6 L mite de cuantificaci n Se realizaron determina
8. BIOHIT ACTIVE B12 HOLOTRANSCOBALAMIN INSTRUCCIONES DE USO REF 602 290 C INSTRUCCIONES DE USO Espa a BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin N cat 602290 lz USO PRE MIS OD A A tido 4 2 INTA NA o atl 4 3 PRINCIPIOS DELANALS IS ia 5 4 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES ari o n aE a a i 5 gt CONTENIDO DECI ao 6 5 1SOlCI N COMM AA AA AAA 6 Ae ela CS SUSU o ED 6 5 3 60140100 06 ays ge le gt a ta Le es ltd dl et dt 6 5 4 Concentrado de tamp n de lavado 2 OO 7 SS Micropla a AAA A A A AAA E AAA AA 7 56 SOM IGE CO ld es ted dl e dto 7 5 CalibradOres td at 7 Be MOS O OO 7 59 S0l ci n dE PISTA AMINO AR 7 5 10 Instrucciones de USO EAA eda 7 6 MATERIALES Y EQUIPO NECESARIOS QUE NO SE SUMINISTRAN ee 7 T ESTANDARIZACION ai ld tb 8 8 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD csc setacoetiictndtpntslocdeaesatiutecexcves daxeau a a i 8 8 1 Estabilidad del kit abierto en USO 35 8 8 2 Estabilidad AS kit Sin A AAA ARA 8 8 3 Notas sobre la manipulaci n y el procediMiento ooocccicninnicnicnnnnnononnnnncnnaccanncrnncrnnrn conan nacos 8 8 4 Indicios dE Aste ii nai 8 9 RECOGIDA Y CONSERVACI N DE MUESTRAS csccsssessssesssessssesssessssessseessssessecssecsssesssecssseessesstess 9 10 M TODO ANAL da tad 9 TOA d A F PC Clol iP 9 10 2 Protoc lo del Analisis EAA 10 11 RESUETADOS 20050 da A A a ea las 10 MA C CUO SIME N A 10 11 2 Control de Cal i 11 ES Valores Previstos SG 12 12 DATOS SOBRE EL RENDIMIENT
9. ES EN LAS ETIQUETAS DE LOS VIALES 5 8 Controles CONTROL CONTROL HIGH O Un vial de control bajo y un vial de control alto 1 mL de tamp n fosfato con estabilizador de prote na bovina que contiene holoTC Conservante lt 0 1 p v azida s dica Listo para usar No exponer a la luz durante el almacenamiento 5 9 Soluci n de pretratamiento Un vial de 25 mL de tamp n citrato Conservante lt 0 1 p v azida s dica Listo para usar 5 10 Instrucciones de uso 6 MATERIALES Y EQUIPO NECESARIOS QUE NO SE SUMINISTRAN 1 Lector de placa tira de 96 pocillos con filtro de 405 nm 2 Pipeta s de precisi n para dispensar 100 uL Un dispensador de 8 canales o semejante para dispensar aproximadamente 250 300 uL para el lavado manual 3 Cilindro de medici n de vidrio o pl stico 1x200 mL 4 Agua destilada desionizada 5 Toallas de papel 6 Temporizador para intervalos de 30 35 y 60 minutos 7 ESTANDARIZACION Actualmente no existe ning n m todo ni material de referencia reconocido internacionalmente para la estandarizaci n Los calibradores de BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin pueden trazarse a los est ndares de referencia internos que se sometieron a una asignaci n nica 8 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 8 1 Estabilidad del kit abierto en uso Se abri un kit y se reutiliz en tres ocasiones durante un per odo de tres meses sin ning n efecto negativo sobre su rendimiento Despu s del uso l
10. O vunstaias dt A ta 12 12 1 i ealldad de la alicia e a 12 12 2 Exa tit d asad suits euch Vest a eau neato eased nee aie aaa ened earns 12 A A a Ora nals ee tp ae aerate 13 12 4 Tyg it ete 9 a 0 Meera ere tetramer ec a ra en ee on er eer err 14 12 5 Limite Ge Ai 15 126 Limite de cuac it aaa 15 12 7 Efecto de gancho por dosis AMAS ti AR 15 12 8 Reactividad rizada el 15 oz ALIS FREI NG Lh cet caste aan eat as 15 13 GARANTIA dis 16 14 1INFORMAGCI N DE PEDIDOS EA et da 16 15 FECHA DE PUBLICACI N a On rOS 16 16 REFERENCIAS ni SAA EA ANA ak wean ut 17 1 USO PREVISTO BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin es un enzimoinmunoan lisis EIA para la determinaci n