Trousse combinatoire HISTO SPOT On-Call Typing
Contents
1. REF Code produit BA Consulter le Mode d emploi HLA TYPING Destin au Typage HLA Combistri Cupules r actionnelles contenant des sondes immobilis es pour le omoisinp typage des loci HLA A B C DRB1 DRB3 4 5 DQ DPB1 PCR Pri Barrettes PCR contenant des amorces s ch es pour l amplification mers des loci HLA A B C DRB1 DRB3 4 5 DQ DPB1 PCR Caps Couvercles pour barrettes PCR PCR Buffer Tampon PCR MgCl2 Solution de Chlorure de magn sium N B pour les modes d emploi en d autres langues veuillez utiliser ce lien http www bag healthcare com en Diagnostika Downloads Page 13 sur 132. Aller chercher les amplicons si thermocyclage complet et les placer soigneusement sur le bloc chantillon gauche Terminer ce transfert on s assurant du bon positionnement et de la bonne orientation de la barrette PCR suivez l aide en ligne sur l cran tactile avant de l ouvrir soigneusement Placer ensuite le support sp cial avec les cupules r actionnelles Combistrip dans le bloc r actionnel droite S assurer du bon positionnement et de la bonne orientation du support suivez l aide en ligne sur l cran tactile N B s assurer de l absence de salet ou de particules de plastique sur le bloc r actionnel car celles ci peuvent perturber le transfert de chaleur pendant l hybridation Pour deux composants du Reagent kit on peut souvent observer des cristaux de sel Dans ce cas rechauffer le Tampon d hybridation orange et la Solution de lavage drastique bleu environ 30 C pour dissoudre ces cristaux N B r chauffer tout le contenu du flacon et pas seulement un aliquote Le Conjugu doit tre dilu au 1 1666 dans du Tampon de blocage La dilution du conjugu doit toujours tre pr par e fra chement pour chaque s rie de test N B le Conjugu doit tre m lang au vortex et centrifug chaque fois avant l tape de dilution Page 7 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 Les volumes n cessaires de tous r actifs communs
3. Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 association d au moins 2 sondes individuelles immobilis es dans la m me zone sonde mosa que et servant l identification des poly morphismes situ s en position cis Ces amplicons marqu s la biotine se fixent aux sondes SSO sp cifiques celles qui contiennent une s quence cible compl mentaire Grace au marquage les amplicons fix s peuvent ensuite tre d tect s par une simple r action colorim trique Pour viter des fixations non sp cifiques dans les cupules r actionnelles la premi re t che du processeur MR SPOT est de traiter chaque puits au pr alable avec un tampon de blocage Apr s une tape de lavage drastique pour liminer tout amplicon non fix un conjugu de la streptavidine marqu e la phosphatase alcaline est ajout aux cupules o il est fix sur le marquage biotine des amplicons pr sents suite l hybridation avec sa sonde SSO compl mentaire Apr s plusieurs autres lavages le substrat BCIP NBT est ajout et produit une coloration bleu violet gr ce l activit de la phosphatase alcaline pr sente Les points color s g n r s au fond des cupules r actionnelles sont photographi s par le processeur MR SPOT et l image est transmise au logiciel HISTO MATCH install sur le PC servant l interpr tation Le programme d analyse d image du logiciel HISTO MATCH d termine l intensit de chaque
4. Reagent Kit R F 726098 e Embouts de pipettes pour l instrument MR SPOT 1000 uL R F 726099 et 200 uL R F 726097 e R actifs pour l isolation des ADN viter le relargage au sel salting out e Thermocycleur e Eau d sionis e e Pipettes volume variable gamme 0 5 1 000 uL et embouts jetables 4 CONSERVATION ET STABILIT Tous les r actifs et composants des trousses doivent tre conserv s entre 2 C et 8 C La date de p remption est indiqu e sur l tiquette de chaque r actif Elle est valable pour les r actifs non entam s La date de p remption indiqu e sur l tiquette externe trousse correspond au r actif contenu dans la trousse ayant la validit la plus courte Les r actifs ouverts seront utiliser dans les 3 mois La dilution du conjugu doit tre pr par e extemporairement chaque s rie de test 5 PROTOC LE 5 1 Pr cautions et recommandations Les techniques de g n tique mol culaire sont des m thodes particuli rement sensibles qui doivent tre r alis es par du personnel bien form ayant l exp rience des techniques de g n tique mol culaire et des tests d histocompatibilit Les r sultats de Page 4 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 ces tests ne doivent pas tre utilis s comme seul d terminant pour prendre des d cisions cliniques Les directives de transplantati
