Creatinina - Wiener lab.
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1. CE EEEN Creatinina enzim tica AA M todo enzim tico para la determinaci n de creatinina en suero plasma u orina SIGNIFICACION CLINICA La creatinina compuesto sumamente difusible se elimina del organismo casi exclusivamente por filtraci n renal Su determinaci n en suero as como el clearance de creatini na end gena constituyen par metros importantes para el diagn stico de diversas afecciones renales FUNDAMENTOS DEL METODO Basado en el siguiente esquema de reacci n creatininasa creatinina H O creatina creatinasa creatina H O sarcosina urea sarcosina oxidasa o sarcosina H O O gt glicina HCHO H O peroxidasa H O 4 AF TOOS quinonimina coloreada La intensidad del color de la quinonimina formada es di rectamente proporcional a la concentraci n de creatinina en la muestra REACTIVOS PROVISTOS A Reactivo A soluci n conteniendo creatinasa 36 kU I sarcosina oxidasa 11 kU l catalasa 300 kU l ascorbato oxidasa 3 kU l y buffer Goods 20 mmol l pH 8 2 con N etil N 2 hidroxi 3 sulfopropil 3 metilanilina TOOS 1 mmol l B Reactivo B soluci n conteniendo 4 aminofenazona 4 AF 4 mmol l creatininasa 370 kU l peroxidasa 15 kU l azida de sodio 0 8 g l y buffer Goods 20 mmol l pH 8 0 S Standard soluci n de creatinina 20 mg l REACTIVOS NO PROVISTOS Calibrador A plus de Wiener lab Agua desmineralizada INSTRUCCIONES PARA S2. nN r Dir T c Viviana E C tola E Bioqu mica Producto Inscripto M S Cert N 5708 05 2000 Rosario Argentina UR130509
3. AFIA Fossatti P Prencipe L Berti G Clin Chem 29 1494 1983 Curtis C A Ashwood E R Tietz Fundamentals of Clin Chem 5 Ed 422 2001 Burtis C A Ashwood E R Tietz Textbook of Clin Chem 3 Ed 1808 1996 Young D S Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests AACC Press 5 ed 2000 CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute ex NCCLS Protocols EP 15A 2001 EP 17A 2004 860243000 03 p 3de6 SIMBOLOS Los siguientes s mbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagn stico de Wiener lab Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98 79 CE de productos sanitarios para el diagn stico in vitro Representante autorizado en la Comunidad Europea IVD Uso diagn stico in vitro wW Contenido suficiente para lt n gt ensayos z Fecha de caducidad L mite de temperatura conservar a ES No congelar e Riesgo biol gico gt Volumen despu s de la reconstituci n Cont Contenido LOT N mero de lote wal Elaborado por Xx Nocivo E Corrosivo Ca stico x Irritante Cl Consultar instrucciones de uso Calibr Calibrador CONTROL Control CONTROL Control Positivo CONTROL Control Negativo REF N mero de cat logo mi Wiener Laboratorios S A l C Riobamba 2944 2000 Rosario Argentina E http www wiener lab com ar W I
4. U USO Reactivos Provistos listos para usar PRECAUCIONES Los reactivos son para uso diagn stico in vitro Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de an lisis cl nicos Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Reactivos Provistos son estables en refrigerador 2 10 C No provisto en todas las presentaciones hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja No man tener a temperaturas elevadas durante lapsos prolongados MUESTRA Suero plasma u orina a Recolecci n obtener suero o plasma de la manera usual Puede emplearse tambi n orina de 2 horas o de 24 horas Su recolecci n debe efectuarse en un recipiente perfecta mente limpio que se mantendr en el refrigerador 2 10 C durante el tiempo de la recolecci n Medir la diuresis tomar una al cuota y efectuar una diluci n 1 50 de la misma En caso de que la diuresis sea de 2 horas multiplicar el volu men medido por 12 para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas b Aditivos en caso de que la muestra a emplear sea plasma se recomienda nicamente el uso de heparina como anticoagulante para su obtenci n c Sustancias interferentes conocidas no se observan in terferencias por cido asc rbico hasta 100 mg dl hemoglobina hasta 400 mg dl 4 g l bilirrubina hasta 28 mg dl 280 mg l ni