cuantitativa de la holotranscobalamina HoloTC en el suero humano La HoloTC vitamina B12 unida a la transcobalamina se utiliza de forma auxiliar para el diagn stico y el tratamiento de la carencia de vitamina B12 2 INTRODUCCI N Existen tres prote nas de uni n implicadas en el transporte de la vitamina B12 en el organismo el factor intr nseco Fl la transcobalamina TC y la haptocorrina HC Estas prote nas de uni n aseguran la absorci n eficaz de la escasa cantidad de vitamina B12 presente en la dieta Cuando la TC y HC se unen a la vitamina B12 los complejos resultantes se conocen como holotranscobalamina y holohaptocorrina HoloHC para distinguirlos de las prote nas que no llevan asociada ninguna vitamina La fracci n princip
11. al en la circulaci n la HoloHC representa el 70 90 de la vitamina B12 en sangre pero es inerte desde el punto de vista biol gico La HoloTC supone tan solo el 10 30 de la vitamina B12 que circula por la sangre pero es la nica forma de vitamina B12 que pueden absorber las c lulas del organismo La prote na TC por si misma transporta la vitamina B12 desde su punto de absorci n en el ileon hasta los tejidos y las c lulas A continuaci n la vitamina se asimila como complejo HoloTC vitamina B12 unida a la transcobalamina a trav s de una absorci n espec fica mediada por receptores Este proceso suministra vitamina B12 a las c lulas del organismo y proporciona la vitamina en forma de coenzima para realizar las funciones celulares esenciales como la s ntesis de ADN Como la HoloTC posee una semivida en circulaci n m s corta que la de la HoloHC la primera alteraci n que tiene lugar cuando ocurre un balance negativo de vitamina B12 es muy probable que sea un descenso de la concentraci n s rica de HoloTC La medida de la B12 total en suero tiene algunas limitaciones en concreto que la mayor parte de la cobalamina medida est unida a la HC biol gicamente inerte Se han publicado algunos estudios que concluyen que la HoloTC ser a un mejor indicador del estado de la vitamina B12 que la B12 total en suero Como cabe esperar los niveles de HoloTC son bajos en los pacientes con signos bioqu micos de carencia de vitamina B124
12. ciones del l mite de cuantificaci n usando cinco muestras de bajo nivel de holotranscobalamina y dos lotes de reactivos 120 r plicas por lote de reactivo El l mite de cuantificaci n del ElA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin result ser de 8 3 pmol L con redondeo a un decimal 12 7 Efecto de gancho por dosis altas El efecto de gancho por dosis altas del ingl s High dose hook es un fen meno por el cual muestras con concentraciones muy elevadas pueden dar una lectura dentro del intervalo din mico del ensayo En lo que respecta al ElA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin no se detect ning n efecto de este tipo al analizar dos muestras con una concentraci n aproximada de 419 y 2236 pmol L 12 8 Reactividad cruzada BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin se ha dise ado para tener una desviaci n m xima en la concentraci n de holotranscobalamina de lt 10 en presencia de apotranscobalamina o haptocorrina Se llev a cabo un estudio basado en las pautas del documento EP7 A2 del instituto de est ndares cl nicos y de laboratorio CLSI Tres muestras con niveles de holotranscobalamina en todo el intervalo del an lisis fueron suplementadas con 500 pmol L de apotranscobalamina o 5000 pmol L de haptocorrina La desviaci n m xima en la concentraci n de holotranscobalamina oscil entre 5 y 1 12 9 Interferencia BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin se ha dise ado para tener una desviaci n m xima en la conc