5. con u pour fournir au minimum des r sultats sans ambigu t au niveau des groupes d all les c est dire sur une r solution sur 2 digits Des associations d all les diff rentes qui pr sentent le m me sch ma de sondes positives et qui recoupent des groupes d all le sont consid r es comme ambigu s Page 10 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 8 LIMITES DE LA M THODE En raison de la grande sensibilit de l analyse par PCR aux variations de concentration et de qualit de l ADN seuls des chantillons d ADN avec une concentration comprise entre 15 et 30 ng uL et un indice de puret rapport DO D0 compris entre 1 5 et 2 0 doivent tre utilis s Un soin particulier doit tre pris pour viter la contamination des r actifs de la trousse et des autres produits et quipements de laboratoire avec des amplicons ou de l ADN Il est fortement recommand de r aliser r guli rement des tests de contamination ex BAG Wipetest R F 7091 et d utiliser des contr les n gatifs dans chaque s rie d analyse L hybridation est un proc d tr s sensible la temp rature De ce fait les trousses HISTO SPOT SSO ne doivent tre utilis es qu en association avec le processeur MR SPOT pour assurer des temp ratures et temps d incubation valides Tous les instruments p ex pipettes thermocycleurs blocs chauffants instrument MR SPOT doivent tre
6. manuellement Seuls les spots de contr le sont positifs ADN non ajout la PCR ou erreur d amplification Recommencer toute l analyse et v rifier le produit PCR sur gel __ Sondes faussement positives __ Utilisation d une quantit d ADN trop importante ou conjugu trop concentr non centrifug V rifier la concentration en ADN centrifuger le conjugu avant son utilisation Absence d amplification de lexon Concentration en ADN trop lev e ou ADN d grad V rifier la concentration en ADN tester l ADN sur gel Aucun r sultat ou r sultat non concluant en raison de signaux faibles Erreur de dilution du conjugu ou amplification faible __ Dysfonctionnement de l instrument Recommencer l analyse V rifier la temp rature d hybridation sur l instrument 11 MARQUES COMMERCIALES UTILIS ES e ProCliin est une marque commerciale de l entreprise Rohm amp Haas e BCIP est une marque commerciale de Sigma Aldrich Co e Veriti est une marque commerciale d Applied Biosystems Page 12 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 12 EXPLICATION DES SYMBOLES UTILIS S IVD Pour usage de diagnostic in vitro 1 Temp rature de conservation LOT N de lot 2 Utiliser avant
7. r actifs contiennent une concentration lt 0 1 d azide de sodium qui n est pas consid r e comme dangereuse viter toutefois le contact avec la peau et les membranes muqueuses L azide de sodium peut r agir avec les tuyauteries de plomb et de cuivre et former des azides m talliques explosifs Au moment d liminer les Page 9 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 solutions contenant de l azide de sodium dans les viers de laboratoire rincer les tuyauteries avec de grandes quantit s d eau pour viter la formation d azide Toute la manipulation avec les r actifs doit tre r alis e en respectant les pr cautions adapt es Porter une protection oculaire une blouse de laboratoire et des gants jetables pour manipuler les r actifs viter le contact de ces produits avec la peau les yeux et les membranes muqueuses En cas de contact rincer imm diatement avec une grande quantit d eau Sinon une br lure pourrait se produire Si des r actifs sont renvers s les diluer avec de l eau avant de les ponger Ne pas exposer le substrat aux m taux ni aux agents oxydants L limination de tous les chantillons des r actifs non utilis s et des d chets doit respecter les r glementations nationales f d rales et locales viter la contamination microbienne des r actifs au moment de pr lever un aliquot dans les flacons L utilisation de pipettes et de pointes de pipet
