Adenovirus (20/11 & 2/6)
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1. 1 Les produits base d anticorps pr dilu s sont optimis s pour tre pr ts l emploi En raison de la possibilit de variation au niveau de la fixation et du traitement des tissus il peut tre n cessaire daugmenter ou de diminuer la dur e d incubation de lanticorps primaire en fonction des chantillons individuels 2 En association avec les syst mes de d tection et les accessoires l anticorps d tecte le ou les antig nes qui r sistent aux proc dures de routine comme la fixation au formol le traitement et la coupe des tissus Les utilisateurs qui s cartent des proc dures de test recommand es demeurent comme ils le seraient dans n importe quelle situation responsables de l interpr tation et de la validation des r sultats des patients R sum Des R sultats Attendus Se reporter aux tableaux de r activit suivants tude De Tissus Sains Total Cas des Cas Tissu Positifs Test s Notes ewa CS A yO M CS ES ow oe o C a C CS A ES CS A estate T E woe AC A o C CA EE CS A Thymus 1 faible dans les pith liums Advanced Solutions for Advanced Pathology MEN Template 0 2 imPath tude De Tissus Sains continu Cas Tissu Positifs woese AC omn fop wew fo Jo o Estomac 1 en forme de point coloration du cytoplasme observ e dans les glandes fov olaires O CS A CE AC NC A sandesaere T Dust biare o S EC A Desse T RE CS DE Eu T rome deraiepe 0 M2. R serv un usage en laboratoire Pour utilisation en diagnostic in vitro La coloration du tissu d pend de la manipulation et du traitement de ce tissu avant coloration Les fixation cong lation d cong lation lavage s chage chauffage ou coupe incorrects ou une contamination par d autres tissus ou liquides peuvent entra ner des art facts un pi geage de l anticorps ou des faux n gatifs Des r sultats incoh rents peuvent tre la cons quence de variations dans les m thodes de fixation et d inclusion ainsi que d irr gularit s inh rentes au tissu Une contre coloration incompl te ou excessive peut compromettre l interpr tation correcte des r sultats L interpr tation clinique de toute coloration positive ou de son absence doit tre valu e dans le contexte de l historique clinique de la morphologie d autres crit res histopathologiques ainsi que dautres tests diagnostiques Cet anticorps est con u pour tre utilis le cas ch ant dans une gamme d anticorps La r alisation de la coloration rel ve de la responsabilit d un pathologiste qualifi devant tre familiaris avec les anticorps les r actifs les gammes diagnostiques et les m thodes de coloration utilis s La coloration doit tre r alis e dans un laboratoire autoris et accr dit sous le controle dun pathologiste responsable de l examen des lames color es et de la pertinence des contr les positif et n gatif Des anticorps et r
3. traitement des tissus 10 Syst me de d tection et chromog ne 11 Solutions de lavage 12 H matoxyline ou un autre contre colorant 13 Diluants pour anticorps 14 R actif de blocage du peroxyde utiliser avec de la HRP 15 R actif de blocage de l avidine Advanced Solutions for Advanced Pathology MEN Template 0 2 AirPath 16 R actif de controle n gatif 17 Milieu de montage 18 Lamelles de montage 19 Microscope optique 40 400x Conservation Et Manipulation Conserver entre 2 et 8 C Ne pas congeler Pour assurer une distribution correcte du r actif et la stabilit de l anticorps remettre le capuchon sur le flacon apr s chaque cycle et ranger imm diatement celui ci en position verticale dans le r frig rateur Chaque r actif base d anticorps comporte une date de p remption Lorsqu il est correctement conserv le r actif reste stable jusqu la date indiqu e sur l tiquette Ne pas utiliser le r actif au del de la date de p remption pour la m thode de conservation prescrite Aucun signe vident n indique l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patients Contacter le service apr s vente de A Menarini Diagnostics en cas de signe d instabilit du r actif Recueil Et Pr paration Des chantillons Pour L analyse Les tissus fix s au formol neutre tamponn inclus en paraffi