13. con el documento de CLSI EP9 A2 Las concentraciones de las muestras estaban en el intervalo de 13 8 a 112 8 pmol L En la tabla 2 se presentan los valores estad sticos obtenidos 12 Tabla 2 EIA BIOHIT Active B12 en comparaci n con una prueba disponible en el mercado ElA BIOHIT Active B12 Holotranscobalamin en comparaci n con una prueba disponible en el mercado N mero de muestras 111 Pendiente de la l nea de regresi n regresi n de Passing Bablok 0 95 de 0 89 a 1 01 IC 95 Ordenada en el origen regresi n de Passing Bablok IC 95 8 39 de 5 73 a 11 77 Coeficiente de correlaci n r Pearson IC 95 0 93 de 0 90 a 0 95 12 3 Precision Se analizaron siete 7 muestras de suero humano con 3 lotes de reactivos Las muestras fueron analizadas por 2 operadores en r plicas de 8 una vez al d a durante 5 dias total n 80 Los datos de este estudio se resumen en la Tabla 3 13 Tabla 3 Datos de precisi n Muestra n Lote Operador Media pmol L CV intraensayo CV total 4 1 17 8 7 5 8 2 2 17 5 3 1 9 3 1 20 1 6 0 6 6 TA 80 2 2 20 3 6 9 9 2 3 1 19 1 5 5 8 0 2 18 9 8 5 11 0 4 1 21 8 5 5 9 9 2 21 8 3 9 7 5 1 22 6 5 6 8 7 a e 2 23 5 9 0 10 3 3 1 23 9 7 0 10 2 2 23 2 5 8 8 9 4 1 28 8 3 8 7 8 2 30 7 4 3 9 6 1 31 0 6 8 8 0 SA e e 2 31 4 4 3 6 1 3
14. entraci n de holotranscobalamina de lt 10 en presencia de compuestos que puedan interferir Se llev a cabo un estudio basado en las pautas del documento EP7 A2 del instituto de est ndares cl nicos y de laboratorio CLSI Las muestras con niveles de holotranscobalamina en todo el intervalo del an lisis fueron suplementadas con los compuestos con capacidad de interferir enumerados en la tabla siguiente La desviaci n m xima en la concentraci n de holotranscobalamina oscil entre 10 y 8 15 Tabla 4 Lista de compuestos con capacidad de interferir analizados No se encontr ninguna Sustancia con capacidad de 1 T interferencia hasta la siguiente interferencia e concentraci n Hemoglobina 500 mg dL Bilirrubina 30 mg dL Triglic ridos soluci n Intralipid 3000 mg dL Factor reumatoide 7500 IU dL Prote na total 9000 mg dL 13 GARANT A Biohit deber solucionar todo defecto hallado en cualquier Producto el Producto Defectuoso causado por materiales inadecuados o negligencia en la manufacturaci n y que eviten el funcionamiento mec nico o el uso previsto de los Productos incluyendo entre otros aspectos las funciones indicadas en las especificaciones de Biohit para los Productos SIN EMBARGO EN CASO DE HALLARSE UNA FALTA CAUSADA POR TRATO INDEBIDO USO INDEBIDO DA O ACCIDENTAL CONSERVACI N INCORRECTA O USO DE LOS PRODUCTOS PARA PROCEDIMIENTOS FUERA DE LAS LIMITACIONES INDICADAS
15. entration Clin Chem 2002 48 11 2064 5 Herrmann W Schorr H Obeid R et al Vitamin B12 status particularly holotranscobalamin ll and methylmalonic acid concentrations and hyperhomocysteinemia in vegetarians Am J Clin Nutr 2003 78 131 6 Lloyd Wright 2 Hvas A M Moller J et al Holotranscobalamin as an indicator of dietary vitamin B12 deficiency Clin Chem 2003 49 12 2076 8 Refsum H Yajnik CS Gadkari M et al Hyperhomocysteinemia and elevated methylmalonic acid indicate a high prevalence of cobalamin deficiency in Asian Indians Am J Clin Nutr 2001 74 233 41 Refsum H Smith AD Low Vitamin B12 status in confirmed Alzheimer s disease as revealed by serum holotranscobalamin J Neurol Neurosurg Psychiatry 2003 74 959 61 Chen X Remacha AF Sarda MP et al Influence of cobalamin deficiency compared with that of cobalamin absorption on serum holo transcobalamin 11 Am J Clin Nutr 2005 81 110 14 The National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures A Statistical Approach Approved Guideline NCCLS document EP6 A Wayne PA NCCLS 2003 The National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples Approved Guideline Second Edition NCCLS Document EP9 A2 Wayne PA NCCLS 2002 Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI Interference Testing in Clinical Symbols 17 Para uso diagn s