8. 1 2 C seconde Une fois l tape d amplification termin e les chantillons peuvent tre analys s imm diatement ou conserv s entre 2 C et 8 C pendant un maximum de 5 jours herm tiquement scell s Analyse des amplicons sur gel il n est pas n cessaire de r aliser un gel pour contr ler l amplification Cela est d autant plus justifi que l amplification peut tre correcte m me si le gel ne pr sentait qu une bande tr s faiblement visible Si cependant il est pr vu de r aliser un gel ne veuillez pas utiliser plus que 2 3 uL d amplicon Les tailles des diff rents amplicons sont indiqu es sur le CD d information fourni dans chaque trousse de tests sous Hit Table fichier xls puis deuxi me onglet intitul Notes 5 4 Hybridation amp D tection automatis es par le processeur MR SPOT 5 4 1 D marrage de l instrument MR SPOT Mettre sous tension le processeur MR SPOT l cran de d marrage s affiche Suivez les instructions l cran pour pr parer le lancement de votre s rie Plus de d tails sont d crits dans le Manuel utilisateur du processeur MR SPOT Remarque viter l exposition au soleil du processeur MR SPOT et de ces r actifs associ s 5 4 2 Pr paration des r actifs n cessaires Sortir la trousse HISTO SPOT Reagent Kit et les cupules r actionnelles HISTO SPOT Combistrip du r frig rateur et les laisser se r chauffer temp rature ambiante
9. HISTO MATCH 8 6 PRECAUTIONS ET TRAITEMENT DES D CHETS nan een demie 9 7 CARACT RISTIQUES ET PERFORMANCES een 10 7 1 valuation des performances s s sesseesiesieetertsrtsrteretertsrtartart nket tartartart nro nrartartanea ren rnrareant 10 7 2 Amplifications par r action POR ssssssssssseesssssseerrnrresserrrrrrrntrsstttrttrnnntnstttntttnnnnsetnnnennn ennet 10 7 3 R solution dela technique siessenek an eE RaR EEA ENE EEEE EEE E 10 8 LIMITES D LAM TAO DR Rd cent 11 9 CONTR LE QUALIT INTERNE ssarmnn nnnnenennnennnnienanmenenenanne 11 10 GESTION DE INGIDENTES Sd ee 12 11 MARQUES COMMERCIALES UTILIS ES 12 12 EXPLICATION DES SYMBOLES UTILIS S n nine 13 Distribu en Belgique en France et au Luxembourg par m diane diagnostics Z A de la Cha ne 78370 PLAISIR 33 1 30 07 50 60 info mediane diag fr BAG Health Care GmbH Auftragsannahme Ordering Customer Service AmtsgerichtsstraRe 1 5 Tel 49 0 6404 925 0 www bag healthcare com Tel 49 0 6404 925 450 Tel 49 0 6404 925 125 35423 Lich Germany Fax 49 0 6404 925 250 info bag healthcare com Fax 49 0 6404 925 460 Fax 49 0 6404 925 421 verkauf bag healthcare com service bag healthcare com Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 1 DESCRIPTION DU PRODUIT Le syst me HISTO SPOT SSO est un test de diagnostic in vitro pour le typage tissulaire des all les HLA par m thode de g n tique
10. O BAG eam care E T Notice Utilisateur Trousse combinatoire HISTO SPOT On Call Typing Trousse de test pour le typage des all les HLA par m thode de g n tique mol culaire 10 combi tests pour les loci HLA A B C DRB1 DRB3 4 5 DQ DPB1 CE 0123 IVD Lire attentivement les instructions figurant dans le manuel d utilisation du ou des syst me s et sur les tiquetages et ou dans la notice d utilisation du r actif REF 726070 HISTO SPOT On Call Typing 10 x 7 tests Version 3 2014 Edition 2014 01 Table des mati res 1 DESCRIPTION DU PRODUITE nsere ennt 2 2a PRINCIPE DU TEST 2 E 2 EE 3 3 1 R actifs fournis avec la trousse HISTO SPOT On Call Typing 3 3 2 R actifs et quipements n cessaires mais non fournis eeeseeeeeeeeeeee ereen en enner erernne nenene 4 4 CONSERVATION ET STABILIT nnnnnsrnrnrnrsrsrsnsninineeneneenenenenrnnsnsnsnsnsnsneneneneenenses 4 5 PROTOCOLE a e 4 5 1 Pr cautions et recommandations nesdieimerertineannistmeeneamantitinsianbinrentiemenditiueennent 4 52 ISO0l ment de ADN a a a aaa E a a 5 5 3 Amplification de ADN ee bintesmenent entend p aient 6 5 4 Hybridation amp D tection automatis es par le processeur MR SPOT scce 7 5 4 1 D marrage de l instrument MR SPOT nee 7 5 4 2 Pr paration des r actifs n cessaires 7 5 4 3 Transfert des images sur un PC pour l interpr tation 8 5 4 4 Interpr tation des images l aide du logiciel