4. A asmens Jof SSS y M Jo D TE CS D DE CO D wenn o BC AE EE Placenta 1 Lanticorps pr sente une faible r activit par rapport l pith lium thymique et aux cellules basales de la peau tude De Tissus Pathologiques Total Cas des Cas Tissu Positifs Test s Ad novirus Carcinome canalaire invasif du sein Carcinome colorectal Cytom galovirus Tissu infect par le virus varicelle zona Tissu infect par le virus herp s simplex L anticorps pr sente une r action immunitaire par rapport aux cellules infect es par ad novirus dans les six cas A MENARINI diagnostics MENARINI Adenovirus 20 11 amp 2 6 Mouse Monoclonal Antibody D pannage Si le controle positif pr sente une coloration plus faible que celle attendue v rifier les autres contr les positifs test s pendant le m me cycle de coloration pour d terminer si cela est d l anticorps primaire ou l un des r actifs secondaires communs Si le controle positif sav re n gatif v rifier les autres contr les positifs test s pendant le m me cycle pour d terminer si la cause sous jacente se rattache l anticorps primaire ou l un des r actifs secondaires communs Il se peut que les tissus aient t mal pr lev s fixes ou d paraffin s Suivre la proc dure ad quate de pr l vement de conservation et de fixation En cas de coloration de fond excessive des taux lev s de biotine endog ne peuvent tre
5. actifs pr ts l emploi sont fournis la dilution optimale pour une utilisation conforme aux instructions Tout cart par rapport aux proc dures de test recommand es peut invalider les r sultats attendus Des contr les appropri s doivent tre utilises et document s Les utilisateurs doivent quelles que soient les conditions accepter la responsabilit de l interpr tation des r sultats des patients Des produits sont fournis sous forme concentr e afin que l utilisateur puisse ensuite les diluer et les utiliser de fa on optimale condition que ce dernier tablisse des techniques de validation appropri es et sy conforme L utilisateur doit valider l emploi d ventuels diluants autres que ceux recommand s dans la pr sente Une fois que l aptitude l emploi de l anticorps primaire a t valid e tout cart par rapport aux proc dures de test recommand es peut invalider les r sultats attendus Des contr les appropri s doivent tre utilis s et document s Les utilisateurs doivent quelles que soient les conditions accepter la responsabilit de l interpr tation des r sultats des patients Ce produit nest pas con u pour tre utilis en cytome trie en flux Les r actifs peuvent pr senter des r actions inattendues sur des tissus qui nont pas t test s auparavant En raison de la variabilit biologique de lexpression antig nique dans les n oplasmes ou dautres tissus pathologiques la possibilit d obteni
6. cellules cibles indique une r activit positive Consulter la notice du syst me de d tection utilis pour conna tre les r actions color es attendues Selon la dur e d incubation et la puissance de l h matoxyline utilis e une contre coloration donnera une coloration bleu p le bleu fonc des noyaux cellulaires Une contre coloration incompl te ou excessive peut compromettre l interpr tation correcte des r sultats Si le tissu de contr le positif ne pr sente pas de coloration positive appropri e les r sultats des pr l vements des patients sont alors consid r s comme non valides Tissu De Contr le N gatif Le tissu de contr le n gatif doit tre examin apr s le tissu de contr le positif afin de v rifier le marquage sp cifique de lantig ne cible par l anticorps primaire Labsence de coloration sp cifique dans le tissu de controle n gatif confirme l absence de r activit crois e de l anticorps avec les cellules ou les composants cellulaires En cas de coloration sp cifique dans le tissu de contr le n gatif les r sultats obtenus avec les chantillons de patients sont consid r s comme non valides Toute coloration non sp cifique si pr sente aura un aspect diffus Une coloration claire sporadique du tissu conjonctif peut galement tre observ e dans les coupes provenant de tissus qui ne sont pas fix s de fa on optimale Des cellules intactes doivent tre utilis es pour interpr ter les r sultats