16. jo y alto listos para el uso del kit deben analizarse por duplicado en todos los ensayos para controlar la calidad del procedimiento de an lisis Dando por sentado que se cumplen las especificaciones de precisi n descritas por el fabricante el hecho de que un control no cumpla las especificaciones de control que aparecen a continuaci n invalida el an lisis y no se deben comunicar los resultados del paciente El operador puede repetir el an lisis tras haber revisado el procedimiento o ponerse en contacto con el fabricante Para repetir el an lisis preparar una diluci n nueva de cada muestra Los laboratorios pueden incluir controles internos en cada an lisis si as lo desean Almacenar 11 dicho material de control a una temperatura de 20 C o inferior y evitar los ciclos repetidos de congelaci n descongelaci n Los conservantes como por ejemplo la azida s dica a lt 0 1 p v no afectar n a los resultados de las muestras Deben calcularse los intervalos de referencia y los valores l mite apropiados para las poblaciones espec ficas atendidas por los usuarios Tabla 1 Especificaciones para los controles bajo y alto Especificaciones de control Control bajo Control alto Media del duplicado De 15 a 35 pmol L De 36 a 84 pmol L 11 3 Valores previstos Se analizaron 135 muestras de suero de donantes asintom ticos aparentemente sanos con edades comprendidas entre 18 y 75 a os y con una representaci
17. lisis a adiendo un volumen igual de soluci n de pretratamiento a la muestra por ejemplo 150 uL de muestra y 150 uL de pretratamiento Las muestras pretratadas pueden almacenarse tapadas durante un m ximo de 24 horas a 2 8 C antes del an lisis 10 2 Protocolo del an lisis 1 Establecer referencias en los pocillos para identificarlos 2 Pipetear 100 uL de los calibradores por duplicado de los controles del kit por duplicado y de las muestras de pacientes pretratadas 50 50 por duplicado en los pocillos pertinentes Recordar cambiar las puntas de las pipetas entre adiciones Este paso no debe exceder de 15 minutos 3 Incubar durante 60 10 minutos a 18 25 C Decantar el contenido de la tira mediante inversi n r pida sobre una pila adecuada para desechar los materiales biol gicos teniendo en cuenta el riesgo infeccioso potencial de las muestras Secar bien las tiras invertidas con toallas de papel No lavar 5 A adir 100 uL de conjugado a cada pocillo 6 Incubar durante 35 5 minutos a 18 25 C 7 Decantar el contenido de la tira mediante inversi n r pida sobre una pila adecuada para desechar los materiales biol gicos Secar bien las tiras invertidas con toallas de papel 8 Lavar los pocillos cinco veces con un m nimo de 250 uL de tamp n de lavado diluido Decantar y secar despu s de cada adici n de lavado 9 A adir 100 uL de sustrato a cada pocillo 10 Incubar durante 30 5 minutos a 18 25 C No decantar