11. age 3 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 Chaque trousse combinatoire est livr e avec un CD comportant les fichiers relatifs aux sondes pr sentes sur les diff rentes biopuces qui doivent tre enregistr s dans la base de donn es du logiciel d interpr tation HISTO MATCH s il s agit d un nouveau lot de trousse pour le laboratoire N B pour obtenir des d tails consulter le Manuel utilisateur du logiciel HISTO MATCH A ce sujet il convient de diff rencier les notions Trousse amp n de Lot de la trousse Vrac de sondes puis Lots des vrac utilis s dans une trousse combinatoire e Trousse par ex HISTO SPOT A d finit le locus analys Lot de la trousse e Vrac par ex A084 A085 d finit la sp cificit des sondes dudit vrac et leurs positions sur les biopuces contenues dans les cupules r actionnelles Un m me vrac Lot de sondes peut tre utilis pour plusieurs productions de trousses e Lot de vrac par ex A085 1 A085 2 A085 3 d finit comment une sonde donn e r agit par rapport aux sondes de contr le valeurs seuil et correspond de ce fait sa calibration Chaque Lot de vrac sert la fabrication de cupules r actionnelles et d finit leur dates de fabrication et de p remption 3 2 R actifs et quipements n cessaires mais non fournis e Processeur MR SPOT avec le logiciel HISTO MATCH R F 726100 e Trousse de r actifs communs HISTO SPOT
12. enue et des fonctions des diff rentes sondes Page 8 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 sondes de position qui r agissent avec les amorces d amplification Elles indiquent que les amorces ont bien t pr sentes et que lors du travail automatique les r actifs communs ont t distribu s par l instrument e Par ailleurs elles permettent au logiciel de positionner l image avant l interpr tation Tout sch ma correspond un lot de vrac contr les d amplification pour les exons 2 amp 3 trait s en double Ces sondes sont universelles pour les all les du locus cibl et montre ainsi la r ussite de la PCR Leur fonction principale est de fixer le seuil pour les sondes sp cifiques d all le olololololol 60b0cobockebvce olo0lolo lelo olololol lolo 660c0obbibo 60b0b0ololbolo 60b0bololbolo ololol olo o olol olol o l o 0o lolol sonde sp cifique all le signal positif 2 O sonde sp cifique d all le signal n gatif Figure 3 Illustration des diff rentes fonctions des points 6 PRECAUTIONS ET TRAITEMENT DES DECHETS Le syst me HISTO SPOT est con u pour une utilisation de diagnostic in vitro et doit tre manipul par du personnel qualifi et form Toute utilisation doit respecter les bonnes pratiques de laboratoire Les produits b
13. h es dans des barrettes PCR et les cupules r actionnelles sont fournies pr combin s sur un support sp cial Pour l interpr tation de cette association de tests le logiciel HISTO MATCH dispose d une option de gestion int gr e 2 PRINCIPE DU TEST Le test est divis en quatre tapes de base Isolement de l ADN Amplification par PCR Hybridation et D tection Interpr tation des donn es L isolement de l ADN est r alis sur l chantillon clinique par une m thode d isolement d ADN d finie au laboratoire ou avec une trousse commerciale L ADN est ensuite amplifi par une s rie de r actions PCR chacune sp cifique d un locus HLA barrettes PCR multi test et pr t l emploi tampon PCR avec Taq incorpor e et solution de MgCl sont fournis dans la trousse La sp cificit de l amplification est obtenue par un ensemble d amorces biotinyl es con ues pour amplifier sp cifiquement le locus HLA cibl Apr s amplification par PCR la barrette PCR contenant les diff rents amplicons marqu s la biotine est transf r e sur le bloc chantillon du processeur Le processeur MR SPOT ajoute le tampon d hybridation chaque puits et transf re chaque m lange apr s d naturation dans la cupule correspondante contenant au fond des sondes SSO immobilis es l aide d une biopuce SSO oligonucl otides sp cifiques d une s quence Ces sondes sont soit de simples sondes d oligonucl otides soit une Page 2 sur 13