7. contre color et recouvert dune lamelle Les r sultats sont interpr t s au moyen dun microscope optique et contribuent poser un diagnostic diff rentiel des processus physiopathologiques qui peuvent tre associ s ou non un antig ne sp cifique Les produits pr dilu s sont dilu s de facon optimale pour pouvoir tre utilis s avec un large ventail de kits de d tection propos s par dautres fabricants Mat riel Et M thodes Consulter l tiquette du produit pour les informations suivantes particuli res au lot 1 Concentration d immunoglobulines anticorps AirPath T lt z w 2 A Menarini Diagnostics S r l Via Sette Santi 3 50131 Firenze Italy MEN21221000 FR Rev 0 0 Ml Cell Marque Corporation 6600 Sierra College Blvd Rocklin California 95677 USA EMERGO EUROPE Molenstraat 15 2513 BH The Hague NL CE A MENARINI diagnostics Adenovirus 20 11 amp 2 6 Mouse Monoclonal Antibody 2 Informations d taill es concernant l origine R actifs Fournis L anticorps primaire pr dilu en question contient un r actif pr t l emploi La plage de concentration en immunoglobulines pr dilu es pour ce produit est comprise entre 2 5 10 0 ug ml Lanticorps primaire concentr en question contient un r actif pr t l emploi Les formes pr dilu e et concentr e de cet anticorps sont dilu es dans Tampon Tris pH 7 3 7 7 avec 1 de BSA et lt 0 1 d azoture de
8. de la coloration Les cellules n crotiques ou d g n r es pr sentent une coloration non sp cifique Tissus De Patients Les chantillons de patients doivent tre examin s en dernier L intensit de la coloration positive doit tre valu e en tenant compte de la coloration de fond du r actif de contr le n gatif Comme avec tout test immunohistochimique un r sultat n gatif signifie que l antig ne en question na pas t d tect et non pas que lantig ne est absent des cellules ou du tissu test s Une gamme d anticorps peut faciliter l identification de faux n gatifs voir le paragraphe R sum des r sultats attendus La morphologie de chaque chantillon de tissu doit galement tre examin e l aide d une coupe color e l h matoxyline et l osine lors de l interpr tation des r sultats immunohistochimiques Les r sultats morphologiques et les donn es cliniques pertinentes du patient doivent tre interpr t s par un pathologiste qualifi Advanced Solutions for Advanced Pathology MEN Template 0 2 AirPath Limitations 10 Ce r actif est r serv un usage professionnel dans la mesure o limmunohistochimie est une proc dure en plusieurs tapes n cessitant une formation sp cialis e pour le choix des r actifs appropri s la s lection des tissus la fixation le traitement la pr paration des lames d immunohistochimie et l interpr tation des r sultats de la coloration
9. 6 Appliquer une quantit suffisante de chromog ne et incuber pendant 1 10 minutes rincer 7 D shydrater et recouvrir d une lamelle Advanced Solutions for Advanced Pathology MEN Template 0 2 AirPath Proc dures De Contr le Qualit Tissu De Contr le Positif Un tissu de contr le positif doit tre test avec chaque proc dure de coloration r alis e Ce tissu peut contenir des composants cellulaires ou tissulaires la fois positifs et n gatifs et peut servir la fois de tissu de contr le positif et n gatif Les tissus de controle doivent tre de r cents pr l vements d autopsie de biopsie ou de chirurgie pr par s ou fix s d s que possible d une mani re identique aux tissus de patients Lutilisation d une coupe de tissu fix ou trait diff remment de l chantillon du patient servira fournir un contr le pour tous les r actifs et toutes les tapes de la m thode l exception de la fixation et du traitement des tissus Un tissu pr sentant une faible coloration positive conviendra mieux pour assurer un contr le qualit optimal et pour d tecter de faibles niveaux de d t rioration des r actifs Les tissus suivants peuvent constituer un tissu de contr le positif pour la s rie d anticorps primaire en question Tissu De Contr le Positif Tissu d Tissu infect par ad novirus Cytoplasmique Nucl aire Des tissus de contr le positifs connus doivent tre utilis s uniquem
10. Adenovirus 20 11 amp 2 6 Mouse Monoclonal Antibody Identification du Produit R f cat Description 45606 Adenovirus O 1 M 20 11 amp 2 6 45607 Adenovirus 1 M 20 11 amp 2 6 45631 Adenovirus RTU M 20 11 amp 2 6 D finitions Des Symboles Esm o E sumageant plage de dilution du produit concentr distribu par Application Cet anticorps est con u pour tre utilis en diagnostic in vitro DIV Lanticorps Adenovirus est con u l attention des laboratoires qualifi s afin de d tecter de mani re qualitative par microscopie optique la pr sence d antig nes associ s dans des coupes de tissus fix s au formol et inclus en paraffine en utilisant des techniques d analyses IHC immunohistochimiques L tilisation de cet anticorps est