18. os componentes deben conservarse de nuevo a una temperatura de 2 8 C 8 2 Estabilidad del kit sin abrir A una temperatura de 2 8 C los componentes sin abrir son estables hasta la fecha que se indica en las etiquetas 8 3 Notas sobre la manipulaci n y el procedimiento 1 Guardar los componentes del kit a una temperatura de entre 2 y 8 C y utilizarlos hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas No utilizar reactivos caducados 2 Todos los lotes de reactivos y calibradores han sido estandarizados para producir la reacci n adecuada No intercambiar reactivos o calibradores de un lote a otro Las concentraciones del calibrador se muestran en las etiquetas de los viales y pueden variar entre los lotes No congelar los kits El concentrado de tamp n de lavado debe diluirse antes del uso Todos los dem s reactivos est n listos para usar 6 El tamp n de lavado diluido es estable durante al menos 3 meses si se evita la contaminaci n microbiana Despu s de cada uso volver a conservarlos a 2 8 C 7 Volver a colocar las tiras de microtitulaci n sobrantes sin utilizar en el envase de papel de aluminio con el desecante Asegurarse de que el sellado es integral y volver a guardarlas a una temperatura de entre 2 y 8 C hasta que sea necesario No exponer los calibradores los controles ni el sustrato a la luz durante el almacenamiento Evitar la contaminaci n de los reactivos Utilizar una punta de pipeta desechable nueva pa
19. otectora adecuada guantes gafas y m scara de protecci n En caso de ingesti n acudir inmediatamente al m dico y mostrar la etiqueta o el envase 5 CONTENIDO DEL KIT 5 1 Soluci n conjugada Un vial de 15 mL de anticuerpo monoclonal murino de la transcobalamina humana marcado con fosfatasa alcalina en tamp n Tris con estabilizador de prote na Conservante lt 0 1 p v azida s dica Listo para usar 5 2 Soluci n de sustrato KO Un vial de 15 mL de soluci n tamp n de para nitrofenil fosfato pNPP Listo para usar No exponer a la luz durante el almacenamiento N B NOCIVO 5 3 Soluci n de parade E Un vial de 15 mL de hidr xido de sodio 1M pH gt 10 Listo para usar N B CORROSIVO 5 4 Concentrado de tamp n de lavado x Dos viales de 25 mL de tamp n fosfato Conservante 0 72 p v azida s dica Diluir antes de usar N B NOCIVO 5 5 Microplaca 12 x 8 tiras con pocillos de microtitulaci n separables recubiertas con anticuerpo monoclonal murino antiholotranscobalamina en un envase de papel de aluminio resellable con desecante 5 6 Soluci n blanco BLANK O Un vial de 1 mL de tamp n fosfato con estabilizador de prote na bovina 5 7 Calibradores O Cinco viales de 1 mL de tamp n fosfato con estabilizador de prote na bovina que contienen holoTC Conservante lt 0 1 p v azida s dica Listo para usar No exponer a la luz durante el almacenamiento V ANSE LAS CONCENTRACION
20. ra cada manipulaci n de reactivos o muestras 8 4 Indicios de deterioro El sustrato debe ser entre incoloro y amarillo p lido Una coloraci n amarilla m s oscura indica contaminaci n por lo que el reactivo deber desecharse La turbidez o precipitaci n de cualquier componente indica deterioro por lo que se deber desechar el componente 9 RECOGIDA Y CONSERVACION DE MUESTRAS El an lisis est recomendado para realizarse en suero humano incluye tubos separadores de suero No utilizar muestras sumamente hemolizadas o turbias Mezclar a fondo las muestras descongeladas antes del an lisis y evitar repetir el congelado descongelado coo Las muestras Dueden someterse a 3 ciclos de congelado descongelado Las muestras descongeladas deben centrifugarse a gt 10 000g durante 5 minutos antes de analizarse 5 No someter las muestras del co gulo o no a temperaturas superiores a la temperatura ambiente durante m s de una noche lt 16 horas 6 Las muestras pueden conservarse a una temperatura de entre 2 C y 8 C en el co gulo durante 3 d as o fuera del co gulo durante cuatro semanas para un almacenamiento m s prolongado deben conservarse fuera del co gulo a una temperatura de 20 C hasta un m ximo de 6 meses 7 Preparar cada muestra antes del an lisis a adiendo un volumen igual de soluci n de pretratamiento a la muestra por ejemplo 150 uL de muestra y 150 uL de pretratamiento Las muestras pretratadas pueden