14. iologiques utilis s pour l extraction de l ADN par exemple le sang ou un tissu humain doivent tre manipul s comme des substances potentiellement infectieuses Il est donc recommand de respecter les pr cautions de s curit adapt es pour manipuler les produits biologiques ne pas pipeter la bouche utiliser des gants jetables pour manipuler les produits biologiques et r aliser le test se d sinfecter les mains une fois la manipulation termin e Les d chets biologiques doivent tre inactiv s avant leur limination ex dans un autoclave Les produits jetables doivent tre autoclav s ou incin r s apr s usage Un renversement de produits potentiellement infectieux doit tre ramass imm diatement avec du papier absorbant et les zones contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant standard adapt ou avec de l alcool 70 Les mat riels utilis s pour nettoyer les renversements y compris les gants doivent tre inactiv s avant leur limination ex dans un autoclave Le tampon de blocage le tampon d hybridation le tampon de lavage drastique et le tampon de lavage TBS contiennent du ProClin 150 et la solution de chlorure de magn sium contient du ProClin 300 La concentration en conservateur dans les r actifs est de seulement 0 001 viter toutefois le contact avec la peau et les membranes muqueuses Le tampon PCR et le conjugu contiennent de l azide de sodium comme conservateur Les
15. mol culaire Les r sultats de typage ont une r solution basse moyenne Le syst me est compos des trousses de typage HISTO SPOT de la trousse de r actifs communs HISTO SPOT Reagent Kit du processeur MR SPOT et du logiciel d interpr tation HISTO MATCH Les trousses de test HISTO SPOT contiennent tous les composants n cessaires la r action PCR ainsi que les cupules r actionnelles avec des sondes d oligonucl otides sp cifiques de s quence pour la d tection des produits PCR La trousse HISTO SPOT Reagent Kit contient tous les r actifs n cessaires l hybridation et la d tection Elle peut tre utilis e en association avec toutes les trousses de typage HISTO SPOT L instrument MR SPOT est sp cialement con u pour tre utilis avec les trousses de test HISTO SPOT et traite entre 1 et 96 chantillons par cycle Il automatise l analyse depuis l hybridation jusqu la d tection et la prise d images qui serviront l interpr tation des r sultats Le logiciel HISTO MATCH est n cessaire la lecture des images et l interpr tation des r sultats La trousse combinatoire HISTO SPOT On Call Typing destin e l astreinte contient l association de tous les loci typer en vue d une transplantation d organe La trousse est con ue pour faciliter autant que possible le flux de travail en particulier en situation d urgence Les amorces d amplification sont pr tes l emploi car d j distribu es et s c
16. ntra ner des checs d amplification Pour effectuer un Contr le n gatif veuillez utiliser le puits n 8 et pr parer pour cela une r action PCR contenat de l eau distill e la place de l ADN 10 uL Tampon PCR 5 pL H20 Sceller les barrettes PCR avec les bouchons les centrifuger rapidement les placer dans le thermocycleur et lancer l amplification dans les conditions suivantes tape de programme Dur e Temp rature Nb de cycles Premi re d naturation 2 mn 96 1 cycle D naturation 15s 96 10 cycles Hybridation extension 60 s 65 D naturation 105 96 20 cycles Hybridation 50s 61 Extension 30 s 72 Maintien co 22 N B ces conditions sont identiques pour tous les thermocycleurs Toutefois le temps total n cessaire pour cette tape Varie selon la vitesse de rampe gt de chaque mod le de thermocycleur Les mod les suivants de thermocycleurs ont t valid s avec les tests HISTO SPOT SSO e Applied Biosystems PE 9600 PE 9700 utiliser la vitesse de rampe du PE 9600 amp Veriti e Biorad PTC 100 PTC 200 amp MyCycler e Eppendorf Mastercycler EP Gradient S N B en cas d utilisation d autres thermocycleurs une validation doit tre effectu e par l utilisateur Page 6 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 De mani re g n rale il est recommand d utiliser une vitesse de rampe de