indiqu e la suite d un diagnostic diff rentiel clinique afin de faciliter l identification d infections par ad novirus lorsque plusieurs anticorps sont impliqu s pour l historique clinique du patient et dautres tests effectu s par un pathologiste qualifi R sum Et Explication Une infection par ad novirus est associ e un large spectre de maladies cliniques tant chez lenfant que chez l adulte Ce type d infection fait l objet d une plus grande attention lorsqu il sagit dune complication importante chez des patients ayant subi une transplantation d organe solide ou de moelle pini re L incidence d une infection par ad novirus chez les patients a
11. Cell Marque Les certificats attestent que les produits dorigine bovine proviennent de pays o le risque li l enc phalopathie spongiforme bovine BSE est minime et indiquent que les tats Unis et le Canada sont les pays de provenance de ces produits 11 Comme pour tout produit dorigine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre mises en place Mode D Emploi Proc dure tape Par tape Protocoles de coloration recommand s pour lanticorps primaire en question Coloration Manuelle 1 D paraffiner r hydrater et restaurer les pitopes la m thode privil gi e consiste utiliser des techniques de restauration antig nique par la chaleur HIER Cette m thode privil gi e permet de d paraffiner de r hydrater et de restaurer les pitopes simultan ment Enfin rincer 5 reprises avec de l eau distill e ou d sionis e 2 En cas d utilisation d un syst me de d tection de type HRP placer les lames dans un r actif de blocage du peroxyde d hydrog ne pendant 10 minutes rincer En cas d utilisation d un syst me de d tection de type AP omettre cette tape 3 Appliquer l anticorps et incuber pendant 10 30 minutes rincer Avec un syst me de d tection de polym re en 2 tapes appliquer l amplificateur conform ment aux instructions du fabricant 5 Appliquer le r actif de d tection en respectant le nombre de minutes d application recommande par le fabricant puis rincer
12. e puis refaire la proc dure compl te sur les chantillons des patients R actif De Contr le N gatif Un r actif de contr le n gatif doit tre test pour chaque chantillon afin de faciliter l interpr tation des r sultats Un r actif de contr le n gatif est utilis la place de l anticorps primaire pour valuer la coloration non sp cifique La lame doit tre trait e avec un r actif de contr le A MENARINI diagnostics MENARINI Adenovirus 20 11 amp 2 6 Mouse Monoclonal Antibody n gatif correspondant l esp ce h te de l anticorps primaire et ayant de pr f rence une concentration en IgG identique La dur e d incubation pour le r actif de contr le n gatif doit correspondre celle de l anticorps primaire Interpr tation Des R sultats La proc dure d immunocoloration provoque la pr cipitation d un produit de r action color au niveau des sites antig niques localis s par l anticorps primaire Consulter la notice du syst me de d tection appropri pour connaitre les r actions color es attendues Un pathologiste qualifi expert en proc dures immunohistochimiques doit valuer les tissus de controle positifs et n gatifs avant d interpr ter les r sultats Tissu De Contr le Positif Le contr le positif color doit tre examin en premier pour v rifier que tous les r actifs fonctionnent correctement La pr sence d un produit de r action color de mani re appropri e dans les
13. ent pour v rifier que les performances des tissus trait s et des r actifs de test sont correctes et non comme une aide la formulation d un diagnostic sp cifique sur des chantillons de patients Si les tissus de contr le positifs ne pr sentent pas de coloration positive appropri e les r sultats des pr l vements des patients doivent alors tre consid r s comme non valides Tissu De Contr le N gatif Il est possible d utiliser le m me tissu pour le tissu de contr le positif que pour le tissu de contr le n gatif Les diff rents types de cellules pr sents dans la plupart des coupes de tissus offrent des sites de contr le n gatif internes mais ceci doit tre v rifi par lutilisateur Les composants ne pr sentant pas de coloration doivent d montrer l absence de coloration sp cifique et fournir une indication sur la coloration de fond non sp cifique En cas de coloration sp cifique dans les sites du tissu de contr le n gatif les r sultats obtenus avec les chantillons de patients doivent tre consid r s comme non valides Diff rences Inexpliqu es Les diff rences inexpliqu es dans les controles doivent tre imm diatement transmises au service apr s vente de AMenarini Diagnostics Si les r sultats du contr le qualit ne correspondent pas aux attentes les r sultats des patients ne sont pas valides Consulter le paragraphe R solution des probl mes de cette notice Identifier et rem dier au probl m