5. l 3 82 ml Significa la compensaci n por diluci n del blanco por agre gado del Reactivo B Ejemplo B 0 123 S 0 145 D 0 164 B 0 137 S 0 365 D 0 412 Standard 20 mg l k 0 673 20 mg l 20 0 365 0 137 0 145 0 123 x0 673 0 228 0 022 x 0 673 20 20 0 228 0 015 0 213 93 9 Creatinina mg l 0 412 0 137 0 164 0 123 x 0 673 x 93 9 0 275 0 041 x 0 673 x 93 9 0 275 0 028 x 93 9 0 247 x 93 9 23 19 2 Creatinina en orina g 24 hs Creatinina mg l x 50 x D Creatinina mg l x D 1000 20 donde D volumen de la diuresis expresado en litros 24 hs 50 factor de diluci n 1000 conversi n de mg a gramos 3 Depuraci n de Creatinina End gena D C E Creatinina en orina g 24 hs D C E ml min x 694 ml min Creatinina en suero mg l donde 9 24 hs 1 000 mg x 1 000 ml 1 000 000 ml 694 ml min 1 440 min METODO DE CONTROL DE CALIDAD Procesar 2 niveles de un material de control de calidad Standatrol S E 2 niveles con concentraciones conocidas de creatinina con cada determinaci n VALORES DE REFERENCIA Los valores esperados de creatinina son los siguientes Suero o plasma Hombre 7 13 mg l Mujer 6 11 mg l Orina Hombre 0 8 2 0 g 24 hs Mujer 0 6 1 8 g 24 hs Depuraci n de Creatinina End gena Hombre 94 140 ml min promedio 125 ml min Mujer 72 110 ml min Es recomendable que cada laboratorio es
6. tablezca sus pro pios valores de referencia CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI Creatinina mg l x 8 84 Creatinina umol l LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA PERFORMANCE a Reproducibilidad procesando sueros de acuerdo al documento EP5A del CLSI se obtuvo lo siguiente Precisi n intraensayo n 20 Nivel D S C V 0 98 mg dl 0 014 mg dl 1 45 3 80 mg dl 0 038 mg dl 0 99 Precisi n total n 20 Nivel D S C V 0 98 mg dl 0 019 mg dl 1 99 3 80 mg dl 0 044 mg dl 1 15 b Linealidad la reacci n es lineal hasta 170 mg l 17 mg dl de creatinina Para valores superiores diluir la muestra 1 2 1 4 con agua destilada y repetir la determinaci n Corregir los c lculos multiplicando por el factor de diluci n empleado c Sensibilidad anal tica depende del fot metro empleado y de la longitud de onda En espectrofot metros a 546 nm con cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor para un AA de 0 001 el m nimo cambio de concentraci n detec table ser 1 2 mg l 8602435000 03 p 2de 6 PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS Para las instrucciones de programaci n debe consultarse el Manual del Usuario del Analizador en uso Para la calibraci n debe usarse Calibrador A plus de Wiener lab PRESENTACION 60 ml 1 x 40 ml Reactivo A 1 x 20 ml Reactivo B C d 1260362 90 ml 3 x 20 ml Reactivo A 3x 10 ml Reactivo B C d 1009612 BIBLIOGR
7. triglic ridos hasta 1250 mg dl 12 5 g l Referirse a la bibliograf a de Young para los efectos de las drogas en el presente m todo d Estabilidad e instrucciones de almacenamiento el suero o plasma debe ser separado de los gl bulos rojos antes de las dos horas de la extracci n Si se conserva en la oscuridad a 2 10 C la estabilidad es de 3 d as La orina puede mantenerse hasta 4 d as en refrigerador 2 10C sin agregado de conservantes MATERIAL REQUERIDO no provisto Espectrofot metro Micropipetas y pipetas para medir los vol menes indicados Cubetas espectrofotom tricas Ba o de agua a 37 C Cron metro CONDICIONES DE REACCION Longitud de onda 546 nm Temperatura de reacci n 37 C PROCEDIMIENTO Antes de agregar la muestra llevar el aparato a cero con agua destilada En tres cubetas espectrofotom tricas marcadas B Blanco S Standard y D Desconocido colocar 860243000 03 p 1de6 Muestra Standard 0 07 mil Agua desmineralizada 0 07 ml Reactivo A 2 5 ml 2 5 ml 2 5 mil Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C Leer la absorbancia a 546 nm B S y D Reactivo B 1 25 mi 1 25 mi 1 25 mi Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C Leer la absorbancia a 546 nm B S y D CALCULO DE LOS RESULTADOS 1 Creatinina en suero mg l D B D B x k x f 20 mg l S B S B x k donde volumen del Blanco ml 2 97 ml 0 673 volumen final m
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