17. on ainsi que les normes EFI doivent tre respect es de mani re r duire le risque de typages erron s Ceci est particuli rement important dans le cas de r sultats discordants observ s entre les m thodes de s rologie et de g n tique mol culaire Des pr cautions doivent tre prises pour viter la contamination et donc les fausses r actions e Porter des gants pour manipuler sans poudre si possible e Utiliser de nouveaux embouts chaque tape de pipetage avec un filtre int gr e Utiliser des zones de travail s par es pour les t ches avant l amplification isolement de l ADN et pr paration des r actions et apr s l amplification hybridation et d tection De pr f rence utiliser deux pi ces diff rentes zones pr et post PCR e Les amplicons ne doivent pas tre ramen s dans la zone de pr paration de la PCR e Utiliser les dispositifs et autres mat riels uniquement leur place respective et ne pas les changer 5 2 Isolement de l ADN Pr parer l ADN chantillon par la m thode standard utilis e par le laboratoire pour l isolement des ADN destin s la PCR il est pr f rable de ne pas utiliser la technique du relargage au sel M thodes d isolation d ADN valid es e Colonnes de marque Quiagen M thodes utilis es avec succ s en pratique e Quick Gene 610L 800 810 amp Mini 80 marque Kurabo e EZ 1 GenoM6 marque Quiagen e Maxwell 16 marque Promega e QuatroProbe marq
18. point spot pr sent sur la biopuce et la compare l intensit de son bruit de fond partir de ces donn es les r actions positives et n gatives sont d termin es en comparant un seuil biopuces pr calibr es Le programme de correspondance all lique du logiciel HISTO MATCH calcule l aide de chaque sch ma d hybridation observ le typage HLA de l chantillon 3 MAT RIEL 3 1 R actifs fournis avec la trousse HISTO SPOT On Call Typing Les r actifs d une trousse sont en quantit suffisante pour r aliser 10 typages multi locus Chaque trousse de tests combi tests contient les l ments suivants Cupules r actionnelles pour le typage des loci HLA Combistrip A B C DRB1 DRB3 4 5 DQ DPB1 plus Ctrl n g associ es sur un support sp cial contenant des sondes d oligonucl otides sp cifiques de s quence 10 combi tests Barrettes PCR contenant selon le puits des amorces PCR Primers s ch es pour l amplification sp cifique des loci HLA A B C DRB1 DRB3 4 5 DQ DPB1 plus Ctrl n g amorces HLA A B et DRB1i 10 barrettes PCR Caps Bouchons PCR barrettes de 8x 10 pi ces Tampon PCR pr t l emploi contenant des dNTP 1100 uL PCR Buffen de la Taq polym rase du tampon de r action et de l azide de sodium 0 05 Maci2 Chlorure de magn sium 6 mM pr t l emploi 600 uL contient 0 001 de ProClin 300 P
19. talonn s conform ment aux instructions des fabricants L exactitude et l uniformit de temp rature du thermocycleur peuvent tre test es avec la trousse BAG CyclerCheck R F 7104 9 CONTR LE QUALIT INTERNE Le Contr le qualit des nouveaux lots de trousses HISTO SPOT SSO peut tre r alis l aide d un panel maison d chantillons d ADN typ s pour les crit res HLA dont la trousse est sp cifique Le syst me HISTO SPOT SSO offre sur chaque une des biopuces cupule r actionnelle des Contr les positifs ceci afin de v rifier la r ussite des r actions d amplification et de l hybridation Il est recommand d utiliser des Contr les n gatifs lors de chaque s rie de typage pour d tecter d ventuelles contaminations Pr parez pour cela un mixe initial sans ADN et l utiliser le lors des r actions d amplification et d hybridation comme Contr le n gatif Page 11 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 10 GESTION DES INCIDENTS Sympt me Probl me s possible s Solution s ventuelle s _ Dysfonctionnement de l instrument Nombreux Consulter le manuel utilisateur du syst me MR SPOT Message d erreur au transfert de donn es Erreur de transfert des donn es Transf rer les donn es manuellement avec une cl USB Aucun r sultat Erreur d adressage R aliser l adressage