14. ne et trait s en routine peuvent tre utilis s avec cet anticorps primaire Il est recommande de fixer les tissus au formol neutre tamponn 10 Il se peut que des r sultats variables soient obtenus en raison d une fixation prolong e ou de processus sp ciaux comme la d calcification des pr parations de moelle osseuse Chaque coupe doit avoir une paisseur appropri e environ 3 um et tre plac e sur une lame de verre charg e positivement Les lames contenant une coupe de tissu peuvent tre cuites pendant au moins 2 heures mais pas plus de 24 heures dans une tuve une temp rature de 58 60 C gt O C Avertissements Et Pr cautions 1 Prendre des pr cautions raisonnables lors de la manipulation des r actifs Porter des gants jetables et des blouses de laboratoire lors de la manipulation de substances soup onn es d tre canc rig nes ou toxiques exemple xyl ne 2 viter tout contact des yeux et des muqueuses avec les r actifs Si des r actifs entrent en contact avec des zones sensibles laver abondamment l eau 3 Les chantillons de patients et tout le mat riel entrant en contact avec ceux ci doivent tre manipul s comme des substances biologiques dangereuses et tre limin s en prenant les pr cautions qui s imposent Ne jamais pipeter la bouche 4 Eviter toute contamination microbienne des r actifs car cela pourrait entrainer des r sultats erron s 5 Lutilisateur doit valide
15. pr sents Une tape de blocage de la biotine doit tre incluse moins qu un syst me de d tection sans biotine soit utilis auquel cas la biotine pr sente nest pas un facteur d cisif pour la coloration de fond Si toute la paraffine na pas t limin e la proc dure de d paraffinage doit tre r p t e Si les coupes de tissus se d tachent des lames v rifier que les lames sont charg es positivement Parmi les autres causes susceptibles d avoir un impact n gatif sur l adh rence du tissu notons un s chage insuffisant de la coupe tissulaire sur la lame avant la coloration ou une fixation dans du formol dont le pH nest pas neutre formol neutre tamponn L paisseur du tissu peut galement y contribuer Pour conna tre les mesures correctives prendre consulter le paragraphe Proc dure tape par tape ou contacter le service apr s vente de A Menarini Diagnostics Bibliographie 1 Ison MG Adenovirus Infections in Transplant Recipients Clin Infect Dis 2006 43 331 9 Shayan K et al Adenovirus enterocolitis in pediatric patients following bone marrow transplantation report of 2 cases and review of the literature Arch Pathol Lab Med 2003 127 1615 8 Advanced Solutions for Advanced Pathology MEN Template 0 2 AirPath MENARINI A MENARINI diagnostics
16. r des r actions inattendues sur des groupes de tissus d j test s ne peut cependant pas tre totalement limin e Contacter le service apr s vente de A Menarini Diagnostics en documentant les r actions inattendues soupconn es A MENARINI diagnostics MENARINI Adenovirus 20 11 amp 2 6 Mouse Monoclonal Antibody 11 Les tissus provenant de personnes infect es par le virus de l h patite B et contenant l antig ne de surface du virus de l h patite B HBsAg peuvent pr senter une coloration non sp cifique avec la peroxydase de raifort 12 Lorsqu ils sont utilis s au cours des tapes de blocage les s rums normaux ayant la m me origine animale que les antis rums secondaires peuvent donner des faux n gatifs ou des faux positifs cause de l effet des auto anticorps ou des anticorps naturels 13 Des faux positifs peuvent appara tre en raison de liaisons non immunologiques des prot ines ou des produits de r action du substrat Ils peuvent galement tre provoqu s par une activit pseudoperoxydasique rythrocytes une activit de la peroxydase endog ne cytochrome C ou de la biotine endog ne par exemple foie cerveau sein rein en fonction du type de technique d immunocoloration utilis e 14 Comme avec tout test immunohistochimique un r sultat n gatif signifie que l antig ne na pas t d tect et non pas que l antig ne tait absent des cellules ou du tissu test s Limitations Sp cifiques