21. s de bioseguridad para los materiales que contienen o se sospecha que puedan contener agentes infecciosos E Soluci n R34 Causa quemaduras de S26 En caso de contacto con los ojos enjuagar inmediatamente con agua CORROSIVA parada abundante y acudir al m dico S36 37 39 Llevar ropa protectora adecuada guantes gafas y m scara de protecci n S45 En caso de accidente o de sentirse indispuesto acudir inmediatamente al m dico mostrar la etiqueta si es posible Nocivo por inhalaci n en contacto con la piel y por ingesti n R20 21 22 i Irritante para la piel R38 ee R43 Puede causar sensibilizaci n en contacto con la piel No inhalar los vapores 23 Sustrato ai Ev tese el contacto con la piel 208 En caso de contacto con la piel enjuagar inmediatamente con agua abundante S205 No tirar los residuos por el desag e Desechar este material y su recipiente de forma segura S36 37 39 7 ean Llevar ropa protectora adecuada guantes gafas y m scara de protecci n En caso de ingesti n acudir inmediatamente al m dico y mostrar el envase NOCIVO Concentr R22 Nocivo por ingesti n ado de R32 En contacto con cidos libera gases muy t xicos tamp n R52 53 Nocivo para los organismos acu ticos puede causar efectos adversos de larga de duraci n en el medio acu tico lavado S29 35 No tirar los residuos por el desag e Desechar este material y su recipiente de 8x S36 37 39 forma segura S46 Llevar ropa pr
22. tico in vitro N mero de cat logo C digo de lote 96 pruebas Precauci n Consultar las instrucciones de uso Proteger de la luz Fecha de caducidad Almacenar entre 2 y 8 C No reutilizar Oficina principal BIOHIT OYJ Laippatie 1 00880 Helsinki Finland Tel 358 9 773 861 Fax 358 9 7738 6200 E mail info biohit fi www biohithealthcare com 400920 01 CONTROL LOW CONTROL HIGH BLANK O O E 3 E 6 E ds Control bajo Control alto Conjugado Sustrato Soluci n de parada Pretratamiento Concentrado de tamp n de lavado 8x Blanco Calibradores 1 a 5 Corrosivo Nocivo 18
23. trucciones de este folleto especialmente en cuanto a las condiciones de manipulaci n y almacenamiento No pipetear con la boca No fumar comer beber ni aplicarse cosm ticos en las zonas donde se manipulan kits y muestras Se debe proteger debidamente cualquier afecci n cut nea as como cortes abrasiones y otras lesiones de la piel Los calibradores controles conjugado pretratamiento y concentrado de tamp n de lavado contienen azida s dica que puede reaccionar con el plomo y el cobre de las ca er as formando azidas met licas altamente explosivas Al desechar los residuos vaciar con agua abundante para evitar la formaci n de estas azidas La soluci n de parada contiene hidr xido de sodio Evitar el contacto con la piel los ojos y las membranas mucosas Los derrames deben limpiarse con cantidades abundantes de agua En caso de que ocurra un contacto con los ojos enjuague con agua y acuda inmediatamente al m dico Las hojas de datos de seguridad de los materiales de todos los componentes peligrosos que contiene este kit est n disponibles bajo petici n a Biohit Oyj Este producto requiere la manipulaci n de muestras y materiales de origen humano y animal Se recomienda considerar todos los materiales de procedencia humana y animal como potencialmente infecciosos y manipularlos conforme a la norma de la OSHA sobre Bioseguridad de nivel 2 de los pat genos de transmisi n sangu nea o se deben utilizar otras pr cticas pertinente
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