20. tes st riles jetables est recommand e Ne pas utiliser de r actifs pr sentant une turbidit ou une contamination microbienne apparente Les Fiches de Donn es de S curit peuvent tre t l charg es l adresse www bag healthcare com 7 CARACT RISTIQUES ET PERFORMANCES 7 1 valuation des performances Les trousses HISTO SPOT SSO ont t valu es lors d une tude portant sur plus de 180 chantillons pour chaque locus Les r sultats ont t compar s ceux d autres m thodes de typage p ex SSP s quen age Aucune discordance n a t observ e entre les m thodes de typage Par dessus une tude mettant en uvre des r actifs sous sa forme combinatoire combi tests ici les amorces sont toutes pr sent es s ch es dans une barrette PCR pr t l emploi a t men e avec 30 chantillons suppl mentaires Dans cette tude non plus aucune discordance par rapport aux r sultats de typage connus n a pu tre observ e Pour chaque lot fabriqu la sp cificit de chaque sonde est v rifi e l aide d ADN d chantillons de r f rence 7 2 Amplifications par r action PCR Les all les amplifi s par chaque trousse HISTO SPOT SSO la version de la nomenclature HLA et les exons amplifi s sont indiqu s avec les informations sp cifiques du lot respectif Ces informations sont rassembl es sur le CD fourni avec chaque trousse 7 3 R solution de la technique Le syst me de typage HISTO SPOT SSO est
21. ue BeeRobotics La pr sence d h parine peut inhiber la PCR De ce fait il est recommand d utiliser du sang recueilli sur EDTA ou sur citrate pour le typage L ADN de l chantillon doit avoir une concentration comprise entre 15 et 30 ng uL et un indice de puret rapport DO260 DO280 compris entre 1 5 et 2 0 Des valeurs plus lev es sont le signe d une pr sence d ARN des valeurs plus faibles celui d une contamination par des prot ines Concernant le rapport DO6 DO 3 celui ci doit tre gt 1 8 car des valeurs plus faibles sont observ es en pr sence de carbohydrates des sels ou des solvants organiques Page 5 sur 13 Notice utilisateur de la trousse HISTO SPOT On Call Typing Version 3 2013 5 3 Amplification de l ADN Pour chaque typage multi locus sortir du r frig rateur une barrette PCR PCR Primers contenant d j les amorces d amplification Effectuer un m lange initial pour chaque chantillon avec les composants suivants 80 uL Tampon PCR 40 uL MgCl 40 uL chantillon d ADN 15 30 ng L Distribuer 20 uL du m lange initial dans chaque cupule contenant d j les amorces et remettre en suspension les amorces l aide du m lange initiale ajout Remarque il est important que la concentration en ADN soit comprise entre 15 et 30 ng uL Des concentrations plus lev es peuvent conduire des r actions de sondes faussement positives et des concentrations plus faibles peuvent e
22. varient selon le nombre de typages r aliser Le processeur MR SPOT calcule et affiche les volumes n cessaires volumes morts compris pour chaque liste de travail suivez l aide en ligne sur l cran tactile Verser alors les volumes n cessaires de r actifs dans les r servoirs marqu s en cons quence suivez l aide en ligne sur l cran tactile 5 4 3 Transfert des images sur un PC pour l interpr tation Transf rer les donn es au logiciel HISTO MATCH par l interm diaire du r seau d faut utilisez une cl USB tel qu indiqu dans le Manuel utilisateur du logiciel HISTO MATCH 5 4 4 Interpr tation des images l aide du logiciel HISTO MATCH Ouvrir le logiciel HISTO MATCH et s lectionner la liste de travail en question puis interpr ter une fois que les images ont t trait es et pr interpr t es par le logiciel et valider les r sultats Pour le d tail veuillez suivre les instructions du Manuel utilisateur du logiciel HISTO MATCH Les images doivent ressembler l exemple pr sent la figure 2 ci dessous N B la couleur des cercles autour des points obtenus qui sont plus ou moins grands et plus ou moins denses indique la fonction de chaque point l illustration sch matique donn e par la figure 3 ci dessous donne de plus amples d tails Figure 2 Image d un r sultat pour le HLA A La figure 3 pr sent la suite cf page 9 donne une illustration sch matique de l image type obt
Download Pdf Manuals
Related Search