17. r les dur es et temp ratures d incubation A MENARINI diagnostics MENARINI Adenovirus 20 11 amp 2 6 Mouse Monoclonal Antibody 6 Les r actifs pr dilu s pr ts l emploi sont dilu s de fa on optimale et toute dilution suppl mentaire peut entrainer une perte de coloration de l antig ne 7 Les r actifs concentr s peuvent tre dilu s de facon optimale en fonction de la validation de lutilisateur Lutilisateur doit galement valider tout diluant utilis qui nest pas sp cifiquement recommand dans la pr sente afin den tablir la compatibilit et l effet sur la stabilit 8 Lorsquil est utilis selon les instructions ce produit nest pas class comme substance dangereuse Lagent de conservation du r actif pr sente une concentration inf rieure O 1 d azoture de sodium et ne r pond pas aux crit res du r glement europ en REACH Enregistrement valuation et autorisation des produits chimiques en mati re de substances dangereuses pour la concentration indiqu e 9 Lutilisateur doit valider toute condition de conservation autre que celle sp cifi e dans la notice 10 Le diluant peut contenir de la s rum albumine bovine et le surnageant du s rum bovin Les produits contenant du s rum de veau f tal et ceux contenant de la s rum albumine bovine sont achet s des fournisseurs commerciaux Les certificats d origine pour les produits dorigine animale utilis s dans ces produits sont conserv s par
18. sodium La plage de concentration en immunoglobulines concentr es pour ce produit est comprise entre 85 160 ug ml La plage de dilution de travail recommand e pour le concentr s tend de 1 25 1 100 elle est indiqu e sur l tiquette du produit Isotype IgG k Reconstitution M lange Dilution Titrage Lanticorps pr dilu est pr t l emploi et optimis pour la coloration Aucun m lange reconstitution dilution ou titrage ne sont n cessaires Lanticorps concentr est optimis pour tre dilu dans les limites de la plage de dilution Lutilisateur doit valider la dilution de travail du produit concentr Des diff rences dans les proc dures techniques et de traitement du tissu au sein du laboratoire peuvent se traduire par une variabilit importante des r sultats et n cessiter de ce fait l utilisation r guli re de contr les Consulter le paragraphe Proc dures de contr le qualit Mat riel Et R actifs N cessaires Mais Non Fournis Les r actifs et le mat riel suivants peuvent tre requis pour la coloration mais ne sont pas fournis avec l anticorps primaire 1 Tissu de contr le positif et n gatif 2 Lames de microscope charg es positivement 3 tuve capable de maintenir une temp rature de 58 60 C 5 C 4 Cuves ou bains de coloration 5 Minuteur 6 Xyl ne ou substitut du xyl ne 7 thanol ou alcool 8 Eau d ionis e ou distill e 9 Autocuiseur lectrique pour l tape de pr
19. yant subi une transplantation de moelle Advanced Solutions for Advanced Pathology pini re a t rapport e dans 5 20 des cas 2 Le diagnostic diff rentiel de l infection par ad novirus est effectu principalement avec dautres infections virales en particulier celle due au CMV L Anti ad novirus peut faciliter le diagnostic diff rentiel en mettant en vidence une inclusion nucl aire ronde ou en forme de croissant g n ralement au sein de l pith lium de surface avec une localisation exclusivement intra nucl aire Principes Et Proc dures L anticorps primaire en question peut tre utilis comme anticorps primaire pour la coloration immunohistochimique des coupes de tissus fix s dans du formol et inclus en paraffine En g n ral la coloration immunohistochimique utilis e conjointement avec un syst me de d tection streptavidine biotine permet de visualiser les antig nes par le biais de l application s quentielle dun anticorps sp cifique anticorps primaire dirig contre l antig ne d un anticorps secondaire anticorps de liaison dirig contre lanticorps primaire dun complexe denzymes et dun substrat chromog ne avec des tapes de lavage interm diaires Un syst me de d tection base de polym res et sans biotine peut tre utilis le cas ch ant Lactivation enzymatique du chromog ne g n re un produit de r action visible au niveau du site antig nique L chantillon peut ensuite tre
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